Моноцитарный хемотаксический белок-1 (МСР-1) как фактор воспаления при атерогенезе. Разработка пептидного ингибитора МСР-1. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.06, кандидат медицинских наук Кухтина, Надежда Борисовна

• Кухтина, Надежда Борисовна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Кухтина, Надежда Борисовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Атеросклероз — заболевание с хронической воспалительной компонентой

1.2. Рестеноз как осложнение эндоваскулярных способов реваскуляризации в отдаленном периоде

1.3. Участие цитокинов в атерогенезе. Влияние цитокинов на стабильность атеросклеротических бляшек

1.4. Семейство хемокинов. Характеристика моноцитарного хемотаксического белка-1 (МСР-1 )/ССЬ

1.5. Рецепторы хемокинов. Пути передачи внутриклеточных сигналов от хемокиновых рецепторов. Рецептор МСР

1.6. Роль МСР-1 в атерогенезе

1.7. Перспективные противовоспалительные лекарственные препараты и препараты для покрытия стентов при лечении ИБС и атеросклероза

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Моноцитарный хемотаксический белок-1 (МСР-1) как фактор воспаления при атерогенезе. Разработка пептидного ингибитора МСР-1.»

Атеросклероз коронарных сосудов, проявляющийся клинически как ишемическая болезнь сердца (ИБС), является наиболее распространенной причиной смерти у населения развитых стран. Ряд клинических и экспериментальных данных позволяют рассматривать атеросклероз как хроническое воспалительное заболевание артериальной стенки. На всех этапах атерогенеза в интиме сосуда выявлено накопление «клеток воспаления», преимущественно моноцитов/макрофагов и Т-лимфоцитов. Активация этих клеток и их взаимодействие друг с другом приводит к локальной продукции, главным образом, макрофагами, цитокинов, активных форм кислорода, протеолитических ферментов и других факторов, приводящих к ремоделированию сосудистой стенки. В последние десятилетия для лечения больных ИБС, широко применяют транслюминальную баллонную ангиопластику со стентированием коронарных артерий. Наиболее значительным ограничением данных способов восстановления кровотока является рестеноз. Рестеноз - повторное сужение просвета сосуда в месте его повреждения, возникающее приблизительно у 7-30% больных. Воспалительная реакция, возникающая в ответ на повреждение сосуда, является пусковым механизмом формирования неоинтимы. Об этом свидетельствуют данные о накоплении моноцитов в участках рестеноза у человека, а также о том, что подавление миграции лейкоцитов предупреждает рестенозирование сосудов у экспериментальных животных. В настоящее время для улучшения результатов стентирования разрабатываются стенты, покрытые различными лекарственными препаратами. Широкое распространение получили стенты, покрытые рапамицином — антибактериальным препаратом с выраженным антипролиферативным и иммуносупрессорным действием.

Миграция лейкоцитов в очаг воспаления осуществляется под действием хемотаксических цитокинов — хемокинов. Результаты многочисленных исследований свидетельствуют о том, что одним из основных хемокинов в атерогенезе является моноцитарный хемотаксический белок-1 (МСР-1). МСР-1 - хемоаттрактант для моноцитов/макрофагов и активированных Т-лимфоцитов. МСР-1 вырабатывается моноцитами/макрофагами, эндотелиальными клетками (ЭК) и гладкомышечными клетками (ГМК). Он не обнаружен в нормальной сосудистой стенке, однако его экспрессия значительна в атеросклеротических бляшках в богатых макрофагами областях, прилегающих к липидному ядру, и в зонах инфаркта миокарда. Формирование атеросклеротических поражений было подавлено в экспериментах с использованием мышей, дефицитных по гену МСР-1 или его рецептору ССЯ2. Баллонное повреждение артерий приводит к быстрой индукции синтеза МСР-1 ГМК, в свою очередь нейтрализация МСР-1 с помощью специфичных антител подавляет рост неоинтимы после баллонирования у экспериментальных животных. Таким образом, МСР-1 стимулирует формирование неоинтимы и может вносить существенный вклад в развитие стенозирующих осложнений после проведения чрескожной транслюминальной ангиопластики.

В настоящее время ведется активный поиск лекарственных средств, в частности антагонистов МСР-1, действие которых направлено на ограничение миграции лейкоцитов. Исследуются противовоспалительные свойства ингибирующих МСР-1 моноклональных антител, мутантных рекомбинантных форм МСР-1, ингибиторов вирусной природы и др. Препараты пептидной природы на сегодняшний день являются наиболее безопасными, поэтому разработка пептидных антагонистов МСР-1 представляет собой одно из наиболее перспективных направлений.

Целью работы явилось изучение роли хемокина МСР-1 в атерогенезе и рестенозировании сосудов и разработка противовоспалительного пептидного препарата - фрагмента МСР-1, ингибирующего миграцию лейкоцитов.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Проанализировать экспрессию хемокинов, цитокинов и факторов роста в атеросклеротических бляшках коронарных артерий больных ИБС.

Исследовать клеточный состав атеросклеротических бляшек, оценить экспрессию клетками хемокиновых рецепторов.

2. Определить концентрацию хемокина МСР-1 в плазме крови больных со стабильной и нестабильной стенокардией.

3. Получить короткие пептидные фрагменты последовательности МСР-1. Протестировать полученные пептиды в моделях миграции лейкоцитов in vitro и in vivo. Выбрать целевой пептид с наиболее выраженными ингибиторными свойствами.

4. Проанализировать противовоспалительные свойства целевого пептида в моделях подкожного воспаления у грызунов и приматов, а также при баллонной ангиопластике сонных артерий крыс.

Научная новизна. Проведен анализ атеросклеротических бляшек коронарных артерий и интимы аорты больных ИБС, полученных в ходе операций эндартерэктомии коронарных артерий и аортокоронарного шунтирования. Получены оригинальные данные об экспрессии мРНК цитокинов/хемокинов, в частности, хемокина МСР-1 и новые данные об экспрессии хемокиновых рецепторов клетками, выделенными из атеросклеротических бляшек коронарных артерий больных ИБС.

Выявлено достоверное повышение концентрации МСР-1 в плазме крови больных ИБС с нестабильной стенокардией по сравнению с больными со стабильной стенокардией.

Протестировано 15 пептидных фрагментов аминокислотной последовательности МСР-1 по влиянию на миграцию лейкоцитарных клеток в условиях in vitro. На основе анализа выбран целевой пептид — фрагмент С-концевого домена 65-76 МСР-1 (РХ). Показано, что РХ препятствует накоплению лейкоцитов в области подкожного воспаления и подавляет формирование неоинтимы на ранних сроках после проведения баллонной ангиопластики сонных артерий у экспериментальных животных.

Впервые показано участие С-концевого домена хемокина МСР-1 в миграции клеток.

Практическая значимость. Полученные в ходе выполнения работы данные, в частности, об экспрессии цитокинов/хемокинов и рецепторов хемокинов в атеросклеротических бляшках коронарных артерий человека, способствуют более глубокому пониманию молекулярных механизмов атерогенеза. Получен новый пептидный фрагмент 65-76 С-концевой последовательности МСР-1 (РХ), подавляющий миграцию лейкоцитов in vitro и in vivo в очаг воспаления. Данный пептид может найти применение в терапии больных с хроническими воспалительными заболеваниями, а также в кардиологии у больных ИБС при возникновении острого коронарного синдрома (ОКС) и при стентировании коронарных артерий.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Сердечно-сосудистые заболевания представляют собой одну из сновных причин инвалидности и преждевременной смерти жителей экономически развитых стран. По данным Hansson GK (2005) доля этих заболеваний в структуре смертности составляет 40-60%, в Северной Америке составляет приблизительно 38% от общего количества смертей. Среди европейцев сердечно-сосудистые заболевания являются наиболее частой причиной смерти у мужчин в возрасте моложе 65 лет и второй по частоте причиной смерти у женщин. В России также отмечается существенное увеличение смертности от сердечно-сосудистых заболеваний, доля которых в структуре преждевременной смертности у мужчин составляет приблизительно 60% и до 70% у женщин.

Одним из главных заболеваний сердечно-сосудистой системы является ишемическая болезнь сердца (ИБС). Приблизительно половина всех случаев летальных исходов (40-60% по разным данным), связанных с сердечнососудистыми заболеваниями, обусловлена ИБС. В подавляющем большинстве (до 98%) случаев в основе ИБС лежит атеросклероз коронарных артерий.

Заключение диссертации по теме «Кардиология», Кухтина, Надежда Борисовна

ВЫВОДЫ:

1. В атеросклеротических бляшках коронарных артерий больных ИБС выявлена экспрессия хемокина МСР-1. Лейкоциты, выделенные из образцов атеросклеротических бляшек, экспрессируют рецептор МСР-1 CCR2.

2. Концентрация МСР-1 в плазме крови пациентов с ИБС при нестабильной стенокардии достоверно повышена по сравнению с пациентами со стабильной стенокардией.

3. Синтетический пептид С-концевой последовательности (65-76) МСР-1 (РХ) ингибирует МСР-1-опосредованную миграцию моноцитов человека in vitro в камере Бойдена и в «воздушном мешке» у мышей.

4. РХ подавляет подкожное ЛПС-индуцированное воспаление у крыс и приматов.

5. РХ препятствует формированию неоинтимы после баллонного повреждения сонных артерий крыс на ранних сроках после вмешательства.

7. Заключение

Проведенное исследование способствуют более глубокому пониманию роли хемокина МСР-1 в атерогенезе, представлению о некоторых механизмах развития воспаления и атерогенеза. Установлено, что у больных ИБС при НС концентрация МСР-1 в плазме крови достоверно повышается. Анализ экспрессии цитокинов, хемокинов и факторов роста в атеросклеротических бляшках свидетельствует о том, что участком развивающегося воспаления может являться интима артерий пациентов с ИБС без макроморфологических изменений. Выявлены внутриклеточные протеинкиназы, активирующиеся в ответ на МСР-1 в моноцитах периферической крови и ЭК. Анализ активации внутриклеточных протеинкиназ на ЭК проведен впервые. Авторы разработали, синтезировали и протестировали новый пептидный фрагмент РХ, обладающий противовоспалительными свойствами, который является потенциальным кандидатом для использования при лечении хронических воспалительных заболеваний, а также при использовании направленной фармакотерапии при установке стентов, покрытых лекарственными препаратами, больным ИБС. Такое лекарственное средство способно подавлять развитие гиперплазии неоинтимы на ранних сроках. Разработанный препарат пептидной природы РХ не оказывает системного действия на параметры неспецифического и специфического иммунитета. РХ обладает высокой устойчивостью к деградации в плазме крови, эффективно подавляет миграцию моноцитарных и гранулоцитарных лейкоцитов. Применение синтетического пептидного С-концевого фрагмента 65-76 МСР-1 РХ в качестве ингибитора миграции лейкоцитов при проведении ангиопластики наряду с традиционной терапией могло бы способствовать снижению частоты возникновения рестеноза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Кухтина, Надежда Борисовна, 2009 год

1. Антонов A.C., Крушинский A.B., Николаева^ М:А., Флегель Х.Г.

2. Первичная культура эндотелиальных клеток из пупочной вены человека: идентификация и характеристика растущей и конфлуентной культуры. Цитология, 1981; 33: 1154-1159.

3. Кухтина Н.Б., Арефьева Т.И., Арефьева А.М., Акчурин P.C., Красникова Т.Л;. Экспрессия хемокинов и цитокинов в атеросклеротических бляшках и интиме артерий у больных ИБС. Терапевтический архив, 2008; 80(4): 63-9.

4. Панченко Е.П., Добровольский А.Б. Тромбозы в кардиологии. Механизмы развития и возможности терапии. Предисловие акад. Е.И. Чазова -М., Спорт и культура, 1999.

5. Самко А.Н., Савченко АЛ. Некоторые современные направления коронарной ангиопластики. Кардиология, 1993; 9: 62-67.

6. Флоря В.Г., Беленков Ю.Н. Ремоделирование сосудов как патогенетический компонент заболеваний сердечно-сосудистой системы. Кардиология 1996; 12: 72-78.

7. Abi-Younes S, Sauty A, Mach F, Sukhova GK, Libby P, Luster AD. The stromal cell-derived factor-1 chemokine is a potent platelet agonist highly expressed in atherosclerotic plaques. Circ Res. 2000; 86(2): 131-8.

8. Adam LP, Hathaway DR. Identification of mitogen-activated protein kinase phosphorylation sequences in mammalian h-Caldesmon. FEBS Lett., 1993; 322(1): 56-60.

9. Adams P.C., Lam J.Y., Badimon L., Chesebro-J.H., Fuster Y. Interactions of platelets and vessels wall in the development of restenosis after coronary angioplasty. AnnN Y Acad Sci, 1987; 516: 602-620.

10. Ait-Oufella H, Taleb S, Mallat Z, Tedgui A. Cytokine network and T cell immunity in atherosclerosis. Semin Immunopathol., 2009; (3): 56-62.

11. Al-Sumidaie AM, Jones DL, Young HL. Characterisation of the under-agarose method for quantifying migration of highly purified human monocytes. J Immunol Methods. 1984; 75(1): 129-40.

12. Apostolou I, von Boehmer H. In vivo instruction of suppressor commitment in naive T cells. J Exp Med., 2004; 199(10): 1401-8.

13. Arefleva T.I., Kukhtina N.B., Antonova O.A., Krasnikova T.L. MCP-1 -stimulated chemotaxis of monocytic and endothelial cells is dependent on activation of different signaling cascades. Cytokine, 2005; 31(6): 439-446.

14. Ashida N, Arai H, Yamasaki M, Kita T. Distinct signaling pathways for MCP-1-dependent integrin activation and chemotaxis. J Biol Chem., 2001; 276(19): 16555-60.

15. AukrustP, Damas JK, Gullestad L, Freland SS. Chemokines in myocardial failure — pathogenic importance and potential therapeutic targets. Clin Exp Immunol., 2001; 124(3): 343-5.

16. Aukrust P, Otterdal K, Yndestad A, Sandberg WJ; Smith C, Ueland T, 0ie E, Damas JK, Gullestad L, Halvorsen B. The complex role of T-cell-based immunity in atherosclerosis. Curr Atheroscler Rep., 2008; 10(3): 236-43.

17. Barlic J, Murphy PM. Chemokine regulation of atherosclerosis. J Leukoc Biol., 2007; 82(2): 226-36.

18. Bass DA. Behavior of eosinophil leukocytes in acute inflammation. II. Eosinophil dynamics during acute inflammation. J Clin Invest., 1975; 56(4): 870-9.

19. Beall CJ, Mahajan S, Kuhn DE, Kolattukudy PE. Site-directed mutagenesis of monocyte chemoattractant protein-1 identifies two regions of the polypeptide essential for biological activity. Biochem J., 1996; 313 (2): 633-40.

20. Boehme SA, Sullivan SK,.Crowe PD, Santos M, Conlon PJj Sriramarao P, Bacon KB. Activation of mitogen-activated protein kinase regulates eotaxin-induced eosinophil migration. J Immunol., 1999; 163(3): 1611-8.

21. Bonanno E, Mauriello A, Partenzi A, Anemona L, Spagnoli LG. Flow cytometry analysis of atherosclerotic plaque cells from human carotids: a validation study. Cytometry, 2000; 39(2): 158-65.

22. Bondeva T, Pirola L, Bulgarelli-Leva G, Rubio I, Wetzker R, Wymann MP. Bifurcation of lipid and protein kinase signals of PI3Kgamma to the protein kinases PKB andMAPK. Science, 1998; 282(5387): 293-6.

23. Boring L, Gosling J, Cleary M, Charo IF. Decreased lesion formation in CCR2-/- mice reveals a role for chemokines in the initiation of atherosclerosis. Nature, 1998; 394(6696): 894-7.

24. Bottomley MJ, Salim K, Panayotou G. Phospholipid-binding protein domains. Biochim Biophys Acta., 1998; 1436(1-2): 165-83.

25. Boyura A. Isolation of leucocytes from human blood. A two-phase system for removal of red cells with methylcellulose as erythrocyte-aggregating agent. Scand J Clin Lab Invest Suppl., 1968; 97: 9-29.

26. Briner TJ, Kuo MC, Keating KM, Rogers BL, Greenstein JL. Peripheral T-cell tolerance induced in naive and primed mice by subcutaneous injection of peptides from the major cat allergen Fel d I. Proc Natl Acad Sci USA, 1993; 90(16): 7608-12.

27. Buffon A, Biasucci LM, Liuzzo G, D'Onofrio G, Crea F, Maseri A.

28. Widespread coronary inflammation in unstable angina. N Engl J Med., 2002; 347(1): 5-12.

29. Cambien B, Pomeranz M, Millet MA, Rossi B, Schmid-AIIiana A. Signal transduction involved in MCP-1-mediated monocytic transendothelial migration. Blood, 2001; 97(2): 359-66.

30. Chan TO, Rittenhouse SE, Tsichlis PN. AKT/PKB and other D3 phosphoinositide-regulated kinases: kinase activation by phosphoinositide-dependent phosphorylation. Annu RevBiochem., 1999; 68: 965-1014.

31. Cho HJ, Shashkin P, Gleissner CA, Dunson D, Jain N, Lee JK, Miller Y, Ley K. Induction of dendritic cell-like phenotype in macrophages during foam cell formation. Physiol Genomics, 2007; 29(2): 149-60.

32. Clowes A.W., Reidy M.A., Clowes M.M. Kinetics of cellular proliferation after arterial injury. I: Smooth muscle growth in the absence of endothelium. Lab Invest, 1983; 49: 327-333.

33. Clowes A.W., Schwartz S.M. Significance of quiescent smooth muscle migration in the injured rat carotid artery. Circ Res, 1985; 56: 139-145.

34. Coso OA, Chiariello M, Yu JC, Teramoto H, Crespo P, Xu N, Miki, T, Gutkind JS. The small GTP-binding proteins Racl and Cdc42 regulate the activity ofthe JNK/SAPK signaling pathway. Cell, 1995; 81(7): 1137-46.

35. Czepluch FS, Zweigle B, Waltenberger J. Chemotaxis analysis of circulating monocytes in patients with a recent acute coronary syndrome. Atherosclerosis, 2008; 204(1): 304-8.

36. Daugherty A, Rateri DL. T lymphocytes in atherosclerosis: the yin-yang of Thl and Th2 influence on lesion formation. Circ Res., 2002; 90(10): 1039-40.

37. Dawson TC, Kuziel WA, Osahar TA, Maeda N. Absence of CC chemokine receptor-2 reduces atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice. Atherosclerosis, 1999; 143(1): 205-11.

38. De Meyer GR, Bult H. Mechanisms of neointima formation—lessons from experimental models. Vase Med., 1997; 2(3): 179-89.

39. Egashira K. Clinical importance of endothelial function in arteriosclerosis and ischemic heart disease. Circ J., 2002; 66(6): 529-33.

40. Egashira K. Molecular mechanisms mediating inflammation in vascular disease: special reference to monocyte chemoattractant protein-1. Hypertension, 2003; 41(3): 834-41.

41. Falk E, Schwartz SM, Galis ZS, Rosenfeld ME. Neointimal cracks (plaque rupture?) and thrombosis in wrapped arteries without flow. Arterioscler Thromb Vase Biol., 2007; 27(1): 248-9.

42. Falk W, Goodwin RH Jr, Leonard EJ. A 48-well micro chemotaxis assembly for rapid and accurate measurement of leukocyte migration. J Immunol Methods, 1980; 33(3): 239-47.

43. Fanger GR, Gerwins P, Widmann C, Jarpe MB, Johnson GL. MEKKs, GCKs, MLKs, PAKs, TAKs, and tpls: upstream regulators of the c-Jun amino-terminal kinases? Curr Opin Genet Dev., 1997; 7(1): 67-74.

44. Fanning AS, Anderson* JM. Protein modules as organizers of membrane structure. Curr Opin Cell Biol., 1999; 11(4): 432-9.

45. Farb A, Burke AP, Tang AL, Liang TY, Mannan P, Smialek J, Virmani R. Coronary plaque erosion without rupture into a lipid core. A frequent cause of coronary thrombosis in sudden coronary death. Circulation, 1996; 93(7): 1354-63.

46. Fine JS, Byrnes HD, Zavodny PJ, Hipkin RW. Evaluation of signal transduction pathways in chemoattractant-induced human monocyte chemotaxis. Inflammation, 2001; 25(2): 61-7.

47. Fuster V. Understanding the coronary disease process and the potential for prevention: a summary. Prev Med., 1999; 29(6): S9-10.

48. Galis ZS, Khatri JJ. Matrix metalloproteinases in vascular remodeling and atherogenesis: the good, the bad, and the ugly. Circ Res., 2002; 90(3): 251-62.

49. Gartner T, Kiihnel H, Raab G, Raab M, Strebhardt K, Rubsamen-Waigmann H. A strong protein-tyrosine kinase activity is associated with a baculovirus-expressed chicken tkl gene. Eur J Biochem., 1992; 208(1): 91-100.

50. Gashler A, Sukhatme VP. Early growth response protein 1 (Egr-1): prototype of a zinc-finger family of transcription factors. Prog Nucleic Acid Res Mol Biol., 1995; 50: 191-224.

51. Geissmann F, Jung S, Littman-DR. Blood monocytes consist of two principal subsets with distinct migratory properties. Immunity, 2003; 19(1): 71-82.

52. Gerthoffer WT, Yamboliev IA, Pohl J, Haynes R, Dang S, McHugh J.

53. Activation of MAP kinases in airway smooth muscle. Am J Physiol., 1997; 272(2): L244-52.

54. Gimbrone MA Jr, Buchanan MR. Interactions of platelets and leukocytes with vascular endothelium: in vitro studies. AnnN Y Acad Sci., 1982; 401: 171-83.

55. Glagov S. Intimal hyperplasia, vascular modeling, and the restenosis problem. Circulation, 1994; 89(6): 2888-91.

56. Gosling J, Slaymaker S, Gu L, Tseng S, Zlot CH, Young SG, Rollins BJ, Charo IF. MCP-1 deficiency reduces susceptibility to atherosclerosis in mice that overexpress human apolipoprotein B. J Clin Invest., 1999; 103(6): 773-8.

57. Glass CK, Witztum JL. Atherosclerosis the road ahead. Cell, 2001; 104(4): 503-16.

58. Go Hedge J, McCann M, Mangan, S, Lam A, Karan M. Osteoprotegerin and osteopontin are expressed at high concentrations within symptomatic carotid atherosclerosis. Stroke, 2004; 35(7): 1636-41.

59. Haivorsen B, Otterdal K, Dahl TB, Skjelland M, Gullestad B, 0ie E, Aukrust P. Atherosclerotic plaque stability—what determines the fate of a plaque? Prog Cardiovasc Dis., 2008; 51(3): 183-94.

60. Handel TM, Domaille PJ. Heteronuclear (1H, 13C, 15N) NMR assignments and solution structure of the monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1). dimer. Biochemistry. 1996; 35(21): 6569-84:

61. Hansson GK. Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease. N Engl J Med., 2005; 352(16): 1685-95.

62. Hansson GK, Libby P, Schönbeck U, Yan ZQ; Innate and adaptive immunity in the pathogenesis of atherosclerosis. Circ Res., 2002; 91(4): 281-91.

63. Haque NS, Fallon JT, Pan JJ, Taubman MB, Harpel PC. Chemokine receptor-8 (CCR8) mediates human vascular smooth muscle cell Chemotaxis and metalloproteinase-2 secretion. Blood, 2004; 103(4): 1296-304.

64. Haudenschild CC. Pathobiology of restenosis after angioplasty. Am J Med., 1993; 94(4A): 40S-44S.

65. Hayashi Y, Sawa Y, Nishimura M, Tojo SJ, Ichikawa H, Satoh H, Yamaguchi T, Suhara.H, Ohtake S, Matsuda H. P-selectin monoclonal antibody may attenuate the whole body inflammatory response induced by cardiopulmonary bypass. ASAIO J., 2000; 46(3): 334-7.

66. Hehrlein C., Zimmermann M.,.PiII J;, Kubler W., von Hodenberg E. The role of elastic recoil after balloon angioplasty of rabbit arteries and its prevention by stent implantation. Eur Heart J, 1994; 15: 277-280.

67. Heriaar E, Brown Z. p38 MAPK signalling cascades in inflammatory disease. MolMed Today, 1999; 5(10): 439-47.

68. Herrman J.P., Serruys P.W. Thrombin and antithrombotic therapy in interventional cardiology. Tex Heart Inst J, 1994; 21: 138-147.

69. Holmes WE, Lee J, Kuang WJ, Rice GC, Wood WI. Structure and functional expression of a human interleukin-8 receptor. Science, 1991; 253(5025): 1278-80.

70. Honye J:, Mahon D.J., Jain A., White C.J., Ramee S.R., Wallis J.B., Zarka A., Tobis J.M. Morphological effects of coronary balloon angioplasty in vivo assessed by intravascular ultrasound imaging. Circulation, 1992; 85: 1012-1025.

71. Hoyne GF, O'Hehir RE, Wraith DC, Thomas WR, Lamb JR. Inhibition of T cell and antibody responses to house dust mite allergen by inhalation of the dominant T cell epitope in naive and sensitized mice. J Exp Med., 1993; 178(5): 1783-8.

72. Huo Y, Weber C, Forlow SB, Sperandio M, Thatte J, Mack M, Jung S, Littman DR, Ley K. The chemokine KC, but not monocyte chemoattractant protein1, triggers monocyte arrest on early atherosclerotic endothelium. J Clin Invest., 2001; 108(9): 1307-14.

73. J., Fuster V., Israel D. The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty. J Am Coll Cardiol, 1991; 17: 77B-88B.

74. Jonasson L, Holm J, Skalli O, Bondjers G, Hansson GK. Regional accumulations of T cells, macrophages, and smooth muscle cells in the human atherosclerotic plaque. Arteriosclerosis, 1986; 6(2): 131-8.

75. Kaji M, Ikari M, Hashiguchi S, Ito Y, Matsumoto R, Yoshimura T, Kuratsu Ji, Sugimura K. Peptide mimics of monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) with an antagonistic activity. J Biochem., 2001; 129(4): 577-83.

76. Kakuta T, Currier JW, Haudenschild CC, Ryan TJ, Faxon DP. Differences in compensatory vessel enlargement, not intimal formation, account for restenosis after angioplasty in the hypercholesterolemic rabbit model. Circulation, 1994; 89(6): 2809-15.

77. Karpus WJ, Kennedy KJ. MlP-lalpha and MCP-1 differentially regulate acute and relapsing autoimmune encephalomyelitis as well as Thl/Th2 lymphocyte differentiation. J Leukoc Biol., 1997; 62(5): 681-7.

78. Kasibhatla S, Brunner T, Genestier L, Echeverri F, Mahboubi A, Green DR. DNA damaging agents induce expression of Fas ligand and subsequent apoptosis in T lymphocytes via the activation of NF-kappa B and AP-1. Mol Cell., 1998; 1(4): 543-51.

79. Keeley EC, Mehrad B, Strieter RM. Chemokines as mediators of neovascularization. Arterioscler Thromb Vase Biol., 2008; 28(11): 1928-36.

80. Kimura T., KaburagiS., TamuraT. Remodeling of human coronary arteries undergoing coronary angioplasty or atherectomy. Circulation, 1997; 96: 475-483.

81. Klemke RL, Cai S, Giannini AL, Gallagher PJ^ de Lanerolle P, Cheresh

82. DA. Regulation of cell motility by mitogen-activated protein kinase. J Cell Biol., 1997; 137(2): 481-92.

83. Kolodgie FD, Narula J, Burke AP, Haider N, Farb A, Hui-Liang Y, Smialek J, Virmani R. Localization of apoptotic macrophages at the site of plaque rupture in sudden coronary death. Am J Pathol., 2000; 157(4): 1259-68.

84. Krug A, Uppaluri R, Facchetti F, Dorner BG, Sheehan KC, Schreiber RD, Cella M, Colonna M. IFN-producing cells respond to CXCR3 ligands in the presence of CXCL12 and secrete inflammatory chemokines upon activation. J Immunol., 2002; 169(11): 6079-83.

85. Majesky M.W., Schwartz S.M., Glowes M.M., Clowes A.W. Heparin regulates smooth muscle S phase entry in the injured rat carotid artery. Circ Res, 1987;61:296-300.

86. McCaffrey TA, Fu C, Du B, Eksinar S, Kent KC, Bush H Jr, Kreiger K, Rosengart T, Cybulsky MI, Silverman ES,. Collins T. High-level expression of Egr-1 and Egr-1 -inducible genes in mouse and human atherosclerosis. J Clin Invest., 2000; 105(5): 653-62.

87. McNamara C.A., Sarembock I.J., Gimple L.W., Fenton J.W.d., Coughlin S.R., Owens G.K. Thrombin stimulates proliferation of cultured rat aortic smooth muscle cells by a proteolytically activated receptor. J Clin Invest, 1993; 91: 94-98.

88. Mehrad B, Keane MP, Strieter RM. Chemokines as mediators of angiogenesis. Thromb Haemost., 2007; 97(5): 755-62.

89. Menten P, Wuyts A, Van Damme J. Monocyte chemotactic protein-3. Eur Cytokine Netw., 2001; 12(4): 554-60

90. Minty A, Chalón P, Dërocq JM, Dumont X, Guillemot JC, Kaghad M, Labit C, Leplatois P, Liauzun P, Miloux B, et al. Interleukin-13 is a new human lymphokine regulating inflammatory and immune responses. Nature, 1993; 362(6417): 248-50;

91. Murdoch.C, Finn A. Chemokine receptors and their role in inflammation and; infectious diseases. Blood, 2000; 95(10): 3032-43.

92. Murdoch G, Finn A. Chemokine receptors and their role in vascular biology. J Vase Res., 2000; 37(1): 1-7.

93. Murphy PM, Baggiolini M, Charo IF, Hébert GA, Horuk R; Matsushima K, Miller LH, Oppenheim JJ, Power GA. International union of pharmacology. XXII. Nomenclature for chemokine receptors. Pharmacol Rev., 2000; 52(1): 145-76.

94. Murphy PM; Tiffany HL. Cloning of complementary DNA encoding a functional human interleukin-8 receptor. Science, 1991; 253(5025): 1280-3.

95. Nair KS, Zingde SM. Adhesion of neutrophils to fibronectin: role of the cd66 antigens. Cell Immunol., 2001; 208(2): 96-106.

96. Naruko T., Ueda M., Becker A.E., Tojo O., Teragaki M., Takeuchi K., Takeda T. Angiographie-pathologie correlations after elective percutaneous transluminal coronary angioplasty. Circulation, 1993; 88(1): 1558-1568.

97. Nathan C. Points of control in inflammation. Nature, 2002; 420(6917): 846-52.

98. Neptune ER, Iiri T, Bourne-HR. Galphai is not required for Chemotaxis mediated by Gi-coupled receptors. J Biol Chem., 1999; 274(5): 2824-8.

99. Nugent HM, Edelman ER. Endothelial implants provide long-term control of vascular repair in a porcine model of arterial injury. J Surg Res., 2001; 99(2): 228-34.

100. Olsen NJ, Stein CM. New drugs for rheumatoid arthritis. N Engl J Med., 2004; 350(21): 2167-79.

101. Orsini MJ, Krymskaya VP, Eszterhas AJ, Benovic JL, Panettieri RA Jr, Penn RB. MAPK superfamily activation in human airway smooth muscle: mitogenesis requires prolonged p42/p44 activation. Am J Physiol., 1999; 277(3): L479-88.

102. Ohashi N, Matsumori A, Furukawa Y, Ono K, Okada M, Iwasaki A, Miyamoto T, Nakano A, Sasayama S. Role of p38 mitogen-activated protein kinase in neointimal hyperplasia after vascular injury. Arterioscler Thromb Vase Biol., 2000 Dec; 20(12): 2521-6.

103. Packard RR, Libby P. Inflammation in atherosclerosis: from vascular biology to biomarker discovery and risk prediction. Clin Chem., 2008; 54(l):24-38.

104. Paolini JF, Willard D, Consler T, Luther M, Krangel MS. The chemokines IL-8, monocyte chemoattractant protein-1, and 1-309 are monomers at physiologically relevant concentrations. J Immunol., 1994; 153(6): 2704-17.

105. Park DW, Lee CW, Yun SG, Kim YH, Hong MK, Kim? JJ; Park SW, Park

106. SJ. Prognostic impact of preprocedural C reactive protein- levels on 6-month angiographic and 1-year clinical outcomes after drug-eluting stent implantation. Heart., 2007; 93(9): 1087-92.

107. Pintucci G, Moscatelli D, Saponara F, Biernacki PR, Baumann FG, Bizekis C, Galloway AC, Basilico C, Mignatti P. Lack of ERK activation and cell migration^ in FGF-2-deficient endothelial cells. FASEB J., 2002; 16(6): 598-600.

108. Poole JC, Florey HW. Changes in the endothelium of the aorta and the behaviour of macrophages in experimental atheroma of rabbits. J Pathol Bacteriol., 1958; 75(2): 245-51.

109. Pollman MJ, Hall JL, Gibbons GH. Determinants of vascular smooth muscle cell apoptosis after balloon angioplasty injury. Influence of redox state and. cell phenotype. CircRes., 1999; 84(1): 113-21.

110. Ranjbaran H, Sokol SI, Gallo A, Eid RE, Iakimov AO, D'Alessio A, Kapoor JR, Akhtar S, Howes CJ, Asian M, Pfau S, Pober JS, Tellides G. Aninflammatory pathway of IFN-gamma production in coronary atherosclerosis. J Immunol., 2007; 178(1): 592-604.

111. Reckless J, Grainger DJ. Identification of oligopeptide sequences which inhibit migration induced by a wide range of chemokines. Biochem J., 1999; 340(3): 803-11.

112. Reckless J, Tatalick LM, Grainger DJ. The pan-chemokine inhibitor NR58-3.14.3 abolishes tumour necrosis factor-alpha accumulation and leucocyte recruitment induced by lipopolysaccharide in vivo. Immunology, 2001; 103(2): 24454.

113. Reidy M.A., Clowes A.W., Schwartz S.M. Endothelial regeneration. V. Inhibition of endothelial regrowth in arteries of rat and rabbit. Lab Invest, 1983; 49(5): 569-75.

114. Reidy M.A., Colleen I., Lindner V. Migration of arterial wall cells. Expression of plasminogen activators and inhibitors in injured rat arteries. Circ Res, 1996; 78: 405-414.

115. Rensing B.J., Hermans W.R.M., Beatt K.J. Quantitative angiographic assessment of elastic recoil after percutaneous transluminal coronary angioplasty. Am J Cardiol, 1990; 66: 1039-1044.

116. Reynaert H, Colle I, Noppen M, Naegels S, Urbain D. A new type of partially covered metal stent for treatment of a high esophagotracheal fistula. Endoscopy, 1999; 31(6): S45-6.

117. Rodríguez-Frade JM, Vila-Coro AJ, de Ana AM, Albar JP, Martínez-A C, Mellado M. The chemokine monocyte chemoattractant protein-1 induces functionalresponses through dimerization of its receptor CCR2. Proc Natl Acad Sci U S A, 1999; 96(7): 3628-33.

118. Rollins BJ. Chemokines. Blood, 1997; 90(3): 909-28.

119. Rollins BJ, Stier P, Ernst T, Wong GG.The human homolog of the JE gene encodes a monocyte secretory protein. Mol Cell Biol., 1989; 9(11): 4687-95.

120. Ross R. Atherosclerosis is an inflammatory disease. Am Heart Ji, 1999; 138(5): 419-20.

121. Ross R, Glomset JA. The pathogenesis of atherosclerosis (first of two parts). N Engl J Med., 1976; 295(7): 369-77.

122. Ross R, Glomset JA. The pathogenesis of atherosclerosis (second of two parts). N Engl J Med., 1976; 295(8): 420-5.

123. Schneider A, Panzer U, Zahner G, Wenzel U,.Wolf G, Thaiss F, Helmchen U, Stahl RA. Monocyte chemoattractant protein-1 mediates collagen deposition in experimental glomerulonephritis by transforming growth factor-beta. Kidney Int., 1999; 56(1): 135-44.

124. Schober A, Zernecke A. Chemokines in vascular remodeling. Thromb Haemost, 2007; 97(5): 730-7.

125. Schwartz R.S.,Campbell G.R., Campbell J.H. Replication of smooth muscle cells in vascular deasease. Circ Res., 1986; 58: 427-444.

126. Schwartz S.M., deBlois D., Er O.B. The intima. Soil for atherosclerosis and restenosis. Circ Res, 1995; 77: 445-465.

127. Serbina> NV, Pamer EG. Monocyte emigration from bone marrow during bacterial infection requires signals mediated by chemokine receptor CCR2. Nat Immunol., 2006; 7(3): 311-7.

128. Servant G, Weiner OD, Herzmark P, Balla T, Sedat JW, Bourne HR.

129. Polarization of chemoattractant receptor signaling during neutrophil chemotaxis. Science, 2000; 287(5455): 1037-40.

130. Shi Y., O'Brien J.E. Jr., Fard A., Zalewski A. Transforming growth factor-beta 1 expression and myofibroblast formation during arterial repair. Arterioscler ThrombVasc Biol, 1996; 16(10): 1298-1305.

131. Shyamala V, Khoja H. Interleukin-8 receptors R1 and R2 activate mitogen-activated protein kinases and induce c-fos, independent of Ras and Raf-1 in Chinese hamster ovary cells. Biochemistry, 1998; 37(45): 15918-24.

132. Silverman ES, Collins T. Pathways of Egr-1-mediated gene transcription in vascular biology. Am J Pathol., 1999; 154(3): 665-70.126i

133. Sotsios Y, Whittaker GC, Westwick J; Ward SG. The CXC chemokine stromal cell-derived factor activates a Gi-coupled phosphoinositide 3-kinase in T lymphocytes. J Immunol., 1999; 163(11): 5954-63.

134. Stamatovic SM, Keep RF, Mostarica-Stojkovic M, Andjelkovic AV. CCL2 regulates angiogenesis via activation of Ets-1 transcription factor. J Immunol., 2006; 177(4): 2651-61.

135. Steitz SA, Hasegawa K, Chiang SL, Cobb RR, Castro MA, Lobl TJ, Yamada M, Lazarides E, Cardarelli PM. Mapping of MCP-1 functional domains by peptide analysis and site-directed mutagenesis. FEBS Lett., 1998; 430(3): 158-64.

136. Stephens LR, Eguinoa A, Erdjument-Bromage H, Lui M, Cooke F, Coadwell J, Smrcka AS, Thelen M, Cadwallader K, Tempst P, Hawkins PT. The G beta gamma sensitivity of a PI3K is dependent upon a tightly associated adaptor, plOl. Cell, 1997; 89(1): 105-14.

137. Sugden PH, Clerk A. Regulation of mitogen-activated protein kinase cascades in the heart. Adv Enzyme Regul., 1998; 38: 87-98.

138. Sullivan SK, McGrath DA, Liao F, Boehme SA, Farber JM, Bacon KB: MIP-3 alpha induces human eosinophil migration and activation of the mitogen-activated protein kinases (p42/p44 MAPK). J Leukoc Biol., 1999; 66(4): 674-82.

139. Swirski FK, Libby P, Aikawa E, Alcaide P, Luscinskas FW, Weissleder R, Pittet MJ. Ly-6Chi monocytes dominate hypercholesterolemia-associated monocytosis and give rise to macrophages in atheromata. J Clin Invest., 2007; 117(1): 195-205.

140. Tacke F, Alvarez D, Kaplan TJ, Jakubzick C, Spanbroek R, Llodra J, Garin A, Liu J, Mack M, van Rooijen N, Lira SA, Habenicht AJ, Randolph GJ.

141. Monocyte subsets differentially employ CCR2, CCR5, and CX3CR1 to accumulate within atherosclerotic plaques. J Clin Invest., 2007; 117(1): 185-94.

142. Tanaka S, Green SR, Quehenberger O. Differential expression of the isoforms for the monocyte chemoattractant protein-1 receptor, CCR2, in monocytes. Biochem Biophys Res Commun., 2002; 290(l):73-80.

143. Taubman MB, Rollins BJ, Poon M, Marmur J, Green RS, BerkBC, Nadal-Ginard B. JE mRNA accumulates rapidly in aortic injury and in platelet-derived growth factor-stimulated vascular smooth muscle cells. Circ Res., 1992; 70(2): 31425.

144. Tedgui A, Ma Hat Z. Cytokines in atherosclerosis: pathogenic and regulatory pathways. Physiol Rev., 2006; 86(2): 515-81.

145. Thelen M, Peveri P, Kernen P, von Tscharner V, Walz A, Baggiolini M. Mechanism of neutrophil activation by NAF, a novel monocyte-derived peptide agonist. FASEB J., 1988; 2(11): 2702-6.

146. Thelen M; Uguccioni M', Bosiger J. PI 3-kinase-dependent and independent chemotaxis of human neutrophil leukocytes. Biochem Biophys Res Commun., 1995; 217(3): 1255-62.

147. Togni M, Windecker S, Cocchia R, Wenaweser P, Cook S, Billinger M, Meier B, Hess OM. Sirolimus-eluting stents associated with paradoxic coronary vasoconstriction. J Am Coll Cardiol., 2005; 46(2): 231-6.

148. Tsou CL, Peters W, Si Y, Slaymaker S, Aslanian AM, Weisberg SP, Mack M, Charo IF. Critical roles for CCR2 and MCP-3 in monocyte mobilization from bone marrow and recruitment to inflammatory sites. J Clin Invest., 2007; 117(4): 902-9.

149. Valente AJ, Rozek MM, Schwartz CJ, Graves DT. Characterization of monocyte chemotactic protein-1 binding to human monocytes. Biochem Biophys Res Commun., 1991; 176(1): 309-14.

150. Van Domburg RT, Saia F, Lemos PA. Coronary artery bypass surgery and percutaneous transluminal coronary angioplasty in patients with multivessel disease. Minerva Cardioangiol., 2003; 51(5): 599-608.

151. Vanhaesebroeck B, Waterfield MD. Signaling by distinct classes of phosphoinositide 3-kinases. Exp Cell Res., 1999; 253(1): 239-54.

152. Violaris AG, Melkert R, Herrman JP, Serruys PW. Role of angiographically identifiable thrombus on long-term luminal renarrowing after coronary angioplasty: a quantitative angiographic analysis. Circulation, 1996; 93(5): 889-97.

153. Virmani R, Burke A, Farb A. Coronary risk factors and plaque morphology in men with coronary disease who died suddenly. Eur Heart J., 1998; 19(5): 678-80.

154. Virmani R, Burke AP, Farb A. Plaque rupture and plaque erosion. Thromb Haemost., 1999; 82 Suppl 1: 1-3.

155. Virmani R, Kolodgie FD, Farb A, Burke AP. Pathology of Transmyocardial Angiogenesis and Arteriogenesis. Curr Interv Cardiol Rep., 1999; 1(3): 215-221.

156. Wain JH, Kirby JA, Ali S. Leucocyte chemotaxis: Examination of mitogen-activated protein kinase and phosphoinositide 3-kinase activation by Monocyte-Chemoattractant Proteins-1, -2, -3 and -4. Clin Exp Immunol., 2002; 127(3): 436-44.

157. Welt FG, Ed elm an ER, Simon" DI, Rogers G. Neutrophil, not macrophage, infiltration precedes neointimal thickening in balloon-injured arteries. Arterioscler Thromb Vase Biol., 2000; 20(12): 2553-8.

158. Yakubenko VP, Belevych N, Mishchuk D, Schurin A, Lam SC, Ugarova TP. The role of integrin alpha D beta2 (CDlld/CD18) in monocyte/macrophage migration. Exp Cell Res., 2008; 314(14): 2569-78.

159. Yamagami S, Tokuda Y, Ishii K, Tanaka H, Endo N. cDNA cloning and functional expression of a human monocyte chemoattractant protein 1 receptor. Biochem Biophys Res Commun., 1994; 202(2): 1156-62.

160. Yamasaki M, Arai H, Ashida N, Ishii K, Kita T. Monocyte chemoattractant protein 1 causes differential signalling mediated by proline-rich tyrosine kinase 2 in THP-1 cells. Biochem J., 2001; 355(3): 751-6.

161. Yen H, Zhang Y, Penfold S, RolIins B,T. MCP-1-mediatedchemotaxis requires activation of non-overlapping signal transduction pathways. JLeukoc Biol., 1997;-61(4): 529-32.

162. Yutani C., Imakita M., Ishibashi-Ueda H., Tsukamoto Y., Nishida N., Ikeda Y. Coronary atherosclerosis and interventions: pathological sequences and restenosis. Pathol Int, 1999; 49(4): 273-90.

163. Zalewski A., Shi Y. Vascular myofibroblasts. Lessons from coronary repair and remodeling. Arterioscler Thromb Vase Biol, 1997; 3: 417-22.

164. Zernecke A, Shagdarsuren E, Weber G. Chemokines in atherosclerosis: an update. Arterioscler Thromb Vase Biol., 2008; 28(11): 1897-908:

165. Zhou X, Nicoletti A, Elhage R, Hansson GK. Transfer of CD4(+) T cells aggravates atherosclerosis in immunodeficient apolipoprotein E knockout mice. Circulation, 2000; 102(24): 2919-22.