Общая кобальтсвязывающая способность сыворотки крови: оптимизация протокола и оценка применимости в диагностике острой миокардиальной ишемии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Литус, Екатерина Андреевна

• Литус, Екатерина Андреевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Литус, Екатерина Андреевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Патогенетические основы ишемической болезни сердца

1.2. Острый коронарный синдром, общие принципы диагностики

1.3. Кардиологические маркеры

1.4. Механизм образования ишемически-модифицированный альбумина

1.5. Методы определения ишемически-модифицированного альбумина

1.6. Кобальт-связывающая способность сыворотки крови как показатель

содержания ишемически-модифицированного альбумина

1.7. Вклад белков в суммарную кобальт-связывающую способность сыворотки и

плазмы крови

1.8. Методика определения уровня кобальт-связывающей способности

сыворотки крови

1.9. Заключение

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Список использованных материалов

2.2. Список использованного оборудования

2.3. Объекты исследования

Исследование образцов сыворотки крови человека

Хранение биологических образцов и пробоподготовка

2.4. Список используемых методов

Анализ кобальт-связывающей способности

Линейность

Сходимость/воспроизводимость

Предел обнаружения, предел надежного количественного определения

Изучение стабильности биологических проб

Оценка параметров биологической вариабельности показателя

Определение содержания глобулинов в биологической пробе фотохимическим

методом с п-диметиламинобензальдегидом

Определение содержания сывороточного альбумина и общего белка в

сыворотке крови

Окислительная модификация альбумина гипохлоритом натрия

Окислительная модификация альбумина системой Фентона

Сайт-специфическая модификация сывороточного альбумина

Анализ постмодификационных структурных изменений белка

2.5. Методы статистической обработки данных

ГЛАВА 3 ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОТОКОЛА ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ КОБАЛЬТ-СВЯЗЫВАЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАСТВОРОВ БЕЖОВ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБРАЗЦОВ

3.1. Определение условий проведения анализа содержания ионов кобальта в растворе

Исследование спектральных характеристики комплекса ДТТ-Со

Кинетика реакции комплексообразования дитиотрейтола с ионами кобальта.47 Исследование спектральных характеристики комплекса дитиотрейтола с

ионами кобальта в присутствии бычьего сывороточного альбумина

Исследование стабильности реактивов на основе буферных систем MOPS, ТРИС, HEPES, Трицин

3.2. Аналитические характеристики метода

3.3. Анализ кобальт-связывающей способности сывороточного альбумина ..61 Оценка кобальт-связывающей способности бычьего сывороточного альбумина

с помощью реактивов на основе HEPES, MOPS, ТРИС

Оценка коэффициента вариации метода при определении кобальт-

связывающей способности образцов сыворотки

Зависимость кобальт-связывающей способности альбумина от времени

инкубации с ионами кобальта

Изучение кинетики реакции комплексообразования дитиотрейтола с ионами кобальта в присутствии бычьего сывороточного альбумина

3.4. Исследование стабильности образцов сыворотки при хранении

Стабильность образцов сыворотки в течение дня

Стабильность при повторном замораживании-оттаивании

Долгосрочная стабильность образцов сыворотки крови

3.5. Протокол проведения анализа

ГЛАВА 4 ИЗМЕНЕНИЯ КОБАЛЬТ-СВЯЗЫВАЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА ПОД ДЕЙВИЕМ ОКИСЛИТЕЛЕЙ IN VITRO

ГЛАВА 5 ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕГИОНАЛЬНЫХ РЕФЕРЕНТНЫХ ПРЕДЕЛОВ УРОВНЯ КОБАЛЬТ-СВЯЗЫВАЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДОБРОВОЛЬЦЕВ

5.1. Анализ необходимого размера выборки

5.2. Анализ корреляционных зависимостей

ГЛАВА 6 ИССЛЕДОВАНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ВАРИАБЕЛЬНОСТИ УРОВНЯ КОБАЛЬТ-СВЯЗЫВАЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ

СЫВОРОТКИ КРОВИ

ГЛАВА 7 ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ ПОКАЗАТЕЛЯ У ПАЦИЕНТОВ,

ПЕРЕНЕСШИХ АОРТО-КОРОНАРНОЕ ШУНТИРОВАНИЕ

ГЛАВА 8 ИССЛЕДОВАНИЕ ОБРАЗЦОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ ПАЦИЕНТОВ

БЕЗ ОСТРОЙ ИШЕМИИ МИОКАРДА

ГЛАВА 9 ЭКОНОМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

9.1. Экономическая оценка рыночной цены разработанного метода, сравнение с зарубежными аналогами

9.2. Расчет экономической выгоды от внедрения метода определения кобальт-связывающей способности сыворотки крови для диагностики острого коронарного синдрома в рутинную практику диагностических лабораторий

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

т

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ А

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Общая кобальтсвязывающая способность сыворотки крови: оптимизация протокола и оценка применимости в диагностике острой миокардиальной ишемии»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Поиск новых биомаркеров и разработка методов их определения является активно развивающимся направлением современной медицины. Постоянно появляются десятки предложений новых лабораторных тестов, однако клиническое признание получают единицы. Особое внимание исследователи уделяют разработке методов диагностики рака [133], сердечно-сосудистых заболеваний [138], болезни Альцгеймера [28]. Поиск биомаркеров нацелен на ранние, обратимые стадии заболевания, в частности много работ посвящено выявлению ишемии миокарда, начальной стадии развития ишемической болезни сердца [86, 99, 114, 131]. В настоящий момент нет общепринятого лабораторного метода, позволяющего быстро и объективно диагностировать обратимые изменения кардиомиоцитов [97]. Это осложняет раннюю диагностику таких форм ишемической болезни сердца, как бессимптомная ишемия миокарда [60, 139], нестабильная стенокардия и острый инфаркт миокарда (ИМ) [1].

В качестве раннего маркера ишемии миокарда в 1999 г. было предложено анализировать снижение способности сывороточного альбумина связывать Со [114]. Считается, что белок подвергается модификации в очаге ишемии [140] и, в результате, не может образовывать комплекс с некоторыми ионами двухвалентных металлов [33, 91], что позволило ряду исследователей [86, 140] назвать данный тест тестом определения уровня ишемически-модифицированного альбумина. В США Albumin cobalt binding test (АСВ-тест) был рекомендован Food and Drug Administration (FDA) к использованию в лабораторной практике для детектирования ишемии миокарда у пациентов с подозрением на острый коронарный синдром. Однако данные многочисленных исследований свидетельствуют о том, что изменения кобальт-связывающей способности (КСС) сыворотки крови связано не только с патологией миокарда [55, 109, 132, 136] и тканевой ишемией [69, 88, 118, 128]. И хотя АСВ-тест все еще считается

перспективным диагностическим инструментом [44, 68, 108], вопрос о границах его применимости остается открытым.

Диссертация подготовлена и выполнена по плану НИР ВолгГМУ на кафедре теоретической биохимии с курсом клинической биохимии. Научное сотрудничество осуществлялось с ГБУЗ "Волгоградский областной клинический кардиологический центр", МУЗ «Городская клиническая больница № 25» и ФГУЗ "Волгоградский медицинский центр федерального медико-биологического агентства России". Тема диссертации утверждена на заседании ученого совета ВолгГМУ. Работа выполнялась в рамках общего направления работы кафедры биохимии.

Степень разработанности проблемы

Ишемически-модифицированный альбумин (ИМА) на сегодняшний день остается единственным маркером ишемии миокарда, который был разрешен к использованию в клинической лабораторной практике [68]. Но до сих пор нет единой точки зрения на диагностические возможности данного теста. Некоторые исследователи считают его незаменимым для диагностики острого коронарного синдрома [116] и мониторинга состояния пациентов, перенесших аортокоронарное шунтирование (АКШ) [44], а также важным показателем для долгосрочного прогноза у больных после острого ИМ [108]. Другие полагают, что низкая специфичность маркера не позволяет использовать его для выявления острой ишемии миокарда [131]. Одной из причин этих противоречий является отсутствие целостного представления о природе КСС сыворотки крови и о факторах, которые могут на нее повлиять. Очевидно, что изменение способности альбумина взаимодействовать с ионами двухвалентных металлов может быть вызвано не только его ишемической модификацией [17, 118]. Более того альбумин является не единственным сывороточным белком способным связывать ионы двухвалентных металлов [18, 76]. При этом вклад других белков сыворотки в ее общую КСС до сих пор малоизучен.

Не маловажной проблемой является тот факт, что исследователи используют разные протоколы для определения ИМА [12, 15, 34, 59, 89]. Это затрудняет сравнение данных и вносит путаницу в их интерпретацию.

Диссертация подготовлена и выполнена по плану НИР ВолгГМУ на кафедре теоретической биохимии с курсом клинической биохимии. Научное сотрудничество осуществлялось с ГБУЗ "Волгоградский областной клинический кардиологический центр", МУЗ «Городская клиническая больница № 25» и ФГУЗ "Волгоградский медицинский центр федерального медико-биологического агентства России". Тема диссертации утверждена на заседании ученого совета ВолгГМУ. Работа выполнялась в рамках общего направления работы кафедры биохимии.

Цель исследования: оптимизация процедуры и оценка клинической информативности метода определения общей КСС белков сыворотки крови в лабораторной практике.

Задачи исследования

1. Разработать унифицированный протокол фотометрического определения КСС растворов модельных белков и образцов сыворотки крови.

2. Исследовать возможные свободно-радикальные механизмы, лежащие в основе снижения КСС сывороточного альбумина.

3. Установить региональные референтные границы уровня КСС сыворотки крови.

4. Оценить показатели биологической вариабельности уровня КСС сыворотки крови и коэффициент критической разницы показателя.

5. Апробировать полученный протокол определения КСС на группе пациентов с миокардиальной ишемией,

6. Исследовать уровень КСС у пациентов с заболеваниями, не сопровождающимися острой ишемией миокарда.

Научная новизна

Впервые были получены данные о внутри- и межиндивидуальной биологической вариабельности общей КСС сыворотки крови для группы условно здоровых добровольцев.

Впервые рассчитаны индекс индивидуальности и коэффициент критической разницы показателя (RCV) общей КСС сыворотки крови. Впервые показана необходимость привлечения RCV при интерпретации результатов анализа КСС сыворотки крови пациентов с острой ишемией миокарда.

Впервые были получены данные о связи между изменением белкового спектра сыворотки крови и уровнем ее КСС у пациентов с аутоиммунной патологией и сахарным диабетом 2 типа.

Теоретическая значимость

Данные, полученные в экспериментах с модельными системами, свидетельствуют, что свободные радикалы вызывают сайт-специфическую модификацию (SSM) сывороточного альбумина. Это приводит к снижению его КСС. Описанный патогенетический механизм может иметь место в очаге ишемии миокарда, где увеличивается концентрация свободных радикалов, что объясняет снижение уровня общей КСС сыворотки крови.

Нами было показано, что соотношение белковых фракций сыворотки крови влияет на уровень ее КСС. Изменение соотношения концентраций у-глобулинов и

альбумина в сыворотке крови является неспецифическим механизмом снижения

j

ее общей КСС, несвязанным с острой ишемией миокарда и свободно-радикальными процессами.

Практическая значимость

1. Разработан оптимизированный протокол определения КСС сыворотки крови.

2. Определены региональные референтные границы и RCV для КСС сыворотки крови: 95%-е доверительные границы составляют 0,462 - 0,744 ммоль

Со /л сыворотки, односторонний RCV - 0,097 ммоль Со /л сыворотки, двухсторонний - 0,115 ммоль Со /л сыворотки.

3. Установлено, что патологические изменения белкового спектра сыворотки крови необходимо учитывать при интерпретации результатов анализа ее КСС.

4. На основании предложенного протокола могут быть созданы коммерчески доступные наборы для определения КСС сыворотки крови.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Способность сывороточного альбумина взаимодействовать с Со2+ может меняться в зависимости от конформационных изменений его молекулы. Сайт-специфическое окисление молекулы альбумина вызывает снижение его КСС.

2. Биологическая вариабельность вносит существенный вклад в значение общей КСС сыворотки крови, что необходимо учитывать при интерпретации результатов анализа данного показателя.

3. Изменение соотношения концентраций у-глобулинов и альбумина в сыворотке крови влечет за собой изменение ее общей КСС. Данный механизм не связан с ишемией миокарда и свободно-радикальным окислением.

Апробация

Основные положения диссертации доложены и обсуждены:

4th EucheMs chemistry congress, Prague, Czech republic, 2012.

21st International Congress of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 19th IFCC-EFCC European Congress of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 8th Annual Meeting of the German Society of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, Berlin, Germany, 2011.

Восьмая национальная научно-практическая конференция с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека», Смоленск, 2014.

Первая всероссийская конференция молодых ученых-медиков «Инновационные технологии в медицине XXI века», Москва, 2012.

Национальные дни лабораторной медицины России - 2010. IV Съезд Научного общества специалистов клинической лабораторной диагностики России. Научно-практическая конференция «Лабораторная наука - практике: первое десятилетие XXI века» Москва, 2010.

Всероссийская конференция молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия». Санкт-Петербург, 2010.

3-й научно-практический симпозиум «Свободнорадикальная медицина и антиоксидантная терапия». Волгоград, 2010.

Национальные дни лабораторной медицины России - 2008. Научно-практический симпозиум «Лабораторная медицина: инновационные технологии в аналитике, диагностике, образовании, организации» Москва, 2008.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 20 работ, в том числе 4 — в издании, рекомендованном ВАК Минобрнауки РФ.

Результаты диссертационной работы легли в основу инновационного проекта «Новый метод диагностики ишемии миокарда», который стал победителем программы «Участник молодежного научно-инновационного конкурса» («У.М.Н.И.К.») в апреле 2011 г., занял первое место в «Ежегодном областном конкурсе инновационных проектов Волгоградской области» (2011 г.), а также стал победителем Регионального молодежного инновационного конвента в марте 2012 г. (г. Волгоград). В июле 2012 г. проект стал призером конкурса КУМИР.

Внедрение в практику

Предложенный диагностический тест для определения общей КСС сыворотки крови внедрен в практику на базе ГБУЗ "Волгоградский областной клинический кардиологический центр" как дополнительный метод исследования для скрининга и мониторинга острой ишемии миокарда. Отдельные положения и

выводы нашли применение в учебном процессе на кафедре внутренних болезней педиатрического и стоматологического факультетов и кафедре кардиологии с функциональной и лабораторной диагностикой ФУВ ГБОУ ВПО «ВолГМУ Минздрав РФ». Предложенный нами тест также используется для работы НИИ фармакологии ВолгГМУ и ФГБУ научно-исследовательского института клинической и экспериментальной ревматологии РАМН.

Личный вклад автора

Автор участвовал в разработке темы исследования и планировании экспериментов. Ею была подробно проанализирована зарубежная и отечественная литература, посвященная проблеме диагностики ишемии миокарда и ИМА, как перспективному маркеру данной патологии. Вся экспериментальная часть работы, включая постановку модельных экспериментов, отбор, транспортировку и хранение образцов сыворотки крови, биохимические анализы, была выполнена автором лично. На клиническом этапе автор участвовал в разработке критериев включения и исключения пациентов и здоровых добровольцев. Она формировала и структурировала базу данных материалов исследования. Автор провел статистическую обработку полученных результатов, сформулировал обоснованные выводы и практические рекомендации. Авторский вклад в выполнение работы - 80% и в написание научных работ по теме диссертации -70%.

Структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 7 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Общий объем диссертации 121 страниц. Список литературы содержит 141 наименование.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ

СЕРДЦА

Согласно определению, сформулированному Всемирной организацией здравоохранения ишемическая болезнь сердца (ИБС) — патологическое состояние, характеризующееся абсолютным или относительным нарушением кровоснабжения миокарда вследствие поражения коронарных артерий [30]. Ишемия возникает вследствие недостатка кислорода из-за неадекватной перфузии (рис. 1).

Наиболее частой причиной ишемии миокарда являются атеросклеротические изменения эпикардиальных венечных артерий, которые приводят к сужению этих артерий, что обуславливает уменьшение перфузии миокарда, когда появляется потребность в ее увеличении. Коронарный кровоток уменьшается также при наличии тромбов в венечных артериях, при возникновении спазма в них, иногда - при эмболии венечных артерий, сужении их сифилитическими геммами [11].

В норме коронарное кровообращение регулируется и контролируется потребностью миокарда в кислороде. Это происходит в результате значительно меняющегося коронарного сопротивления, а следовательно, и кровотока. В тоже время количество кислорода, экстрагируемого миокардом из крови, относительно постоянно и достаточно велико. В норме изменение потребности в кислороде, возникающее при физическом и эмоциональном напряжении, влияет на коронарное сопротивление и, таким образом регулирует снабжение кровью и кислородом (метаболическая регуляция). Эти же сосуды адаптируется к физиологическим изменениям артериального давления и тем самым поддерживают коронарный кровоток на уровне, соответствующем потребности миокарда (ауторегуляция). Атеросклеротические изменения локализуются

главным образом в эпикардиальных венечных артериях. Увеличение размеров

атеросклеротических бляшек приводит к сужению просвета сосуда.

Рисунок 1. Развитие тканевой гипоксии вследствие недостатка снабжения

миокарда кислородом.

Экспериментальные исследования показали, что при достижении степени стеноза в 75% от общей площади просвета сосуда максимальное увеличение кровотока в ответ на возрастающую потребность миокарда в кислороде уже невозможно [11]. Если степень стеноза более 80%, то снижение кровотока возможно и в состоянии покоя [52]. Дальнейшее, даже очень небольшое увеличение степени стеноза приводит к значительному ограничению коронарного кровотока и появлению ишемии миокарда.

Неадекватное снабжение сердечной мышцы кислородом, вызванное коронарным атеросклерозом, может привести к нарушению механической, биохимической и электрической функций миокарда. Внезапное развитие ишемии обычно отражается на функции миокарда левого желудочка, что приводит к нарушению процессов расслабления и сокращения. Вследствие того что субэндокардиальные отделы миокарда хуже снабжаются кровью, ишемия этих участков развивается в первую очередь. Если ишемия носит преходящий характер, она проявляется возникновением приступа стенокардии. При продолжительной ишемии возможно возникновение некроза миокарда, что может сопровождаться или не сопровождаться клинической картиной острого ИМ [11].

В основе упомянутых нарушений лежит широкий спектр изменений метаболизма клеток, их функции и структуры. При наличии кислорода нормальный миокард метаболизирует жирные кислоты и глюкозу в углекислый газ и воду. В условиях дефицита кислорода жирные кислоты не могут окисляться, а глюкоза превращается в лактат; рН внутри клетки снижается. В миокарде уменьшаются запасы высокоэнергетических фосфатов, АТФ и креатинфосфата. Нарушение функции клеточных мембран приводит к недостатку ионов К+ и поглощению миоцитами ионов Ыа+. Обратимы ли эти изменения или они приводят к развитию некроза миокарда, зависит от степени и продолжительности дисбаланса между снабжением миокарда кислородом и потребностью в нем [93].

Развитие ишемии и последующей за ней реперфузии ассоциированы с образованием свободных радикалов с одной стороны и снижением антиоксидантной защиты с другой [42, 48, 45, 63, 113]. В условиях недостатка

кислорода их количество невелико, однако в период восстановления кровотока их концентрация резко возрастает, что неизбежно влечет за собой окислительное повреждение тканей [42]. Окислительный стресс ведет к повреждении мембраны митохондрий наряду с изменением функциональной активности клеточных белков [126, 141]. Так в сарколемме снижается активность Са2+-АТФазы и №+-К+-АТФазы, что влечет за собой снижение оттока Са и повышению притока этих ионов [19, 50]. Также ингибируется активность

Са2+-АТФазы

саркоплазматического ретикулума, что в свою очередь снижает скорость

"У А-

поглощения Са из цитоплазмы в кардиомиоцитах [20]. Все перечисленные изменения ведет к «перегрузке» Са2+ и гибели клеток.

Посмертные исследования пострадавших в результате несчастных случаев и погибших в военное время, показали, что атеросклеротические изменения в венечных артериях возникают обычно до 20-летнего возраста [1]. Эти изменения встречаются у взрослых людей, не имевших клинических проявлений болезни [39]. С помощью теста с физической нагрузкой у лиц без клинических проявлений ИБС иногда можно выявить так называемую «немую» ишемию миокарда, т.е. наличие на электрокардиограмме (ЭКГ) изменений, характерных для ишемии миокарда, не сопровождающейся приступом стенокардии. У таких больных при коронарографии часто выявляются обструктивные изменения в венечных артериях. Посмертные исследования лиц с обструктивными изменениями в венечных артериях, у которых не было признаков ишемии миокарда при жизни, часто обнаруживают макроскопические рубцы, являющиеся свидетельством ИМ, в областях, кровоснабжающихся пораженной венечной артерией. Кроме того, популяционные исследования показали, что примерно 25% больных с острым ИМ остаются вне внимания врачей вследствие атипичной клинической картины болезни. Прогноз жизни у таких больных и вероятность возникновения осложнений у них такие же, как и у больных с классической клинической картиной [1]. Внезапная смерть всегда неожиданна и обычно является следствием коронарной болезни сердца. У больных, у которых нет клинических проявлений ишемии до развития сердечной недостаточности, первыми проявлениями

коронарной болезни сердца могут быть кардиомегалия или собственно сердечная недостаточность, развившиеся вследствие ишемического повреждения миокарда левого желудочка. После первого появления клинических признаков болезнь может протекать стабильно, либо прогрессировать, либо вновь принимать бессимптомуную форму, либо заканчиваться внезапной смертью [11].

Длительная ишемия влечет за собой некроз кардиомиоцитов. Эти патологические изменения лежат в основе такой формы ИБС, как ИМ. По данным ВОЗ чаще всего больные ИМ жалуется на боль. Однако у 15-20%, а по-видимому, даже и большего процента больных острый ИМ протекает также безболезненно, и такие больные могут вообще не обращаться за помощью [39]. Чаще безболевой ИМ регистрируют у больных сахарным диабетом, а также у лиц преклонного возраста [122]. У пожилых больных ИМ проявляется внезапно возникшей одышкой, которая может перейти в отек легких. В других случаях ИМ, как болевой, так и безболевой, характеризуется внезапной потерей сознания, ощущением резкой слабости, возникновением аритмий или просто необъяснимым резким понижением артериального давления.

При остром ИМ можно выделить два основных типа осложнений [95] - это осложнения, обусловленные электрической нестабильностью (аритмии) и механические (насосная недостаточность). Так большинство больных с фибрилляцией желудочков умирают в первые 24 ч после появления симптомов, а более половины из них - в течение первого часа. Прогноз для больного в этой ситуации зависит от своевременного оказания квалифицированной медицинской помощи, а также от верно выбранной тактики лечения. На это указывает и тот факт, что размер некротизированного вследствие ишемии участка коррелирует со степенью сердечной недостаточности и уровнем смертности [102] как в первые дни, так и в более поздние сроки.

Итак, клиническая картина даже острых форм ИБС может иметь стертый, невыраженный характер, что неизбежно влечет за собой трудности в диагностике этой группы заболеваний, а следовательно препятствует оказанию своевременной медицинской помощи [23, 38].

1.2. ОСТРЫЙ КОРОНАРНЫЙ СИНДРОМ, ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ

ДИАГНОСТИКИ

Термин «острый коронарный синдром» (ОКС) был предложен новозеландским клиницистом White в 1996-1997 г., чтобы показать трудности диагностики и точного прогнозирования течения острых ишемий миокарда, непосредственно угрожающих жизни больного. В широкой клинической практике его стали применять лишь в самом конце XX в. [1].

В 2005 г. К.Кэннон и Ю.Браунвальд предложили включать в рубрику "острый коронарный синдром" лишь больных с ИМ, имеющих подъем интервала ST на ЭКГ (STEMI-ST elevated myocardial infarction), и больных с нестабильной стенокардией и ИМ без подъема ST (NSTEMI-non-ST-segment elevation myocardial infarction) [31]. По данным К.Каннон и Ю.Браунвальд, с диагнозом ОКС только в США ежегодно в стационар врачами первого контакта направляется от 6 до 7 млн человек. При этом истинный ОКС констатируется у 1,8 млн человек, а подъем ST-сегмента выявляется лишь в 22% случаев [1].

В настоящее время принято считать [25], что ОКС представляет собой определенный спектр клинических проявлений одного и того же процесса в коронарных артериях, в ходе которого происходит формирование обструкции коронарной артерии различной степени выраженности, вплоть до ее полной окклюзии. Эту обструкцию осуществляет тромбоцитарно-фибриновый тромб, который накладывается на место разрыва или только надрыва атеросклеротической бляшки. Данное предположение получило подтверждение в ходе ангиографических и ангиоскопических исследований коронарных артерий. Важно подчеркнуть, что ангиоскопия коронарных артерий обнаружила тромботические формирования в 20% случаев даже стабильной стенокардии.

Диагностика ОКС осуществляется на основе данных клинической картины, показателей ЭКГ, снятой во время развития клинических проявлений, и результатов изучения кардиоспецифических ферментов [119]. При анализе

клинической картины учитываются не только интенсивность и локализация болевого синдрома, но и состояние гемодинамики.

В ходе обследования больных необходимо исключить внесердечные причины боли, заболеваний сердца неишемического происхождения в виде перикардита, поражения клапанов, а также внесердечных причин, потенциально способствующих усилению ишемии (например, анемии). Необходимо также выявить другие сердечные причины, вызывающие или усугубляющие ишемию миокарда, например, сердечную недостаточность, артериальную гипертензию, аритмии [1].

ЭКГ является не только важнейшим инструментом диагностики, но и первостепенным фактором в выборе стратегии начальной (прежде всего, реперфузионной) терапии. Необходимо как можно скорее снять ЭКГ, которая является основным методом диагностики ОКС. Регистрацию ЭКГ следует стремиться проводить во время наличия симптомов и сравнивать с ЭКГ, зарегистрированной после их исчезновения. Желательно сравнивать «свежую» ЭКГ со старыми. Как известно, ЭКГ позволяет определить наличие ишемии миокарда, ее локализацию и давность.

Классическими признаками ОКС являются смещения сегмента 5Т и изменения зубца Т. Даже в ранней стадии ИМ параметры ЭКГ редко остаются в норме [11]. Однако в первые часы ЭКГ часто не поддается однозначной интерпретации. Даже при несомненном ИМ на ЭКГ может не быть классических признаков подъема сегмента £Т и появления нового зубца Q.

Электрокардиографические данные достаточно условно могут быть отнесены к разряду «ранних диагностических критериев» даже с учетом того, что начальная ЭКГ редко бывает неизмененной при остром ИМ. Выяснено, что почти 6 % больных острым ИМ не имеют изменений на начальной ЭКГ. Ранние изменения ЭКГ могут характеризоваться только одним появлением высокоамплитудных зубцов Т. Имеющиеся данные говорят о том, что ко времени обращения за медицинской помощью только 50% больных ИМ имеют подъем сегмента 5Т, либо уже сформировавшиеся патологические зубцы (). В 40%

случаев регистрируются либо смещение сегмента 5Т ниже изолинии, либо изменения касаются только зубцов Т[ 1].

Принципиальное различие между двумя нозологическими формами, входящими в понятие ОКС без подъема сегмента 5Т, — нестабильная стенокардия и ИМ без зубца () — заключается в том, что при нестабильной стенокардии признаки некроза кардиомиоцитов отсутствуют, в то время как при ИМ без зубца 0 они присутствуют [105].

Так как клиническая картина и ЭКГ не позволяют достоверно выявить некроз кардиомиоцитов у больных ОКС без подъема сегмента БТ, дифференциальный диагноз между нестабильной стенокардией и ИМ без зубца Q возможен только на основании изучения биохимических маркеров некроза миокарда [70].

Таким образом, ЭКГ позволяет диагностировать только ИМ с подъемом сегмента БТ. Дифференциальная диагностика ИМ без подъема БТ и нестабильной стенокардии возможна лишь на основании дополнительных биохимических исследований.

1.3. КАРДИОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ

Общепринято, что идеальный кардиологический маркер должен быть распространен исключительно в ткани сердца, обладать высокой специфичностью, чувствительностью и точностью, быстро появляться в кровотоке с момента начала сердечного приступа и быть хорошо изученным.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Литус, Екатерина Андреевна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Бокарев И.Н., Аксенова М.Б., Хлевчук Т.В. Острый коронарный синдром и его лечение: учебное пособие для студентов медицинских вузов. 2-е изд. испр. и доп./ М.: Практическая медицина, 2009. 172 с.

2. Гланц, С. Медико-биологическая статистика./ М.: Практика, 1998.

459 с.

3. ГОСТ Р 53079.4-2008. Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа. М: Стандартинформ, 2009. 18 с.

4. ГОСТ Р 53133.2-2008 Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 2. Оценка аналитической надёжности методов исследования (точность, чувствительность, специфичность). М: Стадартинформ, 2009. 23 с.

5. Грызунова Ю.А., Добрецова Г.Е. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. Книга 2./ М.: ГЭОТАР, 1998. 440 с.

6. Зайцев В.Г., Литус Е.А., Жданова A.B. Разнонаправленное изменение кобальтсвязывающей способности сывороточного альбумина под действием различных окислителей.// Вестник Волгоградского государственного университета. Cep.l 1. Биология и биотехнология, 2011. №2. С. 22-25.

7. Новый справочник химика и технолога. Аналитическая химия. Часть III/ СПб: "Мир и Семья", 2002. 692 с.

8. Островский О.В. Лабораторные маркеры повреждения миокарда в современной кардиологии.// Вестник ВогГМУ, 2009. №1. С. 11-15.

9. Справочник биохимика./ Р. Досон [и др.]/ М: Мир, 1991. 544 с.

10. Уильяме У.Дж. Определения анионов./ М.: Химия, 1982. 624с.

11. Харрисон Т.Р. Внутренние болезни. Книга 5. Болезни сердечнососудистой системы./М: Медицина, 1995. С.448.

12. A novel assay for cobalt albumin binding and its potential as a marker for myocardial ischemia - a preliminary report.// D. Bar-Or [et al.]/ Emerg. Med., 2000. №4. P. 311-315.

13. ACC/AHA 2007 guidelines for the management of patients with unstable angina/non-ST-Elevation myocardial infarction: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines (Writing Committee to Revise the 2002 Guidelines for the Management of Patients With Unstable Angina/Non-ST-Elevation Myocardial Infarction) developed in collaboration with the American College of Emergency Physicians, the Society for Cardiovascular Angiography and Interventions, and the Society of Thoracic Surgeons endorsed by the American Association of Cardiovascular and Pulmonary Rehabilitation and the Society for Academic Emergency Medicine.// J.L. Anderson [et al.]/ J. Am. Coll. Cardiol., 2007. №7. P. el—el57.

14. ACC/AHA guidelines for the management of patients with ST-elevation myocardial infarction—executive summary. A report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines (Writing Committee to revise the 1999 guidelines for the management of patients with acute myocardial infarction).// E.M. Antman [et al.] / J. Am. Coll. Cardiol. 2004. №3. P. 671—719; Circulation, 2004. №5. P. 588—636.

15. Albumin Cobalt Binding Assay to Rule Out Acute Coronary Syndrome.// J.M. Abadie/Annals of clinical & laboratory science, 2005. №1. P. 66-72.

16. Albumin website. Режим доступа: http://www.albumin.org. (Дата обращения: 29.07.2014).

17. Allosteric inhibition of cobalt binding to albumin by fatty acids: implications for the detection of myocardial ischemia.// J. Lu [et al.]/ J. Med. Chem., 2012. №9. P. 4425-4430.

18. Al-Mashikhi S.A., Nakai S. Separation of immunoglobulin and transferrin from blood serum and plasma by metal chelate interaction chromatography. / J Dairy Sci., 1988. №7. P. 1756-1763.

19. Alterations in cardiac membrane Ca2+ transport during oxidative stress.// I.M. Dixon [et al.]/Mol. Cell. Biochem., 1990. №2. P. 125-133.

20. Alterations in sarcoplasmic reticulum function and gene expression ischemic-reperfused rat heart.// R.M. Temsah [et al.]/ Am. J. Physiol. 1999. №2 Pt 2. P. H584-H594.

21. Analysis of the albumin cobalt binding (ACB™) test as an adjunct to cardiac troponin I for the early detection of acute myocardial infarction.// A. Wu [et al.]/ Cardiovascular toxicology, 2001 №1. P. 147-151.

22. Analytical performance of the Albumin Cobalt Binding (ACB) test on the Cobas MIRA Plus analyzer.// S. Gidenne [et al.] /Clin. Chem. Lab. Med. 2004. №4. P. 455 -461.

23. Angiographic evolution of coronary artery morphology in unstable angina.// J.A. Ambrose [et al.]/ J. Am. Coll. Cardiol., 1986. № 7. P. 472.

24. Antibodies-online. Режим доступа: http ://www. antibodies-online, com/kit/3 67143/Ischemia+Modified+Albumin+IMA+ELI S А/ (дата обращения 24.03.2012).

25. Anxiety and Well-being among Acute Coronary Syndrome Patients: Overtime.// D. Arora [et al.]/ Journal of the Indian academy of applied psychology, 2010. №1. P. 79-88.

26. Apple F.S. Clinical and analytical review of ischemia-modified albumin measured by the albumin cobalt binding test. / Adv. Clin. Chem, 2005. Vol. 39. P. 1-10.

27. Association between ischemia-modified albumin, lipids and inflammation biomarkers in patients with hypercholesterolemia. M.M. Duarte [et al.]/ Clin. Biochem., 2009. №7-8. P. 666-671.

28. Beyond statistics: a new combinatorial approach to identifying biomarker panels for the early detection and diagnosis of Alzheimer's disease.// E.A. Milward [et al.]/J. Alzheimers Dis., 2014. №1. P. 211-217.

29. Biological variation of ischaemia-modified albumin in healthy subjects.// Govender R. [et al.]/ Cardiovasc. J. Afr. 2008. № 3. P.141 - 144

30. Burgess A.M., Fejfar Z., Kagan A. Arterial hypertension and ischaemic heart disease comparison in epidemiological studies. 5. Work in progress./ WHO Chron., 1963. Vol. 17. P. 97-106.

31. Cannon, C.P., Braunwald, E. Unstable angina and non-ST elevation myocardial infarction., in Libby P. et al (eds). Braunwald's Heart Disease: a textbook cardiovascular medicine (8th ed.), 2008. P. 1319-1351.

32. Cardiac troponin T levels for risk stratification in acute myocardial ischemia. GUSTO IIA Investigators.// E.M. Ohman / N. Engl. J. Med., 1996. №18. P. 1333-1341.

33. Characteristics of a nickel-albumin binding assay for assessment of myocardial ischaemia.// S.H. da Silva [et al.]/ Biomarkers, 2010. №4. P. 353-357.

34. Characteristics of an albumin cobalt binding test for assessment of acute coronary syndrome patients: a multicenter study.// R.H. Christenson [et al.]/ Clin. Chem., 2001. №3. P. 464-470.

35. Christenson R.H., Azzazy H.M.E. Biochemical marker of the acute coronary syndromes. / Clin. Chem., 1998. №8. P. 1855-1864.

36. Clinical and laboratory standards institute: Document EP 17: Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation / CLSI Approved Guideline. Wayne, PA USA, 2004. №34. 39 p.

37. Coddington A., Perkins D. J. The effect of chemical modification on the uptake of cobalt ions by human serum albumin/ Biochem. J., 1958. №4. P. 45.

38. Cohn P.F., Braunwald E. Chronic ischemic heart disease/ Heart disease: a textbook of cardiovascular medicine. Pliladelphia: W.B. Saunders, 1984. P. 1334-1383.

39. Cohn P.F., Fox K.M. Silent Myocardial Ischemia./ Circulation, 2003. №10. P. 1263-1277.

40. Comparison of ischemia-modified albumin levels in patients undergoing percutaneous coronary intervention for unstable angina pectoris with versus without coronary collaterals.// I.P. Garrido [et al.]/ Am. J. of Cardiology, 2004. №1. — P. 88-90.

41. Defective endovascular trophoblast invasion in the first trimester is associated with increased maternal serum ischemia-modified albumin.// A.T. Papageorghiou [et al.]/ Human reproduction, 2008. №4. P. 803-806.

42. Demonstration of free radical generation in 'stunned myocardium' of intact dogs with the use of the spin trap alpha-phenyl N-tert-butyl-nitrone.// R. Bolli [et al.]/ J. Clin. Invest., 1988. №2. P. 476-485.

43. DerVartanian D.V., Chenoweth M.R. Rapid and accurate colorimetric determination of nickel and cobalt in protein solutions./ U.S. Patent 6,020,204. 2000. 11 c.

44. Detection of perioperative myocardial infarction with ischemia-modified albumin.// S.-Y. Dong, [et al.]/ Asian cardiovascular and thoracic annals, 2012. №3. P. 252-256.

45. Determination of the mechanisms of free radical generation in human aortic endothelial cells exposed to anoxia and reoxygenation.// J.L. Zweier [et al.]/ J. Biol. Chem., 1994. №39. P. 24156-24162.

46. Diagnostic efficacy of ischemia modified albumin and its cor-relation with lipid profile,oxidative stress in acute myocardial infarct patients on admission.//

S. Behera/Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 2012. №1. P. 62-65.

47. Diagnostic value of ischemia-modified albumin in patients with acute coronary syndrome.// X.L. Shen [et al.]/ Zhonghua xin xue guan bing za zhi, 2007. №9. P. 814-817.

48. Direct evidence that oxygen derived free radicals contribute to postischemic myocardial dysfunction in the intact dog.// R. Bolli [et al.]/ Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989. №12. P. 4695-4699.

49. Direct measurement of creatine kinase-MB activityin serum after extraction with a monoclonal antibody specific to the MB isoenzyme// H.C. Valdya [et al.]/ Clin.Chem., 1986. №4. P. 657-663.

50. Dixon I.M., Hata T., Dhalla N.S. Sarcolemmal Na+-K+ ATPase activity in congestive heart failure due to myocardial infarction./ Am. J. Physiol. 1992. №3 Ptl. P. 664-671.

51. Effect of albumin concentration and serum matrix on ischemia-modified albumin.// A. Hakligör [et al.]/ Clin. Biochem., 2010. № 3. P.345 - 348.

52. Effect of coronary stenotic lesions on regional myocardial blood flow at rest.// Nichols A.B. [et al.]/ Circulation, 1986. №4. P. 746-757.

53. Effect of radiofrequency catheter ablation on the biochemical marker ischemia modified albumin.// D. Roy [et al.]/ Am. J. Cardiol., 2004. №2. P. 234-236.

54. Effects of balloon occlusion during percutaneous coronary intervention on circulating Ischemia Modified Albumin and transmyocardial lactate extraction.// M.K. Sinha [et al.]/ Heart, 2006. №12. P. 1852- 1853.

55. Effects of peripheral vascular intervention on ischemia-modified albumin.// Hacker M. [et al.]/ Coronary Artery Disease, 2007. №5. P. 375-379.

56. Elion-Gerritzen W.E., Analytic precision in clinical chemistry and medical decisions./ Am. J. Clin. Patho., 1980. №2. P. 183-195.

57. Enzyme linked immunoassay of cardiac troponin T for the detection of acute myocardial infarction in patients.// H.A. Katus [et al.]/ Journal of molecular and cellular cardiology, 1989. №12. P. 1349-1353.

58. Evaluation of cardiac laboratory markers in patients with systemic sclerosis// M. Montagnana [et al.]/ Clin. Biochem, 2006. № 9. P 913-917.

59. Evaluation of human serum albumin cobalt binding assay for the assessment of myocardial ischemia and myocardial Infarction.// N.V. Bhagavan [et al.]/ Clin. Chem., 2003. №4. P. 581-585.

60. Evaluation of ischaemia-modifïed albumin as a marker of myocardial ischaemia in end-stage renal disease.// R. Sharma [et al.]/ Clinical science, 2007. №1. P. 25-32.

61. Evaluation of ischemia-modified albumin in anemia associated to chronic kidney disease. Cichota L.C. [et al.]/ J. Clin. Lab. Anal., 2008. №1. P. 1-5.

62. Evaluation of the albumin cobalt binding (ACB®) assay for measurement of ischaemia-modified albumin (IMA®) on the Beckman Coulter LX-20// O.C. Maguire [et al.]/ Ann. Clin. Biochem., 2006. №6. P. 494-499.

63. Evidence for free radical generation after primary percutaneous transluminal coronary angioplasty recanalisation in acute myocardial infarction.// E.D. Grech [et al.]/ Am. J. Cardiol. 1996. №2. P. 122-127.

64. First experience with the cobalt binding capacity (ACB) test in the diagnosis of acute coronary syndrome (a pilot study).// D. Stejskal [et al.]/ Vnitr. Lek., 2004. №10. P.734 - 739.

65. First trimester maternal serum ischaemia-modified albumin: a marker of hypoxia-ischaemia-driven early trophoblast development.// F. Preiumo [et al.]/Human reproduction, 2007. №7. P. 2029-2032.

66. Fraser C.G.. Biological Variation: From Principles to Practice./ AACCPress Washington DC, 2001. 151 p.

67. Future biomarkers for detection of ischemia and risk stratification in acute coronary syndrome.// F.S. Apple [et al.]/ Clin. Chem., 2005. №5. P. 810—824.

68. Gaze D.C. Ischemia modified albumin: a novel biomarker for the detection of cardiac ischemia./ Drug Metab. Pharmacokinet., 2009. №4. P. 333 - 341.

69. Gaze D.C., Crompton L., Collinson P. Ischemia-modified albumin concentrations should be interpreted with caution in patients with low serum albumin concentrations./ Med. Princ. Pract., 2006. №4. P. 322 - 324.

70. Guideline for the management of patients with acute coronary syndromes without persistent ECG ST segment elevation. British cardiac society guidelines and medical practice committee, and royal college of physicians clinical effectiveness and evaluation unit heart, 2001. №2. P. 133-142.

71. Harris E.K. Some theory of reference values. II. Comparison of some Statistical models of intraindividual variation in blood constituents./ Clin.Chem., 1976. №8. P. 1343-1350.

72. Harris E.K., Yasaka T. On the Calculation of a "Reference Change" for Comparing Two Consecutive Measurements./ Clin.Chem., 1983. №1. P. 25-30.

73. Hawkins C.L., Davies M.J. Hypochlorite-induced damage to proteins: formation of nitrogen-centred radicals from lysine residues and their role in protein fragmentation./ Biochem. J., 1998. № Pt 3. P. 617 - 625.

74. Hedin N. Metal Ion Interactions with Immunoglobulin G (IgG). 1. Preliminary Studies with Electron Paramagnetic Resonance (EPR) Spectroscopy and Ultrafiltration./ South dakota school of mines and technology, Rapid city, 1978. 182 p.

75. High ischemia-modified albumin concentration reflects oxidative stress but not myocardial involvement in systemic sclerosis.// B. Didier [et al.]/ Clin. Chem., 2004. №11. p. 2190-2193.

76. HIV-1 rsgp41 depends on calcium for binding of human Clq but not for binding of gpl20.// H. Stoiber [et al.]/ Molecular immunology, 1995. № 5. P. 371-374.

77. ICH Q2A: Validation of analytical methods: definitions and terminology. (CPMP/ICH/381/95), 1994. 5 p.

78. ICH Q2B: Validation of analytical procedures: Methodology. (CPMP/ICH/381/95), 1996. 9 p.

79. Identification of the Clq-binding Sites of Human Clr and Cls. A refined three-dimensional model of the CI complex of complement// Bally I. [et al.]/ The Journal of Biological Chemistry, 2009. №29. P. 19340-19348.

80. Immanuel S., Sanjaya A.I. Albumin cobalt binding (ACB) test: its role as a novel marker of acute coronary syndrome. / Acta. Med. Indones. 2006. №2. P. 92 - 96.

81. Influence of physical exercise and relationship with biochemical variables of NT-pro-brain natriuretic peptide and ischemia modified albumin.// G. Lippi [et al.]/ Clin. Chim. Acta., 2006. № 1-2. P 175-180.

82. Influence of the dialysis membrane on markers of tissue ischemia.// L. Carrega [et al.]/ J. Investig. Med., 2006. №2. P.62-66.

83. Ischaemia modified albumin cannot be used for rapid exclusion of acute coronary syndrome.// R. M.-H. Lin [et al.]/ Emerg. Med. J., 2010 №9. P. 668-671.

84. Ischaemia modified albumin in radiofrequency catheter ablation.// E. Sbarouni [et al.]/ Europace, 2007. №2. P. 127-129.

85. Ischemia Modified Albumin in Acute Cerebrovascular Disease./ Medical research, 2012. Режим доступа: http://www.res-medical.com/neuropathy/40982 (дата обращения 24.03.2012)

86. Ischemia modified albumin is a sensitive marker of myocardial ischemia after percutaneous coronary intervention.// M.K. Sinha [et al.]/ Circulation, 2003. №19. P. 2403-2405.

87. Ischemia-modified albumin as an oxidative stress marker in preeclampsia.// Y. Ustun [et al.]/ J. Matern. Fetal Neonatal. Med., 2011. №3. P. 418-421.

88. Ischemia-modified albumin during skeletal muscle ischemia.// E. Zapico-Muniz [et al.]/ Clin. Chem, 2004. №6. P. 1063-1065.

89. Ischemia-modified albumin improves the usefulness of standard cardiac biomarkers for the diagnosis of myocardial ischemia in the emergency department setting.// S. Anwaruddin [et al.]/ Am. J. Clin. Pathol., 2005. №1. P. 140-145.

90. Ischemia-modified albumin in acute stroke.// H. Abboud [et al.] /Amarenco P Cerebrovasc Dis., 2007. №2-3. P. 216-220.

91. Ischemia-modified albumin in relation to exercise stress testing.// E. Sbarouni [et al.]/ J. Am. Coll. Cardiol. 2006. №12. P. 2482-2484.

92. Ischemia-modified albumin is increased in patients with unstable angina: a new potential diagnostic biomarker of this acute coronary syndrome / Sh. Ju [et al.]/ Labmedicine, 2008. №11. P. 668-670.

93. Ito M. Cardiac function abnormalities and biochemical changes in myocardial ischemia. / Rinsho Byori, 1991. №8. P. 791-792.

94. Kanaide H., Uranishi Т., Nakamura M. Effects of divalent cations on the conversion of fibrinogen to fibrin and fibrin polymerization./ Am. J. Hematol., 1982. №3. P. 229-237.

95. Kondur A.K., Hari P., Afonso L.C. Complications of myocardial infarction./ Medscape. Режим доступа: http://emedicine.medscape.com/ article/164924-overview#aw2aab6b2 (дата обращения 10.05.2014).

96. Korff S., Katus H.A., Giannitsis E. Differential diagnosis of elevated troponins./ Heart, 2006. №7. P. 987-993.

97. Koulouris S., Tzeis S., Manolis A.S. New Biochemical Markers of Ischemia: The Diagnostic and Prognostic Role of Brain Natriuretic Peptide, C-Reactive

Protein, Ischemia Modified Albumin and Myeloperoxidase./ Hospital chronicles, 2009. №1 sup. P. 31-38.

98. Lages В., Stivala S.S. Copper ion binding and heparin interactions of human fibrinogen. / Peptide Science, №5. P. 961 - 997.

99. Meta-analysis of ischemia-modified albumin to rule out acute coronary syndromes in the emergency department.// F. Peacock [et al.]/ Am. Heart J., 2006. №2. P. 253-62.

100. Morrow D.A. Cardiovascular biomarkers. Pathophysiology and disease management edited. / Humana press New Jersey, 2006. 620 p.

101. Mothes E., Faller P. Evidence that the principal Coil-binding site in human serum albumin is not at the N-terminus: implication on the albumin cobalt binding test for detecting myocardial ischemia./ Biochemistry, 2007. №8. P. 2267 - 2274.

102. Myocardial infarction./ The internet pathology laboratory for medical education. Режим доступа: http://library.med.utah.edu/WebPath/TUTOMAL/MYOCARD/MYOCARD.html (дата обращения 30.07.2014).

103. Myocardial ischaemia after coronary arteiy bypass grafting: early vs late extubation.// P.D. Berry [et al.]/ Br. J. Anaesth., 1998. №1. P. 20-25.

104. National academy of clinical biochemistry laboratory medicine practice guidelines: Clinical characteristics and utilization of biochemical markers in acute coronary syndromes.// D.A. .Morrow [et al.]/ Circulation, 2007. №13. P. e356—e375.

105. National academy of clinical biochemistry. National academy of clinical biochemistry laboratory medicine practice guidelines: clinical characteristics and utilization of biochemical markers in acute coronary syndromes.// Morrow D.A. [et al.]/ Clin. Chem., 2007. №4. P. 552-574.

106. Nowatzke W., Woolf E. Best practices during bioanalytical method validation for the characterization of assay reagents and the evaluation of analyte stability in assay standards, quality controls, and study samples/ The AAPS Journal, 2007. №2. P. 117-122.

107. On the action of hypochlorite on human serum albumin// J. Arnhold [et al.] /Biomed. Biochim. Acta, 1990. №10. P. 991-997.

108. OPERA Investigators. Ischemia-modified albumin levels predict long-term outcome in patients with acute myocardial infarction. The French Nationwide OPERA study.// E. Van Belle [et al.]/ Am. Heart. J., 2010. №4. P. 570-576.

109. Oxidative and nitrosative stress in acute ischaemic stroke. M. Senes [et al.]/ Ann. Clin. Biochem., 2007 №Pt 1. P. 43-47.

110. Piwowar A., Knapik-Kordecka M., Warwas M. Ischemia-modified albumin level in type 2 diabetes mellitus. / Preliminary report. Dis. Markers, 2008. №6. P. 311317.

111. Plebani M., Zaninotto M. Diagnostic strategies in myocardial infarction using myoglobin measurement. Eur J Cardiol 1998. Vol. 19 Suppl. N. P. N12—N15.

112. Prognostic significance of ischemia-modified albumin in patients with acute coronary syndrome.// M.Aparci [et al.]/ Coron. Artery. Dis., 2007. №5. P. 367373.

113. Protection by superoxide dismutase from myocardial dysfunction and attenuation of vasodilator reserve after coronary occlusion and reperfusion in dog.// J.L. Mehta [et al.]/ Circ. Res., 1989. №5. P. 1283-1295.

114. Reduction in the cobalt binding capacity of human albumin with myocardial ischemia// D. Bar-Or [et al.]/ Ann. Emerg. Med., 1999. №4. P. 56.

115. Relation of ischemia-modified albumin (IMA) levels following elective angioplasty for stable angina pectoris to duration of balloon-induced myocardial ischemia.// J. Quiles [et al.]/ Am. J. Cardiol., 2003. №3. P. 322-324.

116. Role of "Ischemia modified albumin", a new biochemical marker of myocardial ischaemia, in the early diagnosis of acute coronary syndromes.// M.K. Sinha [et al.]/ Emerg. Med. J., 2004. №1. P. 29-34.

117. Sadler P.J., Tucker A., Viles J.H. Involvement of a lysine residue in the N-terminal Ni2 + and Cu2+ binding site of serum albumins. Comparison with Co2+, Cd2 + and Al3 +./ Eur. J. Biochem. 1994. №1. P. 193-200.

118. Sbarouni E. Ischemia modified albumin as an acute-phase reactant./ EJCM, 2011. №3. P. 81-83.

119. Scott M.G., Gronowski A.M., Eby Ch.S. Tietz's Applied Laboratory Medicine. Second Edition./ Wiley-interscience, a John Wiley and sons., inc., publication, Hoboken, New Jersey, 2007. 679 p.

120. Serum ischaemia-modified albumin increases in critical lower limb ischaemia.// A. Gunduz [et al.]/ Emergency Medicine Journal, 2008. №6. P. 351-353.

121. Serum levels of ischemia-modified albumin in healthy volunteers after exercise-induced calf-muscle ischemia.// J. Falkensammer [et al.]/ Clin. Chem. Lab. Med., 2007. №4. P. 535-40.

122. Significance of silent ischemia and microalbuminuria in predicting coronary events in asymptomatic patients with type 2 diabetes.// M. Rutter [et al.]/ J. Am. Coll. Cardiol., 2002. №1. P. 56-61.

123. Skendzel L.P. How physicians use laboratory tests./ J. Am. Med. Assoc., 1978. №11. P. 1077-1080.

124. Smith R^C., Leung J.M., Mangano D.T. Postoperative myocardial ischemia in patients undergoing coronary artery bypass graft surgery. S.P.I. Research Group./ Anesthesiology, 1991. №3. P. 464-473.

125. Statistics with confidence 2d Ed.// D.G. Autman [et al.]/ BMJ Publishing, 2000. 240 p.

126. Status of myocardial antioxidants in ischemia-reperfusion injury.// N.S. Dhalla [et al.]/ Cardiovasc Res, 2000. №47. P. 446-456.

127. Susuki Y. Color reaction of aromatik aldehyde with serum protein and its application to the determination of serum total globulin concentration./ Anal. Sci., 2000. №2. P. 145 - 149.

128. The cobalt-albumin binding assay Insights into its mode of action.// D. Bar-Or [et al.]/ Clinica chimica acta, 2008. №1-2. P. 120-127.

129. The ischemia-modified albumin in relation to pacemaker and defibrillator implantation.//E. Sbarouni [et al.]/Pacing Clin. Electrophysiol., 2008. №1. P. 83-87.

130. The national center for biotechnology information. Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov (дата обращения 29.07.2014)

131. The PRIMA Study: presentation ischaemia-modified albumin in the emergency department.// L. Keating [et al.]/ EMJ, 2006. №10. P. 764-768.

132. Time-dependent variations in ischemia-modified albumin levels in mesenteric ischemia.// A. Gunduz [et al.]/ Acad. Emerg. Med. 2009. №6. P. 539-543.

133. Update on biomarkers for the detection of lung cancer.// E. Jantus-Lewintre [et al.]/ Lung cancer: targets and therapy, 2012. Vol. 3. P. 21 - 29.

134. Use of ischemia-modified albumin in diagnosis of coronary artery disease.// N. Kalay [et al.]/ Coron. Artery. Dis., 2007. №8. P. 633 - 637.

135. Utility of admission cardiac troponin and "Ischemia Modified Albumin" measurements for rapid evaluation and rule out of suspected acute myocardial infarction in the emergency department.// P.O. Collinson [et al.] / Emergency medicine journal — 2006. №4. P. 256-261.

136. Value of ischemia-modified albumin in the diagnosis of pulmonary embolism.// S. Turedi [et al.]/ Am. J. Emerg. Med., 2007 №7. P. 770-773.

137. Vancan S., Miranda E.A., Bueno S.M.A. IMAC of human IgG: studies with IDA-immobilized copper,nickel, zinc, and cobalt ions and different buffer systems./ Process Biochemistry, 2002. №6. P. 573-579.

138. Vasan R.S. Biomarkers of cardiovascular disease: Molecular basis and practical considerations./ Circulation, 2006. №19. P. 2335-2362.

139. Von Arnim T. The diagnosis of silent myocardial ischemia. The problems of false-positive findings in the exercise ECG and long-term ECG/ Fortschr. Med., 1990. №14. P. 267-269.

140. Wu A. New biochemical markers of ischemia: What markers are being investigated and how do they work?/ International workshop on ischemia. Barcelona, Spain, 2002. P. 18-20.

141. Zweier J.L., Flaherty J.T., Weisfeldt M.L. Direct measurement of free radical generation following reperfusion of ischemic myocardium./ Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987 №5. P. 1404-1407.