Молекулярные маркеры для технологии сохранения природных популяций женьшеня: Panax ginseng C. A. Mey. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Корень, Ольга Геннадьевна

• Корень, Ольга Геннадьевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Корень, Ольга Геннадьевна

Вкеденпе.

I Обзор ли тературы

I 1 Женьшень настоящий - Ранах ginseng С А. Меу.: лекарственное использование, биологическая характеристика, распространение.

II!. Лекарственная ценность и экономическая значимость.

1.1.2 Биологическая характеристика Р. ginseng С. А. Меу.

1.1.3. Систематическое положение Р. ginseng и распространение в природе.

I 1.4. Запасы в природе и проблема решения источников сырья.

1.2. Проблема сохранения генетического разнообразия и современные подходы к ее решению.

1.2.1. Молекулярные методы оценки генетического полиморфизма. 2 2. Аллозимный полиморфизм - генетические основы и выявление аллозимной изменчивости.

1 2.3. Параметры генетической изменчивости и дифференциации популяций.

1.2.4. Уровни аллозимного полиморфизма и гетерозиготности в природных популяциях.

1.2.5. Влияние жизненной стратегии вида, экологических и географических факторов на уровень генетической изменчивости растений.

1 2.6. Факторы, влияющие на динамику популяций.

2. Материалы и методы.

2.1. Материалы.

2.2. Методы.,.

2.3. Статистическая обработка результатов. 3. Результаты и обсуждение.

3.1. Изучение генетического контроля изоферментов женьшеня и выбор маркеров.

3.2. Экспрессия изоферментов в клеточных культурах женьшеня.

3.3. Использование маркеров для оценки состояния генофонда женьшеня и выявления центров изменчивости.

3.3.1. Внутривидовая изменчивость женьшеня.

3.3.2. Сравнение параметров изменчивости Р. ginseng и P. quinquefolium.

3.3.3. Генетическая неоднородность популяций женьшеня.

3.4. Особенности системы размножения Р. ginseng - основного фактора динамики популяций.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярные маркеры для технологии сохранения природных популяций женьшеня: Panax ginseng C. A. Mey.»

Сокращение видового разнообразия биосферы стало одним из неблагоприятных процессов, характеризующих конец XX века. По оценкам специалистов, к началу следующего века природные популяции растений могут утратить до 10-15 % составляющих их видов (Wilson, 1988). Только за последнее столетие человеческая деятельность привела к тому, что с лица Земли уже исчезли или близки к исчезновению до 25 тыс. видов высших растений. Такая скорость вымирания превышает все, что известно из данных палеонтологической летописи (Алтухов, 1995). Кроме того, многие виды, имеющие медицинское, промышленное или эстетическое значение, на сегодняшний день представлены истощенными популяциями. Поэтому возникает проблема сохранения и восстановления биоразнообразия планеты (Wilson, 1988; Соколов, Шатуновский, 1995).

Мировой объем производства и продажи препаратов женьшеня увеличивается. Кроме восточно-азиатских стран, лидеров производства женьшеня (Panax ginseng С.А. Меу.), на передовые позиции выходят также США, сумевшие потеснить традиционных производителей на основных рынках благодаря культивированию женьшеня пятилистного (Panax quinquefolium L.). Развитые страны мира ежегодно экспортируют несколько сот тонн корня женьшеня и препаратов на его основе. Лекарственные препараты и пищевые добавки из женьшеня помогают увеличить продолжительности жизни в этих странах, т.к. новейшие исследования показали, что препараты женьшеня обладают уникальным свойством восстанавливать нейроны коры головного мозга, препятствуют опухолеобразованию, обладают антидиабетическим и антисклеротическим действием. Приморский край в настоящее время остался практически единственным в мире обладателем дикорастущего женьшеня. Только здесь женьшень пока еще представлен в количестве, достаточном для сохранения его как вида. Однако, в последнее время запасы дикорастущего женьшеня истощаются. Поэтому особую актуальность приобретает проблема сохранения, восстановления и рационального использования его генофонда. Необходимым предварительным условием разработки технологий восстановления женьшеня является выяснение биологических и генетических характеристик вида, которые и определяют конкретные меры по его защите, а также поиск генетических маркеров, пригодных для решения этих вопросов.

Цель настоящей работы заключалась в изучении уровня генетической изменчивости женьшеня и его популяционно-генетической структуры и создании таким образом базы для биотехнологии сохранения этого вида.

Для достижения этой цели в ходе настоящего исследования решались следующие задачи:

1. Выявить изменчивость возможно большего числа ферментных систем Panax ginseng и найти генетические маркеры, пригодные для разработки технологий восстановления вида, описать картину внутривидовой изменчивости женьшеня и оценить состояние его генофонда.

2. Определить степень различий между природными популяциями женьшеня и выявить центры наибольшей генетической изменчивости.

3. Используя молекулярные маркеры, описать особенности системы размножения Panax ginseng как основного фактора динамики природных популяций.

4. Использовать полученные эколого-популяционные и репродуктивные характеристики женьшеня для создания стратегии его восстановления.

Работа выполнена в лаборатории биотехнологии Биолого-почвенного института ДВО РАН под руководством доктора биологических наук, академика Ю.Н. Журавлева в рамках плановой тематики лаборатории. Работа финансировалась преимущественно грантами Экологического Фонда Приморья (гранты 1995-2000 гг.) и частично поддержана грантами государственного научно-технического проекта "Биологическое разнообразие", Директората Биологических наук США (Biotic Surveys and Inventories Program) и Отделения международных программ Национального научного фонда США (№№> DEB-9400821, DEB-9505031) и Японского общества содействия науке (№ BSAR-401).

Описанные в работе результаты получены автором лично.

Автор благодарит ведущего научного сотрудника лаборатории биотехнологии, д.б.н. В.П. Булгакова, старших научных сотрудников, к.б.н. Т.И. Музарок и О.Л. Бурундукову за помощь в сборе материала, а также сотрудника лаборатории Л.М. Тимашеву и сотрудников института к.б.н. В.Г. Юдина и Е.В. Юдину за помощь в поддержании экспериментальной коллекции.

1. Обзор литературы

В обзоре приведены литературные сведения по использованию, биологии и распространению Ралах ginseng С.А. Меу. Особое внимание уделено современному состоянию природных популяций женьшеня. На основании данных отечественной и зарубежной литературы рассмотрены теоретические основы и обобщены практические подходы к сохранению биологического разнообразия, дана краткая характеристика современных методов оценки генетического разнообразия и более подробное описание метода аллозимного анализа. В обзоре также приведены данные по генетическому разнообразию растений, рассмотрены факторы, влияющие на уровень и динамику генетического разнообразия в природе.

1.1. Женьшень настоящий - Panax ginseng С.А. Меу.: лекарственное использование, биологическая характеристика, распространение.

1.1.1. Лекарственная ценность и экономическая значимость

Женьшень настоящий {Panax ginseng С.А. Меу.) является одним из наиболее известных лекарственных растений восточной медицины, где он использовался для излечения самых разнообразных недугов и для поддержания сил в старости. Полагают, что в восточной медицине женьшень применяется не менее 4-5 тысячелетий (Малышев, 1991). По крайней мере, одно из первых письменных упоминаний о нем содержится в древнейшем китайском сочинении о лекарственных средствах "Шень-нун-Бэнь-цао", которое относят к IV в. до н. э. (Журавлев, Коляда, 1996).

Само название женьшеня - Panax - происходит от слова "panacea", что значит "лекарство от всех болезней", и связано со славой этого растения как всеисцеляющего средства. Действительно, в традиционной восточной медицине женьшень использовался при самых различных недугах: при общей слабости, малокровии и потере аппетита, при заболеваниях органов дыхания и сердечно-сосудистой системы, при нарушениях половой функции, при болезнях обмена веществ, в том числе при сахарном диабете. Корни женьшеня также применялись для профилактики опухолей и инфекционных заболеваний, в сборе с другими травами использовались в качестве противораковых средств. Наземные части растения использовались для лечения заболеваний желудочнокишечного тракта, различных женских недугов и для облегчения родов. Употребляли женьшень и профилактически, поскольку на Востоке считается, что женьшень активизирует психическую и физическую деятельность человека, снимает усталость, улучшает память и зрение, быстро заживляет раны, замедляет старение и дарует бодрость в старости (Журавлев, Коляда, 1996).

Современная наука подтвердила лекарственную ценность женьшеня. Оказалось, что широкий спектр его лекарственных свойств обусловлен разнообразием и сложностью химических веществ, накапливающихся в различных органах растения. Изучение основных действующих веществ женьшеня - тритерпеновых гликозидов, названных гинзенозидами, - началось в 60-х годах нашего столетия, после того, как в 1962-1968 гг. Г.Б. Елякову и японским ученым во главе с С. Шибата удалось установить структуру шести гинзенозидов (Shibata et al., 1963; Elyakov et a!., 1968). К настоящему времени известно более 30 индивидуальных гинзенозидов, выделенных из женьшеня и родственных ему видов. Фармакологические исследования показали, что все они являются биологически активными веществами, и целебные свойства женьшеня обусловлены, прежде всего, именно этой группой веществ (Tanaka, Kasai, 1984; Shibata et al, 1985).

Так, исследования последних лет показали, что гинзенозид Rb2 ингибирует процесс метастазирования опухолей (Sato et al., 1994), гинзенозид Ro обладает противовоспалительным действием (Matsuda et al., 1990), семь гинзенозидов Rbi, Rbi, Rc. Re, Rgi, Rg2 и Ro регулируют свертываемость крови и предотвращают образование тромбов (Matsuda et al, 1986). На сегодняшний день достаточно хорошо исследованы механизмы иммуномодулирующего действия женьшеня, связанного с активацией клеток иммунной системы (Jie et al., 1984; Singh et al., 1984; Li et al., 1985; Gao et al., 1994, Mizuno et al., 1994; Scaglione et al., 1990; 1994; Yun et al., 1993; Matsuda et al., 1985). Доказано положительное влияние гинзенозидов на углеводный обмен и эндокринную систему (Hikino, 1985; Tomodo, 1985; Suzuki, Hikimo, 1989; Tchilian et al., 1991). Показано, что омолаживающее действие женьшеня связано с гинзенозидами Rgi, Rg2 и Ro, улучшающими липидный метаболизм крови и предотвращающими атеросклероз сосудов (Kuo et al., 1990), а также с гинзенозидами Rgi и Rbi, которые увеличивают продолжительность жизни нейронов коры головного мозга (Himi et al., 1989). Подтвердилась и противоязвенная активность препаратов женьшеня, которая, как оказалось, обусловлена ингибированием кислотной секреции на уровне центральной нервной систремы (Yamahara et al., 1987; Matsuda et al., 1984; Suzuki et al., 1991).

В состав женьшеня входят и другие вещества, также обладающие биологической активностью. Это полиацетилены (гинзеноины), пептиды, полисахариды, сесквитерпены, а также витамины, смолы, пектин, аминокислоты и микроэлементы (Журавлев, Коляда, 1996). Показано, что полиацетилены и полисахариды женьшеня обладают иммуностимулирующим действием (Hirakura et al., 1991; Gao et al., 1994; Tomoda et al., 1993), полисахариды подавляют развитие язвенной болезни (Sun et al., 1992) и снижают содержание глюкозы в крови и гликогена в печени (Yang et al., 1990). Показано, что полиацетилены женьшеня обладают цитотоксической активностью против раковых клеток в тест-системе in vitro (Matsunaga et al., 1990; Fujimoto et al., 1991).

Многие биологически активные вещества женьшеня в настоящее время еще только изучаются. Так, сравнительно недавно внимание исследователей было привлечено к содержанию в препаратах женьшеня металлического германия и его солей, которые, как полагают, важны для проявления лекарственных свойств растения (Guan Jianqui et al., 1992; Zhang Shuchen et al., 1992). Пристальное внимание в последнее время уделяется и пептидам женьшеня (Konno et al., 1984; Tomoda et al., 1984). Показано стимулирующее действие одного из тетрапептидов женьшеня на пролиферацию клеток в опытах С культурой клеток животных (Yagi et al., 1994), другой пептид оказался важным для проявления гипогликемической активности панаксана A (Tomoda et al., 1984).

Некоторые типы действия препаратов женьшеня пока не связываются с каким-либо определенным веществом. Это относится, например, к способности водных и спиртовых вытяжек женьшеня уменьшать вред, наносимый гамма-лучами, показанной в опытах на животных (Kim et al., 1993). Также малопродуктивными оказываются попытки связать влияние препаратов женьшеня на повышение работоспособности и снижение утомляемости при больших физических нагрузках с какой-либо системой жизнедеятельности организма. В связи с этим, современная медицина относит женьшень к средствам неспецифического действия, то есть к адаптогенам.

В настоящее время женьшень включен в фармакопеи многих стран Европы и Азии, в том числе и в России. Чаще всего применяют настойку, порошок, пилюли при истощении, усталости, пониженной работоспособности, быстрой утомляемости, анемии, общем ослаблении организма в качестве тонизирующих препаратов (Кузнецова, Резникова, 1992). В отечественной медицине применяется также настойка биоженьшеня, обладающая выраженным поливалентным адаптогенным эффектом (Слепян и др., 1989).

В некоторых странах Юго-Восточной Азии женьшень используется не только как лекарственное средство, но и в виде различных пищевых добавок, напитков и продуктов

Грушвицкий, 1961). В нашей стране экстракты женьшеня, иногда в композиции с другими травами, также применяются для изготовления безалкогольных тоников и других напитков, например "Уссурийского бальзама" (Журавлев, Коляда, 1996). Биологически активные вещества женьшеня также являются составной частью различных косметических средств - зубных паст, шампуней (Proserpio, 1976; Leung, 1980), мыла, лосьонов, кремов и других (Shiraishi, 1993; Huang et al, 1990; Minabe et al., 1991; Minamoto, Ivamoto, 1993; Miamoto, 1994; Courtin, 1993).

Даже этого весьма краткого обзора лекарственных свойств женьшеня достаточно, чтобы его экономическая ценность не подлежала сомнению. На сегодняшний день исключительные целебные свойства этого растения находят применение во многих странах мира. Так, через Гонконг, который является главным пунктом мирового распределения женьшеня (But et al., 1994b), ежегодно транспортируется свыше 5 тыс. т сухого корня женьшеня и различных его препаратов. В одной только Японии ежегодный спрос на женьшеневое сырье составляет 1 тыс. т. При этом, мировой спрос на женьшень не только не падает, но и возрастает с каждым годом (Журавлев, Коляда, 1996).

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Корень, Ольга Геннадьевна

Выводы

1. Выявлены полиморфные ген-ферментные системы женьшеня Panax ginseng С.А. Меу и установлен генетический характер наследования полиморфных генов на основании скрещиваний.

2. Впервые изучена изозимная изменчивость в клеточных культурах Р. ginseng. Показана значительная стабильность изоферментного состава как в нетрансформированных, так и в трансформированных клетках женьшеня при культивировании in vitro. Показана способность клеток, трансформированных геном rolC, при морфогенезе восстанавливать изоферментный состав, свойственный интактному растению.

3. Наиболее глубокие изменения изоферментного состава выявлены у линии, трансформированной геном rolB, которая отличалась от остальных клеточных линий и исследованных тканей интактных растений.

4. Впервые установлены параметры генетической изменчивости в природных и в искусственных популяциях женьшеня Panax ginseng С. А. Меу. Установлен более высокий уровень генетической изменчивости в искусственных популяциях женьшеня.

5. Сравнительное изучение генетического полиморфизма двух видов, Р. ginseng и P. quinquefolium, выявило отличия между ними по девяти ген-ферментным системам из 25-ти, в семи из которых обнаружена дивергенция по мономорфным генам и в трех выявлены аллели, специфичные только для одного вида, P. quinquefolium. Индекс сходства между двумя видами составил 73,6 %, величина стандартного генетического расстояния Ней оказалась равной 0,306.

6. Установлено, что оба вида, P. ginseng и P. quinquefolium, имеют низкие показатели изменчивости по сравнению со средними оценками для растительных видов, однако уровень внутривидовой изменчивости P. quinquefolium значительно превышает таковой у P. ginseng. Предложена гипотеза, что более длительная эксплуатация человеком популяций P. ginseng, по сравнению с P. quinquefolium, является одной из вероятных причин обеднения генофонда женьшеня настоящего.

7. Впервые исследована популяционно-генетическая структура женьшеня на обширной части его современного ареала в Приморье. Показано, что современные популяции женьшеня различаются между собой по частотам встречаемости аллелей и

136 степени гетерозиготности. Наиболее гетерозиготными оказались хасанская и спасская популяции.

8. Установлена низкая степень дифференциации природных популяций женьшеня настоящего, которые обладают единым генофондом и связаны интенсивным потоком генов. Примерно 92,5-94,6 % всей наблюдаемой изменчивости женьшеня приходится на внутривыборочную компоненту и лишь 5,4-7,5 % генетической изменчивости распределено между выборками.

9. Величина генетической дистанции между выборками из природных популяций женьшеня колеблется в пределах от 0 до 0,0062, составляя в среднем 0,0016, что значительно ниже средних для растений межпопуляционных расстояний. Показано, что хасанская и спасская популяции генетически не дифференцированы, тогда как выборки из чугуевской популяции образуют две группы, одна из которых объединяет выборки из центральных частей Сихотэ-Алиня, а вторая - из периферических, расположенных ближе к северному пределу распространения женьшеня.

10. С применением генетических маркеров охарактеризована система размножения женьшеня. Впервые установлена способность женьшеня к бесполосеменному размножению (апомиксису) по типу мейотической диплоспории. Показано, что апомиксис у женьшеня является одной из форм самофертильности и ведет к тем же последствиям, т.е. к инбридингу. На модельной популяции показано, что при высокой плотности растений доля аутбридинга у женьшеня может быть весьма значительной (до 75 %).

Заключение

Современные биотехнологии позволяют более рационально использовать в народном хозяйстве природные ресурсы редких и исчезающих растений. Настоящая работа выполнена в рамках одного из активно развивающихся разделов современной биотехнологии - экологической биотехнологии. С целью сохранения и восстановления ценного лекарственного растения женьшеня предпринято комплексное изучение современного состояния его природных популяций и подобраны генетические маркеры, пригодные для разработки технологий восстановления этого вида в естественных местообитаниях.

На первом этапе исследований был проведен анализ 25 ген-ферментных систем женьшеня и проведен поиск маркерных генов. При помощи метода гель-электрофореза было идентифицировано 39 генов, контролирующих ферменты, из которых только три, Gpt-2, Pgm-2 и Pgm-З оказались полиморфными. Для каждого из этих генов было обнаружено по два аллельных варианта, которые наследовались кодоминантно, что подтвердилось в результате генетического анализа. Исследования показали, что выявленные полиморфные локусы Gpt-2, Pgm-2 и Pgm-З стабильно экспрессируются в листьях женьшеня и надежно интерпретируются, в силу чего могут быть использованы в качестве генетических маркеров для популяционно-генетических исследований и для реинтродукции и мониторинга природных популяций женьшеня.

Далее была изучена экспрессия ген-ферментных систем в клеточных культурах женьшеня. Полученные результаты позволяют сделать вывод о значительной стабильности и малой изменчивости изоферментного состава в клетках P. ginseng при культивировании in vitro. Было показано, что экспрессия 27-ми генов, ответственных за 16 ферментных систем из 23-х изученных, не менялась как в процессе дедифференцировки клеток в каллусных линиях, так и в процессе дальнейшей трансформации генами rolC и rolB и редифференцировке трансформированных клеток во время эмбриогенеза и морфогенеза. Изменения в изоферментных спектрах различных клеточных культур были выявлены по 7-ми ферментным системам. Изменчивость по этим ферментам связана, вероятно, с тканеспецифичностью и онтогенезом, а не с мутационным процессом, поскольку подобные изменения были выявлены также в зародышах из семян женьшеня. Исключением является линия, трансформированная геном rolB, изоферментный состав которой отличался и от всех остальных клеточных линий, и от исследованных тканей интактных растений. Было также показано, что листья, продуцируемые клеточной линией 2с-3м, пройдя через процессы трансформации, опухолеобразования и эмбриогенеза, при дальнейшем морфогенезе почти полностью восстановили изоферментный состав, характерный для интактных растений женьшеня. Результаты проведенного анализа свидетельствуют о возможности использования клеточных линий женьшеня для сохранения уникальных генотипов и создания банка генов этого растения.

Следующим этапом работы была оценка внутривидовой изменчивости женьшеня и состояния его генофонда, а также выявления среди его природных популяций центров наибольшей генетической изменчивости. С этой целью, на основании изменчивости 39 структурных генов, контролирующих исследованные ферменты и представляющих случайную выборку из всего генома вида, был описан уровень внутривидового полиморфизма Р. ginseng. На основе собственных и немногочисленных существующих литературных данных, был сделан вывод о высокой генетической консервативности Р. ginseng. Можно было бы предполагать, что некоторая часть аллельного разнообразия Р. ginseng сохранилась среди культивируемых растений, поскольку культивирование женьшеня имеет более чем тысячелетнюю историю. Однако аллозимный анализ не выявил новых аллелей среди генофонда женьшеня, культивируемого в Приморье.

Чтобы ответить на вопрос, насколько оптимален для изучаемого вида современный уровень его изменчивости, была изучена изменчивость по тем же ферментам у родственного женьшеню американского вида Р. quinquefolium и проведено сравнение генетических потенциалов двух видов. Различия между двумя видами женьшеня были выявлены по 9 ген-ферментным системам, в 7 из которых обнаружена дивергенция по мономорфным генам и в 3-х выявлены аллели, специфичные только для одного вида, Р. quinquefolium. В целом, оба вида характеризовались низкими показателями изменчивости по всем параметрам по сравнению со средними оценками для растительных видов, что отражает биологические особенности и общее происхождение Р. ginseng и Р. quinquefolium. Однако сравнение показателей изменчивости двух видов между собой выявило более высокие значения генного разнообразия у американского женьшеня. Одной из возможных причин такого положения может быть то, что природные популяции Р. quinquefolium начали активно эксплуатироваться человеком гораздо позже, чем Р. ginseng и, вследствие этого, их генетический потенциал лучше сохранился.

Далее, было описано распределение генетической изменчивости по ареалу и между популяциями P. ginseng. Для обнаружения генетических различий между отдельными местообитаниями P. ginseng использовали данные об изменчивости маркерных генов Pgm-2, Pgm-3, и Gpt-2 в восьми локальных выборках, которые были взяты в местах наиболее частой встречаемости женьшеня по всему ареалу. Проведенный анализ показал, что все ныне существующие популяции P. ginseng обладают единым генофондом и связаны между собой интенсивным потоком генов. Низкая генетическая изменчивость женьшеня исторически обусловлена и различается в сихотэ-алинских местообитаниях (чугуевская популяция) и на юго-востоке Приморья (спасская и хасанская популяции). Наиболее изменчивыми в Приморье оказались хасанская и спасская популяции женьшеня, которые заслуживают особого внимания как источник материала для реинтродукции природных популяций P. ginseng.

Следующим шагом было описание с помощью молекулярных маркеров особенностей системы размножения Panax ginseng как основного фактора динамики природных популяций. Результаты проведенных исследований с применением молекулярных маркеров позволяют говорить о сложной системе размножения у Р. ginseng. Впервые было показано, что женьшень способен к бесполосеменному размножению, или апомиксису. В зависимости от внешних условий (и, возможно, от индивидуального генотипа) женьшень способен формировать потомство за счет самоопыления, перекрестного опыления и апомиксиса, который у P. ginseng является одним из механизмов самофертильности и имеет аналогичные последствия (инбридинг). Анализ распределения маркерных генов среди потомства женьшеня в модельной популяции показал, что доля перекрестного опыления у женьшеня может составлять до 75 %. Однако, в природных условиях частота перекрестного опыления у дикорастущего женьшеня, по-видимому, лимитируется факторами, определяющими экологию опыления и особенно, плотностью растений в популяциях. Доля инбредного потомства в природных популяциях женьшеня значительно выше и за счет близкородственного скрещивания. Последнее, скорее всего, замещает истинное перекрестное опыление в естественных местообитаниях, где близкорастущие растения женьшеня являются, как правило, родственными. Логично полагать, что в настоящее время перекрестное опыление не вносит существенного вклада в поддержание гетерозиготности и является не частым событием в природных популяциях женьшеня.

Таким образом, впервые была изучена биохимическая изменчивость у женьшеня и выявлены генетические маркеры, с помощью которых было проведено комплексное популяционно-генетическое исследование женьшеня. Полученные результаты предполагают ряд мер по сохранению, восстановлению и рациональному использованию природных популяций женьшеня. К этим мерам, прежде всего, относится увеличение плотности природных популяций, необходимое для поддержания общей гетерозиготности, которая должна осуществляться за счет близкого расположения неродственных растений. Кроме того, генетическую близость индивидуальных растений для интродукции в природные популяции необходимо оценивать с использованием возможно большего количества генетических маркеров, чтобы избежать гомотизации скрытых летальных и полулетальных аллелей в потомствах.

Результаты настоящей работы были использованы в качестве научной базы для разработки технологии восстановления природных популяций женьшеня, которая была принята Думой Приморского края в 1997 г. (Региональная комплексная долговременная программа восстановления (реинтродукции) приморских популяций женьшеня, 19972005).

В рамках этой программы в 1998 г. Управлением лесами Приморского края при поддержке Администрации Приморского края и Экологического Фонда Приморья был основан первый защитный центр женьшеня в Чугуевском районе, в центральном местообитании женьшеня в пределах Сихотэ-Алиня. Выявленные генетические маркеры в настоящее время используются для отбора и маркирования материала для коллекции живых растений, которая создается при защитном центре и призвана решить проблему консервации локальной генетической изменчивости женьшеня. Ведется работа по размножению маточного материала, представленного в коллекции, с тем, чтобы полученное потомство было затем реинтродуцировано в местообитания их родителей с учетом типичных для местообитания частот аллелей. В ближайшее время предполагается также создать подобный центр в Спасском районе Приморья, в центре наибольшего генетического разнообразия женьшеня.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Корень, Ольга Геннадьевна, 2000 год

1. Алтухов Ю.П. Генетический мониторинг популяций в связи с состоянием окружающей среды // Генетика и благосостояние человечества. М.: Наука. 1981. С. 205-220

2. Алтухов Ю.П. Концепция адаптивной нормы популяций и проблема аутбридинга // Вестн. АМН СССР. 1984. № 7. С. 16-21

3. Алтухов Ю.П. Молекулярная эволюция популяций. Молекулярные механизмы генетических процессов. М.: Наука, 1985. С. 100-131

4. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. М.: Наука, 1989. 328 с.

5. Алтухов Ю.П. Внутривидовое генетическое разнообразие: мониторинг и принципы сохранения//Генетика. 1995. Т.31. № 10. С. 1333-1357.

6. Алтухов Ю.П. Аллозимная гетерозиготность, скорость полового созревания и продолжительность жизни // Генетика. 1998. Т. 34. № 7. С. 908-919.

7. Алтухов Ю.П., Сусков И.И., Афанасьев К.И., и др. Частота редких электрофоретических белковых вариантов у человека в норме и при врожденной патологии // Генетика. 1985. Т. 21. № 12. С. 2031-2043.

8. Алтухов Ю.П., Курбатова O.JI. Проблема адаптивной нормы в популяциях человека // Генетика. 1990. Т.26. № 4. С. 583-598.

9. Алтухов Ю.П., Корочкин Л.И., Рычков Ю.Г. Наследственное биохимическое разнообразие в процессах эволюции и индивидуального развития // Генетика. 1996. Т.32. № 11. С. 1450-1473.

10. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А., Омельченко В.Т. Популяционная генетика лососевых рыб. М.: Наука, 1997. 285 с.

11. Айала Ф. Введение в молекулярную и эволюционную генетику. М.: Мир, 1984. 230с.

12. Айала Ф., Кайгер Дж. Современная генетика. М.: Мир, 1988. 280 с.

13. Байков H.A. Корень жизни // Вестн. Манчжурии. 1926. №5. С. 9-29.

14. Баянова В.П. Условия произрастания женьшеня в заповеднике "Кедровая падь" // Тр Горнотаежн. Станции ДВФ АН СССР. 1941. Т. 4. С. 269-293.

15. Белая Г. А. Флора сосудистых растений Еврейской автономной области. Аннотированный список. Владивосток: Дальнаука, 1994. 108 с.

16. Бормотов В.Е., Загрекова В.Н. Мейотическая полиплоидизация у сахарной свеклы // Успехи полиплоидии. Киев: Наук, думка, 1977. С. 108-115.

17. Бродский В.Я., Урываева И В. Сходства и особенности растительных клеток // Клеточная полиплоидия. Пролиферация и дифференцировка. М.: Наука, 1981. С. 111-126.

18. Булгаков В.П., Журавлев Ю.Н., Козыренко М.М., Бабкина Э.Н., Уварова Н.И., Маханьков В.В. Содержание даммарановых гликозидов в различных каллусных линиях Рапса ginseng СЛ. Меу //Растит. Ресурсы. 1991. Вып. 3. С. 94-100.

19. Булгаков В.П., Лауве Л.С., Чернодед Г.К., Ходаковская М.В., Журавлев Ю.Н. Хромосомная вариабельность клеток женьшеня, трансформированных растительным онкогеном rolC // Генетика. 2000. Т. 36. № 2. С. 209-216.

20. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964. 272 с.

21. Буторина А.К., Машкина О.С., Мурая Л.С., Вьюнова Л.Н., Бурдаева Л.М. Образование нередуцированных микроспор у древесных // Изв. СО АН СССР, сер. биол. н. 1990. №2. С. 15.

22. Вайсман Н.Я., Викслер Л.Н. Нередуцированные гаметы в популяциях сахарной свеклы при различных условиях выращивания // С.-Х. Биология. 1988. № 4. С. 123-124.

23. Васильев Н.Г. Самый южный заповедник Дальнего Востока // Охрана природы на Дальнем Востоке. Владивосток: ДВФ СО АН СССР, 1963. Вып. 1. С. 27-33.

24. Бахтин Ю.Б., ред. Генетика соматических клеток. Л.: Наука, 1974. 258 с.

25. Гетманова Е.С., Журавлев Ю.Н., Музарок Т.И. Вегетативное размножение дикорастущего женьшеня в культуре in vitro II Тез. Докл. 2 Съезда Всесоюз. О-ва физиологов растений. Минск, 24-29 сент., 1990 г. М., 1992. 4.2. С. 51.

26. Гончаренко Г.Г., Падутов В.Е., Потенко В.В. Руководство по исследованию хвойных видов методом электрофоретического анализа изоферментов. Гомель: Полеспечать, 1989. 163 стр.

27. Гончаренко Г.Г., Падутов В.Е., Силин А.Е. Генетическая структура, изменчивость и дифференциация в популяциях Pinns sibirica Du Tour II Генетика. 1992. T. 28. № 10. С. 114-127.

28. Гончаренко Г.Г., Потенко В.В., Абдыганыев Н. Изменчивость и дифференциация в природных популяциях ели тяныианской Picea schrenkiana Fisch, et Меу. II Генетика. 1992. T. 28. № 11. С. 83-95.

29. Горпенченко Т.Ю., Корень О.Г. Оплодотворение и апомиксис Panax ginseng С. А. Меу. // Тез. VII Молодежной Конференции Ботаников в Санкт-Петербурге, 2000. Санкт-Петербург, 2000. С. 222.

30. Грушвицкий И.В. Женьшень. Вопросы биологии. JI, 1961. 344с.

31. Грушвицкий И.В., Гутникова З.И., Воробьева П.П., Чуян А.Х., Шаповалов В.К. Инструкция по ускоренному проращиванию семян женьшеня. Владивосток, ДВНЦАНСССР, 1981. 10 с.

32. Гутникова З.И. Женьшень в условиях Супутинского заповедника // Тр. Горнотаеж. станции ДВФ АН СССР. 1941. Т. 4. С. 257-268.

33. Гутникова З.И., Воробьева П.П., Бункина И.А. Женьшень и его возделывание. Владивосток. ДВФ СО АН СССР, 1963. 124 с.

34. Дубинин Н.П., Алтухов Ю.П., Курбатова O.JL, Сусков И.И. Интегральная генетическая характеристика "адаптивной нормы" в популяциях человека // Докл. АН СССР. 1976. Т. 230. № 4. С. 957-960.

35. Еляков Г.Б., Уварова Н.И., Прокопенко Г.И., Маханьков В.В., Слабко М.Г., Фаустов B.C., Константинова H.A., Новиков Е.В., Подгорбунская Н.В. Химическое исследование суспензионной культуры клеток женьшеня // Биотехнология. 1989. Т. 56. № 1. С. 420-426.

36. Животовский Л. А. Статистические методы анализа частот генов в природных популяциях. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ АН СССР. Общая генетика. 1983. Т. 8. С. 76-104.

37. Журавлев Ю.Н., Булгаков В.П., Мороз Л.А., и др. Накопление гинзенозидов в культуре клеток женьшеня Panax ginseng С.А. Меу., трансформированных с помощью Agrobacterium rhizogenes //Докл. АН СССР. 1990. Т. 311. № 3. С. 1017-1019.

38. Журавлёв Ю.Н., Гетманова Е С., Музарок Т.И., Булгаков В.П. Способ микроразмножения женьшеня/ Авторское свид. N 1824114. А01Н 4/00. Приор, от 26.06.1990 г. Опубл. 30.06.93, Бюлл. № 24. (1993)

39. Журавлев Ю.Н., Коляда A.C. Araliaceae: женьшень и другие. Владивосток: Дальнаука, 1996. 280 с.

40. Журавлев Ю.Н., Корень О.Г., Музарок Т.И., Реунова Г.Д., Козыренко М.М., Артюкова Е.В., Илюшко М.В. Молекулярные маркеры для сохранения редких видов растений Дальнего Востока. // Физиология Растений. 1999. Т. 46. № 6. С. 953-964.

41. Захарьева О.И. Полиплоидия в онтогенезе растений // Полиплоидия у растений. М.: Изд-во АН СССР, 1962. С. 98-109.

42. Каранова C.JL, Носов А.М., Пауков В.Н., Шамина З.Б. Продуктивность различных линий диоскореи дельтовидной // Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука. 1986. С. 83-87.

43. Кашин A.C. Половое размножение, агамоспермия и видообразование у цветковых // Журн. Общей Биологии, 1998. Т. 59. № 2. С. 171-191.

44. Кашин A.C., Куприянов П.Г. Апомиксис в эволюции цветковых растений. Саратов: Изд-во Сарат. Ун-та, 1993. 196 с.

45. Кириллов Н. Огородная культура женьшеня //Приморский хозяин. 1913. № 8. С. 1-5.

46. Козыренко М.М., Артюкова Е.В., Реунова Г.Д., Чернодед Г.К., Ходаковская М.В., Журавлев Ю.Н. Геномный полиморфизм в культивируемых клетках женьшеня // Биотехнология. 1997. № 5. С. 10-14.

47. Кордюм Е.Л., Недуха Е.М., Сидоренко П.Г. Структурно-функциональная характеристика растительной клетки в процессе дифференцировки и дедифференцировки. К.: Наук, думка, 1980. 116 с.

48. Корень О.Г. Изучение системы размножения Panax ginseng С.A. Meyer // Тез. VI Молодежной Конференции Ботаников в Санкт-Петербурге, 1997, Санкт-Петербург. 1997. С. 100.

49. Короткий А.М., Лобанова Л.А. О скорости и условиях голоценового торфонакопления на Дальнем Востоке // Палеографический анализ и стратиграфия антропогена Дальнего Востока. Владивосток, изд-во ДВНЦ АН СССР, 1983. С. 109-119.

50. Красная книга РСФСР. Растения. М.: Росагропромиздат, 1988. С. 56

51. Кренке Н.П. Регенерация растений. М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1950. 676 с.

52. Кузнецова М.А., Резникова A.C. Сказания о лекарственных растениях. М.: Высшая школа, 1992. С. 79-84.

53. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений. 1. Изменчивость в онтогенезе//Биополимеры и Клетка. 1994. Т. 10. № 6. С. 5-35.

54. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений. 2. Изменчивость в природе //Биополимеры и Клетка. 1995. Т.П. № 6. С. 5-40.

55. Кунах В. А. Геномная изменчивость соматических клеток растений. 3. Каллусообразование in vitro //Биополимеры и Клетка. 1997. Т. 13. № 5. С. 362-370.

56. Кунах В. А. Геномная изменчивость соматических клеток растений. 4. Изменчивость в процессе дедифферренцировки и каллусообразования in vitro И Биополимеры и Клетка. 1998. Т. 14. № 4. С. 298-319.

57. Куренцова Г.Э. Некоторые данные к биологии и культуре женьшеня // Сов. Ботаника. 1944. № 1.С. 47-50.

58. Ларионова А Я. Наследование аллозимных вариантов у ели сибирской {Picea obovata Ledeb.) // Генетика. 1995. Т. 31. № 9. С. 1261-1267.

59. Левитес Е.В. Генетика изоферментов растений. Новосибирск: Наука, 1986. 144с.

60. Левонтин Р. Генетические основы эволюции. М.: Мир, 1978. 350с.

61. Ли Ч. Введение в популяционную генетику. М.: Мир, 1978. 555с.

62. Липаева Л.И. Полиплоидизация тканей в онтогенезе // Полиплоидия у растений. М.: Изд-во АН СССР, 1962. С. 90-97.

63. Малецкий С.И. Сцепленное и несцепленное наследование генов при автосегрегации в партеногенетических потомствах растений //Генетика. 1997. Т. 33. № 10. С. 13331340.

64. Малецкий С.И., Левитес Е.В., Малецкая Е.И., Шаворская O.A. Автосегрегация в партеногенетических потомствах сахарной свеклы (Beta vulgaris L.) // Докл. Акад. Наук. 1997. Т. 354. № 5. С. 705-706.

65. Малецкий С.И., Левитес Е.В., Малецкая Е.И., Овечкина О.Н. Автосегрегация и сцепленное наследование в агамоспермных потомствах сахарной свеклы (Beta vulgaris L.) // Генетика. 1998. T. 34. № 4. С. 520-527.

66. Малышев A.A. Женьшень. М.: Агропромиздат, 1991. 144 с.

67. Малышев C.B., Картель H.A. Молекулярные маркеры в генетическом картировании растений // Молекуляр. Биол. 1997. Т. 31. С. 197-208.

68. Маханьков В.В., Малиновская Г.В., Константинова H.A., Уварова Н.И. Химическое исследование биомассы культуры клеток женьшеня. IV. Количественный анализ гинзенозидов суммарной гликозидной фракции методом ВЭЖХ // Химия Прир. Соед. 1990. № 3. С. 361-363.

69. Нейштадт М.И. История лесов и палеогеография СССР в голоцене. М.: изд-во АН СССР, 1957. 403с.

70. Оганисян A.C., Кочиева Е.З., Рысков А.П. Маркирование видов и сортов картофеля с помощью метода RAPD-PCR//Генетика. 1996. Т. 32. С. 448-451.

71. Падутов В.Е., Гончаренко Г.Г., Поджарова З.С. Генетическая изменчивость у Pinns sylvestris (L.) // ДАН БССР. 1989. Т. 33. № 11. С. 1039-1042.

72. Петров Д.Ф. Генетически регулируемый апомиксис как способ закрепления гетерозиса и его значение для селекции. // Апомиксис и селекция. М.: Наука, 1970. С. 21-33.

73. Петровская-Баранова П.Т. , Эмбриологическое исследование женьшеня // Эмбриологические исследования покрытосемянных. Труды Главного Государственного Ботанического Сада. 1959. Т. 4. С. 211-225.

74. Писецкая Н.Ф. Некоторые особенности роста культуры изолированной ткани женьшеня: Автореф. Дис. . канд. биол. наук. 1971. 21 с.

75. Потенко В.В., Кривко В.Г. Изменчивость и сцепление изоферментных локусов у ели восточной Picea orientalis (L.) Link. II Генетика. 1993. T. 29. № 4. С. 632-637.

76. Развитие природной среды юга Дальнего Востока. М.: Наука, 1988. 238с.

77. Райдер К., Тейлор К. Изоферменты. М.: Мир, 1983. 106 с.

78. Региональная комплексная долговременная программа восстановления (реинтродукции) приморских популяций женьшеня до 2005 года. Постановление Думы Приморского края № 550, 30.12.1997. Владивосток, 1997, с. 1-7, с приложениями.

79. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск: изд-во "Вышэйшая школа", 1973. 320с.

80. Сапожникова Т.Г. Распространение и охрана редких видов сосудистых растений Хабаровского края и Еврейской автономной области. Владивосток; Хабаровск: Дальнаука, 1994. 126 с.

81. Сарнацкая В.В. Физиологические аспекты опухолевого роста растений. К.: Наук, думка, 1993.152 с.

82. Семериков B.JL, Матвеев A.B. Изучение генетической изменчивости лиственницы сибирской (Larix sibirica Ldb.) по изоферментным локусам // Генетика. 1995. Т. 31. №8. С. 1107-1113.

83. Сиволап Ю.М., Календарь Р.Н., Чеботарь C.B. Генетический полиморфизм злаковых растений при помощи ПЦР с произвольными праймерами // Цитология и Генетика. 1994. Т. 28. С. 54-61.

84. Сиволап Ю.М., Календарь Р.Н., Нецветаев В.П. Использование продуктов полимеразной цепной реакции для картирования генома ячменя (Hordeum vulgare L.) // Генетика 1997. T. 33. С. 53-60.

85. Сиволап Ю.М., Календарь Р.Н., Нецветаев В.П., Чапля А.Е. Маркерный анализ некоторых QTL ячменя с помощью RAPD и изоферментов // Цитология и Генетика. 1997а. Т. 31. С. 39-45.

86. Соколов В.Е., Шатуновский М.И. Можно ли сохранить биологическое разнообразие? /7 Вестн. РАН. 1995. Т. 66. № 5. С. 422-424.

87. Солнцева М.П. Основы эмбриологической классификации апомиксиса покрытосемянных. // Апомиксис и селекция. М.: Наука, 1970. С. 87-100.

88. Тахтаджян А.Л. Система магнолиофитов. Л.: Наука, 1987. 439 с.

89. Тимерьянов А.Ш., Старова Н.В., Бахтиярова P.M. Генетическая изменчивость лиственницы Сукачева (Lasrix sukaczewii Dyl.) на Южном Урале // Генетика. 1996. Т. 32. №2. С. 267-271.

90. Уварова Н.И, Маханьков В.В., Прокопенко Г.И., Слабко М.Г. Химический состав суспензионной культуры женьшеня // Химия Природ. Соед. 1987. № 3. С. 461-462.

91. Федоренко О.М., Олимпиенко Г.С. Генетическое разнообразие природных популяций Festucapratensis в Карелии // Генетика. 1998. Т. 34. № 3. С. 379-384.

92. Хопкинс Д.М. История уровня моря в Берингии за последние 250000 лет. // Берингия в кайнозое. Материалы Всесоюзн. Симп. "Берингийская суша и ее значение для развития голарктических флор и фаун в кайнозое", Хабаровск, 1973, 10-15 мая. 1976. С. 9-27

93. Шамина З.Б. Стратегия получения мутантных штаммов клеток растений-продуцентов биологически активных веществ // Физиология Растений. 1994. Т. 41. № 6. С. 879884.

94. Шишкин И.К. Материалы к флоре бассейна р. Имана. Владивосток: Изд-во Владивост. отд-ния Русского геогр. о-ва, 1930. 173 с.

95. Шлотгауэр С.Д. Антропогенная динамика растительности Хабаровского края // Вестн. ДВО РАН. 1993. № 6. С. 84-90.

96. Юрцев Б.А. Проблемы ботанической географии Северо-восточной Азии. // Ленинград: Наука, 1974. 160с.

97. Яковлев И.А., Гемери Д., Пауле Л., Стародубцева В.В. Генетическая изменчивость дуба черешчатого (Quercus robur L.) в левобережной части республики Марий Эл И Генетика. 1999. Т. 35. № 7. С. 925-932.

98. Adams W.T., Joly R.J. Genetics of allozyme variants in loblolli pine // J. Heredity. 1980. V. 71. P. 33-40.

99. Allendorf F.W., Knudsen K.L., Blake G.M. Frequencies of null alleles of enzyme loci in natural populations of ponderosa and red pine // Genetics. 1982. V. 100. P. 497-504.

100. Altukhov Yu.P. Population genetics: diversity and stability. L.: Harwood Acad. Publ., 1990. 362 p.

101. Altukhov Yu.P., Salmenkova E.A. Straying intensity and genetic differentiation in salmon populations // Aquaculture and Fisheries Management. 1994. V. 25, suppl. 2. P. 99-120.

102. Aravanopoulos F.A., ZsufFa L., Chong K.X. Inheritance of isozymes in Salix eriocephala Michx. // J. Heredity. 1994. V. 85. P. 381-388.

103. Arnold M.L., Buckner C.M., Robinson J.J. Pollen-mediated introgression and hybrid speciation in Louisiana irises // Proceed. Nat. Acad. Sci. USA. 1991. V. 88. P. 1398-1402.

104. Arroyo M.T.K. Electrophoretic studies of genetic variation in natural populations of allogamous Limnanthes alba and autogamous Limnanthes floccosa (Limnanthus) //Heredity. 1975. V. 35. N2. P. 153-164.

105. Asaka I., Hirotani M., Asada Y., Furuya T. Ginsenoside contents of plantlets regenerated from

106. Ophiomusium lymani H Marine Biol. 1974. V. 27. P. 51-57. Avise J.C., Selander R.K. Evolutionary genetics of cave-dwelling fishes of the genus Astyanax

107. Beet E.A. The genetics of sickle cell trait in a Bantu tribe // Ann. Eugenics. 1949. V. 14. P. 279286.

108. BohmB.A. Intraspecific flavonoid variation// Bot. Rev. 1987. V. 53. P. 197-279.

109. Bonnell ML., Selander R.K. Elephants seals: genetic variation and near extinction // Science. 1974. V. 184. P. 908-909.

110. Brown A.H.D. Enzyme polymorphism in plant populations // Theor. Pop. Biol. 1979. V. 15. P. 1-42.

111. Brown A.H.D. Barley. // In: Isozymes in plant genetics and breeding. Part B. Amsterdam: Elsevier, 1983. p. 57-77.

112. Bulgakov V.P., Khodakovskaya M. V., Labetskaya N.V., Chernoded G.K., Zhuravlev Y. N. The impact of plant rolC oncogene on ginsenoside production by ginseng hairy root cultures // Phytochemistry. 1998. V. 49, N 7. P. 1929-1934.

113. BushR.M., Smouse P.E., Ledig F.T. The fitness consequences of multiple-locus heterozygosity and growth rate in pitch pine (Pinus rigida Mill.) // Evolution. 1987. V. 41. P. 787-798.

114. Case S.M., Haneline P.G., Smith M.F. Protein variation in several species of Hyla // Syst. Zool. 1974. V. 24. P. 281-295.

115. Chakraborty R., Nei M. Bottleneck effects on average heterozygosity and genetic distance with the stepwise mutation model // Evolution. 1977. V. 31. P. 347-356.

116. Chalmers K.J., Waugh R., Sprent J.I., Simons A. J., Powell. W. Detection of genetic variation between and within populations of Gliricidia sepium and G. maculata using RAPD markers//Heredity. 1992. V. 69. P. 465-472.

117. Clegg M.T., Allard R.W., Kahler A.L. Is the gene the unit of selection? Evidence from two experimental plant populations//Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1972. V. 69. P. 2474-2478.

118. Clegg M.T., Gaut B.S., Learn G.H., Morton B.R. Rates and patterns of chloroplast DNA evolution//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 6795-6801.

119. Conkle M.T. Isozyme variation and linkage in six conifer species // Proc. North Am. Trees and For. Ins., Berkeley, 1981. P. 11-17.

120. Copes D.L. Isoenzyme uniformity in Western Red Cedar seedlings from Oregon and Washington//Can. J. For. Res. 1981. V. 11. P. 451-453.

121. Courtin O. Cosmetic composition for protection against atmospheric pollutants / Patent FR N 2688137 C1.A61K7/40, 10 Sep 1993, Appl. 04 Mar 1992. (1993)

122. Crins W.J., Bohm B.A., Carr G.D. Flavonoids as indicators of hybridization in a mixed population of Lava-Colonizing Havaiian tarweeds (Asteracea: Heliantheae: Madiinae) // Syst. Bot. 1988. V. 13. P. 567-571.

123. DiCosmo F., Towers G.H.N. Stress and secondary metabolism in cultured plant cells // Recent Advantages in Phytochem., v. 18. Phytochemical adaptation to stress. N.Y.: Plenum Publ. Corp., 1984. P. 97-175.

124. Dobzhansky Th. A review of some fundamental concepts and problems of population genetics // Gold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1955. V. 20. P. 1-15.

125. Dobzhansky T. Genetic of the evolutionary process // Columbia Univ. Press, N. Y., 1970. 385 p.

126. Dong Wanchao, Chao Junghui, Liu Jizhong. A studies on the chemical components in variety and type of Panax ginseng in China // Proceed. Int. Ginseng Conf., Changchun, 1992, Aug. 10-14. 1992. P. 107-108.

127. Ehrlich P.R., Raven P.H. Differentiation of populations // Science. 1969. V. 165. P. 1228-1232.

128. Ellstrand N.C., Levin D.A. Recombination system and population structure in Oenothera / Evolution. 1980. V. 34. P. 923-933.

129. Elyakov G.B., Strigina L.I., Shapkina E.V., Aladyina N T., Korailova S.A., Dzizenko A.K. The probable structure of the true aglycones of ginseng glycosides // Tetrahedron Lett. 1968. V. 24. P. 5483.

130. Fabler C., Elers B. Panax ginseng production in Southern Germany il In: H.Chr. Weber, D. Zeuske, S. Imhof, eds. Ginseng in Europe. Proceedings of the First European Ginseng Congress. Philipps-Universitat, Marburg, Germany, 1998. P. 207-214.

131. Falk D.A., Olwell M. Scientific and policy considerations an restoration and reintroduction of endangered species//Rhodora. 1992. V. 94. P. 287-315.

132. Falk D.A., Holsinger K.E., eds. Genetics and conservation of rare plants. N-Y., Oxford: Oxford Univ. Press, 1991. 490 p.

133. Falk D A., Millar C.I., Olwell M., eds. Restoring diversity. Strategies for reintroduction of endangered plants. Washington, Covelo: Island Press, 1996. 505 p.

134. Fillipini, F., Rossi, R., Marin, O., Trovato, M., Costantino, P., Downey, P.M., Lo Schiavo, F. and Terzi, M. A plant oncogene as a phosphatase // Nature. 1996. V. 379. P. 499-500.

135. Finkeldey R. Inheritance of isozyme phenotypes of the native Paulownia ssp. in Taiwan // J. Heredity. 1992. V. 82. N 2. P. 140-143.

136. Fowler D.R., Morris R.W. Genetic diversity in Red Pine: evidence for low genetic heterozygosity // Can. J. For. Res. 1977. V. 7. P. 343-347,

137. Fujimoto Y, Satoh M., Takeuchi N., Kirisawa M. Cytotoxic activity of polyacetylene components in Panax ginseng C.A. Meyer // Chem. Pharm. Bull. 1991. V. 39, N 2. P. 521-523.

138. Furuya T. Production of useful compounds by plant cell cultures de novo synthesis and biotransformation// Yakugaku zasshi. 1988. V. 108. N 8. P. 675-696.

139. Furuya T., Kojima H., Syono K., Ishii T. Isolation of panaxatriol from Panax ginseng callus // Chem. Pharm. Bull. 1970. V. 18. N 11. P. 2371-2372.

140. Furuya T., Kojima H., Syono K., Ishii T., Uotani K., Nishio M. Isolation of saponins and sapogenins from callus tissue of Panax ginseng H Chem. Pharm. Bull. 1973. V.21. N 1. P. 98-101.

141. Gao H., Wang F.Z., Lien E.J., Trousdale M.O. Immunostimulating polysaccharide from Panax-Notoginseng // Abstracts of Papers of the American Chemical Society. 1994. V. 207. P. 113.

142. Godoy-Hernandes G., Loyola-Vergas V.M. Effect of fungal homogenate enzyme inhibitors and osmotic stress on alkaloid content of Catharantus roseus cell suspension cultures // Plant Cell Rep. 1991. V. 10. N 10. P. 537.

143. Godt M.J.W., Johnson B.R., Hamrick J.L. Genetic diversity and population size in four rare southern Appalachian plant species // Conservation Biol. 1996. V. 10. N 3. P. 796-805.

144. Gong Xichen. The historical process of ginseng farming in China // Proceed, of Int. Ginseng Conf., Changchun, Aug. 10-14, 1992. P. 198.

145. Goodman M.M., Stuber C.W., Newton K.J., Weissinger H.H. Linkage relationships of 19 enzyme loci in maize // Genetics. 1980. V. 96. P. 697-710.

146. Goodman M.M., Newton K.J., Stuber C.W. Malate dehydrogenase. Viability of cytosolic nulls and lethality of mitochondrial nulls in maize // Proceed. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. V. 78. P. 1783-1785.

147. Gorman G.C., Soule M., Yang S.Y., Nevo E. Evolutionary genetics of insular Adriatic lizards // Evolution. 1975. V. 29. P. 52-71.

148. Gottlieb L.D. Conservation and duplication of isozymes in plants // Science. 1982. V. 216. P. 373-380.

149. Mill.) //Evolution. 1982. V. 36. P. 387-402. Hamrick J.L. Genetic variation and longevity // Topics in Plant Population Biology / Eds.

150. Harris H. Enzyme polymorphism in men // Proceed. Roy. Soc., London B. 1966. V. 164. P. 298-310.

151. Hedric P. Shooting the RAPDs // Nature. 1992. V. 355. P. 679-680.

152. Henning V., Yanofsky C. An electrophoretic study of mutationally altered proteins of the triptophan synthetase of Escherichia coli II J. Mol. Biol. 1963. V. 6. P. 16-21.

153. Hirakura K., Morita M., Nakajima K., Ikeya Y., Mitsuhashi H. Polyacetylenes from the roots of Panax ginseng II Phytochemistry. 1991. V. 30. N 10. P. 3327-3333.

154. Hoelzel A.R., ed. Molecular genetic analysis of populations. A practical approach. Tokyo: IRL Press, 1992. 315 p.

155. Hoo G., Tseng Ch.-J. Araliaceae //FX. Republ. Popular. Sin. 1978. V. 54. P. 1-210.

156. Huang M., Hang W., Zhong Q. Hair growth stimulating preparations containing medicinal plant extracts / Patent CN N 1043624 CI. A61K7/06, 11 Jul. 1990, Appl. 23 Dec. 1988. (1990)

157. Hubby J.L., Throckmorton L.H. Protein differences of Drosophila. II. Comparative species genetics and evolutionary problems. I I Genetics. 1965. V. 52. P. 203-215.

158. Hubby J.L., Lewontin R.C. A molecular approach to the study of genie heterozygosity in natural populations. I. The number of alleles at different loci in Drosophila pseudoobscura I I Genetics. 1966. V. 54. P. 577-591.

159. Huff D.R., Peakall R., Smouse P.E. RAPD variation within and among natural populations of outcrossing buffalograss Buchloe dactyloides (Nutt.) Engelm. // Theor. Appl. Genet. 1993. V. 86. P. 927-934.

160. Univ. Tokyo. Sect. 3. 1963. Bot. 8.8. Karron J.D. A comparison of levels of genetic polymorphism and self-compatibility in geographically restricted and widespread plant congeners // Evolutionary Ecology. 1987. V. l.P. 47-58.

161. Kirkpatrick R E.В., Soltis P.S., Soltis D.E. Mating system and distribution of genetic variation in Gymnocarpium dryopteris ssp. Disjunctum II Amer. J. Bot. 1990. V. 77. N 8. P. 11011110.

162. Ко K.S., Nogushi H., Ebizuka Y., Sankawa U. Oligoside production by hairy root cultures transformed by Ri plasmids // Chem. Pharm. Bull. 1989. V. 37. N 1. P. 245-248.

163. Koebner R.M.D., Shepherd K.W. Shikimate dehydrogenase a biochemical marker for group 5 chromosomes in Triticinae // Genet. Res., Camb. 1982. V. 41. N 2. P. 209-213.

164. Konno Ch., Sugiyama К., Капо M. Isolation and hypoglycaemic activity of panaxans А, В, C, D and E, glycans of Panax ginseng roots // Planta Med. 1984. V. 50. P. 434-436.

165. Koren O., Muzarok Т., Zhuravlev Yu., Chorosh K. Electrophoresis of Panax ginseng storage proteins // Abstracts of the XV Int. Bot. Congress, Tokyo, 1993. N 7138.

166. Koren O., Zhuravlev Yu. Allozyme variations in two ginseng species, Panax ginseng and Panax quinquefolium И Abstracts of the 7th Int. Symposium on Ginseng. Sept. 22-25, 1998, Seoul, Korea. 1998. P. 123.

167. Kresovich S., Williams J.G.K., McFerson J.R. Characterization of genetic identities and relationships of Brassica oleraceae L. via a random amplified polymorphic DNA assay // Theor. Appl. Genet. 1992. V. 85. P. 190-196.

168. Kuittinen H., Muona O., Karkkainen K., Borzan Z. Serbian spruce, a narrow endemic, contains much genetic variation // Can. J. For. Res. 1991. V. 21. P. 363-367.

169. Kwang-Tae Choi, Yong-Eiu Choi, Deok-Chun Yang, Ji-Chang Park. 1998. Somatic embryogenesis in Korean ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) // "Advances in Ginseng

170. Pinus torreyana Parry ex. Carr) //Evolution. 1983. V. 37. P. 79-85. Leung A.Y. Encyclopedia of common natural ingredients used in food, drugs and cosmetics.

171. Evolution. 1974. V. 27. P. 622-632. Levin D.A., Ritter K., Ellstrand N.C. 1979. Protein polymorphism in the narrow endemic

172. Markert C.L., Moller F. Multiple forms of enzymes: tissue, ontogenetic, and species specific patterns//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1959. V. 45. P. 753-763.

173. Martin G.B., Williams J.G.K., Tanksley S.D. Rapid identification of markers linked to a pseudomonas resistance gene in tomato by using random primers and near-isogenic lines //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V. 88. P. 2336-2340.

174. Matsumoto Sh. Ginseng tissue culture for enchanted induction of adventitious embryo / Patent JPN 05244838 C1.A01H4/00, 24 Sep. 1993. Appl. 05 Mar. 1992. (1993)

175. Matsunaga H., Katano M., Yamamoto H, Fujito H., Mori M., Takata K. Cytotoxic activity of polyacetylene compounds in Panax ginseng Meyer C.A. // Chem. Pharm. Bull. 1990. V. 38. N 12. P. 3480-3482.

176. May B. Starch gel electrophoresis of allozyraes /¡In: Molecular genetic analysis of populations: a practical approach / Ed. A.R. Hoelzel. Oxford Univ. Press, 1992. P: 1-27 and 271-280.

177. Mayr E. Populations, species and evolution. // Harvard Univ. Press, Cambridge, Mass., 1970. 249 p.

178. McCauley D.E. Contrasting the distribution of chloroplast DNA and allozyme polymorphism among local population of Silene alba: implication for studies of gene flow in plants I I Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 8127- 8131.

179. McCommas S.A., Bryant E.H. Loss of electrophoretic variation in serially bottlenecked populations//Heredity. 1990. V. 64. P. 315-321.

180. McLeod M.J., Guttman S.I., Esbaugh W.H. Peppers (Capsicum). / In: Isozymes in plant genetics and breeding. // Tanksley S.D., Orton T.J., eds. Part B. Amsterdam: Elsevier, 1983. P. 189-201.

181. Minabe T., Fujii K., Kanetani A., Tamai A. Hair grows stimulating preparations containing CAMP, pyruvic acid, fermentation metabolites, and natural products / Patent JP N 03167113 CI A 61K7/06, 19 Jul. 1991, Appl. 24 Nov. 1989. (1991)

182. Minamoto H., Ivamoto Y. Hair preparations containing Aconitum extracts in combination with hair growth stimulants / Patent JP N 05286837 CI A61K7/06, 02 Nov 1993, Appl. 03 Apr 1992. (1993)

183. Molina-Freaner F., Jain S.K. Isozyme variation in Californian and Turkish populations of the colonizing species Trifolium hirtum II J. Heredity. 1992. V. 83. P. 423-430.

184. Moran G.F., Bell J.C. Eucalyptus / In: Isozymes in plant genetics and breeding. // Tanksley S.D., Orton T.J., eds. Part B. Amsterdam: Elsevier, 1983. P. 423-441.

185. Moran G.F., Hopper S.D. Genetic diversity and the insular population structure of the rate granite rock species, Eucaliptus caesia Benth. // Australian J. Bot. 1983. V. 31. P. 161172.

186. Moran G.F., Bell J.C., Matheson A.C. The genetic structure and levels of inbreeding in a Pinus radiata D. Don seed orchard // Silvae Genetica. 1980. V. 29. P. 190-193.

187. Muller-Starck G., Zanetto A., Kremer A., Herzog S. Inheritance of isozymes in sessile oak (Quercus petraea (Matt.) Liebl.) and offspring from interspecific crosses // Forest Genetics. 1996. V. 3. N 1. P. 1-12.

188. Muzarok T., Koren O., Reunova G., Kozyrenko M., Artyukova E., Zhuravlev Yu. Collection of Panax ginseng plants from natural populations // Abstracts of the 7th Int. Symposium on Ginseng. Sept. 22-25,1998, Seoul, Korea. 1998. P. 91.

189. Myamoto T. Hair tonics containing gyaluronic acid and plant extracts / Patent JP N 0609349 CI A61K7/06, 18 Jan 1994, Appl. 24 Jun 1992. (1994)

190. Neel J.V. The inheritance of sickle cell anemia // Science. 1949. V. 110. P. 64-66.

191. Nei M. Interspecific gene differences and evolutionary time estimated from electrophoretic data on protein identity. // Amer. Naturalist. 1971. V. 105. N 945. P. 385-398.

192. Nei M. Genetic distance between populations. // Ibid. 1972. V. 106. N 949. P. 283-292.

193. Nei M. Molecular population genetics and evolution. Amsterdam: North-Holland Publ. Co., 1975. 288 p.

194. Nei M. Molecular evolutionary genetics. N. Y.: Columbia Univ. Press, 1987. 363 p.

195. Nei M., Maruyama T., Chakraborty R. The bottleneck effect and genetic variability in populations // Evolution. 1975. V. 29. P. 1-10.

196. Nei M., Li W.-H. Mathematical model for studying genetic variation in terms of restriction endonucleases //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. V. 76. N 10. P. 5269-5273.

197. Nevo E. Genetic variation in natural populations: patterns and theory // Theor. Pop. Biol. 1978. V. 13. P. 121-177.

198. Nevo E., Kim G.J., Shaw C.R., Thaler C.S. Genetic variation, selection and speciation in Thomomys talpoides pocket gophers // Evolution. 1974. V. 28. P. 1-23.

199. Nevo E., Beiles A., Ben-Shlomo P. The evolutionary significance of genetic diversity: ecological, demographic and life history correlates // Lect. Notes Biomath. 1984. V. 53. P. 13-213.

200. Newbury H.J., Ford-Lloyd B.V. The use of RAPD for assessing variation in plants // Plant Growth Regulation. 1993. V. 12. P. 43-51.

201. Odnevall A., Bjork L. Effects of light on growth, morphogenesis and ginsenoside formation in tissue cultures of Panax ginseng II Biochem. Pflanzen. 1989. V. 185. P. 253-259.

202. Ohno S. Evolution by gene duplication. B.: Spring.-Verl., 1970. 178 p.

203. O'Malley D.M., Allendorf F.W., Blake G.M. Inheritance of isozyme variation and heterozygosity in Pinusponderosa II Biochem. Genet. 1979. V. 17. P. 233-250.

204. Pauling L., Itano H.H., Singer S.J., Wells I.C. Sickle cell anemia: a molecular disease // Science. 1949. V. 110. P. 543-548.

205. Potenko V.V., Velikov A.V. Genetic diversity and differentiation of natural populations of Pinus Koraiensis (Sieb. et Zucc.) in Russia I I Silvae Genetica. 1998. V. 47. N 4. P. 202208.

206. Powell J.R. Genetic polymorphism in varied environments // Science. 1971. V. 174. P. 10361037.

207. Proctor J.T.A., Bailey W.G. Ginseng: industry, botany, and culture // Horticult. Rev. 1987. V. 9. P. 187-236.

208. Ramshaw J.A.M., Coyne J.A., Lewontin RC. The sensitivity of gel electrophoresis as a detector of genetic variation// Genetics. 1979. V. 93. P. 1019-1037.

209. Rick C.M., Fobes J.F., Holle M. Genetic variation in Lycopersicon pimpinellifolium: evidence of evolutionary change in mating systems //Plant Syst. Evol. 1977. V. 127. P. 139-170.

210. Robins P.J., Walton N.J., Hamill J.B., Parr A.J., Rhodes M.J.S. Strategies for the genetic manipulation of alkaloid-producing pathways in plants // Planta Medica. 1991. V. 57. N l.P. 27-35.

211. Rogers J.S. Measures of genetic similarity and genetic distance. Univ. Texas Publ., 1972. P. 145-153.

212. Philaenus spumarium (L.) (Homoptera). // Genetica. 1973. V. 44. P. 459-473. Scheidegger A. Plant biotechnology goes commercial in Japan // Trands in biotechnology. 1990. V. 8. P. 187-198.

213. Torrey Botanical Club. 1985. V. 112. P. 129-133. Schnabel A., Hamrick J.L. Organization of genetic diversity within and among populations of

214. Cleditsia triacanthos (Leguminosae) // Amer. J. Bot. 1990. V. 77. N 8. P. 1060-1069. Schwaegerle K.E., Schaal B.A. Genetic variability and founder effect in the pitcher plant

215. Sarracenia purpurea!,. //Evolution. 1979. V. 33. P. 1210-1218. Seiander R.K., Kaufman D.W. Genetic variability and strategies of adaptation in animals //

216. Proceed. Natl. Acad. Sei. USA. 1973. V. 70. P. 1875-1877. Shaw C.R. Electrophoretic variation in enzymes // Science. 1965. V. 149. P. 936-943. Shaw C.R., Prasad R. Starch-gel electrophoresis of enzymes a compilation of recipes I I

217. CI A61K7/50,16 Nov 1993, Appl. 30 Nov 1990. (1993) Slatkin M. Gene flow in natural populations//Ann. Rev. Ecol. Syst. 1985. V. 16. P. 393-430. Solbrig O.T. Breeding system and genetic variation in Leavenworthia II Evolution. 1972. V. 26. P. 155-160.

218. Soltis P.S. et al., eds. Molecular systematics of plant. N.Y.; London: Chapman and Hall, 1992. 434 p.

219. Soltis P.S., Soltis D.E., Tucker T.L. Allozyme variability is absent in the narrow endemic Bensoniella oregona (Saxifragaceae) // Conservation Biol. 1992 b. V. 6. N 1. P. 131134.

220. Stebbins G.L. Chapter X. Apomixis in relation to variation and evolution // Variation and evolution in plants. N.Y.: Columbia Univ. Press, 1950. P. 380-419.

221. Stebbins G.L. Self-fertilization and population variability in the higher plants // Amer. Naturalist. 1957. V. 91. P. 337-354.

222. Sun Guodong, Zhang Qi. Somatic embryogenesis from anther and seed embryo of Panax ginseng I I Kekue Tongbao. 1986. V. 31. P. 142-143.

223. Sun X.B., Matsumoto T., Yamada H. Purification of an antiulcer polysaccharides from the leaves of Panax ginseng // Planta Medica. 1992. V. 58. N 5. P. 445-448.

224. Systma K.J., Schaal B.A. Genetic variation, differentiation, and evolution in a species complex of tropical shrubs based on isozymic data // Evolution. 1985. V. 39. P. 582-593.

225. Szmidt A.E., Wang X.-R., Lu M.-Z. Empirical assessment of allozyme and RAPD variation in Pinus sylvestris (L.) using haploid tissue analysis // Heredity. 1996. V. 76. P. 412-420.

226. Tanksley S.D., Orton T.J., eds. Isozymes in plant genetics and breeding. Amsterdam: Elsevier Science Publishers B.V. Part A, 516 p. Part B, 1983. 472 p.

227. Templeton A.R. Coadaptation and outbreeding depression // Conservation Biology: the sciences of scarcity and diversity / Soule M.E., ed. Sunderland, MA: Sinauer, 1986. P. 105-116.

228. Tingey S.V., del Tufo J.P. Genetic analysis with random amplified polymorphic DNA markers //PlantPhysiol. 1993. V. 101. P. 349-352.

229. Tomoda M., Shimada K., Konno Ch et al. Partial structure of panaxan A, a hypoglycaemic glycan of Panax ginseng roots // Planta Med. 1984. V. 50. P. 436-438.

230. Tomoda M., Takeda K., Shimizu N., Gonda R, Ohara N., Takada K., Hirabayashi K. Characterization of 2 acidic polysaccharides having immunological activities from the roots of Panax ginseng // Biol. Pharm. Bull. 1993. V. 16. N 1. P. 22-25.

231. Valentine J.W., Ayala F.J. Genetic variability in krill // Proceed. Natl. Acad. Sci. USA. 1976. V. 73. P. 658-660.

232. Vallejos C.E. Enzyme activity staining // In: Isozymes in plant genetics and breeding / Eds. S.D. Tanksley and T.J. Orton. Amsterdam: Elsevier Science Publishers B.V. Part A, 1983. P. 469-516.

233. Van Ommen G.-J. B., Boer P.H., Groot G.S.P. Mutations affecting RNA splicing and the interaction of gene expression of the yeast mitochondrial loci cob and oxi-3 // Cell. 1980. V. 20. P. 173-183.

234. Waller D M., O'Malley D.M., Gawler S.C. Genetic variation in the extreme endemic

235. Warwick S.I., Gottlieb L.D. Genetic divergence and geographic speciation in Layia

236. Acids Res. 1990. V. 18. P. 7213-7218. Wendel J.F., Parks C.R. Genetic control of isozyme variation in Camellia japonica L. //J.

237. Xiao-jun Ma, Xiao-guan Wang, Pei-gen Xiao, De-yuan Hong. A study on germplasm of Panax ginseng and its DNA fingerprinting // Advances of Ginseng Research Proceed, of the 7th Int. Symp. on Ginseng, Seoul, Korea, Sept. 22-25. 1998. P.337.

238. Yagi A., Akita K., Ueda T., Okamura N., Itoh H. Effect of a peptide from Panax ginseng on the proliferation of baby hamster kidney-21 cells // Planta Med. 1994. V. 60. N 2. P. 171174.

239. Yang S.H., Wheeler L.L., Bock I.R. Isozyme variation and phylogenetic relationships in the Drosophila bipectinata species complex. Univ. Texas Publ., 1972. P. 213-227.

240. Yang M., Wang B., Jin Y., Wang J., Cui Zh. Effects of ginseng polysaccharides on reducing blood glucose and liver glycogen // Zhongguo. Yaoli Xue bao. 1990. V. 11. N 6. P. 520524.

241. Yazdani R., Yeh F.C., Rimsha J. Genomic mapping of Pinus sylvestris (L.) using random amplified polymorphic DNA markers // Forest Genetics. 1995. V. 2. P. 109-116.

242. Yeh F., Layton C. The organization of genetic variability in central and marginal populations of lodgepole pine (Pinus contorta spp. latifolia) // Can. J. Genet. Cytol. 1979. V. 21. P. 487-503.

243. Yoshikawa T., Furuya T. Saponins production by cultures of Panax ginseng transformed with Agrobacterium rhizogenes II Plant Cell Rep. 1987. V. 6. P. 449-453.

244. Zhang Shuchen, Yang Xiaojing, Sun Hong. The anti-cancer action of ginseng saponin RJ12 and the mixture of RJ12 and organic Ge // Proceed, of Int. Ginseng Conf., Changchun, Aug. 10-14. 1992. P. 115.

245. Zhao Shoujing, Wang Rongsheng, Liu Yunzhang, Li Fangyuan. Studies on inheritance of major agronomic characters of Panax ginseng I I Proceed. Int. Ginseng Conf., Changchun, Aug. 10-14, 1992. P. 34.

246. Zhao Shoujing, Zhao Yahui, Yang Zhentang. Genetic analysis of ginseng germplasm by lactate polyacrylamide gel electrophoresis of seed protein // J. Ginseng Res. 1998. V. 22. N 3. P. 168-172.