Морфофункциональные изменения органов иммунной системы при конканавалин А-индуцированном гепатите тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат технических наук Обернихин, Сергей Станиславович

• Обернихин, Сергей Станиславович
• кандидат технических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат технических наук Обернихин, Сергей Станиславович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика Кон А.

1.2. Иммунологические аспекты действия Кон А.

1.3. Роль клеточных популяций в развитии гепатита.

1.4. Роль адгезии лимфоцитов в развитии гепатита.

1.5. Роль цитокинов в развитии гепатита.

1.6. Морфологическая характеристика модели Кон А-индуцированного гепатита.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Морфологические изменения внутренних органов мышей линии BALB/c после введения Кон А.

3.2. Функциональные изменения иммунной системы мышей линии BALB/c после введения Кон А.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональные изменения органов иммунной системы при конканавалин А-индуцированном гепатите»

Актуальность темы. В последние годы возрастает частота заболеваемости гепатитом различной этиологии (вирусный гепатит, алкогольное повреждение печени). Только от вирусного гепатита пострадало более 2 миллиардов человек в мире. Патогенез развития некоторых форм гепатита до сих пор остаётся невыясненным. В ряде работ показано, что конканавалин А (Кон А) является хорошим индуктором для создания модели гепатита (Tiegs G. et al., 1992; Nicoletti F. et al., 1997). Некоторые авторы придерживаются мнения о том, что алкогольное (Batey R.G. et al.,2002) и вирусное (Lasarte J. et al, 2003) повреждение печени имеет сходную природу с Кон А-индуцированным гепатитом и связано с активацией Т-лимфоцитов.

Кон А — лектин, широко применяемый в иммунологии как Т-клеточный митоген. Достаточно хорошо изучено активирующее влияние Кон А на лимфоциты. В конце 60-х начале 70-х годов появилось большое количество работ по активации Кон А антигеппеспецифических Т-супрессоров. Было показано, что Кон А приводит к значительной супрессии первичного и вторичного иммунного ответа на эритроциты барана, генерировании цитотоксичесих Т-клеток в смешанной культуре лимфоцитов (CKJI), а также антительного ответа. Была исследоваиа не только супрессия клеточной цитотоксичности, но и перенос её клетками перитонеального экссудата при внутрибрюшинной инъекции Кон А. Отмечали замедление отторжения трансплантанта у животных, которым вводили Кон А. Однако, в дальнейшем, было обнаружено, что Кон А активирует также и хелперпое звено иммунитета. Имеются факты, свидетельствующие об активирующем влиянии Кон А на лимфоциты: выработка интерлейкина (ИЛ)-2, генерирование неспецифических киллеров, индукция пролиферации лимфоцитов и повышение уровня экспрессии рецепторов к ИЛ-1.

Выяснение механизмов повреждения печени играет серьёзную роль в понимании патогенеза гепатита и поиске оптимальных способов его лечения.

В последние годы нарастает количество работ, посвященных влиянию Кон А на печень. Так показано, что при развитии индуцированного Кон А гепатита важную роль играют цитокины: фактор некроза опухоли (ФНО)-а, ИЛ-2 и интерферон-у, увеличивается содержание ИЛ-4 и ИЛ-10. Наряду с этим происходит активация клеточного звена иммунитета (Kato М. et al., 2001). Таким образом, Кон А-индуцированное повреждение печени является адекватной экспериментальной моделью гепатита.

Остаются невыясненными механизмы действия Кон А в системе in vivo на различные звенья иммунитета, патоморфологические особенности действия лектина на органы иммунной системы и печени. Несмотря на почти тридцатилетнюю историю изучения этого митогена, морфологические особенности действия Кон A in vivo описаны чрезвычайно скудно. Это, по-видимому, связано с тем, что Кон А, являясь мощным "пан-Т-клеточным митогеном", активно изучался только в иммунологическом аспекте и был обделён вниманием морфологов. Достаточно большое количество работ, появившихся в последние годы по данной теме лишь подтвердили вышеизложенное. Исходя из этого мы сочли необходимым более детально изучить морфологические изменения в печени, селезенке и тимусе, т. к. в формирование гепатита вовлекаются и органы иммуногенеза, не оставляя без внимания, при этом, и некоторые иммунологические аспекты данной модели.

Цель исследования. Изучить морфофункциональные изменения иммунной системы в динамике при экспериментальном Кон А-индуцированном гепатите.

Задачи исследования.

1. Изучить в динамике морфологические изменения в печени и органах иммунной системы при Кон А-индуцированном гепатите.

2. Изучить влияние Кон А на клетки иммунной системы in vivo.

3. Изучить in vitro функциональную активность клеток иммунной системы после системного введения Кон А.

4. Изучить влияние Кон А на генерирование неспецифических киллеров.

Научная новизна. Впервые охарактеризована динамика морфологических изменений в печени и органах иммунной системы при Кон А-индуцированном гепатите.

Впервые данные морфологического исследования органов мишеней соотнесены с результатами функциональных тестов в процессе развития экспериментального кон А-индуцировапного гепатита.

При анализе динамики Кон А-индуцированного гепатита показано, что в течение первых трех суток происходит нарастание дистрофических и некротических изменений в печени, сопровождаемых развитием геморрагических некрозов в селезенке.

В динамике Кон А-индуцированного гепатита в первые трое суток функциональная пролиферативная и цитотоксическая активность лимфоцитов возрастает, что сочетается с прогрессировапием альтсративпых (дистрофических и некротических) изменений в печени.

В тимусе при Кон А-индуцированном гепатите развиваются и прогрессирующе нарастают морфологические проявления акцидентальной инволюции.

В селезенке в 1-е сутки отмечается опустошение Т-зон, что, по-видимому, обусловлено миграцией активированных лимфоцитов в барьерные ткани. В последующие сроки на фоне нормализации пролиферативной активности лимфоцитов отмечается восстановление и гиперплазия Т- и В-зон селезенки.

Научная ценность. Только в условиях эксперимента мы можем проследить этапы участия различных клеточных популяций и тканевых элементов в печени, селезенке и тимусе в процессе развития экспериментального гепатита.

Практическое значение работы. Полученные в работе данные о динамике морфологических изменений иммунной системы при индуцированном Кон А гепатите могут быть использованы для доклинической оценки иммуномодулирующих и гепатопропротекторных фармакологических препаратов.

Данные о высоком пролиферативном ответе клеток селезёнки, через 1 сутки после введения 10 мг/кг Кон А, позволяют рекомендовать использование этих клеток в тест- системе для определения активности ИЛ-2, т.к. этот тест по сравнению со стандартным является менее трудоемким и более информативным.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Модель Кон А-индуцировапного гепатита дает возможность проанализировать динамику морфологических изменений в печени, селезенке и тимусе па фоне развития острого некротического гепатита.

2. Развитие острого некротического гепатита сопровождается резким увеличением активности лимфоцитов селезенки, проявляющейся в усилении пролиферации как спонтанной, так и в ответ на экзогенный интерлейкин-2. Пролиферативная активность возвращается к контрольному уровню на 4-сутки.

3. Обнаружено увеличение цитотоксической активности лимфоцитов в прилипающей фракции спленоцитов в 3,5 раза по сравнению с общей популяцией клеток селезенки, что указывает на роль клеточной адгезии в механизмах поражений печени.

4. Активированные Кон А клетки селезенки обладают выраженной супрессорной активностью, проявляющейся в соответствующих функциональных тестах (генерировании цитотоксических Т-лимфоцитов, реакции бласттрансформации).

Апробация работы. Результаты диссертационной работы представлены на конференции по патологии клетки (Москва, 2004) и на заседании Ученого Совета НИИ морфологии человека РАМН (Москва, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано четыре печатные работы.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 92 страницах машинописного текста, состоит из введения, глав обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов собственных исследований, выводов и списка литературы, иллюстрирована 25 рисунками, 1 таблицей. Библиография включает 18 отечественных и 90 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Обернихин, Сергей Станиславович

ВЫВОДЫ.

1. По данным морфологического исследования у мышей BALB/c после введения Кон А в дозе 10 мг/мышь развивается острый некротический гепатит, характеризующийся в динамике на 1-3-и сутки увеличением распространенности и выраженности дистрофических изменений гепатоцитов и очагов некроза и сочетанием поражения печени с геморрагическими некрозами селезенки.

2. В тимусе, начиная с 1-х суток развития экспериментального гепатита, выявляется акцидентальная инволюция, выраженность которой нарастает к 7 суткам.

3. В селезенке на 1-2-е сутки происходит опустошение белой пульпы с редуцированием Т зон, образованием очагов геморрагических некрозов, но уже на 3-й сутки отмечается тенденция к восстановлению функциональных зон, которые претерпевают гиперплазию па 7 сутки.

4. Спонтанная пролиферативная активность клеток селезенки возрастает на 1 сутки, поддерживается на высоком уровне до 3 суток и нормализуется на 7-е сутки.

5. Пролиферативный ответ клеток селезенки мышей на интерлейкин 2 повышен на 1-е сутки и снижается на 3-й сутки, приближаясь к базовому уровню.

6. В динамике Кон А-индуцированного гепатита в первые 3 суток пролиферативная и цитотоксическая активность лимфоцитов возрастает, что сочетается с прогрессированием альтеративных (дистрофических и некротических) изменений в печени. В последующие сроки пролиферативная активность лимфоцитов нормализуется, что согласуется с позитивными морфологическими изменениями в селезенке (восстановление и гиперплазия функциональных зон).

Заключение.

Таким образом, при введении Конканавалина А в дозе 10 мкг/кг у мышей BALB/c по данным морфологического исследования развивается острый гепатит с обширными некрозами, в селезёнке на 1 -3 сутки очаговые некрозы и опустошение белой пульпы, а на 7-е сутки тенденция к нормализации морфологической картины. В тимусе на 1 -3 сутки акцидентальная инволюция 1-3 стадий; на 7-е сутки выраженность акцидентальной инволюции нарастает до 2-3 стадии. 3.2. Функциональные изменения иммунной системы мышей линии BALB/c после введения Кон А.

Изменение пролиферативной активности клеток селезёнки мышей после внутривенного введения Кон А.

Индукция гепатита Кон А приводит к значительному изменению состояния иммунной системы, поэтому важным моментом в исследовании явилось изучение пролиферативной активности спленоцитов в классической реакции бласттрансформации после внутривенного введения Кон А.

Для этих целей исследовали пролиферативную активность клеток селезёнки в различные сроки после введения лектина. Спленоциты получали через 18, 48, 72 и 96 часов после внутривенного введения Кон А. Полученные результаты РБТ представлены на рисунке №11.

150 Н □

Интактные

48

72

96

Время (час), прошедшее после введения Кон А.

Рис. 11 Пролиферация клеток селезёнки в РБТ у интактных мышей (□) и после внутривенного введения Кон А в дозе 200 мкг/мышь (■) . Достоверность различий по сравнению с контролем: * - р<0,001

Как видно из рисунка через 18 часов после введения 200 мкг Кон А ответ на митоген значительно снижается по сравнению с интактными спленоцитами, а восстановление пролиферативпого ответа происходит только спустя 96 часов после введения митогена.

В следующей серии опытов сравнивали величину пролиферативпого ответа клеток селезёнки мышей через 18 часов после внутривенного введения различных доз Кон А. Животным вводился лектин в дозах 25, 50, 100 и 200 мкг. Более высокие дозы Кон А были токсичны и приводили к гибели животных. Обобщающие данные этих опытов представлены на рисунке №12.

На диаграмме видно, что пролиферативный ответ на Кон А был обратно пропорционален дозе вводимого митогена. Наибольшим эффектом обладала доза 200 мкг/мышь.

Пролиферация лимфоцитов в ответ на ИЛ-2.

В следующей серии опытов исследовали влияние Кон А, введённого внутривенно, на способность клеток селезёнки пролиферировать в ответ на ИЛ-2. Наш интерес был вызван тем, что, судя по литературным данным после 18 часов контакта с митогепом in vitro на лимфоцитах экспрессируется большое количество рецепторов к ИЛ-2.

Также как и в опытах, описанных выше, определяли величину пролиферативного ответа клеток селезёнки на ИЛ-2 в зависимости от времени, прошедшего после внутривенного введения лектина в дозе 200 мкг. Полученные данные представлены на рисунке №13. Способность клеток селезёнки отвечать на ИЛ-2 резко возрастала к 18 часам и уменьшалась с увеличением интервала времени после введения Кон А.

Результаты опытов, отражающие величину пролиферативного ответа спленоцитов на ИЛ-2 в зависимости от дозы введённого Кон А, представлены на рисунке №14.

150 х s г rz о»

OJ

-е-s и о

Q. о Ьй D 4

100

50 0

Интактные 50 100

Доза Ко11 А (мкг/мышь) n

200

Рис. 12. Пролиферация клеток селезёнки мышей Balb/c в РБТ через 1 сутки после внутривенного введения Ком А. Достоверность различий по сравнению с контролем: * - р<0,001

40 i

30

Й к гг о.

QJ s 5

Едо с о ы 0> п X Б

10

Интактные 18 72 время (ч) прошедшее после введения КонА

Рис. 13 Пролиферация клеток селезёнки мышей на HJ1-2 после внутривенного введения 200 мкг Кон А. Достоверность различий по сравнению с контролем: * - р<0,001

40 т

30 s s а я О. U ^^ J s а. 20 с и

Ьй ©

4 X 5

10

Интактные 50 100 доза Кон А (мкг/мышь)

200

Рис. 14.Пролиферация клеток селезёнки мышей Balb/c in vitro через 1 сутки после внутривенного введения Кон А. Достоверность различий по сравнению с контролем: * -р<0,001; ** -р<0,01

Из рисунка видно, что пролиферативный ответ на ИЛ-2 возрастал с увеличением дозы вводимого митогена.

Поскольку нельзя исключить возможность продукции ИЛ-2 в организме мышей через 18 часов после введения Кон А, аналогично тому, что происходит в культуре, мы исследовали содержание ИЛ-2 в монокультурах спленоцитов Кон А-стимулированных мышей. Однако нам не удалось обнаружить ИЛ-2 в этих культурах, а при стимуляции спленоцитов, полученных после введения Кон А, не зафиксировано достоверного увеличения продукции ИЛ-2 от такового в контроле. Эти данные иллюстрирует рисунок №15.

Далее сравнивали величину пролиферативного ответа на ИЛ-2 клеток селезёнки мышей, которым за 18 часов вводили 200 мкг Кон А и 4-х дневных Кон А бластов, экспрессирующих большое количество рецепторов к ИЛ-2 и стандартно использующихся наряду с ИЛ-2-зависимыми линиями для определения активности этого лимфокина. Результаты типичного опыта представлены в таблице №1. Из таблицы видно, что величина пролиферативного ответа как на рекомбинантный ИЛ-2, так и на культуральный крысиный супернатант, содержащий ИЛ-2, у спленоцитов, полученных от Кон А-стимулированных мышей, была в несколько раз выше, чем у Кон А-бластов. Эти данные позволяют предложить использовать клетки селезёнки, полученные от мышей через 18 часов после введения 200 мкг Кон А, в качестве гест-системы для определения активности ИЛ-2 в культурах.

Проведена также сравнительная характеристика пролиферативного ответа спленоцитов Кон А-стимулированных мышей на рекомбинантный и кукльтуральный крысиный ИЛ-2 в зависимости от времени культивирования с цитокином in vitro. Как отражено на рисунке №16 максимальный индекс пролиферации был зарегистрирован при 72 часовой инкубации.

1 2

Рис. 15 Продукция ИЛ-2 клетками селезёнки мышей через 1 сутки после введения 200 мкг Кон А - Клетки селезёнки интактиых мышей ■ - Клетки селезёнки Кон А-стимулированных мышей

1 - Нестимулированные клетки селезёнки

2 - Клетки селезёнки стимулированные Кои Л in vitro

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Обернихин, Сергей Станиславович, 2005 год

1. Абдумуратова Д.А. Морфогенез и иммунологическая характеристика лимфатических узлов плода человека. //Дисс. канд. м. н. М. - 1990. - 193 с.

2. Агеев А.К. Гистопатология вилочковой железы человека. — Л.: Медицина, 1973. 175 с.

3. Вепхвадзе Л.К. Изменение плоидности гепатоцитов крыс в течение суток в контроле и после частичной гепатэктомии. // Известия АН ГССР, серия биологическая. 1984. - т. 10. - N4. - с.274-278.

4. Гринцевич И.И. Функциональная морфология тимуса при антигенных и неантигенных воздействиях на организм. //Дисс. доктора мед. наук. — Л. — 1989.

5. Зайратьянц О.В. Патология вилочковой железы и аутоиммунные болезни. //Дисс. доктора мед. наук. М. - 1992.

6. Ерофеева Л.М. Тимус крыс в условиях воздействия на организм диметилсульфата. //Дисс. канд. м.н. — М. 1993. - 216 с.

7. Имре Барта. Селезёнка. //Из-во акад. наук Венгрии. — Будапешт. — 1976. — 264 с.

8. Коваленко Н.Я. Функциональный элемент печени в норме и патологии. Обзор. .Патол. физиол. и эксперим. терапия. 1984. вып. 1 - с. 83-88.

9. Ляшенко А.А., Уваров В.Ю. К вопросу о систематизации цитокинов. // Усп. совр. биол. -2001. т.121. —N6. - с.589-603.

10. П.Онищенко Г.Г., Шахгильдян И.В. Парентеральные вирусные гепатиты — актуальная проблема здравоохранения России. //Гепатит В, С, D и Gпроблемы изучения, диагностики, лечения и профилактики. М., - 1997. -с. 164-166.

11. Романова Л.К. Регуляция восстановительных процессов. М.: Изд-во Моск. ун-та. - 1984. - 209 с.

12. Сапин М.Р., Харин Г.М., Вавилов В.И. Цитоконструкция вилочковой железы у половозрелых обезьян. // Архив АГЭ. 1977. - т.72 - №1. - с.32-36

13. Сапин М.Р., Юрина П.А., Этинген Л.Е. Лимфатический узел. М. -Медицина - 1978.-271 с.

14. Серов В.В., Апросина З.Г., Крель П.Е. и соавт. Хронический вирусный' гепатит одна из наиболее важных проблем современной медицины. //Архив патологии. - 2004. - т.66. - 6. - с.6-11.

15. Ткачук М.Г. Морфологические изменения вилочковой железы под влиянием дозированных физических нагрузок в возрастном аспекте. // Автореф. дис. канд. биол. наук — 1985. 16 с.

16. Хлыстова З.С. Становление иммуногенеза плода человека. //М., Медицина. 1987.

17. Фукс Б.Б., Малайцев В.В., Богданова И.М. Отсутствие генерализованной иммуносупрессии у мышей С57В1/6 при прогрессивном росте сингепной Т-лимфомы EL-4 и легочной карциномы Льюиса 3LL. // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1986. - т.С1. - пб. - с.725-728.

18. Arcaro KF, Wang J, Otis CN, Zuckerman BM. Beta-galactosidase and alpha-mannosidase inhibit formation of multicellular nodules in breast cancer cell cultures. //Anticancer Res. 2004. - v.24. - n.l. - p. 139-144.

19. Arya S., Gilbert E., Hong R., Bloodworth B. The Thymus. //In: Endocrine pathology, general and surgical/Ed. J.Bloodworth. N.Y. - 1982. - 2 ed. — p.767-833.

20. Askari F, Dick R.,Mao M., Brewer G. Tetrathiomolybdate Therapy Protect Against Concanavalin A and Carbon Tetrachloride Hepatic Damage in Mice. //Exp. Biol, and Med. 2004. - v. 229. - p.857-863.

21. Baenzinger J.U., Fiete D. Structural determinants of Concanavalin A specificity for oligosaccharides. //J. Biol. Chem. 1979. - v.254 - p.2400-2407.

22. Barbosa Т., Arruda S., Cavada B. et all. //Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 2001. -v.95. n.5. - p.673-678.

23. Batey RG, Cao Q, Could B. Lymphocyte-mediated liver injury in alcohol-related hepatitis. //Alcohol. 2002. - v.27. - N1. - p. 37-41.

24. Batey RG., Wang J. Molecular pathogenesis of T lymphocyte-induced liver injury in alcoholic hepatitis. //Front. Biosci. 2002. - v.l. - n.7 - p.dl662-1675.

25. Becker J.W., Reeke G.N., Cunningham R.A., Edelman G.M. New avidence on the location of the saccharide-binding site of Concanavalin A. //Nature. 1976. - v.259. - p.406-409.

26. Becker J., Reeke G., Wang, J., Cunningham В., and Edelman,G. The Covalent and Three-Dimensional Structure of Concanavalin A. III. Structure of the Monomer and its Interaction with Metals and Saccharides. // J. Biol. Chem. -1975. v.250. - p.1513.

27. Ben-Bassat H. and Goldblum N. Concanavalin A Receptors on the Surface Membrane of Lymphocytes from Patients with Hodgkin's Disease and Other Malignant Lymphomas. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1975. - v.72. - p. 1046.

28. Besedovsky H., Rey A., Sorkin E. Immunoregulation by neuroendocrine mechanisms. //In: Neuroimmunology. Ed. P.Beham, F.Spreafice. — N.Y., 1984- 12-p. 445-450.

29. Berzins K. and Blomberg F. Identification of Concanavalin A-Binding Plasma Membrane Antigens of Rat Liver. //FEBS Lett. 1975. - v.54. - p. 139.

30. Beyer C. and Bowers W. Periodate and Concanavalin A Induce Blast Transformation of Rat Lymphocytes by an Indirect Mechanism, //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1975. - v.72. - p.3590.

31. Black C.D., Kroczek R.A., Barbet J., et al. Induction of IL-2 receptor expression in vivo: response of Concanavalin A. //Cell Immunol. 1988. -v.lll.- p.420-432.

32. Bockman D.E. Fine structure of normal human thymus from children and adults. //RES J. Reticuloendothel. Soc. - 1977. - v.22. - №6. - p.36.

33. Boenisch T. and Norgaard-Pedersen B. Carcinoembryonic Antigen (CEA) of Human Tissue Extracts: Partial Characterization of Two Variants Separated by Affinity Chromatography on Concanavalin A. //Clin. Chim. Acta. 1975. -v.60. — p.51.

34. Bonder C., Ajuebor M., Zbytnuik L. et al. Essential Role for Neutrophil Recruitment to the Liver in Concanavalin A-Induced Hepatitis. // J. of Immunol. 2004. - v. 172 -Nl. - p.45-53.

35. Brattain M. Jones C., Pittman J. and Pretlow T. The Purification of Carcinoembryonic Antigen by Glutaraldehyde Cross-Linked Concanavalin A //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975. — v.65. - p.63.

36. Brunson K. and Watson D. Concanavalin A Preparation with Activities Related to Bacterial Lipopolysaccharide. //J. Immunol. 1975. - v. 115. -p.599.

37. Chikamori K., Araki Т., Yamada M. Pattern analysis of geterogenous distribution succinate dehydrogenase in single rat hepatic loubules. //Cell and Mol. Biol. 1985 - V.31.-N3.- p.217-222.

38. Clark A. and Denborough M. The Interaction of Concanavalin A with Blood-Group-Substance Glycoproteins from Human Secretions. //Biochem. J. — 1971. -v.121.-p. 811.

39. Cunningham В., Wang J., Waxdal M. and Edelman G. The Covalent and Three-Dimensional Structure of Concanavalin A. II. Amino Acid Sequence of Cyanogen Bromide Fragment F3. //J. Biol. Chem. 1975. - v.250. - p. 1503.

40. DePetris S. Concanavalin A Receptors, Immunoglobulins, and О Antigen of the Lymphocyte Surface. Interactions with Concanavalin A and with Cytoplasmic Structures. //J. Cell. Biol. 1975. - v.65. - p. 123.

41. Dourov N. Thymus Atrophy and Immune Deficient in Malnutrition. //The Human Thymus/Eddition H.Muller-Hermellink. -Berlin Springer Verlag. -1986 -p.127-150.

42. Dutton R.W. Inhibitory and stimulatory effects of Concanavalina A on the responce of mouse spleen cells to antiden. // J. Exp. Med. 1973. - v. 138. -p.1496.

43. Ekstedt R.D., Merdian D.G. Effect of Concanavalin A treatment of the allogenic responce of mice to challenge with P815 mastocytoma: Interleukin 2 treatment reverses Concanavalin A supression. // Cell Immunol. 1984. - v.85.- p.447.

44. Ellis J.A., Demartini J.C. Ovine Concanavalin A-induced supressor cells: generation, assay, age related effects and re-evaluation of mechanism of supression. //Immunol. 1985. - v.54. - p.353-362.

45. Farr A.G., Bruyn P. Macrophage-lymphocyte clusters in lymph nodes: possible substrate for cellular interactions in the immune response. //Amer. J. Anat. -1975. v. 144. - № 2. - p. 209-232.

46. Gantner F., Leist M., Lohse A.W. et al. Concanavalin A-induced T-cell-mediated hepatic injury in mice: the role of tumor necrosis factor. //Hepatology.- 1995.-v.21.- p.190-198.

47. Hentze H., Ganter F., Kolb S., Wendel A. Depletion of Hepatic Glutathione Prevents Death Receptor-Dependent Apoptotic and Necrotic Liver Injury in mice. //Am. J. of Pathology. 2000. - v. 156. - N6. - p.2045-2056.

48. Hasegawa A., Cheng X., Kajino K. et al. Fas-disabling small exocyclic peptide mimetics limit apoptosis by an unexpective mechanism. //PNAS. 2004. -v.101. - n.17. -p.6599-6604.

49. Hershkoviz R., Bruck R., Aeed H. et al. Treatment of concanavalin A-induced hepatitis in mice with low molecular weight heparin. //J. Hepatol. 1999. — v.31. - n.5. - p.834-840.

50. Huet C. and Bernadac A. Dynamic State of Concanavalin A. Receptor Interactions on Fibroblast Surfaces. //Biochim. Biophys. Acta. — 1975. — v.394. — p.605.

51. Inbar M. and Sachs L. Structural Difference in Sites on the Surface Membrane of Normal and Transformed Cells. //Nature. 1969. - v.223. - p.710.

52. Janossy G., Bofill M., Tredosiewicz L. et al. Cellular differentiation of lymphoid subpopulations and their microinviron.//The Human Thymus/Ed.H.Muller-Hermellink. Berlin, ect.,: Spriger Verlag. - 1986. -p.89-127.

53. Kato M, Ikeda N., Matsushita E, Kaneko S, Kobayashi K. Involvement of IL-10, an anti-inflammatory cytokine in murine liver injury induced by Concanavalin A. //Hepatol. Res. 2001. - v.20. - N2. - p.232-243.

54. Katzen H. and Soderman D. Interaction of Concanavalin Binding Sites on Concanavalin A-Agarose with Receptors on Adipocytes Studies by Buoyant Density Method. //Biochem. 1975. - v. 14. - p.2293.

55. Kimura K, Ando K, Ohnishi H, Ishikawa T, Kakumu S, Takemura M, Muto Y, Moriwaki H. Immunopathogenesis of hepatic fibrosis in chronic liver induced by repeatedly administered concanavalin A. //Int. Immunology. 1999. - N9. p. 1491-1500.

56. Kornfeld R. and Ferris C. Interaction of Immunoglobulin Glycopeptides with Concanavalin A.//J. Biol. Chem. 1975. - v.250. - p.2614.

57. Kristin H. The human thymus in desease with particular emphysis on thymus and thymoma. // The thymus gland. 1981. - London: Acad. Press. - p.85- 111.

58. Ksontini R. et all. Disparate Role for TNF-a and Fas Ligand in Concanavalin A-Induced Hepetitis. //J. Immunol. 1998. - v. 160. -p.4082-4089.

59. Kubota J. and Kanatani H. Concanavalin A: Its Action in Inducing Oocyte Maturation-Inducing Substance in Starfish Follicle Cells. //Science. 1975. -v.187. - p.654.

60. Langweiler M. I., Cockerell G.L. Generation of Concanavalin A-induced supressor cell in the cat. // Int. arch allergy appl. immunol. 1982. - v.69. -p.148-153.

61. Lasarte JJ, Sarobe P, Boya P et al. A recombinant adenovirus encoding hepatitis С virus core and El proteins protects mice against cytokine-induced liver damage. //Hepatology. 2003. - v.37. - n.2. - p.461-470.

62. Ma X., Qiu DK., Li EL, Peng YS, Chen XY. Effect of T-cell vaccination in murine experimental autuimmune hepatitis. //Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 2004. - v. 1. - p.44-46.

63. Martin J. Neuroendocrine regulation of immune response. //In: Neuroimmunology. /Ed. P.Beham, F.Spreafico. N.Y. - 1984. - 12. - p.443-444

64. Massaguer A, Perez-Del-Pulgar S., Engel P. et al. Concanavalin A-induced injury is severely impaired in mice deficient in P-selectin. //J. Leukoc. Biol. — 2004. v.72. - N2. - p.262-270.

65. Mathers D. and Usherwood P. Concanavalin A Blocks Desensitization of Glutamate Receptors on Insect Muscle Fibres. //Nature. 1976. - v.259. -p.409.

66. McKenzie G, Sawyer W. and Nichol L. The Molecular Weight and Stability of Concanavalin A. // Biochim. Biophys. Acta. 1972. - v.263. - p.283.

67. Mizuhara H., O'Neill E., Seki N., Ogawa T. et al. T cell activation-associated hepatic injury: mediation by tunor necrosis factors and protection by interleukin 6. //J. Exp. Med. 1994. - v. 179. - p. 1529-1537.

68. Mizuhara H, Uno M, Seki N et al. Critical involvement of interferon gamma in the pathogenesis of T-cell activation-associated hepatitis and regulatory mechanisms of IL-6 for the manifestation of hepatitis. //Hepatology. -1996. -N6. p.1608-1615.

69. Moscona A. Embryonic and Neoplastic Cell Surfaces: Availability of Receptors for Concanavalin A and Wheat Germ Agglutinin. //Science. — 1971. -v.171.-p.905.

70. Nadler L.M., Strachenko P., Hardy R. et al. Characterization of human B-cell specific antigen (B2) distinct from B1 //J. immunol. 1981. - v. 126. - p. 1941-1947.

71. Nel A.E., Wooten M.W., Galbraith R.M. Molecular signalin mechnisms in T-lymphocyte activation pathway: a review and future prospects. //Clin, immunol. and immunopathol. 1987. - v.44. -N2. -p. 167-186.

72. Nicholson G. Topography of Membrane Concanavalin A Sites Modified by Proteolysis. //Nature New Biol. 1972. - v.239. - p. 193.

73. Nicoletti F., Beltrami В., Raschi E. et al. Protection from concanavalin A (ConA)-induced T-cell-depended hepatic lesions and modulation of cytokine release in mice by sodium fusidate. //Clin. Exp. Immunol. 1997. - v.l 10. -N3.-479-484.

74. Ogawa M., Mori Y., Mori T. et al. Adoptive transfer of Experimental autoimmune hepetitis in mice — cellular interactin between donor and recipient mice. //Clin, exper. Immunol. 1988. - v.- 73. - n.2. - 276-282.

75. Okamoto Т., Nakano Y., Asakura W. et al. Expression of Cytokine mRNA in Extrahepatic Organs in a Mouse Concanavalin A-Hepatitis Model. //Jpn. J. Pharmacol. 1998. - v.77. - p.219-225.

76. Packman K., Packman U., Penning R. Allocation of the suppressive activity of normal peripheral blood lymphocytes induced by diffusion. // Cell Immunol. -1985. -v.94.-N1 -p.21-31.

77. Pommier G., Ripert G., Azoulay R. and Depieds R. Effect of Concanavalin A on Membrane-Bound Enzymes from Mouse Lymphocytes. //Biochim. Biophys. Acta. 1975.- v.389. - p.483.

78. Radaeva S., Sun R., Pan H., Hong F., Gao B. Interleukin 22 (IL-22) plays a protective role in T cell-mediated murine hepatitis: IL-22 is a survival factor for hepatocytes via STAT3 activation. //Hepatology. 2004. - v.39. - n.5. -p. 1332-1342.

79. Reeke G., Becker J., and Edelman G. The Covalent and Three-Dimensional Structure of Concanavalin A. IV. Atomic Coordinates, Hydrogen Bonding, and Quaternary Structure. //J. Biol. Chem. 1975. - v.250. - p. 1525-1529.

80. Roth R.,Cassel D., Maddux B. and Goldfine J. Regulatin of insulin receptor kinase activity by insulin mimickers and an insulin antagonist. //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1983. - v.l 15. - p.245-252.

81. Saito Т., Okumura A., Watanabe H. et al. Increase in Hepatic NKT Cells in Leucocyte Cell-Derived Chemotaxin 2-Defient Mice Contributes to Severe Concanavalin I-Induced Hepatitis. //J. Immunol. 2004. - v. 173. - p.579-585.

82. Sass G., Heinlein S., Agli A., Bang R. et al. Cytokine expressin in three model of experimental hepatitis. //Cytokine. 2002. - v. 19. - n.3. - p.l 12-120.

83. Sharon N. and Lis H. Lectins: Cell-Agglutinating and Sugar Specific Proteins. //Science.- 1972.-v. 177- p.949.

84. Shoham J., Inbar M. and Sachs L. Differential Toxicity on Normal and Transformed Cells in vitro and Inhibition of Tumour Development in vivo by Concanavalin A. //Nature. 1970. - v.227. - p. 1244.

85. Simon H., Wenzelides K., Guski H., Kranz D. Zur regeneration der leberparenchym und sinusoidazellen nach teilhepatektomie. // Zbl. allg. Pathol, und Patol. Anat. - 1985. - Bd. 130.-Nl. - p.57-62.

86. Smith E. and Goldstein 1. Protein-Carbohydrate Interaction. V. Further Inhibition Studies Directed Toward Defining the Stererochemical Requirements of the Reactive Sites of Concanavalin A. //Arch. Biochem. Biophys. 1967. -v.121. - p.88.

87. Smith W. G., Usinger W.R., Splitter G.A. Bovine Con A induced suppressor cell: generation, macrophage requirement and possible mechanisms of regulatory action. // J. Immunol. 1981. - v.43. - p.91-97.

88. Streetz K., Wustefeld Т., Klein C. at al. Lack of gpl30 expression in hepatocytes promotes liver injury. //Gastroenterology. 2003. - v. 125. - p.532.

89. Sumner J., and Howell, S. The Identification of the Hemagglutinin of the Jack Bean with Concanavalin A. //J Appl. Bacteriol. 1936. — v.32, p.227.

90. Sun R., Tian Z., Kulkami S. and Gao B. IL-6 Orevents T Cell-Mediated Llepatitis via Inhibition of NICT Cells in CD4+ T Cell- and STAT3-Dependent Manners. //J. Immunol. 2004. - v. 172. - p.5648-5655.

91. Suntucci L., Fiorucci S., Cammilleri F. ey al. Galectin-1 exerts immunomodulatory and protective effects on concanavalin A-induced hepatitia in mice. //Hepatology. 2000. - v.31. - n.2. - p.399-406.

92. Surh C.D. and Sprend J. Homeostasis T cell proliferation: how far can T cells be activated to self-ligands? //J. Exp. med. 2002. - v. 192. - f9.

93. Tiegs G., Hentschei J., Wendel A. A T cell-dependent experimental liver injury in mice inducible by Concanavalin A. //J. Clin. Invest. 1992. — v.90. — p. 196-203.

94. Toyabe S., Seki S., Iiai T. et al. Requirement of IL-4 and liver NK1f T cells for Concanavalin A-induced hepatitis injury in mice. Hi. Immunol. 1997. -v.159. - p.1537.

95. Toyoshima S., Iwata M., Osawa T. Kinetics of lymphocyte stimulation by Concanavalin A. // Nature. 1976. - v. 264. - p.447-449.

96. Trautwein C., Rakemann Т., Malek N. ey al. Concanavalin A-induced Injury Triggers Hepatocyte Proliferation. //J. Clin. Invest. 1998. - v.101. -n.9. - p. 1960-1969.

97. Tsutsui H, Adachi K., Seki E., Nakanishi K. Cytokine-induced inflamatory liver injures. //Curr. Mol. Med. 2003. - v.3. - n.6. - p.545-559.

98. Wang J., Cunningham В., Waxdal M. and Edelman G. The Covalent and Three Dimensional Structure of Concanavalin A. I. Amino Acid Sequence of Cyanogen Bromide Fragments F1 and F2. //J. Biol. Chem. 1975.,v.250. — p. 1490.

99. Wang J., Zhao Y., Xu Q. Astibin prevents concanavalin A-inducecl liver injury by reducing TNF-alfa production and T lynphocytes adhesion. //J. Pharm. Pharmacol. 2204. - v.56. - n.4. - p.495-502.

100. Xiang M., Zaccone P., Marco D. et al. Prevention by rolipram of concanavalin A-induced T-cell-dependent hepatitis in mice. //Eur. J. Pharmacol. 1999.- v.367.- n.2-3. - p.399-404.

101. Yamanaka A., Hamano S., Miyazaki Y. et al. Hyperproduction of proinflammatory cytokines by WSX-1 -dificient NKT cells in concanavalin A-induced hepatitis. //J. Immunol. 2004. - v. 172. - n.6. - p.3590-3596.