Морфофункциональные особенности эритроцитов у лиц различных возрастных групп тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.01, кандидат биологических наук Горис, Анна Пятрас

• Горис, Анна Пятрас
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Горис, Анна Пятрас

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о структуре и функции эритроцитов, строение их мембран

1.2. Механизм деформируемости эритроцитов

1.3. Методы определения деформируемости эритроцитов

1.4. Микроциркуляторное русло и его исследование методом лазерной допплеровской флоуметрии

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

2.2. Методы исследования

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Изучение деформируемости эритроцитов у людей разных возрастных групп с помощью «лазерного пинцета»

3.2. Морфофункциональные изменения мембран и деформируемость эритроцитов в зависимости от возраста человека

3.3. Влияние деформируемости эритроцитов на состояние регионарного кровотока у людей разных возрастных

групп

3.4. Влияние гипоксии и рН на деформируемость эритроцитов и регионарный кровоток в зависимости от возраста

человека

3.5. Влияние изменения температуры на деформируемость эритроцитов в зависимости от возраста человека

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АМТБ антибиотик амфотерицин Б

АТФ аденозинтрифосфат

АТФ-аза аденозинтрифосфатаза

КОС кислотно-основное состояние крови

ЛДФ лазерная допплеровская флоуметрия

пол перекисное окисление липидов

цАМФ циклический аденозинмонофосфат

Э эритроцит

1 длина волны зондирующего излучения

пш показатель шунтирования

ЭрОг насыщение кислорода в артериальной крови

802, насыщение кислорода в венозной крови

БОт индекс перфузионного насыщения кислорода в микрокровотоке

р02 парциальное давление кислорода

и индекс удельного потребления кислорода в ткани

Уг объема фракции эритроцитов в области исследования

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональные особенности эритроцитов у лиц различных возрастных групп»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Одним из важнейших свойств эритроцита является его способность к деформируемости. Эритроциты способны значительно деформироваться при прохождении через капилляры, не меняя своего объема и площади поверхности. Эта особенность эритроцитов имеет важное значение для поддержания оптимальных процессов диффузии газов на протяжении всего микроциркуляторного русла различных органов. Огромное значение для деформируемости эритроцитов имеют вязко-эластичные свойства мембраны, которые определяются состоянием спектрино-актинового комплекса и его взаимодействием с другими структурными элементами мембраны [9,19,50,128]. Прочность мембраны обеспечивается подмембранной сеткой из длинных и относительно гибких нитей белков спектрина и актина, тогда как содержимое цитоплазмы (раствор гемоглобина) ведет себя подобно жидкости, не препятствуя деформациям [83,121].

В нормальных физиологических условиях с возрастом деформируемость эритроцитов уменьшается, увеличивается их агрегируемость и снижается кислородтранспортная функция, что по данным ряда авторов [46,98,119] отражается на состоянии системы микроциркуляции. В литературе подробно обсуждаются механизмы изменений и нарушений деформируемости эритроцитов, многообразие которых указывает на то, что этот показатель является достаточно лабильной характеристикой крови, которая чувствительно реагирует на изменение любого метаболического процесса в организме [10,99,102].

При многих ситуациях, когда на организм человека начинают воздействовать неблагоприятные факторы внешней и внутренней среды [60,61,73,81], эритроциты первыми реагируют нарушением деформируемости своей мембраны. Это связано с эндогенными (изменение структуры и концентрации гемоглобина, уровня содержания 2,3-дифосфоглицериновой кислоты, АТФ, ионов 2+ и Са 2+ в клетке и т.д.) и экзогенными (изменение

концентрации гормонов, глюкозы, повышения вязкости плазмы) факторами [50,69].

Все эти обстоятельства объясняют повышенный интерес биофизиков и физиологов к деталям молекулярной динамики, обеспечивающим гибкость эритроцитов, и методам оперативного контроля их деформируемости, особенно в условиях клиники. Цель исследования:

Изучить морфофункциональное состояние мембран эритроцитов и их способность к деформации в зависимости от возрастных особенностей человека.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Изучить способность мембран эритроцитов к деформации у лиц

разных возрастных групп.

2. Определить характер изменений липидного и белкового компонентов мембраны эритроцитов, влияющих на её деформируемость у лиц разных возрастных групп.

3. Установить влияние деформируемости мембраны эритроцитов на состояние регионарного кровотока и кислородное обеспечение тканей у лиц

разных возрастных групп.

4. Оценить влияние гипоксии и температуры на деформируемость эритроцитов и регионарный кровоток у лиц разных возрастных групп.

Научная новизна. Получены новые данные о состоянии мембран эритроцитов и их способности к деформации у лиц разных возрастных групп. Исследованы показатели, характеризующие состояние как липидной, так и белковой компонент мембран эритроцитов у лиц разных возрастных групп.

Выявлены качественные и количественные различия в белковой части мембран эритроцитов у лиц разных возрастных групп. Установлено, что у лиц старше 50 лет в мембранах эритроцитов возрастает процентное содержание спектрина, увеличивающего естественную «жесткость» красных клеток крови. Получены новые данные о взаимосвязи между состоянием мембран

эритроцитов и параметрами регионарного кровотока.

Установлено, что гипоксия и изменение температуры влияют на состояние мембран эритроцитов и характеристики регионарного кровотока в зависимости от возраста.

Практическая значимость работы. Изучение фракционной структуры эритроцитов может использоваться при оценке качества эритроцитарной массы и донорской крови, для проверки ее годности на фоне хранения и оценки состояния мембран красных клеток крови.

Возрастные структурно-функциональные особенности эритроцитов следует учитывать при коррекции состояний на фоне гипоксии и гипертермии.

Методика определения деформируемости эритроцитарных мембран, метод отмывки и хранения эритроцитов используются в работе клинико-диагностической лаборатории многопрофильного лечебно-диагностического комплекса «МедГард».

Выявленные тенденции в изменении деформируемости мембран эритроцитов на фоне старения человека используются в курсе преподавания нормальной физиологии в разделе «Кровь» у студентов лечебного, стоматологического факультетов Самарского медицинского института «РЕАВИЗ».

Положения, выносимые на защиту:

1. В периферической крови людей содержатся эритроциты с различной способностью к деформации, которая зависит от возраста и оказывает влияние на характер регионарного кровотока.

2. Возрастные особенности мембран эритроцитов связаны с изменением вязкости липидного бислоя, содержанием скелетных белков, которые определяют степень деформируемости эритроцитов.

3. Гипоксия, снижение рН и изменение температуры влияют на деформируемость мембран эритроцитов и характеристики регионарного кровотока в зависимости от возраста.

Личный вклад автора в проведенное исследование и результаты, полученные совместно с другими исследователями. Все экспериментальные результаты исследования были проведены лично. Постановка цели и задач исследования, а также обсуждение экспериментальных результатов проведены под руководством д.м.н., профессора Зарубиной Е.Г.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на XXXV международной научно-практической конференции «Применение лазеров в медицине и биологии» (Харьков, 2011), на научно-практической конференции с международным участием «Инновационные технологии в лазерной медицине» (Москва, 2011), ежегодной Российской Научно-практической конференции «Наука. Образование. Медицина» (Самара, 2011), на международной научно-практической конференции «Применение лазеров в медицине и биологии» (Судак, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ, 3 из них по

списку ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов исследований, главы данных собственных исследований и обсуждения результатов, выводов, списка литературы. Работа изложена на 140 страницах машинописного текста, иллюстрирована 26 рисунками, содержит 15 таблиц. В работе использовано 211 литературных источника, из них 144 отечественных и 67 зарубежных.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Современные представления о структуре и функции эритроцитов, строении их мембран

Эритроцит (Э) является самой многочисленной и наиболее дифференцированной клеткой организма человека и млекопитающих животных. В организме млекопитающих это единственная безъядерная клетка, в цитоплазме которой присутствует белок гемоглобин (95% массы Э), обеспечивающий транспорт кислорода и обратный перенос углекислого газа [9,17,80].

Вследствие того, что Э не содержат ядра, они не способны к самовоспроизведению и репарации возникающих в них повреждений. Эти клетки циркулируют в крови около 120 дней. При достижении возраста 4 месяца Э становятся хрупкими, ломкими и подвергаются разрушению макрофагами в печени, селезенке и костном мозге [157]. Железо отделяется от гемоглобина и хранится как ферритин в селезенке для повторного использования в синтезе гемоглобина. Остаток гема молекулы гемоглобина связывается с альбумином и транспортируется в печень, где частично подвергается деградации, конъюгации и экскретируется через желчные протоки и желчный пузырь, как билирубин желчи [9,17].

На первой фазе развития и дифференцировки Э - ретикулоцита, несмотря на более крупные размеры этих клеток, они не несут полной нагрузки гемоглобина. Созревание завершается за 1-3 дня, в течение которых клетки выполняют безотказно функцию переноса кислорода. На второй фазе, зрелого Э, полностью выполняющего свою функцию, он переносит кислород в одном направлении, а углекислоту - в обратном. На третьей фазе, дефицитного Э с уменьшенной эффективностью, по причине сокращения процессов обмена веществ их утилизируют макрофаги, тем самым открывая путь молодым клеткам, вступающим в функциональный цикл [9].

Основную массу Э в периферической крови человека составляют

дискоциты (около 90%). Дискоциты имеют форму двояковогнутого диска [56,112]. Ранее считалось, что плоский диск лучше приспособлен к транспорту веществ из клетки и внутрь ее и к диффузии газов к центру клетки [50]. В настоящее время доказано, что двояковогнутая форма обладает незначительными диффузионными преимуществами. Но, объем, соответствующий диску, имеет в 1,7 раза большую поверхность, чем такой же объем, соответствующий сфере, и может изменяться без растяжения мембраны клетки [13,17,139].

Э имеет толщину 2,1 мкм, объем - 85-90 мкм3, площадь поверхности -145 мкм . Такое соотношение площади к объему способствует деформабильности Э при их прохождении через капилляры, не меняя своего объема и площади поверхности, что поддерживает процессы диффузии газов на высоком уровне на протяжении всего микроциркуляторного русла различных органов. При высокой деформируемости красных клеток крови происходит максимальный перенос кислорода в клетки, а при ухудшении деформируемости (повышении «жесткости») - поступление кислорода в клетки резко снижается [48,50].

Двояковогнутая форма Э, эластичность, деформируемость и сохранение структуры клетки при удалении из нее гемоглобина, когда остается так называемая тень Э, зависят от особенностей его строения, прежде всего скелета клетки. В состав оболочки Э входят 49% белков, 43% жиров и 8% углеводов [9]. Мембрана Э полупроницаемая, состоит из трех слоев. Наружный слой образован гликокаликсом, средний - липидным бислоем, внутренний слой -сетью белков, называемой цитоскелетом [6,28].

Мембрана представляет собой динамическую структуру. Наиболее подвижным компонентом в ней являются липиды. Они довольно свободно двигаются в плоскости липидного слоя (латеральное перемещение), меняя своих «соседей» в среднем 106 раз /сек. Молекулы белков также могут перемещаться латерально в плоскости мембраны. Возможно также, что белковые молекулы вращаются вокруг перпендикулярных и параллельных

плоскости бислоя осей, что может иметь большое значение при функционировании макромолекул и мембран в целом [6].

Поверхность Э отграничена оболочкой, представленной как результат сочетания и уплотнения тенсиоактивных гликопротеидных веществ и составляющей селективный барьер, в котором осуществляются обмены между клеткой и окружающей средой. Наружная мембрана Э, хотя отличается от плазматических мембран других клеток, тем не менее выполняет специфические функции, обеспечивая включение Э в функциональное единство организма. Она принимает непосредственное участие в непрерывном обмене водой, электролитами и метаболитами - с одной стороны, между Э и плазмой крови, а с другой - между интерстициальной жидкостью и остальными клетками [9].

В начале 70-х годов при исследовании механических свойств мембран Э было обнаружено, что после разрушения мембраны, вызванного экстракцией липидов неионными детергентами, остается плотная ячеистая структура, сохраняющая форму Э [17,53]. Эта структура получила название примембранного цитоскелета. Электронно-микроскопические исследования показали, что примембранный цитоскелет представляет собой правильную двумерную сеть, образованную гибкими протяженными молекулами длиной около 200 нм, которые соединены вершинами с образованием пента- или гексагональных ячеек [4,6,156,170,206].

Основой мембраны Э является липидный бислой, пронизанный интегральными белками цитоскелета. Среди липидов мембраны выделяют: фосфолипиды (глицерофосфолипиды, сфинголипиды, фосфотидил-этаноламин, фосфатидилсерин и др.); гликолипиды; холестерин [49,53,67,168].

Липидный бислой содержит примерно равные количества холестерина и фосфолипидов. Относительное содержание холестерина играет существенную роль, изменяя физико-химические и физиологически значимые свойства мембраны Э [189]. Фосфолипиды представлены, в основном, сфингомиелином (25%), фосфатидилхолином (28%), фосфатидилэтаноламином (26%) и фосфатидилсерином (13%). Кроме того, имеется около 2% фосфатидиловой

кислоты, 1% фосфатидилинозитола и 1% лизофосфатидилхолина. [4,17,83,100,189]. Фосфолипиды расположены в мембране асимметрично: в наружном слое преобладают сфингомиелин (более 85%) и фосфатидилхолин (65-75%), а во внутреннем - фосфатидилэтаноламин (80-85%) и фосфатидилсерин (более 96%) [46, 211].

Методом электрофореза в мембране Э обнаруживают около 15 основных мембранных белков с молекулярной массой от 15 до 250 кДа. В связи со способом расположения макромолекул в мембране эритроцита белки подразделяют на периферические (внутренние) и интегральные. Интегральные удерживаются в мембране. В их состав входят гликопротеины и протеолипиды. Функции интегральных белков разнообразны: они могут выступать в роли гидролитических ферментов, рецепторов клеточной поверхности, окислительно-восстановительных компонентов транспортной системы электронов и в качестве специфических белков входит в состав цитоскелета, который представляет собой двумерную сеть, соединенную непосредственно с мембраной эритроцита через взаимодействие с интегральными белками. Также к периферическим белкам относится ряд эритроцитарных ферментов [17].

Около 60% массы мембранных белков приходится на спектрин, гликофорин и белок полосы 3 (называется так по расположению этой белковой фракции на электрофореграмме относительно других белков) [148] .

Один из важнейших белков оболочки - это гликофорин. С внешней стороны к гликофорину присоединяются олигосахаридные группы (в основном сиаловая кислота) [9]. Олигосахариды гликофорина - антигенные детерминанты системы групп крови ABO. Гликопротеины мембраны содержат сиаловую кислоту, которая придает отрицательный заряд Э, отталкивающий их друг от друга [103].

На внутренней стороне оболочки находится спектрин - периферический мембранный белок, нековалентно связанный с цитоплазматической поверхностью липидного бислоя мембраны. Его основная роль заключается в

сохранении двояковогнутой формы Э, его способности изменять диаметр до 3-4 мкм при прохождении через капилляры, с последующим восстановлением исходного очертания, равно как и устойчивости к многочисленным механическим воздействиям, которым он подвергается в процессе выхода в кровообращение [17,19,190]. Он представляет собой длинную, тонкую, гибкую фибриллу и является основным белком цитоскелета Э. Спектрин состоит из а-и р-полипептидных цепей, имеющих доменное строение; а- и (3-цепи димера расположены антипараллельно, перекручены друг с другом и нековалентно взаимодействуют во многих точках. Спектрин может прикрепляться к мембране и с помощью белка анкирина. Этот крупный белок соединяется с р-цепью спектрина и цитоплазматическим доменом интегрального белка мембраны - белка полосы 3 [153,167,188].

Белок полосы 3 - анионтранспортный белок - один из основных интегральных белков эритроцитарной мембраны - является гликопротеидом с молекулярной массой 90 кДа. Этот белок принимает участие в обеспечении анионного транспорта, в связывании цитоскелетного каркаса с мембраной, цитоплазматических белков гемоглобина и глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы. Не все молекулы белка 3 взаимодействуют с анкирином. Если бы все молекулы белка 3 были связаны с анкирином и, следовательно, со всей спектриновой сетью, это исключило бы возможность латеральных перемещений самого белка, образования кластеров и транспортных функций.

Связь спектрина с мембраной осуществляется, вероятно, не только через анкирин, но также с помощью дополнительных взаимодействий.

Белковая сеть прикреплена к липидному бислою с помощью двух типов связей: между спектрином и анкирином, между белком полосы 4.1 и интегральным белком гликофорином [6,53]. Такое строение мембраны Э обеспечивает ее нерастяжимость, при этом мембрана способна сохранять целостность, подвергаясь большим сдвиговым и изгибным деформациям [121].

Анкирин представляет собой периферический мембранный белок.

Впервые он был обнаружен в Э в результате поисков участка связывания спектрина с мембраной. Белок полосы 2.1, в состав которого входит протеолитический 72 кДа фрагмент, получил название анкирин (от греческого слова ankyr, что означает "якорь"), а белки полос 2,2, 2,3 и 2,6, также содержащие этот фрагмент, но имеющие меньший молекулярный вес, были отнесены к семейству анкиринов [153].

Анкирин не только фиксирует спектрин на мембране, но и уменьшает скорость диффузии белка полосы 3 в липидном слое. Во взаимодействие актина со спектрином могут быть вовлечены и другие белки, обладающие спектринсвязывающей активностью: аддуцин, тропомиозин, тропомодулин, дематин [185].

Белки, образующие цитоскелет эритроцитов, неуникальны. Они или им подобные белки есть во многих других клетках. Преимущественная их локализация - вблизи мембран. Вероятно также, что рассмотренные белки могут быть полифункциональны и использоваться в структурных комплексах разного функционального назначения [28].

Таким образом, на цитоплазматической поверхности Э образуется гибкая сетевидная структура, которая обеспечивает сохранение их формы при прохождении через узкие капилляры сосудов.

Взаимодействие белкового цитоскелета с липидным бислоем мембраны обеспечивает стабильность структуры Э, поведение Э как упругого твердого тела при его деформации [163,165]. Нековалентные межмолекулярные взаимодействия белков цитоскелета легко обеспечивают деформабильность красных клеток крови при их прохождении через микроциркуляторное русло, при выходе ретикулоцитов из костного мозга в кровь - благодаря изменению расположения молекул спектрина на внутренней поверхности липидного бислоя [26,28].

Метаболизм Э характеризуется прежде всего гликолизом (анаэробное окисление), посредством которого и осуществляется энергетическое обеспечение клетки. Конечным продуктом гликолиза являются молочная

кислота и АТФ. Прекращение гликолиза приводит Э к «метаболической» смерти - процессу, конечный результат которого - гемолиз. Кроме того, до 30% глюкозы Э используется в пентозофосфатном цикле, результатом которого является синтез НАДФН2 - основного метаболита, обеспечивающего функционирование антиоксидантных систем в Э. Это очень важная система в Э, т.к. она предупреждает чрезмерное накопление свободных радикалов двухвалентного железа и кислорода, способных вызвать активацию ПОЛ эритроцитарной мембраны и гемолиз [84].

1.2. Механизм деформируемости эритроцитов

Одним из важнейших свойств Э является его способность к деформируемости. Она определяется его формой и способностью строения плазматической мембраны клетки, ее эластичностью, и обеспечивает тесный контакт со стенками капилляров и полноценный газообмен [27,50,92].

Двояковогнутая дискоидная форма способствует тому, что общая площадь поверхности Э увеличивается на 20% в сравнении со сферой такого же объема [50].

Прижизненная микроскопия показала, что Э, движущиеся в капилляре, подвергаются значительным деформациям, приобретая при этом разнообразные формы [137].

В соответствии с законами гидродинамики Э располагается в капилляре вдоль его оси, при этом его вращение прекращается, но деформация типа растяжения возрастает [56]. Нормальные Э способны значительно деформироваться, не меняя при этом своего объема и площади поверхности [9]. Эта особенность движения Э в потоке чрезвычайно важно для поддержания оптимальности процессов диффузии газов [90]. Показано, что улучшение свойств Э к деформируемости повышает перенос в ткани кислорода, а при их ухудшении поступление кислорода в ткани снижается, тканевое р02 падает [50]. Определяющее значение для деформируемости Э имеют вязкостно-эластичные

свойства мембраны, которые определяются, прежде всего, состоянием спектрино-актинового комплекса и его взаимодействием с другими структурными элементами мембраны. При добавлении к искусственным мембранам спектрина, на долю которого приходится около 75% всех белков мембраны, их свойства деформируемости улучшились более чем в 2 раза

Стабильность и деформабильность мембран Э во многом зависят от жесткости белковой сети цитоскелета, которую определяют межмолекулярные взаимодействия его белковых компонентов. Деформация сдвига, когда происходят изменения формы и линейных размеров клеток при постоянной величине площади поверхности мембраны, сопровождается изменением расположения молекул спектрина на внутренней поверхности липидного бислоя. При больших величинах усилия сдвига и, соответственно, значительных деформациях мембраны может произойти разрыв белковой сети цитоскелета в местах взаимодействия молекул спектрина (предел стабильности мембраны), что приводит к фрагментации мембран Э [128].

Механизм деформируемости Э, по-видимому, имеет энтропийную природу (рис.1) [49,121].

Рис.1. Молекулы спектрина формируют гексагональную сетку, которая прикреплена к молекулам анкирина (эллипсы). Волнистыми линиями условно показана тенденция к образованию спектриновыми молекулами клубков -«энтропийная пружина» (Свербиль В. П., Захаров С.Д.,2008)

[9,11,50].

Суть предложенной гипотезы состоит в следующем. В покоящейся клетке длинные спектриновые нити занимают наиболее энергетически выгодную пространственную конфигурацию, самопроизвольно сворачиваясь в клубки. С приложением нагрузки клубки разворачиваются, и конформационная энтропия понижается. При этом клетка деформируется, сохраняя площадь мембраны практически постоянной. После снятия сдвиговой нагрузки процесс повторяется в противоположном направлении, и Э принимает прежнюю форму [49].

В процессе циркуляции деформация Э осуществляется за счет сдвиговых напряжений, возникающих при течении крови по сосудам. В разных частях микроциркуляторного русла Э деформируется по-разному. В крупных сосудах они концентрируются вдоль оси и формируют зону с высоким гематокритом и большой скоростью течения, вытесняя тромбоциты и лейкоциты к стенкам сосуда [50,58,83]. В артериолах Э вытягиваются, и происходит явление, называемое «tank-treading», при котором мембрана клетки вращается вокруг своего содержимого. При этом в мембране практически нет сдвиговых напряжений, соответственно, затраты энергии на деформацию минимальны. В то же время в капиллярах микроциркуляции Э подвергается действию значительных сдвиговых напряжений (до 400 дин/см). Таким образом, высокая способность Э к деформации значительно уменьшает сопротивление течению крови по сосудам разного диаметра и необходима для обеспечения транспортной функции крови [11,83,154].

Большинство белков цитоскелета являются фосфопротеинами, это позволяет предполагать, что контроль за функциональным состоянием цитоскелета обеспечивается через изменение уровня фосфорилирования белковых компонентов. В Э выявлено наличие различных протеинкиназ [128]:

1. цАМФ-зависимая протеинкиназа, имеется как мембраносвязанная, так и цитозольрастворимая формы;

2. цАМФ - независимая протеинкиназа, для которой также характерно наличие двух форм - мембраносвязанной и цитозольрастворимой;

3. Кальцийзависимая протеинкиназа;

4. Протеинкиназа С.

В наибольшей степени фосфорилированы молекулы белков полос 3, 4.1, 4.9, спектрина, анкирина, аддуцина. В ходе протеинкиназных реакций в их молекулы включается до трех остатков фосфорной кислоты. Результатом увеличения уровня фосфорилирования белковых компонентов цитоскелета в большинстве случаев является уменьшение сродства между их молекулами [81,128,202].

Выявленная зависимость межмолекулярных взаимодействий белков цитоскелета от уровня их фосфорилирования позволяет говорить о наличии важного звена регуляции таких качественных характеристик мембран Э, как стабильность и деформабильность, опосредуемого через изменение активности протеинкиназных систем Э [128].

Наряду с уровнем фосфорилирования белков цитоскелета существенное влияние на характер их межмолекулярных взаимодействий оказывают ионы кальция. Действие кальция, по всей видимости, опосредуется через кальмодулин, поскольку эти эффекты блокируются антогонистами кальмодулина, например, такими, как трифлуоперазин. Наиболее вероятными мишенями для кальмодулина среди белков цитоскелета Э являются спектрин, белок полосы 4.1, аддуцин. Кальмодулин связывает молекулы спектрина с низкой активностью и имеет более высокое сродство к белку 4.1 [128,185]. Основной мишенью для кальмодулина среди белков цитоскелета являются молекулы аддуцина, к которым он проявляет наибольшую аффинность. Кальмодулин ингибирует спектрин - актин - белок 4.1 взаимодействия.

Концентрация кальция в цитозоле эритроцитов имеет величину менее 10"7 М [2] и обеспечивается за счет работы системы активного транспорта кальция -мембраносвязанной Са2+ - АТФазы, переносящей ионы кальция из цитозоля в плазму крови против градиента электрохимического потенциала. Са2+-АТФаза представляет собой трансмембранный белок с молекулярным весом 138 кДа. Характерной особенностью этого фермента является его активация

кальмодулином, который увеличивает сродство АТФазы к Са2+. Кальмодулин взаимодействует непосредственно с ферментом [7,128,193].

Увеличение концентрации кальция в цитоплазме приводит к изменению формы, снижению деформабильности и уменьшению продолжительности жизни эритроцитов [83,128]. Кальций и кальмодулин вызывают обратимое снижение стабильности мембран эритроцитов. Инкубация эритроцитов с ионофорами кальция при миллимолярных его концентрациях индуцирует сфероцитоз и уменьшение площади клеточной поверхности [128].

Концентрация кальция в эритроцитах определяется балансом между его активным транспортом из цитозоля в плазму крови и пассивным потоком в обратном направлении, последний будет лимитироваться активностью кальциевых каналов мембраны [2,86,96].

Таким образом, межмолекулярные взаимодействия белков цитоскелета определяют такие важные свойства мембран эритроцитов как их стабильность и деформабильность. На межбелковые взаимодействия существенное влияние оказывают ионы кальция и изменение уровня фосфорилирования молекул цитоскелета.

Необходимым условием существования любой биологической системы и в том числе человека, является адекватное обеспечение тканей кислородом. Кислород в процессе жизнедеятельности расходуется на энергетическое обеспечение органов и тканей, поддержание их функциональной активности, репаративно-пластические процессы, обеспечение защитно-приспособительных механизмов, то есть практически любой физиологический процесс требует наличия должного количества кислорода [122,175]. В свою очередь кислородная недостаточность организма (гипоксия), возникающая в результате неблагоприятного воздействия экзогенных и эндогенных факторов, приводит к метаболическим, функциональным и морфологическим нарушениям, вплоть до гибели биологической структуры [85,175]. Важной предпосылкой и в то же время следствием нарушения обеспечения органов и тканей человека кислородом является процесс старения. Возникающая с возрастом органно-

тканевая гипоксия служит причиной прогрессирования возрастных изменений, патогенетической основой и важным компонентом целого ряда заболеваний [69,97,122].

Определяющая роль в обеспечении адекватного кровоснабжения, а значит, обеспечения кислородом органов и тканей организма принадлежит системе микроциркуляции. Именно на уровне сосудов микроциркуляторного русла происходит транскапиллярный обмен кислорода, углекислого газа, субстратов и продуктов метаболизма, ионов, биологически активных веществ. Снабжение тканей кислородом является одной из наиболее ответственных функций системы микроциркуляции, так как запасов кислорода в организме нет. Поэтому состояние капиллярного кровотока должно жестко синхронизировать доставку кислорода относительно потребности в нем. Состоятельность указанного процесса зависит от структуры и количества микрососудов (артериол, прекапилляров, капилляров, посткапилляров, венул, артериовенулярных шунтов), способности приносящих артериол в достаточной степени реагировать на изменяющиеся потребности тканей в энергообеспечении, реологических свойств крови, ее тромбогенного потенциала [66,192]. Наряду с функциональным состоянием эндотелия, реологические свойства крови имеют значение для увеличения скорости капиллярного кровотока. Накопленные за последние десятилетия сведения свидетельствуют о том, что повышенная вязкость крови является независимым фактором риска самых различных заболеваний вследствие нарушения микроциркуляции. На уровне микроциркуляторного русла изменения вязкости крови и свойств эритроцитов особенно значимы, поскольку показано, что уменьшение вязкости крови в 2 раза на уровне крупного сосуда приводит к уменьшению вязкости в капиллярной системе в 6x109 раз. Так как сопротивление на уровне микроциркуляторного русла составляет 70% общего сосудистого сопротивления, реологические свойства крови имеют наибольшее значение на уровне микроциркуляции [62-66]. Основными факторами, создающими феномен вязкости крови, являются объемная концентрация

эритроцитов, свойства и состав плазмы, клеточная агрегация и деформируемость клеточных элементов [31,94,138,196,197]. Основным показателем, определяющим вязкость крови на уровне микроциркуляторного русла, является объемная концентрация и функциональное состояние Э [66,173]. От агрегационной активности и деформируемости зависит способность красных кровяных телец поддерживать гомогенный кровоток в капиллярном русле, а значит обеспечивать доставку кислорода тканям.

С биофизической точки зрения кровь — это гетерогенная многокомпонентная система корпускулярной природы, то есть суспензия, взвесь форменных элементов в коллоидном растворе белков, липидов и электролитов, которым является плазма крови. В системе микроциркуляции важнейшую роль в поддержании перфузии тканей играют реологические свойства крови, ее "текучесть". Всякой жидкости свойственно такое понятие, как "вязкость", поскольку столб жидкости перемещается по трубке не как единое целое, а отдельными слоями, которые сдвигаются относительно друг друга. Это так называемый ламинарный или слоистый ток, для которого характерно наличие прямой зависимости между движущей силой, которым является давление жидкости, и скорости ее передвижения. Вследствие наличия молекулярных сил сцепления между отдельными слоями потока развивается внутреннее трение, выраженность которого обусловливает вязкость жидкости. В результате отдельные слои будут смещаться с различной скоростью; наибольшая скорость характерна для центрального или осевого слоя, наименьшая — для пристеночного, скорость движения осевого слоя примерно в 2 раза больше, чем средняя скорость. В результате распределения скоростей отдельных слоев профиль потока приобретает параболическую форму [80]. При большой скорости потока после достижения критической точки поток теряет ламинарный характер и превращается в турбулентный, при котором утрачивается параллельный характер движения отдельных слоев, возникают завихрения. На их создание затрачивается значительная энергия, в результате чего при турбулентном характере потока теряется прямая зависимость между

его скоростью и величиной давления. Разница в скорости движения отдельных слоев, отнесенная к расстоянию между ними, называют "скоростью сдвига". Чем выше внутреннее сопротивление, то есть вязкость жидкости, тем выше необходимые затраты энергии для его преодоления и приведения жидкости в движение, это усилие носит название "напряжения сдвига". Поэтому отношение величины напряжения сдвига к величине скорости сдвига является мерой вязкости жидкости [80,83].

Способность Э изменять свою форму в ответ на деформирующее усилие определяет его ригидность, или деформируемость. Деформируемость Э в наибольшей степени зависит от состояния его мембраны [9,115,200]. Эластичность мембраны определяет ее сопротивление различного рода деформациям, в то время как вязкость мембраны характеризует сопротивление скорости деформации [83].

В норме Э обладают очень высокой деформируемостью, что определяется вязко-эластичными свойствами мембраны, высоким отношением площади поверхности к объему клетки и низкой вязкостью внутриклеточного содержимого [83,92]. Основные причины изменений деформируемости мембраны Э, наблюдаемых при различных патологических состояниях, могут быть условно разделены на три группы [35,83,176]:

1. Нарушения, возникающие при эритропоэзе (генетически обусловленные анемии, в том числе дефициты ферментов, серповидноклеточная анемия, наследственный сфероцитоз и эллиптоцитоз, талассемия, острая почечная недостаточность и т.д.)

2. Нарушения, возникающие в процессе циркуляции (действие плазменных факторов, иммунных комплексов, активированных лейкоцитов, химических или лекарственных соединений, инфекций, механических повреждений).

3. Комбинация 1 и 2.

Показано, что изменение реологических свойств Э является одним из важных патогенетических факторов в формировании многих тяжёлых

заболеваний. Так, увеличение ригидности клеток отмечается при сахарном диабете [20,41,51,57,67,72,73,159] и ряде онкологических заболеваний [33,34,37]. Нарушение агрегационной способности красных клеток крови сопровождает заболевания сердечно-сосудистой системы. У больных стенокардией выявлено достоверное увеличение способности клеток к образованию между собой комплексов с одновременным ростом, как вязкости цитоплазмы Э, так и вязкости крови в целом [16,25,26,38,48,106,129]. Выявлено снижение эластических свойств Э при заболеваниях крови [44,47].

Кроме того, многие авторы отмечают реологические нарушения при острой пневмонии [101], а также бронхолегочных заболеваниях [25,105]. В последние годы появились сообщения о снижении деформационных свойств красных клеток крови при ожирении [51] и в результате полученных ожоговых травм [114]. Определено значение коррекции реологических свойств Э в лечении больных с открытыми переломами конечностей [113]. Накопленные сведения свидетельствуют о том, что изменчивость реологических свойств Э влияет на симптоматику заболеваний, а также играет роль в контроле

эффективности лечения больных.

В этой связи особую актуальность приобретают исследования изменчивости реологических свойств Э. Результаты таких исследований могут способствовать более корректной оценке изменчивости реологических характеристик при патологии, более оптимальному влиянию на формирование количественных характеристик реологических свойств и одновременно служить источником новых знаний о морфофункциональном состоянии

эритрона.

1.3. Методы определения деформируемости эритроцитов

Э как физический объект характеризуется геометрическими размерами, показателем преломления и механическими свойствами, одним из основных среди которых является деформируемость. В связи с этим исследование различных характеристик Э, в частности, их размеров, формы и показателя преломления, при различных заболеваниях [18,21,22,24,36,210] представляет определенный теоретический и, несомненно, практический интерес. Динамика изменения геометрических параметров и появление регулярных структур Э при различных воздействиях позволяет говорить о возможности косвенного измерения механических параметров клеток - деформируемости.

Согласно литературным данным [9,13,83,131,147], деформируемость Э является одним из важных показателей, определяющих движение крови по капиллярам. Благодаря своей высокой деформируемости Э, имеющие в среднем диаметр 8 мкм свободно проходят через капилляры диаметром до 3 мкм, обеспечивая транспорт кислорода ко всем клеткам организма [49,50].

При анализе способов измерений деформируемости обычно различают прямые и косвенные методы [121]. «Прямые» методы включают измерения деформаций мембраны при различных способах закрепления Э в поле зрения микроскопа и при различных вариантах действия на него сдвигового напряжения. К ним относятся методы втягивания мембраны в микропипетку и растяжения Э, закрепленного на несиликонизированном стекле [172]. При этом изучают как механические свойства Э, так и их корреляции с другими факторами - размерами клеток, типом гемоглобина, возрастом и т.п. Достоинством прямых методов являются возможность анализа вязко-упругих свойств единичной клетки как целостной конструкции и простота интерпретации полученных результатов [121,191].

Пропускание эритроцитарной суспензии сквозь искусственный капилляр малого диаметра, или продавливание заданного объема суспензии через микропористый фильтр (метод фильтруемости) относятся к косвенным

методам. Минимальный диаметр трубки, по которому может проходить Э человека, легко принимающий форму цилиндра, составляет 3 мкм, а гидравлическое сопротивление при этом почти не превышает сопротивления чистой плазмы. Регистрируемыми параметрами, определяющими деформируемость Э, является «скорость фильтрации», «время полуфильтрации» и другие, называемые показателями «фильтруемости» [83,121].

Достоинствами «косвенных» методов является то, что непосредственно из измерений определяется способность клеток «протискиваться» по капиллярам периферийной кровеносной системы и, тем самым, оценивается способность Э снабжать ткани и органы кислородом. Благодаря существенному упрощению измерительной аппаратуры, эти методы до сих пор применяются в некоторых медицинских центрах и исследовательских лабораториях, занимающихся проблемами реологии крови. Однако интерпретация получаемых результатов и их связь с деформацией конкретных клеточных структур в данных измерениях весьма затруднена. Наблюдается сильная зависимость от объема клетки, ее формы, распределения Э по размерам. Серьезным недостатком «косвенных» методов является частое засорение пор

слабодеформируемыми Э [121].

Существует много методов измерения деформируемости красных клеток крови, различающихся по характеру воздействия на Э и по способам измерения:

- метод центрифугирования;

- метод фильтрации;

- микропипеточный метод; -реоскопия;

- метод дифрактометрии или эктацитометрии.

Метод центрифугирования относится к гравитационным методам. Сущность их состоит в центрифугировании исследуемого образца крови, при этом, чем дольше деформируемость Э, тем плотнее будет их «упаковка» после

центрифугирования. Достоинствами метода являются его простота и доступность. В то же время на процесс «упаковки» форменных элементов (в цельной крови) влияют и иные факторы - концентрация белков в плазме, наличие других форменных элементов (не эритроцитов) и т.д., что повышает погрешность методики [13].

Среди методов исследования деформируемости Э, одно из важнейших мест занимают фильтрационные методы, основанные на изучении особенностей протекания (фильтрации) суспензий Э через фильтры, с порами диаметром 3-5 мкм. В настоящее время существует много модификаций фильтрационных методов [13,50,83,99].

Измеряемые фильтрационными методами показатели являются интегральными, т.е. зависят сразу от нескольких клеточных параметров (объема клетки, отношения площади поверхности к объему, внутриклеточной вязкости, механических свойств) отдельных групп (субпопуляций) Э в исследуемой крови. Тем самым снижается информационная ценность измерений мембраны. Кроме того, исследование реологических свойств Э с помощью фильтрационных методов существенно осложняется неоднородностью популяции Э [83].

Принцип микропипеточного метода заключается в том, что Э всасывают в микропипетку с внутренним диаметром капилляра 3-3,5 мкм и измеряют геометрические параметры клетки (ее объем и площадь поверхности) и физические характеристики [83,205]. Измерительная система состоит из пневматического микроманипулятора, который создает необходимое отрицательное давление в капилляре. Прибор подсоединен к микроскопу с видеорегистрацией, измерительная система обеспечивает высокое временное и пространственное разрешение. Недостатком метода является то, что полученные результаты зависят не только от механических свойств мембраны клетки, но и от вязкости внутриклеточного содержимого. Сложность микропипеточных систем делает их малопригодными для использования в клинике. Существует метод определения деформируемости эритроцитов по

измерению скорости движения клетки по силиконовым микроканалам различной конфигурации. При визуальном наблюдении оценивают объем красной клетки крови, площадь его поверхности, концентрацию гемоглобина и скорость движения по каналу, т.е. деформируемость [83].

Все перечисленные способы определения деформируемости Э являются контактными, что сопряжено с риском неконтролируемых клеточных изменений и искажения результатов измерений.

Особое место занимает метод определения деформируемости Э -ротационная вискозиметрия, в котором в качестве приложенной нагрузки используется напряжение сдвига, действующее на клетки, движущиеся в сдвиговом потоке, а в качестве регистрируемого параметра - удлинение эритроцитов. Он относится к «прямым» методам, и обладает рядом преимуществ: бесконтактностью регистрации, физиологичностью силового воздействия. Способность Э к деформации уменьшает вязкость при высоких скоростях сдвига, когда клетки вытягиваются вдоль потока, значительно уменьшая гидродинамическое сопротивление [83,121,171].

Влияние на вязкость крови приложенного напряжения сдвига зависит от гематокрита. Если гематокрит меньше 12 %, вязкость не зависит от величины сдвигового напряжения. При скорости сдвига большей 200 с-1 вязкость крови меняется слабо и при дальнейшем увеличении выходит на стационарное значение, которое определяется вязкостью плазмы и способностью эритроцитов

к деформации [80,83].

Однако данное устройство не обладает высокой точностью, что обусловлено замыканием краев клетки на фотографии, сложностью конструкции и длительностью обработки результатов [121].

В последние два десятилетия для измерения деформируемости Э широко используется метод эктацитометрии [12-14, 92,121,198].

В 1975 году французскими исследователями в области молекулярной биологии Bessis М. и Mohandas N. был создан прибор эктацитометр. В основу прибора был заложен метод лазерной дифрактометрии или, как его назвали

авторы, эктацитометрии. В приборе использован оптический метод регистрации относительного удлинения клетки.

В 2001 году Белкин А.В. и соавторы [12,13] предложили усовершенствованный эктацитометр, в котором был применен новый подход в деформирующим воздействии на суспензию Э. Основным достоинством метода является возможность бесконтактного определения удлинения клетки с высокой точностью. Однако, помимо конструктивной сложности, что лишило возможности использовать эктацитометр в клиниках, он имеет принципиальный недостаток. Измеренные с его помощью параметры соответствуют фиксированному стационарному режиму («что залито в зазор, то и даст одну цифру»). Динамические характеристики Э, представляющие наибольший практический и фундаментальный интерес, не могут быть исследованы. Например, невозможно наблюдать переходные режимы при воздействии на Э физических факторов или химических препаратов. Характеристики Э усреднены по всем клеткам суспензии и позволяют оценивать только свойства основной массы клеток. Зарегистрировать появление малых примесей Э с измененными свойствами с помощью

эктацитометрии невозможно [83].

Для определения деформируемости красных клеток крови может быть использован ультразвуковой метод. Такая возможность базируется на наличии зависимости скорости распространения и затухания акустической волны от свойств вещества. По скорости ультразвука могут быть определены и упругие свойства Э. Также для исследования текучести крови и деформируемости Э, может быть использован метод ядерного магнитного резонанса [13].

В последние годы [1,70,71,203] для исследования деформируемости красных клеток крови используется оптический пинцет (optical tweezers) -оптический прибор, позволяющий удерживать и перемещать в пространстве микро- и наноразмерные объекты, захваченные в фокус лазерного луча.

Феномен удержания микроскопических частиц в луче лазера был впервые описан в 1970 году Артуром Эшкиным. А. Эшкин показал, что сильно

сфокусированный лазерный луч способен втягивать в себя небольшие объекты вблизи точки фокусировки. Лазерный пинцет позволяет манипулировать микроскопическими объектами с помощью лазерного света [1,70,158,186]. Свет позволяет прикладывать к диэлектрическим объектам силы от фемтоньютонов до наноньютонов и измерять расстояния от нескольких нанометров до микронов. Благодаря способности манипулировать субмикроскопическими объектами вплоть до атомов и измерять пиконьютонные силы и нанометровые перемещения оптический пинцет рассматривается как один из важнейших инструментов для нанотехнологий.

Принцип работы лазерного пинцета состоит в том, что оптически прозрачные микрочастицы, имеющие размеры больше длины волны падающего света (например, полистирольные и латексные шарики диаметром около 1 мкм, живые клетки) одновременно отражают и преломляют свет лазера, что приводит, к возникновению сил отталкивания частиц в направлении от источника света и одновременно сил, возвращающих частицу в исходное положение. При помещении частицы в фокус луча лазера эти силы уравновешиваются, и частица попадает в ловушку. Ее смещение от этого положения вызывает появление дополнительной силы, возвращающей частицу обратно. В современных оптических ловушках и пинцетах используется один или несколько лазеров и акустооптические преобразователи, позволяющие создавать стационарные и подвижные ловушки и работать с несколькими объектами сразу [70,164,166,174].

Молекулярные пинцеты из лазерных лучей широко применяются в современных исследованиях. Их технологии постоянно совершенствуются. Сейчас в мире несколько десятков научных групп с помощью этого инструмента проводят опыты по реконструкции внутриклеточных процессов.

1.4. Микроциркуляторное русло и его исследование методом лазерной допплеровской флоуметрии

Гемореология изучает течение и деформацию крови и ее элементов и их взаимодействие с сосудистым эндотелием в потоке [94,98]. Состояние кровотока в капиллярах и близлежащих кровеносных сосудах представляет огромный интерес. Его изучение важно в практическом отношении для раскрытия особенностей патогенеза различных нарушений кровообращения [64,110]. Совокупность микрососудов, составляющих структурно-функциональную единицу микроциркуляторного (терминального) русла, реализует основную функцию сердечно-сосудистой системы — обеспечение тканевого гомеостаза [108,110].

Микроциркуляцией называют взаимодействие между током крови и биологической тканью на уровне мельчайших структурно-функциональных единиц системы кровообращения. Благодаря ей осуществляются различные клеточные функции. В современном понимании, микроциркуляция включает [65]:

а) движение крови в капиллярах и прилежащих к ним микрососудах (микрогемоциркуляция);

б) движение лимфы в начальных отделах лимфатического русла;

в) движение жидкости во внеклеточном (интерстициальном) пространстве. Взаимообусловленность этих процессов является необходимой основой для поддержания жизнедеятельности органов и тканей.

Условия движения крови в микрососудах существенно отличается от таковых в крупных артериях и венах. Свойства крови как корпускулярной жидкости, состоящей из плазменной и клеточной фракций, отчетливо проявляются в микрососудах меньше 200 мкм в диаметре, т.е. в тех сосудах, которые составляют микроциркуляторное русло. С кинематическим взаимодействием движущихся Э и их деформацией в капиллярах связан известный феномен Фареуса-Линдквиста [64]: снижение гематокрита и

кинематической вязкости крови по мере приближения к самой узкой части микроциркуляторного русла - капиллярам. В силу корпускулярных свойств крови, в микроциркуляторном русле возникает ряд специфических реологических внутрисосудистых эффектов, таких как внутрисосудистая агрегация Э, временная закупорка устьевых отделов микро сосудов относительно ригидными лейкоцитами или появление плазматических капилляров, заполненных только плазмой крови. Эти феномены характерны только для микрососудов, а их выявление важно для диагностики состояния микроциркуляции [62].

Микроциркуляторное русло является одной из тех важнейших систем, в которых заболевания проявляются на ранних стадиях. Следует подчеркнуть при этом, что нарушения микроциркуляции могут быть не только вторичными, но и являться первопричиной многих заболеваний, определяя в дальнейшем их исход [199,209,149].

Большое число заболеваний неразрывно связано с теми или иными нарушениями отдельных звеньев микроциркуляции. Среди них атеросклероз и гипертензия, эндотоксемия и сепсис, эндотелиальная и эректильная дисфункции [106,151,188], диабетическая нефропатия и тромботическая микроангиопатия, венозная недостаточность, острый панкреатит и даже болезнь Альцгеймера, а также многие другие [108,119,123,124].

Среди методов изучения микроциркуляции, применяемых в клинической практике достаточно широко используется метод лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ). Сущность метода лазерной допплеровской флоуметрии заключается в зондировании ткани лазерным излучением с последующей обработкой отраженного от ткани излучения на основании выделения из зарегистрированного сигнала допплеровского сдвига, пропорционального скорости движения эритроцитов. В ходе проводимых исследований обеспечивается регистрация изменения потока крови в микроциркуляторном русле - флоуметрия [75,145].

При взаимодействии лазерного излучения с тканью отраженный сигнал имеет две составляющие: постоянную и переменную. Постоянный сигнал обусловлен отражением от неподвижных структур зондируемой ткани. Переменный сигнал связан с движущимися частицами - Э [63]. Отраженное от статических (неподвижных) компонентов ткани лазерное излучение не изменяет своей частоты, а отраженное от подвижных частиц (Э) имеет допплеровское смещение частоты относительно зондирующего сигнала. Переменная составляющая отраженного сигнала, пропорциональная мощности спектра допплеровского смещения, определяется двумя факторами: концентрацией Э в зондируемом объеме и их скоростью [63,66].

Регистрируемый при ЛДФ сигнал характеризует кровоток в микрососудах в объеме 1-1,5 мм3 ткани. Это означает, что в коже человека ЛДФ дает интегральную информацию по очень большому объему Э, около 3,4x104, одновременно находящихся в зондируемом объеме ткани [63].

Характеристика тканевого кровотока, регистрируемого при ЛДФ, представляет собой параметр микроциркуляции, который является функцией от концентрации Э в зондируемом объеме ткани (№р) и их усредненной скорости (Уср) [40]. Фактически величина ПМ представляет собой уровень перфузии единицы объема ткани за единицу времени и измеряется в относительных единицах (пф.ед.) [75]. Однозначно параметр микроциркуляции интерпретировать затруднительно. С одной стороны, чем больше этот параметр, тем выше уровень перфузии ткани, а с другой стороны, большее значение параметра микроциркуляции может быть сопряжено с явлением застоя крови в венулярном звене микроциркуляторного русла, т.к. значительный вклад в ЛДФ-сигнал (около 60%) дают Э из венулярного звена. Вместе с тем, в регистрируемом ЛДФ-сигнале закодирована информация о различных колебаниях потока Э как по их скорости, так и по объемному содержанию [62-66].

Составной частью ЛДФ-метрии является анализ различных колебаний кровотока по частоте и амплитуде зарегистрированных в ЛДФ-грамме [75].

Временная изменчивость кровотока, по сути своей, есть объективная характеристика уровня жизнедеятельности тканей. Ритмы колебательных процессов в системе микроциркуляции и их соотношения имеют важную диагностическую значимость. Так, потеря или, напротив, появление в допплерограмме тех или иных колебаний напрямую связано с определенными симптомами расстройства периферического кровотока и нарушением трофики в тканях [63].

Ритмические колебания кровотока и их изменения позволяют получить информацию об определенных соотношениях различных механизмов, определяющих состояние микроциркуляции.

По мнению ряда авторов [65,95,127], ЛДФ в большей мере характеризует периодические изменения перфузии тканей кровью, которые могут протекать с разной частотой и амплитудой. Как оказалось, кровоток на микроциркуляторном уровне не является абсолютно стабильным феноменом, а подвержен временным и пространственным вариациям [3,136,137].

Влияние активных и пассивных факторов на поток крови приводит к изменению скорости и концентрации потока Э. Активные механизмы создают поперечные колебания кровотока в результате чередования сокращения и расслабления мышц сосудов (сменяющие друг друга эпизоды вазоконстрикции и вазодилатации). Пассивные факторы организуют продольные колебания кровотока, выражающие в периодическом изменении объема крови в сосуде. В артериолах характер изменения объема определяется пульсовой волной, в венулах - рабочим ритмом «дыхательного насоса» [74,75].

Метод ЛДФ позволяет оценить уровень периферической перфузии, позволяет исследовать и оценивать механизм активной и пассивной модуляции тканевого кровотока, выявить особенности состояния и регуляции кровотока в микроциркуляторном русле, что важно при дифференцированном подборе терапии [66].

К преимуществам метода ЛДФ относится: высокая чувствительность к изменениям в микрогемодинамической ситуации в сосудистом русле;

неинвазивность; безвредность проведения исследований у человека; получение максимальной информации о нарушениях регуляторных механизмов, которые подлежат коррекции; отсутствие ограничений на выбор тестируемой области, так как световодный зонд может быть установлен практически на любой участок поверхности кожи в зависимости от задач исследования перфузии.

Метод ЛДФ применяют при диагностике микроциркуляторных изменений кровотока при онкологических заболеваниях кожи, при оценке микрогемодинамики, при различных заболеваниях сердечно-сосудистой системы и оценке эффективности терапии [108,127,160].

Заключение диссертации по теме «Физиология», Горис, Анна Пятрас

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что в зависимости от возраста человека изменяется деформируемость эритроцитов: в группе молодых людей зафиксирована максимальная способность к деформации эритроцитов (40,3%), в группе пожилых людей - минимальная способность к деформации эритроцитов (19,6%).

2. Возрастные изменения мембран эритроцитов заключаются в увеличении вязкости липидного бислоя (индекс микровязкости снижается за период с 20-29 лет до 50-59 лет на 69,2%) и повышении процентного содержания скелетных белков (спектрина на 52,7%), что определяет снижение деформируемости эритроцитов.

3. Установлена взаимосвязь между возрастными изменениями деформируемости мембран эритроцитов и состоянием регионарного кровотока, что выражается в изменении параметров тканевой микроциркуляции: у лиц старших возрастных групп по сравнению с более молодыми людьми снижается объем перфузии (на 43,8%), объем фракции эритроцитов, проходящих в единицу времени через микрососуды (на 59,3%), индекс удельного потребления кислорода в тканях (на 6,6%), а индекс перфузионного насыщения кислорода и показатель шунтирования в микрокровотоке возрастают (на 50,0% и 76,9% соответственно).

4. Выявлено, что на фоне гипоксии и изменения рН у лиц старших возрастных групп отмечается уменьшение деформируемости мембран эритроцитов, что выражается в увеличении количества «ригидных» красных клеток крови: у лиц старше 40 лет - до 41,7%, у лиц старше 50 лет - до 67,0%.

5. Установлено, что воздействие температурного фактора до 38°С у лиц старших возрастных групп приводит к увеличению числа «ригидных» клеток до 41,3% и 60,2%; при гипертермии в 40°С - до 51,3% и 68,9 % соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки качества эритроцитарной массы и донорской крови, а также для проверки ее годности на фоне хранения рекомендуется использовать изучение деформируемости красных клеток крови с помощью методики «лазерный пинцет».

2. Степень изменения структурно-функциональных клеток крови с возрастом должна учитываться при лечении состояний, связанных с гипоксиями. Возрастание доли «жестких» эритроцитов свыше 40,7% в возрасте 40-49 лет и свыше 64,0% в возрасте старше 50 лет должно расцениваться как неблагоприятный признак, ухудшающий реологические свойства крови, что должно корригироваться схемами лечения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Горис, Анна Пятрас, 2012 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абрамочкин Е.Г., Волостников В.Г., Котова С.П. и др. Манипуляция микрообъектами с использованием лазерных пучков с ненулевым орбитальным моментом // Лазерная физика. - 2006. -N 5. - С. 1-7.

2. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. - М.: Наука, 1994. -285 с.

3. Анищенко B.C. Знакомство с нелинейной динамикой. - ЛКИ, 2008. -224с.

4. Антонов В.Ф. Структура биомембран. Липидные поры // Соровский образов, журн. - 1998. - № 10 (35). - 13 с.

5. Артамонов Р. Г. Алиментарная метгемоглобинемия // Медицинский научный и учебно-методический журнал. - 2004. - № 18. - С. 70-73.

6. Артюхов В.Г., Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами // Воронеж: ВГУ, 2000. - 296 с.

7. Атауллаханов Ф.И., Витвицкий В.М., Кияткин А.Б., Пичугин A.B. Регуляция объема эритроцита человека. Роль активируемых кальцием калиевых каналов //Биофизика. - 1993. -№5. - С.809-821.

8. Баимбетова И.А., Бахтиярова Ш.К., Колбай И.С. и др. Физиология адаптации //Материалы науч. конф. - Волгоград, 2008. - с.32-36.

9. Байбеков И.М., Мавлян-Ходжиев Р.Ш., Эрстекис А.Г., Москвин C.B. Эритроциты в норме, патологии и при лазерных воздействиях. - Тверь: «Изд-во Триада», 2008. - 256 с.

10. Бархина Т.Г., Никитина Г.М., Бархина М.М., Черных A.C. Патология мембран форменных элементов крови при заболеваниях и в эксперименте // Успехи современного естествознания. - 2006. - № 6 - С. 64-65.

11. Баталова Е А. Анализ комплекса факторов, определяющих текучесть крови и ее транспортный потенциал: Автореф. дис. канд. биол.наук. -Ярославль, 2010. - 24с.

12. Белкин A.B., Марьинских В.В., Сайфиев P.P., Шалабодов А.Д. Эктацитометрия. Новые технические решения. Новые перспективы // Сборник тезисов научных работ: «Физика в биологии и медицине». -Екатеринбург, 2001. -С.10-11.

13. Белкин A.B., Марьинских В.В., Сайфиев P.P., Шалабодов А.Д. Оценка деформируемости эритроцитов различной степени зрелости // Тезисы докладов: «XVIII Съезд физиологического общества им. И.П, Павлова». -Казань, 2001. -309 с.

14. Белкин A.B., Марьинских В.В. и др. Исследование вязкоэластических свойств мембран эритроцитов крыс с различным уровнем двигательной активности и ихреакция на стрессы различной этиологии // Вестник Тюменского Государственного Университета. -2007. -№ 3. - С. 234-239.

15. Белоусова Е.В. Вклад плазменных и клеточных факторов в реализацию транспортного потенциала крови: Автореф. дис. канд. биол.наук. - Ярославль, 2009. - 22 с.

16. Белоусова Е.В. Оценка состояния микроциркуляции пациентов с ишемической болезнью сердца и здоровых лиц методом ЛДФ //Материалы четвертой Всероссийской научн. конф. с международн. участием «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии». - Москва, 2009.-С. 184-185.

17. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 2002. - 704 с.

18. Бессмельцев С.С., Скворцова Ю.А., Тарлыков В.А. Исследование жёсткости мембран эритроцитов у больных с множественной миеломой на фоне терапии, включающей лечебный плазмаферез // Эфферентная терапия. -2000.-Т. 6, № 1. - С. 36-41.

19. Бобынцева О. В. Количественное содержание липидов и белков клеточных мембран эритроцитов и их корреляционные взаимосвязи у человека: Автореф. дис. канд. биол.наук. - Курск, 2006. -23 с.

20. Бондарь Т.П., Козинец Г.И. Морфофункциональное состояние эритроцитов периферической крови при поздних сосудистых осложнениях сахарного диабета типа 2 (обзор литературы) // Клинич. лаб. диагностика. -2002.-№ 12.-С. 22-34.

21. Будяков C.B., Конопля H.A., Гаврилюк В.П., Конопля А.И. Структурно-функциональные свойства эритроцитов у больных с гнойным верхнечелюстным синуситом // Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье". - 2010. - № 3. - С. 64-69.

22. Бутусова В. Н. Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях: Автореф. канд..мед.наук. -Новосибирск,2007. - 24 с.

23. Ванин А. Ф. Оксид азота: регуляция клеточного метаболизма без участия системы клеточных рецепторов // Биофизика. - 2001. - Т. 46, №4. - С. 631 -641.

24. Верболович В.П. Изменение структуры мембран эритроцитов при некоторых патологических состояниях по данным инфракрасной спектрометрии // Клиницист. - 1995. - № 2. - С. 30-35.

25. Ветчинникова О.Н., Плаксина Г.В., Горенков Р.В. Реологические и морфологические показатели крови в оценке тяжести течения и эффективности лечения бронхолегочных и сердечно-сосудистых заболеваний // Гематология и трансфузиология. - 2002. - № 5. - С. 29-33.

26. Ганелина И.Е., Денисенко А.Д., Катюхин JI.H. Липиды плазмы крови и реологические свойства эритроцитов у больных со стабильной стенокардией // Кардиология. - 2000. - Т. 40, № 8. - С. 62-63.

27. Гареев P.A. Концепция адсорбционно-транспортной функции эритроцитов //Материалы 5 съезда физиологов Казахстана. - Караганда, 2003 -С 75- 79.

28. Геннис Р. Биомембраны. Молекулярная структура и функции. - М.: Мир, 1997.-622 с.

29. Герасимов Н.Ю., Голощапов А.Н., Бурлакова Е.Б. Структурное состояние мембран эритроцитов человека с болезнью Альцгеймера // Химическая физика. - 2009. - Т.28, № 7. - С. 82-86.

30. Гольдберг Е. Д., Дыгай A.M., Шерстобоев Е.Ю. Механизмы локальной регуляции кроветворения / Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, Е. Ю. Шерстобоев // Институт Фармакологии ТНЦ СО РАМН. Томск. - 2000. - 148 с.

31. Голубкова Е.В. Оценка взаимосвязи агрегируемости эритроцитов и их мембранных свойств / Е.В. Голубкова, И.А. Тихомирова, A.B. Муравьев, Е.П.Петроченко, С.Г. Михайлова // «Регионарное кровообращение и микроциркуляция». - 2007. - № 2(22). - С. 24-29.

32. Горенков Р.В., Карпов В.Н., Рогаткин Д.А., Шумский В.И. Хроническая гипоксия как один из факторов повышенной флуоресценции эндогенных порфиринов в живых биологических тканях //Биофизика. - 2007. - Т.52, №4. -С.711-717.

33. Горошинская И.А., Глотина Л.Ю. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови у онкологических больных //Вопросы мед. химии. - 1999. - Т. 45, № 1. - С. 53-57.

34. Гунина Л.М. Роль изменений структурно-функционального состояния мембраны эритроцита в развитии анемии у больных раком желудка / Л.М. Гунина, А.П. Кабан, В.Б. Коробко // Онкология. -2000. -Т. 2, №4.-С. 247-249.

35. Гущин А.Г. Гемореологическая эффективность применения плазмафереза в сочетании с гемодилюцией и лейкосупрессией / А.Г. Гущин, C.B. Майнугин, В.А. Шабалин, И.Е. Виноградов, C.B. Сажина // Мат. международн. конф. по гемореологии и микроциркуляции. - Ярославль, 2003. - С. 58.

36. Гущина Ю.Ю., Плескова С.Н., Преснухина Н.Г. и др. Морфометрический СЗМ-анализ клеток крови в норме и при альтерациях //Электромагнитные поля в биологии и медицине. - 2006. - С. 24-33.

37. Давыдовский А.Г. Проблема «молекулярного износа и старения» эритрона при противоопухолевой химиотерапии // Онкологический журнал. 2007. - №2. - с. 26-29.

38. Денисов E.H. Изменение параметров циркулирующих эритроцитов у больных артериальной гипертензией // Вестник ОГУ. - 2006. - №4 - С.127-129.

39. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеидов. - М.: Наука, 1989. - 277 с.

40. Добротина H.A., Копытова Т.В., Щелчкова H.A. Характеристика функционального состояния мембран эритроцитов при эндогенной интоксикации у больных хроническими распространенными дерматозами // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 2 - С. 39-43.

41. Додхоев Д.С., Евсюкова И.И., Бородина B.JÏ. Особенности проницаемости эритроцитарных мембран и сорбционной способности эритроцитов у новорождённых и их матерей, больных сахарным диабетом // Педиатрия. Журн. им. Сперанского. - 1999. - № 5. - С. 12-16.

42. Дубинина Е.Е., Пустыгина A.B. Окислительная модификация протеинов, ее роль при патологических состояниях // Укр. биохим. журн. - 2008. - Т. 80, № 6.-С. 5-18.

43. Ермолаев Ю.А. Возрастная физиология - М.: Высшая школа, 1985. -384с.

44. Ершова Л.И., Лиховецкая З.М., Курбанова Г.Н. Патогенетические аспекты гемолиза и изменений реологических свойств крови при наследственном гемохроматозе // Терапевт, арх. - 1998. - Т.70, № 11 - С.74-76.

45. Ефимов A.A., Маслякова Т.Н. О роли липофусцина в инволютивных и патологических процессах // Саратовский научно-медицинский журнал. -2009. -Т. 5, № 1.-е. 111-115.

46. Журавлева Т.Д., Долгов В.В., Суплотов С.Н. и др. Особенности липидного состава мембран эритроцитов у здоровых людей разного возраста // Клинич. лаб. диагностика. - 2003. - №5. - С. 50-52.

47. Замышляев A.B. Реологические свойства крови у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией: автореф. дис. канд. биол. наук. -Ярославль, 2002. -22 с.

48. Зарубина Е.Г. Структурно-функциональные эритроцитарные нарушения у больных инфарктом миокарда и их коррекция: Автореф. докт. мед. наук. -Москва, 2002 - 35 с.

49. Захаров С.Д. Энтропийная упругость живой клетки (эритроцита) // Краткие сообщения по физике ФИАН. -1986. - №2. - С. 1-3.

50. Зинчук В.В. Деформируемость эритроцитов: физиологические аспекты // Успехи физиологических наук. - 2001. - Т. 32, № 3. - С. 64-76.

51. Зорина Н.В., Пахрова O.A., Шаалали Н., Орлов Р.Б. Гемореологические нарушения у больных с метаболическим синдромом //Вестн. Ивановской медицинской академии. - 2009. - Т. 14. - Приложение. - С. 42.

52. Зубаиров Д.М., Г.И. Свинтенок, И.А. Андрушко. Нарушение липидной асимметрии при термогемолизе эритроцитов человека // Гематология и трансфузиология. - 2003. - Т48,№3. _ С.33-35.

53. Ивенс И., Скейлак Р. Механика и термодинамика биологических мембран -М.: Мир, 1982.-257 с.

54. Капышева У.Н., Колбай И.С., Куанышбекова Г.А., Байдалинов А.И. Зависимость стрессоустойчивости у крыс от типа высшей нервной деятельности // Известия HAH PK. Сер.биол. и мед. - 2004. - № 2. - С.49-56.

55. Кармен Н.Б., Абдуллаева М.А., Токарева JI.B Окислительный стресс в формировании гипоксии при тяжелой бронхиальной астме // Пульмонология -2011. - Т. 12, №2. - С. 665-678.

56. Катюхин Л.Н. Реологические свойства эритроцитов. Современные методы исследования // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 1995. - Т. 81, № 6. - С. 122-129.

57. Киричук В.Ф. Изменения микроциркуляторного гомеостаза и реологии крови при сахарном диабете / В.Ф. Киричук, Н.В. Болотова, Н.В. Николаева // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2004. -№ 4. - С. 12-19.

58. Клебанов Г.И., Рогаткин Д.А., Терещенко С.Г. // Биофизика. - 2004. -Т.49, Вып. 5. - С.941-947.

59. Кленова H.A. Биохимические механизмы дезинтеграции эритроцитов человека в различных условиях функционирования: Автореф. дис. д-ра биол. наук. - Тюмень, 2003.-35 с.

60. Кленов P.O. Действие адреналина, цАМФ и АТФ на образование пептидов возрастными фракциями эритроцитов: Автореф. дис. канд. биол. наук. -Уфа, 2010.-24 с.

61. Козинец Г.И., Высоцкий В.В., Погорелов В.М. Кровь и инфекция. - М.: Триада-фарм, 2001. - С. 182.

62. Козлов В.И., Кореи JI.B., Соколов В.Г. Анализ флуктуаций капиллярного кровотока у человека методом лазерной допплеровской флоуметрии. // В кн.: «Применение лазерной допплеровской флоуметрии в медицинской практике» Материалы I Всероссийского симпозиума. - Москва, 1996 - с.38-47.

63. Козлов В.И. Метод лазерной допплеровской флоуметрии: пособие для врачей / В.И. Козлов и (др.). - М., 2001. - 22 с.

64. Козлов В.И. Гистофизиология системы микроциркуляции /В.И.Козлов // Регионарное кровообращение и микроциркуляция.-2003.-Т.2, №4. - С.79-85.

65. Козлов В.И. Компьютерная TV-микроскопия сосудов коньюктивы глазного яблока в оценке состояния микроциркуляции крови / В.И. Козлов, Г.А. Азизов, О.А.Гурова. - М.,2004. - 30 с.

66. Козлов В.И. Система микроциркуляции крови: клинико-морфологические аспекты изучения /В.И.Козлов// Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2006. - Т.5. - С.84-85.

67. Колосова М.В., Новицкий В.В., Степовая Е.А. Состав липидов мембран эритроцитов и их биофизические характеристики у детей с инсулинзависимым сахарным диабетом в процессе терапии // Клиническая лабораторная диагностика. -2001. -№ 1. - С. 10-12.

68. Конопля А.И. Взаимосвязь структуры и функции эритроцитов с иммунным гомеостазом. - Курск: КГМУ, 2008. - 40 с.

69. Коркушко О.В. Значение изменения отдельных показателей внутрисосудистого гомеостаза в развитии циркуляторной гипоксии при

старении / О.В.Коркушко, В.Ю.Лишневская // Успехи геронтологии. - 2002, № 9.-С. 262.

70. Коробцов A.B. Развитие методов лазерного микроманипулирования с использованием полей со сложной структурой: Автореф. дис. канд. физ.-мат..наук. - Самара, 2009 - 19 с.

71. Коробцов A.B., Котова С.П., Лосевский H.H. и др. Применение лазерного пинцета для изучения механических свойств эритроцитов //Известия Самарского науч.центра Российской академии наук. -2009. -Т. 11, №3 - с.76-81.

72. Кравец Е.Б., Яковлева Н.М., Рязанцева Н.В. Особенности микрореологических свойств эритроцитов при сосудистых осложнениях сахарного диабета типа 1 // Сахарный диабет. -2005, № 1. - С. 14-17.

73. Кравец Е.Б., Рязанцева Н.В., Яковлева Н.М. и др. Молекулярные нарушения мембран эритроцитов и тромбоцитов при сосудистых осложнениях сахарного диабета типа 1 //Бюллетень сибирской медицины-2006, №4.-с. 33-41.

74. Крупаткин А.И., Сидоров В.В., Меркулов М.В. и др. Функциональная оценка периваскулярной иннервации конечностей с помощью лазерной допплеровской флоуметрии //Пособие для врачей. М.: Медицина, 2004. - 26с.

75. Крупаткин А.И., Сидоров В.В. Лазерная допплеровская флоуметрия микроциркуляции крови// Руководство для врачей М.: Медицина, 2005.-256с.

76. Крылов В.Н., Дерюгина A.B., Плескова С.Н. Электрофоретическая подвижность и морфометрия эритроцитов крыс при стрессовых воздействиях // «Современные технологии в медицине». - 2010. - № 4. - С. 23-26.

77. Кублинская М.М. Изменения структуры мембраны эритроцитов при физиологическом старении и болезни Альцгеймера: Автореф. дис. канд. мед.наук. - Томск, 2002. - 22 с.

78. Кулапина О.И., Киричук В.Ф., Утц И.А. и др. Проницаемость мембран эритроцитов с инфекционной патологией //Серия. Критические технологии. Мембраны. - 2005. - № 1 (25). - С.3-11.

79. Курилович С.А., Кручинина М.В., Генералов В.М. и др. Электрические параметры и структура мембран эритроцитов при диффузных заболеваниях

печени // Рос.журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. - Т.19, №2. - С.30-36.

80. Левтов В. А., Регирер С. А., Шадрина H. X.. Реология крови. М.,: Медицина, 1982. - 272 с.

81. Лесникова Л.Н. Стрессорные изменения физиологических свойств эритроцитов и их коррекция с помощью экстракта из туники асцидии пурпурной (Halocynthia auranitum): Автореф. дис. канд. биол.наук. -Владивосток, 2006.-22 с.

82. Лимарев В.А. Особенности дезорганизации липидной и фосфолипидной компоненты мембран лимфоцитов при сочетанном течении хронического обструктивного заболевания легких и анемии у лиц, пере-несших туберкулез легких // Украшський медичний альманах. - 2010. - Том 13, №1. - С. 72-74.

83. Лисовская И.И. Популяционная характеристика эритроцитов человека в норме и патологии; фильтрационно-осмотические методы исследования деформируемости: Автореф.дис. д-ра биол.наук. - Москва, 2004. - 25 с.

84. Луговская С. А., Морозова В. Т., Почтарь М.Е., Долгов В. В. Лабораторная гематология. М.: «Триада», 2006. - 222 с.

85. Лукьянова Л.Д. Роль биоэнергетических нарушений в патогенезе гипоксии // Патол. физиол. и экспер. терапия. - 2004. - № 2. - С. 2-11.

86. Маймистова A.A., Кошелев В.Б., Булаева C.B., Муравьев A.B. Изменение агрегации и деформируемости эритроцитов при активации внутриклеточных сигнальных путей//Ярославский педагогический вестник. -2010.-№3-С. 71-74.

87. Макшанова Г.П. Изменение проницаемости эритроцитарных мембран и показателей липидного обмена у больных с политравмой при раннем и отсроченном оперативном лечении //Физиология человека. - 2003. - №29 (1) -С.96-98.

88. Малкина-Пых И.Г. Возрастные кризисы взрослости. М.: «Эксмо», 2005. -416 с.

89. Мансуров В.А., Ямайкина И.В., Ивашкевич Э.В. Температурная денатурация спектрина эритроцитов: реология, деформируемость и детергентустойчивость // Биофизика. -1997. - Т. 42, № 3. - С. 675-679.

90. Медведев М.А., Коваль Г.С., Рязанцева Н.В. и др. Физиологическое распределение эритроцитов на уровне дуги аорты по данным цитометрического и спектрафлуориметрического исследований //Вестник Томского государственного университета. - 2007. - №2. - С. 170-171.

91. Миллер K.JL, Сергеев И.В., Дворецкий Д.П. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения красной области спектра на осмотическую резистентность и деформируемость эритроцитов // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2008. - Т.7, № 1(25). - С.26-30.

92. Мищук И.И. Нарушение деформируемости эритроцитов. Обзор.// Анестезиол. Реаниматол. - 1993. - № 2. - С.72-74.

93. Муравлёва J1.E., Молотов-Лучанский В.Б., Клюев Д.А., Колесникова Е.А., Демидчик Л.А., Калина A.C. Физико-химические параметры эритроцитов в условиях термоиндукции. // Современные проблемы науки и образования (Электронный журнал). - 2011. - № 4.

94. Муравьев A.B. Вне- и внутриклеточные механизмы изменения агрегации эритроцитов/А.В.Муравьев, А.А.Муравьев // Физиология человека. -2005. -Т.31,№4. - С. 1-5.

95. Муравьев A.B. Гемореология: перспективы развития /A.B. Муравьев и (др.) // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2007. -Т.5,№4.-4 с.

96. Муравьев A.B., Тихомирова И.А и др. Изменение микрореологических свойств эритроцитов с возрастом: роль Ca //Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2007. - Т. 6, № 24- С.60-63.

97. Муравьев A.B., Тихомирова И.А., Круглова Е.В. и др. Анализ изменений деформируемости эритроцитов в норме и при патологии //Тромбоз, гемостаз и реология. - 2008. -N 4. - С.22-27.

98. Муравьев, A.B., Чепоров, C.B. Гемореология (экспериментальные и клинические аспекты реологии крови) [Текст]: монография / A.B. Муравьев, C.B. Чепоров,- Ярославль: Изд-во ЯГПУ, 2009. - 54 с.

99. Муравьев A.A., Муравьев A.B., Тихомирова И.А. и др. Методы изучения деформируемости эритроцитов в эксперименте и клинике //Клиническая лабораторная диагностика. - 2010. -N 1. - С. 32-35.

100. Новгородцева Т.П., Абакумов А.И., Сорокина JI.B. Методы многомерной статистики и диагностическое значение жирных кислот эритроцитов при сердечно-сосудистых заболеваниях // Клинич. лаб. диагностика. - 2001. - № 3. -С. 8-12.

101. Новицкий В.В., Колосова М.В., Степовая Е.А. Показатели обратимой агрегации эритроцитов периферической крови у детей с острой пневмонией // Клинич. лаб. диагностика. - 2001. - № 6. - С. 36-38.

102. Новицкий В.В. Рязанцева Н.В., Степовая Е.А., Федорова Т.С. и др. Молекулярные нарушения мембраны эритроцитов при патологии разного генеза являются типовой реакцией организма: контуры проблемы // Бюл. сибирской медицины. - 2006. - №2. - С. 62-69.

103. Новодержкина Ю.К., Шишканова З.Г., Козинец Т.Н. Конфигурация и поверхность клеток крови в норме и патологии - М.:Триада-фарм, 2004-152с.

104. Петров В.К. Взаимодействие некоторых вазоактивных веществ с фосфолипидными и эритроцитарными мембранами //Фармакол. токсикол-1985. -Т. 48, № 2. - С.72-77.

105. Петроченко A.C. Степень агрегации эритроцитов и функциональное состояние их мембран при хронической обструктивной болезни легких / A.C. Петроченко, Е.П. Гусева // Ангиология и сосудистая хирургия. - 2006. - С.52.

106. Петроченко A.C. Гемореологические изменения у пациентов с тяжелой сердечной недостаточностью / A.C. Петроченко, В.А. Симонов // Материалы конференции «Качественное использование лекарственных средств». - Казань, 2005.-С. 77-78.

107. Погорелов В.М., Козинец Г.И. Анемия, гипоксия. Гемотрансфузии. Санкт-Петербург: «Абрис+», 2005. - 183 с.

108. Поленов С.А. Основы микроциркуляции //Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2008. - Т.7. - №1(25). - 19 с.

109. Пристром М.С., Байда A.B., Козыро В.И., и др. Влияние адаптации к гипобарической гипоксии на состояние микроциркуляции у больных артериальной гипертензией / /Мед новости. - 2005. - №8. - С.96.

110. Ройтман Е.В. Биореология. Клиническая гемореология. Основные понятия, показатели, оборудование (лекция) // Клинич. лаб. диагностика. -2001.-№ 5.-С. 25-32.

111. Ройтман Е.В., Дементьева И.И., Азизова O.A. и др. Изменение реологических свойств крови и осмотической резистентности эритроцитов при активации свободнорадикальных процессов.// Тромбоз, гемостаз и реология. -2000.-№ 1.-С. 15-17.

112. Роуз М. Дж., Берлинер Н. Эритроциты // Патофизиология крови / Под ред. Ф. Дж. Шиффман. - Пер. с англ. - М. - СПб., 2000. - С. 71-101.

113. Рябова С.С., Бурыкина И.А., Бурдыга Ф.А. Значение коррекции реологических свойств эритроцитов в лечении больных с открытыми переломами конечностей // Рос. мед. журн. - 2001. - № 2. - С. 29-31.

114. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Рязанцев В.П., Бычков A.B. Влияние ожоговой травмы на эритроциты // Гематология и трансфузиология. - 2002. - № 1.-С. 25-29.

115. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Стеновая Е.А., Ткаченко СБ. Эритроцит при патологии: размышления у микроскопа // Архив патологии. - 2004. - Т. 66, №3 - С.53-61.

116. Руководство по эксплуатации комплекса многофункционального лазерного диагностического «JIAKK-M» //Научно-производственное предприятие «ЛАЗМА», 2009. - 25 с.

117. Садретдинов P.A., Галимзянов Х..М. Гемодинамические типы микроциркуляции у больных инфекционными лихорадками //Фундаментальные исследования. - 2010. - №7. - 66 с.

118. Самойлов М.В., Мишнев О.Д., Кудрявцев Ю.В. Трансформированные и патологические эритроциты при эндогенной интоксикации и экстракорпоральной детоксикации // Архив патологии. - 2002. - Т.34, №5 - С. 36-39.

119. Саркисов К. Г., Коркушко О. В., Ступина А. С. и др. Микроциркуляция и гемореология при старении человека. // Проблемы старения и долголетия. -1998.-Т. 7, N 3. - С. 269-278.

120. Сарычева Т. Г. Морфофункциональная характеристика эритрона в норме / Т.Г. Сарычева, Т.П. Козинец // Клиническая лабораторная диагностика. -2001.-№5.-с. 3-8.

121. Свербиль В. П., Захаров С. Д. Эритроциты в сдвиговом потоке: механизмы деформируемости, методы измерений, медицинские применения // "Математика. Компьютер. Образование". Сб. трудов XV международной конф. -Ижевск, 2008-Т. 3. - С.123-130.

122. Снегирева JI.B., Иванов В.П. Реологические свойства эритроцитов в их онтогенезе // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье» -2007.-№ 1 -35 с.

123. Соколова И.А. Изменение реологических свойств крови при острых экспериментальных нарушениях мозгового кровообращения и их коррекции /И.А. Соколова, A.A. Шахназаров и др.// Гемореология в микро- и макроциркуляции: Мат.международн.конф. - Ярославль, 2005. - 38 с.

124. Соловьева Т.И., Лукина Е.А. Микрогемореологические нарушения: характеристика и клиническое значение // Терапевтический архив. - 2006. - N 2.-С. 87-91.

125. Степовая Е.А., Новицкий В.В., Рязанцева Н.В. Роль нарушений структуры мембраны и метаболизма эритроцитов в развитии анемии у больных

126. Степовая Е.А., Новицкий В.В., Рязанцева Н.В. и др. Хронический бронхит: участие эритроцитов в патологическом процессе // Клинич. медицина. -2004.-№1._с. 53.

127. Стешин A.B., Дуванский В.А., Азизов Г.А., Набиев А.Ф. Лазерная допплеровская флоуметрия как метод оценки микроциркуляции гнойных ран // Инфекции в хирургии. - 2010. - Т.8, №1. - С. 24.

128. Сторожок С.А., Санников А.Г., Белкин A.B. Зависимость стабильности деформабельности мембран эритроцитов от межмолекулярных взаимодействий белков цитоскелета // Научный вестник ТГУ. - 2009. - №3. - С. 3-10.

129. Сушков С.А., Небылицин Ю.С., В.И. Козловский. Деформируемость эритроцитов у больных при остром и хроническом нарушении венозного оттока //Медицинский журнал: научно-практический рецензируемый журнал / учредитель: Белорусский государственный медицинский университет . - 2008 . -N 1.-С. 70-72 .

130. Татарюнас А.Б. Липофусцин в старении и патологии: Автореф. дис...докт. биол. наук/А.Б. Татарюнас. - Вильнюс, 1999. -41 с.

131. Терещенко В.П., Яворская Н.В., О.И. Зайцева О.И. и др. Нарушения структуры эритроцитарных мембран у детей с синдромом вегетативной дисфункции // Вестник КрасГУ. - 2006. - № 3. - с. 177- 179.

132. Тихомирова И.А., Гусева Е.П., Петроченко A.C. Мембранные свойства эритроцитов и адренореактивность организма в норме и при патологии // Ангиология и сосудистая хирургия. Материалы II Всерос. конф. с международн. участием «Микроциркуляция в клинической практике». -Москва, 2006. - С. 54.

133. Тихомирова И.А. Роль экстрацеллюлярных, мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов: Автореф. дис. д. биол.наук. - Ярославль, 2006. - 47с.

134. Трубецков Д.И. Введение в синергетику. Хаос и структуры. - М.: Едиториал УРСС, 2004. - 240 с.

135. Филиппова О.Н., Шперлинг И.А., Новицкий В.В и др. Изучение структурных свойств мембраны эритроцитов методом флуоресцентного зондирования в динамике нитритной метгемоглобинемии // Фундаментальные исследования. - 2005. - № 4 - С. 90.

136. Флейшман А.Н. Медленные колебания гемодинамики. - Новосибирск: Наука, 1998.-30 с.

137. Чернух А.М., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция. -М.: Медицина, 1984.-432 с.

138. Чирикова O.A. Факторы, определяющие процесс адсорбции высокомолекулярных белков плазмы крови на мембранах эритроцитов при мышечных нагрузках: Автореф. дис. канд. биол.наук -Ярославль, 2006. -22 с.

139. Чижевский A.JI. Структурный анализ движущийся крови. М.: Изд.АН СССР, 1959.-С.290.

140. Шаалали H.A. Гемореологические нарушения при гипертонической болезни I—II стадии: алгоритм диагностики и коррекции: Автореф.канд.мед.наук. - Иваново, 2010. - 20 с.

141. Шевченко Ю.Л. Гипоксия. Адаптация, патогенез, клиника. - СПб.: Элби, 2000.-384 с.

142. Шилов А.М., Авшалумов A.C., Марковский В.Б. и др. Изменения реологических свойств крови у больных с метаболическим синдромом //Русский медицинский журнал. - 2008. - N 4. - С.200-204.

143. Шляхто Е.В., Моисеева О.М., Лясникова Е.А. и соавт. Реологические свойства крови и функция эндотелия у больных гипертонической болезнью // Кардиология. - 2004. - Т.44. №4. - С. 20-23.

144. Щербаченко И.М. Модифицированные окислением эритроциты как экспериментальная модель для оценки активности антиоксидантов: Автореф. дис. канд. биол.наук. - Москва, 2008.-21 с.

145. Almond N. Laser Doppler flowmetry: Theory and practice, Laser Doppler. -London, Los Angeles, Nicosia, Med-Orion Publishing Company. -1994.-P. 17- 31.

146. Anstee D.J., Hemming N.J., Tanner M.J. Functional factors in the red cell membrane: interactions between the membrane and its underlying skeleton. Immunol Invest. - 1995.-P. 187-198.

147. An X., Mohandas N. Disorders of red cell membrane. British Journal of Haematology. - 2008. - P. 367-375.

148. Baskurt O.K. Particle electrophoresis as a tool to understand the aggregation behavior of red blood cells // Electrophoresis. - 2002. - Vol.23 (13). - P.2103-2109.

149. Baskurt O.K. Handbook of hemorheology and hemodynamics / O.K. Baskurt, M.R. Hardeman, M.W. Rampling, H.J. Meiselman; IOS Press. - 2007. - 455 p.

150. Bariel P., Sheng Y. et. al. Calculation of spherical red blood cell deformation in dualbeam optical stretcher// Opt. Express. - 2007. - Vol. 15, N. 24. - P. 160296034.

151. Bateman R.M., Jagger J.E., Sharpe M.D . et al. Erythrocyte deformability is a nitric oxide-mediated factor in decreased capillary density during sepsis. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. - 2001,280(6). - P.2848-2856.

152. Beder I., Aarsky J., Maea-Eje A. E ffect of selected substances with antigycative and antioxidativeproperties on erythrocyte deformability indiabetic patiens // Scripta Medica (Brno). -2002. - Vol. 75, N 5. - P. 239-244.

153. Bennett V., Anthony J.B. Spectrin and Ankyrin-Based Pathways: Metazoan Inventions for Integrating Cells Into Tissues // Physiol Rev. - 2001. - Vol. 81. - P. 1353-1392.

154. Bojesen, I.N. Membrane transport of anandamide through resealed human red blood cell membranes / I.N. Bojesen, H.S. Hansen // J Lipid. Res. 2005. -Vol.46, N8. -P. 1652-1659.

155. Borgos J. Principles of instrumentation: Calibration and technical issues. Laser Doppler //London, Los Angeles, Nicosia, Med-Orion Publishing Company. -1994. -P.3-16.

156. Bratosin D., Mazurier J., Tissier J.P et al. Cellular and molecular mechanisms of senescent erythrocyte phagocytosis by macrophages. A review. // Biochimie. -1998.- Vol80.-P.173-195.

157. Boning D., Hollnagel Ch., Boecker A. The bohr effect of lactic acid in vitro simulation of oxereise/31 int. Cong. Phisioi. ScL, Helsinki. 9-14 July, 1989. -P.256-257.

158. Brandao M.M., Fontes A., et.al. Optical tweezers for measuring red blood cell elasticity: application to the study of drug response in sickle cell disease // Eur. J.Haematol. -2003. - V.70. - P. 207-211.

159. Brown CD, Ghali HS, Zhao Z, Thomas LL, Friedman EA Association of reduced red blood cell deformability and diabetic nephropathy // Kidney Int. - 2005. - 67(1). - P.295-300.

160. Caimi G., Hoffmann E., Montana M. Haemorheological pattern in young adults with acute myocardial infarction // Clin. Hemorheol. Micricirc - 2003. - Vol. 29, N 1. - P. 11-18.

161. Cicco G., Carbonara M.C., Stingi G.D., Pirrelli A. Cytosolic calcium and hemorheological patterns during arterial hypertension.// Clin Hemorheol Microcirc. -2001. - Vol.24(l). - P. 25-31.

162. Condon M.R., Kim J.E., Deitch E.A. et al. Appearance of an erythrocyte population with decreased deformability and hemoglobin content following sepsis. // Am. J Physiol. Heart Circ Physiol. - 2003,284. - P.2177-2184.

163. Contreras F.X., Basanez G., Alonso A. et al. Asymmetric addition of ceramides but not dihydroceramides promotes transbilayer (flip-flop) lipid motion in membranes // Biophys. J. - 2005. - Vol.88, N1. - P. 348-359.

164. Cui Y., Guo Z., Zhao Y. et al. Reactive effect of low intensity He-Ne laser upon damaged ultrastructure of human erythrocyte membrane in Fenton system by atomic force microscopy // Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). - 2007. -Vol.39 (7) -P.484-489.

165. Daleke DL. Regulation of phospholipids asymmetry in the erythrocyte membrane //Curr Opin Hematol. 2008. - Vol. 15, №3. - P. 191-195.

166. Dao M., Lim C. T., Suresh S. Mechanics of the human red blood cell deformed by optical tweezers // J. Mech.Phys. Solids. 2003. V. 51. P. 2259-2280.

167. Dao M., Li J., Suresh S. Molecularly based analysis of deformation of spectrin network and human erythrocyte // Materials Science and Engineering. -

2006. - № 26. - P. 1232-1244.

168. Deeba F., Tahseen H.N., Sharad K.S. et al. Phospholipid diversity: correlation with membrane-membrane fusion events // Biochim Biophys Acta. 2005. -Vol. 20, N2.-P. 170-181.

169. Deeley J. O. Th, Crum L. A., Coakley W. T. The influence of temperature and incubation time on deformability of human erythrocytes //Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. - 1979. - Vol.554, Issue 1,13,- P. 90 -101.

170. Devaux, P.F. Transmembrane asymmetry and lateral domains in biological membranes / P.F. Devaux, R. Morris // Traffic. 2004. - Vol.5, N4. - P.241-246.

171. Dobbe J.G., Streekstra G.J., Hardeman M.R. et al. Measurement of the distribution of red blood cell deformability using anautomated rheoscope. // Cytometry -2002.-Vol.50-P.313-325.

172. Engstrom K.G., Moller B., Meiselman H.J. Optical evaluation of red

blood cell geometry using micropipette aspiration.// Blood Cells. - 1992. - Vol. 18. -P. 241-257.

173. Gifford S.C, Frank M.G., Derganc J. et al. Parallel microchannel based measurements of individual erythrocyte areas and volumes.// Biophys. J. - 2003. Vol.84.-P. 623-633.

174. Gu M., Kuriakose S. et al. A singlebeam nearfield laser trap for optical stretching, folding and rotation of erythrocytes // Opt. Express. -2007. - V. 15, N. 3. -P. 1369-1375.

175. Henig, H. R. Hypoxia mechanismus / Noreen R. Henig, David J. Pierson // Respiratory Care Clinics of North America - 2000. - Vol. 6 (4). - P. 203-225.

176. Hill G.E., Prawley W.H., Griffith K.E. et al. Allogeneic blood transfusionincre-ases the risk of postoperative bacterial infection: a meta-analysis. / Trauma. - 2003. - Vol. 54. - P. 908-914.

177. Hoffman R., Benz E.J., Shattik S.J. et al. (eds) Hematology Basic Principles and Practice. N.Y., Churchill Livingstone, 2001. -1970p.

178. Jayavanth S., and Singh M. Changes in erythrocyte aggregation and deformability during human ageing. // Current science. -2002 -V.82, №2.-P.191-196.

179. Kolbay I.S., Kapysheva U., Akhmetova M., Djusipbekova B., Baidalinov A., Baimbetova A. The relationship between rats resistance to stress, higher nervous activity types and the brain biogenic amines content // XXXV International Congress of Physiological Sciences. San Diego, 2005. -P.33.

180. Lee S., Cunningham E.B., Swislocki N.I. Molec. Cell. Biochem., 1991. -Vol. 106.-P.75 - 85.

181. Levin I. Increased erythrocyte aggregation in ovarian hyperstimulation syndrome: a possible contributing factor in the pathophysiology of this disease// Hum. Reprod. - 2004. - Vol. 19 (5). - P. 1076-1080.

182. Lew V.L., Raftos J.E., Sorette M. et al. Generation of normal human red cell volume, hemoglobin content, and membrane area distributions by 'birth' or regulation?//Blood. - 1995. -Vol.86.-P. 334-341.

183. Lopez-Montero I., Rodriguez N., Cribier S. et al. Rapid transbilayer movement of ceramides in phospholipid vesicles and in human erythrocytes // J. Biol. Chem. - 2005. - Vol.280, №27. - P. 25811-25819.

184. Luo Jisheng Zuo et al. The effect of hyperthermia on human erythrocyte //Journal of East China Normal University (Natural Science). - 1988. - №3. - P. 140145.

185. Manno, S. Modulation of Erythrocyte Membrane Mechanical Function by Protein 4.1 Phosphorylation / S.Manno, Z. Takakuwa, N. Mohandas // Biol. Chem. -2005. - № 280 (is. 9). - P. 7581- 7587.

186. Mi X. Q. Effect of low power laser irradiation on dis-connecting the membrane-attached hemoglobin from erythrocyte membrane / X. Q. Mi, J. Y. Chen, L. W. Zhou // J. Photochem. Photobiol. B. - 2006. - 1 may. - Vol. 83, № 2. - P. 146150.

187. Mayer M.F., Rose C.J., Hulsmann J.-O., Schatz h., Pfonl M. Impaired 0.1 - Hz vasomotion assessed by laser Doppler anemometry as an early index of peripheral sympathetic neuropathy in diabetes. //Microvascular Research. - 2003. - Vol. 65. -P. 88-95.

188. Nieuwland R., Berckmans R.J., McGregor S. et al. Cellular origin and procoagulant properties of microparticles in meningococcal sepsis.// Blood. - 2000. -Vol.95.-P. 930-935.

189. Pantaler E., Kamp D., Haest C.W. Acceleration of phospholipid flip-flop in the erythrocyte membrane by detergents differing in polar head group and alkyl chain length // Biochim. Biophys. Acta. -2000. - Vol.1509, № (1-2). - P. 397- 408.

190. Paramore S., Ayton G.S., Mirijanian D.T., Voth G.A. Extending a spectrin repeat unit. I: Linear force-extension response // Biophys. J. - 2006. - Vol. 90. - P. 92-100.

191. Paulitschke M., Nash G.B. Micropipette methods for analysing blood cell theology and their application to clinical research.// Clin. Hemorheol. - 1993. - Vol. 13. - P.407-434.

192. Pries A. R. Rheology of microcirculation / A. R. Pries, T. Secomb // Clin. Hemorheol. and Microcirc. - 2003. - №29. - P. 143-148.

193. Rivera A., Jarolira P., Brugnara C. Modulation of Gardos channel activity by cytokines in sickle erythrocytes.// Blood. - 2002. - Vol. 99. - P. 357-363.

194. Rizvi S.I. Erythrocyte Plasma Membrane Redox System in Human Aging / S.I. Rizvi, R. Jha, P.K. Maurya // Rejuvenation Research. -2006. - Vol. 9, N 4. - P. 470 -474.

195. Romero P. J. Voltage-dependent calcium channels in young and old human red cells / P. J. Romero // Cell Biochem Biophys. - 2006. - № 46 (3). -P. 265-276.

196. Rotstein R., Landau T., Twig A. The erythrocyte adhesiveness/aggregation test (EAAT). A ewbiomarker to reveal the presence of low grade subclinical smoldering inflammation in individuals with atherosclerotic risk factors // Atherosclerosis. -2002.-Vol. 165,N2.- P. 343-351.

197. Samosha-Bonet D., Lichtenberg D., Tomer A. Enchanced erythrocyute adhesiveness / aggregation in obesity corresponds to low-grade inflammation// Obes. Res. - 2003. - Vol. 11, N 3. - P. 403-407.

198. Schauf B., Aydeniz B., Bayer R., Wallvsdener D. The laser diffractoscope -a new and fast system to analyse red blood cell flexibility with high accuracy // Lasers Med Sci. - 2003. - Vol. 18(1). - P. 45-50.

199. Serné E. H. Microvascular dysfunction: a potential pathophysiological role in the metabolic syndrome / E. H. Serné [et al] // Hypertension. - 2007. - Vol. 50. - № l.-P. 204-211.

200. Shin S. Erythrocytes deformability and its variations in diabetes mellitus [Text] / S. Shin, Y. Ku, N. Babu, M. Singh // Indian J. Exp. Biol. - 2007. - Vol. 45, N 1. -P. 121-128.

201. Schmid - Schonbein H., Ziege S., Grebe R., Blazek V., Spielmann R., Linzenich F. Synergetic Interpretation of Patterned Vasomotor Activity in Microvascular Perfusion: Descrete Effects of Myogenic and Neurogenic Vasoconstriction as well as Arterial and Venous Pressure Fluctuations.// Int J. Microcir. - 1997; 17. - P. 346-359.

202. Smriti, Nemergut E.C., Daleke D.L. ATP-dependent transport of phosphatidylserine analogues in human erythrocytes // Biochemistry. - 2007. -Vol.46, №8. - P. 2249-2259.

203. Spodaryk K. The influence of low-power laser energy on red blood cell metabolism and deformability / K. Spodaryk// Clin. Hemorheol. Microcirc - 2001. -Vol. 25, №3-4. -P. 145-151.

204. Stefanovska A., Bracic M. Physics of the human cardiovascular system. // Contemporary Physics. - 1999. Vol . 40, N 1. - P.31-35.

205. Sutton N., Tracey M.C., Johnston I.D. et al. A novel instrument for studying the flow behaviour of erythrocytes through microchannels simulating human blood capillaries // Microvasc. Res. - 1997. Vol.53. - P.272-281.

206. Swihart A. H, Mikrut J. M., Ketterson J. B., Macdonald R. C.Atomic force microscopy of the erythrocyte membrane skeleton // Journal of Microscopy. - 2001. -Vol. 204.-P.212-225.

207. Tannert T.C., Lux K. Spreading of red cell bloodsuspensions on paper as a simple test of cell deformability // Acta biol.med.germ. -1981. -V. 40. - P. 739-742.

208. Tavazzi B., Di Pierro D., Amorini A. M. et al. Energy metabolism and lipid peroxidation of human erythrocytes as a function of increased oxidative stress // Eur. J. Biochem. - 2000. -Vol.267. - P.684-689.

209. Wiernsperger N. Microcirculation and the metabolic syndrome / N. Wiernsperger [et al] // Microcirculation. -2007. - Vol. 14, № 4-5. - P. 403-438.

210. Wohrle J., Nusser T., Hoffmeister A. Effect of molsidomine on rheological parameters and the incidence of cardiovascular events // Dtsch. Med.Wochenschr. -2003.-Vol. 128, N24.-P. 1333-1337.

211. Zachowski A. Phospholipids in animaleukaiyotic membranes: transverse asymmetry and movement.// Biochem. J. L 993. - Vol.294. - P. 1-14.