Особенности экспрессии вирусных антигенов и сборки вирусных частиц в фибробластах и эндотелиальных клетках, инфицированных цитомегаловирусом человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Ряскина, Светлана Сергеевна

• Ряскина, Светлана Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ряскина, Светлана Сергеевна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные представления о патогенезе атеросклероза.

1.2. Вирусная теория атеросклероза.

1.3. Цитомегаловирус человека.

1.4. Особенности развития цитомегаловирусной инфекции в клеточных культурах.

1.5. Латентная цитомегаловирусная инфекция.

1.6. Особенности иммунного ответа на цитомегаловирусную инфекцию.

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Расходные материалы и реактивы.

2.2. Культура эндотелиальных клеток и фибробластов человека.

2.3. Вирусологические исследования.

2.4. Иммуноцитохимическое окрашивание.

2.5. Стандартная трансмиссионная электронная микроскопия.

2.6. ДНК гибридизация in situ.

2.7. Совмещение гибридизации in situ с электронной микроскопией.

2.8. Полимеразная цепная реакция и электрофорез

ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Идентификация инфицированных ЦМВ эндотелиальных клеток. Выбор источника ЭК человека.

3.2. Цитопатологические изменения в эндотелиальных клетках при ЦМВ инфекции.

3.3. Закономерности экспрессии сверхраннего антигена ЦМВ р72 в инфицированных эндотелиальных клетках.

3.4. Закономерности экспрессии раннего антигена ЦМВ рр65 в инфицированных эндотелиальных клетках.

3.5. Закономерности экспрессии позднего антигена ЦМВ gB в инфицированных эндотелиальных клетках.

3.6. Особенности экспрессии вирусных антигенов в фибробластах, инфицированных эндотелиотропным вирусным штаммом.

3.7. Цитопатологические изменения в культуре фибробластов при ЦМВ инфекции.

3.8. Закономерности экспрессии сверхраннего антигена ЦМВ р72 в фибробластах, инфицированных эндотелиотропным штаммом

3.9. Закономерности экспрессии рр65 и gB в фибробластах, инфицированных эндотелиотропным штаммом.

3.10. Закономерности экспрессии вирусных антигенов в фибробластах, инфицированных фибробластотропным вирусным штаммом.

3.11. Оценка уровня неспецифического связывания моноклональных антител.

3.12. Особенности сборки вирусных частиц в клетках, инфицированных эндотелиотропным или фибробластотропным штаммами цитомегаловируса человека.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности экспрессии вирусных антигенов и сборки вирусных частиц в фибробластах и эндотелиальных клетках, инфицированных цитомегаловирусом человека»

Цитомегаловирусная инфекция широко распространена в человеческой популяции, и лишь малой части людей удается избежать инфицирования. По данным эпидемиологических исследований подавляющее большинство взрослых людей инфицировано цитомегаловирусом (ЦМВ): до 80% в развитых и практически 100% в развивающихся странах [Griffiths et al., 1985; Grahame-Clarke, 2005]. В последнее время ЦМВ привлекает внимание исследователей не только как источник тяжелых осложнений у пациентов с ослабленным иммунитетом [De Bolle et al., 2005; Taylor, 2003; Badami et al, 2001]. Bee больше данных свидетельствует о том, что цитомегаловирусная инфекция может являться наиболее вероятным участником патогенеза атеросклероза [Dockrell et al., 2003; Fong et al., 2002; Grahame-Clarke, 2005]. Еще в 80-х годах, в исследованиях на экспериментальных животных было убедительно доказано, что инфекция вирусами группы герпеса индуцирует в артериях развитие поражений, близко напоминающих атеросклероз у человека [Minick et al., 1979; Fabricant et al., 1981; Span et al, 1992]. В последующие годы накопилось множество данных, подтверждающих взаимосвязь между развитием атеросклероза и ЦМВ. Так, признаки обострения цитомегаловирусной инфекции были обнаружены у подавляющего большинства пациентов с вновь развившимся атеросклерозом коронарных артерий пересаженного сердца [Grattan et al, 1989, Loebe et al, 1990]. Ускоренное развитие атеросклероза на фоне цитомегаловирусной инфекции было отмечено у больных после операций аортокоронарного шунтирования [Bulkley, Hutchins, 1977; Speir et al, 1994]. В эпидемиологических исследованиях была выявлена корреляция между степенью утолщения интимы, определенной с помощью ультразвукового исследования, и титром антител к ЦМВ у людей без клинических признаков атеросклероза [Sorlie et al., 1994].

Исследования больных с клиническими проявлениями атеросклероза также показали, что подавляющее большинство больных имеют повышенный титр антител к ЦМВ [Adam et al., 1987]. Имеются также сведения, что повторный стеноз коронарных артерий чаще развивается у пациентов, имеющих в сыворотке крови антитела к ЦМВ, причем большинство таких пациентов имеют повышенный титр антител [Blum et al., 1998]. Учитывая, что геном ЦМВ был найден в аорте, коронарных, бедренных и сонных артериях человека [Yamashiroya et al., 1988, Hendrix et al1989, Pampou et al., 2000], было высказано предположение, что сайт реактивации ЦМВ может находиться в стенке артерий [Speir et al, 1994].

Способность эндотелиальных клеток (ЭК) быть инфицированными и продуцировать вирус в организме на сегодняшний день не вызывает сомнения. Сосудистый эндотелий является резервуаром латентной цитомегаловирусной инфекции в организме человека [Pampou et al., 2000], в связи с чем взаимодействие ЦМВ с ЭК может играть важную роль в генерализации инфекции. Помимо эндотелия, ЦМВ способен продуктивно инфицировать различные типы человеческих клеток: фибробласты, гладкомышечные и эпителиальные клетки, а также клетки крови [Taylor, 2003]. Закономерности протекания цитомегаловирусной инфекции в фибробластах хорошо изучены, однако в организме человека эти клетки инфицируются только в случае развития острого процесса, например, при подавлении иммунной системы при трансплантациях. Несмотря на это, сегодняшние представления о биологии ЦМВ базируются на исследованиях не клинических изолятов ЦМВ, а лабораторных штаммов, пассируемых на фибробластах. Известно, что пассирование вируса в фибробластах изменяет его свойства: штаммы теряют характерную способность инфицировать ЭК [Waldman et al., 1991]. Эти данные позволяют усомниться в том, что литический цикл ЦМВ регулируется совершенно одинаково в инфекционных системах, базирующихся на использовании различных клеточных типов.

Чтобы прояснить этот вопрос, было проведено сравнительное изучение закономерностей экспрессии вирусных антигенов в ЭК и фибробластах, инфицированных эндотелиотропным (УНЬ/Е) или фибробластотроптным (АБ169) штаммами цитомегаловируса человека.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение процесса развития литической ЦМВ инфекции в эндотелиальных клетках и фибробластах человека с использованием эндотелиотропного штамма (УНЬ/Е), сохраняющего клеточный тропизм клинического изолята.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Отработать методы оценки развития литической инфекции различных типов клеток человека, основанные на выявлении сверхранних, ранних и поздних антигенов ЦМВ.

2. Исследовать закономерности развертывания цитомегаловирусной инфекции в культуре эндотелия и фибробластов человека, инфицированных эндотелиотропным вирусом (штамм УНЬ/Е) и выявить возможные отличия от фибробластотропных вариантов цитомегаловируса.

3. Провести сравнительное изучение закономерностей сборки вирусных частиц в эндотелиальных клетках и фибробластах, инфицированных эндотелиотропным (УНЬ/Е) или фибробластотропным (АО 169) штаммами цитомегаловируса человека.

Научная новизна и практическая значимость работы. В ходе работы были разработаны методические приемы, позволяющие охарактеризовать локализацию вирусной ДНК в инфицированных клетках, в частности, метод проведения ДНК гибридизации in situ на электронно-микроскопическом уровне. Предложенный методический прием позволил одновременно исследовать ультраструктуру клетки, оценивать стадии развития вирусной инфекции и процесс формирования и упаковки вирусных частиц. Впервые описан феномен нарушения созревания вирусных частиц эндотелиотропного варианта ЦМВ (VHL/E) в цитоплазме инфицированных клеток. Впервые охарактеризованы особенности экспрессии сверхранних, ранних и поздних вирусных антигенов в ЭК и фибробластах, инфицированных эндотелиотропным вирусным штаммом. Показано, что последовательность экспрессии сверхранних и ранних белков ЦМВ в ходе литической инфекции ЭК и фибробластов, инфицированных штаммом VHL/E, отличается от литической инфекции фибробластов, инфицированных фибробластотропным штаммом AD169. Получены доказательства различий в молекулярных основах функционирования эндотелиотропного (VHL/E) и фибробластотропного (AD169) вариантов цитомегаловируса человека в различных типах клеток. Полученные данные впервые подтверждают изменение активности ЦМВ в результате длительного поддержания в лабораторных условиях на определенном типе клеток.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Ряскина, Светлана Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Цитомегаловирусная инфекция не оказывает существенного влияния на митотический индекс эндотелиальных клеток. Единичные, характерные для цитомегаловирусной инфекции патологические митозы, встречаются только в участках скопления клеток, содержащих сверхранний антиген цитомегаловируса р72.

2. В эндотелиальных клетках, инфицированных эндотелиотропным штаммом VHL/E, ранний антиген цитомегаловируса рр65 способен к ассоциации с хромосомами митотических клеток.

3. На поздних стадиях развития инфекции эндотелиальные клетки и фибробласты, инфицированные эндотелиотропным штаммом VHL/E, различаются по локализации вирусных антигенов: до 15 дня сверхранний антиген р72 и ранний антиген рр65 локализованы в ядре, после 20 дня антигены накапливаются и в ядре, и в цитоплазме.

4. В культурах клеток, инфицированных эндотелиотропным (VHL/E) и фибробластотропным (AD169) штаммами цитомегаловируса, характер экспрессии сверхранних и ранних вирусных антигенов различается.

5. В ходе литической инфекции, вызванной эндотелиотропным штаммом, в культурах эндотелиальных клеток и фибробластов выявляются две популяции клеток, различающиеся по характеру сборки вирусных частиц и сменяющиеся на протяжении развития инфекции.

6. При исследовании методом in situ ДНК гибридизации и электронной микроскопии установлено, что процесс упаковки вирусной ДНК в капсид нарушается спустя две недели после инфицирования клеток эндотелиотропным штаммом цитомегаловируса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ряскина, Светлана Сергеевна, 2006 год

1. Антонов A.C., Крушинский A.B., Николаева М.А. и др. Первичная культура эндотелиальных клеток из пупочной вены человека: идентификация и характеристика растущей и конфлуэнтной культуры // Цитология, 1981,23: 1154-1159.

2. Иванова В.Ф. (1984): Многоядерные клетки (образование, строение, биологическое значение) //Арх. Анат. Гистол. Эмбриол., т.23, стр. 1154-1159.

3. Караганов Я.Л., Алимов Г.А., Миронов A.A. (1986а): Общая морфология сосудистого эндотелия // В кн.: «Сосудистый эндотелий» Киев, «Здоров'ья», стр. 78-121.

4. Караганов Я.Л., Миронов В.А., Миронов A.A. (19866): Сосудистый эндотелий при старении // В кн.: «Сосудистый эндотелий» Киев, «Здоров'ья», стр. 200-208.

5. Романов Ю.А., Антонов A.C. Морфологические и функциональные особенности эндотелия аорты человека. Два варианта организации эндотелиального монослоя при атеросклерозе // Цитология, 1991,33 (3): 7-15.

6. Смирнов В.Н., Романов Ю.А., Антонов A.C., Корнхилл Дж.Ф., Хердерик Е.Е. (1991): Морфологические особенности эндотелия аорты человека при атерогенезе // В кн.: «Проблемы атерогенеза» под ред. Е.И. Чазова, М.: Внешторгиздат., стр. 4-16.

7. Adam Е, Melnick JL, Probtsfield JL, Petrie BL, Burek J, Bailey KR, McCollum CH, DeBakey ME (1987): High levels of cytomegalovirus antibody in patients requiring vascular surgery for atherosclerosis // Lancet, ii, p. 291-293.

8. Albrecht T, Cavallo T, Cole NL, Graves K (1980): Cytomegalovirus: development and progression of cytopathic effects in human cell culture // Lab Invest, v. 42, p. 1-7.

9. Augsburger JJ, Henry RY (1978): Retinal aneurysms in adult cytomegalovirus retinitis // Am J Ophthalmol, v. 86, p. 794-797.

10. Badami KG. (2001): The immunocompromised patient and transfusion // Postgrad Med J, v.77(906), p.230-234.

11. Bancroft GJ, Shellam GR, Chalmer JE (1981): Genetic influences on the augmentation of natural killer (NK) cells during murine cytomegalovirus infection: correlation with patterns of resistance // J Immunol, v. 126, p. 988994.

12. Barnes PD, Grundy JE (1992): Down-regulation of the class I HLA heterodimer and beta 2-microglobulin on the surface of cells infected with cytomegalovirus // J Gen Virol, v. 73, p. 2395-2403.

13. Beck S; Barrell BG (1988): Human cytomegalovirus encodes a glycoprotein homologous to MHC class-I antigens // Nature, v. 331, p. 269272.

14. Beninga J, Kropff B, Mach M. (1995): Comparative analysis of fourteen individual human cytomegalovirus proteins for helper T cell response // J Gen Virol., v.76 (1), p. 153-160.

15. Benditt EP (1974): Evidence for a monoclonal origin of human atherosclerotic plaques and some implications // Circulation, v. 50, p. 650652.

16. Berencsi K, Endresz V, Klurfeld D, Kari L, Kritchevsky D, Gonczol E (1998): Early atherosclerotic plaques in the aorta following cytomegalovirus infection of mice // Cell Adhes Commun, v. 5, p. 39-47.

17. Beschorner WE, Hutchins GM, Burns WH, Saral R, Tutschka PJ, Santos GW (1980): Cytomegalovirus pneumonia in bone marrow transplant recipients: miliary and diffuse patterns // Am Rev Respir Dis, v. 122, p. 107114.

18. Borysiewicz LK, Morris S, Page JD, Sissons JG (1983): Human cytomegalovirus-specific cytotoxic T lymphocytes: requirements for in vitro generation and specificity // Eur J Immunol, v. 13, p. 804-809.

19. Bresnahan WA, Shenk TE. (2000): UL82 virion protein activates expression of immediate early viral genes in human cytomegalovirus-infected cells// Proc Natl Acad Sci U S A., v. 97(26), p.14506-14511.

20. Brigati DJ, Myerson D, Leary J J, Spalholz B, Travis SZ, Fong CKY, Hsiung GD, Ward DC (1983): Detection of viral genomes in cultured cells and paraffin embedded tissue sections using biotin labelled hybridization probes // Virology, v. 126, p. 32-50.

21. Browne EP, Shenk T. (2003): Human cytomegalovirus UL83-coded pp65 virion protein inhibits antiviral gene expression in infected cells// Proc Natl Acad Sci U S A., v. 100(20), p.l 1439-11444.

22. Browne H, Smith G, Beck S, Minson T (1990): A complex between the MHC class I homologue encoded by human cytomegalovirus and beta 2 microglobulin // Nature, v. 347, p. 770-772.

23. Bukowski JF, Woda BA, Welsh RM (1984): Pathogenesis of murine cytomegalovirus infection in natural killer cell-depleted mice // J Virol, v. 52, p. 119-128.

24. Bulkley BH, Hutchins GM (1977): Accelerated "atherosclerosis". A morphologic study of 97 saphenous vein coronaiy artery bypass grafts // Circulation, v. 55, p.163-169.

25. Burch GE, Harb JM, Hiramoto Y, Shewey L (1973): Viral infection of the aorta of man associated with early atherosclerotic changes // Am Heart J, v. 86, p. 523-534.

26. Burch GE (1974): Viruses and atherosclerosis // Am Heart J, v. 87, p. 407-412.

27. Bystrevskaya VB, Lichkun W, Krushinsky AV, Smirnov VN. (1992): Centriole modification in human aortic endothelial cells// J Struct Biol., v. 109(1), p.1-12.

28. Bystrevskaya VB, Lobova TV, Smirnov VN, Makarova NE, Kushch AA. (1997): Centrosome injury in cells infected with human cytomegalovirus // J Struct Biol., v. 120(1), p.52-60.

29. Cha TA, Tom E, Kemble GW, Duke GM, Mocarski ES, Spaete RR. (1996): Human cytomegalovirus clinical isolates carry at least 19 genes not found in laboratory strains // J Virol., v.70(l), p.78-83.

30. Chang, C.P., Malone, C.I., Stinski M.F. (1989). A human cytomegalovirus early gene has three inducible promoters that are regulated differentially at various times after infection. Journal of Virology 63, 281290.

31. Chee M (1991): The HCMV genome project: what has been learned and what can be expected in the future // Transplant Proc, v. 23 (Suppl 3), p. 174-180.

32. Cunningham K.S., Gotlieb A.I. (2005): The role of shear stress in the pathogenesis of atherosclerosis // Lab Invest, v. 85(1), p. 9-23.

33. Daugherty A., Webb N.R., Rateri D.L., King V.L. (2005): Thematic review series: The immune system and atherogenesis. Cytokine regulation of macrophage functions in atherogenesis // J Lipid Res., v.46(9), p. 1812-1822

34. De Bolle L, Naesens L, De Clercq E (2005): Update on human herpesvirus 6 biology, clinical features, and therapy // Clin Microbiol Rev., v.18(1), p. 217-245.

35. Dittmer D, Mocarski ES. (1997): Human cytomegalovirus infection inhibits Gl/S transition // J Virol., v.71(2), p.1629-1634.

36. DeMarchi J.M. (1983): Correlation betwin stimulation of host cell DNA syntesis by Human cytomegalovirus and lack of expression of a subset of early virus genes // J. Virol, v. 129, p. 274-286.

37. Dockrell DH (2003): Human herpesvirus 6: molecular biology and clinical features // J Med Microbiol., v.52(Pt 1), p.5-18.

38. Einhorn L, Ost A (1984): Cytomegalovirus infection of human blood cells // J Infect Dis, v. 149, p. 207-214.

39. Fabricant CG, Hajjar DP, Minick CR, Fabricant J (1981): Herpesvirus infection enhances cholesterol and cholesteryl ester accumulation in cultured arterial smooth muscle cells // Am J Pathol, v. 105, p. 176-184.

40. Faggiotto A, Ross R (1984): Studies of hypercholesterolemia in the nonhuman primate. II. Fatty streak conversion to fibrous plaque // Arteriosclerosis, v. 4, p. 341-356.

41. Farber I, Wutzler P, Sprossig M, Schweizer H. (1979): Determination of antibodies against cytomegalovirus-induced early antigens by using rabbit lung fibroblasts. Brief report. // Arch Virol,v.62(3),p.273-276.

42. Feldman DL, Hoff HF, Gerrity RG (1984): Immunohistochemical localization of apoprotein B in aortas from hyperlipemic swine. Preferential accumulation in lesion-prone areas // Arch Pathol Lab Med, v. 108, p. 817822.

43. Fish KN, Britt W, Nelson JA (1996): A novel mechanism for persistence of human cytomegalovirus in macrophages // J Virol, v. 70, p. 1855-1862.

44. Fish KN, Depto AS, Moses AV, Britt W, Nelson JA (1995): Growth kinetics of human cytomegalovirus are altered in monocyte-derived macrophages // J Virol, v. 69, p. 3737-3743.

45. Fong IW. (2002): Infections and their role in atherosclerotic vascular disease // J Am Dent Assoc., Suppl. p. 7S-13S.

46. Foucar E, Mukai K, Foucar K, Sutherland DE, Van Buren CT (1981): Colon ulceration in lethal cytomegalovirus infection // Am J Clin Pathol, v. 76, p. 788-801.

47. Frostegard J. (2005): Atherosclerosis in patients with autoimmune disorders // Arterioscler Thromb Vase Biol., v.25(9), p. 1776-1785

48. Garnett HM. (1979): Fusion of cytomegalovirus infected fibroblasts to form multinucleate giant cells// J Med Virol., v.3(4), p.271-274.

49. Gerna, G.G., Percivalle, E., Baldanti, F., et al. (2000). Human cytomegalovirus replicates abortively in polymorphonuclear leucocytes after transfer from infected endothelial cells via transient microfusion events. Journal of Virology 74, 5629-5638.

50. Gerna G, Percivalle E, Sarasini A, Baldanti F, Campanini G, Revello MG. (2003): Rescue of human cytomegalovirus strain AD 169 tropism for both leukocytes and human endothelial cells // J Gen Virol., v.84(6), p. 14311436.

51. Gilloteaux J, Nassiri MR. (2000): Human bone marrow fibroblasts infected by cytomegalovirus: ultrastructural observations // J Submicrosc Cytol Pathol., v.32(l), p. 17-45.

52. Gimbrone MA Jr, Cotran RS, Folkman J. (1974): Human vascular endothelial cells in culture. Growth and DNA synthesis // J Cell Biol., v. 60(3), p.673-684.

53. Goldstein JL, Brown MS (1984): Progress in understanding the LDL receptor and HMG-CoA reductase, two membrane proteins that regulate the plasma cholesterol // J Lipid Res, v. 25, p. 1450-1461.

54. Grahame-Clarlce C. (2005): Human cytomegalovirus, endothelial function and atherosclerosis // Herpes., v. 12(2), p.42-45.

55. Grattan MT, Moreno-Cabral CE, Starnes VA, Oyer PE, Stinson EB, Shumway NE (1989): Cytomegalovirus infection is associated with cardiac allograft rejection and atherosclerosis // J Am Med Assoc, v. 261, p. 35613566.

56. Greaves, R.F., Mocarski, E.S. (1998). Defective growth correlates with reduced accumulation of a viral DNA replication protein after low-multiplicity infection by human cytomegalovirus iel mutant. Journal of Virology 72, 366-379.

57. Grefte A, van der Giessen M, van Son W, The TH (1993): Circulating cytomegalovirus (CMV)-infected endothelial cells in patients with an active CMV infection // J Infect Dis, v. 167, p. 270-277.

58. Griffiths P, Baboonian C, Ashby D (1985): The demographic characteristics of pregnant women infected with cytomegalovirus // Int J Epidemiol, v. 14, p. 447-452.

59. Grundy JE, McKeating JA, Griffiths PD (1987a): Cytomegalovirus strain AD 169 binds beta 2 microglobulin in vitro after release from cells // J Gen Virol, v. 68, p. 777-784.

60. Hagemeier C, Walker SM, Sissons PJ, Sinclair JH. (1992): The 72K IE1 and 80K IE2 proteins of human cytomegalovirus independently trans-activate the c-fos, c-myc and hsp70 promoters via basal promoter elements// J Gen Virol.,v. 73 (9), p.2385-2393.

61. Hajjar D.P. Viral pathogenesis of atherosclerosis. Impact of molecular mimicry and viral genes // Amer. J. Pathol., 1991, 139: 1195-1211.

62. Hansson GK, Holm J, Jonasson L (1989): Detection of activated T lymphocytes in the human atherosclerotic plaque // Am J Pathol, v. 135, p. 169-175.

63. Hendrix MG, Dormans PH, Kitslaar P, Bosman F, Bruggeman CA (1989): The presence of cytomegalovirus nucleic acids in arterial walls of atherosclerotic and nonatherosclerotic patients // Am J Pathol, v. 134, p. 1151-1157.

64. Houle S, Roach MR (1981): Flow studies in a rigid model of an aorto-renal junction. A case for high shear as a cause of the localization of sudanophilic lesions in rabbits // Atherosclerosis., v.40(3-4), p.231-244.

65. Jonjic S, del Val M, Keil GM, Reddehase MJ, Koszinowski UH (1988): A nonstructural viral protein expressed by a recombinant vaccinia virus protects against lethal cytomegalovirus infection // J Virol, v. 62, p. 16531658.

66. Kalejta RF, Shenk T. (2003): The human cytomegalovirus UL82 gene product (pp71) accelerates progression through the G1 phase of the cell cycle// J Virol., V.77(6), P.3451-3459.

67. Kapasi K, Rice GP (1988): Cytomegalovirus infection of peripheral blood mononuclear cells: effects on interleukin-1 and -2 production and responsiveness // J Virol, v. 62, p. 3603-3607.

68. Koszinowski UH, Reddehase MJ, Del Val M (1992): Principles of cytomegalovirus antigen presentation in vitro and in vivo // Semin Immunol, v. 4, p. 71-79.

69. Koszinowski UH, Reddehase MJ, Keil GM, Volkmer H, Jonjic S, Messerle M, del Val M, Mutter W, Munch K, Buhler B (1987): Molecular analysis of herpesviral gene products recognized by protective cytolytic T lymphocytes // Immunol Lett, v. 16, p. 185-192.

70. Maciag T, Hoover GA, Stemerman MB, Weinstein R. (1981): Serial propagation of human endothelial cells in vitro// J Cell Biol., v.91(l), p.420-426.

71. Majno G, Joris I, Zand T. (1985): Atherosclerosis: new horizons. // Hum Pathol., v. 16(1), p. 3-5.

72. Malone CL, Vesole DH, Stinski MF (1990): Transactivation of a human cytomegalovirus early promoter by gene products from the immediate-early gene IE2 and augmentation by IE1: mutational analysis of the viral proteins // J Virol, v. 64, p. 1498-1506.

73. Marutsuka K., Hatakeyama K., Yamashita A., Asada Y. (2005): Role of thrombogenic factors in the development of atherosclerosis // J Atheroscler Thromb., v. 12(1), p. 1-8.

74. McKeating JA, Griffiths PD, Grundy JE (1987): Cytomegalovirus in urine specimens has host beta 2 microglobulin bound to the viral envelope: a mechanism of evading the host immune response? // J Gen Virol, v. 68, p. 785-792.

75. Melnick JL, Adam E, DeBakey ME (1993): Cytomegalovirus and atherosclerosis // Eur Heart J, v. 14 (Suppl K), p. 30-38.

76. Michelson-Fiske S, Horodniceanu F, Guillon JC (1977): Immediate early antigens in human cytomegalovirus infected cells // Nature, v. 270, p. 615-617.

77. Minick CR, Fabricant CG, Fabricant J, Litrenta MM (1979): Atheroarteriosclerosis induced by infection with a herpesvirus // Am J Pathol, v. 96, p. 673-706.

78. Mocarski ES, Stinski MF (1979): Persistence of the cytomegalovirus genome in human cells // J Virol, v. 31, p. 761-775.

79. Mocarski ES (1996): Cytomegaloviruses and their replication. In Fields of virology, 3rd edn., p. 2447-2492.

80. Mossman K.L. Activation and inhibition of virus and interferon: the herpesvirus story// Viral Immunology, 2002,15(1): 3-15.

81. Mueller SN, Rosen EM, Levine EM. (1980): Cellular senescence in a cloned strain of bovine fetal aortic endothelial cells // Science, v.207(4433), p.889-891.

82. Newby AC, Zaltsman AB (1999): Fibrous cap formation or destruction-the critical importance of vascular smooth muscle cell proliferation, migration and matrix formation // Cardiovasc Res, 1999, v. 41, p. 345-360.

83. Otto SM, Sullivan-Tailyour G, Malone CL, Stinski MF (1988): Subcellular localization of the major immediate early protein (IE1) of human cytomegalovirus at early times after infection // Virology., v. 162(2), p.478-482.

84. Palinski W, Rosenfeld ME, Yla-Herttuala S, Gurtner GC, Socher SS, Butler SW, Parthasarathy S, Carew TE, Steinberg D, Witztum JL (1989): Low density lipoprotein undergoes oxidative modification in vivo // Proc Natl Acad Sci U S A, v. 86, p. 1372-1376.

85. Pampou, S.Yu., Gnedoy, S.N., Bystrevskaya, V.B., Smirnov, V.N., Chazov, E.I., Melniclc, J.L., DeBakey M.E. (2000). Cytomegalovirus genome and the immediate-early antigen in cells of different layers of human aorta. Virchows Archiv 436, 539-552.

86. Paya CV, Hermans PE, Wiesner RH, Ludwig J, Smith TF, Rakela J, Krom RA (1989): Cytomegalovirus hepatitis in liver transplantation: prospective analysis of 93 consecutive orthotopic liver transplantations // J Infect Dis, v. 160, p. 752-758.

87. Percivalle E, Revello MG, Yago L, Morini F, Gerna G (1993): Circulating endothelial giant cells permissive for human cytomegalovirus (HCMV) are detected in disseminated HCMV infections with organ involvement // J Clin Invest, v. 92, p. 663-670.

88. Peterslund NA (1991): Herpesvirus infection: an overview of the clinical manifestation // Scand J Infect, v. 78, Suppl., p. 15-20.

89. Quehenberger O. (2005): Thematic review series: the immune system and atherogenesis. Molecular mechanisms regulating monocyte recruitment in atherosclerosis // J Lipid Res., v. 46(8), p. 1582-1590.

90. Quinn MT, Parthasarathy S, Fong LG, Steinberg D (1987): Oxidatively modified low density lipoproteins: a potential role in recruitment andretention of monocyte/macrophages during atherogenesis // Proc Natl Acad Sci U S A, v. 84, p. 2995-2998.

91. Quinnan GY, Manischewitz JE, Ennis FA (1978): Cytotoxic T lymphocyte response to murine cytomegalovirus infection // Nature, v. 273, p. 541-543.

92. Quinnan GV, Manischewitz JE.(1979): The role of natural killer cells and antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity during murine cytomegalovirus infection // J Exp Med, v. 150(6), p. 1549-1554.

93. Rasmussen L (1990): Immune response to human cytomegalovirus infection // Curr Top Microbiol Immunol, v. 154, p. 221-254.

94. Reddehase MJ, Koszinowski UH (1984): Significance of herpesvirus immediate early gene expression in cellular immunity to cytomegalovirus infection//Nature, v. 312, p. 369-371.

95. Reddehase MJ, Mutter W, Munch K, Buhring HJ, Koszinowski UH (1987): CD8-positive T lymphocytes specific for murine cytomegalovirus immediate-early antigens mediate protective immunity // J Virol, v. 61, p. 3102-3108.

96. Reddehase MJ, Rothbard JB, Koszinowski UH (1989): A pentapeptide as minimal antigenic determinant for MHC class I-restricted T lymphocytes // Nature, v. 337, p. 651-653.

97. Revello MG, Zavattoni M, Sarasini A, Percivalle E, Simoncini L, Gerna G (1998): Human cytomegalovirus in blood of immunocompetent persons during primary infection: prognostic implications for pregnancy // J Infect Dis, v. 177, p. 1170-1175.

98. Reyburn HT, Mandelboim O, Vales-Gomez M, Davis DM, Pazmany L, Strominger JL (1997): The class I MHC homologue of human cytomegalovirus inhibits attack by natural killer cells // Nature, v. 386, p. 514-517.

99. Rice GP, Schrier RD, Oldstone MB (1984): Cytomegalovirus infects human lymphocytes and monocytes: virus expression is restricted to immediate-early gene products // Proc Natl Acad Sci U S A, v. 81, p. 61346138.

100. Roby C, Gibson W. (1986): Characterization of phosphoproteins and protein kinase activity of virions, noninfectious enveloped particles, and dense bodies of human cytomegalovirus// J Virol., v. 59(3)., p.714-727.

101. Ross R. (1986): The pathogenesis of atherosclerosis an update. Engl J Med // v.314(8), p. 488-500.

102. Ross R (1993): Rous-Whipple Award Lecture. Atherosclerosis: a defense mechanism gone awry // Am J Pathol, v. 143, p. 987-1002.

103. Ruger B, Klages S, Walla B, Albrecht J, Fleckenstein B, Tomlinson P, Barrell B. (1987): Primary structure and transcription of the genes coding for the two virion phosphoproteins pp65 and pp71 of human cytomegalovirus// J Virol,v. 61(2), p. 446-453.

104. Schwartz CJ, Valente AJ, Sprague EA, Kelley JL, Nerem RM. (1991) :The pathogenesis of atherosclerosis: an overview // Clin Cardiol., v. 14 (2 Suppl 1), p.11-16.

105. Sedmak DD, Guglielmo AM, Knight DA, Birmingham DJ, Huang EH, Waldman WJ (1994a): Cytomegalovirus inhibits major histocompatibility class II expression on infected endothelial cells // Am J Pathol, v. 144, p. 683692.

106. Sedmak DD, Roberts WH, Stephens RE, Buesching WJ, Morgan LA, Davis DH, Waldman WJ (1990): Inability of cytomegalovirus infection of cultured endothelial cells to induce HLA class II antigen expression // Transplantation, v. 49, p. 458-462.

107. Sinzger C, Plachter B, Stenglein S, Jahn G (1993): Immunohistochemical detection of viral antigens in smooth muscle, stromal, and epithelial cells from acute human cytomegalovirus gastritis // J Infect Dis, v. 167, p. 1427-1432.

108. Sima A, Bulla A, Simionescu N. (1990): Experimental obstructive coronary atherosclerosis in the hyperlipidemic hamster // J Submicrosc Cytol Pathol, v.22(l), p.1-16.

109. Smirnov VN, Repin VS, Tkachuk VA, Chazov EI. (1988): Vascular endothelium and atherosclerosis a multidisciplinary approach // Endothelial cells. CRC Press, Boston, v.3, p. 139-215.

110. Soderberg C, Larsson S, Bergstedt-Lindqvist S, Moller E (1993): Definition of a subset of human peripheral blood mononuclear cells that arepermissive to human cytomegalovirus infection // J Virol, v. 67, p. 31663175.

111. Sorlie PD, Adam E, Melnick SL, Folsom A, Skelton T, Chambless LE, Barnes R, Melnick JL (1994): Cytomegalovirus/herpesvirus and carotid atherosclerosis: the ARIC Study // J Med Virol, v. 42, p. 33-37.

112. Span AH, Frederik PM, Grauls G, Van Boven GP, Bruggeman CA (1993): CMV induced vascular injury: an electron-microscopic study in the rat // In Vivo, v. 7, p. 567-573.

113. Span AH, Grauls G, Bosman F, van Boven CP, Bruggeman CA (1992): Cytomegalovirus infection induces vascular injury in the rat // Atherosclerosis, v. 93, p. 41-52.

114. Speir E, Modali R, Huang E-S, Leon MB, Shawl F, Finkel T, Epstein SE (1994): Potential role of human cytomegalovirus and p53 interaction in coronary restenosis // Science, v. 256, p. 391-394.

115. Spencer GD, Shulman HM, Myerson D, Thomas ED, McDonald GB (1986): Diffuse intestinal ulceration after marrow transplantation: a clinicopathologic study of 13 patients // Hum Pathol, v. 17,p. 621-633.

116. Stagno S, Reynolds DW, Pass RF, Alford CA (1980): Breast milk and the risk of cytomegalovirus infection // N Engl J Med, v. 302, p. 1073-1076.

117. Stamminger T, Fleckenstein B (1990): Immediate-early transcription regulation of human cytomegalovirus // Curr Top Microbiol Immunol, v. 154, p. 3-19.

118. Starr SE, Allison AC (1977): Role of T lymphocytes in recovery from murine cytomegalovirus infection // Infect Immun., v. 17(2), p.458-462.

119. Steinberg D, Witztum JL (1990): Lipoproteins and atherogenesis. Current concepts // JAMA, v. 264, p. 3047-3052.

120. Stenberg RM, Depto AS, Fortney J, Nelson JA (1989): Regulated expression of early and late RNAs and proteins from the human cytomegalovirus immediate-early region // J Virol, v. 63, p. 2699-2708.

121. Stenberg RM (1996): The human cytomegalovirus major immediate-early gene // Intervirology, v. 39, p. 343-349.

122. Stinski MF, Thomsen DR, Stenberg RM, Goldstein LC (1983): Organization and expression of the immediate early genes of human cytomegalovirus // J Virol, v. 46, p. 1-14.

123. Swenson PD, Kaplan MH (1987): Comparison of two rapid culture methods for detection of cytomegalovirus in clinical specimens J Clin Microbiol, v. 25, p. 2445-2446.

124. Tamura T, Chiba S, Abo W, Chiba Y, Nalcao T. (1980): Cytomegalovirus-specific lymphocyte transformations in subjects of different ages with primary immunodeficiency // Infect Immun., v.28(l), p.49-53.

125. Taylor GH. (2003): Cytomegalovirus // Am Fam Physician. v.67(3), p.519-524.

126. Thyberg J, Nilsson J, Palmberg L, Sjolund M (1985): Adult human arterial smooth muscle cells in primary culture. Modulation from contractile to synthetic phenotype // Cell Tissue Res, v. 239, p. 69-74.

127. Tokunaga 0, Fan JL, Watanabe T (1989): Atherosclerosis- and age-related multinucleated variant endothelial cells in primary culture from human aorta // Am J Pathol, v. 135, p. 967-976.

128. Toorkey CB, Carrigan DR (1989): Immunohistochemical detection of an immediate early antigen of human cytomegalovirus in normal tissues // J Infect Dis, v. 160, p.741-751.

129. Vyalov S, Langille BL, Gotlieb AI (1996): Decreased blood flow rate disrupts endothelial repair in vivo // Am J Pathol, v. 149, p. 2107-2118.

130. Waldman WJ, Sneddon JM, Stephens RE, Roberts WH (1989): Enhanced endothelial cytopathogenicity induced by a cytomegalovirus strain propagated in endothelial cells // J Med Virol, v. 28, p.223-230.

131. Waldman WJ, Roberts WH, Davis DH, Williams MV, Sedmak DD, Stephens RE (1991): Preservation of natural endothelial cytopathogenicity of cytomegalovirus by propagation in endothelial cells // Arch Virol, v. 117, p. 143-164.

132. Waldman WJ, Adams PW, Orosz CG, Sedmak DD (1992): T lymphocyte activation by cytomegalovirus-infected, allogeneic cultured human endothelial cells // Transplantation, v. 54, p. 887-896.

133. Wathen MW, Stinski MF (1982): Temporal patterns of human cytomegalovirus transcription: mapping the viral RNAs synthesized at immediate early, early, and late times after infection // J Virol, v. 41, p. 462477.

134. Weber B, Hamann A, Ritt B, Rabenau H, Braun W, Doerr HW (1992): Comparison of shell viral culture and serology for the diagnosis of human cytomegalovirus infection in neonates and immunocompromised subjects // Clin Investig, v. 70, p. 503-507.

135. Wick G, Schett G, Amberger A, Kleindienst R, Xu Q (1995): Is atherosclerosis an immunologically mediated disease? // Immunology Today, v. 16, p. 27-33.

136. Winston DJ, Pollard RB, Ho WG, Gallagher JG, Rasmussen LE, Huang SN, Lin CH, Gossett TG, Merigan TC, Gale RP (1982): Cytomegalovirus immune plasma in bone marrow transplant recipients // Ann Intern Med, v. 97,p. 11-18.

137. Wright HP (1972): Mitosis patterns in aortic endothelium // Atherosclerosis, v. 15, p. 93-100.

138. Wolf DG, Courcelle CT, Prichard MN, Mocarski ES. (2001): Distinct and separate roles for herpesvirus-conserved UL97 kinase in cytomegalovirus DNA synthesis and encapsidation // Proc Natl Acad Sei U S A., v.98(4), p.1895-1900.

139. Yamada T, Fan J, Shimokama T, Tokunaga O, Watanabe T (1992): Induction of fatty streak-like lesions in vitro using a culture model system simulating arterial intima // Am J Pathol, v. 141, p. 1435-1444.

140. Yamashiroya HM, Ghosh L, Yang R, Robertson AL (1988): Herpesviridae in the coronary arteries and aorta of young trauma victims // Am J Pathol, v. 130, p. 71-79.

141. Yamashita Y, Shimokata K, Mizuno S, Yamaguchi H, Nishiyama Y (1993): Down-regulation of the surface expression of class I MHC antigens by human cytomegalovirus // Virology, v. 193, p. 727-736.

142. Yang Z., Ming XF. (2006): Recent advances in understanding endothelial dysfunction in atherosclerosis // Clin Med Res., v.4(l), p.53-65