Разработка подходов к созданию лекарственных форм антибиотиков на основе полимерных наночастиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, доктор химических наук Гельперина, Светлана Эммануиловна

• Гельперина, Светлана Эммануиловна
• доктор химических наук
• 2010

Оглавление диссертации доктор химических наук Гельперина, Светлана Эммануиловна

Список основных сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы. Коллоидные системы доставки лекарственных веществ на основе полимерных наночастиц.

1.1. Технология.

1.2. Распределение наночастиц в организме.

1.3. Распределение наночастиц в условиях патологии: эффект EPR.

1.4. Химиотерапия экспериментальных опухолей.

1.5. Активный транспорт с помощью наночастиц.

1.6. Лечение экспериментальных внутриклеточных инфекций.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка подходов к созданию лекарственных форм антибиотиков на основе полимерных наночастиц»

2.1. Состояние проблемы и актуальность. .39

2.2. Разработка наносомальной формы доксорубицина на основе полибутилцианоакрилата.45

2.2.1. Устойчивость доксорубицина в условиях получения наночастиц. .47

2.2.2. Влияние технологических параметров на характеристики наносомальной формы доксорубицина.49

2.3. Исследование биораспределения наносомальной формы доксорубицина.56

2.3.1. Биораспределение наносомального доксорубицина.55

2.3.2. Биораспределение [14С]-полибутилцианоакрилатных наночастиц.64

2.4. Изучение противоопухолевой активности наносомальных форм доксорубицина в отношении интракраниальной глиобластомы 101/8 у крыс.73

2.5. Влияние технологических параметров на противоопухолевую активность наносомальных форм доксорубицина.79

2.6. Углубленные исследования противоопухолевой активности наносомального доксорубицина в отношении глиобластомы 101/8.87

2.7. Токсикологическое исследование наносомальной формы доксорубицина.93

2.7.1. Исследование острой токсичности.93

2.7.1.1. Ненагруженные ПБЦА наночастицы (плацебо).94

2.7.1.2. Наносомальные формы доксорубицина.97

2.7.2. Исследование субхронической токсичности.100

2.7.3. Заключение.120

2.8. Исследование механизма доставки лекарственных веществ в мозг 122 с помощью наночастиц.

2.9. Радиационная стерилизация наносомальной формы доксорубицина.144

2.10. Заключение.155

3. Разработка и исследование наносомальных форм рифампицина.159

3.1. Состояние проблемы и актуальность.159

3.2. Влияние технологических параметров на физико-химические свойства полимерных наночастиц, содержащих рифампицин.161

3.2.1. Полибутилцианоакрилатные наночастицы.161

3.2.2. Полилактидные наночастицы.165

3.2.3. Исследование кинетики высвобождения рифампицина из наночастиц.173

3.3. Влияние состава наносомальной формы рифампицина на его биораспределение.177

3.3.1. Внутривенное введение.177

3.3.1.1. Наносомальная форма на основе 177 полибутилцианоакрилатных наночастиц.

3.3.1.2. Наносомальные формы на основе полилактидов.181

3.3.1.3. Оптимизация биораспределения наносомальных форм 187 рифампицина при внутривенном введении.

3.3.2. Пероральное введение.199

3.3.3. Подкожное введение.205

3.4. Активность наносомальной формы рифампицина в отношении внутриклеточных бактерий in vitro.208

3.5. Оценка эффективности наносомальных форм рифампицина на модели экспериментального туберкулеза у мышей.209

3.5.1. Внутривенное введение.210

3.5.1.1. Полибутилцианоакрилатные наночастицы.211

3.5.1.2. Наночастицы на основе полилактидов.215

3.5.2. Пероральное и подкожное введение.217

3.6. Оценка эффективности наносомальной формы рифампицина при лечении острых бактериальных инфекций.218

3.7. Заключение.220

4. Разработка и исследование наносомальных форм стрептомицина.223

4.1. Влияние технологических параметров на характеристики наносомальной формы стрептомицина.223

4.2. Оценка эффективности наносомальной формы стрептомицина на модели острой септической инфекции.231

5. Разработка и исследование наносомальной формы моксифлоксацина.231

5.1. Влияние технологических параметров на характеристики наносомальной формы моксифлоксацина.233

5.2. Исследование наносомальной формы моксифлоксацина на культуре макрофагов ТНР-1.238

5.2.1. Оценка цитотоксического действия наночастиц.239

5.2.2. Кинетика накопления моксифлоксацина в макрофагах.240

5.2.3. Оценка активности наносомального моксифлоксацина в отношении

М. tuberculosis, локализованных в макрофагах ТНР-1.243

5.3. Эффективность наносомального моксифлоксацина при лечении экспериментального туберкулеза у мышей.247

6. Материалы и методы.250

6.1. Получение наносомальной формы доксорубицина.250

6.2. Исследование биораспределения наносомальной формы доксорубицина.253

6.3. Исследование биораспределення [14С]-полибутилцианоакрилатных наночастиц.254

6.4. Экспериментальная модель опухоли мозга.255

6.5. Оценка проницаемости гематоэнцефалического барьера у крыс с интракраниально имплантированной глиобластомой 101/8.256

6.6. Оценка противоопухолевой активности на модели интракраниальной глиобластомы 101/8 у крыс.256

6.7. Оценка острой токсичности наносомальной формы доксорубицина.257

6.8. Оценка субхронической токсичности наносомальной формы доксорубицина.257

6.9. Определение белков плазмы, адсорбированных на поверхности ПБЦА наночастиц методом двухмерного электрофореза в полиакриламидном геле (2-D PAGE).262

6.10. Радиационная стерилизация наносомальной формы доксорубицина на основе ПБЦА наночастиц.263

6.11. Получение наносомальной формы рифампицина на основе полибутшшианоакрилата.267

6.12. Получение наносомальной формы рифампицина на основе полилактидов.268

6.13. Биораспределение наносомального рифампицина.271

6.14. Определение активности наносомальной формы рифампицина в отношении внутриклеточных бактерий in vitro.273

6.15. Определение накопления наносомальной формы рифампицина в легочных макрофагах кролика. 274

6.16. Исследование антибактериального эффекта наносомального рифампицина на модели экспериментального туберкулеза у мышей. 275

6.17. Оценка эффективности наносомальной формы рифампицина при лечении острых бактериальных инфекций. 276

6.18. Получение наносомальной формы стрептомицина. 277

6.19. Оценка эффективности наносомальной формы стрептомицина на модели септической инфекции у мышей. 278

6.20. Получение наносомальной формы моксифлоксацина. 278

6.21. Исследование антибактериального эффекта наносомального моксифлоксацина на модели экспериментального туберкулеза у мышей. 280

Выводы. 281

Список литературы. 282

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ГЭБ гематоэнцефалический барьер

Доке доксорубицин

Докс-ПБЦА доксорубицин, включенный в наночастицы из полибутилцианоакрилата Докс-ПБЦА+Пс доксорубицин, включенный в наночастицы из полибутилцианоакрилата, модифицированные полисорбатом 80 ЛВ лекарственное вещество

МОКС моксифлоксацин

НЧ наночастицы

ПАВ поверхностно-активное вещество

ПБЦА полибутилцианоакрилат

ПВС поливиниловый спирт

ПС полисорбат 80

РИФ рифампицин

РИФ-ПБЦА рифампицин, включенный в наночастицы из полибутилцианоакрилата РИФ-ПБЦА-407 рифампицин, включенный в наночастицы из полибутилцианоакрилата, модифицированные полоксамером 407 РИФ-ПБЦА-908 рифампицин, включенный в наночастицы из полибутилцианоакрилата, модифицированные полоксамином 908 СМФ система мононуклеарных фагоцитов

СТР стрептомицин

СТР-ПБЦА стрептомицин, включенный в наночастицы из полибутилцианоакрилата ЦНС центральная нервная система

ЧСА человеческий сывороточный альбумин

AUC интегральный показатель площади под фармакокинетической кривой EPR эффект повышенной проницаемости и удерживания

F68 Pluronic F68

HSA человеческий сывороточный альбумин

Р188 полоксамер 188

Р407 полоксамер 407

Р908 полоксамин 908

PVA поливиниловый спирт

Rif-PLGA/PVA рифампицин, включенный в полилактидные наночастицы, стабилизированные поливиниловым спиртом

Rif-PLGA/HSA рифампицин, включенный в полилактидные наночастицы, стабилизированные человеческим сывороточным альбумином VEGF эндотелиальный фактор роста сосудов

ВВЕДЕНИЕ

Современная медицина располагает арсеналом мощных лекарственных средств, однако результаты лечения часто остаются неудовлетворительными. Среди факторов, снижающих эффективность химиотерапии, следует отметить недостаточную селективность действия лекарств: при введении лекарственного вещества (ЛВ) в организм происходит его неконтролируемое распределение по органам и тканям, при этом концентрации в очаге патологии не достигают терапевтического уровня. Причинами неэффективной доставки ЛВ могут быть трудности при проникновении в орган-мишень из-за наличия гистогематических барьеров, таких как, например, гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), или структурных изменений ткани (например, в случае роста опухоли), а также неспособность проникать в клетки ввиду физико-химических свойств ЛВ или особенностей клеточной мембраны (например, в случае множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток). Кроме того, неблагоприятными факторами являются низкая биодоступность ЛВ вследствие их недостаточной растворимости или быстрой инактивации и, наконец, неблагоприятная фармакокинетика.

Тривиальным способом преодолеть эти препятствия и повысить эффективность лечения является увеличение дозы ЛВ. При этом терапевтический эффект часто достигается ценой повышения неспецифической токсичности. Проблема приобретает особую остроту в случае сильнодействующих ЛВ, таких как, например, противоопухолевые агенты и антибиотики, применение которых сопряжено с побочными эффектами, выраженными настолько, что они значительно снижают терапевтическую ценность этих препаратов.

Другим подходом к решению этой проблемы является создание принципиально новых препаратов, отличающихся более высокой селективностью. Актуальность этой проблемы послужила стимулом для разработки подходов к созданию разнообразных систем направленной доставки ЛВ. Особый интерес среди таких систем представляют полимерные наночастицы (НЧ), то есть частицы размером от 10 до 1000 нм, сочетающие такие важные для носителей качества, как стабильность и высокая емкость в отношении широкого спектра ЛВ.

К настоящему времени можно считать доказанным, что включение в НЧ может существенно изменять профиль распределения ЛВ в организме, и накоплен значительный опыт по разработке и исследованию наносомальных форм различных ЛВ. Однако некоторые аспекты этой технологии изучены недостаточно. Так, несмотря на очевидную целесообразность использования НЧ для доставки антибиотиков, систематические исследования в этой области не проводились. Транспорт НЧ через наименее проницаемый из гистогематических барьеров - гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) к началу данного исследования также оставался практически неизученным.

Несмотря на обширный опыт по созданию наносомальных форм различных JIB, подходы к созданию таких форм недостаточно систематизированы и остаются, как правило, эмпирическими, видимо, вследствие разнообразия фармакологических задач и применяемых материалов. В связи с этим разработка наносомальной формы каждого конкретного JIB требует длительной и трудоемкой экспериментальной работы.

Цель работы состояла в выявлении закономерностей, определяющих способность полимерных НЧ влиять на фармакологическое действие различных антибиотиков. В частности, представлялось необходимым изучить влияние состава наносомальных форм на параметры биораспределения антибиотиков. Преодоление ГЭБ является важнейшей проблемой химиотерапии; в связи с этим одна из наиболее существенных задач состояла в изучении возможности использования полибутилцианоакрилатных (ПБЦА) НЧ для доставки противоопухолевого антибиотика доксорубицина через ГЭБ в мозг и оценке эффективности наносомальной формы доксорубицина на модели интракраниальной глиобластомы. Наконец, для достижения цели исследования необходимо было изучить влияние наносомальной формы на активность антибактериальных антибиотиков в отношении экспериментальных инфекций, в том числе туберкулеза.

Работа выполнена при участии НИИ морфологии человека РАМН (Москва), НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф, Гаузе РАМН (Москва), ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии (Оболенск), Всероссийского научного центра молекулярной диагностики и лечения (Москва), Еврейского медицинского и исследовательского центра (Денвер, США) и Института фармацевтической технологии Университета им. Гёте (Франкфурт-на-Майне, Германия).

Исследования выполнены при поддержке гранта №2440 по программе БиоПромышленная Инициатива (BII) Государственного Департамента США, грантов Международной ассоциации по содействию сотрудничеству с учеными из Новых независимых государств бывшего Советского Союза

INTAS) M» 94-310 и 00-838 и грантов Немецкого научно-исследовательского сообщества (DFG).

Работа также является частью научных исследований, проводимых на кафедре биотехнологии и бионанотехнологии Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М,В. Ломоносова по госконтракту с Роснаукой № 02.512.11.2328 «Разработка субмикронных носителей и новых лекарственных форм биологически активных субстанций таргетного действия для терапии распространенных болезней человека (онкология, внутриклеточные инфекции)», в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы».

Автор выражает глубокую признательность проф. Й. Кройтеру (Университет им. Гёте, Франкфурт-на-Майне, Германия) и проф. Л.Б. Хейфецу (Еврейский медицинский исследовательский центр, Денвер, США), оказавшим неоценимую поддержку при выполнении работы и получении грантов INTAS, DFG и BII, благодаря которым работу удалось успешно завершить.

Автор также сердечно благодарит к.б.н. A.C. Халанского, к.х.н. О.М. Максименко, к.х.н. Л.В. Ванчугову, к.х.н. Е.В. Шипуло, к.б.н. И.И. Любимова, д.м.н. Э.Р. Переверзеву, к.м.н. И.Д. Трещалина и А.П. Будько за высокопрофессиональное содействие в процессе выполнения работы и ценные советы при ее написании.

1. Обзор литературы. Системы доставки лекарственных веществ на основе полимерных наночастиц

Впервые концепцию направленной доставки JIB сформулировал еще Пауль Эрлих, мечтавший о лекарстве, которое при введении в организм находит орган-мишень как «волшебная пуля». Наряду с прогрессом физических и химических наук актуальность этой проблемы послужила стимулом для разработки подходов к созданию разнообразных систем направленной доставки JIB.

Такие системы можно разделить на две основные группы: конъюгаты JIB с макромолекулярным носителем и коллоидные системы, некоторые типы которых приведены в Табл. 1.1. Размер всех коллоидных носителей составляет менее одного микрона, то есть, в соответствии с определением Энциклопедии фармацевтической технологии [1], все эти носители являются объектами нанотехнологии. Как правило, для терапевтических целей применяют носители размером 100 - 500 нм.

Самым известным представителем коллоидных носителей являются липосомы [2,3]. Среди альтернативных носителей наибольший интерес представляют полимерные НЧ. Эту технологию, зародившуюся еще в начале 70-х годов [4], отличает гибкость, обусловленная разнообразием полимеров, применяемых для получения НЧ.

В настоящем обзоре рассмотрены наиболее важные аспекты направленной доставки JIB с помощью НЧ и приведены примеры успешного применения этой технологии. Применение НЧ в диагностических целях выходит за рамки данного обзора.

Таблица 1.1. Типы коллоидных систем, используемых для доставки ЛВ

Тип Типичные размеры, нм Характеристика

Липосомы 100—200 Капсулы, внешняя мембрана которых состоит из природных фосфолипидов; активный ингредиент растворен во внутренней водной фазе или в липидной мембране

Полимерные наночастицы 100—500 Твердые частицы из полимеров (природных или синтетических); активный ингредиент распределен (растворен) в твердой фазе и/или адсорбирован на поверхности

Липидные наночастицы 100—500 Частицы из твердых липидов; активный ингредиент распределен (растворен) в твердой фазе и адсорбирован на поверхности

Полимерные нанокапсулы 100—300 Капсулы с внутренней масляной фазой, внешняя оболочка состоит из биодеградируемых полимеров; активный ингредиент растворен во внутренней фазе

Наногели 50—250 Частицы из гидрофильного геля, состоящего из поперечно-сшитых полимеров (например, система ПЭГ - полиэтиленимин или полисахариды)

Полимерные мицеллы 20—150 Самоорганизующиеся мицеллы из блок-сополимеров типа А-В или А-В-А; активный ингредиент солюбилизирован или ковалентно связан с полимером

Полиплексы /липоплексы 50—150 Комплексы ДНК с поликатионами или положительно заряженными липидами

Дендримеры 5—10 Сверхразветвленные полимеры, макромолекулы которых имеют сферическую форму; активный ингредиент иммобилизован во внутренних полостях макромолекул

Нано-кристаллы 100—500 Кристаллическая форма активного ингредиента; кристаллы стабилизированы поверхностно-активным веществом

1.1. Технология

Итак, полимерные НЧ представляют собой твердые частицы размером от 10 до 1000 нм, состоящие из полимеров как природного (например, альбумин, хитозан, альгинат), так и синтетического (например, полилактиды, полиакрилаты и пр.) происхождения и содержащие активный ингредиент, который может быть инкапсулирован, адсорбирован или присоединен ковалентной связью [1]. Данное определение распространяется также на нанокапсулы, состоящие из полимерной оболочки, внутри которой находится масляная фаза.

СНЭ(Н) СН3 I

-С - С - С I

СОО-А1ку1 Я а

С— сн3 о

I II -0-СН—сб

СНз

Р1А О

РЕС в

О II

-о-сн2—с т

-о—сн-со о—(сн,)—с

Г д

Рис. 1.1. Химическая структура некоторых полимеров, применяемых для получения наночастиц: а) полиметакрилаты (К- = СООСН3, СООС4Н9, СООСН2СН2^(СНз)зСГ, СООСН2СН2М+(СНз)2; б) гомополимер молочной кислоты (РЬА); в) гомополимер молочной кислоты, модифицированный полиэтиленгликолем (РЕС-РЬА); г) сополимер молочной и гликолевой кислот (РЬвА); д) поли-е-капролактон.

Как правило, НЧ получают из готовых полимеров путем эмульгирования или осаждения. Так, например, получают НЧ из полилаьсгидов, полиакрилатов и поли-е-капролактона [5,6]; структуры этих полимеров приведены на Рис. 1.1. ЛВ включается в частицу в процессе ее формирования и, в зависимости от физико-химических свойств (растворимости), может присутствовать в органической или водной фазе. НЧ из полиакрилатов можно получать также полимеризацией соответствующих мономеров в водной фазе; при этом наиболее эффективная сорбция достигается, когда J1B присутствует в полимеризационной среде [7].

Помимо упомянутых выше стабильности и высокой емкости, к технологическим достоинствам НЧ следует отнести их способность связывать как гидрофильные, так и гидрофобные вещества, а также пригодность для разнообразных путей введения в организм, в том числе для перорального и ингаляционного. При получении НЧ, предназначенных для парентеральных путей введения, используют только биодеградируемые полимеры.

При введении в организм JIB высвобождается из НЧ путем диффузии и/или десорбции. Выделению веществ также способствуют набухание полимерной матрицы, ее эрозия и деградация. Поскольку скорость деградации полимеров, используемых для получения НЧ, варьирует в широких пределах — от нескольких часов (полиалкилцианоакрилаты, ПАЦА) до нескольких месяцев (полилактиды) — применение наносомальной формы позволяет достигать контролируемого (в том числе пролонгированного) выделения активного ингредиента. Таким образом, выбор полимера-носителя является одним из ключевых факторов этой технологии, в значительной степени определяющим такие важные параметры наносомальной формы, как эффективность включения активного ингредиента и скорость его выделения, свойства поверхности, скорость биодеградации и, в конечном счете, параметры биораспределения и терапевтическую эффективность такой формы.

В частности, целесообразность применения ПАЦА для получения НФ обусловлена, прежде всего, их низкой токсичностью и биосовместимостью. Алкилцианоакрилаты, применяемые для получения этих НЧ, широко используют в медицине в качестве хирургических клеев, таких как Indennil® (2-п-бутилцианоакрилат, Henkel, Germany), Trufill® (2-п-бутилцианоакрилат, Cordis Neurovascular Inc., U.S), Dermabond® (2-п-октилцианоакрилат, Ethicon Inc., Johnson & Johnson, U.S.) и др. В процессе получения НЧ образуются низкомолекулярные полимеры (3000 - 4000 Да), которые в организме подвергаются быстрой деградации в результате ферментативного гидролиза; продукты деградации (полицианоакриловая кислота и соответствующий спирт) выводятся из организма в течение нескольких суток (Рис. 1.2) [7, 8].

Таблица 1.2.

Сравнительные характеристики полилактидов и полиалкилцианоакрилатов

Полимеры Достоинства Недостатки

Полиалкилциано- акрилаты (РАСА) Простота получения Низкая токсичность Экономичность Быстрая биодеградация Низкая молекулярная масса (2-4 кДа) обеспечивает полное и быстрое выведение полимера из организма Неэффективная сорбция высоко гидрофобных и высоко гидрофильных соединений Быстрая биодеградация

Гомополимеры молочной кислоты (РЬА) и сополимеры молочной и гликолевой кислот (РЬвА) Гибкая технология: Широкий выбор полимеров фармацевтического назначения Возможность регулировать скорость биодеградации и гидрофобность Возможность сорбции гидрофобных и гидрофильных соединений Низкая токсичность и биосовместимость Наличие лекарственных препаратов на основе РЬА/РЬвА Многоступенчатый процесс получения, сложное аппаратурное оформление

Инициация полимеризации ионами ОН"*

Рост цепи внутрь фазы мономера

Терминация растущих цепей протонами водной фазы

Выделение олигомеров в отдельную фазу. Солюбилизация мономера этой фазой

С-» Кг-шдщмп

Инициирование Рост цепи Установление равновесной Терминация

ММ олигомера

Рис. 1.2. Превращения растущей цепи полиалкилцианоакрилатов [8]).

Сравнительные характеристики полилактидов и полиалкил-цианоакрилатов с точки зрения целесообразности их применения для получения наночастиц - носителей JIB приведены в Табл. 1.2.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Гельперина, Светлана Эммануиловна

выводы

1. Разработана технология получения наносомальной формы доксорубицина на основе ПБЦА НЧ. Изучено влияние условий полимеризации на свойства НЧ.

2. ПБЦА НЧ, модифицированные полисорбатом 80, являются эффективным средством доставки доксорубицина в мозг при внутривенном введении. НЧ доставляют в мозг ~1% дозы введенной дозы, то есть проникают в мозг так, как если бы он не был защищен ГЭБ.

3. Наносомальная форма доксорубицина оказывает выраженное противоопухолевое действие на интракраниальную глиобластому у крыс, тогда как его стандартная лекарственная форма малоэффективна. Выявлено влияние состава наносомальной формы на фармакологический эффект.

3. Модификация ПБЦА НЧ полоксамером 188 позволяет при внутривенном введении доставить в мозг терапевтически эффективные концентрации JIB, поступление которых в мозг ограничивается ГЭБ.

4. Найденная корреляция между профилями сорбции белков и фармакологическим эффектом наносомальных форм доксорубицина предполагает, что проникновение в мозг ПБЦА НЧ, модифицированных полоксамером 188 или полисорбатом 80, происходит при участии аполипопротеина A-I, который эти частицы адсорбируют при введении в кровь.

5. Показано, что наносомальная форма доксорубицина на основе ПБЦА НЧ обладает радиационной устойчивостью, то есть может быть стерилизована радиационными методами. Определена стерилизующая доза 15 кГр.

6. Разработана технология получения наносомальных форм рифампицина на основе наночастиц ПБЦА и полилактидов. Кинетика выделения рифампицина из наночастиц зависит от структуры полимера.

7. Показано, что легкие не накапливают изученные НЧ с рифампицином. При этом концентрации наносомальных форм в легких зависят от градиента концентраций между кровью и легкими.

8. Модификация ПБЦА НЧ полоксамером 407 приводит к повышению концентрации связанного с НЧ рифампицина в легких. Показано, что влияние полоксамера 407 на распределение НЧ зависит от структуры полимера.

9. Включение рифампицина и моксифлоксацина в НЧ приводит к повышению их эффективности при лечении экспериментального туберкулеза по сравнению со стандартными лекарственными формами

10. Включение рифампицина и стрептомицина в НЧ приводит к повышению их эффективности при лечении острых бактериальных инфекций по сравнению со стандартными лекарственными формами.

И. Включение в ПБЦА НЧ нерастворимых в воде субстанций позволяет значительно повысить их содержание в водной фазе.

12. Использование исключительно фармацевтических ингредиентов, мягкие условия получения, позволяющие сохранять структуру биологически активных веществ, емкость, стабильность и возможность стерилизации предопределяют технологичность лекарственных форм на основе полибутилцианоакрилатных и полилактидных наночастиц.

2.10. Заключение

Разработана наносомальная лекарственная форма доксорубицина на основе ПБЦА, модифицированных полисорбатом 80. Эффективность наносомальной формы в сравнении со стандартной лекарственной формой исследована на модели интракраниальной глиобластомы 101/8 у крыс.

Для того чтобы обеспечить возможность сравнения результатов в большинстве экспериментов использовали одинаковый режим лечения: 3 х 1,5 мг/кг внутривенно в дни 2, 5 и 8 после имплантации опухоли. Противоопухолевый эффект оценивали по ряду критериев, в том числе увеличение продолжительности жизни, число животных с длительной ремиссией, а также морфометрические (динамика роста опухоли), гистологические и иммуногистохимические показатели (пролиферация, плотность сосудов).

Наносомальная форма доксорубицина проявила противоопухолевый эффект в отношении глиобластомы, который по всем вышеупомянутым показателем был более выраженным, чем эффект стандартной формы доксорубицина. Увеличение продолжительности жизни составило 85%; более того, наносомальный доксорубицин обеспечивал длительную ремиссию у > 20% животных. Отсутствие опухоли у этих животных не наблюдалось, по крайней мере, в течение 6 месяцев, в то время как нелеченные животные погибали в течение 20 дней. Воспроизводимость полученных результатов подтверждена при проведении более 10 серий экспериментов на более чем 300 животных.

Как свидетельствуют результаты фармакокинетических исследований, противоопухолевый эффект наносомального доксорубицина в отношении интракраниальной, опухоли обусловлен созданием в мозге терапевтических концентраций этого антибиотика. Иначе говоря, наночастицы доставляют в мозг антибиотик, который в свободном виде практически в мозг не проникает.

Данные иммуногистохимнческого исследования предполагают, что противоопухолевый эффект наносомального доксорубицина в отношении глиобластомы в значительной мерее обусловлен ингибированием роста сосудов в опухоли.

Результаты токсикологического исследования показали, что гематологическая, кардио- и тестикулярная токсичность доксорубицина могут быть значительно ослаблены при связывании антибиотика с ПБЦА наночастицами. Добавление в наносомальную лекарственную форму полисорбата 80 способствует снижению ее токсичности.

Список литературы диссертационного исследования доктор химических наук Гельперина, Светлана Эммануиловна, 2010 год

1. Kreuter J. Nanoparticles. 1.: Swarbrick J., Boylan J.C. (Eds.), Encyclopedia of Pharmaceutical Technology. // M. Dekker. - New York. - 1994. - V.10. - P. 165-190.

2. Швец В.И., Каплун А.П., Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Чехонин В.П. От липосом семидесятых к нанобиотехнологии XXI века. // Рос. нанотехнол. 2008. - Т.З. - С.52-56.

3. Дудниченко A.C., Краснопольский Ю.М., В.И. Швец. Липосомальные лекарственные препараты в эксперименте и клинике. // Харьков: РА-Каравелла. 2001. — 144 с.

4. Kreuter J. Nanoparticles~a historical perspective. // Int J Pharm. 2007. -V.331, №1. - P.1-10.

5. Bala I., Hariharan S., Kumar M.N. PLGA nanoparticles in drug delivery: the state of the art. // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 2004. - V.21, No5. -P.387-422.

6. Nguyen C.A., Konan-Kouakou Y.N., Allemann E., Doelker E., Quintanar-Guerrero D., Fessi H., Gurny R. Preparation of surfactant-free nanoparticles of methacrylic acid copolymers used for film coating. // AAPS PharmSciTech.- 2006. V.7, №3. - Article 63.

7. Vauthier C., Bouchemal K. Methods for the preparation and manufacture of polymeric nanoparticles. // Pharm. Res. 2008 - V.26, No5. -P.1025-1058

8. Behan N., Birkinshaw C., Clarke N. Poly(n-butyl cyanoacrylate) nanoparticles: a mechanistic study of polymerisation and particle formation. // Biomaterials. -2001. V.22, Nol. -P.1335-1344.

9. Pinto-Alphandary H., Andremont A., Couvreur P. Targeted delivery of antibiotics using liposomes and nanoparticles. Int. J. Antimicrob. Agents // -2000. V.13, No3. - P. 155-168.

10. Moghimi S.M., Hunter A.C., Murray J.C. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. // Pharmacol. Rev. 2001. - V. 53, No2. -P. 283-318.

11. Moghimi S.M., Hunter A.C. Capture of stealth nanoparticles by the body's defences. // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 2001. - V. 18. - P.527-550.

12. Moghimi S.M., Hunter A.C. Poloxamers and poloxamines in nanoparticle engineering and experimental medicine. // Trends Biotechnol. 2000. - V. 18.- P.412-420.

13. Araujo L., Loebenberg R., Kreuter J. Influence of the surfactant concentration on the body distribution of nanoparticles. // J. Drug Targeting. 1999. - V.6.- P.373-385.

14. Redhead H.M., Davis S.S., Ilium L. Drug deliveiy in poly(lactide-co-glycolide) nanoparticles surface modified with poloxamer 407 and poloxamine 908: In vitro characterisation and in vivo evaluation. // J. Control. Release. 2001. - V.70. - P.353-363.

15. Stolnik S., Ilium L., Davis S.S. Long circulating microparticle drug carriers. Adv. DrugDeliv. Rev. 1995. - V.l6. - P. 195-214.

16. Moghimi S.M., Gray T. A single dose of intravenously injected poloxamine-coated long-circulating particles triggers macrophage clearance of subsequent doses in rats. // Clin. Sci. (Lond). 1997. - V. 93. - P.371-379.

17. Peracchia M.T, Vauthier C., Passirani C., Couvreur P., Labarre D. Complement consumption by poly(ethylene glycol) in different conformations chemically coupled to poly(isobutyl 2-cyanoacrylate) nanoparticles. // Life Sci. 1997.- V.61.-P.749-761.

18. Florence A.T., Hussain N. Transcytosis of nanoparticle and dendrimer delivery systems: evolving vistas. // Adv. Drug Deliv. Rev. 2001. - V.50. Suppl 1. - S69-89.

19. Florence A.T. Issues in oral nanoparticle drug carrier uptake and targeting. // J. Drug Target. 2004. - V. 12. - P.65-70.

20. Delie F., Blanco-Prfeto M.J. Polymeric particulates to improve oral bioavailability of peptide drugs. // Molecules. 2005. - V.10, Nol. - P.65-80.

21. Sakuma S., Sudo R., Suzuki N., Kikuchi H., Akashi M., Ishida Y., Hayashi M. Behavior of mucoadhesive nanoparticles having hydrophilic polymeric chains in the intestine. // J. Control. Release. 2002. - V.81. - P.281-290.

22. Yang S., Zhu J., Lu Y., Liang B., Yang C. Body distribution of camptothecin solid lipid nanoparticles after oral administration. // Pharm. Res. 1999. -V.16. - P.751-757.

23. Ubrich N., Schmidt C., Bodmeier R., Hoffman M., Maincent P. Oral evaluation in rabbits of cyclosporin-loaded Eudragit RS or RL nanoparticles. // Int. J. Pharm. 2005. - V.288. - P. 169-175.

24. Arbos P., Campanero M.A., Arangoa M.A., Irache J.M. Nanoparticles with specific bioadhesive properties to circumvent the pre-systemic degradation of fluorinated pyrimidines. // J. Control. Release. 2004. - V.96. - P.55-65.

25. Moghimi S.M., Hawley A.E., Christy N.M., Gray T., Ilium L., Davis S.S. Surface engineered nanospheres with enhanced drainage into lymphatics and uptake by macrophages of the regional lymph nodes. // FEBS Lett. 1994. -V.344. -P.25-30.

26. Moghimi S.M. Modulation of lymphatic distribution of subcutaneously injected poloxamer 407-coated nanospheres: the effect of the ethylene oxide chain configuration. // FEBS Lett. 2003. - V.540. - P.241-244.

27. Jain R.K. Delivery of molecular medicine to solid tumors: lessons from in vivo imaging of gene expression and function. // J. Control. Release. 2001. -V.74. - P. 7-25

28. Padera T.P., Stoll B.R., Tooredman J.B., Capen D., di Tomaso E., Jain R.K. Cancer cells compress intratumour vessels. // Nature. 2004. - V.427. - P. 695.

29. Maeda H., Matsumura Y. Tumoritropic and lymphotropic principles of macromolecular drugs. // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 1989. — V.6. -P.193-210.

30. Yi Y„ Kim J.H., Kang H.W., Oh H.S., Kim S.W., Seo M.H. A polymeric nanoparticle consisting of mPEG-PLA-Toco and PLMA-COONa as a drug carrier: improvements in cellular uptake and biodistribution. // Pharm. Res. -2005. V.22. - P.200-208.

31. Miura H., Onishi H., Sasatsu M., Machida Y. Antitumor characteristics of methoxypolyethylene glycol-poly(DL-lactic acid) nanoparticles containing camptothecin. // J. Control. Release. 2004. - V.97. - P. 101-113.

32. Lenaerts V., Labib A., Chouinard F., Rousseau J., Ali H., van Lier J.E. Nanocapsules with a reduced liver uptake: targeting of phthalocyanines to EMT-6 mouse mammary tumor in vivo. // Eur. J. Pharm. Biopharm. 1995. -V.41. -P.38-43.

33. Kaul G., Amiji M. Biodistribution and targeting potential of poly(ethylene glycol)-modified gelatin nanoparticles in subcutaneous murine tumor model. // Drug Target. 2004. - V.12. - P.585-591.

34. Hobbs S.K., Monsky W.L., Yuan F., Roberts W.G., Griffith L., Torchilin V.P., Jain R.K. Regulation of transport pathways in tumor vessels: Role of tumor type and microenvironment. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. -V.95. - P.4607-4612.

35. Alexis F., Rhee J.W., Richie J.P., Radovic-Moreno A.F., Langer R., Farokhzad O.C. New frontiers in nanotechnology for cancer treatment. // Urol Oncol. 2008. - V.26, Nol. - P.74-85.

36. Vijayaraghavalu S., Raghavan D., Labhasetwar V. Nanoparticles for delivery of chemotherapeutic agents to tumors. // Curr. Opin. Investig. Drugs. 2007. - V.8, No6. - P.477-484.

37. Moghimi S.M. Recent developments in polymeric nanoparticle engineering and their applications in experimental and clinical oncology. // Anticancer Agents Med. Chem. 2006. - V.6, No6. -P.553-561.

38. Chiannilkulchai N., Driouich Z, Benoit J.P., Parodi A.L., Couvreur P. Doxorubicin-loaded nanoparticles: increased efficiency in murine hepatic metastases. // Sel. Cancer Ther. 1989. - V.5. -P.l-11.

39. Leslie E.M., Deeley R.G., Cole S.P. Multidrug resistance proteins: role of P-glycoprotein, MRP1, MRP2, and BCRP (ABCG2) in tissue defense.// Toxicol. Appl. Pharmacol. 2005. - V. 204, No3. - P.216-237.

40. Vauthier C, Dubernet C, Chauvierre C, Brigger I, Couvreur P. Drug delivery to resistant tumors: the potential of poly(alkyl cyanoacrylate) nanoparticles. // J. Control. Release.-2003. V.93, No2.-P.151-160.

41. Soma C.E., Dubernet C., Bentolila D., Benita S., Couvreur P. Reversion of multidrug resistance by co-encapsulation of doxorubicin and cyclosporin A in polyalkylcyanoacrylate nanoparticles. // Biomaterials. 2000. - V.21. - P. 1-7.

42. Nobs L., Buchegger F., Gurny R., Allemann E. Current methods for attaching targeting ligands to liposomes and nanoparticles. // J. Pharm. Sci. 2004. -V.93.-P. 1980-1992.

43. Olivier J.C. Drug transport to brain with targeted nanoparticles. // NeuroRx. -2005. V.2, Nol. - P. 108-119.

44. Xu Z., Gu W., Huang J., Sui H., Zhou Z., Yang Y., Yan Z„ Li Y. In vitro and in vivo evaluation of actively targetable nanoparticles for paclitaxel delivery. // Int. J. Pharm. -2005. V.288. - P. 361-368.

45. Sahoo S.K., Ma. W., Labhasetwar V. Efficacy of transferrin-conjugated paclitaxel-loaded nanoparticles in a murine model of prostate cancer. // Int. J. Cancer. 2004. - V. 112. - P.335-340.

46. Sudimack J., Lee R.J. Targeted drug delivery via the folate receptor. // Drug Delivery Rev. 2000. - V.41. - P. 147-162.

47. Zhang Z., Huey Lee S., Feng S.S. Folate-decorated poly(lactide-co-glycolide)-vitamin E TPGS nanoparticles for targeted drug delivery. // Biomaterials. 2007. - V.28, No 10. - P. 1889-1899.

48. Stevens P.J., Sekido M., Lee R.J. A folate receptor-targeted lipid nanoparticle formulation for a lipophilic paclitaxel prodrug. // Pharm. Res. 2004. - V.21. - P.2153-2157.

49. Hood J.D., Bednarski M., Frausto R., Guccione S., Reisfeld R.A., Xiang R, Cheresh D.A. Tumor regression by targeted gene delivery to the neovasculature. // Science. 2002. - V.296. - P.2404-2407.

50. Murphy E.A., Majeti B.K., Barnes L.A., Makale M., Weis S.M., Lutu-Fuga K., Wrasidlo W., Cheresh D.A. Nanoparticle-mediated drug delivery to tumor vasculature suppresses metastasis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2008. -V.105, No27. - P.9343-9348.

51. Silverstein S.C., Kabbash C. Penetration, retention, intracellular localization, and antimicrobial activity of antibiotics within phagocytes. // Curr. Opin. Hematol. 1994. - V.l. - P.85-91.

52. Carryn S., Chanteux H., Serai C., Mingeot-Leclercq M.P., Van Bambeke F., Tulkens P.M. Intracellular pharmacodynamics of antibiotics. // Infect. Dis. Clin. North Am. 2003. - V.l7, No3. - P.615-634.

53. Couvreur P., Fattal E., Andremont A. Liposomes and nanoparticles in the treatment of intracellular bacterial infections. // Pharm. Res. 1991. - V.8, No9. - P.1079-1086.

54. Fattal E., Youssef M., Couvreur P., Andremont A. Treatment of experimental salmonellosis in mice with ampicillin-bound nanoparticles. // Antimicrob. Agents Chemother. 1989. -V.33. P. 1540-1543.

55. Fawaz F., Bonini F., Maugein J., Lagueny A.M. Ciprofloxacin-loaded polyisobutylcyanoaciylate nanoparticles: pharmacokinetics and in vitro antimicrobial activity. // Int. J. Pharm. 1998. - V. 168. - P.255-259.

56. Gonzalez-Martin G., Merino I., Rodríguez-Cabezas M.N. Characterization and trypanocidal activity of nifurtimox-containing and empty nanoparticles of polyethylcyanoacrylates. // Pharm. Pharmacol. 1998. - V.50. - P.29-35.

57. Pandey R., Zahoor A., Sharma S., Khuller G.K. Nanoparticle encapsulated antitubercular drugs as a potential oral drug delivery system against murine tuberculosis. // Tuberculosis. 2003. - V.83. - P.373-378.

58. Kreuter J. Liposomes and nanoparticles as vehicles for antibiotics. // Infection. 1991. - V.19, Suppl 4. - S.224-228.

59. Gelperina S., Kisich K., Iseman M.D., Heifets L. The potential advantages of nanoparticle drug delivery systems in chemotherapy of tuberculosis. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2005. - V.l72, Nol2. - P.1487-1490.

60. Gelperina S. Brain delivery by nanoparticles. in Gupta R.B., Kompella U.B. (Eds.), Nanoparticle Technology for Drug Delivery. // Taylor and Francis. -New York, U.S.A. 2006. - P. 273-318.

61. Gelperina S. Nanocarriers and drug delivery. In: Regional Cancer Chemotherapy. Schlag P.M., Stein U. (Eds.) // Humana Press. USA. - 2007. -P. 163-180.

62. Гельперина С.Э., Швец В.И. Системы доставки лекарственных веществ на основе полимерных наночастиц. //Биотехнология. 2009. - Т.З. - С. 8-23.

63. Misra A., Ganesh A., Shahiwala A., Shah S.P. Drug delivery to the central nervous system: a review. // J. Pharm. Pharmaceut. Sci. 2003. - V.6, No2. -P.252-273. URL http://www.ualberta.ca/~csps

64. Begley D.J., Brightman M.W. Structural and Functional Aspects of the Blood-Brain Barrier. In: Prokai L., Prokai-Tatrai K. (Eds). Progress in Drug Research. V.61. // Birkhauser Verlag. - Basel (Switzerland). - 2003. - P.39-78.

65. Pardridge W.M. CNS drug design based on principles of blood-barrier transport. // J. Neurochem. 1998. - V.70. - P.1781-1792.

66. Tsuji A., Tamai I. Carrier-mediated or specialized transport of drugs across the blood-brain barrier. // Adv. Drug Delivery Rev. 1999. - V.36. - P.277-290.

67. Groothuis D.R. The blood-brain and blood-tumor barriers: A review of strategies for increasing drug delivery. // Neuro-Oncology. 2000. - V.2. - P. 45-59.

68. Pardridge W.M. Non-invasive drug delivery to the human brain using endogeneous blood-brain barrier systems. // PSTT. 1999. - V.2. - P.49-59.

69. Huwyler J., Wu D., Pardridge W.P. Brain drug delivery of small molecules using immunoliposomes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - V.93. - P. 14164-14169.

70. Kreuter J., Alyautdin R.N., Kharkevich D.A., Ivanov A.A. Passage of peptides through the blood-brain barrier with colloidal polymer particles (nanoparticles). // Brain Res. 1995. - V.674. - P. 171-174.

71. Alyautdin R., Gothier D., Petrov V., Kharkevich D., Kreuter J. Analgesic activity of the hexapeptide dalargin adsorbed on the surface of Ps 80-coated poly(butyl cyanoaciylate) nanoparticles. // Eur. J. Pharm. Biopharm. 1995. -V.41. - P.44-48.

72. Alyautdin R.N., Petrov V.E., Langer K., Berthold A., Kharkevich D.A., Kreuter J. Delivery of loperamide across the blood-brain barrier with Ps80-coated polybutylcyanoacrylate nanoparticles. // Pharm. Res. 1997. - V.14. -P.325-328.

73. Басел A.A., Петров B.E., Балабаньян В.Ю., Гельперина С.Э., Трофимов С.С., Воронина Т.А., Аляутдин Р.Н. Транспорт прозерина в головной мозг при помощи поли(бутил)цианоакрилатных наночастиц, покрытых полисорбатом. // Рос. Мед. Ж. 2006. - №4. - С. 28-32.

74. Grossman S.A., Batara J.F. Current management of glioblastoma multiforme. // Semin. Oncol. 2004. - V.31, No5. - P.635-644.

75. Stupp R, van den Bent M.J., Hegi M.E. Optimal role of temozolomide in the treatment of malignant gliomas. // Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 2005. — V.5, No3. - P.198-206.

76. Fleming A.B., Saltzman W.M. Pharmacokinetics of the carmustine implant. // Clin. Pharmacokinet. 2002. - V.41, No6. - P.403-419.

77. Kaajik P., Troost D., de Boer O.J. Daunorubicin and doxorubicin but not BCNU have deleterious effects on organotypic multicellular spheroids of gliomas. // Br. J. Cancer. 1996. - V.74. - P. 187-193.

78. Stan A.C., Casares S., Radu D. Walter GF, Brumeanu TD. Doxorubicin-induced death in highly invasive human gliomas. // Anticancer Res. 1999. -V.19, 2A. - P. 941-950.

79. Vauthier C., Dubernet C., Fattal E., Pinto-Alphandary H., Couvreur P. Poly(alkylcyanoacrylates) as biodegradable materials for biomedical applications. // Adv. Drug Deliv. Rev. 2003. - V.55, No4. - P.519-548.

80. Gulyaev A.E., Gelperina S.E., Skidan I.N., Antropov A.S., Kivman G.Ya., Kreuter J. Significant transport of doxorubicin into the brain with Ps 80-coated nanoparticles. // Pharm. Res. 1999. - V.16. - 1564-1569.

81. Bootz A., Russ Т., Gores F., Karas М., Kreuter J. Molecular weights of poly(butyl cyanoacrylate) nanoparticles determined by mass spectrometiy and size exclusion chromatography. // Eur J. Pharm. Biopharm. 2005. - V.60, No3. -P.391-399.

82. Rolland A. Clinical pharmacokinetics in hepatoma patients after a single intravenous injection of free or nanoparticle-bound anthracyclines. // Int. J. Pharm. 1989. V.54. - P.' 113-121.

83. Danesi R., Fogli S., Gennari A., Conte P., Del Tacca M., Pharmacokinetic-pharmacodynamic relationships of the anthracycline anticancer drugs. // Clin. Pharmacokinet. 2002. - V.41. - P.431-444.

84. Schlageter K.E., Molnar P., Lapin G.D., Groothuis D.R. Microvessel organization and structure in experimental brain tumors: microvessel populations with distinctive structural and functional properties. // Micro vase. Res. 1999. V.58. - P.312-328.

85. Vajkoczy P., Menger M.D. Vascular microenvironment in gliomas. // Cancer Treat Res. 2004. - V. 117. - P.249-262.

86. Яблоновекая Л.Я., Спрышкова H.A. Морфологическая и биологическая характеристика экспериментальных опухолей мозжечка крыс. // Арх. Патол. 1971. - Т.ЗЗ, №2. - С. 50-53.

87. Смирнова З.С., Герасимова Г.К., Родионова Ю.В. и др. Экспериментальные опухоли мозга в системе доклинического изучения новых противоопухолевых препаратов. // Материалы 5 Всероссийского съезда онкологов. Казань. - 4-7 октября 2000. - С. 214-217.

88. Tröster S.D., Muller U., Kreuter J. Modification of the body distribution of poly(methyl methacrylate) nanoparticles in rats by coating them with surfactants. // Int. J. Pharm. 1990. - V.61. - P. 85-100.

89. Borchardt G., Kreuter J. Interaction of serum components with poly(methylmethacrylate) nanoparticles and the resulting body distribution after intravenous injection in rats. // J. Drug Target. 1993. — V.l, Nol. -P.15-19.

90. Labarre D., Vauthier C., Chauvierre C., Petri В., Müller R., Chehimi M.M. Interactions of blood proteins with poly(isobutylcyanoacrylate) nanoparticles decorated with a polysaccharide brush. // Biomaterials. 2005. - V.26, No24. - P.5075-5084.

91. Wilkins D.J., Myers P.A. Studies on the relationship between the electrophoretic properties and their blood clearance and organ distribution in the rat. // Brit. J. Exp. Pathol. 1966. - V.47. - P.568 - 576.

92. Ambruosi A., Yamamoto H., Kreuter J. Body distribution of polysorbate-80 and doxorubicin-loaded 14C.poly(butyl cyanoacrylate) nanoparticles after i.v. administration in rats. // J. Drug Target. 2005. - V.13, NolO. - P.535-542.

93. Л Y., Powers S.K., Brown J.T., Miner R. Characterization of the tumor invasion area in the rat intracerebral glioma. // J. Neurooncol. 1996. - V.30, No3. - P.189-197.

94. Moos Т., Molgärd К. Cerebrovascular permeability to azo dyes and plasma proteins. // Neuropath. Appl. Neurobiol. 1993. - V. 19. - P. 120-127.

95. Lemarchand С., Gref R., Couvreur P. Polysaccharide-decorated nanoparticles. // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2004. - V.58. - P.327-341.

96. Kante В., Couvreur P., Dubois-Krack G., De Meester C., Guiot P., Roland M., Mercier M., Speiser P. Toxicity of polyalkylcyanoacrylate nanoparticles I: Free nanoparticles. // J. Pharm. Sci. 1982. - V.71. - P.786-790.

97. Kreuter J., Gelperina S. Use of nanoparticles for cerebral cancer. Tumori. -2008. V.94, No2. - P.271-277.

98. Hekmatara Т., Gelperina S., Vogel V., Yang Sh.-R., Kreuter J. Encapsulation of water-insoluble drugs in poly(butyl cyanoacrylate) nanoparticles. // J. Nanosci. Nanotechnol. 2009. - V.9. - P.5091-5098.

99. Zhou R., Mazurchuk R., Straubinger R.M. Antivasculature effects of doxorubicin-containing liposomes in an intracranial rat brain tumor model. // Cancer Res. 2002. - V.62. - P.2561-2566.

100. Straubinger R.M., Arnold R.D., Zhou R., Mazurchuk R., Slack J.E. Antivascular and antitumor activities of liposome-associated drugs. // Anticancer Res. 2004. - V.24. - P.397-404.

101. Гельперина С.Э., Смирнова 3.C., Халанский A.C., Скидан И.Н, Северин С.Е., Кройтер Й. Исследование наносомальной лекарственной формы доксорубицина. // Рос. биотерапевт, ж. 2004. - Т.З. - С.56-64.

102. Pereverzeva Е., Treschalin I., Bodyagin D., Maksimenko О., Kreuter J., Gelperina S. Intravenous tolerance of a nanoparticle-based formulation of doxorubicin in healthy rats. // Toxicol. Lett. 2008. - V.178, Nol. - P. 9-19.

103. Stojiljkovic M.P., Zhang D., Lopes H.F., Lee C.G., Goodfriend T.L., Egan B.M. Hemodynamic effects of lipids in humans. // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2001. - V.280, No 6. - R1674-R1679.

104. Szebeni J. Complement activation-related pseudoallergy caused by liposomes, micellar carriers of intravenous drugs, and radiocontrast agents. // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 2001. - V. 18, No6. - P.567-606.

105. Mazue G., Iatropoulos M., Imondi A., Castellino S., Brughera M., Podesta A., Delia Torre P., Moneta D. Anthracyclines: a review of general and special toxicity studies. // Int. J. Oncol. 1995. - V.7. - 713-726.

106. Zucchi R, Danesi R. Cardiac toxicity of antineoplastic anthracyclines. // Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents. - 2003. - V.3. - P.151-171.

107. Olivier J.C., Fenart L., Chauvet R., Pariat C., Cecchelli R„ Couet W. Indirect evidence that drug brain targeting using polysorbate 80-coated polybutylcyanoacrylate nanoparticles is related to toxicity. // Pharm. Res. -1999. V. 16. - P. 1836-1842.

108. Simeonova M., Chorbadjiev K., Antcheva M. Study of the effect of polybutylcyanoacrylate nanoparticles and their metabolites on the primary immune response in mice to sheep red blood cells. // Biomaterials. 1998. - -19, No23.-P.2187-21893.

109. Couvreur P., Kante В., Grislain L., Roland M., Speiser P. Toxicity of polyalkylcyanoacrylate nanoparticles II: Doxorubicin-loaded nanoparticles. // J. Pharm. Sei. 1982. - V.71. -P.790-792.

110. Borchardt G., Audus K.L., Shi F., Kreuter J. Uptake of surfactant-coated poly(methyl methacry late)-nanoparticles by bovine brain microvessel endothelial cell monolayers. // Int. J. Pharm. 1994. - V.l 10. - P.29-35.

111. Lück M. Plasmaproteinadsorption als möglicher Schlüsselfaktor für eine kontrollierte Arzneistoffapplikation mit partikulären Trägern. // Ph.D. Thesis. Freie Universität Berlin. - 1997. - P. 13 7-154.

112. Alyautdin R., Reichel A., Löbenberg R., Ramge P., Kreuter J., Begley D. Interaction of poly(butylcyanoacrylate) nanoparticles with the blood-brain barrier in vivo and in vitro.// J. Drug Targeting. 2001. - V.9. - P.209-221.

113. Kreuter J., Shamenkov D., Petrov V., Ramge P., Cychutek K., Koch-Brandt C., Alyautdin R. Apolipoprotein-mediated transport of nanoparticle-bound drugs across the blood-brain barrier. //J. Drug Targeting. 2002. - V.10. -P.317-326.

114. Panzenboeck U., Balazs Z., Sovic A., Hrzenjak A., Levak-Frank S., Wintersperger A., Malle E., Sattler W. ABCA1 and scavenger receptor class

115. B, type I, are modulators of reverse sterol transport at an in vitro blood-brain barrier constituted of porcine brain capillary endothelial cells. //J. Biol. Chem.- 2002. V.277. - P.42781-42789.

116. Hu Y.-P., Jarillon S., Dubernet C., Couvreur P., Robert J. On the mechanism of action of doxorubicin encapsulation in nanospheres for the reversal of multidrug resistance. // Cancer Chemother. Pharmacol. 1996. - V.37. -P.556-650.

117. Sommerfeld P., Schroeder U., Sabel B. Sterilization of unloaded polybutylcyanoacrylate nanoparticles. // Int. J. Pharm. 1998. - V. 164. -P.113-118.

118. Сборник нормативно-методических документов, регламентирующих радиационную стерилизацию медицинских материалов и изделий. // Москва. 1980. - Методики 1.5.2., 1.5.3.

119. El-Egakey М.А., Bentele V., Kreuter J. Molecular weights of polycyanoacrylate nanoparticles. //Int. J. Pharm. 1983. - V.13. - P.349 -352.

120. Милинчук В.К., Клиншпонт Э.Р., Тупиков В.И. Основы радиационной стойкости органических материалов. // Энергоатомиздат. Москва. -1994. - С.142-147.

121. Lenaerts V., Couvreur P., Christiaens-Leyh D., Joiris E., Roland M., Rollman В., Speiser P. Degradation of poly (isobutyl cyanoacrylate) nanoparticles. // Biomaterials. 1984. - V.5, No2. - P.65-68.

122. Müller R.H., Lherm C, Herboit J., Couvreur P. In vitro model for the degradation of alkylcyanoacrylate nanoparticles. // Biomaterials. 1990. -V. 11, No8. — P.590-595.

123. Lherm C., Müller R., Puisieux F., Couvreur P. II. Cytotoxicity of cyanoacrylate nanoparticles with different alkyl chain length. // Int. J. Pharm. 1992. -V.84.- P. 13-22.

124. Mohamed F., van der Walle C.F. Engineering biodegradable polyester particles with specific drug targeting and drug release properties. // J. Pharm. Sei. 2008. - V.97, Nol. - P.71-87.

125. Langer К., Seegmueller Е., Zimmer А., Kreuter J. Characterization of polybutylcyanoacrylate nanoparticles. I. Quantification of PBCA polymer and dextrans. // Int. J. Pharm. 1994. - V.l 10. - P.21-27.

126. Agrawal S., Panchagnula R. In vitro analysis of rifampicin and its effect on quality control tests of rifampicin containing dosage forms. // Pharmazie. -2004. V.59, NolO. - P.775-781.

127. Ueda M., Kreuter J. Optimization of the preparation of loperamide-loaded poly (L-lactide) nanoparticles by high pressure emulsification-solvent evaporation. // J. Microencapsul. 1997. - V.14, No5. - P.593-605.

128. Lamprecht A., Ubrich N., Perez M.H., Lehr C.-M., Hoffman M., Maincent P. Influences of process parameters on nanoparticle preparation performed by a double emulsion pressure homogenization technique. // Int. J. Pharm. -2000.-V.196.-P. 177-182.

129. Гельперина С.Э., Максименко O.O., Ванчугова Л.В., Шипуло Е.В., Шандрюк Г.А., Бондаренко Г.Н., Швец В.И. Влияние технологических параметров на физико-химические свойства полилактидных наночастиц, содержащих рифампицин. // Хим.-фарм. ж, в печати

130. Marzipans Т.Т., Sharda N., Singh S. Atypical Log D profile of rifampicin. // Indian J. Pharm. Sei. serial online. 2007. - V.69. - P.l97-201.

131. Bain D.F., Munday D.L., Cox P. Evaluation of biodegradable rifampicin-bearing microsphere formulations using a stability-indicating highperformance liquid chromatographic assay. // J. Eur. J. Pharm. Sci. 1998. -V.7, No 1. - P.57-65.

132. Siepmann J., Faisant N., Akiki J., Richard J., Benoit J.P. Effect of the size of biodegradable microparticles on drug release: experiment and theory. // J. Control. Release. 2004. - V.96, Nol. - P. 123-134.

133. Faisant N., Siepmann J., Benoit J.P. PLGA-based microparticles: elucidation of mechanisms and a new, simple mathematical model quantifying drug release. // Eur. J. Pharm. Sci. 2002. - V.5, No4. - P.355-366.

134. Vandervoort J., Ludwig A. Biocompatible stabilizers in the preparation of PLGA nanoparticles: a factorial design study. // Int. J. Pharm. 2002. -V.238. - P.77-92.

135. Birnbaum D.T., Kosmala J.D., Brannon-Peppas L. Optimization of preparation techniques for poly(lactic acid-co-glycolic acid) nanoparticles. // J. Nanoparticle Res. 2000. - V.2. - P. 173-181.

136. Wang X.Y., Ishida Т., Ichihara M., Kiwada H. Influence of the physicochemical properties of liposomes on the accelerated blood clearance phenomenon in rats. // J. Control. Release. 2005. - V. 104, Nol. - P. 91-102.

137. Ishida Т., Harashima H., Kiwada H. Liposome clearance. // Biosci. Rep. -2002. V.22, No2. - P .197-224.

138. Скидан И.Н., Гельперина С.Э., Северин C.E., Гуляев А.Е. Повышение антибактериальной активности рифампицина в отношении внутриклеточных инфекций с помощью биодеградируемых наночастиц. // Антибиот. Химиотер. 2003. - Т.48, №1. - С.23-26.

139. Гельперина С.Э., Гуляев А.Е., Иванов А.А., Пальцев М.А., Северин Е.С., Северин С.Е., Скидан И.Н. Композиция для лечения легочных инфекций. // Патент РФ № 2185818, приоритет 10.07.2001.

140. Anisimova Y., Gelperina S., Peloquin С., Heifets L. Nanoparticles as antituberculosis drug carriers: effect on activity against Mycobacterium tuberculosis in human monocyte-derived macrophages. // J. Nanoparticle Res. 2000. V.2. -P.165-171.

141. Heifets L. MIC as a quantitative measurement of the susceptibility of Mycobacterium avium strains to seven antituberculosis drugs. // Antimicrob Agents Chemother. 1988. - V.32, No8! - P.l 131-1136.

142. Shoen C.M., DeStefano M.S., Sklaney M.R., Monica B.J., Slee A.M., Cynamon M.H. Short-course treatment regimen to identify potential antituberculous agents in a murine model of tuberculosis. // J AC. 2004. -V.53.-P.641-645.

143. Burman W.J., Gallicano K., Peloquin C. Comparative pharmacokinetics and pharmacodynamics of the rifamycin antibacterials. // Clin. Pharmacokinet. -2001. V.40, No5. - P.327-341.

144. Schultz M.J., van der Poll T. Animal and human models for sepsis. // Ann. Med. 2002. - V.34. - P.573-581.

145. Calandra T. Pathogenesis of septic shock: implication for prevention and treatment. // J. Chemotherapy. 2001. - V. 13. - P.l73-180.

146. Fresta M., Puglisi G. Association of netilmicin sulphate to poly(alkylcyanoacrylate) nanoparticles: factors influencing particle delivery behaviour. // Drag Development Industr. Pharm. 1994. - V.20, No 14. -P.2227-2243.

147. Beutler В., Milsark I.W., Cerami A.C. Passive immunization against cachectin/tumor necrosis factor protects mice from lethal effect of endotoxin. // Science. 1985. - V.229. -P.869-871.

148. Dhillon J., Mitchison D.A. Activity and penetration of antituberculosis drugs in mouse peritoneal macrophages infected with Micobacterium microti OV254. // Antimicrob. Agents Chemother. 1989. - V.33, No8. - P. 12551259.

149. Maincent P., Thouvenot P., Amicabile C., Hoffman M., Kreuter J., Couvreur P., Devissaguet J.P. Lymphatic targeting of polymeric nanoparticles after intraperitoneal administration in rats. // Pharm. Res. 1992. - V.9, No 12. -P.1534-1539.

150. Перёльман М.И., Соколова Г.Б., Можохина Г.Н., Лазарева Я.В., Стрекачев А.Ю., Елистратова Н.А. Применение моксифлоксацина для оптимизации комплексной терапии туберкулеза. // Антибиот. химиотер.- 2004. Т.49, №6. - С.20-24.

151. Страчунский Л.С., Кречиков В.А. Моксифлоксацин фторхинолон нового поколения с широким спектром активности (Обзор литературы). // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2001. Т.З. - С. 3-40.

152. Ballow С., Lettieri J., Agarwal V., Liu P., Stass H., Sullivan J. Absolute bioavailability of moxifloxacin. // Clin. Ther. 1999. - V.21. - C.513-522.

153. Stass H., Kubitza D. Pharmacokinetics and elimination of moxifloxacin after oral and intravenous administration in man. // J. Antimicrob. Chemother. -1999. V.43, Suppl B. - P.83-90.

154. Douglas S.J., Ilium L., Davis S.S., Kreuter J. Particle size and size distribution if poly(butyl-2-cyanoacrylate) nanoparticles. // J. Colloid Interface Sci. 1984. - V. 101, No 1. - P. 149-175.

155. Fawaz F., Guyot M., Lagueny A.M., Devissageut J.Ph. Ciprofloxacin-loaded polyisobutylcyanoacrylate nanoparticles: preparation and characterization. // Int. J. Pharm. 1997. - V.154. - P. 191-203.

156. Lherm C., Mueller R., Puisieux F., Couvreur P. II. Cytotoxicity of cyanoacrylate nanoparticles with different alkyl chain length. // Int. J. Pharm.- 1992.-V.84.-P. 13-22.

157. Page-Clisson M.E. Pinto-Alphandary H., Ourevitch M., Andremont A., Couvreur P. Development of ciprofloxacin-loaded nanoparticles: physicochemical study of the drug carrier. //J. Control. Release. 1998. -V.56. - P.23-32.

158. Hall, I.H., Schwab, U.E., Ward, E.S., Ives, T. Disposition and intracellular levels of moxifloxacin in human THP-l monocytes in unstimulated and stimulated conditions. // Int. J. Antimicrob. Agents. 2003. - V.22. - P. 579-587.

159. Clemens D.L., Lee B.Y., Horwitz M.A. The Mycobacterium tuberculosis phagosome in human macrophages is isolated from the host cell cytoplasm. // Infect. Immun. 2002. - V.70. - P.5800-5807.

160. Северин E.C., Свешников П.Г., Гельперина С.Э., Максименко О.О., Шипуло Е.В., Ванчугова JI.B. Антибактериальное средство для лечения внутриклеточных инфекций. // Патент РФ № 2308970, приоритет 10.03.2006

161. Лабораторные животные (Положение и руководство), под ред. Н.Н. Каркищенко, М. // Межакадемическое издательство «ВПК». 2003. -С.138.

162. Harnisch S., Muller R.H. Plasma protein adsorption patterns on emulsions for parenteral administration: establishment of a protocol for two-dimensional polyacrylamide electrophoresis. // Electrophoresis. 1998. - V.19. - P.349-354.

163. Методика определения инициальной контаминации продукции, стерилизуемой радиационным способом. Утверждена МЗ 11.02.82, per. № 2535-82.

164. Методические указания по использованию непрямого метода определения радиорезистентности производственной микрофлоры на предприятии, выпускающем радиационно-стерилизуемую продукцию. Утверждены МЗ 10.10.90, per. № 15-6/37.

165. Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии. Практическое руководство. // 1971. -"Медицина". Москва.