Новые бактериоцины лактококков и их практическое использование тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор биологических наук Стоянова, Лидия Григорьевна

• Стоянова, Лидия Григорьевна
• доктор биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации доктор биологических наук Стоянова, Лидия Григорьевна

Введение стр.

I. Обзор литературы стр.

1.1 Общая характеристика лактококков Lactococcus lactis Lactococcus lactis и их распространенность. стр.

1.1.1. Морфология и культуральные свойства стр.

1.1.2. Физиолого-биохимические особенности лактококков стр.

1.2. Бактериоцины лактококков Lactococcus lactis стр.

1.2.1. Свойства бактериоцинов стр.

1.2.2. Классификация бактериоцинов стр.

1.2.3. Формирование биологически активных молекул стр.

1.2.4. Механизм действия бактериоцинов стр.

1.2.5. Система иммунности продуцентов к бактериоцинам стр.

1.2.6. Методы выделения и определения бактериоцинов стр.

1.2.7. Условия образования бактериоцинов стр.

1.3. Селекция бактериоцинобразующих лактококков Lactococcus lactis subsp lactis стр.

1.3.1. Выделение бактериоцинобразующих лактококков Lactococcus lactis subsp lactis из природных источников стр.

1.3.1.2. Дифференцирующие среды для выделения Lactococcus lactis subsp lactis стр.

1.3.1.3. Идентификация бактериоцинобразующих лактококков стр.

1.3.2. Слияние протопластов как метод селекции молочнокислых бактерий стр.

1.3.2.1. Получение протопластов стр.

1.3.2.2. Слияние протопластов стр.

1.3.2.3. Регенерация протопластов стр.

1.3.2.4. Селекция рекомбинантов стр.

1.3.3. Генноинженерные методы стр.

1.3.4. Индуцированный мутагенез Lactococcus. lactis стр.

1.3.4.1. Действие физических мутагенов стр.

1.3.4.2. Химические мутагены стр.

1.4. Хранение молочнокислых бактерй стр.

1.5. Применение молочнокислых бактерий и их бактериоцинов в качестве биологических консервантов стр.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые бактериоцины лактококков и их практическое использование»

Молочнокислые бактерии известны с глубокой древности, разнообразны области их применения. Классические работы Луи Пастера открыли первые страницы в изучении этой важной группы микроорганизмов (Гутина, 1988). Развитие микробиологии расширило и усовершенствовало области применения этих микроорганизмов. На основе их использования возникли крупные промышленные производства. Антимикробный эффект этой группы бактерий использовался в той или иной форме людьми в течение столетий, в частности, для продления срока годности пищевых продуктов через процессы ферментации за счет образования молочной кислоты с сопутствующим понижением рН, а также бактериоцинов, обладающих бактерицидным действием на специфические группы микроорганизмов, включая и патогенные формы, развивающиеся в продуктах питания в процессе хранения и выделяющие энтеротоксины, что является причиной желудочно-кишечных заболеваний. Но впервые об этом явлении рассказал миру русский биолог Илья Ильич Мечников, который обобщил разрозненные экспериментальные данные в области изучения явления антагонизма молочнокислых бактерий (Мечников, 1911). Учение Мечникова о преждевременной старости человека в связи с постоянной интоксикацией организма продуктами жизнедеятельности гнилостных бактерий кишечника получило не только широкое признание, но и практическое применение.

Эволюционно бактериоциногения микроорганизмов возникла, по всей вероятности, как приспособление к выживанию в условиях конкуренции - это один из способов занять подходящую экологическую нишу. Молочнокислые бактерии, продуцирующие бактериоцины, являются естественной микробиотой пищевого сырья и комбикормов, они обитают в пищеварительном тракте людей и животных, природных и производственных субстратах. Обычно они не занимают доминирующего положения, над ними всегда превалируют различные сапрофитные микроорганизмы, включая споровые и бесспоровые формы, кокки, грамотрицательные бактерии, дрожжи, плесени, вызывающие порчу продуктов питания при длительном хранении, и которые также могут выделять ингибиторные вещества (Блинкова, 1984; 2006; Riley, Wertz, 2002; Mathara et al., 2004; Жарикова, 2005; Зуев, 2004; Balcazar et al., 2007).

Интерес по использованию бактериоцинов, образуемых лактококками, резко возрос. Одним из главных аспектов этого интереса является возросший спрос потребителей к качеству продуктов питания и их безопасности для здоровья. Широко используемые химические консерванты и антибиотики, увеличивающие срок хранения продуктов питания, вызывают опасения. Наиболее изученным и разрешенным для применения в качестве биологического консерванта (код Е234), является бактериоцин низин, единственный из антибиотиков с 1997 года имеющий «GRAS» (Generally Recognized As Safe) статус, т.е. признанный Европейским парламентом как безопасный (European Parliament and Council, 1997). Являясь низкомолекулярным белком, низин легко переваривается с пищей, не токсичен (Ross et al., 1999; Блинкова, 2003; Nete et al., 2006). Описаны несколько форм низинов (А, В, С, D, Е, Z, R, Q) и родственных им лактицинов, отличающихся между собой по ряду физико-химических свойств, аминокислотному составу и спектру антибактериального действия, но продуцентами которых являются разные штаммы одного вида Lactococcus lactis subsp. lactis (Mulders, 1991; Nes et al., 1996; Janes et al., 2001; Lasango et al., 2002; Yildirim et al., 2004; Zendo et al., 2005). Поэтому интерес к получению «естественных антибиотиков», образуемых молочнокислыми бактериями в последние годы возрос. Но активность известных в литературе природных штаммов низкая (от 579 до 1886 МЕ/мл), антимикробный спектр их действия распространяется, в основном, на грамположительные бактерии (Franz et al., 1997; Buyong et al., 1998; Janes, 1999; Lee, Paik, 2001; Zendo et al., 2003; Yildirim et al., 2004; Porgtharaqku, Demirci, 2006). Особый научный интерес представляют молочнокислые стрептококки серологической группы N, которые по систематическому положению недавно выделены из группы микроорганизмов рода Streptococcus, включающего патогенные формы, и под новым названием Lactococcus отнесены к категории «GRAS», куда относятся микроорганизмы, не вызывающие инфекционных заболеваний человека и животных (European Commission, 1996; Хоулт, 1997; Ленгелер и др., 2005).

Синтез бактериоцинов - наследственная особенность организмов, проявляющаяся в том, что каждый штамм способен образовывать один или несколько определенных, строго специфичных для него бактериоциногенных веществ. Синтез бактериоцина можно индуцировать генно-инженерными методами, различными физико-химическими воздействиями: ультрафиолетовыми лучами, мутагенами химической природы, ДНК-тропными веществами, перекисями и другими агентами. Разработка методов селекции продуцентов бактериоцинов началась еще в 60-70-е годы:, но, к сожалению, была преостановлена. Вследствии этого в настоящее время имеются довольно скудные сведения по этому вопросу. Актуальность данного подхода в селекции - сохранение многообразия живых форм на Земле и аккумуляции мутаций, направленных на решение поставленных задач.

Основными приемами селекции являются: • выделение культур из природных источников;

• сравнительная оценка активности продуцентов и выбор наиболее перспективных из них;

• экспериментальное повышение активности культур, включая классические методы мутаненеза и генио-инженерные манипуляции.

Но следует отметить, что использование генетически модифицированных микроорганизмов в пищевой промышленности не допустимо по закону и этическим нормам. В последние годы в генетико-селекционной практике используют индуцированный мутагенз и метод слияния протопластов, как метод гибридизации, позволяющий соединить полные геномы и цитоплазмы родительских штаммов с целью передачи наследственной информации по интересующему признаку, который может возникать спонтанно в природе. В настоящее время учёные многих лабораторий мира изучают пути и способы направленного синтеза бактериоцинов с целью получения биологическим путем различных модификаций уже известных бактериоцинов, но с более ценными свойствами или же получить новые природные сбалансированные бактериоциногенные комплексы, безопасные для использования в качестве биоконсервантов.

Низин является основой промышленного препарата «Nisaplin», который производится Английской фирмой «Aplin & Barrett Ltd», а в последнее время фирмой «Christian Напсеп» (Дания) под торговой маркой «Krisin». Препараты обеих компаний имеют очень схожие характеристики, содержат 2,5% активного компонента, который переводится на антимикробиальную активность как 1000 МЕ/мг (ME - международная единица). Низаплин и Кризин получают путем ферментации селекционного штамма Lactococcus lactis (Breukink, de Kruijff, 1999). Однако низин эффективен только против грамположительных бактерий, к тому же эффективность действия низина снижена из-за его плохой растворимости при рН выше 5,8. а также его способности гидролизоваться протеолитическими ферментами, присутствующими в пищевом сырье (Chung et al, 1989; Cutter, Siragusa, 1994; Nete et al., 2006).

Завышенное потребление теплоэнергоресурсов и потери продукции до 30% при транспортировке, переработке и хранении пищевого сырья являются актуальными проблемами Агропромышленного комплекса (АПК) нашей страны. Экономический эффект от использования бактериоцинов в консервной промышленности велик и обусловлен сокращением продолжительности стерилизации продуктов и увеличением сроков их реализации: на 15-25 % снижаются теплоэнергозатраты, сохраняются биологическая и пищевая ценность продукта питания, продлеваются сроки хранения (Кудряшов и др., 1995). Создание технологии производства отечественного препарата биоконсерванта позволит полностью отказаться от закупки импортных препаратов и обеспечит более низкую цену за счет использования высокопродуктивного продуцента, оптимизации условий ферментации, а использование в качестве питательных сред вторичного сырья АПК служит одним из звеньв решения экологической проблемы.

Цель исследований состояла в получении новых высокоэффективных бактериоцинов, образуемых лактококками рода Lactococcus для практического использования в качестве биологических консервантов.

Для выполнения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

• скрининг природных бактериоцинобразующих штаммов лактококков из естественной среды обитания лактококков: коровьего и кобыльего молока, кисломолочных продуктов лечебно-профилактического назначения разных территориальных зон, идентификация перспективных штаммов;

• получение активных продуцентов бактериоцинов с использованием методов клеточной инженерии (протопластирования, слияния протопластов) и индуцированного мутагенеза;

• на основе перспективных бактериоцинобразующих штаммов оптимизировать синтез бактериоцинов;

• разработать методы выделения, очистки и идентификации новых бактериоцинов;

• показать возможность практического использования бактериоцинобразующих лактококков и их бактериоцинов в качестве биологических консервантов.

Научная новизна работы

Впервые проведен скрининг бактериоцинобразующих штаммов мезофильных лактококков из лечебно-профилактических национальных продуктов смешанного молочнокислого и спиртового брожений курунги (Бурятия), Doogh (Иран), также из коровьего и кобыльего молока разных территориальных зон. Выделены новые высокоактивные бактериоцинобразующие природные штаммы: из свежего коровьего молока Московской области — штамм 119х с низинсинтезирующей активностью 3700 МЕ/мл (а.с. № I55I744), из Бурятии - штамм 194 с активностью 3600 МЕ/мл широкого спектра бактерицидного и фунгицидного действия, что является неизвестным свойством для лактококков этого вида. Выделенные штаммы идентифицированы как Lactococcus lactis subsp. lactis. Разработана новая методика получения протопластов у бактериоцинобразующих лактококков, подобраны стабилизирующие буферные системы для регенерации и слияния протопластов, изучено влияние протопластирования на физиолого-биохимические свойства лактококков, в том числе и на синтез бактериоцинов. Установлено, что протопластирование и слияние протопластов могут служить методами селекции активных форм. Получены продуценты, в 10-14 раз превышающие активность родительских штаммов (а.с. № 1687616, серебряная медаль ВДНХ).

Оптимизирован синтез бактериоцинов компонентным составом среды за счет снижения содержания фосфата, замены углеводного компонента, внесения аминокислот и рН-статирования.

Подобрана защитная среда для получения бактериального концентрата, сублимационной сушки (а.с. № 1156614, бронзовая медаль ВДНХ)).

Разработан способ хранения яичного белка (№ 542501, серебряная медаль ВДНХ). Разработана схема выделения и очистки новых бактериоцинов, синтезируемых перспективными штаммами L. lactis subsp. lactis разного происхождения. Получены и изучены их индивидуальные компоненты в хроматографически чистом виде. Установлено, что бактериоцины, синтезируемые гибридным штаммом F-116 и оригинальным природным штаммом 194, не имеют аналогов в компьютерной базе данных природных биологически-активных веществ BNPD ("Bioactive Natural Product Database", Berdy, Hungary). Получено положительное решение на патент (заявка № 2007148649/13 (053309) от 28.12.2007. Практическая значимость работы

Новые природные, а также полученные методами клеточной инженерии, индуцированного мутагенеза бактериоцинобразующие штаммы L.lactis. subsp. lactis пополнили коллекцию -активных продуцентов низина и нового бактериоцина, обладающего уникальным для бактерий этого вида фунгицидным действием. Нуклеотидные последовательности генов 16S рРНК этих бактериоцинобразующих штаммов депонированы в базу данных GenBank. Использование в качестве ферментационных субстратов для получения бактериоцинов отходов ряда биотехнологических производств представляет реальную возможность решения проблемы защиты окружающей среды при одновременном удешевлении технологического процесса.

Разработана технология получения низина, синтезируемого новым штаммом L.lactis. subsp. lactis, полученным воздействием УФЛ (ТУ 10-0334585-25-93).

Изучены условия диссоциации продуцентов, что облегчает отбор активных вариантов при их использовании в производстве бактериоцинов.

Разработаны лабораторные регламенты на синтез бактериоцинов гибридным штаммом F-116 и природным штаммом L.lactis subsp. lactis 194. Показана возможность применения этих штаммов и нетоксичного препарата ЛГС, синтезируемого гибридным штаммом L.lactis subsp. lactis F-116, в качестве биологических консервантов (Акты опытно-промышленных испытаний от 16.06. 2006г. и 19.09.2007г.).

Ожидаемый годовой экономический эффект от внедрения штамма 194 в технологический процесс производства колбас в сравнении с препаратом «Дельвоцид» для Мясокомбината производительностью 100 т в год составит 30,07 млн. руб.

Результаты исследований вошли в учебники для студентов вузов, подготовленные в соавторстве с сотрудниками кафедры микробиологии биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова. Разработаны курсы лекций и практических занятий для подготовки специалистов в Биотехнологическом центре МГУ.

Работа с 1985 года была поддержана постановлениями Совмина СССР, ГКНТ и Правительства Москвы, Международной Правительственной программой между СССР и Индией, межвузовской программой «Биотехнология в российских вузах», грантами РФФИ 98-04-49822 и 01-04-48661 "Управление процессами биосинтеза биологически активных веществ микроорганизмами", ФЦАТП N 60123.01.02 по фундаментальным и поисковым исследованиям и разработкам Минпромнауки России "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники на 2002-2004 годы"; блок 2 "Проектно-прикладные исследования". Положения, выносимые на защиту:

Выделение и идентификация новых бактериоцинобразующих штаммов Lactococcus lactis из молока и кисломолочных продуктов лечебно-профилактического назначения разных территориальных зон.

Селекция активных бактериоцинобразующих штаммов с помощью метода клеточной инженерии (слияния протопластов) и индуцированного мутагенеза.

Оптимизация синтеза бактериоцинов компонентным составом ферментационной среды и стабилизацией рН в процессе ферментации. Использование в качестве ферментационных субстратов для получения низина отходов ряда биохимических производств.

Разработка способа выделения эффективных бактериоцинов из культуральной жидкости, их идентификация.

Практическое использование перспективных бактериоцинобразующих штаммов L.lactis subsp. lactis и их бактериоцинов в качестве биологических консервантов.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Стоянова, Лидия Григорьевна

324 ВЫВОДЫ

1. Из коровьего и кобыльего молока, из лечебно-профилактических национальных продуктов смешанного молочнокислого и спиртового брожений курунги и Doogh разных территориальных зон выделены и отобраны наиболее перспективные бактериоцинобразующие природные штаммы мезофильных лактококков: штамм 119х с низинсинтезирующей активностью 3700 МЕ/мл (а.с № I55I744) и штамм 194 с активностью 3600 МЕ/мл, синтезирующий антибиотический комплекс широкого антимикробного действия, что является неизвестным свойством для этих лактококков. Штаммы идентифицированы как Lactococcus lactis subsp. lactis.

2. С использованием метода клеточной инженерии и индуцированного мутагенеза получены новые эффективные бактериоцинобразующие штаммы L.lactis subsp. lactis. Установлено, что протопластирование, реверсия протопластов к клеточной форме и слияние протопластов могут служить методами получения активных форм. Получены гибридные штаммы, в 10^- 14 раз превышающие активность родительских штаммов (а.с. № 1687616, серебряная медаль ВДНХ). Новые штаммы обладали ускоренным синтезом бактериоцина при изменении спектра потребляемых углеводов и чуствительности к разным группам антибиотиков.

3. Оптимизирован синтез бактериоцинов новыми штаммами лактококков при изменении состава среды и контроля рН: выход бактериоцинов был увеличен в 1,8 -1,9 раза и составил для природного штамма 194 - 6400 МЕ/мл, а для. гибридного штамма F-116 - 8200 МЕ/мл. Показана возможность использования в качестве сред для производства бактериоцинов отходов ряда ферментных производств, что удешевляет их получение и представляет реальную возможность решения проблемы защиты окружающей среды.

4. Разработаны методы выделения новых бактериоцинов, синтезируемых штаммами L. lactis subsp. lactis разного происхождения, проведена их идентификация. Установлено, что антибиотический комплекс, синтезируемый гибридным штаммом F-116, представляет собой смесь биологически активных компонентов, относящихся к различным классам органических соединений: полипептида низина, а также компонентов группы алкилароматических кетонов с широким спектром антибактериального действия. Природный штамм 194 образует комплекс биологически активных компонентов с низинподобным бактериоцином и низкомолекулярным алифатическим соединением, содержащим кетонную группу и обладающим широким спектром антимикробного действия. Антибиотические комплексы являются новыми, ранее не описанными природными соединениями, не имеющими аналогов в компьютерной базе данных природных биологически активных веществ BNPD. Заявка на патент № 2007148649/13 (053309).

5. Лактококки синтезируют новые бактериоцины параллельно росту продуцентов. Бактериоцины термостабильны, устойчивы в интервале рН от 2,0-4,0, чувствительны к специфическим ингибиторам синтеза белка. Быстрое проявление антимикробной активности может свидетельствовать о мембранном механизме их действия.

6. Получен новый нетоксичный препарат - бактериоцин ЛГС широкого спектра антимикробного действия по отношению к патогенным и условно-патогенным бактериям и другим нежелательным микробам, развивающимся в пищевом сырье при хранении, что позволяет рекомендовать его в качестве биологического консерванта. Проведены испытания по использованию бактериоцина для увеличения срока хранения охлажденного пищевого сырья: срок хранения рыбы увеличен с 5 до 15 дней, мяса - до 45 суток (Акт опытно-промышленных испытаний от 19.09.2007 г.).

7. Выделенные новые природные штаммы бактериоцинобразующих лактококков, а также гибридный штамм F-116 и мутантные низинобразующие штаммы 10, 11, 25, 52, полученные в результате индуцированного мутагенеза, являются непатогенными, не обладают токсичностью в отношении лабораторных животных. Показана возможность использования штамма F-116 для обессахаривания яичного белка с целью увеличения срока его хранения, а природного штамма 194, обладающего фунгицидным действием, в качестве консерванта для увеличения срока хранения сырокопченых колбас (Акт испытаний штамма 194 от 16.0б.2006г.), что дает основание рекомендовать эти бактериоцинобразующие лактококки для использования в пищевой промышленности в качестве биоконсервантов

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Цель исследований состояла в получении новых высокоэффективных бактериоцинов, образуемых молочнокислыми бактериями Lactococcus lactis subsp. lactis для практического использования их в качестве биологических консервантов.

Для выполнения поставленной цели была проведена селекция бактериоциногенных штаммов L. lactis. subsp. lactis. Первым этапом селекционной работы было выделение лактококков с заданными свойствами из естественной среды обитания молочнокислых бактерий, какой является коровье и кобылье молоко, кисломолочные продукты лечебно-профилактического назначения из разных территориальных зон; сравнительная оценка антимикробной активности вьщеленных штаммов и выбор наиболее перспективных из них. Преимущество метода естественного отбора, основанного на естественной изменчивости популяций бактерий, заключается в том, что свойства микроорганизмов тестирует сама природа. В популяциях бактерий имеет место спонтанная изменчивость. Иногда уже в естественных условиях обитания встречаются наиболее приспособленные формы лактококков, что и определяет их культуральные, физиолого-биохимические свойства, в том числе бактериоцинпродуцирующую активность. Изменчивость морфологических и культуральных свойств микроорганизмов является причиной больших затруднении при их дифференциации, идентификации от таксономически близких и сходных видов бактерий.

Разработан метод выделения и дифференциации наиболее активных бактериоцинобразующих штаммов L. lactis subsp. lactis из числа близкородственных видов, вьщеленных из свежего коровьего и кобыльего молока, молочных продуктов и национальных кисломолочных продуктов смешанного молочно-кислого и спиртового брожений, обладающих лечебно-профилактичеким действием из разных территориальных зон. В результате нами были выделены активные бактериоцинобразующие штаммы мезофильных лактококков, отличающиеся от ранее известных по совокупности физиолого-биохимических свойств и уровню бактериоцинпродуцирующей активности, превышающий уровень активности прежде вьщеленных из природных источников штаммов лактококков. После определения нуклеотидных последовательностей генов 16S рРНК были идентифицированы ряд новых перспективных штаммов, которые депонированы в базу данных GenBank как Lactococcus lactis subsp. lactis.

Из коровьего молока, полученного из Бурятии, выделен оригинальный штамм лактококка 194 с высокой антибиотической активностью (3600 МЕ/мл), синтезирующий бактерициноподобный комплекс антибактериального и фунгицидного действия, что является неизвестным свойством для вида L. lactis. subsp. lactis, выделяемых из молока северных широт, но которое свойственно лактококкам, выделенным из мест с жарким и влажным климатом.

Полученные экспериментальные данные позволяют расширить фундаментальные познания по разнообразию физиолого-биохимических свойств L. lactis subsp. lactis в вопросах адаптации этого вида бактерий к условиям окружающей среды.

Использование метода слияния протопластов показало его перспективность для получения штаммов лактококков с повышенной антимикробной активностью. Нами разработана методика получения протопластов у бактериоцинобразующих лактококков, подобраны стабилизирующие буферные системы для регенерации протопластов, изучено влияние протопластирования на физиолого-биохимические свойства лактококков, в том числе, и на синтез бактериоцинов. Установлено, что протопластирование, ренерация и реверсия протопластов к клеточной форме, может служить методом селекции: низкоактивные штаммы 729 и 1605 увеличили синтез низина в 3 - 4 раза и их антибиотическая активность достигла уровня активных продуцентов.

Проведено слияние протопластов у продуцентов низина, подобраны реагенты для слияния протопластов, среды регенерации и селектируемые компоненты для отбора активных по образованию бактериоцинов гибридов. Выделен новый гибридный штамм L. lactis subsp. lactis F-116, полученный слиянием протопластов двух родственный штаммов с низкой низинсинтезирующей, антибиотическая активность которого составила 4200 МЕ/мл, что в 12-14 раз выше активности родительскиз штаммов (авторское свидетельство № 4729917, серебряная медаль ВДНХ)

Установлена возможность получения стабильных мутантов с активностью до 70%, превышающую активность исходного природного низинсинтезирующего штамма 119, выделенного из молока, в результате индуцированного мутагенеза, включающего действие ультрафиолетовых лучей, химических мутагенов и комбинированного действия мутагенов в сочетании с процессом протопластирования. Полученные штаммы ускоряли ферментационный процесс синтеза низина, изменяли спектр сбраживаемых углеводов и устойчивость к антибиотикам, ингибирующих синтез клеточной стенки и синтез белка бактерий. У этих штаммов выявлена резистентность штаммов к сизомицину, канамицину, рифампицину и неомицину. Разработана нормативно-техническая документация на опытную партию объемом 5 усл.тонн - Технические условия ТУ 10-0334585-25-92 «Препарат антибиотика низина»

В результате изучения условий биосинтеза бактериоцинов, продуцируемых перспективными штаммами лактококков (гибридным штаммом L. lactis subsp. lactis F-116 и природным 194), оптимизирован ферментационный процесс синтеза антибиотиков рН статированием, изменением содержания в базовой среде неорганического фосфата (КН2РО4), дрожжевого автолизата (как источника аминного азота), а также изменения состава углеводов и аминокислот. Показано, что при уменьшении содержания КН2РО4 от 2,0% до 0,5 % в базовой среде, содержащей (в %): глюкозу - 1,0; NaCl - 0,2; MgSC>4 -0,02 и дрожжевой автолизат 35мг% по аминному азоту антибиотическая активность лактококков штамма F-116 снижалась от 4100 до 1150 МЕ/мл (соответственно). Увеличение концентрации дрожжевого автолизата до 70 мг% по аминному азоту в среде с 1,0% КН2РО4 (это количество соответствует содержанию фосфора в натуральном молоке) стимулировало рост лактококка и синтез бактериоцина. При замене в среде глюкозы на сахарозу происходило увеличение антибиотической активности на 24,3 %. При добавлении к ферментационной среде изолейцина на 22,6 %. Внесение в ферментационную среду с 1% КН2РО4 дрожжевого автолизата, 2 % сахарозы и 0,01 % изолейцина способствовало повышению уровня бактериоцинпродуцирующей активности штамма!,, lactis subsp. lactis F-116 в 1,9 раза. Внесение аспарагиновой кислоты в среду культивирования природного штамма 194 способствовало повышению его антибиотической активности на 16,6%%, что указывает на индивидуальные особенности новых штаммов в отношении биосинтеза бактериоцинподобных веществ.

Оптимальной для штамма 194 является среда, содержащая (%): КН2РО4— 0,5; MgS04 — 0,02; NaCl- 0,2; сахароза— 2,0; дрожжевой автолизат с 35-40 мг% аминного азота, 0,01% аспарагиновой кислоты, которая способствует накоплению 4450 МЕ/мл бактериоцина при уменьшении содержания фосфатов в среде культивирования в 4 раза. рН-статирование ферментационного процесса синтеза бактериоцинов перспектиными штаммами лактококков F-116 и 194 способствовало повышению уровня бактериоцинов до 8200 -6400 МЕ/мл соответственно. Сравнивая исследованные физиолого-биохимические свойства выделенных природных культур и полученных в результате селекционной работы (индуцированного мутагенеза, протопластирования, слияния протопластов) со свойствами типовых штаммов, описанных в литературе (Ленгелер, 2005; Nomura etal., 2006; Степаненко, 2006; Kowalczyk, Bardowsky, 2007), можно сделать вывод об особенностях некоторых новых штаммов, о наличии у них свойств, которые у типовых представителей этого вида лактококков в большинстве случаев отсутствуют. Такими особенностями являются усвоение источников углерода, потребность в факторах роста, спектр антимикробной активности. Рост исследуемых культур при неблагоприятных условиях, потребность в отдельных аминокислотах, чувствительность к разным группам антибиотиков и усвоение источников углерода, не утилизируемых типовыми штаммами (спиртов, раффинозы), свидельствует об интенсивности обмена веществ у новых штаммов.

Показано, что для стабильности производственных физиолого-биохимических свойств продуцентов бактериоцинов наиболее эффективным способом их длительного хранения является лиофилизация с использованием сложной защитной среды с глютаматом калия, желатиной и сахарозой, а результаты по изучению диссоциативных переходов бактериоцинобразующих штаммов позволяют проводить поддерживающую селекцию продуцентов в производственных условиях.

Применение в качестве ферментационных субстратов отходов ферментных производств для получения бактериоцинов представляет реальную возможность решения проблемы загрязнения окружающей среды и удешевляет производство антибиотиков.

Нами разработаны методы выделения и очистки новых низиноподобных веществ, не описанные в литературе. Проведено сравнительное изучение бактериоцинов, образуемых разными штаммами L. lactis subsp. lactis. На сновании полученных данных проведена идентификация бактериоцинов, образованных разными штаммами. Получены и изучены индивидуальные компоненты ингибиторных комплексов в хроматографически чистом виде. Из активного штамма L. lactis subsp. lactis 194 был выделен комплекс, представляющий собой смесь двух биологически активных компонентов. Основной фракцией этого комплекса является водо-растворимая фракция В с молекулярной массой 1995 Да, близкая по Rf и биологическому действию к низину. Фракция А - это низкомолекулярное гидрофильное соединение, обладающая широким спектром антимикробного действия и представляет собою новое не описанное в литературе природное соединение с молекулярной массой с 607,5 Да. Анализ свойств бактериоцинподобиого комплекса ЛГС, продуцируемых гибридным штаммом L. lactis subsp. lactis F-116 и состоящего из четырех фракций (ЛГС-Н, ЛГС- Н1, ЛГС-С и ЛГС-В), с помощью компьютерной базы данных BNPD (J. Berdy ) позволяют сделать следующие выводы:

1. Компоненты ЛГС-Н и ЛГС-Н1 являются низинами, причем ЛГС-Н идентичен низину А, основного компонента коммерческого препарата "Nisaplin".

2. Компоненты ЛГС-В и ЛГС-С в литературе не описаны и, по нашим данным, являются новыми природными биологически активными веществами. На основании полученных физико-химических исследований компонент ЛГС-В отнесен к группе алкилароматических кетонов, содержащих также гидроксильные группы, является низкомолекулярным гидрофобным соединением (М= 506 Да) и обладает широким спектром антимикробного и фунгицидного действия. Фракция ЛГС-С является минорной, обладает незначительной биологической активностью.

Для выяснения природы синтезируемых бактериоцинов были проведены исследования по влиянию ингибитора синтеза белка левомицетина (хлоромфеникола) на синтез бактериоцинов перспективными лактококками. Результаты показали, что при добавлении левомицетина к среде для культивирования лактококков синтез белка снизился до 50% от контроля, а образование бактериацинов уменьшилось на 80 - 88,5%. Эти данные дают основание считать, что биосинтез изучаемых антибиотиков происходит с участием рибосом, и синтезируемые бактериоцины по своей природе являются низкомолекулярными белками.

Установлено, что начало синтеза бактериоцинов идет во время экспоненциальной стадии роста бактерий, максимальная продукция антибиотиков происходит в началу стационарной фазы роста лактококков. Новые бактериоцины термостабильны, сохраняют стабильность при кипячение в течение 45 мин, стабильны в интервале рН от 2,0-3,9.

Согласно мнению ряда ученых (АЬее, 1994; Gonzalez, 1996; Vadyvaloo, 2004), быстрое проявление антимикробного эффекта бактериоцинов может свидетельствовать о мембранной направленности механизма их действия. Ингибирующие вещества изучаемых штаммов обладают характерной для большинства известных бактериоцинов скоростью антимикробного действия. По этим свойствам и спектру антибиотической активности эти соединения соответствуют принятому в настоящее время определению бактериоцинов, к которым относят термостабильные пептидно - белковые соединения.

Полученные результаты исследований позволяют предположить, что синтезируемые новыми штаммами L. lactis subsp. lactis соединения, обладающие антимикробным и фунгицидным действием, являются новыми уникальными бактериоцинами, ранее не описанными в литературе и не зарегистрированными в банке данных биологически активных веществ BNPD (J. Berdy).

Разработан лабораторный регламент на синтез бактериоцина ЛГС гибридным штаммом лактококка F-116, рекомендуемого к использованию в пищевой промышленности. Получен новый препарат — бактериоцин ЛГС широкого спектра антимикробного действия с активностью, превышающей активность известного препарата "Nisaplin", изучены его физико-химические свойства, определена безвредность препарата на лабораторных животных (белых мышах и морских свинках), инфузориях в соответствии с методическими указаниями (Игнатьев, Шаблий,1978; МУК 4.1/4/2.588-96).

Установлена антибиотическая активность препарата по отношению к патогенным, условно-патогенным бактериям Staphylococcus aureus, Е. coli, а также штаммам рода Enterococcus, Proteus vulgaris, Salmonella, развивающихся в пищевом сырье при хранении. Все это позволяет рекомендовать полученный препарат в качестве биологического консерванта Проведены опытно-промышленные испытания по его использованию для увеличения срока хранения пищевого сырья: срок хранения мяса, обработанного препаратом ЛГС увеличен с 16 до 45 суток, а рыбы в охлажденном состоянии до 15 дней (Акт от 16.06.2007).

Выполненные токсикологические исследования на экспериментальных животных показали отсутствие токсичности у новых вьщеленных штаммов: низинобразующего штамма 119х, гибридного штамма F-116, штаммов № 10, 25, полученных индуцированным мутагенезом (Акты и справки о патогенности (Приложения 4 - 9).

Показана возможность использования штамма F-116 для обессахаривания яичного белка как предварительного этапа перед его высушванием в целях увеличения срока хранения сухого продукта, а штамма 194, обладающего фунгицидным действием, в качестве консерванта для увеличения срока хранения сырокопченных колбас (см. Акт испытаний штамма 194 от 16.06.2006).

Составлена коллекция активных бактериоцинобразующих лактококков, подобраны условия их хранения, что соответствует задачам таких програмных документов, как конвенция «Сохранение биоразнообразия» и «Микробное разнообразие -XXI», проект ФЦНТП N 60123.01.02. «Технологические процессы хранения и транспортировки сельскохозяйственного сырья и пищевой продукции, обеспечивающие сохранность пищевой и биологической ценности продукции, снижение энергозатрат и потерь массы."

Штаммы депонированы под следующими номерами: bankit858176 L.lactis subsp. lactis F-116 - EF100777, bankit 858460 штамм F-119 - EF100778, bankit858962 729 - EF102814, bankit 858978 1605 - EF102815, bankit 859706 119x - EF114305, bankit 854703 119 -efh4306, штамм мгу - DQ 255952, штамм 115, штамм мгу, 229, 194 под номерами DQ255951 —DQ255954 (соответственно), 119 - ef 100778, К-205-ef 114306

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Стоянова, Лидия Григорьевна, 2008 год

1. Абрамов Н.И., Мурашова А.О., 1994. Патент №2011352, Россия МКИ А23с 9/12: Способ получения кефира // Опубл. 30.04. 1994. Бюл. №8.

2. Авгиева П.Б., Винаров А.Ю., 1993. Получение мутантов дрожжей Sacharomyces cerevisiae -продуцентов лимонной кислоты // Микробиология. Т.62. В. 2. С.15-17.

3. Агафонычев В.П., Каренин А.И., 2006. Улучшение функциональных свойств яичных продуктов путем ферментации // Новые мировые тенденции в производстве продуктов из мяса птицы и яиц. 17-18 октября. Ржавки. Московская обл. С.125-127.

4. Алиханян С.И. Селекция промышленным микроорганизмов. Наука. 1986.

5. Антипова JI.B., Глотова И.А., Рогов И.А. 2004. Методы исследования мяса и мясных продуктов. М. Колос. 571с.

6. Баран А.А., Тесленко А.Я., 1990. Флокуляпты в биотехнологии. JI. С.8-54.

7. Бартошевич Э.Ю., 1966. Сравнительное изучение генетической активности N-нитрозозтилмочевины с физическими и химическими мутагенами // «Супермутагены» под ред. И.А. Рапопорта. Изд. Наука. С.23-33.

8. Бавина Н.А., Королева Н.С, Хараш В.М., 1993. Патент №2001580, Россия МКИ А23 С.9/12. Способ получения препарата молочнокислых культур. Опубл. 30.10.1993. Бюл. №39-40:

9. П.Баранова И.П., Егоров Н.С., Ходжаев М.Н., 1989. Применение метода лиофилизации для хранения низинобразующих штаммов культуры Streptococcus lactis штамм 4968 // Научные доклады высшей школы. Биологические науки. № 2. С.497-499.

10. Баранова И.П., Клюева JI.M., Егоров Н.С., Исакова Н.С., Ходжаев М.Н., Бартошевич Ю.Э., 1992. Выделение низина из нативного раствора и его очистка на катионитах // Антибиотики и химиотерапия. Т. 37. №З.С.

11. Баранова И.П., Заславская П.Л., Егоров Н.С., 1995. Некоторые данные о культурально-морфологических особенностях форм диссоциации низинобразующего стрептококка // Антибиотики и химиотерапия. Т.40. №.4. С.3-7.

12. Баснакьян И. А., 1992. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами. М. Изд. Медицина. 188с.

13. Безбородов А. М., 1991. Биотехнология продуктов микробного синтеза. М. Изд. ВО "Агропромиздат". С.214-218.

14. Белясова Н.А., Чаевская Т.В., Кандыбович И.И., Гриц Н.В., 2002. Получение и реверсия протопластов у некоторых штаммов бактерий рода Lactococcus II Весщ НАЛ Беларусь Серыя б1ялапчных навук. №1. С.68—72.

15. Белясова Н.А., Чаевская Т.В., Караева О.А., Гриц Н.В., 2002. Разработка метода слияния протопластов и селекция гибридных бактерий у лактококков // Весщ НАН Беларусь Серыя бшлапчных навук. №2. С.84—87.

16. Блинкова Л.П., Машенцева Н.Г., Хорольский В.В., Горобец О.Б., Дорофеева Е.С., 2006. Биотехнологические условия синтеза бактериоцинов // Журн. микробиологии, эпидимиологии и иммунологии. №.2. С.83-89.

17. Бондаренко В.М., Чупринина Р.П., Аладышева Ж.И. и др., 2004. Пробиотики и механизмы их лечебного действия // Эксперим. клин, гастроэнтерол. №3. С. 83-87.

18. Вахитов Т.Я., Петров Л.Н., Бондаренко В.М., 2005. Концепция пробиотического препарата, содержащего оригинальные микробные метаболиты // Журн. микробиол. №5. С. 108-114.

19. Воейков В. Л., Решетов П. Д., Набиев И. Р., 1992. Физико-химичкские методы исследования биополимеров и низкомолекулярных биорегуляторов. М. Изд. Наука. С.63-125.

20. Воробьева Л.И., Абилев С.К., 2002. Антимутагенные свойства бактерий.// Прикладная биохимия и микробиология. Т. 38. С. 115-127

21. Генич Г., 1987. Современные бактериальные закваски для ферментированных молочных продуктов. Киев. С. 110-113.

22. Гейс А., Ринг Е., Тойбер М. 1982. Бактериоцины молочнокислых бактерий. XXI Международный молочный конгресс. Краткие сообщения. М., Т.1. кн.2. С.222-223.

23. Герхард Ф., 1984. Методы общей бактериологии. М. Мир. Т. 1.

24. Гилмар Б., Теплы М., Топорка А., 1978. Получение мутантов с повышенной низинообразовательной способностью с помощью радиоактивного облучения // XIX Международный конгресс по молочному делу.М.

25. Гладкова Е.Е., 1994. Снижение микробной загрязненности в кобыльем молоке при помощи ультрафиолетового облучения // Проблемы племенной работы и экологически чистых технологий в коневодстве. Дивово. С.351-355

26. Гладкова Е.Е., Андрюшин В.В., 1994. Влияние низких температур на микробную загрязненность и основные показатели кобыльего молока // Проблемы племенной работы и экологически чистых технологий в коневодстве. Дивово.С.344-347.

27. Голясная Н.В., Тюрина Н.А., 2000. Возраст культуры клеток Escherihia coli и частота мутаций, индуцированных М-метил-ЬТнитро-М-нитрозогуанидином // Микробиология. Т.69. №6. С.805-809.

28. ГОСТ 9958 81. Изделия колбасные и продукты из мяса. Методы бактериологического анализа. Изд. Стандартинформ. М. 2007.

29. ГОСТ 7636- 85. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа. М. 1988.

30. ГОСТ 16131-86 «Колбасы сырокопченые». Изд. Стандарты. М.1986.

31. ГОСТ 30364.2-96. Продукты яичные. Методы микробиологического контроля. ИПК. Изд. Стандарты. М. 199 6.

32. ГОСТ 10444.15-94. Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов. Межгосударственный совет по стандартизации, метрологии и сертификации. Минск. 1994.

33. ГОСТ Р 51448-99. Мясо и мясопродукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований. ИПК. Изд. стандартов. М.1999.

34. ГОСТ Р. 51921—2002. Продукты пищевые. Методы выявления и определения Listeria monocytogenes. Госстандарт России. М. 2002.

35. ГОСТ 31339- 2006. Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и отбора проб. Изд. Стандартинформ. 2007.

36. Грачева И.М., Грачев Ю.П., 1982. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов. М. Легкая и пищ. пром-ть.240с.

37. Гриневич Н. Г., 1981. Молочнокислые бактерии. Селекция промышленных штаммов. Минск. Изд. Высшая школа. 164с.

38. Громов Б.В., 1985. Строение бактерий. Л. С.23-29.

39. Громыко О., Федоренко В., 2005. Вплив мутагешв на анйбютичну актившсть Streptomyces nogalater iMeT 43360 продуцента протипухлевого антибютика ногамщшу // BicHHK JlbeiB. Унту. CepiH бюлопчна. В.40. С. 16-22.

40. Грушина В. А., 1984. Изучение Streptococcus lactis штамм МГУ в связи с биосинтезом низина. Автореферат кандид. диссертации. МГУ. Москва.

41. Гуслянников В.В., Подлегаев М.А., 1992. Технология птицы и яйцепродуктов. М. С.167-285.

42. Гутина Н.В., 1988. Очерки по истории физиологии микроорганизмов. М. Изд. Наука.

43. Данилова М.В., Кудрявцев В.П., 1970. Влияние температуры замораживания на выживаемость бактерий при лиофилизации // Микробиология. Т 39. В.6. С.1102-1105.

44. Демина Н. С., Лысенко С. В., 1989. Влияние высушивания на содержание нуклеиновых кислот и мутационные изменения у микроорганизмов // Биол. Науки. №5. С. 87 — 95.

45. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А., 2002. Функциональное питание. М. С. 248-251.

46. Дубинин Н.П., 2000. Радиационный и химический мутагенез. М. Изд. Наука. Т.2. С.30-36.

47. Егоров Н. С., Баранова И. П., Козлова Ю. И., 1978. Образование низина иммобилизованными клетками молочнокислых бактерий Streptococcus lactis // Антибиотики. № 10. С.757-761.

48. Егоров Н.С., Грушина В.А., Козлова Ю.И., Баранова И.П., Полин А.Н., 1982. Инактивация низина в культуре продуцента Streptococcus lactis штамм МГУ //Антибиотики. № 10. С.872-874.

49. Егоров Н.С., Баранова И.П., 1999. Бактериоцины. Образование, свойства, применение // Антибиотики и химиотерапия. Т.44, №.6, С.33-40.

50. Егоров Н.С., 2004. Основы учения об антибиотиках. М. Изд. МГУ. С. 167

51. Блинов Н.П., 1989. Химическая микробиология. М. Изд. Высшая школа. С. 448-460.

52. Есииова В.В. С.Л. Кривицкий А.С. 1985. Индуцированный мутагенез плазмидных, а также хромосомных генов, включенных в плазмидную ДНК//Генетика. Т. 21 .№ 8. С.22 -24

53. Есина Е.С., 2005. Влияние глюкозоксидазы на микробиологическую сохранность майонеза // Масла и жиры. № 10. С.13-14

54. Жарикова Г. Г., 2005. Микробиология продовольственных товаров. Санитария и гигиена. М. Изд. АКАДЕМА. С. 182-196.

55. Жубанова А.А., Чижаева А.В., Абдиева Г.Ж., Тулемисова Ж.К., 2001. Изучение механизмов антимикробного действия молочнокислых бактерий, выращенных на различных средах // Вестник КазГУ, серия биологическая. № 1. С.111-117.

56. Заборских Е.И., 1976. Антагонистическая активность молочнокислых стрептококков и их экспериментальная селекция.//Автореф. Канд. Дис. Иркутск.

57. Задояна С.Б., Банникова Л. А., 1982. Изменчивость молочнокислых стрептококков // Молочная промышленность. № 9.С.15-17.

58. Зигангирова Н.А., Токарская Е.А., Народницкий Б.С., Гинцбург A.JL, Тутельян В.А., 2006. Роль молочнокислых бактерий в распространении генов лекарственной устойчивости среди здоровых людей // Журн. Микробиол. № 2. С. 106-109.

59. Зуев B.C., 2004. Сапрофитизм патогенных бактерий // Ветеринарная патология. №.4. С.11-16.

60. Иванов Б.Л., Федорова И.Л., Ковальцова С.В., 1992. Выделение и характеристика новых мутантов дрожжей Sacharomyces cerevisiae с повышенной спонтанной мутабильностью // Генетика. Т. 28. № 5. С.47-52.

61. Иванова Л.А., Войно Л.И., 1985. Методические рекомендации к проведению лабораторных работ по технологии белковых препаратов, аминокислот и липидов. Изд. МТИМП, М.

62. Игнатьев А.Д., Шаблий В.Я., 1978. Использование инфузорий Tetrahimena pyriformis как тест-объекта при биологических исследованиях в сельском хозяйстве. Обзорная информация ВАСХНИЛ. Сер. Животноводство и ветеринария . № 65. 52с.

63. Карликанова С. Н., Кимова Э. Т., Виноградская С. Е., 1983. Антибиотически активные молочнокислые бактерии в производстве продуктов гарантированного качества // М. ЦНИИТЭИмясомолпром. Обзорная информация. Сер. Цельномолочная промышленность.51с.

64. Квасников Е. И., Нестеренко О. А., 1975. Молочнокислые бактерии и их использование. М.: Наука. С.23, 290-359.

65. Квасников Е.И., Коваленко Н.К., Нестеренко О.А.,1982. Молочнокислые бактерии в природе и народном хозяйстве // Прикладная биохимия и микробиология. Т. 18. № 6 С. 821-834.

66. Корнелаева Р.П., Степанепко П.П., Павлова Е.П., 2006. Санитарная микробиология сырья и продуктов животного происхождения. М. ООО «Полиграфсервис». С. 174-338.

67. Костенко Ю.Г., Солодовникова Г.И., Кузнецова Г.А., Самойленко В.А., 1997. Новый бактериальный препарат основа ускоренной технологии производства сырокопченых колбас // Мясная индустрия. № 1. С.9-10.

68. Котельникова Е.А., Гельфанд М.С., 2002. Выработка бактериоцинов грамположительными бактериями и механизмы транскрипционной регуляции // Генетика. Т.38. №6. С.758-772.

69. Королева Н.С, Рожкова И.В., Семенихина В.Ф., 1994. Патент №2011351, Россия МКИ А23с 9/12: Способ получения кефира // Опубл. 30.04. Бюл. №8.

70. Красникова JI. В., Кострова Н. Е., 1989. Роль микрофлоры закваски в повышении качества молочных продуктов // М. ЦНИИТЭИмясомоллром, 36 с.

71. Кретович Ю.В., 1980. Биохимия растений. М. Изд. Высшая школа. 445с.

72. Кудлай Д.Г., Лиходед В.Г., 1966. Бактериоциногения. М. Медицина. С. 9-15. 17-23.

73. Кудряшов В.Л., Сергеева И.Д., Стоянова Л.Г., Задорожная Т.И, Дурицкая Л.И., 1995. Синтез биоконсерванта низина на отходах и вторичном сырье ряда биотехнологических производств // Биотехнология. №12. С.25 28.

74. Кудряшов Л.С., Лисицын А.Б., Полякова А.В., 2002 Биохимические изменения говядины с различным характером автолиза в процессе послеубойного хранения // Пища. Экология. Качество. Новосибирск. С.8-50.

75. Лапинска Е., 1981. Низин и его применение. В кн.: Антибиотики и антибиоз в сельском хозяйстве. М."Колос". С.105-134.

76. Лев Г.Б., 1979. Исследование и разработка технологических режимов производства курунги. // Автореф. Дисс. Канд. Техн. Наук. Ленинград. 21 с.

77. Ленгелер Й., Древе Г., Шлегель Г., 2005. Современная микробиология. Прокариоты. М.: Мир. Т.2. С.393.

78. Ленченко Е.М., Павлова И.Б., 1998. Электронно-микроскопическое исследование антагонизма бактерий // Ветеринария. № 7. С. 2-28.

79. Лисицын А.Б., Кудряшов Л.С., Алексахина В.А., Полякова А.В., 2002. Преимущества переработки парного мяса // Все о мясе. №2.

80. Литвинова М.Н., Силева Н.Н., 1976. Повышение способности к биосинтезу низина Streptococcus lactis II Труды ВНИИ, средств защиты растений и бактериальных препаратов. В.4. С.84-89

81. Лотарева О.В., Филиппов В.Д., 1992. Экологический ультрафиолет реальный мутагенный фактор для вегетативных клеток Bacillus subtilis // Генетика. Т.28. № 6. С.22-28.

82. Лукомская И,С., Городецкий.В.К, 1964. Применение отечественного препарата глюкозоксидазы (микроцида) для определения глюкозы в крови в норме при диабете. // Биохимия. Т. 26. № 3. С.477-479.

83. Лях С.В., Рыбальский С.П., 1990. Адаптация микроорганизмов к низким температурным режимам. М., Пищевая промышленность.

84. Максимова А.К., 1980. К вопросу изучения протеолитической активности молочнокислых стрептококков и палочек // М. Труды ВНИМИ. № 26. С. 52 55.

85. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж.,1984. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М. Мир.

86. Мечников И.И., 1911. Молочные микробы и их польза для здоровья. СПТ. Изд. Зворыкин. 30с.

87. Миллер Дж., 1976. Эксперименты в молекулярной генетике //Изд. «Мир». С. 53 58.

88. Милько Е.С., Задояна С.Б., Ганина В.И., Егоров Н.С., 1991. Диссоциация молочно-кислых стрептококков. // Биологические науки. №4. С. 103 — 108.

89. Милько Е.С. Егоров Н.С., 1992. Влияние физико-химических факторов среды на рост диссоциантов некоторых грамположительных бактерий. // Микробиология. № 5. С. 89-96.

90. Милько Е.С., Котова И.Б., Нетрусов А.И., 2007. Процесс диссоциации у бактерий. Изд. Макс Пресс. М. С. 14.

91. МУК 4.1/4/2.588-96. Методические указания. Методы контроля медицинских иммунологических препаратов, вводимых людям. Изд. Минздрав России. С.51.

92. Мюнх Г.Д., Заупе X., Шрайтер М., 1985. Микробиология продуктов животного происхождения. // Пер. с нем. Е.М. Токаря под редакцией Королевой Н.С., Билетовой Н.В., Корнегталовой Р.П. М. Агропромиздат. С. 592.

93. Нечаева А А, Суходолец В.В., 1996. Генетическое изучение производственных штаммов Lactococcus lactis: выявление трасмиссибельных плазмид по признаку сбраживания лактозы.// Генетика. Т.32. № 2. С. 218-227.

94. Носкова Г.Л., 1972. Микробиология мяса при холодильном хранении М. Изд. Пищевая промышленность. 96с.

95. Опарин Ю. Г., 1996. Повреждения и защита биоматериалов при замораживании и лиофилизации // Биотехнология. №7. С. 3 13.

96. Павлова И.Б., Ленченко Е.М., Банникова Д.А., 2007. Атлас морфологии популяций патогенных бактерий. Изд. Колос. С. 180.

97. Паткуль Г.М., Гончиков Г.Г., Лев Г.Б., 1977. Об антагонистической активности молочнокислой микрофлоры курунги по отношению к кишечной палочке // Биология микроорганизмов и их использование в народном хозяйстве. Иркутск. С.83-89.

98. Порошеко Г.Г., Абилев С.К., 1988. Антропогенные мутагены и природные антимутагены // ВИНИТИ. Итоги науки и техники. Общая генетика. Т. 12. С.5 —176.

99. Потехина Н.В., 2006. Тейхоевые кислоты актиномицетов и других грамположительных бактерий // Успехи биологической химии. Т. 46. С. 225-278.

100. Проспект фирмы «Ниро Атомайзер» Полный процесс переработки яиц.,1992:

101. Проспект фирмы «Ovopo» Порошкообразные яичные продукты. Польша, 2005.

102. Пятницына И.Н., 1968. Повышение протеолитической активности штаммов Str. lactis II Труды ВНИИмолочной промышленности. Изд. Пищевая промышленность. Т. 26. С. 37-52.

103. Пятницина И.Н., Банникова Л.Л., 1978. Получение мутантов Streptococcus lactis путем воздействия нитрозоэтилмочевиной // XIX Международный конгресс по молочному делу. М. С. 52.

104. Работнова И.Л. Баснакьян И.А., Боровкова В.М., Запорожцев Л.Н., 1982. Системы культивирования микроорганизмов. Изв. АН СССР. Серия биологическая. № 4. С.559-573.

105. Радионова И.И., Даниленко В.Н., 1987. Влияние протопластирования на антибиотическую активность штамма Streptomyces fradidia 165 продуцента тилозина // Антибиотики и медицинская биотехнология. Т.32. № 12. С. 883-887.

106. Рапопорт А.И., Беккер М.Е., 1983. Влияние сахарозы и лактозы на устойчивость дрожжей Saccharomyces cerevisiae к обезвоживанию. // Микробиология. Т. 52. №. 5. С. 719 — 722.

107. Рапопорт И. А., 1993. Открытие химического мутагенеза. М., Изд. Наука. С.105-240.

108. Рапопорт И.А., 1996. Гены. Эволюция гена. М. Изд. Наука. С. 110 123.

109. Ратникова И.А., Гаврилова Н.Н., Колокова Н.Н., 1995. Идентификация антибиотических веществ молочнокислых бактерий // Биотехнология. № 5-6. С. 19-20.

110. Романова Ю.М., Гинзбург А.Л., 1996. Генетический контроль индукции некультивируемого состояния у патогенных бактерий // Журн. Микробиол. №3. С. 16-18.

111. Румер М.М., Лившиц В.А., 1992. Ген предшественник антибиотика низина Streptococcus lactis АТСС 11454 локализуется на хромосоме // Биотехнология. ;№ 3. С.20-25.

112. СанПиН 2.3.2.1078-01. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Минздрав России, М., 2002

113. Саттон Д., Фотерпшл. М., 2001. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. С.486

114. Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Гаврилова Л.Н., Серебренников В.М., Кисриева Ю.С., 2001. Биохимизм ароматообразования молочнокислыми стрептококками // Молочная промышленность. № 9. С. 14-18.

115. Семенова Е.В., 2005. Составление сред и культивирование микроорганизмов // Практикум по микробиологии / Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Академия. С. 33.

116. Скурихин И.М., Тутельян B.JL, 2002. Химический состав Российских продуктов питания. Справочник. М. Делипринт. С.50

117. Стенько А.С., 1982. Слияние протопластов //Мол. биология. Киев. В. 32. С. 7-16

118. Степаненко П.П., 2006. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии молока и молочных продуктов. М. Изд-во Лира.С. 653.

119. Стоянова Л.Г., Лобзов К.И., Воробьева Л.И., 1979. Физиолого-биохимические особенности пропионовых бактерий P.shermanii при росте их в яичном белке // Микробиология. Т. XI. № 6. С. 5-8

120. Стоянова Л.Г., Лобзов К.И., Воробьева Л.И., 1982. Улучшение пенообразующей способности яичного белка при использовании его в кондитерской промышленности // Хлебопекарная и кондитерская промышленность. №2. С.24-26.

121. Стоянова Л.Г., Лобзов К.И., Воробьева Л.И., 1982. Меланоидинообразование в сухом яичном белке. // Сб. Совершенствование технологических процессов переработки птицеводческого сырья. М. С.40-44

122. Суходолец В.В., 2004. Неравный кроссинговер путь адаптивной гомологичной рекомбинации между прямыми повторами ДНК в тандемных дубликациях у к Esherichia coliJf Генетика. Т. 40. № 8. С. 1046-1053.

123. Суходолец В.В., Ботина С.Г., Лысенко A.M., Тренина М.А., 2005. Молочнокислые энтерококки Enterococcus faecium и Enterococcus durans: разнообразие нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК. // Микробиология. Т. 74. № 6. С.810 815.

124. Таулов Ю.В., Миггелыптейн Т.М., Борткевич Л.Л., 1996. Влияние различных факторов на качественные и количественные показатели мясного сырья в процессе транспортировки и предубойной подготовки животных // Сб. научных трудов ВНИИМП. М. С.21-23.

125. ТУ 9213038-510-323-26-03. Сервелат сырокопченый «3ернистый».2003.136. ТУ 49

126. Туманов JI.Д., Бедняк Л.Е., Норенко М.П., 1966. Мутагенное действие N-нитрозоэтилмочевины. В книге «Супермутанты» под ред.И.А. Раппопорта//Наука.431с.

127. Тшика Т., 2004. Куриное яйцо: производство потребление и использование. Жиры и масла. № 1.С: 6-9.

128. Федорова И.В., Ковальцова СВ., Иванов Е.Л., 1992. Влияние мутаций hms повышающих спонтанную мутабильность, на индуцированный мутагенез и митотическую рекомбинацию у дрожжей Sacharomyces cerevisiae II Генетика. Т. 28. № 7. С.54-66.

129. Фильчакова Н.Н., Панкова Р.И., Королева Н.И., 1994. Патент №2007091 Россия МКП А23с 9.12: Смесь для производства замороженных кисломолочных продуктов / Опубл. 15.02. Бюл. №3.

130. Холлэнд И., 1969. Бактериоцины. В кн.: Механизмы действия антибиотиков. М.Изд. Мир. С. 646-649.

131. Хоулт Дж., 1997. Определитель бактерий Берги. М.: Мир. Т. 2. С. 538, 544, 549.

132. Хунданов Л.Е., 1975. Кисломолочные продукты, их приготовление и лечебно-диетическое назначение. Улан-Удэ, Бурятское книжное издательство. С 67.

133. Ценин А.Н., Каримов Г.А., Рыбчин В.Н., 1978. Рекомбинация при слиянии протопластов Escherichia coli К-12 // ДАН. Т.243. №.4. С.1066-1070

134. Ценин А.Н., Нестеренко А.В., Рыбчин В.Н., Потокин И.Л., Писаренко Ю.С., 1983. Эксперименты с протопластами Вас. thurengiensis. Получение протопластов и их реверсия в бациллярную форму // Генетика. Т.19. №.4. С.517-521

135. Шаблин П.Е., 2001. Лечебно-профилактический напиток «ЭМ-курунга» // Биотехнология-2001. Пущино. 25-27 сентября. С. 223 227.

136. Шапошников В.Н., 1955. Физиологическая сущность некоторых бактериальных брожений в связи с эволюцией функций // Известия АН СССР. Сер.биол. №3. С. 16-24.

137. Шигаева М.Х., Жубанова А.А., Шупшибаев К.К., Дощанова Б.К., Кунчич А.В. Кабидолданова Г.Ж., 1994. Способ получения молочной кислоты// Пат. 1426. № 940797.1. РК.

138. Штанников А.В., Лившиц В.А., Жданова Н.И., 1983. Слияние протопластов и генетическая рекомбинация у Corynobacterium glutamaticum и Brevibacterium flavum II Генетика. Т. 17. №8. С.1419-1428.

139. Ямамота Якихиро, Усами Хироко, 1982. Выделение L-форм стрептококков // Реф. Ж. Биол. Химия. № 144220. пат. 54-89313.

140. Abee T.N., Krockel Н.С., 1995. Bacteriocins: modes of action and potentials in food preservation and control of food poisoning // Int.J.Food Microbiol. 28. P. 169-185.

141. Alcantara-Diaz D, Brena-Valle M, Serment-Guerrero J., 2004. Divergent adaptation of Escherichia coli to cyclic ultraviolet light exposures.// Mutagenesis.V 19. N. 5. P. 349-354.

142. Anderson D. G, McKay L. L., 1983. Simple and rapid method for isolating large plasmid DNA from lactic streptococci.// Appl Environ Microbiol. Sep;46(3). P.549-552.

143. Andersen H., C.Solem, K.Hammer, P.R Jensen, 2001. Twofold reduction of phosphofructokinase activity i n L actococcus lactis r esult i n s trong d ecrease i n growth r ate a nd i n t he g lycolytic flux. J. Bacterol. V.183. P. 3458- 3467.

144. Aleksandrzak-Piekarezyk Т., Kok J., Renault P., and Bardowski J., 2005. Alternative lactose catabolic pathway in Lactococcus IL1403 // Appl. Environ. Microbiol. V. 71. N 10. P. 6060-6069

145. Anonymous, 1 995. L isteria с ontrol i n t he s ausage p roduction. В ioprotection о f sa usages w ith FloraCarn LC. // FloraCarn Bulletin № 3. EN-B3-FC-1195. Chr. Hansen A/S. Hoersholm. Denmark.

146. Aono Reakizo, Ito M., Horikoshi K. Regenaration of protoplasts prepared from Alkaliphilic strains of Bacillus spp.,1993 //Biosci. Biotech. Biochem. V.57. 9. P.1597- 1598.

147. Auffray Y., Gillot В., Lautier M., Thammovongs В., Boutibonnes P. Response of Lactococcus (iStreptococcus) lactis to N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine: absence of adaptive response // Mutagenesis. 1989. V. 4. N 4. P. 280 282

148. Aymes F., Monnet C, Corrieu G., 1999. Effect of alpha-acetolactate decarboxylase inactivation on alpha-acetolactate and diacetyl production by Lactococcus lactis subsp. lactis biovar diacetylactis // J Biosci Bioeng., V. 87. N. 1 P. 87-92.

149. Baker R.S., 1994. Innonative egg products and future trends. In book: Egg uses and processing technologies. New Developments. Ed. Sim J.S. and Nakai. Cab.International. UK. Wallingford. Chapter 7. P. 11-23.

150. Balcazar JL, Vendrell D, de Bias I, Ruiz-Zarzuela I, Girones O, Muzquiz JL, 2007. In vitro competitive adhesion and production of antagonistic compounds by lactic acid bacteria against fish pathogens // Vet. Microbiol. V.122. N. 3-4 P.373-80.

151. Bauer R., Dicks L.M.T., 2005. Mode of action of lipid П-targeting lantibiotics. Int. J. Food Microbiol. V. 101. P.201-216

152. Bernbom N, Licht Т., Brogren C., Jelle В., Johansen A., Badiola I., Vogensen F., N0rrung В., 2006. Effects of Lactococcus lactis on Composition of Intestinal Microbiota: Role of Nisin // Appl Environ Microbiol. V.72. P.239-244.

153. Berry E. D., Liewen M. В., Mandigo R. W., Hutkins R. W., 1990. Inhibition of Listeria monocytogenes by bacteriocin-producing Pediococcus during the manufature fermented simydry sausage//J. Food Prot.V. 53. 3. P. 194-197.

154. Biswas S.R., Ray P., Johnson M.C., Ray B. 1991. Influence of growth conditions on the production of a bacteriocin, pediocin AcH, by Pediococcus acidilactici H. // Appl. Environ. Microbiol. 57. P.1265-1267.

155. Bolotin A., Wincker P., Mouger S., Jaillon O., Malarme K., Weissenbach J., Ehrlich S.D., and Sorokin A. The complete genome sequence of the lactic acid bacterium Lactococcus lactis ssp. lactis IL1403 // Genome Res. 2001. V. 11. P. 731-753.

156. Boutibonnes P., Tranchard C., Hartke A., Thammovongs В., Auffray Y., 1992. Is thermotolerance correlated to heat-shock protein synthesis in Lactococcus lactis subsp. lactis? // J. Food Microbiol. V. 16. N 3. P. 227 36.

157. Breukink E., de Kruijff В., 1999. The lantibiotic nisin, a special case or not? // Biochimica et Biophysica Acta. 1462. P. 23-234.

158. Brotz H., Bierbaum G., Leopold K., Reynold P. E., Sahl H. G., 1998. The lantibiotic mersacidin inhibits peptidoglycan synthesis by targeting lipid П. // Antimicrob. Agents Chemother. V. 42. P. 154-160

159. Budde В. B, Rasch M. A., 2001. Comparative study on the use of flow cytometry and colony forming units for assessment of the antibacterial effect of bacteriocins // Int. J. Food Microbiol. V.63 (1-2). P.65-72.

160. Budin-Verneuil A, Pichereau V, Auffray Y, Ehrlich D, Maguin E., 2007. Proteome phenotyping of acid stress-resistant mutants of Lactococcus lactis MG1363. Proteomics. V. 7.N.2. P.2038-46

161. Calandra J., Band B.M., 1975. Lysis and protoplast formation of group N Streptococci by mutanolysin // Inf. and Immun. V.2. P.563-567. •

162. Cascales Eric, Susan K. Buchanan, Denis Duche, Coin Klanthous R. Lioubex, K. Postle, M. Relley, S. Statin, D. Cavard, 2007. Colicin biology//Microb. Biol. Reviews. March. P.l58-229.

163. Chan Weng C., Barrie W. Bycroft, Lu-Yun Lian and Gordon C.K. Roberts, 1989. Isolation and characterization of two degradation products derived from the peptide antibiotic nisin. //FEB V.252. № 1,2. P.29-36.

164. Chan Li, Fan Ouyang & Jinghua Bai., 2000. Extractive cultivation of Lactococcus lactis using a polyethylene glycol/ MgS04 7НгО aqeous two-phase system to produce nisin // Biotechnology Lett. V.22. P. 843 847.

165. Chan Li, Jinghua Bai, Zhaoling Caia and Fan Ouyanga., 2002. Optimization of a cultural medium for bacteriocin production by Lactococcus lactis using response surface methodology // J. Biotechnology. V. 93. Issue 1. P. 27-34.

166. Chandrapati S., O'Sullivan D. J. 1999. Nisin independent induction of the nisA promoter in Lactococcus lactis during growth in lactose or galactose // FEMS Microbiol. Letts. V. 170. P. 191-198.

167. Chandrapati S., O'Sullivan D. J., 2002. Characterization of the promoter regions involved in galactose and nisin mediated induction of the nisA gene in Lactococcus lactis ATCC 11454 // Mol. Microbiol. V. 46. P. 467-477.

168. Chassy B.M., 1976. Methods for the lysis of Gram-Positive asporogenes bacteria with lysozyme // Biochem. biophys. Res. Commun. // V. 9. P.153-158.

169. Cho H. Y., Yousef A. E., Yang S. Т., 1996. Continuous production of pediocin by immobilized Pediococcus acidilactici P02 in a packed-bed bioreactor // Appl. and Microbiol. Biotech. V.45. 5. P. 589-594.

170. Chen P., Qi F., Novak J., Krull R.E., Caufield P.W., 2001. Effect of amino acid substitutions in conserved residues in the leader peptide on biosynthesis of the lantibiotic mutacin П FEMS Microbiology Letters. V. 195. P.139-144.

171. Chung K.T., Dickson J.S., Crouse J.D., 1989. Effects of nisin growth of bacteria attached to meat //Appl. Environ. Microbiol. V. 55. P.1329-1333.

172. Cintas L.M., Casaus P., Fernandez M.F., and Hernandez P.E., 1998. Comparative antimicrobial activity of enterocin L50, pediocin PA-1, nisin A and lactocin S against spoilage and foodborne pathogenic bacteria. // Food Microbiol. 15. P.289-298

173. Cleveland J., Montville T.J., Nes I.F., and Chikindas M.L., 2001. Bacteriocins: safe, natural antimicrobials for food preservation // Int. J. Food Microbiol. V. 71. P. 1-20.

174. Cocaign-Bousquet, M., C. Garrigues, L. Novak, N.D. Lindley, P. Loubiere., 1995. Rational development of a simple synthetic medium for the sustained growth of Lactococcus lactis. // J. Appl. Bacterid. V.79. P.108-116.

175. Coleman S.E., 1970. Lysis of groupet Streptococci and ungroupet by lysozyme // Infection and Immunity. V.2. P.563-569.

176. Consentino S., Pisano M.B., Piras C., Cjrda A., 2003. Phenotipic, genotypic and technological characteristic of Lactococci isolated from tradional flora sardo cheese.// 1-th FEMS Congress. Slovenia. Lubljna. 29 June 2003. P. 107.

177. Cord В., Mc Kay L.L., Jurry P., 1974. Extrachromosal elements in group N Streptococci. Journal of Bacteriology. V.117. P.l 149-1152.

178. Cusick S.M., and O'Sullivan D.J., 2000. Use of a single, triplicate arbitrary primed (TAP)-PCR procedure for molecular fingerprinting lactic acid bacteria // Appl. Environ. Microbiol.V. 66. P. 22272231.

179. Cunmingham F.F., Proctor V.A., Goetsch S J., 1991. Egg white lysozyme as a food preservative: an overview // World Poultry Sci. V.47. No.2. P. 141-163.

180. Cutter C. N., Siragusa G. R., 1994. Decontaminationof beef carcass tissue with nisin using a pilot scale model carcass washer. // Food Microbiol., 11. P. 481-489.

181. De Hoog G.S., Guarro J., Gene J., Figueras M.J., 2000. Atlas of clinical fungi // 2nd edition. CBS/Univ. Rovira i Virgili.

182. De Ley J., 1962. Microbiol classification. // 12-th Sympos. Soc. Gen. Microbiology. Cambridge. P. 184.

183. Delgano A., Britto D., Fevereiro P.,Tenreiro R., Peres C., 2005. Bioactivity quantification of crude bacteriocin solutions // J/Microbiol. Methods. V.26. P.121-124.

184. Delves-Broughton J., 1990. Nisin and its application as a food preservative // J. Dairy Technol. V.43. P. 73-76.

185. Delves-Broughton J., Blackburn P., Evans R.J., Hugenholtz J., 1996. Application of the bacteriocin nizin // Int. J. General and Molecular. Microbiology. Feb. V.69. N.2. P.193-202.

186. Diep D.B., I.F. Nes., 2002. Ribosomally synthesized antibacterial peptides in Gram positive bacteria. // Curr. Drug Targets V. 3. P. 107-122.

187. Driessen A.J.M., van den Hooven H.W., KuiperW., van den Kamp M., Sahl H.-G., Konings R.N.H., Konings W.N., 1995. Mechanistic studies of lantibiotic-induced permeabilization of phospholipid vesicles. Biochemistry. V.34. P.1606-1614.

188. De Toit E.A., M. Rautenbach., 2000. A sensitive standardised micro-gel well diffusion assay for the determination of antimicrobial activity // J. Microbiol. Methods. V. 42. P. 159-165.

189. De Vuyst L., 1994. Nisin production variability between natural Lactococcus lactis subsp. lactis strains. // Biotechnol. Lett. V. 16. P. 287-292.

190. De Vuyst L., Vandamme E.J., 1994. Nisin, a lantibiotic produced by Lactococcus lactis subsp. lactis: properties, biosynthesis, fermentation and applications. Applied Microbiology and Biotechnology. V. 43. P. 151-221.

191. Dufour Alain, Thomas Hindre, Haras D.,Jean -Paul Le Pennes., 2007 The biology of lantibiotics frem the lacticin 481 group is coming of age // FEMS Microbiol. V.31. P. 134-167/

192. Duwat P., A. Cochu, S. D. Ehrlich, A. Gruss, 1997. Characterization of Lactococcus lactis Lactococcus lactis UV-sensitive mutants obtained by ISS1 transposition // J. Bacterid. V.179. P. 4473-4479.

193. Duwat P., Cesselin В., Sourice S., Gruss A., 2000. Lactococcus lactis, a bacteria model for stress response and survival I I J. Food Microbiol. V.55. P. 83-86.

194. Dykes G.A., Hasting J.W., 1997. Selection and fitness in bacteriocin-producing bacteria. // Proc. R. Lond. B. Biol. Sci. May.V. 22.264 1382 P.683-687

195. Eckburg P.B., Bik E.M., Bernstein C.N. et al. 2005. Diversity of the human intestinal microbial flora// Scince. V. 308. P.1635-1638.

196. Eddy A.A., Williamson D.N., 1959, Formation aberrant cell wall and spores by the growing yeast protoplasts. Nature. V. 183. N 4668. P.l 101-1104.

197. Edlund Т., Normark S. Recombination between short DNA homologies causes tandem duplications//Nature. 1981. V.292. P.269-271.

198. Eeijan breukink, Ben de Kruijff., 1999. The lantibiotic nisin,a special case or not?. Biochimica et Biophisica acta. V. 1462. P.223-234.

199. Eijsink V.G. H.M. Skeie, P.H. Middelhoven, M.B. Brurberg, I.F. Nes., 1998. Comparative studies of class Ha bacteriocins of lactic acid bacteria // Appl. Environ. Microbiol. V.64. P.3275-3281.

200. Elliker P.R., Anderson W., J. Hanneson, 1956, An agar culture medium for lactic acid Streptococci and lactobacilli, // Journal of Dairy Science, V. 39, P. 1064-1066.

201. Elkouhen R., Pages J.M., 1996. Dynamic aspects of colicin N translocation through the Escherichia coli outer membrane // Bacteriol. P. 5316-5319.

202. Emanuele J Jr., H. Jin, B.L. Jacobson, C.Y. Chang, H.M. Einspahr, J.J. Villafranca., 1996. Protein//Sci. V.5 .P.566-2574.

203. Ennahar S., Assobhei O., Hasselmann C., 1998. Inhibition of Listeria monocytogenes in smear-surface soft cheese by Lactobacillus plantarum WHE 92, a pediocin AcH // J. Food Prot. V.61. № 2 P. 186-191.

204. Ennahar S., T. Sashihara, K. Sonomoto, A. Ishizaki., 2000. Class Ha bacteriocins: biosynthesis, structure and activity // FEMS Microbiol. Rev. V. 24. P. 85-106.

205. European Parliament and Council. Regulation (EC) № 258/97 of the European Parliament and of the Council of 27 Jan. 1997 concerning novel foods and novel food ingredients. Official Journal 1997 L43, Feb. 14. P. 1-7.

206. Ferency L., Kevei, Sregedi M., 1975. High-frequency fusion of fungal protoplast // Experimentia. V. 31.P.1028-1030.

207. Fimland G., Eijsink V.G.H., Nissen-Meyer J., 2002. Comparative studies of immunity proteins of pediocin-like bacteriocins//Microbiology. V.148. P.3661-3670.

208. Fimland G., Eijsink V.G.H., Nissen-Meyer J., 2002. Mutational analysis of the role of tryptophan residues in the antimicrobial peptide sakacin P // Biochemistry. V. 41. P. 9508-9515.

209. Foder K., Alfredi L., 1979. Polyethilenglycol induced fusion of bacterial protoplasts // Molecular and General Genetics. V. 168. P.55-57.

210. Foury F., Cauffeau A., 1973. Combination of 2-deoxyglucose and snale gud enzyme treatments for preparing spheroplasts of Schizosaccharomycespombe // Microbiology. V. 75. № 1. P.227-229.

211. Franz C.M, Du Toit M, von Holy A, Schillinger U, Holzapfel W.H., 1997. Production of nisin-like bacteriocins by Lactococcus lactis strains isolated from vegetables // J Basic Microbiol. V.37. № 3. P.187-96.

212. Fremaux C., Ahn C., Klaenhammer T.R., 1993. Molecular analysis of the lactacin F operon // Appl. Environ. Microbiol. V. 59. P.3906-39015.

213. Ford K., Gregory M., Tompson S., 1963. Effect of gamma-radiation on vitamins and proteins of milk // ХУП Inter Congress of Dairy. Sci. V.2. P.9.

214. Gabor M., Hotchkiss R., 1979, Parametrs goverring bacterial regeneration and genetic recomdination after fusion of Bacilus subtilis protoplast // V.137. № 3. P.1340-1350.

215. Galvez A., Abriouel H., Lopez R., Omar N. 2007. Bacteriocin-based strategies for food biopreservation // J Food Microbiol. V.120. P.51-70

216. Gao S., D.-Broadbent J.R., Weimer M.E., Steele J.L., 1998. Aromatic amino acid catabolism by Lactococci // Lait. V.77. P/371-381.

217. Gasson Michaei J., 1980. Fusion of protoplasts of Streptococcus IIFEMS Microb. Letter. V.9 .№ 2. P. 99-103

218. Giacometti, О., Barchiesi F., Fortuna G., Scalise A. 1999. In-vitro activity of cationic peptides alone and in combination with clinically used antimicrobial agents against Pseudomonas aeruginosa// J.l of Antimicrobial Chemotherapy. V.44. P.641-645.

219. Gillot B, Auffray Y, Castillo-Sanchez X, Boutibonnes P.,1988. Mutagenesis in Streptococcus lactis exposed to UV irradiation and alkylating agents // Mutagenesis.V. 3. N. 3. P. 245-247.

220. Gratia A., 1925. Sur un remarquable emple d' antagonisme entre deux senches de coli bacile // C.R. Soc. Biol. V.93. P.1040-1041

221. Gratia A., Federicq P., 1946. Dewersite des souches antibiotiques de Escherihia coli et etendue varibile de leur champ d' action // C.R. Soc. Biol. V.140. P.1032-1033

222. Gross E., Morell J.L., 1971. The structure of nisin // J. Am. Chem. Soc. V.93. P.4634- 4635.

223. Guinane M., Cotter P., Lawton E., Hill C., Ross P. 2007. Insertional Mutagenesis To Generate Lantibiotic Resistance in Lactococcus lactis//Appl. Environ. Microbiol. 73, 4677-4680.

224. Gupta R.K., Prassad D.N., 1989. Nisin in the preservation of stirred yogurt under non-refrigerated storage // Microbiolic. aliments nutrition. V.7. N.2. P.123-129.

225. Gumpert J., 1979. Electron microscopic investigation of protoplast fusion in Streptomyces hydroscopicus II In Fifth Int. Protoplsts Symp. Szeged. 9-14. July. P.27.

226. Haese A., Keller U., 1988. Genetics of actinomycin С production in Streptomyces chrysomallus И J. Bacterid. V.170. P.1360-1368.

227. Hakozaki, Higashi-ku, Fukuoka, 2000. Class Ha bacteriocins: biosynthesis, structure and activity. // FEMS Microbiol. Rev. Jan. V. 24.№ 1. P. 85-106.

228. Hanlin M.B., N. Kalchayanand, P. Ray, B. Ray, 1993. Bacteriocins of lactic acid bacteria in combination have greater antibacterial activity// J. Food Prot. V. 56. P.252-255

229. Havarstein L.S., Diep D.B., Nes I.F., 1995. A family of bacteriocin ABC transporters carry out proteolytic processing of their substrates concomitant with export. V. 16 № 2: 229-240.

230. Hechard Y., H.G. Sahl, 2002. Mode of action of modified and unmodified bacteriocins from Gram-positive bacteria // Biochimie. V.84. P.545-557

231. Hester E. Hasper, Naomi E. Kramer, James A. Smith, J.D. Hillman, Cherian Zachariah, Oscar P. Kuipper, 2006. An Alternative Bactericidal Mechanism Of Action for lantibiotics peptides that target Lipid II// Science. V. 313 P. 1636-1637.

232. Hirst A., 1981. Nisin// Adv. Appl. Microbiol. V. 27. P.85-123.

233. Hopwood D.A., 1981. Genetic studies with bacterial protoplasts // Microbiology. V.35. P.257-272.

234. Hopwood D.A., Wright H.M., 1978. Bacterial protoplast fusion recombination in fussed protoplasts of Streptomyces coelicolor A3(2) // Mol. Gen. Gentic. V.162. N 2. P.307-309.

235. Hotchkiss R., Gabor M., 1979. Recombination segregation gene expression in bacterial protoplasts diploides created by protoplasts fusion // In Fifth Int. Protoplsts Symp. Szeged. 9-14. July. P.27.

236. Huang Hui-Ying, Huang Shih-Yi, Chen Pei-Yu, Fing An-Erl, Lin Y.P., Tsen J.H., 2007. Basic characteristica of Sporolactobacillus inilinus BCRC 14647 for potential probiotic properties // Current Microbiology. V.54. P.396-404.

237. Hutkins R.W., N.L. Nannen, 1993. pH homeostasis in lactic acid bacteria // J. Dairy Sci. V. 76. P.2354-2365.

238. Hostalek Z., Vorisek I., 1985. Environmental regulation of microbiol metabolism // Acad. Press. London. P. 15-28.

239. Ibrahim S.A., D.J. O'Sullivan, 2000. Use of chemical mutagenesis for the isolation of food grade P-galactosidase overproducing mutants of bifidobacteria, lactobacilli and Streptococcus salivarius ssp. thermophilu. И J. Dairy Sci. V. 83. P. 923-930

240. Ishizaki A., Ueda Т., 1995. Growth kinetics and product inhibition of Lactococcus lactis IO-l culture in xylose medium //J. Ferment. Bioeng. V.80. P.287-290.

241. Jack R. W., Tagg J. R., Ray В., 1995. Bacteriocins of Gram-positive bacteria // Microbiol. Rev. V. 59. P. 171-200.

242. Jacob F., Siminovitch L., Wollman E.L., 1953. Comparaison entre la biosynthese induite de la colicineet entre leurmode d'action//Ann. Inst. Pasteur. V. 84. P.313 318.

243. Janes M.E., Hettiarachy, Jonson M.L., 2001. Physical and chemical propertiesof edible films containing nisin and their action against Listeria monocytogenes II J. Food Sci. V. 66.

244. Janes M.E, Nannapaneni R., Johnson M.G., 1999. Identification and characterization of two bacteriocin-producing bacteria isolated from garlic and ginger root // J. Food Prot. Aug; V.62. № 8 P.899-904.

245. Jensen N.B.S., C.R. Melchiorsen, K.V. Jokumsen, J. Villadsen., 2001. Metabolic behavior of Lactococcus lactis MG1363 in microaerobic continuous cultivation at a low dilution rate II Appl. Environ. Microbiol. V. 67. P. 2677-2682.

246. Jensen P.R., K. Hamme, 1993. Minimal requirements for exponential growth of Lactococcus lactis II Appl. Environ. Microbiol. V. 59. P.4363-4366.

247. John R.P., Nanpoothin K.M., Pandey A., 2007. Polyurethane foam as an inert carrer for the production of L(+)-lactic acid by Lactobacillus casei under solid-state fermentation // Letters in Appl. Microbiology. V.44. P.582-587.

248. Jones D., 1978. Composition and differentiation of the genus Streptococcus II Streptococci. Eds. Skinner F. A., Quesnel L. B. L. Academic Press. P. 49.

249. Joosten H.M., M. Nunez, B. Devreese, J. Van Beeumen, J.D. Marugg., 1996. Purification and characterization of enterocin 4, a bacteriocin produced by Enterococcus faecalis INIA 4 // Appl. Environ. Microbiol. V.62. P.4220-4223.

250. Juillard V., Le Bars D., Kunji E.R.S., Konings W.N., Gripon J.C., Richard J., 1995. Oligopeptides are t he m ain s ource о f n itrogen for L actococcus Iactis d uring growth i n m ilk. A ppl. Environ. Microbiol. V. 61. N 8. P. 3024-3030

251. Kaneko H., Sakaguchi K., 1979. Fusion of protoplasts and genetic recombination of Brevibacterium flavum И Agricult. Boil. Chem. V. 31. P. 1028-1030.

252. Kao K.N., Michayluk M.R., 1974 A method for high-frequency intergenetic fusion of plant protoplasts // Planta. V. 115. № 2. P.355.

253. Keller U., Poschmnn S., Krendal U., Kleinkauf H., 1983. The study fusion of protoplasts in Streptomyces chrysomallus // J. Gen. Microbiol. V.129. N.6. P.1725-27.

254. Kim W.S., Hall R.J., Dunn N.W., 1997. The effect of nisin concentration and nutrient depletion on nisin production of Lactococcus lactis. Applied Microbiology and В iotechnology. V.48. P. 449453.

255. Kimoto-Nira H, Suzuki C, Kobayashi M, Sasaki K, Kurisaki JI, Mizumachi K., 2007. Anti-ageing effect of a lactococcal strain: analysis using senescence-accelerated mice // Br. J. Nutr. № 9; P. 1-9

256. Klaenhammer T.R., 1988. Bacteriocins of lactic acid bacteria. // Biochimie. V. 70. № 3. P. 337349.

257. Klaenhammer Т. R. 1993. Genetics of bacteriocins produced by lactic acid bacteria. // FEMS Microbiol Rev. Sep. V.12. № 1-3. P. 39-85.

258. Kok J., W. M. de Vos, 1994. The proteolitic system of lactic acid bacteria. In. M.J.Gasson and W.M. de Vos //Blackie Academic & Professionalal. Glasgow. UK. P.169-210.

259. Kondo J.K., Mc Kay L.L., 1985. Mytanolisin for improved lysis and rapid protoplast formation in dairy Streptococci// J. Dairy Scence. V. 65. P.1428-1431.

260. Kaneko H., Sakagnichi K., 1979. Fusion of protoplasts and genetic recombination of Brevibacterium flavum.ll V. 43. P. 1007.

261. Konings W.N, Kok J, Kuipers OP, Poolman В., 2000. Lactic acid bacteria: the bugs of the new millennium. // Curr. Opin. Microbiol. V.3 № 3. P. 276-282.

262. Kowalczyk M., J.Bardowsky, 2007. Regulation of sugar catobolism in Lactococcus lactis //Crutical Rev. in Microbiol. V. 33., P.l-13.

263. Lane H.E.D., Denhardt D.T., 1974. The rep Mutation // J. Bacterid. V.120. P.805-814.

264. Leblond-Bourget N. Philippe H., I Mangin, and В Decaris., 1996. 16S rRNA and 16S to 23S internal transcribed spacer sequence analyses reveal inter- and intraspecific Bifidobacterium phylogeny//Int. J. Syst. Bacterid. Jan.V. 46. P. 102 111.

265. Lee N.-K., Paik H.-D., 2001. Partial characteriszation of lacticin NK, a newly identifed baceriocin of Lactococcus lactis NK, isolated from Jeon-gal // Food Microbiol. V.18. P.17-24.

266. Lee, J-H., D.J. O'Sullivan., 2006. Sequence Analysis of Two Cryptic Plasmids from Bifidobacterium longum DJOIOA and Construction of a Shuttle Cloning Vector // Appl. Environ. Microbiol. V. 72. P.527-535

267. Lejeune R., Callewaert R., Crabbe K., De Vuyst L. 1998. Modelling the growth and bacteriocin production by Lactobacillus amylovorus DCE 471 in batch cultivation. // J. Appl. Bacterid. V. 84. P. 159-168.

268. Li H., D.J. O'Sullivan., 2002. Heterologous expression of nisin in a dairy Enterococcus strain // Appl. Environ. Microbiol. V. 68. P. 3392-3400.

269. Li Hong Jin Tao, 2005 . Study on the inhibition effect of nisin // J. Amer.Sci. V. l.№ 2. P.33-37.

270. Litchfild J.H., 1996. Microbiological production of lactic acid // Adv. Appl. Microbiol. V. 42. P.45-95

271. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Randal R.J., 1951. Protein measurement with the Foline phenol reagent. // J. Biol. Chem. V. 193. P. 265 275.

272. Mach F., 1980. Die fusion bacterieller protoplasten- ein nener gentrans for mechanisms bei procarioten. Biologishe Rundshan, V. 18, № 4, P. 209-220.

273. Maggio В., Ahong Q.F., Lucy J.A., 1976. Polyethylen glycol surface potenthial and coll fusion. Boochemical journal. V. 158, № 3, P. 647-650.

274. Marcrina F.L., Wood P.H., Jones K.R., 1980. Simple method for demonstrating small plasmid deoxyribonucleic acid molecules in oral Streptococci // Applied and Euvironment Microbiology, V. 39, P. 1070-1073.

275. Maren A., Klich., 2002. Identification of common Aspergillus species. CBS, The Netherlands. P. 116

276. Marmur L.J., 1961. A procedure for the isolation of deoxy-ribonucleic acid from microorganisms // J. Mol. Biol. V.3. P.208 218.

277. Martinez В., Suarez J.E., Rodriguez A., 1996. Lactococcin -972 A homodimeric lactococcal bacteriocin whose primary target is plasma membrane // Microbiology. P. 2393-2398.

278. Mattic A.T., Hirsch A., 1944. A powerful inhibitory substance produced by group N Streptococci //Nature. V.154P. 551.

279. Mayo В., 1993. The proteolytic system of lactic acid bacteria // Microbiologia. V.9. N.2. P.90-106.

280. Mercade, M., Lindley N. D., and Loubiere P. Metabolism of Lactococcus lactis subsp. cremoris MG 1363 in acid stress conditions // Int. J. Food Microbiol. 2000. V. 55. P. 161-165.

281. Montville T.J, Chen Y., 1998. Mechanistic action of pediocin and nisin: recent progress and unresolved questions. // Appl Microbiol Biotechnol. V. 50 № 5 P. 511-519.

282. Nes Ingolf F., Tagg John R., 1996. Novel lantibiotics and their pre-peptides. // Antonie van Leeuwenhok. V. 69. No. 2. P. 91-93.

283. Nes I.F., H. Holo., 2000. Class II antimicrobial peptides from lactic acid bacteria. // Biopolymers. V. 55. P. 50-61.

284. Nilson L.H., Huss H.H., Gram L., 1997. Inhibition of Listeria monocytogenes on cold-smoked salmon by nisin and carbon dioxide atmosphere// Int. J. Food Microbiol. V. 38. P. 217-227.

285. Nissen-Meyer J., I.F. Nes., 1997. Ribosomally synthesized antimicrobial peptides: their function, structure, biogenesis, and mechanism of action. // Arch. Biochem. Biophys. V. 167. P. 67-77.

286. Nomura M., Kobayashi M., Narita Т., Kimoto-Nira H., Okamoto Т., 2006. Phenotypic and molecular characterization of Lactococcus lactis from milk and plants // J. App.Microbiol. V.101. № 2. P. 396-405.

287. Norma de la Fuente Salcido, Ruben Salcedo-Hernandez, Ma. Guadolupe Alanis-Guzman, Denis K. Bideshi, J. Elezar Barbosa-Corona, 2007. A new rapid fluorogenic method for measuring bacteriocin activity. J. Microbiological Methods, V. 70: P. 196-199.

288. Novak L., M.Cocaign-Bousquet, N.D. Lindley, and P. Loubiere, 1997. Metabolism and enegetics of Lactococcus lactis during growth in various complex or synthetic media. //Appl. Environ. Microbiol. V. 63. P. 2665- 2670.

289. Novak L., P. Loubiere, 2000. The metabolic network of Lactococcus lactis: distribution of14 С — substates between catabolic and anaerobic pathways. J. Bacterid. V. 182. P. 1136-1143.

290. Nouaille S., Commisssaire J., Gratodoux J. J., Ravn P. et al., 2004. Influence of lipoteichoic acid d-alanylation on protein secretion in Lactococcus lactis as related random mutagenesis // Appl. Environ. Microbiol. V. 70. № 3 P. 1600- 1607.

291. Novitsky J.A., R.Y. Morita, 1976. Morphological characterization of small cells resulting from nutrient starvation in a psychrophilic marine vibrio. Appl. Environ. Microbiol. V. 32: P. 617-622

292. Oiao M., Omaetxebarria M.J., Ra R., Oruetxebarria ISaris P.E.J., 1997. Isolating of a Lactococcus lactis strain with high resistance to nisin and increased nisin production // Biotechnol. Lett. V. 19. P. 199-202.

293. Okamoto Т., Fujuta J.,R. Grir, 1983. Protoplast formation and regeneration of Streptococaes lactis cells, Agricaltural and Biological Chemistry,, V. 47, №2, P.259-263.

294. Okanishi M., Suruki K., Utezava H., 1974. Formation and revision of Streptomycete protoplasts a cultural condition and morphological stady, Journal of General Microbiology, V. 80, № 1, P.389-400.

295. Okuda K., Aso Y., Nagao J., Shioya K., Kanemasa Y., Nakayama J., Sonomoto K., 2005. Characterization of functional domains of lantibiotic-binding immunity protein, NukH, from Staphylococcus warneri ISK-1. FEMS Microbiology Letters. V. 250. P. 19-25

296. Olivia Mac Auliffe, R.Paul Ross, Colin Hill, 2001. Lantibiotic: structure, biosynthesis and mode of action//FEMS Microbiology Reviews. V. 25. P. 285-308.

297. Quiao M., Omaetxebarria M.J., Ra R, Oruetxebarria I., Saris P.E.J., 1997. Isolation of a Lactococcus lactis strain with high resistance to nisin and increased nisin production. Biotechnology Letters, V. 19. P. 199-202.

298. О'Sullivan D.J., 2000. Methods for analysis of the intestinal microflora. // Curr. Issues Intest. Microbiol. V. 1. P. 39-50

299. O'Sullivan D.J., 2001. Screening of intestinal microflora for effective probiotic bacteria. // J. Ag. Food Chem. V. 49. P. 1751-1760.

300. O'Sullivan L, Ross RP, Hill C., 2002. Potential of bacteriocin-producing lactic acid bacteria for improvements in food safety and quality // Biochimie. V. 84. № 5-6. P. 593-604.

301. Oxford A.E., 1945. Diplococci an antibacterial protein elaborated by certain milk streptococci. Biochem. V.38,№ 178. P.39.

302. Owen R.J., Hill L.R., Lapage S.P., 1969. Determination of DNA base compositions from melting profiles in dilute buffers // Biopolymers V. 7. P. 503-516.

303. Patnaik R, Louie S, Gavrilovic V, Perry K, Stemmer WP, Ryan CM, del Cardayre S., 2002. Genome shuffling of Lactobacillus for improved acid tolerance // Nat/ Biotechnol. V. 20. N. 7. P. 707712.

304. Parente E., Ricciardi A., 1999. Production, recovery, and purification of bacteriocins from lactic acid bacteria // Appl. Microbiol. Biotechnol V. 52. P. 628-638

305. Park S.H., Itoh K., Kikuchi E., Niwa H., Fujisawa Т., 2003. Identification and characteristics of nisin Z-producing Lactococcus lactis subsp. lactis isolated from Kimchi. // Curr Microbiol. V. 46. № 5. P. 385-8.

306. Phister T.G., O'Sullivan D.J., McKay L.L., 2004. Identification of bacilysin, chlorotetaine, and iturin A produced by Bacillus sp strain CS93 isolated from pozol, a Mexican fermented maize dough. //Appl. Environ. Microbiol. V. 70. P. 631-634.

307. Porgtharaqkui Т., Demirci A., 2006. Evalution of cultural medium for nisin production in a repeated-batch biofilm reactor // Biotchnol. Prog. V. 22. № 1. P. 217 224.

308. Power J.B., Cummins S.E., Cocking E.C., 1975. Experietia. V. 31. P. 1-28.

309. Powell I.I., Ward A.C, Hillier A.J., Davidson R.E., 1990. Simultaneous conjugal transfer in Lactacocats to genes involved in bacteriocin production and reduced susceptibility to bacteriophages // FEMS Microbiol. Lett. V. 72: P. 209-214.

310. Raper K.B., Fennell D.I., 1965. The genus Aspergillus. P. 302.

311. Ray В., Daeschnell M.A., 1992. Food biopreservatives microbial // Boca Raton CRC Press. P. 207-264.

312. Riley M.A, Wertz J.E., 2002. Bacteriocins: evolution, ecology, and application. // Annu Rev Microbiol. V.56. P.l 17-137.

313. Roberts R.F., Zottola E.A., 1993. Shelf-life ofpasteurizedprocess cheese spreads made from cheddar cheese manufactured with nisin-producing starter culture. // J. Dairy Sci. V.76. P. 1829-1836.

314. Rodriguez J.M., M.I. Martinez, N. Horn, H.M. Dodd, 2003. Heterologous production of bacteriocins by lactic acid bacteria // Int. J. Food Microbiol. V.80. P.l01-116.

315. Ross R.P., Galvin M., McAuliffe O., Morgan S.M., Ryan M.P., Twomey D.P., Meaney W.J., Hill C., 1999. Developing applications for lactococcal bacteriocins // Antonie van Leeuwenhoek. V.76. P.337-346.

316. Rossa P., S. Morgana, C. Hillb., 2002. Preservation and fermentation: past, present and future // Int. J. Food Microbiol. Issues 1-2,15 November 2002, V. 79. P. 3-16.

317. Rossland E., Andersen Borge GI, Langsrud T, Sorhaug Т., 2003. Inhibition of Bacillus cereus by strains of Lactobacillus and Lactococcus in milk. // Int J Food Microbiol. V.89. № 2-3. P.205-212.

318. Ryan M.P., R.W. Jack, M. Josten, H.G. Sahl, G. Jung, R.P. Ross, C. Hill., 1999. Extensive post-translational modification, including serine to d-alanine conversion, in the two-component lantibiotic, lacticin 3147. J. Biol. Chem. V.274. P.37544-37550.

319. Sailaja Chandrapati, Daniel J. O'Sullivan., 1999. Nisin independent induction of the nisA promoter in Lactococcus lactis during growth in lactose or galactose // FEMS Microbiology Letters Volume 170. Issue 1. January V.l. P. 191-198.

320. Sahl H.G., Kordel M., Benz R., 1987. Voltage-dependent depolarization of bacterial membranes and artificial lipid bilayers by the peptide antibiotic nisin // Archive Microbiology. V.149. P.120- 124.

321. Sahl H.G., BierbaumG., 1998. Lantibiotics: biosynthesis and biological activities of uniquely modified peptides from Grampositive bacteria // Annual Review of Microbiology. V.52. P.41—79.

322. Sancher Rivas Carmen, 1982, Direct selection of comlementing diploid from PEG- induced fusion of Вас. subtilis protoplasts //Molecular and General Genetic. V.l 82, P.322.

323. Sander M.E., Leonhard P.J., Sing V.V.D., Klaenhainmer T.R., 1986. Conjugal strategy for construction of fast acid-producing, bacteriophage-resistant lactic streptococci for use in dairy fermentations // Appl. Environ. Microbiol.V.52. P.1001-1007.

324. Stein Т., Heinzmann S., Dusterhus S., Borchert S., Entian K.D., 2005. Expression and functional analysis of the subtilin immunity genes spalFEG in the subtilin-sensitive host Bacillus subtilis MO 1099 // J. Bacteriology. V.187. P.822-828.

325. Stein Т., Heinzmann S., Solovieva I., Entian K.D., 2003. Function of Lactococcus lactis nisin immunity genes nisi and nisFEG after coordinated expression in the surrogate host Bacillus subtilis // J. Biological Chemistry. V.278. P.89-94.

326. Steimoen H., Teigen A., Havarstein L.S., 2003. Competence-induced cells of Streptococcus pneumoniae lyse competence-deficient cells of same strain during co-cultivation // J. Bacteriology. V.185. P.7176-7183.

327. Schleifer K.H., 1987. Recent changes in the taxonomy of lactic acid bacteria // FEMS Microbiol. Rev. V.46.P.201-203.

328. Schleifer K.H., Ludwig W., 1989. Phylogenetic relationships among bacteria. In: Fernholm В. Bremer. K., Jornwall H. (eds.) The hierarchy of life //Amsterdam. Elsevier. P. 103-117.

329. Sirisansaneeyakul S., Hopolito C.N., Kobaashi G., Lertsiri S., Luangpipuksa P.,.Varavinit S., Ishrizaki A., 1998. Kinitic modeling of. lactis acid fermentation from sago starch using Lactococcus lactis Ю-1 // Annu. Rep. ICBiotech. V. P. 504-524

330. Sirisansaneeyakul S., Luangpipipat T.,.Vanichsriratana W, Srinophakun Т., Henry Ho-Hsien Chen, Chisti Y., 2007. Optimization of lactis acid production by immobilized Lactococcus lactis IO-l //.J. Ind Microbiol Biotechnol, V. 34: P. 381-391

331. Stoyanova L.G., Baranova I.P., Egorov N.S., Kudriyschov V.L., 1995. Effect of aeration on Lactococcus lactis //Intern. Congress 'Food. Ecology. Human" Russia. Moscow. Dec. 1995. P. 41

332. Stuart M.R., L.S. Chou, B.C. Weimer, 1999. Influence of carbohydrate starvation and arginine on culturability and amino acid utilization of Lactococcus lactis subsp. lactis. Appl. Environ. Microbiol. V. 65. P.665-673.

333. Simon D., Chopin A., 1988. Construction of a vector piasmid family and its use for molecular cloning in Streptococcus lactis /Biochimie. V. 70: P.559-567.

334. Shehard S.K., 1978. The remove of glucose from egg white before the drying //Nahury. №1 P.3-9.

335. Smid E.J., Poolman В., Konings W.N., 1991. Casein utilization by lactococci // Appl. Environ. Microbiol. V.57. N 9. P. 2447-2452

336. Solem С, Koebmann В, Yang F, Jensen PR., 2007. The las enzymes control pyruvate metabolism in Lactococcus lactis during growth on maltose // J. Bacteriol. 2007 Jul 6;

337. Somers E.B., Sandine W.E. Aytes J.W., 1990. Antibotulinal effectiveness of nisin in pasteurized process cheese spreads // J. Food Prot., V. 50 № 10. P. 842-848.

338. Stackebrandt E., Teuber M., 1988. Molecular taxonomy and polygenetic position of lactic acid bacteria // Biochemie. V.70. P.317-324.

339. Stiles M.E., 1996. Biopreservation by lactic acid bacteria // Antonie van Leeuwenhoek, V. 70. P. 331-345.

340. Swearingen P.A., O'Sullivan D.J., Warthesen J.J., 2001. Isolation, characterization and influence of native nonstarter lactic acid bacteria in Cheddar cheese quality // J. Dairy Sci. V.84. P.50-59.

341. Szabo E.A., Cahill M.E., 1998. The combined affects of modified atmosphere, temperature, nisin and ALTA™2341 on the growth of Listeria monocytogenes II Int. J. Food Microbiol V. 43. P.21-31.

342. Tagg J.R., A.R. McGiven, 1971. Assay system for bacteriocins // Appl. Microbiol. V.21. P.943.

343. Tahara Т., Oshimura M., Kanatani K., 1996 Mode of action of acidocin 8912 // Lett. Appl. Microbiol. V.23. № 3. P.192-194.

344. Tanaka N., Traisman E., Plantinga P., Finn L., Flom W., Meske L., Guggisberg J., 1986. Evaluation of factors involved in antibotulinal properties of pasteurized process cheese spreads // J. Food Prot V.49 № 7. P.526-531.

345. Taylor S.L., Sombers E.B., 1985. Evaluation of the antibotulinal effectiveness of nisin in bacon // J. Food Prot. V.48. P.949-952.

346. Taylor S.L., Somers E.B., Krueger L.A., 1985 Antibotulinal effectiveness of nisin-nitrite combinations in culture medium and chicken frankfurter emulsions // J. Food Prot. V.48. P.234-239.

347. Tian Shaofang, Niu Zhongcxiang, Chang Weishan., 2003. Research of Lactic acid bacterial bacteriocin. // China J.Microbiology.V.23. № 6. P.47-49.

348. Todd I., Talarico, Dobrogosez Walter J., 1989. Chemical Characterization of an antimicrobal substance produced by Lactobacillus reuteri II Antimicrobal Agents and Chemotherapy. V.33.N.5. P.674-679.

349. Tugene F.J., Hirshmann D.J.,1944. Subtilin- an antibacterial product of Bacillus subtilis. Culturing couditions and properties // Archives of Biochemistry. V.4. P.297-309

350. Twomey D., Ross R.P., Ryan M., Meaney В., Hill C., 2002. Lantibiotics produced by lactic acid bacteria: structure, function and applications 11 Antonie van Leeuwenhoek. V. 82. P. 165-185.

351. Vademuthu E.B., Henderson J.T., Vandenbergh P.A., 1994. Multiple bacteriocin producing Lactococcus and composition.//Pat. US. № 5,348,881. C1.C12N 1/12,435/252.3. 435/252.4.

352. Vegarud G., Castherg H.B., and Langsrud T. Autolysis of group N streptococci. Effect of media composition modification and temperature 11 J. Dairy Sci. 1993. V. 66. P. 2294-2303.

353. Van Belkum M.J., Stiles M.E., 2000. Nonlantibiotic antibacterial peptides from lactic acid bacteria. Natural Product// Current Opinion in Biotechnology V. 17. P. 323-335

354. Van den Hooven H.W., Lagenwerf F.M., Herma W., 1996. The structure of lantibiotic lacticin 481 produced by Lactococcus lactis. Location of the thiother bridges // Antonie van Leeuwenhoek. V.69. P.317-321.

355. Venema K., Abee Т., Haandrikman A.J., Leenhouts K.J., Kok J., Konings W.N., Venema G., 1993. Mode of action of lactococcin B, a thiol-activated bacteriocin from Lactococcus lactis. Applied and Environmental Microbiology, V.59, P.1041-1048.

356. Wang S. Y., Dockerty T.R., Ledford R.A., Stouffer J.R., 1986. Shelf-life extension of vacuum packaged frankfurters made from beef inoculated with Streptococcus lactis II J. Food Prot. V.49. P.130-134.

357. WangH., Baldwin К. А., О'Sullivan D. J., McKay L.L., 2000. Identification of a genecluster encoding Krebs cycle oxidative enzymes linked to the pyruvate carboxylase gene in Lactococcus lactis ssp lactis C2 // J. Dairy Sci. V.83. P.1912-1918.

358. Wee Y.I., Kim J.N., Ryu H.W., 2006. Biotechnological production of lactic acid and its recent applications // Food Technol. Biotechol. V.44. P.l63-172.

359. Wessels S., 1993. Food-grade g enetic modification of dairy bacteria. PhD thesis // The Royal Veterinary and Agricultural University and The Danish Academy of Technical Sciences, Denmark.

360. Wessels S., Huss H.H., 1996. Suitability of Lactococcus lactis subsp lactis ATCC 11454 as a protective culture for lightly preserved fish products // Food Microbiol. V.13. P.323-332.

361. Widemann I., Bottiger Т., Bonelli R., Schneide Т., Sahl H., Martinez B. 2006. Lipid II-Based Antimicrobial Activity of the Lantibiotic Plantaricin C//Appl. Env. Microdiol. 72, 2809-2814.

362. Willey M., van der Donk W. 2007. Lantibiotics: Peptides of Diverse Structure and Function// Annu. Rev. Microbiol. 61, 477-501.

363. Woojin S. Kim, Ji Hyeon Park, Jun Ren, Ping Su, and Noel W. Dunn., 2001. Survival Response and Rearrangement of Plasmid DNA of Lactococcus lactis during Long-Term Starvation .// Appl. and Environ. Microbiol. V. 67. No. 10. P. 4594-4602.

364. Wouters J.A., Kamphuis H.H., Hugenholtz J., Kuipers O.P., de Vos W.M., Abee T. Changes in glycolytic activity of Lactococcus lactis induced by low temperature // Appl. Environ Microbiol. 2000. V. 66. N9. P. 3686-3691.

365. Yamauchi К. Biologically functional proteins of milk and peptides derived from milk proteins // Bulletin of the IDF. 1992. 272. P. 51-58.

366. Yang J., D J. O'Sullivan., 2006. Involvement of the LlaKR2I methylase in the expression of the AbiR bacteriophage defense system in Lactococcus lactis ssp. lactis biovar diacetylactis KR2 // J. Bacterid. V.188. P. 1920-1928.

367. Yeeh Y., Jo Y.B., Kwon Oh Chang, 1996. Protoplast fusion of Lactobacillus casei and Lactobacillus acidophilus II Biotech.Lett. V.18. №.7. P.805-808

368. Yildirim Z., Yildirim M., Johnson M.G., 2004. Mode of action of lactococcin R produced by Lactococcus lactis R. //Nahrung V.48. № 2. P. 145-148.

369. Yin J., Seo K.Y., Loechler E.L., 2004. A role for DNA polymerase V in G T muyatin from the major benzoa.pyrine N2-dG adduct when studied in a 5'-TGT sequence in E.coli // ELSEVIER. V.4. P.323-334.

370. Yother J., Trieu-Cuot P., Кlaenhammer T. R., D e V os W.M., 2 002. Genetics оfstreptococci, lactococci and enterococci: review of the sixth international conference I I J. Bacteriol. V.184. P.6085-6092.

371. Yu W.K., Gilles J.K.,Kondo J.R.,Broadbent McKay L.LI, 1996. Lost of plasmid mediated oligopeptide transport systemin lactococci anothereason for slow milk coagulation // Plasmid. V.35. P.145-155.