Молекулярно-генетический анализ и функционально значимые генетические мутации вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат медицинских наук Воробьева, Ирина Валерьевна

• Воробьева, Ирина Валерьевна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Воробьева, Ирина Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ стр.

ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕМЕЙСТВА

ОгШотух(тпс1ае.

1.1. Основные признаки и классификация семейства.

1.2.Общая молекулярно-биологическая характеристика вирусов гриппа.

1.3. Медико-социальное значение изучения молекулярных основ репликации вируса гриппа.

ГЛАВА 2. СТРУКТУРА ВИРУСА ГРИППА А ЧЕЛОВЕКА.

2.1.Морфология и химический состав вирионов.

2.2. Строение и функции РНК-генома и полипептидный состав вируса гриппа А. :

2.3. А. Структура и функции гемагглютинина вируса гриппа А. 16 Б. Структура и функции нейраминидазы вируса гриппа А.

ГЛАВА 3. РЕПЛИКАЦИЯ ВИРУСА ГРИППА А ЧЕЛОВЕКА.

3.1. Адсорбция и проникновение вируса в клетки — мишени.

3.2.Внутриклеточная репликация вируса 30 А.Транскрипция и репликация вирусных РНК.

Б. Внутриклеточный транспорт вирусных РНП в инфицированных клетках.

3.3. Сборка и почкование вирусных частиц.

3.4. Цитопатическое действие вируса и механизмы гибели клеток.

3.5. Участие клеточных факторов в репликации вируса гриппа А. 37 А. Вирус-индуцированные клеточные факторы. 39 Б. Размножение вируса гриппа А в различных клеточных культурах.

В. Роль специфического взаимодействия с клеточными рецепторами и клеточный тропизм вируса.

ГЛАВА 4. КРУГ ХОЗЯЕВ ВИРУСА ГРИППА А.

4.1. Гриппозная инфекция у различных видов животных. £

А. Вирус гриппа в популяции птиц.

Б. Вирус гриппа в популяции людей.

ЧАСТЬ 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 2. РЕЗУЛЬТАТЫ.

2.1. Многоцикловая репликация вирусов гриппа А человека в культуре клеток CACO — 2; протеолитическое расщепление вирусного гемагглютинина в клетках CACO — 2 и его ингибирование апротинином.

2.2. Некроз клеток САСО-2 при инфекции вирусом гриппа.

2.3. Выделение клинических изолятов вируса гриппа А человека в культуре клеток CACO — 2 и их биологическая характеристика.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ юб

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетический анализ и функционально значимые генетические мутации вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней»

Грипп - массовое инфекционное заболевание вирусной этиологии, имеющее глобальное распространение - продолжает оставаться неуправляемым процессом. Исключительная вариабельность поверхностных антигенов - гемагглюгинина и нейраминидазы - у различных штаммов вируса гриппа объясняет недостаточную эффективность противогриппозных вакцин. Широкая распространённость гриппа среди людей, домашних и диких животных, высокая контагиозная и инвазионная активность возбудителя, а, вследствие этого, масштабность и стремительное распространение заболевания среди восприимчивой прослойки населения, огромный экономический ущерб и отсутствие радикальных специфических противогриппозных средств защиты — основные причины, определяющие актуальность проблемы гриппа.

Свойство вируса - использовать для своего размножения аппарат клетки — хозяина - является препятствием в создании препаратов, избирательно угнетающих виэ)с и не повреждающих клетку. Вполне понятно, что успешное решение проблемы по преодолению вирусных инфекций определяется уровнем фундаментальных исследований по молекулярной биологии вируса и механизмов его взаимодействия с клеточным аппаратом. Применение новейших методов молекулярной генетики, таких как: генная инженерия, обратная генетика и сайт специфический мутагенез в изучении вируса гриппа существенно расширило паши представления о структуре вируса гриппа и механизмах репликации, о функциях отдельных вирусных белков и их взаимодейс вии с клеточными факторами. Проведение таких исследований позволяет лучше понять механизмы патогенеза, лежащие в основе инфекционного процесса при гриппе и конструировать пути антигриппозной стратегии.

Объектом исследования в настоящей диссертационной работе служили вирусы гриппа А человека и клетки, инфицированные этим вирусом. Изучено внутриклеточное расщепление гемагглютинина вируса гриппа А человека клеточной протеиназой, вызывающее активирование вируса и его многоцикловую репродукцию в культуре клеток человека. Изучены биохимические особенности и свойства клинических вирусов гриппа при размножении в перевиваемой культуре клеток человека.

Существуют различные клеточные линии для культивирования вирусов гриппа. Однако ни одна из используемых клеточных линий не обеспечивала многоцикловую репликацию вируса без дополнительного внесения экзогенного трипсина.

Более того, размножение вируса в таких системах нечеловеческого происхождения вызывало изменение свойств вируса гриппа. Поэтому поиск системы человеческого происхождения представлял интерес.

Особое внимание было уделено клеточной линии CACO - 2, полученной из умереннодифференцированной аденокарциномы толстого кишечника человека. Так как эта линия клеток была выделена из опухоли человека, она оказалась превосходной моделью для культивирования человеческих вирусов. Аденогенные клетки толстого кишечника имеют цитоморфологическое сходство и близость клеточных рецепторов с бокаловидными клетками эпителия респираторного тракта человека, что повышало интерес данного исследования. При заражении клеток вирусом гриппа А человека в клетках развивался некроз, в то время как в других клеточных линиях нечеловеческого происхождения вирус гриппа А вызывал апоптоз.

Установлено, что культура эпителиальных клеток аденокарциномы толстого кишечника человека (линия САСО-2) - это высокочувствительная культура клеток человека, где хорошо реплицируются вирусы гриппа и не требуется добавления экзогенного трипсина для поддержания многоцикловой репродукции вируса. Ранее исследованные клеточные культуры, такие как HeLa, А-293 и др., имели дефекты на этапах сборки вирионов и не содержали IAP - протеазы. поэтому для поддержания многоцикловой репродукции вируса требовалось добавление трипсина. Появлеп.е клеточной культуры САСО-2 сделало возможным изоляцию клинических вирусов гриппа от больных людей с сохранением исходных генетических и фенотипических признаков вируса, свойственных вирусам гриппа человека. Более того, как показывают наши наблюдения, эффективность выделения вирусов от больных людей в клеточной культуре САСО-2 оказалась более высокой, чем в других, используемых для этих целей, системах, таких как, клетки MDCK или куриные эмбрионы. Это наблюдение, как мы считаем, объясняется близостью клеточных рецепторов в респираторном тракте человека и клетках САСО-2.

ЦЕЛЬ НАСТОЯЩЕЙ РАБОТЫ.

Цель настоящей работы заключалась в изучении механизмов протеолиза гемагглютинина вируса гриппа А человека в инфицированных клетках: определении природы внутриклеточных протеиназ, участвующих в механизме его расщепления, а также изучение репликации вируса гриппа А человека и механизмов клеточной гибели в культуре CACO - 2. имеющей человеческое происхождение, и сравнительного анализа размножения вируса гриппа А человека в культурах клеток человека (CACO - 2) и собаки (MDCK), а также механизмов вирусного апоптоза и некроза.

ЗАДАЧИ РАБОТЫ.

1. Изучить возможность внутриклеточного протеолиза гемагглютинина с единичным аргинином в протеолитическом сайте у вирусов гриппа А человека в культуре клеток CACO- 2.

2. Определить локализацию протеолиза гемагглютинина вируса гриппа А человека в заражённых клетках CACO - 2 .

3. Установить возможности ингибирования внутриклсточного протеолиза.

4. Исследовать механизмы гибели клеток CACO - 2 при заражении их вирусом гриппа А человека.

5. Провести сравнительный анализ биологических и структурных свойств клинических вирусов гриппа А человека при размножении в культуре клеток человека (линия CACO - 2).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Проведено сравнение репродукции и биологических свойств вируса гриппа А человека при пассировании на клетках MDCK и в эпителиальных клетках, производных аденокарциномы толстого кишечника человека (CACO - 2) и установили преимущество использования этой высокочувствительной клеточной культуры для изучения биологических свойств вируса гриппа А человека. Впервые исследованы механизмы гибели клеток CACO - 2 при заражении их вирусом гриппа А человека. Впервые определили, что в клетках аденокарциномы происходит внутриклеточное расщепление молекулы гемагглютинина с единичным остатком аргинина в протеолитическом сайте при инфицировании вирусом гриппа А человека без добавления трипсина.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ.

Полученные нами результаты важны для понимания молекулярных механизмов, протекающих в клетках, инфицированных вирусом гриппа А человека, и для обогащения наших знаний о биологических свойствах вируса и клетки. С учётом этой новой информации возможны предпосылки для создания новых противогриппозных препаратов на основе антипротеазных ингибиторов, способных специфически блокировать внутриклеточный протеолиз вирусных белков.

Положения, выносимые на защиту.

1. Клеточная культура аденокарциномы человека высоковосприимчива к вирусам гриппа А (линия CACO - 2).

2. Клеточная культура аденокарциномы человека поддерживает многоцикловую инфекцию без добавления трипсина (линия CACO - 2).

3. В клетках аденокарциномы происходит внутриклеточное расщепление молекулы гемагглюгинина с единичным остатком аргинина в протеолитическом сайте.

4. Клетки аденокарциномы человека погибают некрозом при заражении вирусом гриппа А.

5. Клеточная культура CACO была более восприимчивой для клинических вирусов (вирусы, полученные от больных людей), чем клетки МДСК.

6. В процессе эволюции вируса H3N2 идёт увеличение сайтов гликозилирования, что даёт вирусу возможность ускользать от вируснейтрализующих антител, изменять рецептор! 1ые и адаптационные свойства.

Публикации и апробация работы. Полученные в ходе работы данные представлялись на 12 Международной конференции по негативно - нитевым вирусам (14 - 19 июня 2003 г. Пиза, Италия), а также опубликованы в журналах «Биохимия» и «Вопросы вирусологии».

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Воробьева, Ирина Валерьевна

выводы.

1. Впервые в культуре перевиваемых эпителиальных клеток, производных аденокарциномы толстого кишечника человека (САСО-2) обнаружено внутриклеточное расщепление НАО—»-HA1/HA2 у вируса гриппа А человека, содержащего единичный аргинин в протеолитическом сайге НА, и синтез активирозанного вируса.

2. Установлено, что протеолиз НАО —> НА1/НА2 под действием клеточной протеазы происходит на поздних этапах внутриклеточного транспорта из зоны транс-Гольджи в плазматическую мембрану клеток.

3. Протеолиз вирусного гликопротеина НАО в CACO - 2 подавляется апротинином - природным ингибитором сериновых протеаз.

4. Впервые показано, что клетки САСО-2, зараженные вирусом григпд. резистентны к апоптозу и погибают по некротическому механизму.

5. Обнаружено, что клетки САСО-2 более восприимчивы для современных клинических вирусов гриппа, чем клетки MDCK и куриные эмбрионы.

6. Методом специфической сорбции лектинов SNA и ММА выявлено сходное содержание рецепторов типа 2-3 и 2-6 в клеточных культурах CACO и MDCK.

7. Анализ первичной структуры генов НА и NA московских изолятов вируса гриппа человека H3N2 2003г. показал (1) увеличение количества сайтов гликозилирования по сравнению с аналогичными изолятами 68-70 гг., (2) делецию 66 нуклеотидов (22 аминокислот) в стеблевом регионе гена NA у всех клинических изолятов субтипа H3N2. Данные помещены в Генбанк под номерами DQ066936; DQ066937; DQ 086157-DQ086161; DQ089634-DQ089639; DQ090706-DQ090710; DQ091199; DQ096580; DQ096261-096265; DQ098266-098269; DQ100422-100424.

8. Секвенирование гена М московских вирусов H3N2 показало, что они кодируют белок М2, чувствительный к препаратам амантадинового ряда.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Воробьева, Ирина Валерьевна, 2005 год

1. Жирнов О.П. Молекулярные механизмы протеолитического процессинга вирусных белков. Молекулярная биология 1988, 22: 581-600

2. Жирнов О.П. Белки вируса гриппа: получение растворимого полипептида М1 посредством поэтапной депротеинизации вирионов. Молекулярная биология 1991,25. 375-379

3. Каверин Н. В., Смирнов Ю.А. Межвидовая трансмиссия вирусов гриппа А и проблема пандемий. Обзор. Вопросы вирусологии 2003г

4. Лобанова Т. П., Кихтенко Н. В. Обзор «Птичий грипп» 2004. www://Molbiol.ru/rcview/0.3-0.4.html

5. АМН СССР Патологоанатомическая диагностика опухолей человека. Руководство под редакцией академика АМН СССР проф. Краевского. Москва Медицина. 1982.

6. АМН СССР Цитологическая диагностика опухолей и предопухолевых процессов. Под редакцией проф. Петровой А. С. Москва Медицина 1985.

7. Максимова JT.B. Цитологическая диагностика опухолевых заболеваний толстой кишки. ГНЦ Колопроктологии МЗ России. Москва 1993

8. Гистология. Под редакцией Ю.И. Афанасьева, Н.А. Юриной Москва Медицина 1989.

9. Allen Н, McCauley J, Waterfield М, Gething MJ. Influenza vims RNA segment 7 has the coding capacity for two polypeptides. Virology- 1980;107:548-551a.

10. Apostolov K, Flewett TH. Internal structure of influenza virus. Virology 1965;26:506-508

11. Baigent SJ, McCauley JW. Glycosylation of haemagglutinin and stalk-length of neuraminidase combine to regulate the growth of avian influenza viruses in tissue culture. Virus Res 2001; 79: 177-185.

12. Baigent SJ, McCauley JW Influenza type A in humans, mammals and birds: determinants of virus virulence, host-range and interspecies transmission BioEssays 25: 657-671 2003.

13. Banks J. Speidel ES, Moore E, et al. Changes in the haemagglutinin and the neuraminidase genes prior to the emergence of highly pathogenic H7NI avian influenza viruses in Italy. Arch Virol 2001; 146:

14. Balachandran, S„ Kim, C.N., Yeh, W.C., Mak, T.W., Bhalla, K.and Barber. G.N. (1998) Activation of the dsRNA-dependentprotein kinase. PKR, induces apoptosis through FADD-mediateddeath signalling. EMBO J. 17, 6888-6902.

15. Bizebard T, Gigant B, Rigolet P, et al. Structure of influenza virus haemagglutinin complexed with a neutralizing antibody. Nature 1995;376:92-94.

16. Blake A. Jones and Gregory J. Gores. Physiology and pathophysiology of apoptosis in epithelial cells of the liver, pancreas and intestine. American Physiological Sosiety 1997.

17. Baum LG, Paulson JC. The N2 neuraminidase of human influenza virus has acquired a substrate specificity complementary to the hemagglutinin receptor specificity. Virology 1991;180:10-15

18. Barchet W, Krug A, Cella M, Newby C, Fischer JA, Dzionek A, Pekosz A, Colonna M. Dendritic cells respond to influenza virus through TLR7- and PKR-independent pathways. Eur J Immunol. 2005 Jan;35(l):236-42. PMID: 15593126 PubMed ir.de« d for MEDLINE.

19. Bullough PA, Hughson FM, Skehel JJ, Wiley DC. Structure of influenza haemagglutinin at the pH of membrane fusion. Nature 1994;371:37—43.

20. Burnet FM, Stone JD. The receptor-destroyingenzyme of V. cholerae. Aust J Ext Biol Med 1947; 25:227-233

21. Burnet FM, Stone JD, et al.The genetic character of O-D change in influenza A. Br J Exp Pathol. 1949 0ct;30(5):419-25

22. Bryans JT. Equine influenza. Blood Horse 1975;101:4526-4527

23. Bowie, A. and 0Neill, L.A.J. (2000) Oxidative stress and nuclear factor-kappa B activation — a reassessment of the evidence in the light of recent discoveries. Biochem. Pharmacol. 59, 13-23.

24. Edvard WA Brydon, Susan J. Morris, Clive Sweet. Role of apoptosis and cytokines in influenza virus morbidity. FEMS Miciobiology Reviews 2005

25. Castrucci MR and Kawaoka Y Biologic importance of neuraminidase stalk length "n influenza A virus. Journal of Virology 1993, 759-764

26. Cianci C, Tiley L, Krystal M. Differential activation of the influenza virus polymerase via template RNA binding. J Virol 1995;69:3995-3999.

27. Chen J, Skehel JJ, Wiley DC. N- and C-terminal residues combine in the fusion-pH influenza hemagglutinin HA2 subunit to form an N cap that terminates the triple-stranded coiled coil. Proc Natl Acad Sci U S-A 1999;96:8967-8972

28. Chu VC, Whittaker GR. Influenza virus entry and infection require host cell N-linked glycoprotein. Proe Natl Acad Sci USA. 2004 Dec 28; 101 (52): 18153-8. Epub 2004 Dec 15

29. Colman PM, Varghese JN, Laver WG. Structure of the catalytic and antigenic sites in influenza virus neuraminidase. Nature 1983;303:41-44

30. Colman PM, Laver WG, Varghese JN, et al. Three-dimensional structure of a comj le\ of antibody with influenza virus neuraminidase. Nature 1987;326:358-363.

31. Colman PM. Neuraminidase: Enzyme and antigen, In: Krug RM, cd. The influenza viruses. New York: Plenum Press,-1989:175-218.

32. Colman P.M. Influenza virus neuraminidase: Structure, antibodies, and inhibitors. Protein Science (1994), 3: 1687-1696

33. Class E. C., R Vanbeek., Osterhause., J. C. de Jong. G. F. Rimmelzwann, D.A. Senne. S Krauss and R. G. Webster. 1998. Human influenza A H5N2 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus/ Lancet 351: 472-477/

34. Connor RJ, Kawaoka Y, Webster RG, et al. Receptor specificity in human, avian, itid equine H2 and H3 influenza virus isolates. Virology 1994; 205: 17-23

35. Conti G, Valcavi P, Natali A, Schito GC. Different patterns of replication in influenza virus-infected KB cells. Arch Virol. l980;66(4):309-20

36. Chen J, Lee KH, Steinhauer DA, et al. Structure of the hemagglutinin precursor cleavage site, a determinant of influenza pathogenicity and the origin of the labile conforn.at:o i. Cell 1998;95:409-417.

37. De Jong, J.C.E.C. Class, A.D. Osterhaus, R.G. Webster, and W.L. Lim.1997. A pandemic warning. Nature 389: 554

38. Qingming Ding, Qingding Wang, Zizheng Dong and Mark Evers. Characterization and regulation of E2F activity during CACO 2 cell differentiation. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2000, 278, 110-117.

39. Qingming Ding, Tien C. Ko and B. Mark Evers. Caco 2 intestinal cell differentiation is associated with Gl arrest and suppression of CDK2 and CDK4. American Physiological Society 1998.

40. Doms RW, Helenius A, White J. Membrane fusion activity of the influenza virus hemagglutinin: The low pH-induced conformational change. J Biol Che n 1985;260:2973-2981.

41. Duesberg P. Distinct subunits of the ribonucleoprotein of influenza virus. J Mol Biol 1969:42:485^199.

42. Easterday BC. Animal influenza. In: Kilbourne ED, ed. The influenza viruses and influenza. Orlando: Academic Press, 1975:449-481

43. Els MC, Air GM, Murti KG, Webster RG, Laver WG. An 18-amino acid deletion in an influenza neuraminidase. Virology. 1985 Apr 30;142(2):241-7.

44. Garten W, Klenk H-D. Characterization of the carboxypeptidase involved in the proteolytic cleavage ofthe influenza haemagglutinin. Intcrvirology 1983:20:181-189.

45. Guo Y, Wang M, Kawaoka Y, et al. Characterization of a new avian-like influenza A virus from horses in China. Virology 1992;188:245-255.

46. Geraci JR, St Aubin DJ, Barker IK, et al. Mass mortality of harbor seals: Pneumonia associated with influenza A virus. Science 1982;215:1129-1131.

47. Godley L, Pfeifer J, Steinhaucr D, et al. Introduction of intersubunit disulfide bonds in the membrane-distal region of the influenza hemagglutinin abolishes membrane fusion activity. Cell 1992;68:635-645.

48. Gottshalk A (1959) The chemistry of virus receptors. In The Viruses (Burnet F. M. and Stanley W. M.) Academic Press, New York, USA

49. Gottchalk A., Belyavin G., Biddle F. (1972) In.: Glycoproteins: Their Composition, Structure and Function. 2'nd edn., Part A., Gottchalk A. (eds). Elsevier Publishing Company: Amsterdam-London-New York, 1082-1096

50. Govorkova EA. Matrosovich MN, Tuzikov AB, Bovin NV, Gerdil C. Fanget B, Webster RG. Selection of receptor-binding variants of human influenza A and B viruses in baby hamster kidney cells. Virology. 1999 Sep 15;262(l):31-8.

51. Gorman OT., Bean WJ., Kawaoka Y. et al., Evolution of influenza A virus nucleoprotein genes: implication for the origin of H1N1 human and classical swine viruses //J. Virol. -1991 Vol.65-P. 3704-3714.

52. Gubareva LV. Robinson MJ, Bethell RC, et al. Catalytic and framework mutations in the neuraminidase active site of influenza viruses that are resistant to 4-guar.id'n •>-Neu5Ac2en. J Virol 1997; 71: 3385-3390.

53. Gil. J. and Esteban, M. (2000) Induction of apoptosis by the dsRNA-dependent protein kinase (PKR): Mechanism of action. Apoptosis 5, 107-114

54. Ilinshaw VS, Bean WJ, Geraci J, et al. Characterization of two influenza A viruses from a pilot whale. J Virol 1986;58:655-656.

55. Hausmann J. Kretzschmar E, Garten W, Klenk HD. N1 neuraminidase afinfluenza virus A/FPV/Rostock/34 has haemadsorbing activity. J Gen Virol 1995:76:1719-28.

56. J. Hausmann, E. Kretzschmar, W. Garten and HD Klenk. Biosynthesis, intracellular transport and enzymatic activity of an avian influenza A virus neuraminidase: role of unpaired cysteines and individual oligosaccharides. J Virol 1997: 78. 3233-3245

57. Hirst GK. Agglutination of red cells by allantoic fluid of chick embr\os infected with influenza virus. Science 1941; 94: 22-23

58. Hoffmann E, Stech J, Guan Y, Webster RG, Perez DR. Universal primer set for the lull-length amplification of all influenza A viruses. Arch Virol. 2001 Dec: 146( 12):2275-89.

59. Hughes MT, Matrosovich M, Rodgers ME, et al. Influenza A viruses lacking sialidase activity can undergo multiple cycles of replication in cell culture, eggs, or mice. J Virol 2000; 74: 5206- 5212.

60. Taisuke Horimoto and Yoshihiro Kawaoka Pandemic threat posed by avian influenza A viruses. Clinical Microbiology Reviews 2001, 129-149

61. Inglis SC. Lamb RA, Carroll AR, Mahy BWJ. Polypeptides specified by the infuenra virus genome. I. Evidence for eight distinct gene products specified by fowl plague virus. Virology 1976:74:489-503.

62. Klingborn B, Englund L, Rott R, et al. An avian influenza A virus killing a mammalian species: The mink. Arch Virol 1985;86:347-351.

63. Kobasa D. Rodgers ME, Wells K, Kawaoka Y. Neuraminidase hemadsorption activity, conserved in avian influenza A viruses, does not influence viral replication in ducks. J Virol 1997;71:6706-6713

64. Karen J. Cross. Laura M. Burleigh and David A. Steinhauer Mechanisms of cell entry by influenza virus expert reviews in molecular medicine 2001

65. Kawaguchi A. Naito T, Nagata K. Involvement of influenza virus PA subunit in assembly of functional RNA polymerase complexes. J Virol. 2005 Jan;79(2):731-44.PMID: 15613301 PubMed indexed for MEDLINE.

66. Kawaoka Y., Krauss S., Webster R.G. Avian to - human transmission of the PB1 gene of influenza A virus in the 1957 and 1968 pandemics // J. Virol. - 1989. - Vol. 63. - P. 4603-4608.

67. Kawaoka Y, Gorman OT, Ito T, Wells K, Donis RO, Castrucci MR. Donatelli I, Webster RG. Influence of host species on the evolution of the nonstructural (NS) gene of influenza A viruses. Virus Res. 1998 Jun;55(2): 143-56.

68. Kobasa D, Kodihalli S, Luo M, et al. Amino acid residues contributing to the substrate specificity of the influenza A virus neuraminidase. J Virol 1999; 73: 6743-6751.

69. Kaverin NV, Matrosovich MN, Gambaryan AS, et al. lntergenic HA-NA interactions in influenza A virus: postreassortment substitutions of charged amino acid in the hemagglutinin of different subtypes. Virus Res 2000; 66: 123-129.

70. Kemble GW, Danieli T, White JM. Lipid-anchored influenza hemagglutinin promotes hemifusion, not complete fusion. Cell 1994;76:383-391.

71. Kidd, V.J., Lahti, J.M. and Teitz, T. (2000) Proteolytic regulation of apoptosis. Semin. Cell Dev. Biol. 11, 191-201.

72. Kittel C, Sereinig S, Ferko B, Stasakova J, Romanova J. Wolkerstorfer A,Katinger H. Egorov A. Rescue of influenza virus expressing GFP from the NSI reading frame. Virology. 2004 Jun 20;324(l):67-73.

73. Khatchikian D, Orlich M, Rott R. Increased viral pathogenicity after insertion of a 28S ribosomal RNA sequence into the hemagglutinin gene of an influenza virus. Nature 1989;340:156-157.

74. Krug RM, Soeiro R. Studies on the intranuclear localization of influenza virus-specific proteins. Virology 1975;64:378-387.

75. Krug RM, Alonso-Caplen FV, Julkunen I, Katze MG. Expression and replication of the influenza virus genome. In: Krug RM, ed. The influenza viruses. New York: Plenum, 1989:89-152.

76. Donald Kayc and Craig R. Pringle. Avian influenza viruses and their implication for human health. Clinical Infectious Diseases, 2004, 108-112.

77. Klenk HD, Rott R, Orlich M, Biodorn J. Activation of influenza A viruses by trypsin treatment. Virology. 1975 Dec;68(2):426-39.

78. Klenk I I.D. (1990) In: Van Regenmortel MNV., Neurath A.R. (eds) Immunochemistry of viruses. II. The basis for serodiagnosis and vaccines. Elsevier, Amcrsham. pp 25-37

79. S Kumar. K Tamura, and M Nei (2004) MEGA3: Integrated software for Molecular Evolutionary Genetics Analysis and sequence alignment. Briefings in Bioinfor nati':s 5:150-163

80. Krug RM. Alonso-Caplen FV, Julkunen I, Katze MG. Expression and replication of the influenza virus genome. In: Krug RM, ed. The influenza viruses. New York: Plenum, 1989:89-152

81. Lamb RA, Choppin PW. Synthesis of influenza virus polypeptides in cells resistant to alpha-amanitin: Evidence for the involvement of cellular RNA polymerase 11 in virus replication. J Virol 1977;23:816-819.

82. Lamb RA, Lai C-J. Conservation of the influenza virus membrane protein (Mi) amino acid sequence and an open reading frame of RNA segment 7 encoding a second protein (M2) in HIN 1 and H3N2 strains. Virology 1981-112:746-751.

83. Lamb RA, Choppin PW. The gene structure and replication of influenza virus. Annu Rev Biochem 1983:52:467-506

84. Lamb RA, Choppin PW, Chanock RM, Lai C-J. Mapping of the two overlapping genes for polypeptides NS1 and NS2 on RNA segment 8 of influenza virus genome. Proc Natl Acad SciUSA 1980;77:1857-1861.

85. Lamb RA, Choppin PW. Synthesis of influenza virus proteins in infected celb: Translation of viral polypeptides, including three P polypeptides, from RNA produced by primary transcription. Virology 1976;74:504-519

86. Laver WG, Colman PM, Webster RG, et al. Influenza virus neuraminidase with hemagglutinin activity. Virology 1984;137:314-323.

87. Lazarowitz SG, Compans RW, Choppin PW. Influenza virus structural and nonstructural proteins in infected cells and their plasma membranes. Virology 1971;46:830-843.

88. Lazarowitz SG, Choppin PW. Enhancement of the infectivity of influenza A and B viruses by proteolytic cleavage of the hemagglutinin polypeptide. Virology. 1975 Dec;68(2):440-54

89. R. Joel Lowy. Influenza virus induction of apoptosis by intrinsic and extrinsic mechanisms. International Reviews of Immunology, 22: 425-449, 2003/

90. Liu C, Eichelberger MC, Compans RW, Air GM Influenza type A virus neuraminidase does not play a role in viral entry.rep!¡cation, assembly, or budding. J Virol. 1995 Feb;69(2): 1099-106.

91. Luo G, Chung J, Palese P. Alterations of the stalk of the influenza virus neuraminidase: deletions and insertions. Virus Res. 1993 Aug:29(2):141-53. Erratum in: Virus Res. 1993 Sep;29(3):321.

92. Mumford JA, Chambers TM. Equine influenza. In: Nicholson KG. Webster RG, Hay AJ, eds. Textbook of influenza. Oxford: Blackwell Scienccs, 1998:146-162.

93. Mould JA, Li H-C, Dudlak CS, et al. Mechanism lor proton conduction of the M(2) ion channel of influenza A virus. J Biol Chem 2000:275:8592-8599.

94. Matlin KS, Reggio H, Helenius A, Simons K. The entry of enveloped viruses into an epithelial cell line. Prog Clin Biol Res 1982;91:599-611.

95. Murti KG, Bean WJ Jr, Webster RG. Helical ribonucleoproteins of influenza virus: An electron microscope analysis. Virology 1980;104:224-229.

96. Mikhail Matrosovich, Nannan Zhou, Yoshihiro Kawaoka, and Robert Webster 1999. The surface glycoproteins of H5 influenza virus isolated from humans, chickens, and wild aquatic birds have distinguishable properties.J Virol

97. Matrosovich MN, Matrosovich TY, Gray T, Roberts NA. Klenk HD. Neuraminidase is important for the initiation of influenza virus infection in human airway epithelium. J Virol. 2004 Nov;78(22): 12665-7.

98. McKimm-Breschkin JL, Sahasrabudhe A, Blick TJ, et al. Mutations in a conserved residue in the influenza virus neuraminidase active site decreases sensitivity iO Neu5Ac2en-derived inhibitors. J Virol 1998; 72: 2456-2462.

99. McClelland L, Hare R. The adsorption of influenza virus by red cells and a new in vitro method of measuring antibodies for influenza virus. Can J Public Health 1941:32:530-538.

100. Mitnaul LJ, Matrosovich MN, Castrucci MR, et al. Balanced hemagglutin.n ar d neuraminidase activities are critical for efficient replication of influenza A virus. J Virol 2000; 74:6015-6020.

101. Matlin KS, Reggio H, Helenius A, Simons K. The entry of enveloped viruses into an epithelial cell line. Prog Clin Biol Res 1982;91:599-611.

102. Matrosovich M, Zhou N, Kawaoka Y, et al. The surface glycoproteins of H5 influenza viruses isolated from humans, chickens, and wild aquatic birds have distinguishable properties. J Virol 1999; 73: 1146-1155.

103. Matrosovich M, Klenk HD Natural and synthetic sialic acid-containing inhibitors of influenza virusreceptor binding. Rev Med Virol. 2003 Mar-Apr; 13(2):85-97. Review.

104. Matrosovich MN, Matrosovich TY, Gray T, Roberts NA. Klenk HD. Hunan and avian influenza viruses target different cell types in cultures on human airway epithelium. Proc Natl Acad Sci USA. 2004 Mar 30; 101 (13):4620-4. Epub 2004 Mar 15.

105. Marsh M, Helenius A. Virus entry into animal cells. Adv Virus Res 1989:36:107151.

106. Martin K, Helenius A. Nuclear transport of influenza virus ribonucleoproteins: The viral matrix protein (Ml) promotes export and inhibits import. Cell I99l;67:l 17130

107. Mersich SE, Baumeister EG, Riva D, Lewis AP, Cadario ME, Pontoriero r\V, Savy VL. Influenza circulating strains in Argentina exhibit differential induction of cytotoxicity and caspase-3 in vitro. J Clin Virol. 2004 Oct;31(2): 134-9.

108. Nakajima K., Desselberger U., Palese P ., Recent human influenza A (HI \Ii) viruses are closely genetically to strains isolated in 1950 11 Nature. 1978. - Vol. 274. -P. 334-339.

109. O'Neill RE, Talon J, Palese P. The influenza virus NEP (NS2 protein) mediates the nuclear export of viral ribonucleoproteins. EMBO J 1998; 17:288-296

110. Oilier L, Caramella A, Giordanengo V, Lefebvre JC. High permissivity of human HepG2 hepatoma cells for influenza viruses. J Clin Microbiol. 2004 Dec:42(12):5861-5.

111. Osterhaus AD, Rimmelzwann GF, Martina BE, et al. Influenza B virus in seals. Science 2000;288:1051-1053.

112. Poon LL, Pritlove DC, Fodor E, Brownlee GG. Direct evidence that the poly(A) tail of influenza A virus mRNA is synthesizedby reiterative copying of a U track in the virion RNA template J Virol. 1999 Apr;73(4):3473-6.

113. Pyle G. F., Patterson K.D., Influenza diffusion in European history: Patterns and paradigms // Ecol. Dis. 1984 - Vol. 2 - P. 174 - 184.

114. Palese P, Tobita K, Ueda M, Compans RW. Characterization of temperature sensitive influenza virus mutants defective in neuraminidase. Virology 1974:61:397-410

115. Paulson JC. Interactions of animal viruses with cell surface receptors. In The Reccptors, vol 2, Conn M (ed.). Academic Press: Orlando, 1985: 131-219

116. Pilaipan Puthavathana, Prasert Auewarakul, Pakapak Chor Charoenying, Kantima Sangsiriwut et al., Molecular characterization of the complete genome of human influenza H5N1 virus isolates from Thailand. J Virol 2005 86.423-433.

117. Porter AG, Barber C, Carey NH, et al. Complete nucleotide sequence of an influenza virus haemagglutinin gene from cloned DNA. Nature 1979:282:471-477.

118. Pons MW, Schulze IT, Hirst GK, Hauser R. Isolation and characterization of the ribonucleoprotein of influenza virus. Virology 1969:39:250-259.

119. Pinto LH, Holsinger LJ, Lamb RA. Influenza virus M2 protein has ion channel activity. Cell 1992;69:517-528.

120. Plotch SJ, Bouloy M, Ulmanen I, Krug RM. A unique cap(m7GpppXm)-dep',ndent influenza virion cndonuclease clcaves capped RNAs to generate the primers that initiate viral RNA transcription. Cell 1981;23:847-858.

121. Röhm C, Zhou N, Süss J, Mackenzie J, et al. Characterization of a novel influenza hemagglutinin. HI5: Criteria for determination of influenza A subtypes. Virology 1996;217:508-516.

122. Rota PA, Rocha EP, Harmon MW, et al. Laboratory characterization of a swine influenza virus isolated from a fatal case of human influenza. J Clin Microti )l 1989;27:1413-1416

123. Rogers GN, Paulson JC, Daniels RS, Skehel JJ. Wilson I A. Wiley DC. Single amino acid substitutions in influenza haemagglutinin change receptor binding specificity. Nature. 1983 Jul 7-13;304(5921):76-8.

124. Rogers GN, Paulson JC. Receptor determinants of human and animal influenza virus isolates: differencesin receptor specificity of the H3 hemagglutinin based on species of origin. Virology. 1983 Jun;l27(2):361-73.

125. Shope RE. Swine influenza. III. Filtration experiments and etiology. J Exp Med 1931;54:373-380.

126. Scholtissek C, Hinshaw VS, Olsen CW. Influenza in pigs and their role as the intermediate host. In: Nicholson KG, Webster RG, Hay AJ, eds. Textbook of influenza. Oxford: Blackwell Sciences, 1998:137-145

127. Saumendra N. Sarkar, Ganes C. Sen. Novel function of protein encoded by viral stress-inducible genes. Pharmacology & Therapeutics 103, 2004. 245-259.

128. Seo SH, Webby R, Webster RG. No apoptotic deaths and different levels of inductions of inflammatory cytokines in alveolar macrophages infected with influenza viruses.Virology. 2004 Nov 24;329(2):270-9.

129. Smith GL, Hay AJ. Replication of the influenza virus genome. Virology 1982; 1 18:96108.

130. Shibuya N, Goldstein IJ, Broekaert WF, Nsimba-Lubaki M, Peeters B, Peumans WJ. The elderberry (Sambucus nigra L.) bark lectin recognizes the Neu5Ac(alpha2-6)Gal/GalNAc sequence. J Biol Chem. 1987 Feb 5;262(4): 1596-601

131. Stegmann T, Morselt HWM, Scholma J, Wilschut J. Fusion of influenza virus in an intracellular acidic compartment measured by fluorescence dequenching. Bioc.iim BiophysActa 1987;904:165-170.

132. Schotlissek C., Rohde W., Von Hoyningen V et al., On the origin of the human influenza virus subtype H2N2 and H3N2 // Ibid. Vol.87. P. 13 - 20

133. Steinhauer DA. Role of hemagglutinin cleavage for the pathogenicity of influenza vi'us. Virology 1999:258:1-20

134. Steinhauer DA. Role of hemagglutinin cleavage for the pathogenicity of influenza virus. Virology 1999;258:1-20

135. Skehel JJ, Wiley DC. Receptor binding and membrane fusion in virus entry: the influenza hemagglutinin. Annu Rev Biochem 2000; 69: 531-569

136. Suarez DL, Perdue ML. Multiple alignment comparison of the non-structural genes of influenza A viruses. Virus Res. 1998 Mar;54(l):59-69.

137. Suzuki Y, ItoT, Suzuki T, Holland RE Jr, Chambers TM, Kiso M, Ishida H.Kawaoka Y. Sialic acid species as a determinant of the host range of influenza A viruses. J Virol. 2000 Dec;74(24): 11825-31.

138. Suzuki H. Saito R, Masuda H, Oshitani H, Sato M. Sato I. Emergence of amantadine-resistant influenza A viruses: epidemiological study.J Infect Chemother. 2003 Sep;9(3): 195-200. Review.

139. Tai CY, Escarpe PA, Sidwell RW, et al. Characterization of human influenza virus variants selected in vitro in the presence of the neuraminidase inhibitor GS 4(71. Antimicrob Agents Chemother 1998; 42: 3234-3241

140. Tan, S.L. and Katze, M.G. (1999) The emerging role of the interferon-induced PKR protein kinase as an apoptotic effector: a new face of death. J. Inlerf. Cytokine Res. 19. 543-554.

141. Ter Meulen V. Love R. Virological, immunochemical, and cytochemical studies of lour HeLa cell lines infected with two strains of influenza virus. J Virol. 1967 Jun;l(3):626-39.

142. Ulmanen I, Broni BA, Krug RM. Role of two of the influenza virus core P proteins in recognizing cap 1 structures (m7GpppNm) on RNAs and in initiating viral RNA transcription. Proc Natl Acad Sci U S-A 1981;78:7355-7359.

143. Varghese JN, Laver WG, Colman PM. Structure of the influenza virus glycoprotein antigen neuraminidase at 2.9 A resolution. Nature. 1983 May 5-11:303(5912):35-40.

144. Van-Regenmortel MH Fauquet CM, Bishop CM, et al. Virus Taxonomy: The Seventh Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. San Diego: Ac&de-n'c Press, 2000.

145. Veit M, Klenk H-D, Kendal A, Rott R. The M2 protein of influenza A virus is acylated. Virology 1991;184:227-234

146. Vines A. Wells K, Matrosovich M, Castrucci MR, lto T. Kawaoka Y.The role of influenza A virus hemagglutinin residues 226 and 228 in receptor specificity and host range restriction. J Virol. 1998 Sep;72(9):7626-31.

147. Vines A. Wells K, Matrosovich M, Castrucci MR. lto T, Kawaoka Y.The role of influenza A virus hemagglutinin residues 226 and 228 in receptor specificity and host range restriction.J Virol. 1998 Sep;72(9):7626-31.

148. Vreede FT, Jung TE, Brownlee GG. Model suggesting that replication of influenza virus is regulated by stabilization of replicative intermediates.! Virol. 2004 Scp;78(l7):956<i-72. PM1D: 15308750 PubMed indexed for MEDLINEJ

149. Yasuda J, Nakada S, Kato A, et al. Molecular assembly of influenza virus: Assoi iaMcn of the NS2 protein with virion matrix. Virology 1993;196:249-255.

150. Yoshino S, Yamamoto S, Kawabata N. Use of Caco-2 cells for isolation of influenza virus. Kansenshogaku Zasshi. 1998 Apr;72(4):347-51. Japanese

151. Winter G, Fields S. The structure of the gene encoding the nucleoprotein of human influenza virus A/PR/8/34. Virology 1981;114:423-428.

152. Wiley DC, Wilson IA, Skehel JJ. Structural identification of the antibody-binding sites of Hong Kong influenza haemagglutinin and their involvement in antigenic variation. Nature 1981;289:373-378.

153. Wilson I A, Skehel JJ, Wiley DC. Structure of the haemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3 resolution. Nature 1981;289:366-373.

154. Wiley DC, Skehel JJ. Crystallization and x-ray diffraction studies on the haemagg'ul'n'n glycoprotein from the membrane of influenza virus. J Mol Biol 1977; 112:343-347.

155. Weis W, Brown JH, Cusack S, et al. Structure of the influenza virus haemagglutinin complexed with its receptor, sialic acid. Nature 1988;333:426-431.

156. Wei X, Decker JM, Wang S, Hui H, Kappes JC, Wu X. Salazar-Gonzalez JF.Salazar MG. Kilby JM. Saag MS, Komarova NL, Nowak MA, Hahn BH.Kvvong PD. Shaw GM. Antibody neutralization and escape by HIV-l. Nature. 2003 Mar 20:422(6929):307-12.

157. Webster RG, Yakho MA, Hinhaw VS, Bean WJ, Murti KG. intestinal influenza: replication and characterization of influenza viruses in duckes/ Virology 1978; 84: 268 -78.

158. Webster RG. Influenza: An Emerging Disease, Emerging Infection Disease 1998; 4(3): 436-441.

159. Webster RG, Laver WG. Antigenic variation in influenza virus: Biology and chemistry. Prog Med Virol 1971;13:271-338

160. Webster RG, Laver WG, Air GM, Schild GC. Molecular mechanisms of variation in influenza viruses. Nature 1982;296:115-121

161. Webster RG, Yakhno M, Hinshaw VS. et al. Intestinal influenza: Replication and characterization of influenza viruses in ducks. Virology 1978;84:268-278.

162. Weiss RA. HIV receptors and cellular tropism. IUBMB Life. 2002 Apr-May;53(4-5):201-5. Review.

163. Wagner R, Matrosovich M, Klenk HD. Functional balance between haemagglutiniri ai.d neuraminidase in influenza virus infections. Rev Med Virol. 2002 May-Jun; 12(3): 15966. Review.

164. Ralf Wagner 1, Mikhail Matrosovich 1 and Hans-Dieter Klenk Functional balance between haemagglutinin and neuraminidase in influenza virus infections Rev. Med. Virol. 2002; 12: 159-166.

165. Ralf Wagner, Anke Feldmann, Thorsten Wolff, Stephan Plcschka. Wolfgang Garten, Hans-Dieter Klenk. Hemagglutinin and neuraminidase as determinants of influenza virus pathogenicity. International Congress Series 1219 (2001) 533-543

166. Wylie, A.H. (1981) Cell Death: a new classification separating apoptosis from necrosis. In: Cell Death and Pathology (Bowen, I.D. and Locksin, R.A. Eds.), pp. 9-29. Chapman & Hall Ltd, New York.

167. Wurzer WJ. Planz O, Ehrhardt C, Giner M, Silberzahn T, Pleschka S. Ludwig S. Caspase 3 activation is essential for efficient influenza virus propagation. EMBO J. 2003 Jun 2;22(11):2717-28.

168. Whittaker GR, Helenius A. Nuclear import and export of viruses and virus genomes. Virology 1998:246:1-23.

169. Youil R. Su Q, Toner TJ, Szymkowiak C, Kwan WS, Rubin B, Petrukhin L.Kiseleva I, Shaw AR. DiStefano D.Comparative study of influenza virus replication in Vero iiid MDCK cell lines. J Virol Methods. 2004 Sep 1;120(1):23-31.

170. Young RJ, Content J. 5 '-Terminus of influenza virus RN A. Nature 1971:230:140-142.

171. Maria C. Zambon The pathogenesis of influenza in humans. Rev. Med. Virol. 2001; 11; 227-241.

172. Zhang J, Pekosz A, Lamb RA. Influenza virus assembly and lipid raft microdomainr: \ role for the cytoplasmic tails of the spike glycoproteins. J Virol 2000:74:4634^644.

173. Zhou NN, Senne DA, Landgraf JS, et al. Genetic reassortment of avian, swine, and human influenza A viruses in American pigs. J Virol 1999:73:8851-8856.

174. Zhirnov OP. Isolation of matrix protein Ml from influenza viruses by acid-dependent extraction with nonionic detergent. Virology 1992;186:324-330.

175. Zhirnov OP, Konakova TE, Garten W, Klenk H. Caspase-dependent N-terminal cleavage of influenza virus nucleocapsid protein in infected cells. J Virol 1999;73:10158-10163.

176. Zhirnov, O.P. Konakova, T.E., Wolff, T. and Klenk, H.D. (2002) NS1 protein of influenza A virus downregulates apoptosis. J. Virol. 76. 1617-1625

177. Zurcher T, Luo G, Palese P. Mutations at palmitylation sites of the influenza virus hemagglutinin affect virus formation. J Virol 1994;68:5748-5754

178. Weekly epidemiological record. Recommended composition of influenza virus vaccines for use in the 2005 2006 influenza season. №8. 2005,80 65 -76 http://www.who.int/wer

179. Weekly epidemiological record. Recommended composition of influenza v.rus vaccines for use in the 2005 influenza season. №41, 2004,79 369 376 http://www.who.int/wer

180. СПИСОК РАБОТ АВТОРА ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

181. Жирное О.П., Воробьева И. В., Овчаренко А.В., Кленк Х.Д. Внутриклеточное расщепление гемагглютинина вируса гриппа А человека и его ингибирование. Биохимия 2003, том 68, вып. 9, с. 1247- 1255.

182. Жирнов О.П., Воробьева И. В., Веселовский Е.М., Кленк Х.Д. Ключевая роль Asp 16 в протеолизе NP белка вируса гриппа А каспазами в заражённых клетках. Вопросы вирусологии 2003,ноябрь-декабрь; 48(6):8-14