Патоморфологическая характеристика тимуса и селезенки кур при вирусном гепатите Е тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.01, кандидат биологических наук Токарев, Олег Игоревич

• Токарев, Олег Игоревич
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Токарев, Олег Игоревич

СОДЕРЖАНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Эпизоотологические данные и клиническая картина при 10 вирусном гепатите Е кур

2.2. Характеристика возбудителя вирусного гепатита Е

2.3. Патогенез, диагностика и патологоанатомическая картина при 14 вирусном гепатите Е кур

2.4. Дифференциальный диагноз вирусного гепатита Е кур

2.5. Механизм противовирусного иммунитета

2.6. Органы иммунной системы птицы

2.6.1. Тимус

2.6.2. Селезенка

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материал и методы

3.2. Результаты собственных исследований

3.2.1 Гематологические показатели при вирусном гепатите Е кур

3.2.2 Биохимические показатели сыворотки крови при вирусном 43 гепатите Е кур

3.2.3. Патологоанатомическая картина при вирусном гепатите Е

кур

3.2.4. Патогистологические изменения тимуса кур при вирусном 65 гепатите Е

3.2.5. Патогистологические изменения селезенки кур при вирусном

гепатите Е

4. Обсуждения

5. Выводы

6. Практические предложения

7. Список литературы

8. Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Патоморфологическая характеристика тимуса и селезенки кур при вирусном гепатите Е»

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ

Птицеводство - одно из ведущих отраслей животноводства в современной России. Продукты производства сельскохозяйственной птицы используются в пищевой и легкой промышленности, - это высококачественные продукты питания (яйцо, мясо) и сырье (пух, перо и др.). Птицеводство отличается высокой рентабельностью, плодовитостью и скороспелостью (В.И.Фисинин, 2009). Продуктивность птицепоголовья зависит от условий содержания и степени иммунологической защиты, а так же от проводимых профилактических мероприятий, своевременного выявления заболеваний и проводимых мер борьбы с ними (Б.Ф. Бессарабов, Е.С. Воронин и др., 2007). В последнее время птицеводческое хозяйство стало все более подвержено инфекциям, заносимым из стран дальнего и ближнего зарубежья, которые ранее не регистрировались на территории Российской Федерации и, тем самым, вызывают затруднения в диагностике. В частности, серьезной проблемой птицеводческих хозяйств становится вирусный гепатит Е кур. Впервые это заболевание было зарегистрировано в 80-х годах прошлого века на птицефабриках Австралии, Великобритании, Японии и США среди кур-бройлеров взрослого стада (J.H. Handlinger, W. Williams, 1999; F.F. Huang et al., 2004; Billam, F.F. et al., 2005). В России Ибрагим Ел-Морси в 2004 году проводил исследования в Екатеринбурге и у 18,3 % обследуемых кур обнаружил анти-ВГЕ, что свидетельствует о циркуляции ВГЕ на этой территории (Ибрагим Ел-Морси, 2004).

Реализация программ по ликвидации инфекционных заболеваний показала, что при их выполнении возрастает роль лабораторной диагностики. Ранняя диагностика первых случаев эпизоотических инфекций позволяет своевременно провести противоэпизоотические мероприятия. Для получения правильного представления о болезни необходимо особенно тщательно изучить местные органные поражения, которые обычно проявляются

наиболее ярко. Очень важным является изучение морфогенеза заболевания, -от начала его возникновения до завершения.

В связи с этим, изучение патологоанатомической картины при вирусном гепатите Е кур и морфофункциональное состояние органов иммунной защиты считаем актуальным.

Целью настоящей работы явилось исследование патологоанатомической картины и патогистологических изменений тимуса и селезенки при вирусном гепатите Е кур.

Для выполнения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

1. изучить морфофункциональные показатели крови больных вирусным гепатитом Е кур, в том числе и при ассоциативном течении с другими заболеваниями;

2. описать патологоанатомическую картину при вирусном гепатите Е кур, в том числе и при ассоциативном течении с другими заболеваниями;

3. изучить гистологические изменения тимуса при вирусном гепатите Е кур, в том числе в ассоциации;

4. изучить гистологические изменения селезенки при вирусном гепатите Е кур, в том числе в ассоциации.

Научная новизна.

Впервые выявлено, что при вирусном гепатите Е у кур происходят глубокие изменения показателей крови, выражающиеся макроцитарной анемией гиперхромного типа, снижением количества лейкоцитов, лимфоцитопенией, свидетельствующие о снижении иммунной защиты организма.

Обнаружены изменения в сыворотке крови, - уменьшение альбуминов, билирубина, увеличение аспартатаминотрансферазы (АсАТ), активность ЛДГ и щелочной фосфатазы увеличиваются более чем в два раза, характеризующие значительное поражение печени, которые

могут быть критериальными для прижизненной диагностики данного заболевания.

Впервые описаны центральные и периферические органы иммунной системы (тимус и селезенка) при вирусном гепатите Е кур, в том числе в ассоциации с другими заболеваниями. При вирусном гепатите Е кур в тимусе наблюдается значительная гибель лимфоцитов, некрозы, появление молодых телец Гассаля. В селезенке исчезает белая пульпа, возникают амилоидобласты, синтезирующие амилоид, в красной пульпе появляется много бластных форм клеток лимфоидного ряда, происходит активная плазматизация органа.

Теоретическая и практическая значимость работы. Исследованы изменения в крови при вирусном гепатите Е кур. Изучены патологоанатомическая картина при вирусном гепатите Е кур и патогистологическая картина тимуса и селезенки. Результаты исследований используются в учебном процессе ряда ВУЗов. По результатам исследований разработаны методические рекомендации "Диагностика вирусного гепатита Е кур", утвержденные НТС МСХиП Ростовской области (Протокол №11 от 14.10.2011 г.) в помощь практикующим ветеринарным врачам птицеводческих хозяйств различных форм собственности, которые приняты к внедрению Министерством сельского хозяйства Республики Северная-Осетия Алания, Областной ветеринарной лабораторией Ростовской области.

Данные, полученные в ходе проведенной работы, могут быть использованы в учебном процессе высших и средних учебных заведений ветеринарного профиля при проведении занятий по эпизоотологии и патологической анатомии, а также при проведении курсов повышения квалификации для преподавателей и ветеринарных врачей, написании учебников и монографий, выполнении научных исследований.

Реализация результатов исследований.

Основные результаты научных исследований вошли в отчеты ГНУ СКЗНИВИ РАСХН за 2011г. по теме «Разработать новые высокоэффективные средства и оптимальные способы их применения для диагностики, профилактики и борьбы с инфекционными и паразитарными болезнями, наносящими наибольший ущерб промышленному птицеводству» Государственный регистрационный номер 15070.7823003000.07.7.001.7.

Материалы исследований используются как справочный материал в научно-исследовательской работе и на курсах повышения квалификации ветеринарных специалистов, а также при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по дисциплинам болезни птиц, патологическая анатомия и судебно-ветеринарная экспертиза кафедры морфологии и патологии животных ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ»; кафедры анатомии, патологической анатомии, акушерства и хирургии ФГОУ ВПО «Башкирский ГАУ»; кафедры ВСЭ и заразных болезней ФГОУ ВПО «Оренбургский ГАУ»; по курсам патологической физиологии и патологической анатомии животных и гистологии ФГОУ ВПО «Горский ГАУ»; кафедр анатомии, гистологии и патологической анатомии и ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО «Омский ГАУ»; по курсам анатомия домашних животных, морфология сельскохозяйственных животных, патологическая анатомия, вскрытие, судебная ветеринарная медицина кафедры анатомии сельскохозяйственных животных ФГОУ ВПО «Нижегородская ГСХА»; по курсам вирусологии, эпизоотологии, патологической анатомии на кафедре «Эпизоотологии и зоогигиены» ФГОУ ВПО «Самарская ГСХА»; по дисциплинам патологическая анатомия и патологическая физиология в Институте ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Алтайский ГАУ».

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и получили положительную оценку на 73 и 74 научно-практических конференциях

профессорско-преподавательского состава ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет», г. Ставрополь, 2008-2011гг., VI Всероссийской дистанционной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России», ДонГАУ, пос. Персиановский, 2009; Международной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного производства», г. Курск, 2010; Международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки», г. Владикавказ, 2010, 2011; Международной научно-практической конференции «Кадровое и научное обеспечение инновационного развития отрасли животноводства», г. Казань, 2010; Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства», г. Новочеркасск, 2011; 17-й Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии животных «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных», г. Москва, 2011.

Публикации.

По результатам исследований опубликовано 12 научных работ, 3 из которых в изданиях, входящих в Перечень рекомендованный ВАК РФ. Изданы Методические положения «Диагностика вирусного гепатита Е кур».

Научные положения, выносимые на защиту.

1. Изменения морфофункциональных параметров крови, характерные для вирусного гепатита Е кур.

2. Патоморфологические изменения в тимусе и селезенке кур при вирусном гепатите Е и при его ассоциативном течении с другими заболеваниями.

Объем и структура диссертации.

Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы,

практические предложения и список литературы. Список использованной литературы включает 151 источник, в том числе 70 - иностранных авторов. Имеются приложения. Работа изложена на 125 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 76 микрофотографиями, 6 таблицами, 21 диаграммаой.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1. Эпизоотологические данные и клиническая картина при вирусном гепатите Е кур

Эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням домашних птиц определяется многими факторами: контакт с дикими мигрирующими и прикармливающимися на птицефабриках птицами, межхозяйственные связи как внутри страны, так и с зарубежными странами и ряд других факторов, которые усугубляют эпизоотическую ситуацию по инфекционным болезням в этой отрасли и приводят к значительным экономическим потерям (И.А. Бакулов, 1998; H.A. Лагуткин, 1996, 1998).

С 80-х годов прошлого века на птицефабриках в Австралии, Великобритании, Японии и США среди кур-бройлеров взрослого стада обнаружено инфекционное заболевание с характерными симптомами, -увеличение печени и селезенки. Исходя из основных проявлений, в Австралии за болезнью закрепилось название - «Big Liver and Spleen Disease (BLSD) - большие печень и селезенка» (J.H. Handlinger et al., 1999). При электронно-микроскопическом исследовании образцов желчи больных цыплят обнаружены частицы вируса (без наружной оболочки, размером 3035 nm), подобные по своим морфологическим характеристикам вирусу гепатита Е человека (G. Haqshenas et al., 2001). F. F. Huang et al., (2002) в США идентифицировали и описали новый вирус, назвав вирусом птичьего гепатита Е (птичий HEV). X.J. Meng et al., (1997) сообщает о схожести птичьего HEV с HEVs свиньи и человека, а так же с инфекционным австралийским заболеванием «большая печень и селезенка кур» (BLSV). По их данным, определенные антигенные детерминанты в белке капсулы вируса птичьего HEV сходны со свиным и человеческим HEVs, так же как и с BLSV.

Геном HEV - единичная переплетенная молекула РНК. Первичный путь передачи HEV является фекально-ротовым. Болезнь характеризуется высокой смертностью.

N.L. Tablante et al. (1994), X.J. Meng et al., (1998), P.G. Halbur et al. (2001) констатируют, что зарегистрирована межразновидностная передача HEV: свинья, больная HEV, заражает нечеловеческих приматов, а человеческий HEV передается свиньям.

C.J. Payne et al. (1999), G. Haqshenas et al. (2001) обнаружили идентичность последовательности нуклеотида птичьего HEV с HEVs человека и свиньи на 50-60 % и на 80% с австралийским синдромом «большая печень и селезенка» (BLSV). Геном птичьего HEV также морфологически подобен человеческому HEV (G. Haqshenas et al., 2001).

S.J. Ritchie et С. Riddell (1991), Tablante et Vaillancourt (1994), M.A. Riddell et al., (1999), H.L. Shivaprasad et P. Woolcock, (2001); описывают случаи заболевания BLSV кур-несушек 30-72 недельного возраста в Канаде и США, которые характеризуются большой летальностью.

По данным тестирования на ВГЕ при обследовании 76 птицеводческих ферм, расположенных в 5 штатах США, положительный результат зарегистрирован от 1,27 до 44,1% образцов кур среди 53 птицеводческих ферм (69,7%) (F.F. Huang et al., 2002). Антитела HEV были обнаружены во Вьетнаме в 44 % исследованной птицы (Tien et al., 1997) и в Бразилии (20 % от поголовья исследованной птицы) (Vitrai et al., 2005).

В России Ибрагим Ел-Морси с соавт. (2004) проводил исследования в Екатеринбурге и у 18,3 % обследуемых кур выявил антитела ВГЕ. Обнаружение антител ВГЕ среди животных, обитающих в России, свидетельствует о циркуляции ВГЕ на этой территории. Результаты изучения гепатита Е, полученные при выполнении работы Ибрагима Ел-Морси с соавт. (2004), свидетельствуют о важности проблемы гепатита Е для здравоохранения России.

Из-за отсутствия клеточной культуры и доступной животной модели патогенез и репликация HEV недостаточно изучены. Открытие варианта вируса у кур, получившего название HEV птиц, позволяет рассматривать кур

в качестве модели для изучения HEV (P. Billam, F.F. Huang, Z.F. Sun et al., 2005).

G. Haqshenas et al., (2001), используя филогенетический анализ, подтвердили отдаленные отношения HEV к вирусу гепатита Е млекопитающих и дополнительно предположили, что птичий HEVs может быть разделен на три различных генотипа: 1 (Австралия), 2 (США) и 3 (Европа), обозначая географическую структуру распределения. Птичий HEV был идентифицирован и охарактеризован в образцах желчи цыплят с синдромом спленомегалии и гепатита.

Ученые Австралии, США и Европы, - G. Haqshenas, H.L. Shivaprasad, P. Woolcock, X.J. Meng (2001) в своем исследовании выявили, что ген вируса птичьего гепатита Е (птичий HEV) австралийца и европейца имеют почти полные одинаковые геномные последовательности.

КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА. Болезнь обнаруживается у взрослых птиц. Гепатит Е характеризуется понижением яйценоскости, большой летальностью. При вскрытии выявляется спленомегалия, гепатомегалия, а гистологически - лимфопролиферация, сопровождаемая лимфоидной деструкцией, которая совпадает с клиническими симптомами. Ivana Bilic at al, (2002). H.L. Shivaprasad et al., (2003), гистологически обнаружили также васкулиты, кровоизлияния и отложения амилоида в органах. P. Billam et al. (2007) успешно воспроизвели гистологические поражения в печени, указывающие на HS-синдром без заражения вирусом ВГЕ. Имеется мнение, что его возникновение связано с высококалорийным питанием птиц из-за чего и происходит жировое перерождение печени и как следствие разрыв капсулы и кровоизлияния E.J. Skvairs, (1988). S.J. Ritchie et С. Riddell (1991), Tablante et Vaillancourt (1994), H.L. Shivaprasad et P. Woolcock (1995); M.A. Riddell et al. (1999) при вскрытии описывают перерождение яичников, наличие красной жидкости в брюшной полости, увеличенные печень и селезенка. Подобные патологические поражения выявили у австралийских кур при синдроме BLSV C.J. Payne et al. (1999) и G. Haqshenas et al. (2001).

Многие исследователи отмечают, что в разных стадах степень тяжести заболевания и патологоанатомических изменений совершенно разная. Это может свидетельствовать о наличии иммунитета, полученного в результате инфицирования каким-либо малопатогенным штаммом данного вируса, либо о трансовариальном пути передачи иммунитета.

2.2. Характеристика возбудителя вирусного гепатита Е

Вирус гепатита Е (HEV), впервые был описан при помощи электронной микроскопии в 1983 году, как сферическая вирусная частица, размером 27 - 30 нм (Balayan et al., 1983). Balayan et al. (1983) дали название -вирус не-А и не-В гепатита, а вирус HEV и предложили отнести его в семейство Picornaviridae. Однако более поздние исследования показали, что вирион не имеет капсулы и по структуре не может принадлежать к этому семейству (Acha and Szyfres, 2003). Между 1988 и 1998 гг. HEV был экспериментально отнесен в Семейство Caliciviridae, основанное на морфологии вириона. Эта классификация была также отклонена после анализа филогенеза генома HEV. В дальнейшем HEV был обозначен как независимый HEV-подобный вирус, не принадлежащий ни к какому семейству (Berke и Matson, 2000; Acha и Szyfres, 2003). В настоящее время, HEV - единственный представитель Рода Hepevirus, семейства Hepeviridae (Emerson et al., 2004). В результате исследований выявлено, что по филогенезу HEV близок к вирусу Краснухи: род Alphavirus, семейство Togaviridae и к Некротическому желтому вирусу сахарной свеклы: Род Furovirus, семейство Togaviridae (Berke и Matson, 2000).

Серологические исследования показали, что антитела HEV присутствуют у многочисленных разновидностей животного мира промышленно развитых стран, включая свиней, грызунов, цыплят, собак, коров, овец и коз (Favorov et al., 1998; V.A. Arankalle et al., 2001). Кроме того, по мнению Meng et al. (1997), выделенный HEV свиньи близко связан с HEV человека, идентифицированного в США.

Meng et al. (1998a) и Halbur et al. (2001) экспериментально доказали близкое родство свиного и человеческого вируса, заразив HEV свиньи обезьян резуса и шимпанзе, а человеческим HEV - свинью.

Острое течение HEV во всем мире встречается в виде спорадических случаев и эпидемий. Заражение HEV происходит, главным образом, алиментарно, в связи с этим, эпидемии часто связывают с загрязнением воды. Предполагается также возможность зоонозной передачи вируса. Поэтому HEV рассматривается как новый инфекционный агент с зоонозным потенциалом. Таким образом, птичий HEV это один из пяти генотипов HEV или принадлежит к отдельному роду (Huang et al., 2002).

2.3. Патогенез, диагностика и патологоанатомическая картина при вирусном гепатите Е кур

Заражение HEV происходит алиментарно. Вирус проникает сквозь стенки кишечника и попадает в кровоток. Репликация HEV происходит в гепатоцитах. Неструктурный белок м-РНК HEV внедряется в цитоплазму гепатоцитов, что необходимо для репродукции вируса. Negative sense РНК служит матрицей. С помощью протеазы происходит расщепление неструктурного белка вируса. С помощью РНК-полимеразы из неструктурного матричного гена происходит синтез положительной цепи РНК. Эта полимераза является поддающейся обнаружению только при повторном исследовании. Используя in situ реакцию гибридизации, РНК HEV была обнаружена на внутренней поверхности эпителиоцитов желчного протока. Другие исследования продемонстрировали переход HEV от гепатоцитов в эпителиоциты желчных протоков и желчного пузыря в острой стадии болезни (Kawai et al., 1999; Williams et al., 2001).

Ответная иммунная реакция на внедрение вируса изучена только у людей. С появлением симптомов в сыворотке крови против HEV образуются IgM, позже - IgG титра. При выздоровлении наблюдается резкое снижение IgM (Chauhan et al., 1993). По мнению Clayson et al., (1995), антитела IgG

сохраняются в организме зараженных людей в течение нескольких лет, у 47 % пациентов - больше 14 лет.

Матричная РНК HEV была обнаружена в эпителии тонкой кишки, в селезенке, миндалинах, в костном мозге, слюнных железах, брыжеечных и паховых лимфатических узлах (млекопитающих), почках и моче (Williams et al, 2001).

Для диагностики ВГЕ кур в США, Канаде и Китае в качестве антигена для проведения ИФА используют очищенный усеченный белок ORF2 выделенный из самого ВГЕ кур. Он позволяет определить специфический анти-ВГЕ иммуноглобулин G (IgG). Ранее такая же схема применялась для обнаружения антител в сыворотке крови у людей и свиней (X.J. Meng, 1997, 1998а, 1998b, 1999). В Японии, США, Канаде, Мексике, Индии, Пакистане для выявления изолятов ВГЕ птиц были разработаны праймеры для анализа обратной транскрипции-ПЦР (RT-PCR), которые способны обнаруживать штаммы ВГЕ со значительной генетической изменчивостью. В процессе изучения вируса было выявлено, что ген геликазы подвержен наименьшей изменчивости и встречается у более, чем 80% штаммов (G. Haqshenas, 2001; C.J. Payne, 1993), поэтому разработка праймеров для ПЦР была направлена в область данного гена. Все известные праймеры зарегистрированы в базе данных GenBank и успешно внедрены в производство.

В 2009г д-р X. J. Meng, G. Haqshenas et al, (2009) запатентовали живую инактивированную вакцину против ВГЕ кур, а так же диагностические наборы для ПЦР и ИФА диагностики (патент №7842298).

При патологоанатомическом вскрытии выявлены регрессивные яичники, красная жидкость в брюшной полости, увеличенная печень и селезенка (Billam et al, 2005).

При проведении посмертного обследования 245 птиц, 78% из них имели поражения печени и селезенки, у 44% птиц из последнего числа регистрировали изменения, наблюдаемые при синдроме гепатита-спленомегалии с поражениями от острой формы лимфоплазмоцитного

гепатита до хронического тяжелого холангиогепатита с геморрагиями, васкулитом и амилоидозом. У 11% птиц отмечены поражения, типичные для синдрома жировой геморрагической дистрофии печени (A.C. Agunos, 2006).

2.4. Дифференциальный диагноз вирусного гепатита Е кур

Анализируя данные литературных источников, нами выявлено, что вирусный гепатит Е кур имеет некоторые сходные признаки с рядом других заболеваний.

Многоцентровой гистиоцитоз также имеет название «болезнь большой селезенки Марека» или «ретикулоэндотелиоподобный синдром».

При развитии заболевания происходит увеличение селезенки в два -четыре раза по сравнению с нормой, а печени - в два раза. Однако многоцентровой гистиоцитоз наряду с увеличением селезенки и печени характеризуется появлением множества небольших белых узелков в селезенке, печени и почках (Б.У. Кэлнек, 2006).

На поверхности селезенки и печени возникают просовидные (0,5 - 2 мм) узелки, цвета от белого до желтого. Диагноз ставят на основании гистологических исследований узелков, образовавшихся в органах. В узелках в большом количестве присутствуют митотические фигуры и отдельные некротические клетки. Многоядерные клетки отсутствуют. Внутри узелков часто присутствует небольшое количество плазматических клеток, небольших лимфоцитов, неравномерно распределенных в герментативных центрах лимфобластов (Б.У. Кэлнек, 2006).

В отличие от вирусного гепатита Е многоцентровым гистиоцитозом болеют молодые куры-бройлеры. Заболевшие птицы бледнеют и отстают в росте по сравнению с остальной птицей.

Болезнь Марека хроническое заболевание птиц отряда куриных, характеризующееся развитием неопластических лимфоидных опухолей в паренхиматозных органах, водянкой грудобрюшной полости (Р.Н. Коровин, 1995).

Однако при болезни Марека у кур отмечается также ряд характерных патологоанатомических признаков, отсутствующих при вирусном гепатите Е: При классической (нервной) форме:

1. сероглазие, деформация зрачка;

2. неврит с резким утолщением в седалищных нервах и в нервах плечевого и пояснично-крестцового сплетений;

3. опухолевидные саловидные узлы в яичнике и семенниках;

4. истощение и общая анемия;

5. гисто: размножение лимфоцитов, плазмоцитов и гистиоцитов в утолщенных нервах и опухолевых узлах.

При острой (висцеральной, опухолевой) форме:

1. сероглазие;

2. опухолевидные, саловидные узлы в подкожной клетчатке, скелетных мышцах, печени, селезенке, почках, яичнике, семенниках, легких, железистом желудке, кишечнике, брыжейке;

3. атрофия или опухолевидные узлы в тимусе и фабрициевой бурсе;

4. неврит с утолщением (не всегда);

5. гиперплазия перьевых фолликулов;

6. гисто: размножение лимфоцитов, плазмоцитов и гистиоцитов в опухолевых узлах.

Лейкоз птиц - злокачественная вирусная болезнь, характеризующаяся поражением, главным образом, органов кроветворения. Характерными признаками лейкоза кур являются:

1. разрастание (диффузный или в виде узлов) саловидной опухолевой ткани в фабрициевой бурсе.

2. опухолевидные, саловидные узлы в сердце, легких, железистом желудке, кишечнике, печени, селезенки, почках.

3. истощение и общая анемия.

4. гисто: опухолевая ткань состоит из лимфоцитов.

Патоморфологическая диагностика при лейкозе и болезни Марека является

основной и наиболее точной в дифференцировке данных заболеваний (В.О. Ежков, E.H. Сердюкова, 2003).

Синдром гидроперикардита кур (синонимы: гепатит с тельцами -включениями - гидроперикардит, синдром острой смерти, аденовирусный гидроперикардит, болезнь Ангара, болезнь Личи) - острое инфекционное заболевание молодняка кур, характеризующееся высокой смертностью. Чаще встречается у цыплят-бройлеров в возрасте 4-9 недель (J.R. Pettit, Н.С. Carlson, 1972). Заболевание протекает остро или хронически. Клинические признаки болезни нехарактерны, при хронической форме часто отсутствуют. Наибольший отход цыплят при острой форме наблюдается в течение первых 3_4 суток. В других случаях смертность птиц нарастала постепенно и сохранялась на протяжении 10-14 суток. Смертность варьировала от 2 до 10 %, иногда достигала 30 и более процентов (А.Р. Laursen-Jones, 1972), а в экспериментальных условиях - от 60 - 100 % (R.M. Мс. Cracken, В.М. Adair, 1993). Больные птицы взъерошены и угнетены, отмечается бледность кожных покровов, диарея с примесью уратов (R.H. Long, 1973).

Согласно данным В.А. Бакулина (1998), на территории Российской Федерации гепатит с тельцами-включениями регистрировали в период с 1985 по 1987 годы. Падеж у 50-60 суточных цыплят колебался в пределах от 12 до 30 % и был наиболее выражен у 30-50-суточных птиц.

Таким образом, анализируя данные литературных источников, нами выявлено, что вирусный гепатит Е кур имеет некоторые сходные признаки при ряде других заболеваний.

2.5. Механизм противовирусного иммунитета.

Вирусные инфекции значительно отличаются от бактериальных и имеют свои особенности патогенеза. Возбудителям вирусных болезней присущи облигатное внутриклеточное паразитирование в определенных тканях или органах, обеспечивающих для этого благоприятные условия (А.А.Смородинцев, 1975, цит. по Н.И. Архипову, 1983). Пути проникновения

возбудителей вирусных болезней в организм различны, чаще всего входными воротами являются желудочно-кишечный тракт и органы дыхания (Н.И. Архипов, 1983).

Процесс размножения вируса схематически складывается из следующих основных этапов: адсорбция на поверхности клетки, проникновение внутрь, депротеинизация, синтез вирусных нуклеиновых кислот и белков, формирование вирионов и выход их из клетки (Н.И. Архипов, 1983).

В основе патологических изменений при разнообразных вирусных болезнях лежит либо разрушение клеток, либо их усиленное размножение. В клетках происходит перестройка обмена веществ и антигенной структуры с образованием необычных продуктов обмена (Н.И. Архипов, 1983).

Характерным морфологическим изменением зараженных клеток является образование телец-включений. Они могут быть одиночными или множественными, большими или малыми, округлыми или неправильной формы, внутриядерными или цитоплазматическими, ацидофильными или базофильными (Н.И. Архипов, 1983).

Реакция организма на систему вирус-клетка характеризуется лимфогистиоцитарной инфильтрацией различных органов и определяется иммунологической реакцией замедленного типа, а также иммунопатологическими процессами, развивающимися в организме на гетерогенезированные вирусом клеточные структуры, а не на вирусные частицы. Следствием этого может быть возникновение тяжелых поражений стенок кровеносных сосудов, нарушение их проницаемости, возникновение отеков, кровоизлияний, воспалительных процессов, дегенераций, некрозов, могущих привести организм к гибели (Н.И. Архипов, 1983).

По мнению А.Д. Адо (1978), у животных, зараженных РНК- и ДНК-содержащими вирусами, выявлены иммунопатологические феномены.

Взаимодействие вирусов с клетками иммунной системы играет центральную роль в патогенезе многих вирусных болезней и присуще практически всем вирусным болезням животных с системной патологией.

Наиболее важный аспект этого явления - иммунологическая депрессия. Основу явлений иммунологической депрессии на клеточном уровне составляют четыре механизма:

■ может происходить конкуренция иммунологических процессов,

включая интерференцию вакцинных вирусов, на всем пути, который

проходит антигенная информация;

■ Между вирусами или их антигенами возможна конкуренция за

стволовую кроветворную клетку:

■ Многие вирусы способны повреждать макрофаги и выводить из строя

это центральное звено, осуществляющее взаимодействие между

клетками иммунной системы;

■ Некоторые вирусы непосредственно обусловливают патологию

лимфоидных органов, вызывая дисфункцию Т- и B-систем иммунитета

разной степени (В.В. Макаров, С.Ф. Чевелев, 1983).

Вирусиндуцированная активация комплемента без участия антител играет ключевую роль на различных стадиях вирусной инфекции. Активация комплемента некоторыми вирусами приводит к супрессии вирусной инфекции, тогда как сам комплемент играет роль в развитии иммунопатологии. При этом развивается острое воспаление и размножение вируса задерживается в клетках эпителия (Н. Ohta, 1988).

2.6.0рганы иммунной системы птицы

Лимфоидная ткань у птиц, кроме водоплавающих, сосредоточена под эпителием слизистых оболочек пищеварительной и дыхательной систем. Кроме того, она значительно развита в зобной железе, фабрициевой сумке (бурсе) и селезенке (И.А. Болотников, 1993). Бурса и тимус выделены как центральные лимфоидные органы у птиц, играющие существенную роль в развитии иммунитета. Удаление одного из этих органов в первый день с последующим облучением позволило выявить две различающиеся клеточные

системы и установить, что тимус контролирует клеточный иммунитет, а бурса - синтез антител.

Характерным морфологическим признаком органов иммунной системы является наличие лимфоидных образований, которые представляют собой морфофункциональный комплекс лимфоцитов, плазмоцитов, макрофагов и других лимфоидных клеток, находящихся в петлях ретикулярной ткани. Именно лимфоидные структуры образуют паренхиму органов иммуногенеза, где происходят процессы пролиферации, созревания и дифференциации клеток лимфоидного ряда (Б.Ф. Бессарабов с соавт, 2007).

У птиц лимфоидные органы по степени функциональной активности и значимости в развитии иммунного ответа, так же как и у млекопитающих, принято подразделять на первичные, или центральные, и вторичные, или периферические. К центральным органам иммунитета птицы относят эмбриональный желточный мешок, костный мозг, тимус, фабрициевую сумку (бурсу) (Ю.В. Конопатов, Е.Е. Макеева, 2000). К периферическим (вторичным) лимфоидным органам птицы относятся селезенка, лимфоидные узлы слепых отростков, Гардерова железа, скопления лимфоидных элементов глотки, гортани, бронхов и кишечника и в виде небольших скоплений лимфоидных клеток в других органах и тканях (И.М. Карпуть, 1993; Р.Л. Оуэн, 1996; Э. Монтиэль, 1998; Ю.В. Конопатов, Е.Е. Макеева, 2000; Н.И. Женихова, 2001; С.Б. Селезнев, 2008).

Иммунная система птиц находится на такой же высокой ступени развития, как и у млекопитающих, но организована несколько иначе. Центральное звено иммунной системы птиц, в отличие от млекопитающих, полностью отделено от системы кроветворения, то есть у птиц имеет место топографическое и органное обособление части системы, которая отвечает за пролиферацию, созревание и дифференциацию Т-лимфоцитов (тимус) и В-лимфоцитов (клоакальная сумка). Красный костный мозг у птиц является только органом гемопоэза и выполняет функцию кроветворения (Б.Ф. Бессарабов с соавт, 2007).

У птиц имеются некоторые особенности иммунной системы: нет четко выраженной сети лимфатических сосудов и лимфатических узлов (Mizefewski, 1973), и на первых этапах развития эмбриона основную защитную функцию выполняют многие молодые эмбриональные клетки, обладающие фагоцитарной активностью.

Центральные органы (тимус и клоакальная сумка) выполняют основную роль в дифференцировке и созревании предшественников иммунокомпетентных клеток (E.H. Горышина, О.Ю. Чага, 1990).

Характерным морфологическим признаком всех органов иммунной системы является наличие в них лимфоидных образований. В центральных лимфоидных органах они дифференцируются на корковую и мозговую зоны, а в периферических - на лимфоидные узелки и диффузные скопления лимфоидной ткани (Г.А. Заварзин, 1985, 1999; В.Г. Галактионов, 1986, 1997).

Обращает на себя внимание тот факт, что органы иммунной системы располагаются в организме не беспорядочно, а в определенных строго ограниченных местах. Центральные органы находятся в хорошо защищенных местах: тимус - в грудной, а фабрициева сумка - в грудобрюшной полостях тела. Периферические органы располагаются на границе организма с внешней средой и на путях циркуляции крови и лимфы и представляют собой анатомически рассеянную, но стратегически распределенную защитную сеть против генетически чужеродных клеток или веществ (С.Б. Селезнев, 2008).

2.6.1. Тимус

Тимус является центральным органом лимфоидной системы, в котором из стволовых клеток созревают и дифференцируются популяции Т-лимфоцитов, ответственных за реакции клеточного иммунитета (Л. В. Белецкая и др., 1986).

У птиц тимус на всем протяжении представлен парными цепочками долей, простирающимися вдоль трахеи с каждой стороны шеи (В .И. Шимкевич, 1923; Г.С. Крок, 1962; H.H. Козырь, 1967; Н. Watney et al., 1982).

Железа имеет вид длинного тяжа, состоящего из 6-7 пар долей. Располагаясь вдоль трахеи, она плотно прилегает к сосудисто-нервному сплетению, достигая краниально третьего шейного позвонка, и простирается до уровня грудной выемки. Выраженность, консистенция и окраска долей изменяется в зависимости от физиологического состояния организма птицы (A.A. Новых, М.А. Саморядова, 2002).

Зачатки тимуса появляются на 5 - 7 сутки развития. Работы И.А. Болотникова и Ю.В. Конопатова (1993) свидетельствуют о том, что тимус в эмбриональный период закладывается в виде органа, состоящего из 5 - 7 долек с каждой стороны шеи. Последние две дольки могут заходить в грудную полость. Г.Ф. Задарновская (1967) и А.П. Стрельников (1975, 1990) изучали тимус птиц. Они описывают, что тимус (вилочковая железа), центральный лимфоидный орган, формируется на 10-й день эмбрионального развития. На 10-е сутки в тимусе можно обнаружить лимфоциты, где и происходит их созревание. Тимус гусят в эмбриональный и ранний постнатальный периоды лишен B-клеток. Однако, начиная с 9-недельного возраста, в тимусе обнаруживают положительные лимфоциты, то есть популяция тимоцитов становится гетерогенной.

У птиц каждая доля тимуса, разделяется на несколько овальных или бобовидных долек серовато-розового цвета и располагается в области шеи под поверхностной фасцией вдоль сосудисто-нервного пучка, состоящего из яремной вены, пищеводной артерии и блуждающего нерва (Б.Ф. Бессарабов, Е.А. Лазуткина, И.И. Мельникова, А.Г. Яковлев, 2007).

Тимус здоровой птицы имеет выраженное корковое и мозговое вещество. Корковое вещество тимуса выглядит более темным по сравнению с мозговым веществом за счет относительно большего количества лимфоцитов

(А. Хэм, Д. Кормак, 1983; Б.Ф. Бессарабов, Е.А. Лазуткина, И.И. Мельникова, А.Г. Яковлев, 2007).

У кур тимус состоит из двух удлиненных долей (правой и левой), лежащих под кожей в области шеи вдоль яремных вен (I. Aitken, 1982; М. Kendall, 1985). Каждая доля, состоящая из 6-8 овальных или бобовидных долек, начинается от уровня третьего шейного сегмента и заканчивается около щитовидной железы при входе в грудобрюшную полость (A. Toivanen et al., 1981). Максимальных размеров дольки тимуса у кур достигают к 90-дневному возрасту и равняются 8-15 х 7-9 х 2-5 мм (N. Warner, 1967).

Абсолютная масса зобной железы изменяется с возрастом: к моменту вылупления цыпленка она составляет в среднем 0,1 г и достигает максимального значения (5,0г - 5,5г) к 120-ти дневному возрасту (В.М. Селянский, 1980). По данным А.А. Ибрагимова и В.А. Лукьянченко (1979), абсолютная масса тимуса у суточного цыпленка клеточного содержания породы «белый леггорн» равняется 0,12 ± 0,01 г, и продолжает расти до 165-ти дневного возраста, составляя в среднем 5,18 г. В постнатальном онтогенезе тимус функционирует до 5-месячного возраста, затем происходит его инволюция (Г.Ф. Задарновская, 1967; А.П. Стрельников, 1975, 1990).

Рост относительной массы зобной железы клеточных кур породы «белый леггорн» происходит только до 45-ти дневного возраста и составляет 0,45% (А.А. Ибрагимов, В.А. Лукьянченко, 1979).

По данным Т.К. Шатшнейдер и Ю.Ю. Паре (1974) обнаружили максимальное значение абсолютной массы тимуса (7,31 г) у петухов 150-ти дневного возраста. В дальнейшем величина долек постепенно уменьшается (R. White, 1981; J. Bhattacharya et al., 1987). У кур 360-ти дневного возраста она составляет 1,5 г(Ю.Т. Техвер, 1965).

У птиц каждая доля тимуса, разделяется на несколько овальных или бобовидных долек серовато-розового цвета и располагается в области шеи под поверхностной фасцией вдоль сосудисто-нервного пучка, состоящего из яремной вены, пищеводной артерии и блуждающего нерва.

При микроскопии выявляется четкое разделение тимуса на дольки, покрытые снаружи тонкой капсулой. Соединительнотканной капсулой окружена каждая долька тимуса, от которой внутрь идут трабекулы (септы), доходящие до центра (Б. Сгоше ег а1., 1985). От капсулы простираются тяжи междольковой соединительной ткани. Тяжи делят мозговое вещество долей так, что центральная часть его представляет неделимую массу элементов для всех долек тимуса. В ней находятся ретикулярные и ретикулоэпителиальные длинноотростчатые клетки, образующиеся посредством соединения отростков ячейки, в сотах которых располагаются лимфоциты. Плотность расположения лимфоцитов с возрастом меняется. Среди лимфоцитов обнаруживаются элементы сосудистого и тимического происхождения, присутствуют лаброциты, псевдоэозинофилы, макрофаги циркулирующей крови. Периферическую (корковую) часть каждой дольки лимфоциты заполняют компактно. Дугообразно охватывая мозговое вещество, они плотно прилегают к капсуле органа и междольковым перегородкам. Размер и форма лимфоцитов в этой зоне значительно варьирует. Между лимфоцитами корковой зоны находятся единичные ретикулярные и

ретикулоэпителиальные элементы (А.А. Новых, М.А. Саморядова, 2002; Б. Сгоше ег а1., 1985). Однако, начиная с 9-недельного возраста, в тимусе обнаруживают положительные лимфоциты, в это время популяция тимоцитов становится гетерогенной (Г.Ф. Задарновская, 1967, А.П. Стрельников, 1975, 1990).

Соединительно-тканная основа тимуса, а также клетки, мигрирующие из костного мозга (лимфоциты, макрофаги, дендритные клетки) - происходят из мезодермы, эпителий из энто- и эктодермы ( А.А. Ярилин с соавт., 1991; в. Ге1гег, 1979).

Граница между корковой и мозговой зонами не всегда четко выражена. У суточных цыплят корковая зона преобладает над мозговой (Н. Ми11ег-НегшеНпк ег а1., 1982). С возрастом она становится тоньше и преобладающей становится мозговая (О.В. Зайратьянц, 1993; Н. Ми11ег-НегтеНпк, в.

Steinman, 1982). В корковой зоне лимфоциты лежат более плотно, чем в мозговой, поэтому на окрашенных препаратах она выглядит более темной (М. Kendall, 1985).

Мозговое вещество представлено элементами ретикулоэпителиальной ткани. Содержание лимфоцитов в нем намного меньше. Часть ретикулоэпителиальных удлиненно-овальных клеток имеют пузырьковидное, слабобазофильное ядро и оксифильную ШИК-положительную цитоплазму. В другой части указанных элементов, меньших размеров, цитоплазма заключает отдельные конгофильные включения. В корковом и в мозговом веществе присутствует небольшое число лимфоцитов с признаками разрушения (A.A. Новых, М.А. Саморядова, 2002).

Местами эпителиоциты формируют тимусные тельца. Количество их изменяется соответственно возрасту (А.А.Новых, Саморядова М. А., 2002).

Наличие тимических телец (телец Гассаля) является характерным признаком мозговой зоны, которые представляют собой скопление уплощенных и веретеновидных эпителиальных клеток с крупным бледным ядром и слабоацидофильной цитоплазмой. Вопрос об их функции до настоящего времени остается дискуссионным. Большинство исследователей считают, что тимические тельца участвуют в секреции гормоноподобных веществ тимуса (F. DAnna et al., 1981). Однако Т. Mandel (1968) имеет противоположное мнение и утверждает, что тельца Гассаля не могут участвовать в иммунных процессах, так как в своем составе содержат глыбки кератогиалина. С возрастом количество тимических телец значительно увеличивается (Г.Ф. Задарновская, 1967).

С возрастом в тимусе, наряду с изменением соотношения корковой и мозговой зон, наблюдается разрастание соединительнотканной стромы и жировой ткани, что свидетельствует о его возрастной инволюции. Редуцирующиеся островки тимуса обнаруживаются даже у 5-летних птиц (Б.Ф. Бессарабов с соавт., 2007).

В тимусе осуществляется дифференцировка Т-лимфоцитов, а в клоакальной сумке - В-лимфоцитов. В дальнейшем обе эти популяции лимфоцитов с током крови и лимфы поступают в периферические лимфоидные органы (железу третьего века, лимфоидный дивертикул, слепокишечные бляшки, селезенку), где протекает их додифференцировка и возникает сложный морфофункциональный комплекс по организации иммунного ответа после антигенного воздействия (В.П. Лозовой, С.М. Шергин, 1981; В.Л. Быкова, 2009; N. Payne, 1977; I. Aitken, 1982).

В дальнейшем было доказано, что покидая тимус, Т-лимфоциты поступают в кровь, в лимфу и заселяют периферические лимфоидные органы (В. А. Труфакин, 1983; 3. Кемилева, 1984). Поступая в селезенку, лимфоидные образования слизистых оболочек кишечника, в бронхиальную лимфоидную ткань Т-лимфоциты, как хранители иммунологической памяти об антигене, приобретают способность стимулировать В-лимфоциты к пролиферации и дифференцировке в плазматические клетки, продуцирующие специфические антитела (JgM, JgG, JgA) против антигена.

-у

Количество выходящих из тимуса лимфоцитов составляет 7,4x10 штук в сутки, что достаточно для полного обновления в течение 2-3 месяцев всего циркулирующего лимфоцитарного пула (Е.И. Кяйвяряйнен, 1982; В.М. Митюшников, 1985). Гормоноподобные вещества тимуса влияют на течение реакций и клеточного, и гуморального иммунитета (Т.Е. Ивановская, 1968; Ф.М. Бернет, 1971; И.А. Чертков, А. Я. Фриденштейн, 1977).

Развитие вилочковой железы определяется состоянием гормонального гомеостаза. Морфологическими исследованиями установлено, что в промышленном птицеводстве, начиная с 4-мес. возраста, у птицы отмечается начало инволютивных изменений в органах иммунологической защиты, выражающиеся в снижении их лимфопоэтической функции, уменьшении численности клеточного состава и развитии атрофических процессов в тимусе (Ю.В. Кляцкая, 2008).

У кур тельца Гассаля оксифильные, отличаются гомогенностью и полиморфизмом. Хотя чаще имеют округло-овальную форму. С тельцами Гассаля часто взаимодействуют макрофаги и лимфоциты (И.Н. Громов, 2003).

2.6.2. Селезенка

К периферическим (вторичным) лимфоидным органам птицы относятся селезенка, лимфоидные узлы слепых отростков, гардерова железа, скопления лимфоидных элементов глотки, гортани, бронхов и кишечника и в виде небольших скоплений лимфоидных клеток в других органах и тканях.

Селезенка является основным периферическим органом иммунитета птиц, биологическим фильтром кровеносной системы. Под влиянием антигенов, присутствующих в крови, в ней происходит образование клеток, продуцирующих гуморальные антитела или участвующих в реакциях клеточного иммунитета. У кур селезенка имеет округло-овальную форму, а у водоплавающих птиц - слегка уплощенную. Орган покрыт соединительнотканной капсулой, от которой вглубь селезенки отходят перегородки (трабекулы). Между трабекулами находится паренхима селезенки, состоящая из красной и белой пульпы. Белая пульпа образована периартериальными муфтами (тимусзависимая ткань), лимфоидными узелками (бурсозависимая ткань) и эллипсоидными макрофагально-лимфоидными муфтами. Красная - залегает между венозными синусоидами и состоит из ретикулярной стромы, в петлях которой находятся эритроциты, лейкоциты и тромбоциты. Иммунный аппарат селезенки имеет более сложную структуру, чем другие периферические органы иммунитета (И.Н. Громов, 2003).

Селезёнка у птиц является органом, где образуются лейкоциты и разрушаются эритроциты. Остов селезёнки составляют трабекулы, состоящие из ретикулярной соединительной ткани и гладких мышечных клеток; по ним проходят кровеносные сосуды. В ретикулярную ткань

включены красная и белая пульпы селезёнки. Белая пульпа представляет собой лимфоидное скопление; в красной содержатся форменные элементы крови: большие и малые лимфоциты, зрелые и незрелые лейкоциты зернистой формы, эритроциты в различной стадии распада. Селезёнка играет роль резервуара крови. Она участвует в выработке гуморального иммунитета и относится к органам В-системы (В.М. Селянский, 1972).

Селезенка является самым крупным органом, выполняющим разнообразные функции. В основном она участвует в иммунных реакциях гуморального типа. При внутреннем введении антигена антитела вырабатываются главным образом в селезенке. Селезенка у птиц не выполняет функцию депо крови. Для нее характерным является фагоцитоз, главным образом эритроцитов, образование антител и поглощение антигенов, лимфоцитов (Е.К. Олейник, 1982; Г.А. Ноздрин, А.Б. Иванова, А.И. Шевченко, С.А. Шевченко, 2009).

Селезенка имеет круглую или овальную форму, ее масса у взрослых кур равна 4-7г. Микроскопически различают красную и белую пульпу селезенки, ретикулярную сеть, кровеносные сосуды и пространства, называемые синусами. Внутри селезенки обнаруживают лимфоциты, которые находятся под контролем тимуса и фабрициевой сумки. Селезенка обеспечивает удаление микроорганизмов (бактерий, вирусов) и других веществ (опухолевых клеток) из организма птицы. Другой важной функцией селезенки является разрушение старых эритроцитов. При этом железо из этих клеток вновь поступает в костный мозг, где вторично поступает в структуру новых эритроцитов. Селезенка является источником антител (Anon, 1988).

В селезенке происходит антигензависимое размножение лимфоцитов, она принимает активное участие в реакциях клеточного и гуморального иммунитета с образованием антител. В ней обезвреживаются антигены, незадержанные в лимфатических узлах, погибают старые и нежизнеспособные тромбоциты и эритроциты, вырабатывается вещество, угнетающее эритропоэз в красном костном мозге. Селезенка, так же как и

лимфатические узлы с ретикулярной тканью и лимфоцитами, относится к лимфоидной ткани или лимфоидной системе органов. Закладывается селезенка на 5 неделе эмбрионального развития, как скопление мезенхимных клеток в толще дорзальной брыжейки, пронизанное кровеносными сосудами. Мезенхима в дальнейшем трансформируется в ретикулярную ткань, которая заселяется стволовыми клетками, появляются макрофаги. На 12 неделе эмбрионального развития появляются B-лимфоциты. В эмбриональном периоде до 6 месяца селезенка является универсальным кроветворным органом, но к моменту рождения (человека) усиливаются процессы лимфопоэза (Э.Г. Улумбеков, Ю.А. Челышев, 1997; Ю.И. Афанасьев, H.A. Юрина, 1999).

Соединительнотканная капсула селезенки с поверхности покрыта мезотелием. В капсуле много гладкомышечных клеток. Внутрь органа от капсулы отходят трабекулы, в которых располагаются трабекулярные артерии (мышечного типа) и трабекулярные вены (безмышечного типа). Основа органа - ретикулярная ткань. В селезенке различают белую и красную пульпу. Белая пульпа - это совокупность лимфатических узелков с эксцентрично расположенной в них артерией узелка или центральной артерией (B.JI. Быков, 2009).

В лимфатических узелках имеется четыре зоны: периартериальная - Т-зона (Т- лимфоциты), центр размножения узелка - В- зона (В- лимфоциты), мантийная зона и краевая или маргинальная зона. В последних двух зонах присутствуют Т- и В- лимфоциты. Красная пульпа состоит из ретикулярной ткани, с расположенными в ней эритроцитами и другими форменными элементами крови, многочисленных кровеносных сосудов, а также селезеночных или пульпарных тяжей, где происходит плазмоцитогенез (Э.Г. Улумбеков, Ю.А. Челышев, 1997).

Таким образом, ВГЕ птиц диагностируется как за рубежом, так и в России. Праймеры для ПЦР-диагностики разработаны, однако очень высокая

стоимость не позволяет закупать их за границей. Каждая птицефабрика в той или иной мере сталкивается с проблемой падежа «клинически здоровой» птицы, что влечет за собой убытки. Зачастую падежи при ВГЕ ошибочно относят к падежам из-за погрешностей в рационе. О наличии данного заболевания в стадах кур можно судить опосредовано при анализе патологоанатомической картины, учитывая клинические данные, гематологические и биохимические показатели. Наши исследования данного заболевания позволят не только оценить эпизоотическую обстановку в России, но и в дальнейшем разработать комплекс мер по профилактике и ликвидации ВГЕ в птицеводческих хозяйствах.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Материал и методы

Работа была выполнена в период с 2008-2011 гг. в ГНУ СевероКавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН. Часть исследований было проведено на кафедре анатомии и патологической анатомии ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет». Участвовавшие в опыте куры 60-недельного возраста линии кросса РООС-308 находились на предприятии частной фирмы Ставропольского края. Содержались куры напольно, по 5-15 тысяч голов в корпусе. Рацион для кур всех корпусов был одинаковый, поение проводили из автоматических поилок. В птицеводческом хозяйстве имел место падеж птицы невыясненной этиологии.

Для выяснения причины сложившейся ситуации, нами произведено вскрытие павших кур (в количестве 400 голов). Из общего числа вскрытых кур нами были определены три характерные патологоанатомические картины (патологоанатомические признаки, характерные для лейкоза, колибактериоза и кокцидиоза).

Для выяснения нозологической единицы болезни проведены:

1. бактериологические и паразитологические исследования в ФГУ «Ставропольская межобластная лаборатория».

2. исследования пробы крови на гидроперикардит в ФГУ «Лаборатория по борьбе с болезнями птиц» (г. Пятигорск Ставропольского края).

3. вирусологические исследования трупов кур в ФГУ ВНИИЗЖ (г. Владимир Владимирская область) на лейкоз.

4. вирусологические исследования в Clinic for Avian, Reptile and Fish Medicine (Венгрия).

При проведении лабораторных исследований получены следующие результаты:

В материале от всех кур получен отрицательный результат на гидроперикардит и лейкоз и положительный результат на BLSD (синдром «большой печени и селезенки» или вирусный гепатит Е). У некоторых кур обнаружен положительный результат на Е. coli. У части кур получен положительный результат на Е. coli и кокцидиоз. Нами было сформировано 4 группы кур:

в первой группе находились клинически здоровые куры, которые служили контролем для наших исследований;

во второй группе находились куры, больные вирусным гепатитом Е (хорошей упитанности, с признаками вялости);

в третьей группе - куры, больные вирусным гепатитом Е в ассоциации с колибактериозом (испачканные перья возле клоаки, анемия);

четвертая группа состояла из кур ниже средней упитанности с ярко выраженными признаками анемии, - цианоз гребня и сережек.

Во всех из перечисленных группах происходил падеж кур, кроме первой, в ней проводили диагностический убой.

С целью выяснения патогенного действия вируса гепатита Е на организм больных кур проводили исследования крови, изучали патологоанатомическую картину и гистологические изменения иммунных органов.

На первом этапе опыта проводили исследования крови. Кровь для анализа брали утром, натощак, из подключичной вены.

Гематологические исследования показателей проводили на электронном анализаторе Abacus junior vet. Определяли следующие показатели: содержание гемоглобина, гематокрит, количество эритроцитов, средний объем эритроцитов, среднее содержание гемоглобина в эритроците, среднюю концентрацию гемоглобина в эритроцитах, широту распределения популяции эритроцитов, количество тромбоцитов, тромбокрит, средний объем тромбоцитов, широту распределения популяции тромбоцитов, лейкограмму.

В сыворотке крови на электронном биохимическом анализаторе ВЮСНЕМ ВА с помощью реактивов фирмы Лахема выявляли активность ферментов (АлАТ, АсАТ, ЛДГ, щелочной фосфатазы), количество мочевины, мочевой кислоты, креатинина, содержание общего белка, альбумина, холестерина, билирубина, глюкозы, амилазы. Высчитывали коэффициент Ритиса (Н.У. Тица, 1986).

На втором этапе опыта проводили патологоанатомическое вскрытие трупов кур второй, третьей и четвертой групп и кур, убитых для диагностического вскрытия, из первой группы. При вскрытии отбирали иммунные органы, - тимус и селезенку, для гистологических, гистохимических и морфометрических исследований. Кусочки органов фиксировали в 10% нейтральном формалине, смеси Карнуа с последующей заливкой в парафин или гистологическую заливочную среду «Histomix®».

Парафиновые срезы толщиной 5—6 мкм изготавливали на санном микротоме,

по общепринятым методикам окрашивали гематоксилином и эозином - для обзорных исследований, по Браше - для выявления плазматических клеток, ставили ШИК-реакцию с контролем амилазой, окрашивали Конго красным на амилоид (Р. Лили, 1969; Г.А. Меркулов, 1969).

Морфометрические исследования проводили с помощью программы «Видео-ТесТ-Мастер 4.0». В тимусе измеряли средний размер долек, толщину коркового и мозгового слоя. Определяли абсолютное количество и процентное содержание малых, средних и больших лимфоцитов в поле зрения микроскопа в различных зонах тимуса, селезенки и лимфатических узлов. В селезенке определяли процентное соотношение белой и красной пульпы к паренхиме, также измеряли площадь белой пульпы. Вся гистологическая терминология соответствует новой международной номенклатуре (В.В. Баранин, В.Л. Быков, 2009).

Полученный цифровой материал обработан методами описательной статистики с помощью программы MS Office Excel 2007, и критерием

Стьюдента с помощью программы statplus 2007 professional. Достоверным считали разницу при Р<0,05 (С. Гланц, 1998).

Таблица 1 - СХЕМА ОПЫТА И ОБЪЕМ ПРОВЕДЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

№ п/п Методы исследований Количество проб

1 ЭТАП

1. Гематологические исследования 265

2. Биохимические исследования сыворотки крови 265

3. Бактериологические исследования 215

Заключение диссертации по теме «Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных», Токарев, Олег Игоревич

5. Выводы:

1. Вирусный гепатит Е кур имеет место быть на территории Российской Федерации.

2. При вирусном гепатите Е происходят глубокие нарушения гематологических показателей, а так же гомеостаза организма: у больных кур увеличилось количество эритроцитов на 32 %, средний объем эритроцитов на 30 %, показатель гематокрита на 31 %, количество гранулоцитов на 91 %; уменьшено количество лимфоцитов на 43 %, средний объем тромбоцитов -на 15 %, широта распределения популяции тромбоцитов - на 12 %, понижение моноцитов/эозинофилов - на 88 %.

3. Изменения биохимических показателей сыворотки крови характеризуют глубокое поражение печени, вплоть до некроза гепатоцитов: уменьшение альбуминов на 41 %, билирубина - на 75 %, увеличение аспартатаминотрансферазы (АсАТ) - на 25,8 %, снижение коэффициента Ритиса. Активность ЛДГ и щелочной фосфатазы увеличиваются более чем в два раза. Уровень креатинина падает в 7 раз, что связано с низким синтезом АТФ в мышцах.

4. При патологоанатомическом вскрытии выявлены следующие изменения, характеризующие вирусный гепатит Е кур: наряду с поражением печени - увеличение печени в 4-6 раз, жировая дистрофия с кровоизлияниями, увеличение селезенки, амилоидоз и инфаркты селезенки.

106

5. При вирусном гепатите Е, осложненном бактериальной микрофлорой и паразитарной инвазией, наряду с признаками, характерными для данного заболевания присутствуют изменения, присущие сопутствующим болезням.

6. При осложнении вирусного гепатита Е колибактериозом наряду со специфическими изменениями присутствуют признаки, характерные для колибактериоза (перитонит, некроз яйцеклеток, воспаление органов пищеварения, септическая селезенка, точечные кровоизлияния).

7. При осложнении вирусного гепатита Е колибактериозом и кокцидиозом наряду со специфическими изменениями присутствуют признаки, характерные для колибактериоза и кокцидиоза (перитонит, некроз яйцеклеток, воспаление органов пищеварения, септическая селезенка, точечные кровоизлияния), фибринозный тифлит.

6. Гистологические исследования тимуса кур при вирусном гепатите Е выявили акцидентальную инволюцию тимуса. У кур при неосложненном вирусном гепатите Е имеет место некроз лимфоцитов и почти полное их отсутствие в мозговом веществе.

Для вирусного гепатита Е, осложненного колибактериозом, наряду с имеющимися изменениями фиксируется появление молодых телец Гассаля и их некроз. Для вирусного гепатита Е, осложненного колибактериозом и кокцидиозом, характерно почти полное отсутствие коркового вещества, прогрессивное разрушение лимфоцитов, большое количество телец Гассаля, часто в состоянии некроза, и гигантоклеточный метаморфоз, проявляющийся в появлении многоядерных клеток.

7. Гистологическими исследованиями селезенки выявлено, что для вирусного гепатита Е характерны апоптоз лимфоцитов, появление амилоидобластов, амилоидоз и некроз лимфоидных узелков, активная плазматизация красной пульпы, гомогенизация и частичный лизис стенки кровеносных сосудов.

Для вирусного гепатита Е, осложненного колибактериозом, наряду с признаками гепатита Е, присутствует разрушение эритроцитов в красной пульпе. Для вирусного гепатита Е, осложненного колибактериозом и кокцидиозом, имеет место наличие всех вышеперечисленных признаков.

8. При осложненном течении вирусного гепатита Е бактериальной и паразитарной инфекцией гистологические изменения имеют ту же направленность с усугублением патогистологической картины.

9. При вирусном гепатите Е кур в органах иммунной системы происходят как разрушительные процессы, - некроз, апоптоз лимфоцитов, так и компенсаторные, - появление молодых телец Гассаля, плазматизация красной пульпы.

10. В морфогенезе вирусного гепатита ведущую играет губительное действие вируса на печень, поражая гепатоциты, а так же на органы иммунной системы, - селезенку и тимус.

6. Практические предложения:

1. Разработаны Методические положения по вирусному гепатиту Е, которые предназначены для сотрудников научных учреждений, работников ветеринарных лабораторий, ветеринарных врачей птицеводческих хозяйств, птицеводов, фермеров, могут быть полезны лицам, интересующимся вопросами инфекционной патологии птиц.

2. Совокупность данных гематологических, биохимических показателей сыворотки крови и патологоанатомического вскрытия могут быть использованы в качестве диагностических тестов, предполагающих вирусный гепатит Е кур.

3. Основные положения диссертации могут быть использованы при проведении научных исследований, в учебном процессе вузов и колледжей биологического профиля, а также при составлении монографий, учебных и справочных пособий по диагностике вирусных заболеваний птиц.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Токарев, Олег Игоревич, 2012 год

7. Список литературы:

1. Адо, А.Д. О некоторых свойствах и взаимодействии рецепторов мембран лимфоцитов / А. Д. Адо // Иммунология. - 1993. - №6. - С.12 - 18.

2. Архипов, Н.И. Особенности патогенеза вирусных инфекций / Архипов Н.И. // Ветеринария. №9 - 1983. - С.26-28.

3. Бакулин, В.А Патоморфогенез и дифференциальная диагностика болезни Гамборо, аденовирусной инфекции и других иммунодепрессивных болезней птиц // Архив ветеринарных наук / Прил. к т. 1(48). СПб, Ломоносов, 1998. 322 с.

4. Бакулов, И.А. Эпизоотическая ситуация по болезням диких животных в России и Зарубежных странах в 90-х годах 20-го столетия. / ВНИИВВиМ, Международная научно-практическая конференция, посвященная 40-летию ВНИИВВиМ, Покров, 1998.- С. 139-145.

5. Бакулов, И. А. Эпизоотология с микробиологией / М.: "Агропромиздат", 1987.-415с.

6. Белецкая, Л.В. Структурно-функциональная организация тимуса / Л.В. Белецкая, Э.В. Гнездецкая, Д.Л. Беляев // Успехи современной биологии. -М.:- 1986.-№1/4.- 102с.

7. Бернет, Ф.М. Клеточная иммунология. - М.: Мир, - 1971. - 542 с.

8. Бессарабов, Б.Ф. Влияние пневмовируса птиц на состояние иммунной системы цыплят-бройлеров / Б.Ф. Бессарабов, Е.А. Лазуткина, И.И. Мельникова, А.Г. Яковлев // БИО, - 2007. - С.9-15.

9. Болотников, И.А. Практическая иммунология сельскохозяйственной птицы / И.А. Болотников, Ю.В. Конопатов // Петрозавод. гос. ун-т, Санкт-Петербург, вет. ин-т. - Спб, - 1993. - 205 с.

10. Болотников, И.А. Гематология птиц / И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев // Наука. Ленингр. отд., - 1980. - 116с.

11. Болотников, И.А. Иммунопрофилактика инфекционных болезней птиц / И.А Болотников // М.: Россельхозиздат, - 1982. - 183 с.

12. Болотников, И.А. Стресс и иммунитет у птиц / И.А Болотников, B.C. Михкиева, Е.К. Олейник // Л.: Наука, -1983. - 118с.

13. Болотников, И.А. Влияние В-активина и микроэлементов на некоторые иммунологические показатели цыплят / И.А.Болотников // Тез. докл. -Сергиев Посад, - 1995. - С 79.

14. Вернет, С. Клеточная иммунология. / С. Вернет, М. Франк, Л.Б. Меклер // М.: - 1971 - 157с.

15. Воспаление. Руководство для врачей / Под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова. - М.: Медицина, - 1995. - С.327-407.

16. Галактионов, В.Г. Графические модели в иммунологии / В.Г. Галактионов - М.: Медицина, - 1986. - 317с.

17. Гистология. Ю.И. Афанасьев, H.A. Юрина / М.: Медицина, - 1999.

18. Гистология: введение в патологию. Э.Г. Улумбеков, Ю.А. Челышев / М.: ГЭОТАР, - 1997. - 700 с.

19. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. - М.: Практика, -1999.-45с.

20. Горышина, E.H. Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии / Е. Н. Горышина, О. Ю. Чага // - Уч. пособие, Л.: -1990.-320 с.

21. Громов, И.Н. Особенности структурной организации иммунной системы птиц / И.Н. Громов // Практик, №9-10, - 2003. - С.90-97.

22. Данилова, Л.А. Анализы крови и мочи / Л.А. Данилова // Изд. «Деан», СПб., - 1999. - 128 с.

23. Джавадов, Э.Д. Вирус-индуцированные иммуносупрессии и способы их предупреждения в промышленном птицеводстве: дис. ... док. вет. наук / Джавадов Эдуард Джавадович. - М., - 2004. - С. 25.

24. Драганов, И.Ф. Влияние кормовой добавки Натузим на обмен веществ и продуктивности бройлеров. // И.Ф. Драганов, A.A. Иванов, H.A. Евсеева. «Птица и птицепродукты». - №5 - 2009. - С. 23-25.

25. Ежков, В.О. Особенности патоморфологии лимфоидного лейкоза и болезни Марека у кур // В.О. Ежков, E.H. Сердюкова / Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины, Уфа, - 2003. - 62-63с.

26. Егоров, И. Иммунитет бройлеров современных кроссов / И. Егоров // Птицеводство, №12, - 2007. - С.10-11.

27. Женихова, Н. И. Сравнительная характеристика органов иммунной системы суточных цыплят яичной породы / Н. И. Женихова // Достижения эволюционной, возрастной и экологической морфологии практике медицины и ветеринарии материалы междунар. науч.-практ. конф. Омск, - 2001. - С. 124-125.

28. Жункейра, Л.К. Гистология: атлас: учебное пособие / JI.K. Жункейра, Ж. Карнейро // Пер. с анг. Под ред. В.Л. Быкова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, -2009. - 576 с.

29. Заварзин, Г.А. Индивидуалистический и системный подходы в биологии / Г.А. Заварзин // Вопросы философии, №4, - 1999. - С.89-106.

30. Задарновская, Г.Ф. О некоторых причинах гибели эмбрионов птиц при искусственной инкубации // Тр. Ставроп. СХИ. В.24, - 1967. - С.42-51.

31. Ибрагим Ел-Морси, с соавт. Распространение гепатита Е среди населения эндемичных и неэндемичных регионов мира : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Ибрагим Ел-Морси - М., - 2004. - 19с.

32. Ивановская, Т.Е. Роль тимуса в системе эндокринных желез. - М.: Колос,- 1968.-С. 174-195.

33. Иммунология и аллергология (цветной атлас): учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. A.A. Воробьева, A.C. Быкова, A.B. Караулова - М.: Практическая медицина, - 2006. - 288 е.: ил.

34. Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, Е.С. Воронин и др. // Под ред. А. А. Сидорчука. - М.: Колос, - 2007. - 671 с.

35. Карпуть, И.М. Иммунология и иммунопатология болезней молодняка. - Минск, Ураджай, - 1993. - 45 с.

36. Кассирский, И.А. Клиническая гистология / И.А. Кассирский, Т.А Алексеев // М.: Медицина, - 1970. - 720 с.

37. Кемилева, 3. Вилочковая железа. - М.: Медицина. - 1984. - 252с.

38. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание /И.П.Кондрахин, Н.В.Курилов, А.Г.Малахов и др. - М.: Агропромиздат, 1985. - 287 с.

39. Клиническая оценка лабораторных тестов. / Пер. с англ. под ред. Н.У. Тица. - М.: Медицина, - 1986. - 480 с.

40. Кляцкая, Ю.В. Сравнительная морфология органов иммунитета кур породы белый леггорн кросса П-46 при применении различных доз препаратов «Комбиолакс» и «Сувар» // Автореф. дис... канд. биол. наук. -Саранск., - 2008. - 20 с.

41. Конопатов, Ю.В. Основы иммунитета и кормление сельскохозяйственной птицы / Ю.В. Конопатов, Е.Е. Макеева // - СПб.: Петролазер, - 2000. - 120 с.

42. Конопатов, Ю.В. Корма и биохимические основы иммунитета сельскохозяйственной птицы: учеб. пособие / Ю.В. Конопатов, Б.М. Федоров, Н.В. Пилаева, Е.Е. Макеева // СПб.: вет. ин.-т, -1993.-43 с.

43. Козырь, И.Н. К морфологии вилочковой железы. // М.: Колос, - 1962. -С.81-89.

44. Коровин, Р. Н. Придыбайло Н. Д. Основы профилактики болезни Марека // Тез. докл. конф. по птицеводству. Сергиев - Посад, - 1995. - С. 99100.

45. Коровин, Р.Н. Особенности эпизоотологии болезни Марека и организации мер борьбы с ней в птицеводческих хозяйствах промышленного типа // Автореф. дис... докт. вет. наук. - Л., - 1989. - 34 с.

46. Коровин, Р.Н. Справочник ветеринарного врача птицеводческого предприятия. - СПб., - 1995. - С. 186.

47. Кравчинский, К. «Гепатит Е». Ж. гепатология 17, - 1993, - с. 932-941.

48. Крок, Г.С. Морфофункциональные особенности эозинофильных гранулоцитов у сельскохозяйственных птиц и их участие в инволюции некоторых органов / Г.С. Крок, Н.М. Мусиенко // Цитология и генетика. -1962. - Т.6. - №4. - С.345-347.

49. Куриляк, O.A. Клиническая интерпретация некоторых показателей гематологических анализаторов. / О. А. Куриляк // « Новости А/О Юнимед»

- 2009.

50. Кэлнек, Б.У., Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц / - 2006.

- 1232 с.

51. Кяйвяряйнен, Е.И. Строение и физико-химические свойства иммуноглобулинов М и G кур // Биохимические и морфологические основы иммунологии птиц. - Петрозаводск, - 1982. - С. 28-42.

52. Лагуткин, H.A. Распространение вирусных агентов среди домашних птиц./ H.A. Лагуткин, В.Н Смирнов // МНК., Краснодар, - 1996. - с.64-65.

53. Лагуткин, H.A. Занос инфекционных болезней птиц / H.A. Лагуткин, И.Ф. Вешняков, A.B. Кожемяка// Ветеринария, №10, - 1998. -С.7-10.

54. Ленинджер, А. Биохимия: Пер. с англ. М. - Мир, - 1974. - 957 с.

55. Лили, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. -М.:- 1969.-780 с.

56. Лозовой, В.П. Структурно- функциональная организация иммунной системы. /В.П. Лозовой, С.М. Шергин // - Новосибирск, - 1971. - 124 с.

57. Материалы международной юбилейной научно-практической конференции « Новое в эпизоотологии, диагностики и профилактики инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве» / Б. Ф. Бессарабов // Всерос. науч.-иссл. ин-т птицеводства. - С-Пб, - 2004.

58. Макаров, В.В. Иммунологическая депрессия при вирусных инфекциях // В.В. Макаров, С.Ф. Чевелев / Ветеринария, №8 - 1983. - С.25-27.

59. Международные термины по цитологии и гистологии человека с официальным списком русских эквивалентов ( Российская гистологическая

номенклатурная комиссия ) Под. ред. Чл-корр. РАМН В.В. Банина и проф. В.Л. Быкова изд-во ГЭОТАР- Медиа, М.: - 2009. - 272 с.

60. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники. - Изд-во «Медицина». Лен. отд . - 1969. - 423 с.

61. Митюшников, В.М. Естественная резистентность сельскохозяйственной птицы. - М.: Россельхозиздат, - 1985. - 160 с.

62. Монтиэль, Э. Значение иммунной системы для промышленного птицеводства // Ключевая роль иммунодефицита в промышленном птицеводстве: причины и следствия. - 1998. - С. 2-4.

63. Новых, А. А. Морфофункциональные особенности паренхиматозных элементов тимуса кур // A.A. Новых, М.А. Саморядова /Достижения ветеринарной медицины - 21 веку. Барнаул, - 2002. - с. 94-100.

64. Ноздрин, Г А. Пробиотики и микронутриенты при интенсивном выращивании цыплят кросса Смена / Г.А. Ноздрин, А.Б. Иванова, А.И. Шевченко, С.А. Шевченко // ООО ТД «Орнамент», Новосибирск, Монография. - 2009. - 14,0 с.

65. Олейник, Е.К. Т- и B-системы иммунитета птиц / Биохимические и морфологические основы иммунологии птиц. // Петрозаводск, - 1982. - С. 62-74.

66. Оуэн, Р.Л. Иммунная активность птицы / Р.Л. Оуэн // Птицеводство, № 2.-1996.-С. 39-41.

67. Пальцын, A.A. Радиоавтографическое выявление интрацеллюлярного и экстрацеллюлярного бактерицидного действия нейтрофилов / A.A. Пальцын, А.К. Бадикова, Н.В. Червонская и др. // Бюлл. экспер. биол.. - 1988. -№11. -С.621-623.

68. Селезнев, С.Б. Особенности структурной организации иммунной системы птиц / С.Б. Селезнев // Морфология, №4, Т. 133, - 2008. - С.92.

69. Селянский, В.М. Анатомия и физиология сельскохозяйственной птицы. Изд. 2-е. М.: Колос, - 1972- С. 186.

70. Стрельников, А.П. Лимфоидная ткань - орган иммунитета / А.П. Стрельников, А.Я Самуйленко, В.А. Стрельников // Сборн. науч. тр. МВА. -М.:- 1975.-С. 78-81.

71. Стрельников, А.П. Морфология органов иммунной системы кур при инфекционном бронхите / Диагностика, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве. // Саратов, - 1990.

- С. 97-98.

72. Струков, А. И. Воспаление / А.И. Струков, B.C. Пауков, О.Я. Кауфман

B. кн. Общая патология человека. 2е изд. // Под ред. А. И. Струкова, В. В. Серова, Д.С. Саркисова. - М.: Медицина - Т.2. - 1990. - С. 3-73.

73. Техвер, Ю.Е, Гистология сердечно-сосудистой системы и кроветворных органов домашних животных. / Ю.Т. Техвер. - Тарту, - 1970.

- С.58-75.

74. Труфакин, В.А. Органы тимико-лимфоидной системы. / Новосибирск, -1983.-С. 3-18.

75. Фисинин, В.И. Промышленное птицеводство России: состояние, инновационные направления развития, вклад в продовольственную безопасность. // В.И.Фисинин, - 2009.

76. Хэм, А. Гистология / А. Хэм, Д. Кормак. - М.: Мир, - 1983. - Т.З. -

C.275-281.

77. Частная гистология человека. В.Л. Быков // СПб.: СОТИС, - 1997. -324 с.

78. Чертков, H.A. Клеточные основы кроветворения / И.А. Чертков, А.Я. Фриденштейн - М., - 1977. - 192 с.

79. Шимкевич, В.И. Строение тела домашних животных. - 1923. - С. 314318.

80. Ярилин, A.A. Структура тимуса и дифференцировка Т-лимфоцитов / A.A. Ярилин, В .Г. Пинчук, O.A., Гриневич. // Киев.: Наукова думка, - 1991. -248 с.

81. Ярилин, А. А. Бифункциональность гуморального фактора, продуцируемого предшественниками Т-лимфоцитов / А.А. Ярилин, В.Ю. Талаев, Н.И. Шарова, В.П. Шичкин // Биологический журнал Армении. №2,

- 1991. -Т.44. - С.100-105.

82. Adair, В.М. Ultra structural studies of the replication of fowl adenovirus in primary cell cultures / B.M. Adair, W.L. Curran, J.B. McFerran // Avian Pathol, Vol.8, - 1979.-P. 133-144.

83. Agunos, A.C. Avian hepatitis E virus in an outbreak of hepatitis-splenomegaly syndrome and fatty liver hemorrhage syndrome in two flaxseed-fed layer flocks in Ontario / A.C. Agunos, D. Yoo, S.A. Youssef, D. Ran, B. Binnington, D.B. Hunter // Avian Pathology, Vol.35, N 5 - 2006. - P. 404-412.

84. Aitken, I.D. The avian immune system / Poultry diseases // Ed. By R.F. Jordon, London, - 1982. - P. 328-341.

85. Anderson, D.A. ELISA for an antibody of class IgG to hepatitis E the virus based on highly kept, conformations epitaph, is expressed in the Intestinal stick. / D.A. Anderson, F. Lithium, M. Riddell, T. Howard, Seow, F. Hour, J. Torresi, G. Perr, D. Sumarsidi, S. M. Shrestha, I. L. Shrestha // Magazine of Methods Virological 81, - 1999. - P. 131-142.

86. Anon. The spleen. / Anon. // How it works, Intern. Poultry Pract 3, - 1988.

- P. 1-9; 64-70.

87. Arankalle, V.A Seroepidemiology hepatitis transferred through water in India and a sign for third enterically-transferred means of a hepatitis. / V.A. Arankalle, M.S. Chadha, S.A. Tsarev, S.U. Emerson, A.R. Risbud, K. Banerjee, R.H. Purcell // Hearings of National Academy of sciences USA 91, - 1994. - P. 3428-3432.

88. Arankalle, V.A. Age prevalence of antibodies to hepatitis A and viruses E in Pune, India, 1982 and 1992. / V.A. Arankalle, S.A. Tsarev, M.S. Chadha, D.W. Ailing, S.U. Emerson, K. Banerjee, R.H. Purcell // Magazine of Infectious diseases 171,-1995.-P. 447-450.

89. Arankalle, V. A., S. Paranjape, S.U. Emerson, R.H. Purcell, Walimbe / Magazine of the General Virology 80, - 1991. - p. 1691-1700.

90. Billam, P. System pathogeneses and replication the bird's virus of hepatitis E at the adult not infected hens. Systematic pathogenesis and replication of avian hepatitis e virus in specific-pathogen-free adult chickens. / P. Billam, F.F. Huang, Z.F. Sun et al. // J Viral, 79 (6), - 2005. - P.3429-3437.

91. Billam, P.; Comparative pathogenesis in specific-pathogen-free chickens of two strains of avian hepatitis E virus recovered from a chicken with Hepatitis-Splenomegaly syndrome and from a clinically healthy chicken / P. Billam, T. LeRoith, R.S. Pudupakam, F.W. Pierson, R.B. Duncan, X.J. Meng // Veterinary Microbiology, Vol.139 N 3/4, - 2009. - P. 253-261.

92. Billam, P. Analysis of the complete genomic sequence of an apparently a virulent strain of avian hepatitis E virus (avian HEV) identified major genetic differences compared with the prototype pathogenic strain of avian HEV. / P. Billam, Z.F. Sun, X.J. Meng // J Gen Viral, 88. - 2007. - P. 1538-1544.

93. Grouse, D.A. Thymus no lymphoid cells / D.A. Crouse, J.B. Turpen, J.G. Sharp // Surv. Imminol. Res, V. 4, № 2 - 1985. - P.120-134.

94. Emerson, S. U. Recombinant hepatitis E virus genome, infectious for primacies: importance of a covering and opening of the jet CIS of an element. / S.U. Emerson, M. Zhang, X.J. Meng, H. Nguyen, Y. Huang, R.H. Purcell // Hearings of National Academy of sciences USA, 98, - 2001. - P. 15270-15275.

95. Emerson, S.U. A virus of hepatitis E. / S.U. Emerson, R.H. Purcell // Responses in medical virology 13, - 2003. - p. 145-154.

96. Erker, J. C. Hepatitis E a virus variant from the United States: the molecular characteristic and transfer in cynomolgus macaques. / J.C. Erker, S.M. Desai, G. Schlauder, J. Dawson, I. K. Mushahwar // Magazine of the General Virology 80, -1999.-P. 681-690.

97. Feher, G. Ontogenesis and structural changes of the lymphatic system in birds // XXI Всемирный ветеринарный конгресс: T.I., Сообщ. докл. - М.: -1979.-c.12.

98. Garkavenko, О. Detection and the characteristic of a hepatitis of pig E a virus in New Zealand. / O. Garkavenko, A. Obriadina, J. Meng, D.A.Anderson, H.J. Benard, B.A. Schroder, Y.E. Khudyakov, H.A. Areas, M.C. Croxson // Magazine of Medical Virology 65, - 2001. - P. 525-529.

99. Halbur, P. G. Comparative патогенез infections of pigs with hepatitis E the viruses recovering from a pig and the person. / P.G. Halbur, C. Kasorndorkbua, C. Hilbert, D. Guenette, M.B. Potters, R.H. Purcell, S.U. Emerson, Т.Е. Toth, XJ. Meng // Magazine of Clinical Microbiology 39, - 2001. - p. 918-923.

100. Haqshenas, G., Genetic identification and characterization of a novel virus related to human hepatitis E virus from chickens with hepatitis-splenomegaly syndrome in the United / G. Haqshenas, H.L. Shivaprasad, P.R. Woolcock, D.H. Read, X.J. Meng // J Gen Virol, 10.Vol.82, - 2001. - P. 2449-2462.

101. Haqshenas, G. The prospective protein a capsule of a virus of recently identified bird's hepatitis E a virus parts antigenic determinants with that from a pig and human hepatitis E viruses both a chicken big liver and a virus of illness of a lien / G.Haqshenas, F.F. Huang, M. Fenaux, D.K. Guenette, F.W. Pierson, C.T. Larsen, Hour. L. Shivaprasad, Т.Е. Toth, X.J. Meng // The Center of Molecular Medicine and Infectious disease, Abjointing of Biomedical Sciences and the Pathology. College of Veterinary science. Polytechnical institute of Virginia and the state university, USA. - 2002. - p.2201-2209.

102. Haqshenas, G. Genetic identification and the characteristic of a new virus the virus connected with human hepatitis E from chickens with a hepatitis-spleenomegaly syndrome. / G. Haqshenas, H.L. Shivaprasad, P. Woolcock, D. Read, X.J. Meng // Magazine of the General Вирусологии, 82, (10), - 2001. -P.2449-2462.

103. Haqshenas, G. A prospective capsule of a vims of squirrels of recently identified bird's hepatitis E virus actions antigen determinants with that from a pig and human hepatitis E viruses both a chicken big liver and a virus of illness of a spleen. / G. Haqshenas, F.F. Huang, M. Fenaux, D.K. Guenette, F.W. Pierson,

H.L. Shivaprasda, T.E. Toth, X.J. Meng // Magazine the General Virology, 83, -2002. -P.2201-2209.

104. Haqshenas, G. Prospective fiber of a capsule of a virus of recently identified bird's hepatitis E the virus divides antigen determinants of a pig and human hepatitis E viruses both a chicken big liver and a spleen / G. Haqshenas, F.F. Huang, M. Fenaux, D.K. Guenette, F.W. Pierson, C.T. Larsen, L. Shivaprasad, T.E. Toth X.J. Meng // Magazine of Clinical Microbiology, - 2001.

105. Handlinger, J.H. An egg drop associated with splenomegaly in broiler breeders// J.H. Handlinger W. Williams / Avian Dis, T. 32. N 4.. - 1999. - p. 773778.

106. Huang, F.F. Heterogeneity and the Seroprevalence of Recently identified Bird's Hepatitis E the Virus from Chickens in the United States / F. Huang, G Haqshenas, H.L. Shivaprasad, D.K. Guenette, P.R. Woolcock, C.T. Larsen, F.W. Pierson, F. Elvinger, T.E. Toth, X.J. Meng // Journal of Clinical Microbiology, (40), -№11.- 2002. - p. 4197^1202.

107. Huang, F.F. An experimental infection from embryonated eggs, 1-day chickens, chickens of a layer "the certain infectious agent allocate" and chickens of the selector of a brazier with bird's HEV: the first research. /F.F. Huang, G Haqshenas, D.K. Guenette, F.W. Pierson, H.L. Shrivaprasad, T.E. Toth, X.J. Meng // Magazine of Clinical Microbiology, - 2002.

108. Huang, F.F. Heterogeneity and seroprevalence of a newly identified avian hepatitis E virus from chickens in the United States. / F.F. Huang, G. Haqshenas, H.L. Shivaprasad, P.R. Guenette, P.R. Woolcock, C.T. Larsen, et al. // J Clin Microbiol. 40, - 2002. - P. 4197^1202.

109. Huang, F.F. Determination and analysis of the complete genomic sequence of avian hepatitis E virus (avian HEV) and attempts to infect rhesus monkeys with avian HEV. / F.F. Huang, Z.F. Sun, S.U. Emerson, R.H. Purcell, H.L. Shivaprasad, F.W. Pierson, et al. // J Gen Viral 85,- 2004. - P. 1609-1618.

110. Ivana Bilic, Secvenirovanie, and comparison of bird's hepatitis E viruses from Australia and Europe specify existence of various genotypes. / I. Bilic, B. Jaskulska, A. Basic, C. J. Morrow, M. Hess // - 2002.

111. In, S. Partial comparison of sequence of eight new Chinese's of pressure of hepatitis E a virus offer sequence генома rather steadily. / S. In, S.A. Tsarev, R.H. Purcell, S.U. Emerson // Magazine of Medical Virology, 41, - 1993. - P. 230-241.

112. Kabrane-Lazizi, Y, Evidence that the genomic RNA of hepatitis E virus is capped / Y. Kabrane-Lazizi, X.J. Meng, R.H. Purcell, S.U. Emerson, // J. Viral 73,

- 1999.-P. 8848-8850.

113. Kendall, M.D. The outer and inner thymus cortex is functional syncytium / Cell. Biol. Int. Repts. - V.9, № 1. - 1985. -P.436.

114. Laursen-Jones, A.P. Inclusion bobby hepatitis. / The Vet. Ree. V.90. - №4. 1972.-P. 166.

115. Long, R.H. Inclusion bobby hepatitis - anemia - gangrenous dermatitis, are they really related? / Proc. of the 8 Nat. Meet. Poultry Condemn. Delmar, Maryland, - 1973. - P. 23-24.

116. Mandel, Т. The development and atructure of Hassall's corpuscles in the guinea pig. A light. And electron microscopic study / z. Zellforsch. Mikrosk. Anat.

- Bd.89, h.2. - 1968. - P. 180-192.

117. McCracken, R.M. Virus infections of Birds / R.M. McCracken, В. M. Adair, Adenoviruses in J. B. Mc. Ferran and M.S. McNulty (eds.) // Elsevier Science Publishers В. V. Amsterdam, - 1993. - P. 123-144.

118. Meng, X.J. A novel virus in swine is closely related to the human hepatitis E virus. / X.J. Meng, R.H. Purcell, P.G. Halbur, J.R. Lehman, D.M. Webb, T.S. Tsareva, J.S. Haynes, B.J. Thacker, S.U. Emerson // Proc Natl Acad Sei USA 94, -1997.-P. 9860-9865.

119. Meng, X.J. Experimental infection of pigs with the newly identified swine hepatitis E virus (swine HEV), but not with human strains of HEV. / X.J. Meng, P.G. Halbur, J.S. Haynes, T.S. Tsareva, J.D. Bruna, R.L. Royer, R.H. Purcell, S.U. Emerson//Arch Viral 143, - 1998.-P. 1405-1415.

120. Meng, X.J. Genetic and experimental evidence for cross-species infection by swine hepatitis E virus. / X.J. Meng, P.G. Halbur, M.S. Shapiro, S. Govindarajan, J.D. Bruna, I.K. Mushahwar, R.H. Purcell, S.U. Emerson // J Viral 72, - 1998. - P. 9714-9721.

121. Meng, X.J. Prevalence of antibodies to the hepatitis E virus (HEV) in pigs from countries where hepatitis E is common or is rare in the human population. / X.J. Meng, S. Dea, R.E. Engle, R. Friendship, Y.S. Lyoo, T. Sirinarumitr, K. Urairong, D. Wang, D. Wong, D. Yoo, Y. Zhang, R.H. Purcell, S.U. Emerson // J. Med. Viral, 59, - 1999. - 297-302.

122. Muller- Hermelink, H. Structural and functictional. alterations of the aging human thymus / H. Muller- Hermelink, G. Steinmann, H. Stein // Proc. of the 7-th Int. Conf. lymf. Tissues. - New York; London, - 1982. - P. 303-312.

123. Ohta, H. Влияние вирусов птиц на активацию комплимента кур (Japan). / Н. Ohta, К. Komine, Y. Ishijima, J. Japan. // Se. Veter 50, 5, - 1988. - P.1099-1102.

124. Payne, C.J., Haqshenas G.F., Huang / "Pathology", 37, (5) - 2008. - p. 527535.

125. Payne, C.J. Sequence data suggests big liver and spleen disease virus (BLSV) is genetically related to hepatitis E virus / C.J. Payne, T.M. Ellis, S.L. Plant, A.R. Gregory, G.E. Wilcox // Veter. Microbiol, Vol.68,N 1/2, - 1999. - P. 119-125.

126. Payne, N. The lymphoid system / Payne N. // Physiology and biochemistry of the domestic fowl. London Acad, press., - 1977. - P. 985-1037.

127. Payne, C.J. The detection of the big liver and spleen agent in infected tissues via intravenous chick-embryo inoculation / C.J. Payne, S.L. Plant, T.M. Ellis, P.W. Hillier, W. Hopkinson // Avian Pathol, 22, - 1993. -P.245-256.

128. Pettit, J.R. Inclusion boby hepatitis in broiler chickens / J.R. Pettit, H.C. Carlson // Avian Dis., V. 18 - 1972. - P. 858-863.

129. Peralta, B. Vidence of widespread infection of avian hepatitis E virus (avian HEV) in chickens from / B. Peralta, M. Biarnes, G. Ordonez, R. Porta, M. Martin,

E. Mateu, S. Pina, X.J. Meng // Veterinary Microbiology., Vol 137 - № 1/2 -2009.-P. 31-36.

130. Riddell, M.A. The Serologichesky sign for a hepatitis of pig E a virus infection in the Australian herds of a pig. / M.A. Riddell, F. Lithium, R.J. Love, D.A. Anderson // Veterinary Microbiology, 68, - 1999. - 95-105.

131. Ritchie, S.J. "Hepatitis-splenomegaly" syndrome in commercial egg laying hens. / S.J. Ritchie, C. Riddell // Can Vet J. 32, - 1991. - p. 500.

132. Shivaprasad, H.L. The syndrome hepatitis -splenomegaly. / H.L. Shivaprasad, Y.M. Saif, H.J. Barns, J.R. Glisson, M. Fadly, L.R. Makdygalt, D.E. Syen // Illnesses of birds With Iowa State University Press, 11,- 2003. - P. 11861188.

133. Shivaprasad, H.L. Group 1 avian adenovirus and avian adeno-associated virus in turkey poults with inclusion body hepatitis / H.L. Shivaprasad, P.R. Woolcock, M.D. McFarland // Avian Pathol. Vol.30, - 2001. - P.661-666.

134. Skvairs, E.J. A etiology HSS-syndrome at hens-layers. / E.J. Skvairs, C. Lison // British veterinary Journal, 144, - 1988. - p.602-609.

135. Tablante, N.L. HSS-syndrome and a hepatitis in industrial herds of hens-layers. / N.L. Tablante, J.P. Valyankur, R.J. Dgylian // Pathologies of birds 23, -1994. -p.725-732.

136. Toivanen, A. Ontogeny of chicken lymphoid system. / A. Toivanen, B. Toivanen, J. Escola // Avian immunol. - 1981. - P. 45-56.

137. Warner, N.L. The immunological role of avian thymus and bursa Fabricius / Folia Biol. (Praha), T.13, fasc. 1. - 1967. — P.l-17.

138. Watney, H. Lond term stadies of Mareks dieases infection in chicken. / -1982.-P. 346-365.

139. Williams A.L., Hoofiiagle J.H. Ratio of serum aspartate to alanine aminotransferase in chronic hepatitis/ Relationship to cirrhosis // Gastroenterology. - 1988. -Vol. 95.-P.734-739.

140. Worm, H.C. Identification of a new variant of hepatitis E a virus in Austria: sequence, phylogenetic and serological the analysis. / H.C. Worm, G.G. Schlauder,

H. Wurzer, I.K. Mushahwar // Magazine of the General Virology, 81, - 2000. -P.2885-2890.

141. Worm, H.C. Hepatitis E: the short review. / H.C. Worm, W. a van der Poel, H.M. Brandstatter // Microorganisms and the Infection, 4, P. 657-666. Article of Review Veterinarian Medicine, 52, - 2007. - 365-384.

142. Worm, H.C. Hepatitis E: the short review. / H.C. Worm, W. der Poel, H.M. Brandstatter. // Microorganisms and the Infection, 4, - 2002. - p. 657-666.

143. Wu, J.C. Distribution of hepatitis E a virus among various - at the age of pigs: the two-year-old review in Taiwan. / J.C. Wu, C.M. Chen, T.Y. Chang, W.H. Tsai, W.J. Jeng, I.J. Shine, C.C. Lin, X.J. Meng // Magazine of Medical Virology, 66,-2002.-P. 488-492.

144. Xing, L. Recombinant hepatitis E a capsule of a virus of squirrels in double area particle T=1 representation of a congenital virus. / L. Xing, K. Kato, T. lithium, N. Takeda, T. Miyamura, L. Hammar, R.H. Cheng // Virology, 265, -1999.-P. 35-45.

145. Yarbough, V.S. Llepatitis E a virus. Intervirology / Virology 242, - 1999. -P. 179-184.

146. Yazaki, Y. Sporadic sharp or lightning hepatitis E in Hokkaido, Japan, can be food borne as it is offered presence of hepatitis E a vims in a liver of a pig as food. / Y. Yazaki, H. Mizuo, M. Takahashi, T. Nishizawa, N. Sasaki, Y. Gotanda, H. Okamoto // Magazine of the General Virology, 84, - 2003. - P. 2351-2357.

147. Yoo, D. Prevalence of hepatitis E an antibody vims in the Canadian herds of a pig and identification from a new variant of a hepatitis of pig E a vims. / D. Yoo, P. Willson, Y. Pei, M.A. Hayes, A. Deckert, C.E. Dewey, R.M. Friendship, Y. Yoon, M. Gottschalk, C. Yason, A. Giulivi // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 8, - 2001. - P. 1213-1219.

148. Zafrullah, M. Fiber ORF3 of hepatitis E is phosphoprotein it contacts a cytoskeleton. / M. Zafrullah, M.H. Ozdener, S.K. Panda, S. Jameel // Magazine from Virology, 71, - 1997. - P. 9045-9053.

149. Zafrullah, M. The Mutational analysis glycosidase, membranes a translocation, and an expression of a surface of a cell from hepatitis E a virus of squirrels ORF2. / M. Zafrullah, M.H. Ozdener, R. Kumar, S.K. Panda, S. Jameel // Virology magazine, 73, - 1999. - P. 4074-4082.

150. Zanetti, A.R. Identification from a new variant of hepatitis E a virus in Italy. / A.R. Zanetti, G.G. Schlauder, L. Romano, E. Tanzi, P. Fabris, G.J. Dawson, I.K. Mushahwar // Magazine of Medical Virology, 57, - 1999. - P. 356-360.

151. Zhang, M. Identification from limiting sequence SAR-55 and MEX-14 pressure of hepatitis E is a virus and acknowledgement by a gene is topped. / M. Zhang, R.H. Purcell, S.U. Emerson // - 2001.