Молекулярные механизмы участия урокиназного рецептора в дифференцировке и выживаемости клеток нейробластомы мыши тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Рысенкова Карина Дмитриевна

• Рысенкова Карина Дмитриевна
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Рысенкова Карина Дмитриевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Система активатора плазминогена урокиназного типа

1.1.1. Урокиназа и ее функции: активация внеклеточного протеолиза, запуск внутриклеточной сигнализации и активация экспрессии генов

1.1.2. Строение и основные формы урокиназного рецептора

1.1.3. Лиганды урокиназного рецептора - урокиназа и витронектин

1.1.4. Интерактом урокиназного рецептора и функциональное значение этих взаимодействий

1.1.5. Ингибиторы активатора плазминогена

1.1.6. Физиологическое значение урокиназной системы в организме

1.1.7. Участие урокиназной системы в канцерогенезе

1.1.8.Участие uPAR в регенерации нервной ткани и нейритогенезе

1.2. Механизмы нейрональной дифференцировки при развитии нервной системы и подходы индукции нейрональной дифференцировки in vitro

1.2.1. Участие нейротрофных факторов роста в дифференцировке, пролиферации и выживаемости нейронов

1.2.2. Функции нейротрофинов в клетках нейробластомы

1.2.3. Функция EGF и EGFR в нервной системе

1.2.4. Механизмы роста аксонов и их ветвления

1.2.5. Основные классы навигационных молекул, опосредующие навигацию и рост нервов

1.2.6. Общепринятые белковые маркеры нейрональной дифференцировки

1.2.7. Индукция нейрональной дифференцировки клеток Neuro2a

1.3. Современные молекулярно-генетические стратегии манипуляции с

экспрессией генов в культурах клеток

2.1. Работа с животными и выделение спинальных ганглиев мыши

2.1.1. Трехмерная эксплантная культура спинальных ганглиев мыши в Матригеле

2.1.2. Иммунофлуоресцентное окрашивание эксплантной культуры спинальных ганглиев

2.2. Подавление, нокаут и гиперэкспрессия uPAR в клетках нейробластомы мыши (№шю2а)

2.2.1. Молекулярное клонирование uPAR-специфических направляющих РНК в вектор CRISPR/CAS9n

2.2.2. Создание плазмиды phCMV1-uPAR для гиперэкспрессии

2.2.3. Культивирование линейных клеток №шш2а и индукция их дифференцировки

2.2.4. Получение и анализ клеточных линий Neuro2a с различным уровнем содержания uPAR

2.2.5. Иммунофлуоресцентное окрашивание клеток Neuro2a

2.2.6. Анализ пролиферации клеток Neuro2a с различным уровнем экспрессии uPAR in vitro

2.2.7. Анализ нейритогенеза в клетках Neuro2a с различным уровнем экспрессии uPAR

2.2.8. Условия инкубации клеток Neuro2a при оценке внутриклеточной сигнализации

2.2.9. Электрофорез белков и иммуноблоттинг

2.2.10. Анализ деградации ДНК методом ДНК комет (DNA Comet assay)

2.3. Количественный анализ содержания мРНК методом ПЦР в реальном

времени

2.3.1. Подбор условий для проведения ПЦР в реальном времени

2.4. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Создание клеток Neuro2a c различным уровнем экспрессии uPAR

3.1.1. Создание плазмиды phCMV1-uPAR для гиперэкспрессии

3.1.2. Создание клеток с различным уровнем подавления экспрессии uPAR

3.1.3. Выключение экспрессии (нокаут) гена uPAR с использованием технологии CRISPR/Cas9n и селекция модифицированных клонов

3.1.4. Подбор условий для проведения полимеразной цепной реакции в реальном времени для оценки уровня экспрессии мРНК uPAR

3.2. Урокиназный рецептор регулирует направление роста аксонов

3.3. Оценка влияния активности uPAR на выживаемость и дифференцировку клеток Neuro2a

3.3.1. Активность uPAR важна для дифференцировки Neuro2a клеток

3.3.2. Стимуляция роста нейритов в клетках Neuro2a повышает мРНК uPAR, но не EGFR

3.3.3. Активность uPAR регулирует выживаемость клеток Neuro2a

3.3.4. Гиперэкспрессия uPAR увеличивает содержание рEGFR и активирует EGFR-зависимую внутриклеточную сигнализацию, регулирующую дифференцировку и выживаемость клеток Neuro2a

3.3.5. Снижение экспрессии uPAR ингибирует пролиферацию клеток Neuro2a

3.3.6. uPAR-дефицитные клетки Neuro2a имеют пониженную экспрессию

TrkC

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

- 5 -ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярные механизмы участия урокиназного рецептора в дифференцировке и выживаемости клеток нейробластомы мыши»

Актуальность

Актуальность проблемы обусловлена важностью понимания механизмов иннервации во взрослом организме и при морфогенезе органов и тканей. Поскольку для облегчения роста нервов и миграции клеток важен протеолиз белков внеклеточного матрикса, то повышение содержания компонентов урокиназной системы, возникающее при травме нерва в зоне повреждения, необходимо для его регенерации. При этом система активатора плазминогена урокиназного типа, которая состоит из сериновой протеазы урокиназы (uPA) и ее рецептора (uPAR), не только запускает каскад протеолиза белков внеклеточного матрикса, но и обладает рядом сигнальных эффектов, описанных в клетках, приводящих к их миграции, пролиферации и дифференцировке. Сигнальная функция uPA в клетках реализуется при взаимодействии со своим рецептором uPAR. По структуре uPAR является гликозилфосфатидилинозитол-^Р1-) заякоренным белком и обладает высокой латеральной подвижностью, вступая во взаимодействие с различными трансмембранными рецепторами - а5 и pi субъединицами интегринов, рецепторными тирозиновыми киназами - рецептором эпидермального фактора роста EGFR, PDGFR, семидоменными fMLP рецепторами. Таким образом, за счет своего интерактома uPAR обеспечивает проведение внутриклеточной сигнализации, опосредующей адгезию, миграцию и пролиферацию клеток.

Введение плазмиды, содержащей ген uPA ускоряет восстановление морфологии нерва и его проводимости. Такой эффект описан для классических нейротрофинов и позволяет предположить нейротрофическую функцию uPA за счет регуляции внутриклеточных процессов в нейронах [1]. На модели повреждения аксонов ЦНС было показано, что uPAR индуцирует активацию pi интегрина за счет взаимодействия с рецептором LRP1, что приводит к активации малой ГТФазы Raci, которая стимулирует регенерацию аксонов [2]. При этом миграция нейронов, и рост нейритов/нейритогенез имеют дозовую зависимость

от uPA: рост нейритов и миграция нейронов становятся тем выше, чем больше концентрация урокиназы в среде культивирования. Стимуляции роста нейритов в клетках нейробластомы на модели in vitro также приводит к секреции активаторов плазминогена на конусе роста нейритов [3].

Таким образом, описан ряд эффектов урокиназной системы в регенерации нервов, однако к настоящему времени неизвестны молекулярные механизмы участия урокиназы и ее рецептора в пролиферации и выживаемости нейронов, а также их дифференцировке и нейритогенезе.

Цель работы:

Определение молекулярных механизмов влияния рецептора урокиназы (uPAR) на процессы дифференцировки и выживаемости линейных клеток нейробластомы мыши Neuro2a с участием рецепторных тирозиновых киназ.

Задачи:

1. Создать клетки нейробластомы мыши Neuro2a с различным уровнем экспрессии uPAR с использованием технологии редактирования генома CRISPR/Cas9n и методов плазмидной трансфекции (кДНК uPAR, РНК-интерференция);

2. Определить влияние экспрессии и активности uPAR на выживаемость и дифференцировку клеток нейробластомы мыши Neuro2a;

3. Оценить влияние экспрессии и активности uPAR на активацию рецепторных тирозиновых киназ EGFR и TrkC и регуляцию внутриклеточной сигнализации с участием этих рецепторов.

Научная новизна

Используя модель эксплантной культуры спинального ганглия мыши (Dorsal Root Ganglia, DRG) в Матригеле, впервые показано, что блокирование uPAR усиливает ветвление отрастающих аксонов и нарушает траекторию их роста, что свидетельствует о навигационной роли uPAR в росте и регенерации нервов. На модели линейных клеток нейробластомы мыши Neuro2a блокирование uPAR увеличивало формирование новых нейритов и усиливало ветвление уже

сформированных отрастающих нейритов, сопровождаемое активацией внутриклеточной сигнализации с участием малого G-белка Ritl (ответственного за ветвление аксонов) и высокомолекулярной изоформы МАР2 белка (стабилизирует микротрубочки при ветвлении аксонов). Нарушения в росте и ветвлении нейритов в клетках Neuro2a нарушало дифференцировку этих клеток, и приводило к потере экспрессии нейронального ядерного маркера NeuN, активации киназ Akt (по участку S473) и р38, которая свидетельствовали о гибели клеток. При изучении молекулярных и клеточных механизмов эффектов uPAR было показано, что блокирование uPAR приводит к гибели Neuro2a за счет каспаза-зависимого апоптоза и деградации ДНК.

В настоящей работе впервые описан сигнальный механизм участия uPAR в регуляции пролиферации, дифференцировки/нейритогенеза и выживаемости клеток Neuro2a. Установлено влияние uPAR на активность и экспрессию рецепторных тирозиновых киназ EGFR и TrkC и их нисходящих сигнальных поредников: серин-трениониновой протеинкиназы Akt и митоген-активируемых протеинкиназ ERK1/2 и р38. При нокауте гена uPAR снижалась экспрессия полноразмерной изоформы TrkC, способной к проведению внутриклеточной сигнализации и активность ее сигнального посредника Akt (по участку Т308, важному для выживаемости нейронов). При гиперэкспрессии uPAR увеличивался уровень фосфорилирования EGFR и его сигнального посредника ERK1/2. Блокирование uPAR в Neuro2a приводило к быстрому снижению уровня pEGFR и pERK1/2.

Нокаут uPAR вызывал снижение выживаемости Neuro2a, о чем свидетельствовало значительное (в 3 раза) уменьшение экспрессии маркера пролиферации Ki-67, а также одновременная активация каспаза-зависимого апоптоза и деградация ДНК (определяли по повышению уровня активной каспазы-3 и появлению низкомолекулярного фрагмента PARP-1).

Теоретическая и практическая значимость

Полученные в работе данные могут быть использованы при разработке подходов для стимуляции роста аксонов при восстановлении иннервации после травмы нервов. Знание молекулярных механизмов нейритогенеза при участии uPAR может послужить основанием к разработке терапевтических подходов для восстановления иннервации при травмах различного генеза и нейродегенеративных заболеваниях, а также обеспечению адекватной иннервации при создании сложных тканеинженерных конструкций. Кроме того, полученные результаты могут быть использованы при создании терапевтических препаратов комплексного воздействия на uPAR и рецепторные тирозиновые киназы Trk и EGFR, опосредующие выживаемость, дифференцировку и пролиферацию нейробластомы.

Положения, выносимые на защиту:

1. uPAR регулирует направление роста аксонов и их ветвление: блокирование uPAR усиливает ветвление аксонов и нарушает траекторию их роста.

2. uPAR поддерживает выживаемость и дифференцировку линейных клеток Neuro2a. Нокаут uPAR ингибирует рост нейритов, подавляет пролиферацию и активирует каспаза-зависимый апоптоз клеток Neuro2a. Блокирование активности uPAR приводит к потере экспрессии нейронального маркера NeuN, индуцирует апоптоз и деградацию ДНК.

3. Гиперэкспрессия uPAR приводит к увеличению уровня рEGFR и рERK1/2 и стимулирует рост нейритов. Апоптоз Neuro2a, запускаемый блокированием uPAR, реализуется путем снижения уровня рEGFR, его нисходящего посредника рERK1/2 и активации проапоптотической внутриклеточной сигнализации с участием киназ pAkt (по участку S473) и р38.

4. Нокаут uPAR снижает экспрессию полноразмерной формы TrkC и активность его нисходящих сигнальных посредников киназ Akt (по участку Т308) и р38.

Личный вклад автора

Автор непосредственно участвовала в постановке и реализации задач, решаемых в рамках диссертационной работы. Результаты, изложенные в

диссертации, получены автором лично. Диссертант является первым автором трех публикаций, подготовленных по теме диссертации.

Степень достоверности

Приведенные в работе научные положения и выводы по полученным результатам основаны на достоверных данных. Статистическая обработка проводилась при помощи пакета прикладной программы Statistica (Statsoft, Inc. 1984-2011).

Методология и методы исследования

В настоящей работе использовали современные молекулярно-биологические, биохимические методы и подходы клеточной биологии. Модельными объектами исследования являлись линейная культура нейробластомы мыши (Neuro2a) и эксплантная культура спинального ганглия (Dorsal Root Ganglia, DRG) мыши в Матригеле. Для изучения функции uPAR в клетках Neuro2a были использованы два методических подхода: блокирование активности белка uPAR и изменение экспрессии гена uPAR.

Апробация, внедрение, публикации

Материалы диссертации были представлены на Международном конгрессе CRISPR-2018 (Россия, Новосибирск, 2018); III и IV Национальном Конгрессе по Регенеративной Медицине (Россия, Москва, 2017; 2019); VI Съезде физиологов с международным участием (Россия, Сочи, 2019).

Результаты диссертационной работы были внедрены в научно-исследовательскую и образовательную деятельность на факультете фундаментальной медицины ФГБОУ МГУ имени М.В. Ломоносова и в научно-исследовательскую деятельность лаборатории молекулярной эндокринологии ФГБУ «НМИЦ Кардиологии» Минздрава России.

По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ, в том числе 10 статей в научных рецензируемых изданиях, из них: 3 статьи в журналах, входящих в перечень ВАК, 7 статей в журналах, индексируемых в Scopus, Web of Science и 8 публикаций в сборниках материалов научных конференций.

Апробация была проведена на заседании кафедры биохимии и молекулярной медицины факультета фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова.

Структура и объем работы

Диссертационная работа изложена на 183 странице, состоит из введения, трех глав (обзор литературы, материалы и методы, результаты и их обсуждение), заключения и списка литературы. Список литературы включает 354 публикаций отечественных и иностранных авторов. Диссертационная работа иллюстрирована 3 таблицами и 37 рисунками.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Система активатора плазминогена урокиназного типа

Урокиназная система состоит из трех основных компонентов: активатора плазминогена урокиназного типа (uPA) - сериновой протеазы, секретируемой многими типами клеток [4], рецептора активатора плазминогена урокиназного типа (uPAR) - гликозилфосфатидилинозитол заякоренного белка и необратимых ингибиторов активатора плазминогена (PAI-1, PAI-2), принадлежащих к группе серпинов.

1.1.1. Урокиназа и ее функции: активация внеклеточного протеолиза, запуск внутриклеточной сигнализации и активация экспрессии генов

Урокиназа (uPA) является гликопротеином, который включает 411 аминокислотных остатков, и относится к классу сериновых протеаз (КФ 3.4.21). Клетки секретируют uPA в проферментной форме одноцепочечного белка, который после частичного протеолиза по пептидной связи между остатками K158-I159 превращается в зрелый двухцепочечный фермент, цепи которого

соединены при помощи дисульфидного мостика [5]. Активация урокиназы происходит под действием целого ряда ферментов среди которых плазмин, фактор свертываемости крови Х11а, каликреин плазмы, катепсин В, катепсин L, сериновая протеаза, ассоциированная с Т-клетками, фактор роста нервов-у и специфический антиген простаты [6-10].

Механизмы биологического действия урокиназы определяются ее химическим строением. Урокиназа включает три домена - ^концевой домен фактора роста, крингл домен и С-концевой протеолитический домен. Первый отвечает за взаимодействие с рецептором урокиназы (uPAR) и запуск внутриклеточной сигнализации, для крингл домена показаны специфические эффекты за счет связывания с белком-транспортером нуклеолином, который транспортирует иРА в ядро, где она регулирует эспрессию генов [11, 12]. А также за счет крингл домена реализуется иРА-зависимые эффекты на миграцию клеток [13]. Задача каталитического домена состоит в проведении протеолиза.

Впервые урокиназа была обнаружена в моче [14], за что и получила свое характерное название. Позже было установлено, что урокиназа является одним из фибринолитических ферментов и активирует плазминоген, который, превращаясь в плазмин, обеспечивает системный тромболизис. Плазмин в отличие от иРА является протеазой с широкой субстратной специфичностью и активен в отношении большого числа матриксных белков (ламинин, фибронектин, фибрин, гепаран сульфат протеогликан), а также может активировать ряд матриксных металлопротеиназ ММП-14, ММП-13, ММП-12, ММП-9, ММП-3, ММП-2 и ММП-1 [15-19]. Действие урокиназы в тканях также напрямую зависит от ее протеолитических свойств. Так, например, многие факторы роста недоступны для клеток, поскольку находятся в неактивной форме либо задепонированы в межклеточном матриксе. Урокиназа, плазмин и ММП способны высвобождать факторы роста, тем самым потенцируя их действие на клетки. Так происходит, например, в случае TGF-P1, VEGF и HGF [20-22]. В свою очередь различные

цитокины и факторы роста, такие как Т№-а, EGF и VEGF, могут индуцировать синтез и активацию иРА [23-25].

Образование тройного комплекса uPAR/uPA/PAI-1 индуцирует клатрин-зависимый эндоцитоз, лизосомальную деградацию иРА/РА1-1 и рециркуляцию иРАЯ на плазматическую мембрану с участием LRP-1 [26].

Степанова с соав. впервые показала нуклеолин-зависимую транслокацию одноцепочечной формы урокиназы в ядро, где она запускает экспрессию а-гладкомышечного актина (а^МА) [11], что приводит к превращению адвентициальных фибробластов в миофибробласты [27], и это вероятно определяет процесс отрицательного ремоделирования сосудистой стенки [28]. Кроме того, иРА стимулирует пролиферацию ГМК и раннее образование неоинтимы [29]. Позже теми же авторами было установлено, что одноцепочечная форма иРА способна индуцировать экспрессию рецептора VEGF1 (VEGFR1) и рецептора VEGF2 (VEGFR2) в эндотелиальных клетках, что является новым механизмом в регуляции проангиогенных эффектов VEGF при действии иРА [12].

Рис. 1. Активация и регуляция активатора плазминогена урокиназного типа. Активация одноцепочечной формы урокиназы (про-uPA) происходит путем ограниченного протеолиза с образованием активной двухцепочечной формы uPA. иРА производит активацию плазминогена, переводя его в плазмин, сериновую протеазу широкой субстратной специфичности. Про-иРА может производить и аутоактивацию за счет собственной протеолитической активности. Данная положительная обратная связь находится под контролем ингибиторов урокиназы - PAI-1 и PAI-2. иРА и плазмин активируют матричные металлопротеиназы (ММП), которые ремоделируют внеклеточный матрикс (ВКМ). Таким образом, регулируя клеточную миграцию, инвазию и пролиферацию. Второй уровень в регуляции каскада протеолиза контролируется эндогенными ингибиторами плазмина (а2-антиплазмин, а2-микроглобулин).

Однако помимо широко описанных эффектов, связанных с протеолитическим действием урокиназы, показаны и другие, которые реализуются при связывании урокиназы с рецептором с uPAR.

1.1.2. Строение и основные формы урокиназного рецептора

Открытие рецептора урокиназы uPAR в 1985 году привело к новой волне изучения механизмов внеклеточного протеолиза и деградации матрикса [30-32].

Рецептор uPAR/CD87 - гликопротеин, который заякорен в плазматической мембране через гликозилфосфатидилинозитольный ^Р1) якорь и включает три домена (Д1, Д2 и Д3) (рис.2). Белок не имеет трансмембранного домена, что выражается в высокой латеральной подвижности, способности концентрироваться на мембране в направлении миграции клетки и необходимости в ассоциации с трансмембранными белками для запуска внутриклеточной сигнализации (см. далее). Первичная структура иРАК человека содержит пять потенциальных сайтов Ы-гликозилирования [33]. Кажущаяся Мг мышиного белка иРАК находится в диапазоне значений от 45000-60000 в зависимости от степени гликозилирования. Проведение дегликозилирования мышиного иРАК с помощью фермента эндо-Р-Ы-ацетилглюкозаминидазы Н приводит к появлению полипептида с кажущейся Мг равной 30000, что соответствует значению Мг, полученному при расчете массы белковой последовательности исходя из кДНК мышиной формы иРАК [34].

Помимо мембранной формы, существует еще растворимая форма урокиназного рецептора ^иРАК), которая имеет три разновидности: suPAR (Д1-Д3), suPAR (Д2-Д3) и suPAR (Д1). Фосфолипаза С производит гидролиз связи в фосфатидилинозитольном якоре и рецептор перестает быть связан с мембраной. Кроме того, линкерная область между Д1 и Д2 чувствительна к протеолизу, который происходит под действием трипсина, химотрипсина, эластазы, а также непосредственно урокиназы и плазмина [35, 36]. Протеолиз иРАК может рассматриваться как механизм его инактивации, поскольку продукты расщепления (Д1 и Д2-Д3) не могут эффективно связать иРА. Однако, в форме Д2-Д3 (88-274) урокиназный рецептор приобретает способность регулировать миграцию клеток независимо от иРА [37].

сно оно

сно сно

Рис. 2. Схематическая структура урокиназного рецептора (адаптировано из [38] с изм.). Д1-Д3 - внеклеточные домены иРАК, обозначено количество дисульфидных связей, а также возможность гликозилирования каждого из доменов. Рецептор заякорен в мембране с помощью гликозилфосфатидилинозитольного якоря ^Р1), который посттрансляционно присоединяется к третьему домену рецептора.

1.1.3. Лиганды урокиназного рецептора - урокиназа и витронектин Участок связывания иРА расположен в Д1-домене, но для эффективного связывания необходим полноразмерный рецептор [39, 40]. Связывание иРА с рецептором является видоспецифичным: мышиная форма иРА не связывается с человеческой формой иРАК, а человеческая форма иРА не связывается с мышиной формой иРАК [34]. Также известно, что после связывания с иРАК протеолитическая активность иРА увеличивается в 50 раз [41]. ^ связывания иРАК с иРА и про-иРА соответствует диапазону значений от 0,1 до 1 нМ, но может различаться в зависимости от клеточного типа и условий эксперимента [42].

В результате проведенного кинетического анализа на клеточной линии моноцитов и937 было установлено, что при связывании иРА с иРАК скорость каталитичсекой активации плазминогена в плазмин и реципрокная активация про-иРА под действием плазмина повышалась [43, 44]. При этом значительно снижалась Кт иРА в отношении плазминогена, что отражает связывание субстрата на клеточной поверхности, где создается повышенная локальная концентрация реагирующих молекул в правильной ориентации. Однако

наблюдалось снижение kcat, что отражает наличие стерических затруднений при образовании тройного комплекса uPAR/uPA/плазминоген в силу большого размера последнего (840 а.а., 92 кДа). Урокиназный рецептор может связывать как одноцепочечную, так и двухцепочечную форму uPA, образовавшийся uPAR/uPA комплекс стабилен: t1/2 равно нескольким часам [41].

Помимо участия uPAR в протеолизе, он также участвует в адгезии клеток, напрямую взаимодействуя с белком внеклеточного матрикса витронектином (Kd<30 нМ) [45]. Витронектин - это мультифункциональный гликопротеин, присутствующий в крови, внеклеточном матриксе, в зоне воспаления и атеросклеротических бляшек. Регуляция функции витронектина зависит от действия различных протеинкиназ, среди которых цAMФ-зависимая протеинкиназа (PKA), протеин киназа С (PKC) а также протеинкиназа казеин киназы-2 (CK2) [46]. В частности, внеклеточная протеинкиназа CK2 регулирует uPA-опосредованную адгезию гладкомышечных клеток (ГМК) к витронектину. uPA индуцирует фосфорилирование витронектина за счет действия CK2. Причем в присутствии витронектина в ГМК CK2 образует кластеры, где uPAR солокализуется с а^3-интегринами [47].

Витронектин связывается с uPAR за счет взаимодействия своим N-концевым соматомедин В доменом. Важно отметить, что взаимодействие PAI-1 и витронектина также происходит с участием сомантомедин В-подобного домена витнонектина [48], так что PAI-1 и uPAR конкурируют за связывание с витронектином [49]. Показано, что для эффективного связывания витронектина необходима полноразмерная форма урокиназного рецептора [50]. Причем сайты связывания обоих лигандов урокиназного рецептора не перекрываются, поэтому может формироваться комплекс uPAR-uPA-витронектин [51]. И даже более того, связывание uPA c uPAR увеличивает аффинность uPAR к витронектину [50, 51].

1.1.4. Интерактом урокиназного рецептора и функциональное значение

этих взаимодействий

При связывании иРА с иРАК запускается каскад внутриклеточной сигнализации, управляющей различными процессами в клетке. В частности, взаимодействие иРА с иРАК регулирует адгезию, миграцию и пролиферацию многих типов клеток, включая клетки сосудов, иммунные клетки, фибробласты и опухолевые клетки [45, 52-54]. Также в ряде работ было показано значение иРАК в поддержании дифференцировки гладкомышечных клеток [55]. В опухолевых клетках иРАК может запускать эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) [56]. Было показано, что введение экзогенного TGFp индуцирует экспрессию эндогенных иРАК, TGFp и его рецептора в клетках меланомы, что активизирует в них ЭМП [56].

Поскольку урокиназный рецептор лишен трансмембранного домена, то для осуществления перечисленных функций он входит в состав надмолекулярных белковых комплексов на мембране клетки (рис. 3). Такие молекулярные ансамбли включают интегрины [58], рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) [52], рецептор тромбоцитарного фактора роста (PDGFR) [59], эндоцитируемый рецептор липопротеин-ассоциированного белка ^ЯР) [60], кавеолин [61]. Кроме того, в растворимой форме Д2-Д3 (88-274) иРАК также взаимодействует с рецептором FPRL-1, связанным с G-белком, который является гомологом рецептора хемотактического пептида fMet-Leu-Phe (fMLP) и запускает хемотактичекую миграцию нейтрофилов [62]. Кроме того, нельзя исключить возможность, что и другие молекулы, такие как ЕЫ00180 или белок связанный с рецептором липопротеина (LRP) могут тоже выступать как корецепторы иРАК[63].

ау-интарин

р1-интсгрин

ЭПДОШПОЗ

реоргашш цитоскела

МАРК. Яа<

р13

II Р13-К РЕЮРЯЬ

М-б-РЛОШ-Я

Яа5. \fT.K. Ггк", ХП.СК

мклтат

Адгезия,

пролиферация.

миграция

Раз, МЕК. Егк. МЬСК

Активация ТОР-р

Эпитслиалыю-

мсзснхимальныП

переход

Рис. 3. Основные сигнальные молекулы, входящие в интерактом урокиназного рецептора (адаптировано из [57] с изм.).

В действительности, эти корецепторы могут быть ответственны за снижение роста нейритов и миграцию нейронов в модели экплантной культуры верхнего двухолмия среднего мозга. Такие эффекты были описаны при введении урокиназы в концентрации 15 нг/мл, что может объяснено изменением аффиности uPAR к а5р1-интегринам [64], и приводит к взаимодействию uPAR с другим корецептором, который может активировать новые сигнальные каскады с участием малых G-белков Cdc42 и Яас [63]. Помимо интегриновых рецепторов и рецепторных тирозиновых киназ, адаптером для GPI-заякоренного uPAR может служить белок gp130, который управляет активацией JAK/STAT пути, играющий важную роль в миграции гладкомышечных клеток сосудов [65].

Урокиназный рецептор регулирует клеточную адгезию и миграцию клеток не только за счет прямого взаимодействия с белком ВКМ витронектином [66], но и взаимодействуя с интегринами [67]. Показано взаимодействие uPAR с р1-, амр2-

, ß3-интегринами [68, 69]. Также показано, что адгезия индуцирует экспрессию uPAR [70].

Интегрины - это семейство рецепторов клеточной адгезии. По структуре интегрины представляют собой трансмембранные гетеродимеры, состоящие из а и ß-субъединиц. В геноме млекопитающих выявлено 18 а и 8 ß подтипов субъединиц, комбинация которых приводит к формированию 24 видов действующих рецепторов на мембранах клеток [71]. Интергиновые рецепторы имеют тканеспецифическую экспрессию, так, например, интегрин aIIbß3 обнаружен только на поверхности тромбоцитов [72]. Димеры интегринов специфичны к определенным белкам внеклеточного матрикса, поэтому их обозначают как рецепторы коллагена, фибронектина, витронектина, ламинина. a1ß1, aIIbß3, a2ß1, a10ß1, а^гинтегрины являются рецепторами коллагена; a3ß1-, a6ß1-, a6ß4-, а7ß1-интегрины рецепторы ламинина; a5ß1, a8ß1, aIIbß3, avß-интегрины связываются с фибронектином [71]. Однако, проведенение нокаута по наиболее широко представленной субъединице ß1, не привело к значительным нарушениям, что объясняется взаимозаменяемыми функциями среди интегринов [71, 73].

Урокиназный рецептор взаимодействует с a3ß1-, a4ß1-, a6ß1-, a9ß1-, avß3-интегринами, и Mac-1 (CD11b/CD18; aMß2) [67, 68] в различных типах клеток, включая клетки опухоли, моноциты/макрофаги [58, 69, 74] . Также описан прямой контакт uPAR с а^-интегринами, который происходит с участием аминокислот 130-142 (D2A), 240-248 и 249 на поверхности uPAR [75]. Замена серина в 245 положении на аланин в uPAR нарушает его взаимодействие а^-интегринами [75]. Связывание с uPAR с а^-интегрином происходит в ß-пропеллерной области и усиливает адгезию клеток HEK293 к витронектину [76]. Многие из этих взаимодействий uPAR с интегринами стимулируют запуск внутриклеточной сигнализации с участием киназы SRC [77, 78]. SRC в свою очередь активирует киназу фокальных контактов, что приводит к изменениям в сборке матрикса, пролиферации и ингибирует взаимодействие с интегринами [78, 79].

Эпитопы взаимодействия uPAR с интегринами могут представлять принципиально новые мишени для ингибирования функции uPAR. Например, участок взаимодействия uPAR с интегринами представляет эпитоп с остатками, расположенными в Д1 и Д2 uPAR, причем блокирование участка в Д2 uPAR нарушает взаимодействие рецептора с витронектином и ингибирует миграцию клеток HEK293 [45]. Разобщение взаимодействия uPAR с интегринами блокирует миграцию и внутриклеточную сигнализацию в опухолевых клетках [80]. Причем речь идет о мутации в области с 240 по 248 аминокислотных остатка в Д3 рецептора урокиназы, которые критичны для взаимодействия с интергинами. В частности, было показано, что Ser-245 и His-249 необходимы для активации интергинов, и замена этих аминокислот на Ala приводило к невозможности активировать ERK сигнализацию и стимулировать рост опухоли in vivo [75]. а5р1-интегрин функционирует как корецептор комплекса uPA-uPAR, опосредуя непротеолитический ответ uPA на миграцию нейронов и рост нейритов в эксплантной культуре верхнего двухолмия среднего мозга, основного процессора зрительной информации у птиц [64].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Рысенкова Карина Дмитриевна, 2020 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Рубина К.А., д. Механизмы регуляции направленного роста нервов и сосудов компонентами фибринолитической системы и GPI-заякоренными навигационными рецепторами. / Рубина К.А., д. // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова, - 2018.- 104(9). -

2. Merino, P., Diaz A., Yepes M. Urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor (uPAR) promote neurorepair in the ischemic brain. / Merino, P., Diaz A., Yepes M. // Receptors Clin Investig, - 2017.- 4(2). -.

3. Krystosek, A., Seeds N. W. Plasminogen activator release at the neuronal growth cone. / Krystosek, A., Seeds N. W. // Science, - 1981.- 213(4515). - Р. 15321534.

4. Ткачук, В. А., Плеханова О. С. Роль мультидоменной структуры урокиназы в регуляции роста и ремоделирования сосудов. / Ткачук, В. А., Плеханова О. С. // Укр. бюхш. журн., - 2013.- 85(6). - Р. 18-45.

5. Gunzler, W. A. The primary structure of high molecular mass urokinase from human urine. The complete amino acid sequence of the A chain. / Gunzler, W. A. // Hoppe Seylers Z Physiol Chem, - 1982.- 363(10). - Р. 1155-1165.

6. Yoshida, E. Prostate-specific antigen activates single-chain urokinase-type plasminogen activator. / Yoshida, E. // Int J Cancer, - 1995.- 63(6). - Р. 863-865.

7. Hsu, D. W., Efird J. T., Hedley-Whyte E. T. Prognostic role of urokinase-type plasminogen activator in human gliomas. / Hsu, D. W., Efird J. T., Hedley-Whyte E. T. // Am J Pathol, - 1995.- 147(1). - Р. 114-123.

8. Brunner, G., Simon M. M., Kramer M. D. Activation of pro-urokinase by the human T cell-associated serine proteinase HuTSP-1. / Brunner, G., Simon M. M., Kramer M. D. // FEBS Lett, - 1990.- 260(1). - Р. 141-144.

9. Goretzki, L. Effective activation of the proenzyme form of the urokinase-type plasminogen activator (pro-uPA) by the cysteine protease cathepsin L. / Goretzki, L. // FEBS Lett, - 1992.- 297(1-2). - Р. 112-118.

10. Wolf, B. B. Nerve growth factor-gamma activates soluble and receptor-bound single chain urokinase-type plasminogen activator. / Wolf, B. B. // J Biol Chem, -1993.- 268(22). - P. 16327-16331.

11. Stepanova, V. Nuclear translocation of urokinase-type plasminogen activator. / Stepanova, V. // Blood, - 2008.- 112(1). - P. 100-110.

12. Stepanova, V. Urokinase-type Plasminogen Activator (uPA) Promotes Angiogenesis by Attenuating Proline-rich Homeodomain Protein (PRH) Transcription Factor Activity and De-repressing Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) Receptor Expression. / Stepanova, V. // J Biol Chem, - 2016.- 291(29). - P. 1502915045.

13. Mukhina, S. The chemotactic action of urokinase on smooth muscle cells is dependent on its kringle domain. Characterization of interactions and contribution to chemotaxis. / Mukhina, S. // J Biol Chem, - 2000.- 275(22). - P. 16450-16458.

14. Williams, J. R. The fibrinolytic activity of urine. / Williams, J. R. // Br J Exp Pathol, - 1951.- 32(6). - P. 530-537.

15. Santala, A. Activation of interstitial collagenase, MMP-1, by Staphylococcus aureus cells having surface-bound plasmin: a novel role of plasminogen receptors of bacteria. / Santala, A. // FEBS Lett, - 1999.- 461(3). - P. 153-156.

16. Monea, S. Plasmin activates pro-matrix metalloproteinase-2 with a membrane-type 1 matrix metalloproteinase-dependent mechanism. / Monea, S. // J Cell Physiol, - 2002.- 192(2). - P. 160-170.

17. Knauper, V. Cellular mechanisms for human procollagenase-3 (MMP-13) activation. Evidence that MT1-MMP (MMP-14) and gelatinase a (MMP-2) are able to generate active enzyme. / Knauper, V. // J Biol Chem, - 1996.- 271(29). - P. 1712417131.

18. Ramos-DeSimone, N. Activation of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) via a converging plasmin/stromelysin-1 cascade enhances tumor cell invasion. / Ramos-DeSimone, N. // J Biol Chem, - 1999.- 274(19). - P. 13066-13076.

19. Carmeliet, P. Urokinase-generated plasmin activates matrix metalloproteinases during aneurysm formation. / Carmeliet, P. // Nat Genet, - 1997.-17(4). - P. 439-444.

20. Breuss, J. M., Uhrin P. VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system. / Breuss, J. M., Uhrin P. // Cell Adh Migr, - 2012.- 6(6). - P. 535-615.

21. Sisson, T. H. Urokinase-type plasminogen activator increases hepatocyte growth factor activity required for skeletal muscle regeneration. / Sisson, T. H. // Blood, - 2009.- 114(24). - P. 5052-5061.

22. Horiguchi, M., Ota M., Rifkin D. B. Matrix control of transforming growth factor-beta function. / Horiguchi, M., Ota M., Rifkin D. B. // J Biochem, - 2012.-152(4). - P. 321-329.

23. Niedbala, M. J., Picarella M. S. Tumor necrosis factor induction of endothelial cell urokinase-type plasminogen activator mediated proteolysis of extracellular matrix and its antagonism by gamma-interferon. / Niedbala, M. J., Picarella M. S. // Blood, - 1992.- 79(3). - P. 678-687.

24. Prager, G. W. Vascular endothelial growth factor (VEGF) induces rapid prourokinase (pro-uPA) activation on the surface of endothelial cells. / Prager, G. W. // Blood, - 2004.- 103(3). - P. 955-962.

25. Mahabeleshwar, G. H., Das R., Kundu G. C. Tyrosine kinase, p56lck-induced cell motility, and urokinase-type plasminogen activator secretion involve activation of epidermal growth factor receptor/extracellular signal regulated kinase pathways. / Mahabeleshwar, G. H., Das R., Kundu G. C. // J Biol Chem, - 2004.- 279(11). - P. 9733-9742.

26. Herz, J., Clouthier D. E., Hammer R. E. LDL receptor-related protein internalizes and degrades uPA-PAI-1 complexes and is essential for embryo implantation. / Herz, J., Clouthier D. E., Hammer R. E. // Cell, - 1992.- 71(3). - P. 411-421.

27. Plekhanova, O. S. Urokinase plasminogen activator in injured adventitia increases the number of myofibroblasts and augments early proliferation. / Plekhanova, O. S. // J Vasc Res, - 2006.- 43(5). - P. 437-446.

28. Tkachuk, V. Regulation and role of urokinase plasminogen activator in vascular remodelling. / Tkachuk, V. // Clin Exp Pharmacol Physiol, - 1996.- 23(9). -P. 759-765.

29. Plekhanova, O. Urokinase plasminogen activator augments cell proliferation and neointima formation in injured arteries via proteolytic mechanisms. / Plekhanova, O. // Atherosclerosis, - 2001.- 159(2). - P. 297-306.

30. Vassalli, J. D., Baccino D., Belin D. A cellular binding site for the Mr 55,000 form of the human plasminogen activator, urokinase. / Vassalli, J. D., Baccino D., Belin D. // J Cell Biol, - 1985.- 100(1). - P. 86-92.

31. Stoppelli, M. P. Differentiation-enhanced binding of the amino-terminal fragment of human urokinase plasminogen activator to a specific receptor on U937 monocytes. / Stoppelli, M. P. // Proc Natl Acad Sci U S A, - 1985.- 82(15). - P. 49394943.

32. Bajpai, A., Baker J. B. Cryptic urokinase binding sites on human foreskin fibroblasts. / Bajpai, A., Baker J. B. // Biochem Biophys Res Commun, - 1985.-133(2). - P. 475-482.

33. Roldan, A. L. Cloning and expression of the receptor for human urokinase plasminogen activator, a central molecule in cell surface, plasmin dependent proteolysis. / Roldan, A. L. // EMBO J, - 1990.- 9(2). - P. 467-474.

34. Solberg, H. Identification and characterization of the murine cell surface receptor for the urokinase-type plasminogen activator. / Solberg, H. // Eur J Biochem, -1992.- 205(2). - P. 451-458.

35. Hoyer-Hansen, G. Urokinase plasminogen activator cleaves its cell surface receptor releasing the ligand-binding domain. / Hoyer-Hansen, G. // J Biol Chem, -1992.- 267(25). - P. 18224-18229.

36. Thuno, M., Macho B., Eugen-Olsen J. suPAR: the molecular crystal ball. / Thuno, M., Macho B., Eugen-Olsen J. // Dis Markers, - 2009.- 27(3). - P. 157-172.

37. Resnati, M. Proteolytic cleavage of the urokinase receptor substitutes for the agonist-induced chemotactic effect. / Resnati, M. // EMBO J, - 1996.- 15(7). - P. 1572-1582.

38. Behrendt, N. The urokinase receptor (uPAR) and the uPAR-associated protein (uPARAP/Endo180): membrane proteins engaged in matrix turnover during tissue remodeling. / Behrendt, N. // Biol Chem, - 2004.- 385(2). - P. 103-136.

39. Llinas, P. Crystal structure of the human urokinase plasminogen activator receptor bound to an antagonist peptide. / Llinas, P. // EMBO J, - 2005.- 24(9). - P. 1655-1663.

40. Barinka, C. Structural basis of interaction between urokinase-type plasminogen activator and its receptor. / Barinka, C. // J Mol Biol, - 2006.- 363(2). -P. 482-495.

41. Ellis, V., Behrendt N., Dano K. Plasminogen activation by receptor-bound urokinase. A kinetic study with both cell-associated and isolated receptor. / Ellis, V., Behrendt N., Dano K. // J Biol Chem, - 1991.- 266(19). - P. 12752-12758.

42. Nykjaer, A. Urokinase receptor. An activation antigen in human T lymphocytes. / Nykjaer, A. // J Immunol, - 1994.- 152(2). - P. 505-516.

43. Ellis, V., Scully M. F., Kakkar V. V. Plasminogen activation initiated by single-chain urokinase-type plasminogen activator. Potentiation by U937 monocytes. / Ellis, V., Scully M. F., Kakkar V. V. // J Biol Chem, - 1989.- 264(4). - P. 2185-2188.

44. Ronne, E. Cell-induced potentiation of the plasminogen activation system is abolished by a monoclonal antibody that recognizes the NH2-terminal domain of the urokinase receptor. / Ronne, E. // FEBS Lett, - 1991.- 288(1-2). - P. 233-236.

45. Madsen, C. D. uPAR-induced cell adhesion and migration: vitronectin provides the key. / Madsen, C. D. // J Cell Biol, - 2007.- 177(5). - P. 927-939.

46. Korc-Grodzicki, B. An enzymatic assay for vitronectin based on its selective phosphorylation by protein kinase A. / Korc-Grodzicki, B. // Anal Biochem, - 1990.-188(2). - P. 288-294.

47. Stepanova, V. Urokinase-dependent human vascular smooth muscle cell adhesion requires selective vitronectin phosphorylation by ectoprotein kinase CK2. / Stepanova, V. // J Biol Chem, - 2002.- 277(12). - P. 10265-10272.

48. Seiffert, D., Loskutoff D. J. Evidence that type 1 plasminogen activator inhibitor binds to the somatomedin B domain of vitronectin. / Seiffert, D., Loskutoff D. J. // J Biol Chem, - 1991.- 266(5). - P. 2824-2830.

49. Deng, G. Is plasminogen activator inhibitor-1 the molecular switch that governs urokinase receptor-mediated cell adhesion and release? / Deng, G. // J Cell Biol, - 1996.- 134(6). - P. 1563-1571.

50. Hoyer-Hansen, G. The intact urokinase receptor is required for efficient vitronectin binding: receptor cleavage prevents ligand interaction. / Hoyer-Hansen, G. // FEBS Lett, - 1997.- 420(1). - P. 79-85.

51. Wei, Y. Identification of the urokinase receptor as an adhesion receptor for vitronectin. / Wei, Y. // J Biol Chem, - 1994.- 269(51). - P. 32380-32388.

52. Jo, M. Dynamic assembly of the urokinase-type plasminogen activator signaling receptor complex determines the mitogenic activity of urokinase-type plasminogen activator. / Jo, M. // J Biol Chem, - 2005.- 280(17). - P. 17449-17457.

53. Ossowski, L., Aguirre-Ghiso J. A. Urokinase receptor and integrin partnership: coordination of signaling for cell adhesion, migration and growth. / Ossowski, L., Aguirre-Ghiso J. A. // Curr Opin Cell Biol, - 2000.- 12(5). - P. 613-620.

54. Sandberg, T., Ehinger A., Casslen B. Paracrine stimulation of capillary endothelial cell migration by endometrial tissue involves epidermal growth factor and is mediated via up-regulation of the urokinase plasminogen activator receptor. / Sandberg, T., Ehinger A., Casslen B. // J Clin Endocrinol Metab, - 2001.- 86(4). - P. 1724-1730.

55. Kiyan, J. Urokinase-receptor-mediated phenotypic changes in vascular smooth muscle cells require the involvement of membrane rafts. / Kiyan, J. // Biochem J, - 2009.- 423(3). - P. 343-351.

56. Laurenzana, A. Inhibition of uPAR-TGFbeta crosstalk blocks MSC-dependent EMT in melanoma cells. / Laurenzana, A. // J Mol Med (Berl), - 2015.-93(7). - P. 783-794.

57. Dergilev, K. V. Multifaced Roles of the Urokinase System in the Regulation of Stem Cell Niches. / Dergilev, K. V. // Acta Naturae, - 2018.- 10(4). - P. 19-32.

58. Kugler, M. C., Wei Y., Chapman H. A. Urokinase receptor and integrin interactions. / Kugler, M. C., Wei Y., Chapman H. A. // Curr Pharm Des, - 2003.-9(19). - P. 1565-1574.

59. Kiyan, J. Urokinase-induced signaling in human vascular smooth muscle cells is mediated by PDGFR-beta. / Kiyan, J. // EMBO J, - 2005.- 24(10). - P. 1787-1797.

60. Webb, D. J., Nguyen D. H., Gonias S. L. Extracellular signal-regulated kinase functions in the urokinase receptor-dependent pathway by which neutralization of low density lipoprotein receptor-related protein promotes fibrosarcoma cell migration and matrigel invasion. / Webb, D. J., Nguyen D. H., Gonias S. L. // J Cell Sci, - 2000.- 113 ( Pt 1). - P. 123-134.

61. Stahl, A., Mueller B. M. The urokinase-type plasminogen activator receptor, a GPI-linked protein, is localized in caveolae. / Stahl, A., Mueller B. M. // J Cell Biol, -1995.- 129(2). - P. 335-344.

62. Furlan, F. The soluble D2D3(88-274) fragment of the urokinase receptor inhibits monocyte chemotaxis and integrin-dependent cell adhesion. / Furlan, F. // J Cell Sci, - 2004.- 117(Pt 14). - P. 2909-2916.

63. Sturge, J. GPI-anchored uPAR requires Endo180 for rapid directional sensing during chemotaxis. / Sturge, J. // J Cell Biol, - 2003.- 162(5). - P. 789-794.

64. Lino, N. uPA-uPAR molecular complex is involved in cell signaling during neuronal migration and neuritogenesis. / Lino, N. // Dev Dyn, - 2014.- 243(5). - P. 676-689.

65. Dumler, I. The Jak/Stat pathway and urokinase receptor signaling in human aortic vascular smooth muscle cells. / Dumler, I. // J Biol Chem, - 1998.- 273(1). - P. 315-321.

66. Sidenius, N., Blasi F. Domain 1 of the urokinase receptor (uPAR) is required for uPAR-mediated cell binding to vitronectin. / Sidenius, N., Blasi F. // FEBS Lett, -2000.- 470(1). - P. 40-46.

67. Wei, Y. Regulation of integrin function by the urokinase receptor. / Wei, Y. // Science, - 1996.- 273(5281). - P. 1551-1555.

68. Xue, W. Urokinase-type plasminogen activator receptors associate with beta1 and beta3 integrins of fibrosarcoma cells: dependence on extracellular matrix components. / Xue, W. // Cancer Res, - 1997.- 57(9). - P. 1682-1689.

69. Pluskota, E., Soloviev D. A., Plow E. F. Convergence of the adhesive and fibrinolytic systems: recognition of urokinase by integrin alpha Mbeta 2 as well as by the urokinase receptor regulates cell adhesion and migration. / Pluskota, E., Soloviev D. A., Plow E. F. // Blood, - 2003.- 101(4). - P. 1582-1590.

70. Mahoney, T. S. Cell adhesion regulates gene expression at translational checkpoints in human myeloid leukocytes. / Mahoney, T. S. // Proc Natl Acad Sci U S A, - 2001.- 98(18). - P. 10284-10289.

71. Barczyk, M., Carracedo S., Gullberg D. Integrins. / Barczyk, M., Carracedo S., Gullberg D. // Cell Tissue Res, - 2010.- 339(1). - P. 269-280.

72. Bennett, J. S. Structure and function of the platelet integrin alphaIIbbeta3. / Bennett, J. S. // J Clin Invest, - 2005.- 115(12). - P. 3363-3369.

73. Solowska, J. Cytoplasmic and transmembrane domains of integrin beta 1 and beta 3 subunits are functionally interchangeable. / Solowska, J. // J Cell Biol, - 1991.-114(5). - P. 1079-1088.

74. Wei, Y. Urokinase receptors are required for alpha 5 beta 1 integrin-mediated signaling in tumor cells. / Wei, Y. // J Biol Chem, - 2007.- 282(6). - P. 3929-3939.

75. Chaurasia, P. A region in urokinase plasminogen receptor domain III controlling a functional association with alpha5beta1 integrin and tumor growth. / Chaurasia, P. // J Biol Chem, - 2006.- 281(21). - P. 14852-14863.

76. Wei, Y. Urokinase receptors promote beta1 integrin function through interactions with integrin alpha3beta1. / Wei, Y. // Mol Biol Cell, - 2001.- 12(10). - P. 2975-2986.

77. Degryse, B. Src-dependence and pertussis-toxin sensitivity of urokinase receptor-dependent chemotaxis and cytoskeleton reorganization in rat smooth muscle cells. / Degryse, B. // Blood, - 1999.- 94(2). - P. 649-662.

78. Monaghan-Benson, E., McKeown-Longo P. J. Urokinase-type plasminogen activator receptor regulates a novel pathway of fibronectin matrix assembly requiring Src-dependent transactivation of epidermal growth factor receptor. / Monaghan-Benson, E., McKeown-Longo P. J. // J Biol Chem, - 2006.- 281(14). - P. 9450-9459.

79. Aguirre Ghiso, J. A. Inhibition of FAK signaling activated by urokinase receptor induces dormancy in human carcinoma cells in vivo. / Aguirre Ghiso, J. A. // Oncogene, - 2002.- 21(16). - P. 2513-2524.

80. Duriseti, S. Antagonistic anti-urokinase plasminogen activator receptor (uPAR) antibodies significantly inhibit uPAR-mediated cellular signaling and migration. / Duriseti, S. // J Biol Chem, - 2010.- 285(35). - P. 26878-26888.

81. Fuller, S. J., Sivarajah K., Sugden P. H. ErbB receptors, their ligands, and the consequences of their activation and inhibition in the myocardium. / Fuller, S. J., Sivarajah K., Sugden P. H. // J Mol Cell Cardiol, - 2008.- 44(5). - P. 831-854.

82. Robinson, D. R., Wu Y. M., Lin S. F. The protein tyrosine kinase family of the human genome. / Robinson, D. R., Wu Y. M., Lin S. F. // Oncogene, - 2000.-19(49). - P. 5548-5557.

83. Liu, D. EGFR is a transducer of the urokinase receptor initiated signal that is required for in vivo growth of a human carcinoma. / Liu, D. // Cancer Cell, - 2002.-1(5). - P. 445-457.

84. Gallicchio, M. A. Urokinase type plasminogen activator receptor is involved in insulin-like growth factor-induced migration of rhabdomyosarcoma cells in vitro. / Gallicchio, M. A. // J Cell Physiol, - 2003.- 197(1). - P. 131-138.

85. Bauer, T. W. Insulinlike growth factor-I-mediated migration and invasion of human colon carcinoma cells requires activation of c-Met and urokinase plasminogen activator receptor. / Bauer, T. W. // Ann Surg, - 2005.- 241(5). - P. 748-756; discussion 756-748.

86. Bauer, T. W. Targeting of urokinase plasminogen activator receptor in human pancreatic carcinoma cells inhibits c-Met- and insulin-like growth factor-I receptor-mediated migration and invasion and orthotopic tumor growth in mice. / Bauer, T. W. // Cancer Res, - 2005.- 65(17). - P. 7775-7781.

87. Guerrero, J. EGF receptor transactivation by urokinase receptor stimulus through a mechanism involving Src and matrix metalloproteinases. / Guerrero, J. // Exp Cell Res, - 2004.- 292(1). - P. 201-208.

88. Wang, X. Q., Sun P., Paller A. S. Gangliosides inhibit urokinase-type plasminogen activator (uPA)-dependent squamous carcinoma cell migration by preventing uPA receptor/alphabeta integrin/epidermal growth factor receptor interactions. / Wang, X. Q., Sun P., Paller A. S. // J Invest Dermatol, - 2005.- 124(4). -P. 839-848.

89. Grimaldi, G. Modulation of urokinase plasminogen activator gene expression during the transition from quiescent to proliferative state in normal mouse cells. / Grimaldi, G. // EMBO J, - 1986.- 5(5). - P. 855-861.

90. Boyd, D. Examination of the effects of epidermal growth factor on the production of urokinase and the expression of the plasminogen activator receptor in a human colon cancer cell line. / Boyd, D. // Cancer Res, - 1989.- 49(9). - P. 24272432.

91. Amos, S. Epidermal growth factor receptor-mediated regulation of urokinase plasminogen activator expression and glioblastoma invasion via C-SRC/MAPK/AP-1

signaling pathways. / Amos, S. // J Neuropathol Exp Neurol, - 2010.- 69(6). - P. 582592.

92. Baek, M. K. EGF stimulates uPAR expression and cell invasiveness through ERK, AP-1, and NF-kappaB signaling in human gastric carcinoma cells. / Baek, M. K. // Oncol Rep, - 2008.- 20(6). - P. 1569-1575.

93. Smith, P. C. Epidermal growth factor stimulates urokinase-type plasminogen activator expression in human gingival fibroblasts. Possible modulation by genistein and curcumin. / Smith, P. C. // J Periodontal Res, - 2004.- 39(6). - P. 380-387.

94. Nguyen, D. H. Myosin light chain kinase functions downstream of Ras/ERK to promote migration of urokinase-type plasminogen activator-stimulated cells in an integrin-selective manner. / Nguyen, D. H. // J Cell Biol, - 1999.- 146(1). - P. 149164.

95. Chandrasekar, N. Downregulation of uPA inhibits migration and PI3k/Akt signaling in glioblastoma cells. / Chandrasekar, N. // Oncogene, - 2003.- 22(3). - P. 392-400.

96. Alfano, D., Iaccarino I., Stoppelli M. P. Urokinase signaling through its receptor protects against anoikis by increasing BCL-xL expression levels. / Alfano, D., Iaccarino I., Stoppelli M. P. // J Biol Chem, - 2006.- 281(26). - P. 17758-17767.

97. Kjoller, L., Hall A. Rac mediates cytoskeletal rearrangements and increased cell motility induced by urokinase-type plasminogen activator receptor binding to vitronectin. / Kjoller, L., Hall A. // J Cell Biol, - 2001.- 152(6). - P. 1145-1157.

98. Ma, Z. Regulation of Rac1 activation by the low density lipoprotein receptor-related protein. / Ma, Z. // J Cell Biol, - 2002.- 159(6). - P. 1061-1070.

99. Blasi, F., Carmeliet P. uPAR: a versatile signalling orchestrator. / Blasi, F., Carmeliet P. // Nat Rev Mol Cell Biol, - 2002.- 3(12). - P. 932-943.

100. Jo, M. Soluble urokinase-type plasminogen activator receptor inhibits cancer cell growth and invasion by direct urokinase-independent effects on cell signaling. / Jo, M. // J Biol Chem, - 2003.- 278(47). - P. 46692-46698.

101. Jo, M. Urokinase receptor primes cells to proliferate in response to epidermal growth factor. / Jo, M. // Oncogene, - 2007.- 26(18). - P. 2585-2594.

102. Andreasen, P. A. Plasminogen activator inhibitors: hormonally regulated serpins. / Andreasen, P. A. // Mol Cell Endocrinol, - 1990.- 68(1). - P. 1-19.

103. Thorsen, S. Kinetics of inhibition of tissue-type and urokinase-type plasminogen activator by plasminogen-activator inhibitor type 1 and type 2. / Thorsen, S. // Eur J Biochem, - 1988.- 175(1). - P. 33-39.

104. Dickinson, J. L. Plasminogen activator inhibitor type 2 inhibits tumor necrosis factor alpha-induced apoptosis. Evidence for an alternate biological function. / Dickinson, J. L. // J Biol Chem, - 1995.- 270(46). - P. 27894-27904.

105. Antalis, T. M. The serine proteinase inhibitor (serpin) plasminogen activation inhibitor type 2 protects against viral cytopathic effects by constitutive interferon alpha/beta priming. / Antalis, T. M. // J Exp Med, - 1998.- 187(11). - P. 1799-1811.

106. Stefansson, S., Lawrence D. A. The serpin PAI-1 inhibits cell migration by blocking integrin alpha V beta 3 binding to vitronectin. / Stefansson, S., Lawrence D. A. // Nature, - 1996.- 383(6599). - P. 441-443.

107. Conese, M. alpha-2 Macroglobulin receptor/Ldl receptor-related protein(Lrp)-dependent internalization of the urokinase receptor. / Conese, M. // J Cell Biol, - 1995.- 131(6 Pt 1). - P. 1609-1622.

108. Czekay, R. P. Direct binding of occupied urokinase receptor (uPAR) to LDL receptor-related protein is required for endocytosis of uPAR and regulation of cell surface urokinase activity. / Czekay, R. P. // Mol Biol Cell, - 2001.- 12(5). - P. 14671479.

109. Croucher, D. R. A structural basis for differential cell signalling by PAI-1 and PAI-2 in breast cancer cells. / Croucher, D. R. // Biochem J, - 2007.- 408(2). - P. 203-210.

110. Chazaud, B. Promigratory effect of plasminogen activator inhibitor-1 on invasive breast cancer cell populations. / Chazaud, B. // Am J Pathol, - 2002.- 160(1). - P. 237-246.

111. Smith, H. W., Marshall C. J. Regulation of cell signalling by uPAR. / Smith, H. W., Marshall C. J. // Nat Rev Mol Cell Biol, - 2010.- 11(1). - P. 23-36.

112. Behrendt, N. A urokinase receptor-associated protein with specific collagen binding properties. / Behrendt, N. // J Biol Chem, - 2000.- 275(3). - P. 1993-2002.

113. Wei, Y. A role for caveolin and the urokinase receptor in integrin-mediated adhesion and signaling. / Wei, Y. // J Cell Biol, - 1999.- 144(6). - P. 1285-1294.

114. Zhu, J. Y., Pang Z. J., Yu Y. H. Regulation of trophoblast invasion: the role of matrix metalloproteinases. / Zhu, J. Y., Pang Z. J., Yu Y. H. // Rev Obstet Gynecol, -2012.- 5(3-4). - P. e137-143.

115. Beers, W. H., Strickland S., Reich E. Ovarian plasminogen activator: relationship to ovulation and hormonal regulation. / Beers, W. H., Strickland S., Reich E. // Cell, - 1975.- 6(3). - P. 387-394.

116. Strickland, S., Reich E., Sherman M. I. Plasminogen activator in early embryogenesis: enzyme production by trophoblast and parietal endoderm. / Strickland, S., Reich E., Sherman M. I. // Cell, - 1976.- 9(2). - P. 231-240.

117. Rifkin, D. B. Proteases, angiogenesis, and invasion. / Rifkin, D. B. // Symp Fundam Cancer Res, - 1983.- 36. - P. 187-200.

118. Connolly, B. M. Selective abrogation of the uPA-uPAR interaction in vivo reveals a novel role in suppression of fibrin-associated inflammation. / Connolly, B. M. // Blood, - 2010.- 116(9). - P. 1593-1603.

119. Carmeliet, P. Physiological consequences of loss of plasminogen activator gene function in mice. / Carmeliet, P. // Nature, - 1994.- 368(6470). - P. 419-424.

120. Bugge, T. H. The receptor for urokinase-type plasminogen activator is not essential for mouse development or fertility. / Bugge, T. H. // J Biol Chem, - 1995.-270(28). - P. 16886-16894.

121. Menshikov, M. Urokinase plasminogen activator stimulates vascular smooth muscle cell proliferation via redox-dependent pathways. / Menshikov, M. // Arterioscler Thromb Vasc Biol, - 2006.- 26(4). - Р. 801-807.

122. Traktuev, D. O. Urokinase gene transfer augments angiogenesis in ischemic skeletal and myocardial muscle. / Traktuev, D. O. // Mol Ther, - 2007.- 15(11). - Р. 1939-1946.

123. Zhang, J. Activation of urokinase plasminogen activator and its receptor axis is essential for macrophage infiltration in a prostate cancer mouse model. / Zhang, J. // Neoplasia, - 2011.- 13(1). - Р. 23-30.

124. Xia, W. Expression of urokinase-type plasminogen activator and its receptor is up-regulated during tendon healing. / Xia, W. // J Orthop Res, - 2003.- 21(5). - Р. 819-825.

125. Zhou, H. Q. [Detection of plasma urokinase-type plasminogen activator and its receptor in acute or chronic hepatitis B patients and its clinical significance.]. / Zhou, H. Q. // Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi, - 2006.- 20(3). - Р. 238-240.

126. Wysoczynski, M. Incorporation of CXCR4 into membrane lipid rafts primes homing-related responses of hematopoietic stem/progenitor cells to an SDF-1 gradient. / Wysoczynski, M. // Blood, - 2005.- 105(1). - Р. 40-48.

127. Selleri, C. Involvement of the urokinase-type plasminogen activator receptor in hematopoietic stem cell mobilization. / Selleri, C. // Blood, - 2005.- 105(5). - Р. 2198-2205.

128. Andolfo, A. Metalloproteases cleave the urokinase-type plasminogen activator receptor in the D1-D2 linker region and expose epitopes not present in the intact soluble receptor. / Andolfo, A. // Thromb Haemost, - 2002.- 88(2). - Р. 298306.

129. Белоглазова И.Б., З. Е. С., Цоколаева З.И., Стафеев Ю.С., Дергилев К.В., Ратнер Е.И., Шестакова М.В., Сухарева О.Ю., Парфенова Е.В.,Меньшиков М.Ю. Регуляторное воздействие урокиназы на миграцию, пролиферацию

мезенхимных стромальных клеток и секрецию ими матриксных металлопротеиназ. / Белоглазова И.Б., З. Е. С., Цоколаева З.И., Стафеев Ю.С., Дергилев К.В., Ратнер Е.И., Шестакова М.В., Сухарева О.Ю., Парфенова Е.В.,Меньшиков М.Ю. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, -2016.- 161(6). - Р. 728-732.

130. Gondi, C. S. Down-regulation of uPAR and uPA activates caspase-mediated apoptosis and inhibits the PI3K/AKT pathway. / Gondi, C. S. // Int J Oncol, - 2007.-31(1). - Р. 19-27.

131. Kanno, Y. Urokinase-type plasminogen activator receptor is associated with the development of adipose tissue. / Kanno, Y. // Thromb Haemost, - 2010.- 104(6). -Р. 1124-1132.

132. Kalbasi Anaraki, P. Urokinase receptor mediates osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells and vascular calcification via the complement C5a receptor. / Kalbasi Anaraki, P. // Stem Cells Dev, - 2014.- 23(4). - Р. 352-362.

133. Lakka, S. S. Specific interference of urokinase-type plasminogen activator receptor and matrix metalloproteinase-9 gene expression induced by double-stranded RNA results in decreased invasion, tumor growth, and angiogenesis in gliomas. / Lakka, S. S. // J Biol Chem, - 2005.- 280(23). - Р. 21882-21892.

134. Okusa, Y. Urokinase type plasminogen activator and its receptor regulate the invasive potential of gastric cancer cell lines. / Okusa, Y. // Int J Oncol, - 2000.-17(5). - Р. 1001-1015. https://doi.org/1010.3892/ijo.1017.1005.1001.

135. Montuori, N. Urokinase type plasminogen activator receptor (uPAR) as a new therapeutic target in cancer. / Montuori, N. // Transl Med UniSa, - 2016.- 15. - Р. 15-21. http://www.ncbi.nlm.nih. gov/pubmed/27896223.

136. Margheri, F. The receptor for urokinase-plasminogen activator (uPAR) controls plasticity of cancer cell movement in mesenchymal and amoeboid migration style. / Margheri, F. // Oncotarget, - 2014.- 5(6). - Р. 1538-1553.

137. Rubina, K. A. Increased expression of uPA, uPAR, and PAI-1 in psoriatic skin and in basal cell carcinomas. / Rubina, K. A. // Arch Dermatol Res, - 2017.-309(6). - Р. 433-442.

138. Li, P. Role of urokinase plasminogen activator and its receptor in metastasis and invasion of neuroblastoma. / Li, P. // J Pediatr Surg, - 2004.- 39(10). - Р. 15121519.

139. Mohan, P. M. Adenovirus-mediated delivery of antisense gene to urokinase-type plasminogen activator receptor suppresses glioma invasion and tumor growth. / Mohan, P. M. // Cancer Res, - 1999.- 59(14). - Р. 3369-3373.

140. Raghu, H. Specific knockdown of uPA/uPAR attenuates invasion in glioblastoma cells and xenografts by inhibition of cleavage and trafficking of Notch -1 receptor. / Raghu, H. // Mol Cancer, - 2011.- 10. - Р. 130.

141. Raghu, H. uPA and uPAR shRNA inhibit angiogenesis via enhanced secretion of SVEGFR1 independent of GM-CSF but dependent on TIMP-1 in endothelial and glioblastoma cells. / Raghu, H. // Mol Oncol, - 2012.- 6(1). - Р. 33-47.

142. Gondi, C. S. Downregulation of uPA, uPAR and MMP-9 using small, interfering, hairpin RNA (siRNA) inhibits glioma cell invasion, angiogenesis and tumor growth. / Gondi, C. S. // Neuron Glia Biol, - 2004.- 1(2). - Р. 165-176.

143. Rifkin, D. B. Growth factor control of extracellular proteolysis. / Rifkin, D. B. // Cell Differ Dev, - 1990.- 32(3). - Р. 313-318.

144. Stavropoulou, A. uPA, uPAR and TGFbeta(1) expression during early and late post myocardial infarction period in rat myocardium. / Stavropoulou, A. // In Vivo,

- 2010.- 24(5). - Р. 647-652.

145. Aguirre-Ghiso, J. A. ERK(MAPK) activity as a determinant of tumor growth and dormancy; regulation by p38(SAPK). / Aguirre-Ghiso, J. A. // Cancer Res,

- 2003.- 63(7). - Р. 1684-1695.

146. Jo, M. Cell signaling by urokinase-type plasminogen activator receptor induces stem cell-like properties in breast cancer cells. / Jo, M. // Cancer Res, - 2010.-70(21). - Р. 8948-8958.

147. Ciambrone, G. J., McKeown-Longo P. J. Plasminogen activator inhibitor type I stabilizes vitronectin-dependent adhesions in HT-1080 cells. / Ciambrone, G. J., McKeown-Longo P. J. // J Cell Biol, - 1990.- 111(5 Pt 1). - P. 2183-2195.

148. Previtali, S. C. The extracellular matrix affects axonal regeneration in peripheral neuropathies. / Previtali, S. C. // Neurology, - 2008.- 71(5). - P. 322-331.

149. Siconolfi, L. B., Seeds N. W. Induction of the plasminogen activator system accompanies peripheral nerve regeneration after sciatic nerve crush. / Siconolfi, L. B., Seeds N. W. // J Neurosci, - 2001.- 21(12). - P. 4336-4347.

150. Rivellini, C. Urokinase plasminogen receptor and the fibrinolytic complex play a role in nerve repair after nerve crush in mice, and in human neuropathies. / Rivellini, C. // PLoS One, - 2012.- 7(2). - P. e32059.

151. Karagyaur, M. Non-viral transfer of BDNF and uPA stimulates peripheral nerve regeneration. / Karagyaur, M. // Biomed Pharmacother, - 2015.- 74. - P. 63-70.

152. Ndode-Ekane, X. E., Pitkanen A. Urokinase-type plasminogen activator receptor modulates epileptogenesis in mouse model of temporal lobe epilepsy. / Ndode-Ekane, X. E., Pitkanen A. // Mol Neurobiol, - 2013.- 47(3). - P. 914-937.

153. Eagleson, K. L. The autism risk genes MET and PLAUR differentially impact cortical development. / Eagleson, K. L. // Autism Res, - 2011.- 4(1). - P. 6883.

154. Lahtinen, L. Expression of urokinase-type plasminogen activator receptor is increased during epileptogenesis in the rat hippocampus. / Lahtinen, L. // Neuroscience, - 2009.- 163(1). - P. 316-328.

155. Farias-Eisner, R. The urokinase plasminogen activator receptor (UPAR) is preferentially induced by nerve growth factor in PC12 pheochromocytoma cells and is required for NGF-driven differentiation. / Farias-Eisner, R. // J Neurosci, - 2000.-20(1). - P. 230-239.

156. Nguyen, N. Neuroprotection by NGF and BDNF against neurotoxin-exerted apoptotic death in neural stem cells are mediated through Trk receptors, activating PI3-

kinase and MAPK pathways. / Nguyen, N. // Neurochem Res, - 2009.- 34(5). - P. 942-951.

157. Wang, B. Erk1/2 promotes proliferation and inhibits neuronal differentiation of neural stem cells. / Wang, B. // Neurosci Lett, - 2009.- 461(3). - P. 252-257.

158. Liu, K. PTEN deletion enhances the regenerative ability of adult corticospinal neurons. / Liu, K. // Nat Neurosci, - 2010.- 13(9). - P. 1075-1081.

159. Park, K. K. PTEN/mTOR and axon regeneration. / Park, K. K. // Exp Neurol, - 2010.- 223(1). - P. 45-50.

160. Park, K. K. Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway. / Park, K. K. // Science, - 2008.- 322(5903). - P. 963-966.

161. Nakagawara, A. Trk receptor tyrosine kinases: a bridge between cancer and neural development. / Nakagawara, A. // Cancer Lett, - 2001.- 169(2). - P. 107-114.

162. Carim-Todd, L. Endogenous truncated TrkB.T1 receptor regulates neuronal complexity and TrkB kinase receptor function in vivo. / Carim-Todd, L. // J Neurosci, -2009.- 29(3). - P. 678-685.

163. Skaper, S. D. The neurotrophin family of neurotrophic factors: an overview. / Skaper, S. D. // Methods Mol Biol, - 2012.- 846. - P. 1-12.

164. Angelastro, J. M. Regulated expression of ATF5 is required for the progression of neural progenitor cells to neurons. / Angelastro, J. M. // J Neurosci, -2003.- 23(11). - P. 4590-4600.

165. Ernsberger, U. Role of neurotrophin signalling in the differentiation of neurons from dorsal root ganglia and sympathetic ganglia. / Ernsberger, U. // Cell Tissue Res, - 2009.- 336(3). - P. 349-384.

166. Zhang, L., Jiang H., Hu Z. Concentration-dependent effect of nerve growth factor on cell fate determination of neural progenitors. / Zhang, L., Jiang H., Hu Z. // Stem Cells Dev, - 2011.- 20(10). - P. 1723-1731.

167. Hosomi, S. The p75 receptor is required for BDNF-induced differentiation of neural precursor cells. / Hosomi, S. // Biochem Biophys Res Commun, - 2003.-301(4). - P. 1011-1015.

168. Hohn, A. Identification and characterization of a novel member of the nerve growth factor/brain-derived neurotrophic factor family. / Hohn, A. // Nature, - 1990.-344(6264). - P. 339-341.

169. Maisonpierre, P. C. Neurotrophin-3: a neurotrophic factor related to NGF and BDNF. / Maisonpierre, P. C. // Science, - 1990.- 247(4949 Pt 1). - P. 1446-1451.

170. Chen, Y. Multiple roles of the p75 neurotrophin receptor in the nervous system. / Chen, Y. // J Int Med Res, - 2009.- 37(2). - P. 281-288.

171. Kalcheim, C., Carmeli C., Rosenthal A. Neurotrophin 3 is a mitogen for cultured neural crest cells. / Kalcheim, C., Carmeli C., Rosenthal A. // Proc Natl Acad Sci U S A, - 1992.- 89(5). - P. 1661-1665.

172. Lu, H. Retrovirus delivered neurotrophin-3 promotes survival, proliferation and neuronal differentiation of human fetal neural stem cells in vitro. / Lu, H. // Brain Res Bull, - 2008.- 77(4). - P. 158-164.

173. Kamei, N. BDNF, NT-3, and NGF released from transplanted neural progenitor cells promote corticospinal axon growth in organotypic cocultures. / Kamei, N. // Spine (Phila Pa 1976), - 2007.- 32(12). - P. 1272-1278.

174. Wang, J. M. Recombinant adenovirus vector-mediated functional expression of neurotropin-3 receptor (TrkC) in neural stem cells. / Wang, J. M. // Exp Neurol, -2007.- 203(1). - P. 123-127.

175. Park, K. I. Neural stem cells may be uniquely suited for combined gene therapy and cell replacement: Evidence from engraftment of Neurotrophin-3-expressing stem cells in hypoxic-ischemic brain injury. / Park, K. I. // Exp Neurol, - 2006.-199(1). - P. 179-190.

176. Ren, Z. G. Autocrine regulation of norepinephrine transporter expression. / Ren, Z. G. // Mol Cell Neurosci, - 2001.- 17(3). - P. 539-550.

177. Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert S. E. Kinetic analysis of neurotrophin-3-mediated differentiation of embryonic stem cells into neurons. / Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert S. E. // Tissue Eng Part A, - 2009.- 15(2). - P. 307-318.

178. Kandel, E. S., Hay N. The regulation and activities of the multifunctional serine/threonine kinase Akt/PKB. / Kandel, E. S., Hay N. // Exp Cell Res, - 1999.-253(1). - Р. 210-229.

179. Fukunaga, K., Ishigami T., Kawano T. Transcriptional regulation of neuronal genes and its effect on neural functions: expression and function of forkhead transcription factors in neurons. / Fukunaga, K., Ishigami T., Kawano T. // J Pharmacol Sci, - 2005.- 98(3). - Р. 205-211.

180. Mattson, M. P. NF-kappaB in the survival and plasticity of neurons. / Mattson, M. P. // Neurochem Res, - 2005.- 30(6-7). - Р. 883-893.

181. Bonni, A. Cell survival promoted by the Ras-MAPK signaling pathway by transcription-dependent and -independent mechanisms. / Bonni, A. // Science, - 1999.-286(5443). - Р. 1358-1362.

182. Brodeur, G. M., Bagatell R. Mechanisms of neuroblastoma regression. / Brodeur, G. M., Bagatell R. // Nat Rev Clin Oncol, - 2014.- 11(12). - Р. 704-713.

183. Ryden, M., Ibanez C. F. Binding of neurotrophin-3 to p75LNGFR, TrkA, and TrkB mediated by a single functional epitope distinct from that recognized by trkC. / Ryden, M., Ibanez C. F. // J Biol Chem, - 1996.- 271(10). - Р. 5623-5627. https://doi.org/5610.1074/jbc.5271.5610.5623.

184. Svensson, T. Coexpression of mRNA for the full-length neurotrophin receptor trk-C and trk-A in favourable neuroblastoma. / Svensson, T. // Eur J Cancer, -1997.- 33(12). - Р. 2058-2063.

185. Evangelopoulos, M. E., Weis J., Kruttgen A. Neurotrophin effects on neuroblastoma cells: correlation with trk and p75NTR expression and influence of Trk receptor bodies. / Evangelopoulos, M. E., Weis J., Kruttgen A. // J Neurooncol, -2004.- 66(1-2). - Р. 101-110. https://doi.org/110.1023/B:NE0N.0000013492.0000037426.0000013490c.

186. Hoehner, J. C. Association of neurotrophin receptor expression and differentiation in human neuroblastoma. / Hoehner, J. C. // Am J Pathol, - 1995.-147(1). - Р. 102-113 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1869894/.

187. Kuner, P., Hertel C. NGF induces apoptosis in a human neuroblastoma cell line expressing the neurotrophin receptor p75NTR. / Kuner, P., Hertel C. // J Neurosci Res, - 1998.- 54(4). - P. 465-474.

188. Bouzas-Rodriguez, J. Neurotrophin-3 production promotes human neuroblastoma cell survival by inhibiting TrkC-induced apoptosis. / Bouzas-Rodriguez, J. // J Clin Invest, - 2010.- 120(3). - P. 850-858.

189. Pastor, R., Bernal J., Rodriguez-Pena A. Unliganded c-erbA/thyroid hormone receptor induces trkB expression in neuroblastoma cells. / Pastor, R., Bernal J., Rodriguez-Pena A. // Oncogene, - 1994.- 9(4). - P. 1081-1089. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8134111

190. Haapasalo, A. Expression of the naturally occurring truncated trkB neurotrophin receptor induces outgrowth of filopodia and processes in neuroblastoma cells. / Haapasalo, A. // Oncogene, - 1999.- 18(6). - P. 1285-1296.

191. Aoyama, M. Human neuroblastomas with unfavorable biologies express high levels of brain-derived neurotrophic factor mRNA and a variety of its variants. / Aoyama, M. // Cancer Lett, - 2001.- 164(1). - P. 51-60.

192. Tacconelli, A. TrkA alternative splicing: a regulated tumor-promoting switch in human neuroblastoma. / Tacconelli, A. // Cancer Cell, - 2004.- 6(4). - P. 347-360.

193. Reynolds, B. A., Weiss S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. / Reynolds, B. A., Weiss S. // Science, - 1992.- 255(5052). - P. 1707-1710.

194. Cooke, M. J. Controlled epi-cortical delivery of epidermal growth factor for the stimulation of endogenous neural stem cell proliferation in stroke-injured brain. / Cooke, M. J. // Biomaterials, - 2011.- 32(24). - P. 5688-5697.

195. Torroglosa, A. Nitric oxide decreases subventricular zone stem cell proliferation by inhibition of epidermal growth factor receptor and phosphoinositide-3-kinase/Akt pathway. / Torroglosa, A. // Stem Cells, - 2007.- 25(1). - P. 88-97.

196. Sun, H. The juxtamembrane, cytosolic region of the epidermal growth factor receptor is involved in association with alpha-subunit of Gs. / Sun, H. // J Biol Chem, -1997.- 272(9). - P. 5413-5420.

197. Iguchi, H. cAMP response element-binding protein (CREB) is required for epidermal growth factor (EGF)-induced cell proliferation and serum response element activation in neural stem cells isolated from the forebrain subventricular zone of adult mice. / Iguchi, H. // Endocr J, - 2011.- 58(9). - P. 747-759.

198. Hu, Q. The EGF receptor-sox2-EGF receptor feedback loop positively regulates the self-renewal of neural precursor cells. / Hu, Q. // Stem Cells, - 2010.-28(2). - P. 279-286.

199. Jia, H. Pax6 regulates the epidermal growth factor-responsive neural stem cells of the subventricular zone. / Jia, H. // Neuroreport, - 2011.- 22(9). - P. 448-452.

200. Wen, J. Pax6 directly modulate Sox2 expression in the neural progenitor cells. / Wen, J. // Neuroreport, - 2008.- 19(4). - P. 413-417.

201. Citri, A., Skaria K. B., Yarden Y. The deaf and the dumb: the biology of ErbB-2 and ErbB-3. / Citri, A., Skaria K. B., Yarden Y. // Exp Cell Res, - 2003.-284(1). - P. 54-65.

202. Ciccolini, F. Prospective isolation of late development multipotent precursors whose migration is promoted by EGFR. / Ciccolini, F. // Dev Biol, - 2005.-284(1). - P. 112-125.

203. Burrows, R. C. Response diversity and the timing of progenitor cell maturation are regulated by developmental changes in EGFR expression in the cortex. / Burrows, R. C. // Neuron, - 1997.- 19(2). - P. 251-267.

204. Evangelopoulos, M. E., Weis J., Kruttgen A. Signalling pathways leading to neuroblastoma differentiation after serum withdrawal: HDL blocks neuroblastoma differentiation by inhibition of EGFR. / Evangelopoulos, M. E., Weis J., Kruttgen A. // Oncogene, - 2005.- 24(20). - P. 3309-3318.

205. Morrison, D. K., Davis R. J. Regulation of MAP kinase signaling modules by scaffold proteins in mammals. / Morrison, D. K., Davis R. J. // Annu Rev Cell Dev Biol, - 2003.- 19. - P. 91-118.

206. Zou, J. Mechanisms shaping the role of ERK1/2 in cellular senescence (Review). / Zou, J. // Mol Med Rep, - 2019.- 19(2). - P. 759-770.

207. Maik-Rachline, G., Hacohen-Lev-Ran A., Seger R. Nuclear ERK: Mechanism of Translocation, Substrates, and Role in Cancer. / Maik-Rachline, G., Hacohen-Lev-Ran A., Seger R. // Int J Mol Sci, - 2019.- 20(5). -.

208. Plotnikov, A. The nuclear translocation of ERK1/2 as an anticancer target. / Plotnikov, A. // Nat Commun, - 2015.- 6. - P. 6685.

209. Subramaniam, S., Unsicker K. ERK and cell death: ERK1/2 in neuronal death. / Subramaniam, S., Unsicker K. // FEBS J, - 2010.- 277(1). - P. 22-29.

210. Luo, Y., DeFranco D. B. Opposing roles for ERK1/2 in neuronal oxidative toxicity: distinct mechanisms of ERK1/2 action at early versus late phases of oxidative stress. / Luo, Y., DeFranco D. B. // J Biol Chem, - 2006.- 281(24). - P. 16436-16442.

211. Almeida, R. D. Neuroprotection by BDNF against glutamate-induced apoptotic cell death is mediated by ERK and PI3-kinase pathways. / Almeida, R. D. // Cell Death Differ, - 2005.- 12(10). - P. 1329-1343.

212. Krasilnikov, M. ERK and PI3K negatively regulate STAT-transcriptional activities in human melanoma cells: implications towards sensitization to apoptosis. / Krasilnikov, M. // Oncogene, - 2003.- 22(26). - P. 4092-4101.

213. Marshall, C. J. Specificity of receptor tyrosine kinase signaling: transient versus sustained extracellular signal-regulated kinase activation. / Marshall, C. J. // Cell, - 1995.- 80(2). - P. 179-185.

214. Virdee, K. Nerve growth factor-induced PKB/Akt activity is sustained by phosphoinositide 3-kinase dependent and independent signals in sympathetic neurons. / Virdee, K. // Brain Res, - 1999.- 837(1-2). - P. 127-142.

215. Kamakura, S., Moriguchi T., Nishida E. Activation of the protein kinase ERK5/BMK1 by receptor tyrosine kinases. Identification and characterization of a

signaling pathway to the nucleus. / Kamakura, S., Moriguchi T., Nishida E. // J Biol Chem, - 1999.- 274(37). - P. 26563-26571.

216. Zhou, F. Q. NGF-induced axon growth is mediated by localized inactivation of GSK-3beta and functions of the microtubule plus end binding protein APC. / Zhou, F. Q. // Neuron, - 2004.- 42(6). - P. 897-912.

217. Lillien, L., Raphael H. BMP and FGF regulate the development of EGF-responsive neural progenitor cells. / Lillien, L., Raphael H. // Development, - 2000.-127(22). - P. 4993-5005.

218. Guillemot, F., Zimmer C. From cradle to grave: the multiple roles of fibroblast growth factors in neural development. / Guillemot, F., Zimmer C. // Neuron,

- 2011.- 71(4). - P. 574-588.

219. Schwindt, T. T. Short-term withdrawal of mitogens prior to plating increases neuronal differentiation of human neural precursor cells. / Schwindt, T. T. // PLoS One,

- 2009.- 4(2). - P. e4642.

220. Li, Z., Theus M. H., Wei L. Role of ERK 1/2 signaling in neuronal differentiation of cultured embryonic stem cells. / Li, Z., Theus M. H., Wei L. // Dev Growth Differ, - 2006.- 48(8). - P. 513-523.

221. Formstecher, E. PEA-15 mediates cytoplasmic sequestration of ERK MAP kinase. / Formstecher, E. // Dev Cell, - 2001.- 1(2). - P. 239-250.

222. Wang, P., Ma M., Zhang S. EGF-induced urokinase plasminogen activator receptor promotes epithelial to mesenchymal transition in human gastric cancer cells. / Wang, P., Ma M., Zhang S. // Oncol Rep, - 2017.- 38(4). - P. 2325-2334.

223. Jo, M. Epidermal growth factor receptor-dependent and -independent cell-signaling pathways originating from the urokinase receptor. / Jo, M. // J Biol Chem, -2003.- 278(3). - P. 1642-1646.

224. Ooyen A., Graham B. P., A. R. J. Competition for tubulin between growing neurites during

development. / Ooyen A., Graham B. P., A. R. J. // Neurocomputing, - 2001.38-40. - P. 73-75.

225. Costa Lda, F. A shape analysis framework for neuromorphometry. / Costa Lda, F. // Network, - 2002.- 13(3). - P. 283-310.

226. Acebes, A., Ferrus A. Cellular and molecular features of axon collaterals and dendrites. / Acebes, A., Ferrus A. // Trends Neurosci, - 2000.- 23(11). - P. 557565.

227. Redmond, L., Ghosh A. The role of Notch and Rho GTPase signaling in the control of dendritic development. / Redmond, L., Ghosh A. // Curr Opin Neurobiol, -2001.- 11(1). - P. 111-117.

228. Whitford, K. L. Regulation of cortical dendrite development by Slit-Robo interactions. / Whitford, K. L. // Neuron, - 2002.- 33(1). - P. 47-61.

229. Ahuja, R. Cordon-bleu is an actin nucleation factor and controls neuronal morphology. / Ahuja, R. // Cell, - 2007.- 131(2). - P. 337-350.

230. Ingerman, E., Hsiao J. Y., Mullins R. D. Arp2/3 complex ATP hydrolysis promotes lamellipodial actin network disassembly but is dispensable for assembly. / Ingerman, E., Hsiao J. Y., Mullins R. D. // J Cell Biol, - 2013.- 200(5). - P. 619-633.

231. Strasser, G. A. Arp2/3 is a negative regulator of growth cone translocation. / Strasser, G. A. // Neuron, - 2004.- 43(1). - P. 81-94.

232. Tang, J. X., Janmey P. A. The polyelectrolyte nature of F-actin and the mechanism of actin bundle formation. / Tang, J. X., Janmey P. A. // J Biol Chem, -1996.- 271(15). - P. 8556-8563.

233. Janmey, P. A. The cytoskeleton and cell signaling: component localization and mechanical coupling. / Janmey, P. A. // Physiol Rev, - 1998.- 78(3). - P. 763-781.

234. Dent, E. W., Kalil K. Axon branching requires interactions between dynamic microtubules and actin filaments. / Dent, E. W., Kalil K. // J Neurosci, -2001.- 21(24). - P. 9757-9769.

235. O'Leary, D. D., Terashima T. Cortical axons branch to multiple subcortical targets by interstitial axon budding: implications for target recognition and "waiting periods". / O'Leary, D. D., Terashima T. // Neuron, - 1988.- 1(10). - P. 901-910.

236. Meyer Zum Buschenfelde, U. RIT1 controls actin dynamics via complex formation with RAC1/CDC42 and PAK1. / Meyer Zum Buschenfelde, U. // PLoS Genet, - 2018.- 14(5). - P. e1007370.

237. Lamarche, N. Rac and Cdc42 induce actin polymerization and G1 cell cycle progression independently of p65PAK and the JNK/SAPK MAP kinase cascade. / Lamarche, N. // Cell, - 1996.- 87(3). - P. 519-529.

238. Da Silva, J. S. RhoA/ROCK regulation of neuritogenesis via profilin IIa-mediated control of actin stability. / Da Silva, J. S. // J Cell Biol, - 2003.- 162(7). - P. 1267-1279.

239. Manser, E. A brain serine/threonine protein kinase activated by Cdc42 and Rac1. / Manser, E. // Nature, - 1994.- 367(6458). - P. 40-46.

240. Kichina, J. V. PAK1 as a therapeutic target. / Kichina, J. V. // Expert Opin Ther Targets, - 2010.- 14(7). - P. 703-725.

241. Hynds, D. L. Rit promotes MEK-independent neurite branching in human neuroblastoma cells. / Hynds, D. L. // J Cell Sci, - 2003.- 116(Pt 10). - P. 1925-1935.

242. Comer, J. D. Commissural axon guidance in the developing spinal cord: from Cajal to the present day. / Comer, J. D. // Neural Dev, - 2019.- 14(1). - P. 9.

243. Dickson, B. J. Molecular mechanisms of axon guidance. / Dickson, B. J. // Science, - 2002.- 298(5600). - P. 1959-1964.

244. Serafini, T. The netrins define a family of axon outgrowth-promoting proteins homologous to C. elegans UNC-6. / Serafini, T. // Cell, - 1994.- 78(3). - P. 409-424.

245. Xu, K. Neural migration. Structures of netrin-1 bound to two receptors provide insight into its axon guidance mechanism. / Xu, K. // Science, - 2014.-344(6189). - P. 1275-1279.

246. Hong, K. Calcium signalling in the guidance of nerve growth by netrin-1. / Hong, K. // Nature, - 2000.- 403(6765). - P. 93-98.

247. Bouchard, J. F. Protein kinase A activation promotes plasma membrane insertion of DCC from an intracellular pool: A novel mechanism regulating

commissural axon extension. / Bouchard, J. F. // J Neurosci, - 2004.- 24(12). - P. 3040-3050.

248. Dickson, B. J., Gilestro G. F. Regulation of commissural axon pathfinding by slit and its Robo receptors. / Dickson, B. J., Gilestro G. F. // Annu Rev Cell Dev Biol, - 2006.- 22. - P. 651-675.

249. Ma, L., Tessier-Lavigne M. Dual branch-promoting and branch-repelling actions of Slit/Robo signaling on peripheral and central branches of developing sensory axons. / Ma, L., Tessier-Lavigne M. // J Neurosci, - 2007.- 27(25). - P. 6843-6851.

250. Role of Semaphorins during Axon Growth and Guidance. / Koncina E, R. L., Gonthier B, et al.: Landes Bioscience, Austin (TX), 2013.

251. Xu, Q., Mellitzer G., Wilkinson D. G. Roles of Eph receptors and ephrins in segmental patterning. / Xu, Q., Mellitzer G., Wilkinson D. G. // Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci, - 2000.- 355(1399). - P. 993-1002.

252. Holmberg, J., Frisen J. Ephrins are not only unattractive. / Holmberg, J., Frisen J. // Trends Neurosci, - 2002.- 25(5). - P. 239-243.

253. Fredette, B. J., Miller J., Ranscht B. Inhibition of motor axon growth by T-cadherin substrata. / Fredette, B. J., Miller J., Ranscht B. // Development, - 1996.-122(10). - P. 3163-3171.

254. Acevedo, L. M. hESC Differentiation toward an Autonomic Neuronal Cell Fate Depends on Distinct Cues from the Co-Patterning Vasculature. / Acevedo, L. M. // Stem Cell Reports, - 2015.- 4(6). - P. 1075-1088.

255. Bochkov, V. Phosphoinositide and calcium signalling responses in smooth muscle cells: comparison between lipoproteins, Ang II, and PDGF. / Bochkov, V. // Biochem Biophys Res Commun, - 1992.- 188(3). - P. 1295-1304.

256. Rubina, K. LDL induces intracellular signalling and cell migration via atypical LDL-binding protein T-cadherin. / Rubina, K. // Mol Cell Biochem, - 2005.-273(1-2). - P. 33-41.

257. Hug, C. T-cadherin is a receptor for hexameric and high-molecular-weight forms of Acrp30/adiponectin. / Hug, C. // Proc Natl Acad Sci U S A, - 2004.- 101(28).

- Р. 10308-10313.

258. Rubina K., S. V., Semina E., Kalinina N., Yurlova E., Khlebnikova A., Molochkov V. Malignant transformation in skin is associated with the loss of T-cadherin expression in human keratinocytes and heterogeneity in T-cadherin expression in tumor vasculature. / Rubina K., S. V., Semina E., Kalinina N., Yurlova E., Khlebnikova A., Molochkov V. // Tumor Angiogenesis, - 2012.- (6). - Р. 135-166.

259. Oliveira, S. L. Functions of neurotrophins and growth factors in neurogenesis and brain repair. / Oliveira, S. L. // Cytometry A, - 2013.- 83(1). - Р. 7689.

260. Verwer, R. W. Altered Loyalties of Neuronal Markers in Cultured Slices of Resected Human Brain Tissue. / Verwer, R. W. // Brain Pathol, - 2016.- 26(4). - Р. 523-532.

261. Д.Э. Коржевский, Е. С. П., О.В. Кирик, Г.В. Безнин, Е.Г. Сухорукова Нейрональные маркеры, используемые при изучении дифференцировки стволовых клеток. / Д.Э. Коржевский, Е. С. П., О.В. Кирик, Г.В. Безнин, Е.Г. Сухорукова // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия, - 2010.- 5(3).

- Р. 57-63.

262. Gusel'nikova, V. V., Korzhevskiy D. E. NeuN As a Neuronal Nuclear Antigen and Neuron Differentiation Marker. / Gusel'nikova, V. V., Korzhevskiy D. E. // Acta Naturae, - 2015.- 7(2). - Р. 42-47.

263. Kirik, O. V. [Selective death of the striatum neurons in rats after the transient occlusion of the middle cerebral artery]. / Kirik, O. V. // Morfologiia, - 2009.-135(2). - Р. 80-82.

264. Tippett, L. J. Striosomes and mood dysfunction in Huntington's disease. / Tippett, L. J. // Brain, - 2007.- 130(Pt 1). - Р. 206-221.

265. Olesen, O. F. Expression of low molecular weight isoforms of microtubule-associated protein 2. Phosphorylation and induction of microtubule assembly in vitro. / Olesen, O. F. // J Biol Chem, - 1994.- 269(52). - P. 32904-32908.

266. Chauhan, N., Siegel G. Age-dependent organotypic expression of microtubule-associated proteins (MAP1, MAP2, and MAP5) in rat brain. / Chauhan, N., Siegel G. // Neurochem Res, - 1997.- 22(6). - P. 713-719.

267. Jalava, N. S. Changes in microtubule-associated protein-2 (MAP2) expression during development and after status epilepticus in the immature rat hippocampus. / Jalava, N. S. // Int J Dev Neurosci, - 2007.- 25(2). - P. 121-131.

268. Wu, G., Nakamura K., Ledeen R. W. Inhibition of neurite outgrowth of neuroblastoma Neuro-2a cells by cholera toxin B-subunit and anti-GM1 antibody. / Wu, G., Nakamura K., Ledeen R. W. // Mol Chem Neuropathol, - 1994.- 21(2-3). - P. 259271.

269. Lin, C. H., Hsieh M., Fan S. S. The promotion of neurite formation in Neuro2A cells by mouse Mob2 protein. / Lin, C. H., Hsieh M., Fan S. S. // FEBS Lett, - 2011.- 585(3). - P. 523-530.

270. Sporn, M. B. Mechanism of action of retinoids. / Sporn, M. B. // J Am Acad Dermatol, - 1986.- 15(4 Pt 2). - P. 756-764.

271. Nakamura, K. D., Hart R. W. Proto-oncogene expression during retinoic acid-induced neural differentiation of embryonal carcinoma cells. / Nakamura, K. D., Hart R. W. // Mech Ageing Dev, - 1989.- 48(1). - P. 53-62.

272. Wang, X. Essential role of ERK activation in neurite outgrowth induced by alpha-lipoic acid. / Wang, X. // Biochim Biophys Acta, - 2011.- 1813(5). - P. 827838.

273. Tremblay, R. G. Differentiation of mouse Neuro 2A cells into dopamine neurons. / Tremblay, R. G. // J Neurosci Methods, - 2010.- 186(1). - P. 60-67.

274. Bjorklund, A., Lindvall O. Replacing Dopamine Neurons in Parkinson's Disease: How did it happen? / Bjorklund, A., Lindvall O. // J Parkinsons Dis, - 2017.-7(s1). - P. S21-S31.

275. Markus, A., Patel T. D., Snider W. D. Neurotrophic factors and axonal growth. / Markus, A., Patel T. D., Snider W. D. // Curr Opin Neurobiol, - 2002.-12(5). - P. 523-531.

276. Pratt, A. J., MacRae I. J. The RNA-induced silencing complex: a versatile gene-silencing machine. / Pratt, A. J., MacRae I. J. // J Biol Chem, - 2009.- 284(27). -P. 17897-17901.

277. Scacheri, P. C. Short interfering RNAs can induce unexpected and divergent changes in the levels of untargeted proteins in mammalian cells. / Scacheri, P. C. // Proc Natl Acad Sci U S A, - 2004.- 101(7). - P. 1892-1897.

278. Bartlett, D. W., Davis M. E. Insights into the kinetics of siRNA-mediated gene silencing from live-cell and live-animal bioluminescent imaging. / Bartlett, D. W., Davis M. E. // Nucleic Acids Res, - 2006.- 34(1). - P. 322-333.

279. Reynolds, A. Induction of the interferon response by siRNA is cell type- and duplex length-dependent. / Reynolds, A. // RNA, - 2006.- 12(6). - P. 988-993.

280. Gaj, T., Gersbach C. A., Barbas C. F., 3rd ZFN, TALEN, and CRISPR/Cas-based methods for genome engineering. / Gaj, T., Gersbach C. A., Barbas C. F., 3rd // Trends Biotechnol, - 2013.- 31(7). - P. 397-405.

281. Mali, P. RNA-guided human genome engineering via Cas9. / Mali, P. // Science, - 2013.- 339(6121). - P. 823-836.

282. Canver, M. C. Characterization of genomic deletion efficiency mediated by clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 nuclease system in mammalian cells. / Canver, M. C. // J Biol Chem, - 2014.- 289(31). - P. 21312-21324.

283. Sakuma, T. Multiplex genome engineering in human cells using all-in-one CRISPR/Cas9 vector system. / Sakuma, T. // Sci Rep, - 2014.- 4. - P. 5400.

284. Shalem, O. Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells. / Shalem, O. // Science, - 2014.- 343(6166). - P. 84-87.

285. Kabadi, A. M. Multiplex CRISPR/Cas9-based genome engineering from a single lentiviral vector. / Kabadi, A. M. // Nucleic Acids Res, - 2014.- 42(19). - Р. e147.

286. Ran, F. A. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. / Ran, F. A. // Nat Protoc, - 2013.- 8(11). - Р. 2281-2308.

287. Глазкова Д.В., Ш. Г. А. TALE-нуклеазы - новый инструмент для редактирования генома. / Глазкова Д.В., Ш. Г. А. // Молекулярная биология, -2014.- 48(3). - Р. 335-370.

288. Bedell, V. M. In vivo genome editing using a high-efficiency TALEN system. / Bedell, V. M. // Nature, - 2012.- 491(7422). - Р. 114-118.

289. Hockemeyer, D. Efficient targeting of expressed and silent genes in human ESCs and iPSCs using zinc-finger nucleases. / Hockemeyer, D. // Nat Biotechnol, -2009.- 27(9). - Р. 851-857.

290. Urnov, F. D. Highly efficient endogenous human gene correction using designed zinc-finger nucleases. / Urnov, F. D. // Nature, - 2005.- 435(7042). - Р. 646651.

291. Ramirez, C. L. Unexpected failure rates for modular assembly of engineered zinc fingers. / Ramirez, C. L. // Nat Methods, - 2008.- 5(5). - Р. 374-375.

292. Zhang, F. Efficient construction of sequence-specific TAL effectors for modulating mammalian transcription. / Zhang, F. // Nat Biotechnol, - 2011.- 29(2). -Р. 149-153.

293. Ran, F. A. Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing specificity. / Ran, F. A. // Cell, - 2013.- 154(6). - Р. 1380-1389.

294. Li, H. Applications of genome editing technology in the targeted therapy of human diseases: mechanisms, advances and prospects. / Li, H. // Signal Transduct Target Ther, - 2020.- 5(1). - Р. 1.

295. Murovec, J., Pirc Z., Yang B. New variants of CRISPR RNA-guided genome editing enzymes. / Murovec, J., Pirc Z., Yang B. // Plant Biotechnol J, - 2017.-15(8). - Р. 917-926.

296. Cong, L. Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. / Cong, L. // Science, - 2013.- 339(6121). - P. 819-823.

297. Shen, B. Efficient genome modification by CRISPR-Cas9 nickase with minimal off-target effects. / Shen, B. // Nat Methods, - 2014.- 11(4). - P. 399-402.

298. Wu, Y. Correction of a genetic disease in mouse via use of CRISPR-Cas9. / Wu, Y. // Cell Stem Cell, - 2013.- 13(6). - P. 659-662.

299. Chen, S. CRISPR-Cas9: from Genome Editing to Cancer Research. / Chen, S. // Int J Biol Sci, - 2016.- 12(12). - P. 1427-1436.

300. Packeiser, H. An extremely simple and effective colony PCR procedure for bacteria, yeasts, and microalgae. / Packeiser, H. // Appl Biochem Biotechnol, - 2013.-169(2). - P. 695-700.

301. Semina, E. Urokinase and urokinase receptor participate in regulation of neuronal migration, axon growth and branching. / Semina, E. // Eur J Cell Biol, -2016.- 95(9). - P. 295-310.

302. Eguchi, S. Calcium-dependent epidermal growth factor receptor transactivation mediates the angiotensin II-induced mitogen-activated protein kinase activation in vascular smooth muscle cells. / Eguchi, S. // J Biol Chem, - 1998.-273(15). - P. 8890-8896.

303. Mirkin, B. L., Clark S. H., Zhang C. Inhibition of human neuroblastoma cell proliferation and EGF receptor phosphorylation by gangliosides GM1, GM3, GD1A and GT1B. / Mirkin, B. L., Clark S. H., Zhang C. // Cell Prolif, - 2002.- 35(2). - P. 105-115.

304. Towbin, H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. 1979. / Towbin, H., Staehelin T., Gordon J. // Biotechnology, - 1992.- 24. - P. 145149.

305. Laemmli, U. K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. / Laemmli, U. K. // Nature, - 1970.- 227. - P. 680 - 685.

306. Anderson, D. The effect of various antioxidants and other modifying agents on oxygen-radical-generated DNA damage in human lymphocytes in the COMET assay. / Anderson, D. // Mutat Res, - 1994.- 307(1). - Р. 261-271.

307. Brahimi, F. The Paradoxical Signals of Two TrkC Receptor Isoforms Supports a Rationale for Novel Therapeutic Strategies in ALS. / Brahimi, F. // PLoS One, - 2016.- 11(10). - Р. e0162307.

308. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/.

309. http: //p ga.mgh.harvard.edu/primerbank/.

310. https://eu.idtdna.com/calc/analyzer.

311.URL:http://www.lgcstandards-atcc.org/products/all/CCL-131.aspx?geo_country=ru#generalinformation.

312. Rysenkova, K. D. CRISPR/Cas9 nickase mediated targeting of urokinase receptor gene inhibits neuroblastoma cell proliferation. / Rysenkova, K. D. // Oncotarget, - 2018.- 9(50). - Р. 29414-29430.

313. ПЦР в реальном времени. / Ребриков Д.В., С. Г. А., Трофимов Д.Ю. и др. - Москва: БИНОМ "Лаборатория знаний", 2009.

314. Rudolph, J. L. Rit mutants confirm role of MEK/ERK signaling in neuronal differentiation and reveal novel Par6 interaction. / Rudolph, J. L. // Biochim Biophys Acta, - 2007.- 1773(12). - Р. 1793-1800.

315. Duraikannu, A. Beyond Trophic Factors: Exploiting the Intrinsic Regenerative Properties of Adult Neurons. / Duraikannu, A. // Front Cell Neurosci, -2019.- 13. - Р. 128.

316. Sibilia, M. A strain-independent postnatal neurodegeneration in mice lacking the EGF receptor. / Sibilia, M. // EMBO J, - 1998.- 17(3). - Р. 719-731.

317. Prenzel, N. EGF receptor transactivation by G-protein-coupled receptors requires metalloproteinase cleavage of proHB-EGF. / Prenzel, N. // Nature, - 1999.-402(6764). - Р. 884-888.

318. Tan, X. Stress-Induced EGFR Trafficking: Mechanisms, Functions, and Therapeutic Implications. / Tan, X. // Trends Cell Biol, - 2016.- 26(5). - Р. 352-366.

319. Estrada C., V. A. Epidermal Growth Factor Receptor in the Adult Brain. // The Cell Cycle in the Central Nervous System. Contemporary Neuroscience. / D., J. -NJ: Humana Press Inc., 2006. - C. 265-277.

320. Bouchard, V. J., Rouleau M., Poirier G. G. PARP-1, a determinant of cell survival in response to DNA damage. / Bouchard, V. J., Rouleau M., Poirier G. G. // Exp Hematol, - 2003.- 31(6). - P. 446-454.

321. Nicholson, D. W. Identification and inhibition of the ICE/CED-3 protease necessary for mammalian apoptosis. / Nicholson, D. W. // Nature, - 1995.- 376(6535).

- P. 37-43.

322. Soldani, C. Poly(ADP-ribose) polymerase cleavage during apoptosis: when and where? / Soldani, C. // Exp Cell Res, - 2001.- 269(2). - P. 193-201.

323. Mullen, R. J., Buck C. R., Smith A. M. NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates. / Mullen, R. J., Buck C. R., Smith A. M. // Development, -1992.- 116(1). - P. 201-211.

324. Butler, T. R. Selective vulnerability of hippocampal cornu ammonis 1 pyramidal cells to excitotoxic insult is associated with the expression of polyamine-sensitive N-methyl-D-asparate-type glutamate receptors. / Butler, T. R. // Neuroscience,

- 2010.- 165(2). - P. 525-534.

325. Chaitanya, G. V., Steven A. J., Babu P. P. PARP-1 cleavage fragments: signatures of cell-death proteases in neurodegeneration. / Chaitanya, G. V., Steven A. J., Babu P. P. // Cell Commun Signal, - 2010.- 8. - P. 31.

326. Bhaskara, V. K. Comparative status of activated ERK1/2 and PARP cleavage in human gliomas. / Bhaskara, V. K. // Neuropathology, - 2005.- 25(1). - P. 48-53.

327. Gilliams-Francis, K. L., Quaye A. A., Naegele J. R. PARP cleavage, DNA fragmentation, and pyknosis during excitotoxin-induced neuronal death. / Gilliams-Francis, K. L., Quaye A. A., Naegele J. R. // Exp Neurol, - 2003.- 184(1). - P. 359372.

328. Batzer, A. G. Hierarchy of binding sites for Grb2 and Shc on the epidermal growth factor receptor. / Batzer, A. G. // Mol Cell Biol, - 1994.- 14(8). - P. 51925201.

329. Rodrigues, G. A. A novel positive feedback loop mediated by the docking protein Gab1 and phosphatidylinositol 3-kinase in epidermal growth factor receptor signaling. / Rodrigues, G. A. // Mol Cell Biol, - 2000.- 20(4). - P. 1448-1459.

330. Tanaka, T. Ligand-activated epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling governs endocytic trafficking of unliganded receptor monomers by non-canonical phosphorylation. / Tanaka, T. // J Biol Chem, - 2018.- 293(7). - P. 22882301.

331. Henriksen, L. Internalization mechanisms of the epidermal growth factor receptor after activation with different ligands. / Henriksen, L. // PLoS One, - 2013.-8(3). - P. e58148.

332. Roepstorff, K. Differential effects of EGFR ligands on endocytic sorting of the receptor. / Roepstorff, K. // Traffic, - 2009.- 10(8). - P. 1115-1127.

333. Semina, E. V. Downregulation of uPAR promotes urokinase translocation into the nucleus and epithelial to mesenchymal transition in neuroblastoma. / Semina, E. V. // J Cell Physiol, - 2020.-. -.

334. Douglas, M. R. Off-target effects of epidermal growth factor receptor antagonists mediate retinal ganglion cell disinhibited axon growth. / Douglas, M. R. // Brain, - 2009.- 132(Pt 11). - P. 3102-3121.

335. Caja, L. The tyrphostin AG1478 inhibits proliferation and induces death of liver tumor cells through EGF receptor-dependent and independent mechanisms. / Caja, L. // Biochem Pharmacol, - 2011.- 82(11). - P. 1583-1592.

336. Lenormand, P. Growth factors induce nuclear translocation of MAP kinases (p42mapk and p44mapk) but not of their activator MAP kinase kinase (p45mapkk) in fibroblasts. / Lenormand, P. // J Cell Biol, - 1993.- 122(5). - P. 1079-1088.

337. Michailovici, I. Nuclear to cytoplasmic shuttling of ERK promotes differentiation of muscle stem/progenitor cells. / Michailovici, I. // Development, -2014.- 141(13). - P. 2611-2620.

338. Bologna-Molina, R. Comparison of the value of PCNA and Ki-67 as markers of cell proliferation in ameloblastic tumors. / Bologna-Molina, R. // Med Oral Patol Oral Cir Bucal, - 2013.- 18(2). - P. 174-179.

339. ten Berge, R. L. Expression levels of apoptosis-related proteins predict clinical outcome in anaplastic large cell lymphoma. / ten Berge, R. L. // Blood, - 2002.-99(12). - P. 4540-4546. https://doi.org/4510.1182/blood.V4599.4512.4540.

340. Guidi, M. Overexpression of miR-128 specifically inhibits the truncated isoform of NTRK3 and upregulates BCL2 in SH-SY5Y neuroblastoma cells. / Guidi, M. // BMC Mol Biol, - 2010.- 11. - P. 95.

341. Sartelet, H., Oligny L. L., Vassal G. AKT pathway in neuroblastoma and its therapeutic implication. / Sartelet, H., Oligny L. L., Vassal G. // Expert Rev Anticancer Ther, - 2008.- 8(5). - P. 757-769.

342. Opel, D. Activation of Akt predicts poor outcome in neuroblastoma. / Opel, D. // Cancer Res, - 2007.- 67(2). - P. 735-745.

343. Smith, J. R. Novel pharmacodynamic biomarkers for MYCN protein and PI3K/AKT/mTOR pathway signaling in children with neuroblastoma. / Smith, J. R. // Mol Oncol, - 2016.- 10(4). - P. 538-552.

344. Sartelet, H. Activation of the phosphatidylinositol 3'-kinase/AKT pathway in neuroblastoma and its regulation by thioredoxin 1. / Sartelet, H. // Hum Pathol, -2011.- 42(11). - P. 1727-1739.

345. Navratilova, J. Selective elimination of neuroblastoma cells by synergistic effect of Akt kinase inhibitor and tetrathiomolybdate. / Navratilova, J. // J Cell Mol Med, - 2017.- 21(9). - P. 1859-1869.

346. Welch, H. Protein kinase B and rac are activated in parallel within a phosphatidylinositide 3OH-kinase-controlled signaling pathway. / Welch, H. // J Biol Chem, - 1998.- 273(18). - P. 48-56. https://doi.org/10.1074/jbc.1273.1018.11248.

347. Gomez-Villafuertes, R. PI3K/Akt signaling pathway triggers P2X7 receptor expression as a pro-survival factor of neuroblastoma cells under limiting growth conditions. / Gomez-Villafuertes, R. // Sci Rep, - 2015.- 5. - P. 18417.

348. Chesler, L. Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase destabilizes Mycn protein and blocks malignant progression in neuroblastoma. / Chesler, L. // Cancer Res,

- 2006.- 66(16). - P. 8139-8146.

349. Eleveld, T. F. Relapsed neuroblastomas show frequent RAS-MAPK pathway mutations. / Eleveld, T. F. // Nat Genet, - 2015.- 47(8). - P. 864-871.

350. Martinez, M. A. Power Frequency Magnetic Fields Affect the p38 MAPK-Mediated Regulation of NB69 Cell Proliferation Implication of Free Radicals. / Martinez, M. A. // Int J Mol Sci, - 2016.- 17(4). - P. 510.

351. Marengo, B. p38MAPK inhibition: a new combined approach to reduce neuroblastoma resistance under etoposide treatment. / Marengo, B. // Cell Death Dis, -2013.- 4. - P. e589.

352. Filomeni, G. p38(MAPK) and ERK1/2 dictate cell death/survival response to different pro-oxidant stimuli via p53 and Nrf2 in neuroblastoma cells SH-SY5Y. / Filomeni, G. // Biochem Pharmacol, - 2012.- 83(10). - P. 1349-1357.

353. Eden, G. The urokinase receptor interactome. / Eden, G. // Curr Pharm Des,

- 2011.- 17(19). - P. 1874-1889.

354. Oh, F. Targeting EGFR and uPAR on human rhabdomyosarcoma, osteosarcoma, and ovarian adenocarcinoma with a bispecific ligand-directed toxin. / Oh, F. // Clin Pharmacol, - 2018.- 10. - P. 113-121.