Новые белки обонятельного эпителия млекопитающих. Структурно-функциональные исследования тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, доктор химических наук Шуваева, Татьяна Маратовна

• Шуваева, Татьяна Маратовна
• доктор химических наук
• 2008

Оглавление диссертации доктор химических наук Шуваева, Татьяна Маратовна

Введение стр.

1. Литературный обзор

1.1. Пероксиредоксины - новое семейство белков, антиоксидантов

1.1.1. Организация антиоксидантной защиты клеток

1.1.2. История открытия первого представителя семейства пероксиредоксинов. Белок дрожжей, защищающий ферменты от инактивации в присутствии тиолов

1.1.3. Общие свойства пероксиредоксинов

1.1.4. Идентификация субстратов и тиолового кофактора пероксиредоксинов

1.1.5. Три типа пероксиредоксинов млекопитающих и механизмы их каталитического действия

1.1.6. Пероксинитритредуктазная активность пероксиредоксинов

1.2. Перекись водорода и ее регуляция пероксиредоксинами

1.2.1. Н202 - вторичный посредник сигнальной трансдукции

1.2.2. Регуляция активности самих пероксиредоксинов

1.2.3. Образование сульфинового производного существенного остатка Сув пероксиредоксинов. Обратимость реакции и ее биологическое значение

1.2.4. Бифункциональность пероксиредоксинов

1.3. Пероксиредоксины VI подгруппы

1.3.1. Физиологический электронный донор для пероксидазной активности ^ пероксиредоксина VI

1.3.2. Ферментативнаяактивность пероксиредоксина VI

1.3.3. Антиоксидантные свойства пероксиредоксина VI

1.4. Медицинские аспекты изучения пероксиредоксинов

2. Результаты и их обсуждение

2-1. Пероксиредоксин обонятельного эпителия крысы

2.1.1. Очистка, идентификация и определение частичной аминокислотной последовательности белка р28, пероксиредоксина VI ^

2.1.2. Установление и анализ полной аминокислотной последовательности пероксиредоксина VI

2.1.3. Локализация пероксиредоксина VI в тканях млекопитающих ^

2.2. Функциональная экспрессия пероксиредоксина VI. Выделение и очистка рекомбинантных белков ^

2.2.1. Экспрессия кДНК пероксиредоксина VI в эукариотической системе

Pichia pastoris ^

2.2.2. Экспрессия кДНК пероксиредоксина VI человека в прокариотической системе Е. coli ^

2.2.3. Функциональная экспрессия укороченного варианта белка человека 79 2.3. Sec 14р-подобный белок обонятельного эпителия крысы

2.3.1. Очистка и идентификация в обонятельном эпителии хитиназы YM

2.3.2. Установление и анализ полной аминокислотной последовательности р45 - Secl4p - подобного белка обонятельного эпителия крысы g^

2.3.3. Локализация места синтеза Secl4p - подобного белка

2.3.4. Поиск возможных биологических партнеров Secl4p - подобного белка

2.3.5. Исследование липид-связывающей специфичности Secl4p - подобного белка из обонятельного эпителия крысы

2.3.5.1. Получение рекомбинантного Sec 14р - подобного белка

2.3.5.2. Изучение р45-лигандного взаимодействия на нитроцеллюлозных пластинках jQg

2.3.5.3. Изучение взаимодействия Secl4p - подобного белка с PtdIns(3,4,5)P

2.3.6. Секреция Secl4p - подобного белка и его фрагментов в клетках COS

2.3.7. Колокализация р45 с PtdIns(3,4,5)P3 в клетках COS

3. Экспериментальная часть

4. Выводы

5. Благодарности

6. Список сокращений и обозначений

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые белки обонятельного эпителия млекопитающих. Структурно-функциональные исследования»

Обмен веществ между организмом и окружающей средой - основная функция эпителиальной ткани как пограничного образования. Некоторые из этих тканей, такие как обонятельная выстилка, ткани респираторного эпителия и некоторые другие, непосредственно контактируют с атмосферой и в норме покрыты слизью, которая является первым барьером между ними и окружающим воздухом и, фактически обеспечивает нормальное функционирование всех тканей дыхательной системы и, следовательно, всего организма в целом.

Для поддержания жизнедеятельности организма через слизь осуществляется транспорт важных веществ, например, кислорода - в респираторном эпителии, пахучих стимулов - в обонятельной выстилке. Но одновременно через этот секрет в эпителий поступают вещества, которые могут быть и токсичными для клеток. Действие этих факторов в органах и тканях респираторной системы нейтрализуется путем самоочищения дыхательной поверхности с помощью фагоцитоза, неспецифической бактерицидной защиты органов дыхания радикальными соединениями, генерируемыми активированными фагоцитами, специфической иммунной защитой от инфекционных возбудителей и чужеродных макромолекул. Нарушение работы этих систем является причиной развития многих заболеваний различной этиологии.

Большая физиологическая значимость понимания процессов регулировки адаптационных механизмов защиты организма предопределяет интенсивность исследований самых различных структурно-функциональных аспектов этих систем. В частности, проводятся работы по поиску и характеризации белковых регуляторных компонентов обонятельной слизи, называемых часто (если пользоваться медицинской терминологией) «белками первой линии защиты». Несмотря на достигнутый прогресс в этой области в течение последних лет, связанный, в первую очередь, с полным секвенированием генома человека, многие молекулы, важные для поддержания гомеостаза в органах дыхания, все еще остаются неизвестными, так как выделение белковых компонентов в индивидуальном виде и их идентификация имеют свои специфические трудности. Это обстоятельство сдерживает прогресс в изучении реально существующих защитных механизмов эпителиальных тканей воздухоносных путей, нормальное функционирование которых представляет собой основу естественной невосприимчивости организма к болезням. Вышеизложенное позволяет заключить, что идентификация и структурно-функциональное исследование белков обонятельной выстилки, является актуальной проблемой физико-химической биологии.

Основной целью настоящей работы явился поиск, идентификация и исследование новых белковых компонентов, непосредственно контактирующих с окружающей средой клеток. В дыхательных путях, в зависимости от анатомической структуры, по-разному распределяются субстанции, противодействующие токсичным для клеток веществам. Особое внимание было сосредоточено на характеристике полипептидов, находящихся в слое жидкости, выстилающей эпителий. Первым встречается с воздушным потоком муцин (собирательный термин) - наиболее поверхностно расположенный белок этой жидкости (гель-фаза слизи). Другие белковые компоненты жидкости, обладающие защитными свойствами, расположены в растворимой части слизи (золь-фаза) как бы «под муцином».

Исторически сложилось так, что к началу настоящей работы было известно, что при мягких промывках обонятельного эпителия крысы изотоническим раствором из ткани экстрагируется полипептид, имеющий при электрофоретическом анализе в ПААГ в присутствии БОБ подвижность, соответствующую белку с молекулярной массой ~ 45 кДа (далее в тексте «р45»). Этот полипептид не совпадал по подвижности с описанными ранее белками и на основании его взаимодействия с пкАТ, выработанными против синтетического пептида, соответствующего участку общего для а-субъединиц в-белков (СОАОЕЭОКЗИУКОМК), был охарактеризован как СТР-связывающий, хотя его биологическая роль в клетке не была определена [1]. Повышенный интерес к р45 вызывал тот факт, что он содержится в обонятельном эпителии в значительных количествах и составляет примерно 2% от всех растворимых белков обонятельного эпителия. В 1996 г. была предложена методика очистки р45 [2], при которой было, замечено, что в некоторых фракциях, полученных при первичном разделении экстракта выстилки с помощью ионообменной хроматографии, помимо р45, содержится заметное количество еще одного неисследованного белка со значением молекулярной массы ~ 28 кДа (Новоселов В.И., частное сообщение). Однако, поскольку аминокислотная последовательность и биологическая активность р45 и белка, мигрирующего в ПААГ с кажущейся молекулярной массой ~ 28 кДа («р28») не была известна, идентифицировать эти полипептиды и установить их роль в механизме функционирования эпителиальной ткани млекопитающих не представлялось возможным.

Для достижения поставленной цели на первом этапе исследований была поставлена задача разработки методов выделения р45 и р28 в индивидуальном состоянии, так как учитывалось, что определение аминокислотной последовательности неизвестного полипептида без легко определяемой биохимической характеристики зачастую не приводит к идентификации искомого компонента.

На втором этапе работы планировалось определить первичную структуру этих полипептидов, провести поиск в банках данных гомологичных белков с уже известными функциями и отобрать белки, являющиеся потенциально значимыми для функционирования эпителиальных тканей. Ключевой задачей на этом этапе стало клонирование структурных генов р45 и р28, определение их нуклеотидной последовательности, выведение полной аминокислотной и идентификация участков цепей природных продуктов, имеющих функционально значимые пост-трансляционные модификации.

Целью следующего этапа исследования стало выявление клеточной локализации новых белков и изучение их функциональной роли в механизмах клеточной защиты эпителиальных тканей. Также была поставлена задача разработки методов получения генно-инженерных аналогов новых белков в количествах, достаточных для биомедицинских экспериментов, и изучить особенности их функционирования.

В ходе данной работы был открыт основной антиоксидант респираторных тканей - 1-СуБ-содержащий пероксиредоксин (р28, Ргх VI). В связи с этим была поставлена отдельная задача по разработке условий получения высокоактивных рекомбинантных аналогов Ргх VI человека и сравнения его антиоксидантных свойств с природным белком.

В процессе исследования нами была разработана методика и осуществлено выделение в гомогенном виде двух новых, ранее не описанных белков респираторного эпителия крысы с молекулярными массами 28 и 45 кДа. Впервые установлено, что в слизи обонятельного эпителия в значительных количествах

-2%) присутствует новый тип тиол-специфических пероксидаз (р28) и липид-переносящий белок (р45), БесМр-подобный белок, несущий в своем составе CRAL/TRIO- или Sec14р-подобный домен.

На основании информации о частичной аминокислотной последовательности осуществлено клонирование кДНК этих белков. По определенной нуклеотидной последовательности установлена полная первичная структура этих белков, состоящая из 223 и 400 аминокислотных остатков, соответственно. Установлено, что тиол-специфическая пероксидаза принадлежит к семейству пероксиредоксинов VI (Prx VI) и в ее составе идентифицирован домен, способный защищать белки от разрушения активными формами кислорода подобно полноразмерному ферменту. Изучены особенности химического строения Prx VI и показано, что белок не гликозилирован; отсутствие пост-трансляционной модификации имеет важное значение для проявления ферментом протекторной активности. Впервые показано, что наиболее высокая концентрация этих белков обнаруживается в тканях, имеющих непосредственный контакт с атмосферой, и больше, чем другие, подверженных действию неблагоприятных внешних факторов. На основании полученных данных сделано предположение, что эти белки входят в состав защитных систем эпителиальных тканей и обеспечивают их нормальный контакт с окружающей средой. Впервые идентифицирован в обонятельной выстилке крысы еще один новый белок (YM-1), мигрирующий в ПААГ с кажущейся молекулярной массой около 45 кДа и имеющий подобно р45 значение ИЭТ ~ 5,6. Определена его частичная аминокислотная последовательность и показано, что он принадлежит к семейству хитиназ.

Нами установлено, что ключевой посредник сигнальных путей фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфат является специфическим липидным лигандом р45 тканей респираторной системы. Экспрессией р45 в эукариотических клетках COS-1 доказана колоколизация этих соединений в клетках млекопитающих и выявлено участие р45 в секреторном процессе. Впервые продемонстрирована транспортная активность р45 и возможность переноса фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфата во внеклеточную среду.

Полученные нами результаты имеют не только научное, но и практическое значение. На основе р28 (Prx VI) для тканей, контактирующих с внешней средой, предложен принципиально новый специализированный препарат антиоксидантного действия, направленный, в первую очередь, на восстановление редокс-баланса тканей органов дыхания. В модельных экспериментах на животных показана высокая эффективность действия этого белка на восстановление эпителиальных тканей верхних дыхательных путей. В связи с потенциальной практической важностью Ргх VI на его использование оформлена международная заявка. Структурный и предварительный ферментативный анализ полученных в результате этой работы генно-инженерных препаратов Ргх VI человека позволяет предположить, что полноразмерный и укороченный варианты рекомбинантного белка, синтезированные в прокариотической системе, могут являться эффективными лекарственными средствами при медикаментозной коррекции ряда заболеваний, связанных с нарушением функционирования защитных систем эпителиальных тканей.

В ходе определения липид-связываюицей специфичности р45 разработан простой и не требующий использования радиоактивных липидов метод изучения липид-белковых взаимодействий. Метод позволяет исследовать транспортную активность белков по отношению к липидному лиганду и в случае, когда тип липидного лиганда не известен.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Шуваева, Татьяна Маратовна

выводы

Л. Идентифицирован и выделен в гомогенном состоянии из обонятельной выстилки крысы новый секреторный белок, выявляющийся при электрофоретическом анализе в виде мономера с кажущейся молекулярной массой ~ 28 кДа (р28) и обладающий протекторным действием в металл-окислительных системах.

2. Установлена нуклеотидная последовательность кДНК р28. Кодирующая область кДНК содержит 672 п.о. и соответствует белку с вычисленной массой 24680 Да. Реконструирована полная аминокислотная последовательность р28, включающая в себя 223 остатка.

3. Сравнение первичной структуры р28 с последовательностями других белков показало, что он содержит участок, подобный последовательности Р39хОРТРУСхТЕ49, включает в себя единственный остаток СуБ (Сув46) и принадлежит к подсемейству 1-Суэ-содержащих тиол-специфических антиоксидантов или пероксиредоксинов VI. На основании этого сделано предположение, что основной функцией р28 является защита клеток эпителия от повреждений, вызываемых действием активных форм кислорода.

4. Показано, что, несмотря на имеющийся в составе Ргх VI участок АбпТЬгТИг, белок не гликозилирован; отсутствие пост-трансляционной модификации имеет важное значение для проявления ферментом функциональной активности.

5. Разработаны условия получения высокоактивных генно-инженерных аналогов Ргх VI человека и осуществлено сравнение их протекторных свойств с природным белком.

6. Идентифицирован и выделен в гомогенном состоянии из обонятельной выстилки крысы новый секреторный белок, выявляющийся при электрофоретическом анализе в виде мономера с кажущейся молекулярной массой ~ 45 кДа (р45).

7. Установлена полная нуклеотидная последовательность кДНК р45. Кодирующая область кДНК содержит 1200 п.о. Реконструирована полная аминокислотная последовательность р45, включающая в себя 400 остатков.

8. Определена частичная аминокислотная последовательность белка, подобного по физико-химическим свойствам р45 и сопутствующего ему практически на всех стадиях хроматографической очистки. Впервые показано присутствие в обонятельной выстилке млекопитающих хитиназы УМ-1.

9. Выявлена гомология между аминокислотными последовательностями р45 и липид-переносящих белков, несущими в своем составе СИАЦТРЮ- или 8ес14р-подобный домен. Показано, что наибольшая концентрация р45 обнаруживается в эпителиальных тканях, имеющих непрерывный контакт с окружающей средой.

10. В экспериментах с препаратами природного и рекомбинантного р45 с помощью блоттинга на нитроцеллюлозных пластинках и на искусственных липосомах, а также с помощью специально разработанной методики изучения липидного транспорта впервые показано, что специфическим лигандом Бес14р-подобного белка обонятельного эпителия млекопитающих является фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфат.

11. Осуществлена экспрессия Зес14р-подобного белка в эукариотических клетках СОБ-1. Анализом трансфецированных клеток показано, что исследуемый белок действительно является секреторным, и что секреция есть проявление его физиологической функции.

12. Впервые продемонстрировано участие Зес14р-подобного белка во внеклеточном транспорте и присутствие фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфата у высших эукариот во внеклеточной среде. В связи с этим высказано предположение о вовлечении исследуемого белка в транспорт фосфатидилинозитидов и образование защитного слоя слизи на обонятельном эпителии.

БЛАГОДАРНОСТИ

Осуществлению планов и завершению работы над диссертацией во многом способствовали плодотворные дискуссии с членами-корреспондентами РАН Липкиным Валерием Михайловичем и Фесенко Евгением Евгеньевичем, а также профессором Новоселовым Владимиром Ивановичем, за что автор им глубоко признателен.

Автор сердечно благодарит коллег из Института биофизики клетки РАН, совместно с которыми были получены первые экспериментальные результаты, лежавшие в основе данной работы, - Пешенко Игоря Владимировича, Евдокимова Вячеслава Александровича, Николаева Юрия Владимировича и Быстрову Марину Федоровну.

Необходимо отметить большую практическую работу моих молодых коллег из лаборатории белков гормональной регуляции Меркуловой Марии Игоревны, Радченко Виталия Владиславовича и Ильницкой Елены Вячеславовны, а также помощь высококвалифицированных специалистов из других лабораторий ИБХ РАН Шамборант Ольги Георгиевны, Стукачевой Елены Анатольевны, Симоновой Татьяны Николаевны, Некрасова Алексея Норбертовича и Мурановой Татьяны Анатольевны, оказавших неоценимую помощь в подготовке и обсуждении некоторых экспериментальных подходов.

Работа выполнялась при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований, Министерства образования и науки Российской Федерации, Национального центра научных исследований Франции (1ЫРА), Международного научного фонда, Американского фонда гражданских исследований (СВОР) и ИНТАС.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ

АФК - активные формы кислорода монАТ - антитело монокпональное пкАТ - антитело поликлональное ПААГ - полиакриламидный гель ТФУ - трифторуксусная кислота BSA - бычий сывороточный альбумин CDK - циклин-зависимая киназа

DME - среда Дульбекко (Dulbecco's modified Eagle's medium)

DTT - дитиотреит

DPPC - дипальмитоилфосфатидилхолин

EDTA - этилендиаминтетрауксусная кислота

FAD - флавинадениндинуклеотид

GTP - гуанозин-5'-трифосфат

GPx - глутатионпероксидаза

GSH - глутатион (восстановленная форма)

GR - глутатионредуктаза tcGST - глутатион-Б-трансфераза (изоформа л)

IPTG - изопропил-р-В-тиогалактопиранозид

LPS - липополисахарид

NADPH - никотинамидадениндинуклеотидфосфат PLA2 - фосфолипаза А2 РТК - фосфотирозинкиназа РТР - фосфотирозинфосфатаза Ptdlns(3,4,5)P3 - фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфат Ptdlns(3)P - фосфатидилинозит-3-монофосфат Ptdlns(4)P - фосфатидилинозит-4-монофосфат Ptdlns(5)P - фосфатидилинозит-5-монофосфат PtdEtNH2 - фосфатидилэтаноламин

Список литературы диссертационного исследования доктор химических наук Шуваева, Татьяна Маратовна, 2008 год

1. Novoselov V.I., Peshenko I.V., Evdokimov V.J., Nikolaev J.V., Matveeva E.A., Fesenko E.E. //Water-soluble GTP-binding protein from rat olfactory epithelium. FEBS Letters, 1994, V. 353, P. 286-288

2. Novoselov V.I., Peshenko I.V., Evdokimov V.J., Nikolaev J.V., Matveeva E.A., Fesenko E.E. //45-kDa GTP-binding protein from rat olfactory epithelium: purification, characterization and localization. Chem. Senses, 1996, V. 21, P. 181-188

3. Зенков H.K., Панкин B.3., Меньшикова Е.Б. //Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. М.:МАИК Наука/Интерпериодика, 2001, 343 С

4. Halliwell В. // Free Radicals in Biochemistry and Medicine. Encyclopedia of Molecular Cell Biology and Molecular Medicine. Ed. R.A. Meyers, Wiley-VCH Verlag, 2004, V.4, P. 633-649

5. Зиновьева B.H., Спасов A.A. //Окисление ДНК при патологиях, сопряженных с окислительным стрессом. Успехи совр. биологии, 2004, Т. 124, С. 144-156

6. Чучалин А.Г. //Система оксиданты-антиоксиданты и пути медикаментозной коррекции. Пульмонология, 2004, Т. 2, С. 111-115

7. Winyard P.G., Moody C.J., Jacob С. //Oxidative activation of antioxidant defence. Trends Biochem. Sci., 2005, V. 30, P. 453-461

8. Chae H.Z., Chung S.J., Rhee S.G. //Thioredoxin-dependent peroxide reductase from yeast. J. Biol. Chem., 1994, V. 269, P. 27760-27678

9. Peshenko I.V., Novoselov V.I., Evdokimov V.A., Nikolaev Yu.V., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M., Fesenko E.E. //Novel 28-kDa secretory protein from rat olfactory epithelium. FEBS Letters, 1996, V. 381, P. 12-14

10. Okado-Matsumoto A., Matsumoto A., Fujii J., Taniguchi N.//Peroxiredoxin IV is secretable protein with heparin-binding properties under reduced conditions. J. Biochem. (Tokyo), 2000, V. 127, P. 493-501

11. Immenschuh S., Baumgart-Vogt E. //Peroxiredoxins, oxidative stress, and cell proliferation. Antioxidants & Redox Signaling, 2005, V. 7, P. 768-777

12. Kim K., Rhee S.G., Stadtman E.R. //Nonenzymatic cleavage of proteins by reactive oxygen species generated by dithiothreitol and iron. J. Biol. Chem., 1985, V. 260, P. 15394-15397

13. Brunori M., Rotilio G. //Biochemistry of oxygen radical species. Methods Enzymol., 1984, V. 105, P. 22-35

14. Kim K., Kim I.H., Lee K-Y., Rhee S.G., Stadtman E.R. //The isolation and purification of a specific "protector" protein which inhibits enzyme inactivation by a thiol/Fe(III)02 mixed-function oxidation system. J. Biol. Chem., 1988, V. 263, P. 4704-4711

15. Kim I.H., Kim K., Rhee S.G.//Induction of an antioxidant protein of Saccharomyces cerevisiae by 02, Fe3+, or 2-mercaptoethanol. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, V. 86, P. 6018-6022

16. Jacobson F.S., Morgan R. W., Christman M.F., Ames B.N. //An alkyl hydroperoxide reductase from Salmonella typhimurium involved in the defense of DNA against oxidative damage. Purification and properties. J. Biol. Chem., 1989, V. 264, P. 1488-1496

17. Chae K.Z., Kim 1.1!., Kim K., Rhee S.G. //'Cloning, sequencing, and mutation of thiol-specific antioxidant gene of Saccharomyces cerevisiae. J. Biol. Chem., 1993, V. 268, P. 16815-16821

18. Lim Y.S., Cha M.K., Kim H.K., Kim I.H. //The thiol-specific antioxidant protein from human brain: gene cloning and analysis of conserved cystein regions. Gene, 1994, V. 140, P. 279-284

19. Torian B.E., Flores B.M., Stroener Y.L., Hagen F.S., Stamm W.E. //cDNA sequence analysis of a 29-kDa cysteine-rich surface antigen of pathogenic Entamoeba histolytica. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, V. 87, P. 6358-6362

20. O'Toole P.W., Logan S.M., Kostrzynska M„ Wadstrom T., Trust T.J. //Isolation and biochemical and molecular analyses of a species-specific protein antigen from the gastric pathogen Helicobacter pylori. J. Bacteriol., 1991, Y.173, P.505-513

21. Yamaguchi R., Matsuo K., Yamazaki A., Takahashi M., Fukasawa Y., Wada M., Abe C. //Cloning and Expression of the gene for the Avi-3 antigen of Mycobacterium avium and mapping of its epitopes. Infection and Immunity, 1992, V. 60, P. 1210-1216

22. Prosperi M-T., Ferbus D., Karczinski I., Goubin G. //A human cDNA corresponding to a gene overexpressed during cell proliferation encodes a product sharing homology with amoebic and bacterial proteins. J. Biol. Chem., 1993, V. 268, P. 11050-11056

23. Shau H., Gupta R.K., Golub S.H. //Identification of a natural killer enhancing factor (NKEF) from human erythroid cells. Cell. Immunol., 1993, Y. 147, P. 1-11

24. Yamamoto T., Matsui Y., Natori S., Obinata M. //Cloning of a houskeeping-type gene (MER5) preferentially expressed in murine erythroleukemia cells. Gene, 1989, V. 80, P.337-343

25. Ishii T., Yamada M„ Sato H., Matsue M., Taketani S., Nakayama K., Sugita Y., Bannai S. //Cloning and characterization of a 23-kDa stress-induced mouse peritoneal macrophage protein. J. Biol. Chem., 1993, V.268, P. 18633-18636

26. Kawai S., Takeshita S., Okazaki M., Kikuno R., Kudo A., Amann E. //Cloning and characterization of OSF-3, a new member of the MER5 family, expressed in mouse osteoblastic cells. J. Biochem. (Tokyo), 1994, V. 115, P. 641-643

27. Watabe S., Kohno H., Kouyama H., Hiroi T., Yago N., Nakazawa T. //Purification and characterization of a substrate protein for mitochondrial ATP-dependent protease in bovine adrenal cortex. J. Biochem. (Tokyo), 1994, Y. 115, P. 648-654

28. Iwahara S., Satoh. H., Song D-X., Webb J., Burlingame A.L., Nagae Y„ Muller-Eberhard U. //Purification, characterization, and cloning of a heme-binding protein (23 kDa) in rat liver cytosol. Biochemistry, 1995, V.34, P. 13398-13406