Молекулярно-генетические подходы к микробиологическому мониторингу в системе эпидемиологического надзора за риккетснозами группы клещевой пятнистой лихорадки и бартонеллёзами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.30, кандидат медицинских наук Коломеец, Анна Николаевна

• Коломеец, Анна Николаевна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Коломеец, Анна Николаевна

Список условных сокращений

Введение

Глава 1. Состояние изучения проблемы клещевого риккетсиоза

1.1. Классификация риккетсий

1.2. Классические методы детекции риккетсий

1.3. Молекулярно-генетические методы детекции риккетсий

1.4. Эпидемиолого-эпизоотологические особенности клещевого риккетсиоза

Глава 2. Состояние изучения проблемы бартонеллёзов

2.1. Эпидемиолого-эпизоотологические особенности бартонеллезов

2.2. Методы микробиологического мониторинга за бартонеллами

Глава 3. Сочетанные очаги клещевых инфекций в РФ

Глава 4. Материалы и методы

4.1. Эпидемиологические и статистические методы

4.2. Лабораторные методы 57 А. Иммуноферментный анализ 63 Б. Выделение нуклеиновых кислот:

1.Выделение ДНК из штаммов риккетсий

2.Выделение ДНК из клещей, снятых с людей

3.Выделение ДНК из клещей, собранных в их природных стациях

4.Выделение ДНК из биоптатов пациентов

5.Выделение ДНК из сывороток пациентов

6.Выделение ДНК из селезёнок грызунов 69 В. Полимеразная цепная реакция:

1.Полимеразная цепная реакция для определения фрагментов генов риккетсий группы КПЛ

2.Полимеразная цепная реакция для определения фрагмента гена боррелий

3.Полимеразная цепная реакция для определения фрагмента гена бартонелл

Г. Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (рестрикционный анализ): 1 .Расчёт веса и количества рестрикционных фрагментов

2.Проведение рестрикционного анализа фрагмента гена отрА штаммов риккетсий группы КПЛ

3.Проведение рестрикционного анализа фрагмента гена отрА, полученного при амплификации ДНК клинического и полевого материала

Глава 5. Анализ заболеваемости клещевыми инфекциями

5.1.Анализ заболеваемости вирусным клещевым энцефалитом в России и Омской области

5.2.Анализ заболеваемости иксодовым клещевым боррелиозом в России и Омской области

5.3. Анализ динамики обращаемости населения Омской области по поводу присасывании клещей, а также численности диких мелких млекопитающих, отловленных на территории Омской области

5.4.Анализ заболеваемости клещевым риюсетсиозом в России

5.5 .Анализ заболеваемости бартонеллёзами в России 102 5.6.Территориальный анализ заболеваемости клещевыми инфекциями в

России в 2000 и 2007гг.

Глава 6. Результаты лабораторных методов исследования:

6.1. Результаты исследования штаммов риккетсий: а) Результаты полимеразной цепной реакции б) Результаты рестрикционного анализа

6.2.Результаты лабораторного исследования клещей, снятых с людей: а) Результаты иммуноферментного анализа б) Результаты полимеразной цепной реакции в) Результаты рестрикционного анализа снятых переносчиков

6.3.Результаты лабораторного исследования клещей из природных стаций: а) Результаты полимеразной цепной реакции б) Результаты рестрикционного анализа клещей из природных стаций

6.4. Результаты исследования снятых клещей и клещей из природных стаций

6.5. Результаты лабораторного исследования биоптатов пациентов: Клинико-лабораторные особенности у больных КР а) Результаты полимеразной цепной реакции б) Результаты рестрикционного анализа биоптатов

6.6. Результаты лабораторного исследования сывороток пациентов

6.7. Результаты исследования в ПЦР селезёнок мелких диких млекопитающих

6.8. Результаты исследования заражённости бартонеллами клещей, снятых с людей

6.9. Результаты исследования заражённости бартонеллами платяных вшей

Глава 7. Обсуждение результатов эпидемиологических и лабораторных исследований

7.1. Обсуждение результатов анализа регистрируемой заболеваемости ВКЭ, ИБСБ, КР в России и Омской области

7.2. Обсуждение результатов ПЦР и рестрикционного анализа штаммов риккетсий группы КПЛ

7.3. Обсуждение результатов исследования снятых переносчиков

7.4. Обсуждение результатов исследования клещей из природных стаций

7.5. Обсуждение результатов исследования биоптатов и сывороток пациентов

7.6. Обсуждение результатов ПЦР-детекции бартонелл

Глава 8. Система эпидемиологического надзора за клещевым риккетсиозом, основанная на применении молекулярно-генетических методов:

8.1 .Эпидемиологическая характеристика инфекций, передающихся иксодовыми клещами

8.2.Микробиологический мониторинг в системе эпидемиологоэпизоотологического надзора

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетические подходы к микробиологическому мониторингу в системе эпидемиологического надзора за риккетснозами группы клещевой пятнистой лихорадки и бартонеллёзами»

Актуальность темы

Риккетсии и бартонеллы относятся к возбудителям «новых» и «возвращающихся» инфекций. Отмечается активизация природных очагов эндемических риккетсиозов в разных странах мира, причины которой требуют всестороннего изучения.

Клещевой риккетсиоз зарегистрирован на 18 административных территориях азиатской части РФ. В последние годы в очагах клещевого риккетсиоза и на территориях с отсутствием заболеваемости этой инфекцией выявлен ряд патогенных риккетсий и риккетсий с неустановленной патогенностью, что требует разработки новых подходов к эпидемиологическому надзору за природными очагами (Шпынов С.Н., Рудаков Н.В., 2004). Имеющиеся данные о гетерогенности антигенных и генетических свойств риккетсий привели к необходимости комплексного использования классических и современных молекулярно-генетических методов исследования (Балаева Н.М.,1991; Roux V, Fournier Р-Е, Raoult D, 1996).

В связи с циркуляцией в природных очагах различных альфа-протеобактерий и схожестью клинических проявлений вызываемых ими заболеваний существенную актуальность имеет совершенствование методов и алгоритмов лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых риккетсиями группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ), бартонеллами и другими клещевыми альфа-протеобактериями. Одним из перспективных и недостаточно разработанных подходов является использование технологий, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР) и рестрикционном анализе, как более простой и доступной в практических лабораториях альтернативе технологиям ПЦР-секвенирования. Указанный подход может быть использован для повышения эффективности эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики риккетсиозов группы КПЛ, дифференциации R.sibirica от других видов риккетсий группы КПЛ, прежде всего от наиболее распространенной в клещах рода Dermacentor Rickettsia raoultii sp. nov. Молекулярно-генетические исследования с использованием ПЦР-рестрикционного анализа для дифференциации циркулирующих на территории РФ патогенных и непатогенных риккетсий в иксодовых клещах и в материалах от больных ранее не проводились. Широкое применение молекулярно-генетических методов позволило выявить, что бартонеллы являются этиологическими агентами целого спектра инфекционных болезней. Однако эпидемиологическая значимость членистоногих переносчиков и млекопитающих в качестве резервуара бартонелл в РФ изучена недостаточно.

Цель работы

Цель — повышение эффективности эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики риккетсиозов и других инфекций, вызываемых клещевыми альфа-протеобактериями, на основе подбора и совершенствования адекватных молекулярно-генетических подходов.

Задачи

1. Провести комплексный анализ структуры и уровней заболеваемости инфекций, передаваемых клещами, в территориальном и временном аспектах по федеральным округам РФ и административным территориям Сибирского федерального округа.

2. Отработать алгоритмы лабораторной дифференциации риккетсий группы КПЛ (R.sibirica, R.raoultii) с использованием ПЦР-рестрикционного анализа на музейных штаммах риккетсий.

3. Провести сравнительный анализ этиологической структуры и распространенности риккетсий в переносчиках и в материалах от пациентов на эндемичных по клещевому риккетсиозу территориях (Алтайский край) и территориях, свободных от этой инфекции (Омская область).

4. Провести скрининг заражённости бартонеллами диких мелких млекопитающих и клещей с использованием ПЦР.

5. Обосновать алгоритмы лабораторной диагностики риккетсиозов и детекции бартонелл и риккетсий с использованием технологий, основанных на ПЦР и рестрикционном анализе, в системе эпидемиологического надзора.

Научная новизна

Впервые в территориальном и временном аспектах проанализирована структура заболеваемости клещевыми инфекциями в разрезе федеральных округов РФ и административных территорий Сибирского федерального округа. Увеличение в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями ИКБ связано, в первую очередь, с уменьшением регистрируемой заболеваемости КЭ. Преобладание ИКБ в структуре заболеваемости отмечено в Центральном ФО, КЭ — в Уральском ФО, в Сибирском ФО регистрируются все три наиболее распространенные инфекции (КЭ, ИКБ, КР), КР преобладает в Дальневосточном ФО. На территориях, смежных с Омской областью, отмечается наиболее разнообразная структура заболеваемости клещевыми инфекциями.

С использованием комплекса лабораторных методов исследования установлена циркуляция на территории Омской области инфекционных агентов не только официально регистрируемых заболеваний (клещевого энцефалита и иксодового клещевого боррелиоза), но также возбудителей новых инфекций — R.raoultii (потенциальный патоген человека, вызывающий заболевание, сходное с синдромом TIBOLA) и Bartonella spp.(возбудители широкого спектра инфекций, объединяемых термином «бартонеллёзы»).

Осуществлена сравнительная оценка инфицированности риккетсиями переносчиков, собранных на эндемичных по клещевому риккетсиозу и свободных от этой инфекции территориях.

Впервые получены данные ПЦР-скрининга ДНК бартонелл в иксодовых клещах и мелких млекопитающих в Омской области, свидетельствующие об их широком распространении в Западной Сибири

Впервые разработаны и апробированы технологии молекулярно-биологических исследований, основанные на ПЦР-рестрикционном анализе, для дифференциации основных видов риккетсий, выявляемых в природных очагах Западной Сибири.

Впервые обосновано применение ПЦР-рестрикционного анализа для дифференциации патогенных (R.sibirica) и условно-патогенных (генотипы Rraoultii) риккетсий в иксодовых клещах и в материалах от больных. Отработаны алгоритмы дифференциации риккетсий основных видов и лабораторной диагностики риккетсиозов у пациентов, основанные на ПЦР-рестрикционном анализе.

Практическая значимость работы и внедрения

Обосновано введение в систему эпидемиолого-эпизоотологического надзора микробиологического мониторинга за риккетсиями группы КПЛ и бартонеллами.

В результате проведенных исследований отработана тактика применения ПЦР-рестрикционного анализа в комплексе методов, применяемых для молекулярно-биологической дифференциации альфа-протеобактерий в природных очагах.

Разработанные алгоритмы лабораторной диагностики на основе ПЦР-рестрикционного анализа использованы для совершенствования эпидемиологического надзора в природных очагах трансмиссивных инфекций.

По результатам проведенных исследований опубликованы статьи методического характера.

Подготовлено учебное пособие «Молекулярно-генетические методы диагностики риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки».

Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре микробиологии, иммунологии и вирусологии ОмГМА и в научно-исследовательской деятельности Омского БИИПОИ.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Выявлены существенные отличия в структуре и уровнях заболеваемости инфекциями, передаваемых клещами, в территориальном и временном аспектах по федеральным округам РФ и административным территориям Сибирского федерального округа, являющиеся отражением пространственной и функциональной структуры природных очагов.

2. Население Омской области подвержено риску заражения при присасывании клеща не только возбудителями регистрируемых инфекций (клещевой энцефалит и иксодовый клещевой боррелиоз), но и возбудителями «новых» инфекций, вызываемых R.raoultii и Bartonella spp., что требует совершенствования лабораторной диагностики и эпидемиологического надзора в сочетанных очагах.

3. ПЦР-рестрикционный анализ является эффективным методом для дифференциации R.sibirica и R.raoultii в комплексе методов, применяемых для молекулярно-биологической дифференциации альфа-протеобактерий в природных очагах.

4. Технологии, основанные на ПЦР-рестрикционном анализе, могут быть использованы для совершенствования лабораторной диагностики и эпизоотолого-эпидемиологического надзора за клещевыми риккетсиозами.

Апробация работы

Диссертационная работа апробирована на совместном заседании кафедр эпидемиологии, микробиологии, вирусологии и иммунологии Омской государственной медицинской академии, с участием научных сотрудников Омского НИИ природно-очаговых инфекций, 2009 г.

Основные положения диссертации доложены на следующих отечественных и международных конференциях: V межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты», г.Омск, 2004г.; научно-практической конференции, посвященной 75-летию кафедр инфекционных болезней взрослых и детей ОмГМА, г.Омск, 2005г.; конференции с международным участием «Актуальные вопросы региональной инфекционной патологии», посвященной 95-летию Института эпидемиологии и микробиологии НЦ МЭ ВСНЦ СО РАМН, г.Иркутск, 2007г.; УП межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения», г.Омск, 2007г.; VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, г.Москва, 2007г.; VIII межрегиональной конференции с международным участием «Актуальные проблемы сохранения здоровья населения Сибири», посвященной 70-летию медико-профилактического факультета Омской государственной медицинской академии, г.Омск, 2008г.

Основные результаты опубликованы в 10 печатных работах.

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 315 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами и 89 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырёх глав собственных исследований, заключения, выводов. Библиографический указатель содержит 217 источников, из которых 58 работ отечественных и 132 — зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Эпидемиология», Коломеец, Анна Николаевна

ВЫВОДЫ:

1. Выявлена тенденция изменения уровня регистрируемой заболеваемости клещевым энцефалитом, иксодовым клещевым боррелиозом и клещевым риккетсиозом в РФ и Омской области за 1997-2007гг. Тенденция снижения заболеваемости КЭ в Омской области совпадает с таковой по России. Уровень регистрации ИКБ в РФ и Омской области не имеет тенденции к изменению за период 1997-2007гг.

2. Проведён сравнительный анализ структуры заболеваемости передаваемых клещами инфекций в РФ и регионах РФ за 2000г. и 2007г. В 2000г. структура заболеваемости клещевыми инфекциями в РФ была представлена следующим образом: КЭ составлял 36,0%; на долю ИКБ приходилось 48,0%; на долю КР — 16,0%. В 2007г. доля КЭ в структуре заболеваемости снизилась, составив 25,0%±0,01; доля ИКБ, напротив, возросла и составила 58,0%. Долевое участие КР практически не изменилось — 17,0%.

3. При продвижении с запада на восток РФ отмечалось постепенное снижение долевого участия в заболеваемости клещевыми инфекциями иксодового клещевого боррелиоза с 94,8% в Центральном ФО до 26,1% в Сибирском ФО и 27,7% в Дальневосточном ФО. Наряду с этим увеличивалась доля заболеваемости клещевым энцефалитом с 5,2% в Центральном ФО до 68,5% в Уральском ФО, 26,1% в Сибирском ФО и снова снижалась до 6,4% в Дальневосточном. Доля заболеваемости клещевым риккетсиозом в структуре исследуемых нами клещевых инфекций увеличивалась: в Уральском ФО она составляла 0,6%, в Сибирском — 41,3%, а в Дальневосточном — 65,8%.

4. Впервые отработан алгоритм детекции и дифференциации риккетсий R. sibirica и R.raoultii с использованием ПЦР-рестрикционного анализа в полевом и клиническом материале, на основании которого обоснованы подходы эпидемиологического надзора на региональном уровне и алгоритмы лабораторной диагностики риккетсиозов.

5. Впервые в РФ в материале от пациентов (биоптат) с подозрением на клещевой риккетсиоз выявлена R.raoultii, что позволяет предположить её этиологическую роль в инфекционной патологии человека.

6. Выявление ДНК бартонелл во внутренних органах диких мелких млекопитающих (грызуны), членистоногих переносчиках (иксодовые клещи, вши) свидетельствует о широком распространении бартонелл в Омской области.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Выявление протеобактерий (бартонелл и риккетсий) у иксодовых клещей, мелких млекопитающих, в биоптатах пациентов / А.Н.Коломеец, С.Н.Шпынов, Н.В.Рудаков, И.В.Арсеньева // Вестник Российской Военно-медицинской академии. — 2008. - №2 (22). — С. 635-636.

2. Выявление протеобактерий (бартонелл и риккетсий), спирохет (боррелий) и вируса клещевого энцефалита у иксодовых клещей, мелких млекопитающих, в клиническом материале пациентов / А.Н.Коломеец и др. // Актуальные проблемы сохранения здоровья населения Сибири. — Омск, 2008. - С.228-231.

3. Дифференциация риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки с использованием комплекса молекулярно-генетических методов (ПЦР-ПДРФ) / А.Н.Коломеец, С.Н.Шпынов, Н.В.Рудаков, Л.В.Кумпан, И.Е.Самойленко, Т.А.Решетникова // Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения : матер.7 межрег. научно-практ. конф. с междунар. участием. - Омск, 2007. - Т.2. -С. 118-122.

4. Использование комплекса молекулярно-генетических методов (ПЦР-ПДРФ) для изучения риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки / А.Н.Коломеец, С.Н.Шпынов, Н.В.Рудаков, И.Е.Самойленко, Т.А.Решетникова, Л.В.Кумпан // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2007. 3 (55), прилож. - С. 117-120.

5. Коломеец А.Н. Методы выделения ДНК из различных биологических объектов / А.Н.Коломеец, С.А.Рудакова // Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты. — Омск, 2004. — Т.2. — С. 323.

6. Первые результаты изучения бартонеллезов в Омской области / Н.В.Рудаков, И.Е.Самойленко, Г.В.Березкина, А.Н.Коломеец, А.К.Танцев, С.Н.Шпынов, О.П.Мурзина, Л.В.Хорошавина, В.Н.Белов // Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения: матер.7 межрег. научно-практ. конф. с междунар. участием. - Омск, 2007. - Т.1.- С. 340-344.

7. Рудакова С.А. Актуальные аспекты эпидемиологии и профилактики трансмиссивных природноочаговых инфекций в Западной Сибири / С.А.Рудакова, А.Н.Коломеец, Н.В.Рудаков // Актуальные проблемы сохранения здоровья населения Сибири. — Омск, 2008. — С.368-372.

8. Экспресс-индикация трансмиссивных патогенов как основа дифференцированного подхода к профилактике инфекций, передающихся иксодовыми клещами / С.А.Рудакова, А.Н.Коломеец, И.Е.Самойленко, A.M. Кузьминов, Н.В.Рудаков // Бюллетень СО РАМН, 2007. - №4. -С. 116-119.

9. Эпидемиологическая оценка сочетанных очагов клещевого энцефалита, клещевого боррелиоза и гранулоцитарного анаплазмоза на юге Западной

Сибири / С.А.Рудакова, А.А.Матущенко, Н.В.Рудаков, А.Н.Коломеец, О.В.Бутаков, А.А.Рыбин, Л.Д.Щучинова // Омский научный вестник : ак туальные вопросы инфекционной патологии — 2005. - №4 (33), прилож. -С. 115-118. lO.Rudakova S.A. Genomic diagnostics of tick-borne borrelioses in West Siberia / S.A.Rudakova, E.V.Matuschenko, A.N.Kolomeetz // Proceedings of international scientific-practical interdisciplinary workshop. — Thailand, 2007. -P. 60-61.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема заболеваний, переносчиками которых являются иксодовые клещи, в последнее десятилетие приобретает все большее значение для многих регионов России, в том числе и для Западной Сибири.

В Западной Сибири отмечена сочетанность природных очагов клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза, клещевого риккетсиоза, Омской геморрагической лихорадки [40, 60, 70; 84].

В Омской области имеются сочетанные природные очаги таких инфекций, как клещевой энцефалит (КЭ), иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ), анаплазмозы, инфекционные агенты которых выявлены в клещах родов Ixodes и Dermacentor. Из инфекций, передающихся клещами, регистрируются КЭ и ИКБ. Всё большую актуальность приобретают «новые» и «возвращающиеся» инфекции, вызываемые риккетсиями и бартонеллами.

В связи с циркуляцией в природных очагах различных альфа-протеобактерий и схожестью клинических проявлений вызываемых ими заболеваний, существенную актуальность имеет совершенствование методов и алгоритмов лабораторной диагностики заболеваний, вызывающихся риккетсиями группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ), бартонеллами и другими клещевыми альфа-протеобактериями. Одним из перспективных и недостаточно разработанных подходов является использование технологий, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР) и рестрикционном анализе как более простой и доступной в практических лабораториях альтернативе технологиям ПЦР-секвенирования. Указанный подход может быть использован для эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики риккетсиозов группы КПЛ, дифференциации R.sibirica от других видов риккетсий группы КПЛ, прежде всего от наиболее распространенной в клещах рода Dermacentor Rickettsia raoultii sp. nov. Молекулярно-генетические исследования с использованием ПЦР-рестрикционного анализа для дифференциации циркулирующих на территории РФ патогенных и непатогенных риккетсий в иксодовых клещах и в материалах от больных ранее не проводились. Поэтому нами было проведено исследование вышеуказанных видов материала для восполнения этого пробела. Эпидемиологическая значимость членистоногих переносчиков и млекопитающих в качестве резервуара бартонелл также изучена недостаточно, и наше исследование отчасти восполнило недостаток и этой информации.

Таким образом, основной целью нашего исследования являлось совершенствование адекватных молекулярно-генетических подходов, и на их основе - повышение эффективности эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики риккетсиозов и других инфекций, вызываемых клещевыми протеобактериями.

Для достижения этой цели нами был проведён анализ основных тенденций эпидемического проявления природных очагов клещевого риккетсиоза, клещевого энцефалита и иксодового клещевого боррелиоза в РФ и Омской области за 1997-2007гг.; отработан алгоритм лабораторной дифференциации риккетсий группы КПЛ (R.sibirica, R.raoultii) с использованием ПЦР-рестрикционного анализа; проведён анализ этиологической структуры и распространенности риккетсий в переносчиках и в материалах от пациентов; проведён скрининг мелких млекопитающих (грызунов) и клещей на заражённость бартонеллами и обоснован алгоритм лабораторной диагностики риккетсиозов и детекции бартонелл и риккетсий с использованием технологий, основанных на ПЦР и рестрикционном анализе, в системе эпидемиологического надзора.

При анализе динамики заболеваемости КЭ по РФ была выявлена тенденция к снижению заболеваемости (Тсн=8,37%). Выраженная тенденция снижения регистрируемой заболеваемости КЭ наблюдается и в Омской области (Тсн=16,8%). Следовательно, тенденции заболеваемости КЭ в РФ и Омской области совпали. За анализируемый период уровень заболеваемости КЭ в РФ превысил показатели по Омской области в 1,5 раза (р<0,001).

При анализе динамики заболеваемости КЭ в сельских районах Омской области была выявлена выраженная тенденция к её снижению: Тсн=17,7%. За анализируемый период отмечается пик заболеваемости в 1999г. Увеличение уровня заболеваемости в 1999г. совпадает с подъёмом по РФ, что связано, возможно, с закономерностями, общими и для Омской области и для других регионов РФ. Показатели заболеваемости КЭ в сельских районах Омской области и среднефедеральные не имеют статистически значимых различий за анализируемый период (р>0,05).

При анализе динамики заболеваемости КЭ в г.Омске установлено наличие тенденции к снижению заболеваемости (Тсп=7,5%). За период 1997г. по 2007г. наибольший уровень регистрируемой заболеваемости 1,9 на 100 тыс. населения отмечался в 2000г. За исследуемый период показатели заболеваемости КЭ в РФ превысили показатели в г.Омске в 5,4 раза (р<0,001).

В результате проведённого анализа можно сделать следующее заключение: динамика регистрируемой заболеваемости КЭ в г.Омске, сельских районах Омской области и по Омской области в целом свидетельствует о наличии выраженной тенденции к снижению. Эта тенденция совпала с общей тенденцией, наблюдаемой по РФ. Отмечался пик заболеваемости в 1999г., который совпал с максимумом по РФ, что, вероятно, является следствием факторов, оказавших влияние на заболеваемость КЭ в большинстве эндемичных регионов России.

При изучении динамики заболеваемости ИКБ в РФ и в целом по Омской области нами были выявлены следующие закономерности: существенных изменений в динамике заболеваемости ИКБ по РФ и Омской области не выявлено (Тс„=0,3% и Тпр=0,4% соответственно). При этом показатели заболеваемости по РФ в 4,3 раза превысили таковые по области (р<0,001).

Динамика заболеваемости ИКБ в сельских районах Омской области имела умеренную тенденцию к снижению — (Тсн=3,8%), и показатели в 3,5 раза ниже по сравнению с среднефедеральными (р<0,001).

Динамика заболеваемости ИКБ в г.Омске демонстрировала наличие выраженной тенденции к росту 1997-2007гг. (Тпр=8,9%). Показатели заболеваемости ИКБ в РФ в 7,4 раза превысили показатели заболеваемости в г.Омске (р<0,001).

Таким образом, заболеваемость ИКБ по Омской области в целом ниже среднефедеральных показателей. Таким образом, тенденция снижения заболеваемости КЭ в Омской области совпадает с таковой по России, в отличие от ИКБ. Уровень заболеваемости ИКБ в РФ и Омской области оставался стабильным за период 1997-2007гг.

Несмотря на снижение регистрируемой заболеваемости, численность клещей I.persulcatus и D.reticulatus в Омской области с 2005г. по 2008г. имеет тенденцию к увеличению [21]. Также была выявлена прямая сильная корреляционная связь между количеством укусов клещей и уровнем заболеваемости КЭ (г=0,88) и слабая связь между количеством укусов и уровнем заболеваемости ИКБ (г^-0,07).

Третьей нозоформой, динамика заболеваемости которой нами исследовалась, является клещевой риккетсиоз (КР). Данное заболевание, также как КЭ и ИКБ, является облигатно-трансмиссивным, и имеет достаточно широкое распространение в Азиатской части России и за пределами РФ. В отличие от КЭ и ИКБ, КР не регистрируется на территории Омской области, хотя условия для циркуляции возбудителя данной инфекции имеются.

В динамике заболеваемости КР в РФ за 1997-2007гг. имеется тенденция к снижению заболеваемости (Тсн=10,2%).

Сопоставление территориального распределения заболеваемости КР за период с низким уровнем заболеваемости (60-е годы) и период резкого роста (1993-2002гг.) свидетельствует о его изменении за счёт увеличения доли заболеваемости в Западной Сибири (с 24,5 до 55,0%) и на Дальнем Востоке (с 7,5 до 23,0%). При этом доля заболеваемости в Восточной Сибири снизилась с 68,0 до 22,0%.

За период 2000-2007гг. территориальная структура заболеваемости КР в РФ не претерпела существенных изменений, несмотря на снижение общего количества регистрируемых случаев КР в РФ.

Использование молекулярно-биологических методов для мониторинга природных очагов КР на территории Омской области позволило выявить следующие виды риккетсий: R.helvetica, R.tarasevichiae и R.raoultii [48]. Следовательно, на территории Омской области циркулируют риккетсии, которые являются потенциальными патогенами человека. R.raoultii связывают с развитием синдрома «TIBOLA» [189], хотя окончательно роль этого вида в патологии человека не доказана.

На территории Омской области не осуществляется эпидемиологический надзор за КР, поскольку считается, что эта нозологическая форма здесь отсутствует. Роль вышеперечисленных видов риккетсий в качестве патогенов человека окончательно не доказана. Исходя из этого, крайне необходимым является внедрение в клинико-диагностическую практику точных, быстрых и относительно недорогих методов, каким является ПЦР. Метод ПЦР, дополненный рестрикционным анализом, является оптимальным для клинических лабораторий, благодаря простоте постановки, доступности реактивов и быстроте получения результата. Кроме того, он достаточно точен и легко может быть модифицирован путём подбора оптимального набора рестриктаз в зависимости от спектра риккетсий в конкретном регионе.

В 2000г. структура заболеваемости клещевыми инфекциями в РФ была представлена следующим образом: КЭ составлял 36,0%; на долю ИКБ приходилось 48,0%; на долю КР — 16,0%. В 2007г. доля КЭ в структуре заболеваемости снизилась, составив 25,0%; доля ИКБ, напротив, возросла и составила 58,0%. Долевое участие КР практически не изменилось — 17,0%. Общее количество зарегистрированных заболеваний КЭ за период 1997-2007гг. снизилось в 1,8 раза (р<0,001).

Первое место в 2000г. в структуре территориального распределения заболеваемости КЭ принадлежало Сибирскому ФО (50,9%), на втором месте располагался Приволжский ФО (21,9%). Третье место по заболеваемости занимал Уральский ФО (16,5%). Четвертое, пятое и шестое места принадлежали Северо-Западному (6,1%), Дальневосточному (3,4%) и Центральному ФО (1,1%), соответственно. Наибольшее число случаев КЭ в 2000г. зарегистрировано в Красноярском крае, Удмуртской республике, Пермской области, Свердловской и Томской области. Наибольшие показатели заболеваемости получены в Томской области, Удмуртской республике, Красноярском крае. В 2007г первое место в структуре территориального распределения заболеваемости КЭ также принадлежало Сибирскому ФО (52,6%), с третьего места на второе переместился Уральский ФО (16,4%). Доля Приволжского ФО в структуре заболеваемости снизилась (16,0%), и в 2007г. он занял третье место. Четвертое место принадлежало Северо-Западному ФО (11,0%), доля Центрального ФО возросла (2,2%) и он занял пятое место; доля Дальневосточного ФО по сравнению с 2000г., наоборот, снизилась (1,8%). Наибольшие показатели заболеваемости КЭ в 2007г. были получены в Томской области и республике Алтай, республике Удмуртия, Кировской и Курганской областях. Наибольшее число случаев заболеваний зарегистрировано в Красноярском крае, Пермском крае, Свердловской области.

Уровень заболеваемости КЭ в РФ снизился в 2007г. по сравнению с 2000г. в 1,8 раза (р<0,001).

В структуре территориального распределения ИКБ в 2000г. первое место принадлежало Приволжскому ФО (28,7%). Вторым по доле вклада в общую заболеваемость ИКБ являлся Сибирский ФО (20,1%). Третье место принадлежало Северо-Западному ФО (18,9%). Четвёртое место в структуре заболеваемости ИКБ занимал Центральный ФО (16,2%). Пятое место принадлежало Уральскому ФО (11,6%). На шестом месте располагался Дальневосточный ФО (4,3%). Последнее место в территориальной структуре заболеваемости ИКБ занимал Южный ФО (0,23%). Наибольшее число случаев

ИКБ зарегистрировано в Кировской и Пермской области, Удмуртской республике, г.Санкт-Петербурге, Томской, Свердловской и Ярославской областях. Наибольшие показатели заболеваемости ИКБ в 2000г. получены в УОБАО, Томской, Кировской, Костромской и Ярославской областях. Доли и ранг различных регионов в структуре заболеваемости ИКБ в 2007г. практически не изменились. Наибольшие показатели заболеваемости ИКБ в 2007г. были получены в Кировской области, Усть-Ордынском Бурятском АО и Вологодской области. Наибольшее число случаев ИКБ было зарегистрировано в Кировской области, Томской области, Вологодской области.

Уровень заболеваемости ИКБ в РФ не претерпел существенных изменений (р>0,05).

Первое место в территориальной структуре заболеваемости клещевым риккетсиозом в 2000г. принадлежало Сибирскому ФО (78,2%), второе -Дальневосточному ФО (21,4%), третье - Уральскому ФО (0,4%). В других округах РФ клещевой риккетсиоз зарегистрирован не был.

В 2007г. территориальная структура заболеваемости КР не претерпела существенных изменений. Первое место занимал СФО (79,3%); второе принадлежало Дальневосточному ФО (20,1%); третье — Уральскому ФО (0,6%). В других регионах РФ КР не регистрировался. Наибольшие уровни заболеваемости КР в 2000 и 2007гг. зарегистрированы в республике Алтай, УОБАО, Алтайском крае, Амурской и Тюменской области. Наибольшее число случаев заболеваний КРв 2000 и 2007гг. зарегистрировано в Алтайском крае, Приморском крае и Тюменской области.

Таким образом, территориальная структура заболеваемости КР в РФ не претерпела существенных изменений, несмотря на снижение уровня заболеваемости за 2000-2007гг. в 1,4 раза (р<0,001).

Таким образом, в территориальной структуре этих трёх инфекций, передаваемых через укус клеща, имеются отличия в различных округах РФ. За анализируемый временной период доля отдельных нозоформ в общей структуре также изменилась. При продвижении от западной границы РФ далее на восток в 2007г. происходит постепенное снижение доли ИКБ в структуре заболеваемости с 94,8% в Центральном ФО до 26,1% в Сибирском ФО и 27,7% в Дальневосточном ФО. с нарастанием доли КЭ с 5,2% в Центральном ФО до 68,5% в Уральском ФО, 26,1% в Сибирском ФО со снижением до 6,4% в Дальневосточном. На территории Уральского ФО в данной структуре появляется клещевой риккетсиоз (0,6%), доля которого увеличивается к восточной границе РФ (в Сибирском — 41,3%, а в Дальневосточном — 65,8%), тогда как вклад КЭ и ИКБ в общую структуру клещевых инфекций снижается.

При анализе структуры клещевых инфекций в округах РФ в 2007г. было установлено, что в Центральном ФО основная часть клещевых инфекций приходилась на ИКБ (94,8%), КЭ составлял небольшую часть (5,2%). В СевероЗападном ФО большую часть клещевых инфекций также составлял ИКБ (78,8%), тогда как на долю КЭ приходилось только 21,2%. В Южном ФО клещевой энцефалит и клещевой риккетсиоз не регистрировался, все случаи заболеваний после укуса клещей были диагностированы как ИКБ. В Приволжском ФО на ИКБ приходилось 79,3% всех случаев регистрируемых клещевых инфекций, на КЭ — 20,7%. В Уральском ФО доля ИКБ составляла 68,5%, доля КЭ - 30,8%, доля КР - 0,6 %. В Сибирском ФО доля ИКБ составляла 26,1%, КЭ - 32,5%; КР — 41,3%. В Дальневосточном ФО на долю ИКБ приходилось 27,7%; на долю КЭ - 6,4%, 15; КР - 65,8%.

Нами была проанализирована таюке заболеваемость КЭ, ИКБ и КР в отдельных областях РФ, относящихся к Уральскому (Курганская, Свердловская, Тюменская и Челябинская области) и Сибирскому федеральным округам в 2000г. и 2007г. В регионах Уральского ФО в 2007г. по сравнению с 2000г. отмечались сходные с СФО изменения, касающиеся увеличения доли ИКБ в структуре клещевых инфекций (с 48,3% в 2000г. до 68,5% в 2007г.) при снижении доли КЭ (с 51,7% в 2000г. до 30,8% в 2007г.). В СФО в 2007г. по сравнению с 2000г. отмечалось практически повсеместное снижение долевого участия в структуре клещевых инфекций клещевого энцефалита (с 45,1% в 2000г. до 32,6% в 2007г.), за исключением республики Алтай и Читинской области, где доля данной нозоформы, напротив, увеличилась. Во всех регионах СФО, за исключением УОБАО и Томской области, отмечалось увеличение доли ИКБ в 2007г.(26,1%) по сравнению с 2000г. (23,8%). В УОБАО доля ИКБ в 2007г. снизилась, а в Томской области осталась без изменений. Доля КР увеличилась практически во всех регионах СФО (с 31,1% в 2000г. до 41,3% в

2007г.), за исключением республики Алтай и Читинской области, где отмечалось её снижение.

Доля заболеваемости клещевым риккетсиозом в структуре исследуемых нами клещевых инфекций увеличивалась: в Уральском ФО она составляла 0,6%, в Сибирском - 41,3%, а в Дальневосточном — 65,8%.

В Челябинской области в 2000г. на долю КЭ приходилось 47,8%; на ИКБ — 52,2%.

В 2007г. в структуре произошли существенные изменения: доля КЭ снизилась до 28,1% ; доля ИКБ, напротив, возросла до 71,9%.

При анализе структуры клещевых инфекций в 2000г. в Свердловской области было установлено, что КЭ и ИКБ составляют примерно одинаковые доли в клещевых инфекциях (50,4 %и 49,6 %, соответственно).

В 2007г. в структуре клещевых инфекций Свердловской области произошли существенные изменения: доля ИКБ возросла до 75,5%; тогда как КЭ составил только 24,3%.

В Курганской области в 2000г. в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями КЭ составлял 63,4%; на долю ИКБ приходилось 34,9 %; а КР — 1,6%.

В 2007г. в структуре клещевых инфекций произошли некоторые изменения: так, возросла доля ИКБ (39,2%); доля КЭ, напротив, снизилась (58,9%). Доля КР осталась практически не изменилась (1,7%).

В Тюменской области на долю КЭ приходилось более половины всех клещевых инфекций (56,8 %), на долю ИКБ — 39,6 %; доля КР составляла 3,6 %.

В 2007г. в Тюменской области среди клещевых инфекций увеличилась доля ИКБ (46,6% 1), а также КР (6,1%). Доля КЭ, напротив, снизилась, составив 47,4%.

В СФО нами была проанализирована заболеваемость клещевыми инфекциями в 2000г и 2007г. в республиках Алтай, Бурятии, Тыве, Хакасии; Алтайском, Красноярском краях; Иркутской, Кемеровской, Новосибирской, Омской, Томской, Читинской областях; УОБАО.

В Омской области клещевой риккетсиоз не регистрировался. На долю клещевого энцефалита в 2000г. приходилось 83,0%. Иксодовый клещевой боррелиоз составлял 17,0 %.

В 2007г. долевое участие КЭ и ИКБ в структуре клещевых инфекций в Омской области приняло прямо противоположный характер. Доля КЭ составляла только 20,5%; тогда как доля ИКБ возросла, составив 79,5%.

В Томской области клещевой риккетсиоз не регистрировался. Доли клещевого энцефалита и иксодового клещевого боррелиоза в 2000г. были примерно одинаковыми и составляли соответственно: 47,2% и 52,8%.

В 2007г. структура практически не изменилась. КЭ составлял 48,0%, а ИКБ - 52,0%.

В Новосибирской области клещевой энцефалит составлял 56,8 %. На долю ИКБ приходилось 33,5 %±0,06. Клещевой риккетсиоз составлял 9,6 %.

В 2007г. долевое участие КЭ снизилось, составив 37,1%, тогда как доли ИКБ и КР возросли (47,7% и 15,2%, соответственно).

В Алтайском крае на долю КЭ приходилась небольшая часть заболеваний — 9,0 %; на долю ИКБ — 1,7 %. Клещевой риккетсиоз составлял наибольшую долю в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями - 89,2%.

В 2007г. доля КР в Алтайском крае среди клещевых инфекций возросла, составив 92,7%. Также немного увеличилась доля ИКБ (3,2%); доля КЭ, напротив, уменьшилась (4,1%).

В республике Алтай первое место в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями занимал КР, составив 75,6 %; доля КЭ составляла 18,7 %; на долю ИКБ приходилось 5,6 %.

В 2007г. доли КЭ и ИКБ увеличились, составив 27,5% и 9,8%, соответственно. Доля КР, напротив, уменьшилась до 62,7%.

В Кемеровской области КЭ в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями КЭ составлял 71,2%; ИКБ составлял 27,4 %. Клещевой риккетсиоз занимал незначительную долю и составлял 1,3 %.

В 2007г. в структуре изменилось соотношение долей КЭ и ИКБ. На долю КЭ приходилось лишь 52,3%, тогда как доля ИКБ возросла, составив 45,7%. Доля КР практически не изменилась (1,9%).

В республике Хакасия доля КЭ в структуре клещевых инфекций составила 47,2%; доля ИКБ - 18,4%. Клещевой риккетсиоз составил 34,4%.

В 2007г. доля КЭ снизилась до 27,6%. Доля ИКБ практически не изменилась, составив 17,3%. Доля КР, напротив, возросла, составив 55,1%.

В Красноярском крае в 2000г. на долю клещевого энцефалита приходилось 65,6 %; на долю ИКБ — 20,6 %. Клещевой риккетсиоз составлял 13,8 %.

В 2007г. доля КЭ снизилась, составив 55,0%. Доли ИКБ и КР, напротив, возросли, составив 28,0% и 17,0%, соответственно.

В республике Тыва на долю КЭ приходилось 50,3 %; примерно такую же долю составила заболеваемость КР — 46,8 %. На долю ИКБ приходилось только 2,8 %.

В 2007г. наблюдалось увеличение доли КР, которая составила 53,2%, а также увеличение доли ИКБ до 3,9%, наряду с уменьшением доли КЭ до 42,8%.

В Иркутской области клещевой энцефалит составлял 60,8% в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями. ИКБ составлял 35,2 %. На долю клещевого риккетсиоза приходилось 4,1 %.

В 2007г. в данной структуре произошли существенные изменения : возросло долевое участие ИКБ (55,0%); также увеличилась доля КР (10,9%). Доля КЭ, напротив, снизилась, составив 34,1%.

В Усть-Ордынском Бурятском автономном округе в 2000г. большая часть клещевых инфекций приходилась на ИКБ, который составил 49,6%, тогда как на долю КЭ — 17,2 %. Клещевой риккетсиоз составлял 33,1 %.

В 2007г. доли КЭ и ИКБ в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями снизились, составив 10,8% и 44,0%, соответственно. Доля КР, напротив, возросла до 45,2%.

В республике Бурятия первое место в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями занимал клещевой энцефалит — 65,3%; примерно одинаковые доли занимали ИКБ и КР — 16,7 % и 17,9 % соответственно.

В 2007г. доля КЭ снизилась на 15%, составив 50,9%; тогда как доля ИКБ и JCP возросли (24,3% и 27,8%, соответственно).

В Читинской области в 2000г. на долю клещевого энцефалита приходилось 58,9%. Клещевой риккетсиоз составлял 34,2%, тогда как иксодовый клещевой боррелиоз составлял 6,8%.

В 2007г. додя КЭ в структуре заболеваемости возросла, составив 60,7%, также увеличилась доля ИКБ (16,9%). Доля КР, напротив, снизилась, составив 22,3%.

Таким образом, на территориях, находящихся в сходных климато-географических условия с Омской областью, наряду в КЭ и ИКБ регистрируется и КР, что даёт основание предполагать наличие очагов данной инфекции и на территории Омской области.

В республике Алтай наибольшая доля заболеваемости также принадлежала клещевому риккетсиозу, его доля в структуре заболеваемости клещевыми инфекциями составляла 62,7%; доля КЭ составляла 27,5%, а ИКБ — 9,8/%. В Томской области КЭ составлял 48,0%, ИКБ — 52,0%. В Кемеровской области 52,3% приходилось на клещевой энцефалит, 45,7% - ИКБ, 1,9% - КР. В Хакасии доля клещевого энцефалита составляла 27,6%, ИКБ — 17,3%, КР — 55,1%. В Красноярском крае 55,0% приходилось на КЭ, 28,0% - на ИКБ; 17,0% - на КР. В республике Тыва клещевой энцефалит и клещевой риккетсиоз составляли примерно одинаковые доли в структуре заболеваемости (53,2% и 42,8% соответственно), а на долю ИКБ приходилось 3,9%. В республике Бурятия на дол1р КЭ приходилось 50,9%, на долю ИКБ - 24,3%, на долю КР — 27,8%. В Иркутской области структура заболеваемости клещевыми цнфекциями была представлена следующим образом: КЭ — 34,1%; ИКБ — 55,0%, КР - 10,9%. В УОБАО на долю КЭ приходилось 10,8%, наибольшая доля заболеваемости клещевыми инфекциями принадлежала ИКБ, который составлял 44,0%, на долю КР приходилось 45,2%. В Читинской области КЭ составлял 60,7%, ИКБ - 16,9%, КР - 22,3%.

Причиной различных показателей заболеваемости в регионах РФ является широкий спектр факторов, влияющих на неё.

На регистрируемую заболеваемость оказывают влияние как природные, так ц социальные факторы. Заражённость клещей-переносчиков является, наверное, основным и самым важным фактором, оказывающим значительное влияние на показатели заболеваемости той или иной нозоформой. Немаловажное значение имеет и численность клещей на территории, которая в свою очередь зависит от комплекса биотических и абиотических факторов, экологии определённого вида клещей, а также вида и численности их прокормителей, качества проведения акарицидных обработок, характера климатических изменений в течение года, что создает, соответственно, более или менее благоприятные условия и для циркуляции инфекционного агента в природном очаге.

В формировании ареалов видов иксодовых клещей главными являются абиотические условия. Каждый вид в силу своих исторически выработавшихся биологических потребностей занимает то пространство, на котором обеспечен физическими условиями, необходимыми для полного завершения своего жизненного цикла Роль биотических условий проявляется, в основном, в количественном распределении клещей в пределах их ареалов по различным типам местообитаний. Для иксодовых клещей в целом характерна большая неравномерность в распределении на местности в пределах ареала, что связано с особенностями расселения их хозяев-прокормителей. Качественный и количественный состав населения клещей также находится в определённой связи с ландшафтными особенностями природных территориальных подразделений географической оболочки Земли и в значительной мере зависит от характера их хозяйственного использования. Следовательно, такие факторы как обеспеченность теплом и влагой, наличие прокормителей и характер распределения последних могут иметь индикационное значение при определении характера населения иксодовых клещей. (Вершинина Т.А., 1985) Из социальных факторов, влияющих на регистрируемую заболеваемость клещевыми инфекциями, главным является обращаемость населения в лечебно-диагностические учреждения по поводу присасывания клеща. Обращаемость населения складывается из различных компонентов, в том числе частоты контактов населения с очагами, сезонной активности клещей, уровнем информированности населения о риске заражения различными инфекциями при присасывании клеща, а также доступности медицинской помощи в территориальном и финансовом аспектах.

Такая мультифакториальность регистрируемой заболеваемости затрудняет проведение эпидемиологического анализа и прогнозирование заболеваемости, т.к. получаемые статистические данные как бы «размываются» таким множеством влияний.

Количество патогенов, которые могут передаваться человеку клещами, не ограничивается рассмотренными нами. К таким инфекционным агентам ртносятся также эрлихии, анаплазмы, бабезии, бартонеллы, и этот спектр, возможно, будет расширяться.

Нами впервые были разработаны и апробированы технологии молекулярно-биологических исследований, основанные на ПЦР-рестрикционном анализе, для дифференциации основных видов риккетсий, выявляемых в природных очагах Западной Сибири.

Применение рестрикционного анализа с использованием эндонуклеаз (Rsal и PstI) позволило нам чётко дифференцировать два вида риккетсий:

7. R. sibirica, включающая подвиды R. sibirica subsp.sibirica и R. sibirica subsp.BJ-90

8. R.raoultii, врючающая геноварианты R.sp.DnS14, R.sp.DnS28, R.sp. RpA4,.

При исследовании клинического и полевого материала на наличие ДНК риккетсий получены следующие результаты: снятые переносчики в 18,7 % содержали фрагмент гена цитрат-синтазы, клещи относились к виду D.reticulatus (10 образцов) и I.persulcatus (2 образца) и в 23,4%- фрагмент гена цоверхностного белка отрА (все клещи относились к виду D.reticulatus). Фрагмент гена отрА в клещах I.persulcatus обнаружен не был. Рестрикционный анализ показал вариант профилей, соответствующий виду R.raoultii.

Антиген вирусов комплекса клещевого энцефалита выявлен в 7,8% снятых клещей, все клещи относились к виду D.reticulatus. Наличие фрагмента гена ospA боррелий выявлено в 1 случае (1,6%) у клеща D.reticulatus.

Микст-инфицирование (антиген вируса клещевого энцефалита в ИФА и ген отрА риккетсий в ПЦР) было обнаружено в одном случае из клеща D.reticulatus.

При исследовании 62 образцов ДНК клещей из природных стаций фрагмент гена gltA выявлен в 17,7%, гена отрА - в 21,0%. При рестрикции получен вариант профилей, соответствующий R.raoulti.

Наши исследования показали, что использование для детекции риккетсий в клещах одного гена-мишени не выявляет все случаи инфицирования данными агентами, т.к. только небольшая часть проб (10,3% от 126 проб ДНК клещей) дала положительный результат на оба фрагмента гена риккетсий. Большая часть положительных проб (19,8% от 126 проб) была выявлена с праймерами на какой-то один ген-мишень из исследуемых двух (gltA и отрА). Используя оба праймера, мы можем выявить большее количество проб, содержащих ДНК риккетсий.

Из 45 образцов ДНК биоптатов положительными в ПЦР на фрагмент гена цитрат-синтазы оказались 14 (31,1%). С праймерами на фрагмент гена отрА положительный результат получен в 2,2% (1 проба). При рестрикции получен вариант профилей, соответствующий R.raoultii. Для подтверждения результатов исследований необходимо секвенирование полученных фрагментов.

Все образцы ДНК сывороток в ПЦР дали отрицательный результат, что вероятно, связано с поздним взятием крови у пациента для исследования.

Таким образом, используя молекулярно-генетические методы, нам удалось получить результаты, свидетельствующие о наличии ДНК риккетсии R.raoultii в полевом и клиническом материале, что позволяет предположить этиологическую роль данного вида риккетсий в развитии инфекционного процесса.

В Омской области в результате скрининга мелких диких млекопитающих с использованием ПЦР и секвенирования были выявлены бартонеллы известных видов: B.grahamii и B.taylorii, а также два генотипа, представляющие, вероятно, новые виды бартонелл [62].

Так как в РФ бартонеллёзы не регистрируются, нет возможности на данном этапе оценить распространённость этой инфекции.

Нами впервые получены данные ПЦР-скрининга переносчиков и мелких млекопитающих в Омской области, свидетельствующие о широком распространении в Западной Сибири бартонелл, этиологическая структура которых и роль в региональной инфекционной патологии требует дальнейшего изучения.

При исследовании мелких диких млекопитающих, отловленных в Омской области, ДНК бартонелл была выявлена у следующих видов грызунов: М. gregalis — узкочерепной полёвки в 1,1%, M.oeconomus — полёвки экономки (1,5%), CI. rutilus — красной полёвки(4,5%), A.agrarius — полевой мыши (0,8%), A.sylvaticus — лесной мыши(0,4%), Sorex araneus - обыкновенной бурозубки (0,4%).

Клещи I.persulcatus, снятые с людей, содержали ДНК бартонелл в 35,0%, одна проба содержала антиген вируса КЭ, микст-инфицирования обнаружено не было. При исследовании платяных вшей было выявлено 15,0% положительных проб.

Таким образрм, полученные данные свидетельствуют о заражённости бартонеллами диких мелких млекопитающих и иксодовых клещей в Омской области, однако для определения их видовой принадлежности необходимо секвенирование полученных фрагментов генов. Детекция бартонелл в органах диких млекопитающих и членистоногих переносчиках, снятых с людей доказывает возможность заражения человека при кровопитании переносчика.

Принимая во внимание полученные нами данные, необходимо ввести в информационную подсистему эпидемиологического надзора блок лабораторных исследований, направленных на детекцию и идентификацию в клещах и материале от пациентов риккетсий группы КПЛ, а также детекцию в клещах, диких мелких млекопитающих и материале от пациентов бартонелл с использованием ПЦР и рестрикционного анализа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Коломеец, Анна Николаевна, 2009 год

1. Актуальные аспекты изучения и профилактики клещевого риккетсиоза в Прибайкалье / И.В.Козлова и др. // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. -2007. №3 (приложение). - С. 99-105.

2. Алексеев, А.Н. Возможные последствия вероятного глобального потепления климата для распространения кровососущих эктопаразитов и передаваемых ими патогенов / А.Н. Алексеев // Изменение климата и здоровье России в XXI веке. — 2004. — С. 67-79.

3. Алексеев, А.Н. Диагностически и клинически важные аспекты изучения смешанных клещевых инфекций Электронный ресурс. / А.Н. Алексеев // Режим доступа: http://www.vaccina.kz/articles/letterl2.shtml [Дата обращения: 10.11.2008]

4. Балаева, Н.М. Подходы к молекулярной эпидемиологии риккетсиозов / Н.М. Балаева // Журн. микробиол. 1991. - № 1. - С. 72-75.

5. Балашов, Ю.С. Кровососущие членистоногие и риккетсии / Ю.С.Балашов, А.Б.Дайтер. JI. : Наука, 1973. — 252 с.

6. Бартонеллы и бартонеллёзы — новые и возвращающиеся, эпидемиология, клиника, диагностика / О.Ю.Медянников и др. // Журнал микробиологии. 2005. - №1. - С. 83-89.

7. Вершинина, Т.А. Картографирование размещения и сезонной активности иксодовых клещей / Т.А. Вершинина. — Новосибирск : Наука; Сиб. отделение, 1985. — 77с.

8. Выявление в России природных очагов бабезиоза и гранулоцитарного эрлихиоза / S.R. Telford et al. // Журн. микробиологии. — 2002. № 6. -С. 21-25.

9. Выявление различных видов риккетсий у иксодовых клещей, в крови людей и мелких млекопитающих на юге Западной Сибири и на Урале / Я.П.Иголкина и др. // Бюллетень сибирской медицины. — 2006. — Приложение 1. —С. 121-125.

10. Выявление эрлихий в клещах I.persulcatus на Урале и в азиатской части России / С.Н. Шпынов и др. // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. 2002. - Т. 2, №4. -С. 139-141.

11. Гельвер, Е.С. Здоровье населения Электронный ресурс. / Е.С. Гельвер // Изменения природных и хозяйственных систем в XX в. — С. 86-100. Режим доступа: http://www.vaccina.kz/articles/letterl2.shtnil [Дата обращения: 10.11.2008].

12. Генотипирование риккетсий группы клещевых пятнистых лихорадок в очагах клещевого риккетсиоза в Красноярском крае / С.Н. Шпынов и др. // Здоровье населения и среда обитания. — 2005. — № 10 (51). — С. 2427.

13. Дворецкий, Л.И. Дифференциальный дигноз при лимфаденопатиях Электронный ресурс. / Л.И.Дворецкий // Режим доступа: http://old.consilium-medicum.eom/media/refer/0502/3.shtml [Дата обращения: 27.03.2009].

14. Детекция ДНК бартонелл в иксодовых клещах, комарах и в крови больных Новосибирской области / О.В.Морозова и др. // Бюллетень сибирской медицины. — 2006. №1. — С. 106-110.

15. Долгих, Т.И. Лимфаденопатии инфекционного генеза: новые возможности иммунореабилитации Электронный ресурс. / Т.И. Долгих //Режим доступа: 2006 opit 06 limfa.doc [Дата обращения: 27.03.2009].

16. Дубинина, Е.В. Динамика биоразнообразия возбудителей болезней, переносимых клещами рода Ixodes: анализ многолетних данных / Е.В.Дубинина, А.Н.Алексеев // Мед. паразитология. 1999. - №2. — С. 1319.

17. Дунаев, Н.Б. Смешанная инфекция туляремии и Омской геморрагической лихорадки в эксперименте на водяных полёвках / Н.Б. Дунаев // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1976.-№8.-С. 118-122.

18. Евстафьев, И.Л. Болезнь Лайма. История вопроса Электронный ресурс. / И.Л. Евстафьев // Режим доступа: http://www.zooeco.com/nauc-st24.html - [Дата обращения: 15.05.2009].

19. WWU.'tLUi / и JIV/1U1U . Т1 i- li I ^ W w UJU1\. у JiDi.L' 1 {.L * 1»1 1W * i L UUt 1Y1 ',<-1 - Ul\U/^UlVlIltLaf~~' * i * ■- ; Л Q T ' ' } О v i

20. К вопросу об этиологии гранулопитаоного эолихиоза человека на Дальнем Востоке России /' О.Ю. Медянников Ги др. // Тихоокеан. мед. журнал. 2001. - № 2(7). - С. 126.

21. Клещевой риккетсиоз в Новосибирской области / Н.В. Рудаков и др. // Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения Омской области: материалы обл. науч.-практ. конф. Омск, 2000. - С. 192-194.

22. Климат как один из факторов, влияющих на уровень заболеваемости клещевым энцефалитом / B.PI. Злобин и др.1 // Изменение климата и здоровье России в XXI веке. — 2004. — С. 121-124.

23. Кучерук, В.В. Антропогенная трансформация окружающей среды и природно-очаговые болезни /В.В. Кучерук // Вестник АМН СССР. — 1980. №Ю. - С.24-32.

24. Кучерук, В.В. Избранные труды / В.В.Кучерук. — М. : Товарищество научных изданий, 2006. 523 с.

25. Лобан, К.М. Важнейшие риккетсиозы человека / К.М.Лобан. — Л. : Медицина, 1980. 376 С.

26. Лукин, Е.П. Таксономия и классификация риккетсий / Е.П.Лукин, А.А.Воробьев, А.С.Быков // Журнал микробиологии. — 2001. — №2. — С. 104-110.

27. Лысковцев, М.М. Клещевой риккетсиоз / М.М.Лысковцев. — М. : Медгиз, 1963.-267 с.

28. Маевский, М.М. Экспериментальная сыпнотифозная инфекция у белых мышей / М.М. Маевский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1943. -№1.- С. 17.

29. Молекулярно-генетические методы типирования бартонелл / М.Ю.Кириллов и др. // Молекулярная генетика, биология и вирусология. 2007. - №1. - С. 8-15.

30. Молекулярно-генетический анализ инфекций, переносимых клещами, в Новосибирской области / О.В.Морозова и др. // Генодиагностика инфекционных болезней : сб. науч. тр. — М., 2004. — т.2. — С.79-81.

31. Некоторые итоги изучения риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки в России и Казахстане / С.Н.Шпынов и др. //

32. Природноочаговые болезни человека : Респ. сб. науч. работ, посвященный 80-летию Омского НИИПИ. — Омск, 2001. — С. 83-89.

33. РАМН. 9-10 декабря 2003г. М.,2003. - С. 23-24.

34. Первое выявление Rickettsia heilongjiangensis в клещах Haemaphysalis concinna на территории России / С.Н. Шпынов и др. // Здоровье населения и среда обитания. — 2003. № 12. — С. 16-20.

35. Природно-очаговые инфекции в XXI веке в России / А.Е. Платонов и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2009. — №2. — С. 30-35.

36. Пшеничнов, А.В. Универсальный метод изучения инфекций, передаваемых человеку кровососущими насекомыми, и новая вакцина против сыпного тифа / А.В. Пшеничнов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1943. - №1 - С. 43.

37. Результаты исследования грызунов из сопряжённого очага туляремии и Омской геморрагической лихорадки в лесостепной зоне Западной Сибири / В.В. Якименко // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: материалы конференции. — СПб., 2008. — С. 107.

38. Результаты исследования сочетанного очага лептоспироза и хантавирусной инфекции в Приморье / В.Б. Туркутюков и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2002. - № 2. - С. 34-35.

39. Результаты скрининга ДНК бартонелл в органах мелких диких млекопитающих в Омской области / И.Е.Самойленко и др. // Медицина в Кузбассе: актуальные проблемы клещевых нейроинфекций. — 2008. -№5. С. 140-142.

40. Рудаков, Н.В. Классификация и основные характеристики риккетсий / Н.В. Рудаков, С.Н. Шпынов, И.Е. Самойленко // Природноочаговые болезни человека. — Омск, 2001. — С. 152-161.

41. Рудаков, Н.В. Клещевой риккетсиоз / Н.В.Рудаков, А.С.Оберт. — Омск,2001.- 120 с.

42. Рудаков, Н.В. Представители порядка Rickettsiales: учеб.пособ. / Н.В.Рудаков. — Омск : изд-во ОмГМА, 2007. — 76 с.

43. Рудакова, С.А. Иксодовые клещевые боррелиозы в сочетанных природных очагах трансмиссивных инфекций Западной Сибири автореф. дис.д-ра мед. наук / С.А. Рудакова. — Омск, 2007. — 40 с.

44. Рудакова, С.А. Иксодовые клещевые боррелиозы в сочетанных природных очагах Западной Сибири / С.А. Рудакова // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН.-2007.-№3 (55).-С. 151-155.

45. Совмещённые очаги чумы и клещевого энцефалита на юго-западе Тувы / А.Ф.Даниленко и др. // Докл. Иркутского противочумного института, 1971. Вып. IX. - С. 19-22.

46. Современные подходы к изучению Rickettsiales / Н.В.Рудаков и др. // Бюллетень сибирской медицины. — 2006. — приложение.1 — С. 111-115.

47. Тарасевич, И.В. Современные представления о риккетсиозах / И.В.Тарасевич // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2005. - Т.7, №2. - С. 119-129.

48. Тарасов, В. Клещевой энцефалит Электронный ресурс. / В. Тарасов // Медицинская газета. — 2003. №34 - Режим доступа: http://www.neuro.net.ru/bibliot/b001/mg3403.html.

49. Туляремия и Омская геморрагическая лихорадка у ондатр Западной Сибири / JI.C. Егорова и др. // Туляремия и сопутствующие инфекции: Материалы науч.-практ. конф. — Омск, 1965. — С. 74-79.

50. Ушаков, А.В. Об ассоциированности природных очагов зоонозов / А.В. Ушаков, Н.И. Скареднов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2002. - № 2. - С. 45-48.

51. Хазова, Т.Г. Эколого-паразитологическая характеристика природных очагов клещевого энцефалита в Красноярском крае / Т.Г. Хазова // Бюллетень СО РАМН. 2007. - №4. - С. 94-99.

52. Шпынов, С.Н.Современное состояние очагов клещевого риккетсиоза в Российской Федерации / С.Н.Шпынов, Н.В. Рудаков // ЗНиСО. 2004. -№10(139).- С.36-39.

53. Экспериментальное изучение биологических свойств риккетсий трёх новых генотипов из группы клещевой пятнистой лихорадки / И.Е. Самойленко и др. // Природноочаговые болезни человека. — Омск, 2001. С. 89-95.

54. Эпидемиология, этиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика иксодовых клещевых боррелиозов : рекомендации для врачей /Ю.В. Лобзин и др.. СПб.: 2000. - 51с.

55. Яблонская, В.А. Новое в серодиагностике риккетсиозов / В.А.Яблонская // Вопросы риюсетсиологии : сб. науч. тр. — М., 1985. — С. 80-84.

56. Яблонская, В.А. Серологические методы диагностики риккетсиозов / В.А.Яблонская // Вопросы риюсетсиологии : сб. науч. тр. М., 1978. — С. 54-55.

57. Ястребов, В.К. Клещевой энцефалит в Сибири: эпидемиология, сочетанность природных очагов / В.КЛстребов // Бюллетень СО РАМН.- 2007. №4 (126). - С. 89-93.

58. A comparison of serologic methods for diagnosis of Rocky Mountain spotted fever / R.N. Philip et al. // Am. J. Epidemiol. 1977. - Vol.105. - P. 56-67.

59. A comparison of the complement fixation, indirect fluorescent antibody, and microagglutination tests for the serological diagnosis of rickettsial diseases / V.F. Newhouse et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1979. - Vol.28. - P. 387395.

60. A microagglutination technique for detection and measurement of rickettsial antibodies / P. Fiset et al. // Acta Virol. Vol.13. - P. 60-66.

61. A new tick-transmitted disease due to Rickettsia slovaca / D. Raoult // Lancet.- 1997. Vol.350. - P. 112-113.

62. А protective protein antigen of Rickettsia rickettsii has tandemly repeated, near-identical sequences / B.E. Anderson et al. // Infect. Immun. — 1990. — Vol.58.-P. 2760-2769.

63. Absorption of Rickettsia rickettsii antibodies by Rickettsia rickettsii antigens in four diagnostic tests / K.E. Hechemy et al. // J. Clin. Microbiol. — 1983. — Vol.17.-P. 445-449.

64. Acute Tick-Borne Rickettsiosis Caused by Rickettsia heilonjiangensis in the Russian Far East / O.Y.Mediannikov et al. // Emerging Infectious Diseases. — 2004. Vol. 10, №5 - P. 810-817.

65. African tick-bite fever — a new spotted fever group rickettsiosis under an old name / P.J.Kelly et al. // Lancet. 1992. - Vol.340. - P. 982-983.

66. Aneruptive Fever Associated with Antibodies to Rickettsia Helvetica in Europe and Thailand / P.-E.Fournier et al. // Journal of Clinical Microbiology. 2004. - Vol. 42, №2. - P. 816-818.

67. Astrakhan fever rickettsial antigenic and genotypic analysis of isolates obtained from human and Rhipicephalus pumilio ticks / M.E. Eremeeva et al. // Am. J. Trap. Med. Hyg. 1994. - Vol.51. - P. 697-706.

68. Astrakhan fever: new spotted fever group rickettsiosis / I.V.Tarasevich et al. // Lancet. 1991. - Vol.337. - P. 172-173.

69. Beati, L. Rickettsia massiliae sp. nov., a new spotted fever group rickettsia / L.Beati, L.Raoult // J. Syst. Bacterid. 1993. - Vol.43. - P. 839-840.

70. Biological and genetic characterization of Rickettsia sibirica strains in the endemic area of the north asian tick typhus / N/V/ Balaeva et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1996. - №55 (6). - P. 685-692.

71. Breitschwerdt, E.B Bartonella infection in animals: caniership, reservoir potential, pathogenicity, and zoonotic potential for human infection / Breitschwerdt E.B, Kordick D.L. // Clin Microbiol Rev. 2000. - Vol.13. - P. 428-38.

72. Brumpt, E. Les spirochetoses / E.Brumpt // Nouveau traite de medicine / H.Roger, G.W.Vidal, P.Teissier (ed.). Masson, Paris, France, 1922. - P. 491531.

73. Castaneda, M.R. The antigenic relationship between proteus X-19 and typhus rickettsiae / M.R. Castaneda, S. Zia // J. Exp. Med. — 1933. — Vol.58. — P. 55-62.

74. Castaneda, R. Varietis of Mexican typhus strains / R. Castaneda, R. Silva // Publ. Health Rep. 1939. - P. 1337

75. Chang, S. Erythrocyte sensitizing substance from Rickettsiae of the R. M. Spotted fever group / S.M. Chang, J.C. Snyder, E.S. Murray // J. Immunol. 1954.-Vol.73.-P. 8-15.

76. Chang, S.M. A serologically active erythrocyte sensitizing substance from typhus rickettsiae. II. Serological properties / S.M. Chang, J.C. Snyder, E.S. Murray // J. Immunol. 1953, - Vol.70. - P. 215.

77. Citrate synthase gene comparison, a new tool for phylogenetic analysis, and its application for the Rickettsiae / V.Roux et al. // J. Syst. Bacteriol. — 1997. Vol.47. - P. 252-261.

78. Classification of Rickettsia tsutsugamushi in a new genus, Orientia gen. nov., as Orientia tsutsugamushi comb. nov. / A.Tamura et al. // J. Syst. Bacteriol. 1995. - Vol.45. -P. 589-591.

79. Cloning and sequencing of the gene (tsg56) encoding a type-specific antigen from Rickettsia tsutsugamushi / N. Ohashi et al. // Gene. — 1990. — Vol.91.-P. 119-122.

80. Comparative evaluation of the indirect immunoperoxidase test for the serodiagnosis of rickettsial disease / D.J. Kelly et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1988. - Vol.38. - P. 400-406.

81. Confirmation that Rickettsia helvetica sp. nov. is a distinct species of the spotted fever group of rickettsiae / L.Beati et al. // J. Syst. Bacteriol. — 1993. Vol.43. -P. 521-526.

82. Cox, H. The cultivation of R.diaporcia in tissue culture and in the tissue of chick embryes / H. Cox, E. Bell // Publ. Health Rep. 1939. - Vol.54. - P. 2171.

83. Cox, H.R. Use of yolk sac of developing chick embryo as medium for growing rickettsiae of Rocky Mountain spotted fever and typhus group / H.R. Cox // Public Health Rep. 1938. - Vol.53. - P. 2241-2247.

84. Da Rocha-Lima, H. Zur aetiologic des fleckenfiebers / H.da Rocha-Lima // Berl. Klin. Wochenschr. 1916. - Bd.53. - S. 567-569.

85. Detection and identification of spotted fever group Rickettsiae and Ehrlichiae in African ticks / P. Parola et al. // Emerg. Infect. Dis. — 2001. — Vol.7.-P. 1014-1017.

86. Detection and identification of spotted fever group rickettsiae in ticks collected in southern Croatia / V. Punda-Polic et al. // Exp. Appl. Acarol. — 2002.-Vol.28.-P. 169-176.

87. Detection of Bartonella species from ticks, mites and small mammals in Korea / C.-M.Kim et al. // J. Vet. Sci. 2005. - Vol. 6, №4. - P. 327-334.

88. Detection of Members of the Genera Rickettsia, Anaplasma, and Ehrlichia in Ticks Collected in the Asiatic Part of Russia / S.N.Shpynov, P.

89. E.Fournier, N.V.Rudakov, I.V.Tarasevich, D.Raoult // Annals of New York Academy of Sciences. 2006. - Vol. 1078. - P. 378-383.

90. Detection of Rocky Mountain spotted fever antibodies by latex agglutination test / K.E. Hechemy et al. // J. Clin. Microbiol. — 1980. — Vol.12.-P. 144-150.

91. Distribution, diversity, and host specificity of Bartonella in rodents from the southeastern United States. / Kosoy, M. Y. et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1997. Vol. 57. - P. 578-588.

92. Drancourt, M. Taxonomic position of the Rickettsiae: current knowledge / M.Drancourt, D.Raoult // FEMS Microbiol. Rev. 1994. -Vol.13.-P. 13-24.

93. Dupont, H.T. Identification of rickettsiae from ticks collected in the Central African Republic using the polymerase chain reaction / H.T. Dupont, J.P. Cornet, D. Raoult // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1994. - Vol.50. - P. 373380.

94. Durant, P. Inoculation pulmonaire du virus pourpre (fievre des Montagnes Rocheuses) / P. Durant, P. Giroud, H. Sparrow // Arch. Inst. Pasteur de Tunis. 1940. - Vol.29. - P. 234.

95. Factors associated with the rapid emergence of zoonotic Bartonella infections. / Boulouis H.J et al. // Vet Res. 2005. - Vol. 36. - P. 383^110.

96. First documented human Rickettsia aeschlimannii infection / D. Raoult et al. // Emerg. Infect. 2002. - Vol.8. - P. 748-749.

97. Fournier, P.E. Phylogenetic analysis of spotted fever group rickettsiae by study of the outer surface protein rOmpA / P.E. Fournier, V. Roux, D. Raoult // J. Syst. Bacteriol. 1998. - Vol.48. - P. 839-849.

98. Gene Sequence Based Criteria for Identification of New Rickettsia Isolates and Description of Rickettsia heilonjiangensis sp. nov. / P.-E.Fournier et al. // Journal of Clinical Microbiology. 2003. - Vol. 41, №12. - P. 54565465.

99. Genetic variation in Australia spotted fever group rickettsiae / R.W. Baird et al. // J. Clin. Microbiol. 1996. - Vol.34. - P. 1526-1530.

100. Genotype characterization of the bacterium expressing the male-killing trait in the ladybird beetle Adalia bipunctata with specific rickettsial molecular tools / N.M. Balayeva et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1995. - Vol.61. -P. 1431-1447.

101. Genotypic and antigenic identification of two new strains of spotted fever group rickettsiae isolated from China / X. Yu et al. // J. Clin. Microbiol.- 1993.-Vol.31.-P. 83-88.

102. Genotypic evaluation of rickettsial isolates recovered of various species of ticks in Portugal / F. Bacellar et al. // Epidemiol. Infect. — 1995. — Vol.114.-P. 169-178.

103. Guidelines for the diagnosis of tick-borne bacterial diseases in Europe / P. Brouqui et al. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol.10. - P. 1108-1132.

104. Halle S. Sensitive enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies against typhus rickettsiae, Rickettsia prowazekii and Rickettsia typhi / S. Halle, G.A. Dasch, E. Weiss // J. Clin. Microbiol. 1977. - Vol.6. -P. 101-110.

105. Identification of a unique spotted fever group rickettsia from humans in Japan / T.Uchida et al. // J. Infect. Dis. 1989. - Vol.159. - P. 1122-1126.

106. Identification of Ehrlichia spp. And Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks in the Baltic regions of Russia / A.N. Alekseev et al. // J. of Clinical Microbiology. 2001. - Vol. 39. - P. 2237-2242.

107. Isolation of a spotted fever group Rickettsia from a patient with febrile exanthematous illness in Shikoku, Japan / T.Uchida et al. // Microbiol. Immunol. 1986. - Vol.30. - P. 1323-1326.

108. Isolation Rickettsia akari from a patient in a region where Mediterranean spotted fever is endemic / S.H. Radulovic et al. // Clin. Infect. Dis. 1996. - Vol.22.- P. 216-220.

109. Mahara, F. Three Weil-Felix reaction OX2 positive cases with skin eruptions and high fever / F.Mahara // J. Anan Med. Assoc. — 1984. — Vol.68. -P. 4-7.

110. Mandl, C.W. Sequence of the structural proteins of tick-borne encephalitis virus (Western subtype) and comparative analysis with other

111. Flaviviruses / С. W. Mandl, F.X. Heinz, Ch. Kunz //Virology. 1988, Vol. 166.-P. 197-205.

112. McKiel, Y.A. Rickettsia canada: a new member of the typhus group of rickettsiae isolated from Haemaphysalis leporispalustris ticks in Canada / Y.A.McKiel, EJ.Bell, D.B.Lackman // Can. J. Microbiol. 1967. - Vol.13. -P. 503-510.

113. McNaught, J.G. A tick-borne fever in the Union of South Africa / J.G.McNaught // J. R. Army Med. Corps. -1911.- Vol.l6. P. 505.

114. Molecular Screening of Bartonella Species in Rodents from the Russian Far East / Mediannikov O. et al. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2005. - Vol. 1063. -P. 308-311.

115. New Rickettsiae in Ticks Collected in Territories of the Former Soviet Union / E.Rydkina et al. // Emerging Infectious Diseases. 1999. — Vol. 5, №6.-P. 811-814.

116. Nucleotide sequence of the Ricketsia prowazekii citrate synthase gene / D.O. Wood et al. // J. Bacteriol. 1987. - Vol.169. - P. 3564-3572.

117. Observations on an infectious agent from Amblyomma maculatum f R.R. Parker et al. // Public Health Rep. 1939. - Vol.54. - P. 1482-1484.

118. Ogata, N. Aetiologic der Tsutsugamushi-Krankheit.-Rickettsia tsutsugamushi / N.Ogata // Zentbl. Bacterid. Parasitenkd. Infektkrankh. Hyg. Abt. 1 Orig.- 1931.-Vol. 122. — P.249-253.

119. Parola, P. Tick-Borne Rickettsioses around the World: Emerging Diseases Challenging Old Concepts / P.Parola, C.Paddock, D.Raoult // Clinical Microbiology Reviews. 2005. - Vol. 18. - P. 719-756.

120. Parola, P. Ticks and tick-borne bacterial diseases in humans: an emerging infectious threat / P. Parola, D. Raoult // Clin. Infect. Dis. — 2001. — Vol.32. P. 897-928. (Erratum, Clin. Infect. Dis. - 2001. - Vol.33. - P. 749.)

121. Phenotypic and genotypic characterization of spotted fever group Rockettsiae isolated from Catalan Rhipicephalus sanguineus ticks / L. Beati et al. // J. Clin. Microbiol. 1996. - Vol.34. - P. 2688-2694.

122. Philip, C.B. Miscellaneous human rickettsioses / C.B.Philip // Communicable diseases / R.L.Pullen (ed.). — Lea and Febiger Co., Philadelphia,Pa., 1950.-P. 781-788.

123. Philip, C.B. Nomenclature of the pathogenic rickettsiae / C/B/Philip // Am. J. Hyg. 1943.-Vol.37. - P. 301-309.

124. Phylogenetic diversity of the rickettsiae / W.G.Weisburg et al. // J. Bacterid. 1989. - Vol.171. - P. 4202-4206.

125. Pinkerton, H. Criteria for the accurate classification of rickettsial diseases / H.Pinkerton // Parasitology. 1936. - №28. - C. 172.

126. Polyphasic Taxonomy / M.Gilles et al. // Bergey's manual of systematic bacteriology. 2nd ed. Vol. 1. - P. 43-48.

127. Prevalence of rickettsia-like organisms and spotted fever group rickettsiae in ticks (Acari: Ixodidae) from Zimbabwe / L. Beati et al. // J. Med. Entomol. 1995. - Vol.32. - P. 787-792.

128. Proposal to create subspecies of Rickettsia conorii based on multilocus sequence typing and an emended description of Rickettsia conorii / Y.Zhu et al. // BMC Microbiol. 2005. - Vol.5. - P. 11.r

129. Proteinic and Genomic Identification of Spotted Fever Group Rickettsiae Isolated in the Former USSR / M.E.Eremeeva, N.M.Balaeva, V.F.Ignatovich, D.Raoult // Journal of Clinical Microbiology. — 1993. — Vol. 31, №10. — P.2625-2633.

130. R.raoultii sp. nov., a spotted fever group rickettsia associated with Dermacentor ticks in Europe and Russia / O.Mediannikov et al. // International Journal of Systematic Bacteriology. — 2008. Vol. 58. — P. 16351639.

131. Raoult, D. A New Rickettsial Disease in the United States / D.Raoult // Clinical Infectious Diseases. 2004. - Vol.38. - P. 812-813.

132. Raoult, D. A new spotted-fever-group rickettsiosis / D. Raoult, P. Brouqui, V. Roux // Lancet. 1996. - Vol.348. - P. 412.

133. Raoult, D. Immunoblot cross-reactions among Rickettsia, Proteus spp. And Legionella spp. in patients with Mediterranean spotted fever / D. Raoult, G.A. Dasch // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1995. - Vol.11. - P. 13-18.

134. Raoult, D. Line blot and Western blot immunoassays for diagnostic of Mediterranean spotted fever / D. Raoult, G.A Dasch // J. Clin. Microbiol. — 1989. Vol.27. - P. 2073-2079.

135. Raoult, D. Rickettsioses as paradigm of new or emerging infectious diseases / D. Raoult, V. Roux // Clin. Microbiol. Rev. 1997. - Vol.10. - P. 694-719.

136. Reassessment of the taxonomic position of Rickettsiella grylli / V.Roux et al. // J. Syst. Bacteriol. 1997. - Vol.47. - P. 1255-1257.

137. Recent experience with the complement fixation test in the laboratory diagnosis of rickettsial diseases in the United States / C.C. Shepard et al. // J. Clin. Microbiol. 1976. - Vol.4. - P. 277-283.

138. Regneiy, L.S. Genomic identification of rickettsiae and estimation of intraspecies sequence divergence for portions of two rickettsial genes /L.S. Regnery, C.L. Spruill, B.D. Plikaytis // J. Bacteriol. 1991. - Vol.173. - P. 1576-1589.

139. Rehacek, J. Rickettsia slovaca, the organism and its ecology / J. Rehacek // Acta Sci. Nat. Brno. 1984. - Vol.l8. - P. 1-50.

140. Rhipicephalus ticks infected with Rickettsia and Coxiella in soi^r^zzziiern Switzerland (Canton Ticino) / M.V. Bernasconi et al. // Infect. Genet. E^—— 2002.-Vol.2.-P. 111-120.

141. Rickettsia aeschlimanii sp. nov., a new spotted fever group rickL«==^^srtsia associated with Hyalomma marginatum ticks / L.Beati et al. // J. — Syst. Bacteriol. 1997. - Vol.47. - P. 548-554.

142. Rickettsia africae sp. nov., the etiological agent of African tir~.I<r- bite fever / P.J.Kelly et al. // J. Syst Bacteriol. - 1996. - Vol.46. -P. 611-6 jL

143. Rickettsia felis: molecular characterization of a new member crs=-:=f tihe spotted fever group / D.H.Bouyer et al. // J. Syst. Evol. Microbiol. — 20=^: 01. — Vol.51.-P. 339-347.

144. Rickettsia honei sp. nov., the etiological agent of Flinders Island sj^ > otted fever in Australia / J.Stenos et al. // J. Syst. Evol. Microbiol. — Vol.48.-P. 1399-1404.

145. Rickettsia japonica sp. nov., the etiological agent of spotted fever rr^roup rickettsiosis in Japan / T.Uchida et al. // J. Syst. Bacteriol. — 1992. — V —-P. 303-305.

146. Rickettsia massiliae human isolation / G.Vitale et al. // Emt—==grg;ing Infectious Diseases. 2006. - Vol. 12, №1. - P. 174-175.

147. Rickettsia parkeri: a newly recognized cause of spotted fever rickettsiosis in the United States / C.D. Paddock et al. // Clin. Infect. — Г2004. -Vol.38.-P. 805-811.

148. Rickettsia peacockii sp. nov., a new species infecting wood ticks, Dermacentor andersonii, in western Montana / M.L.Niebylski et al. // J. Syst. Bacteriol. 1997. - Vol.47. - P. 446-452.

149. Rickettsia slovaca infection: DEBONEL/TIBOLA / V.Ibarra et al. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2006. - Vol. 1078. - P. 206-214.

150. Rickettsia slovaca sp. nov., a member of the spotted fever group rickettsiae / Z.Seceyova et al. // J. Syst. Bacteriol. 1998. - Vol.48. - P. 1455-1462.

151. Roux, V. Phylogenetic analysis and taxonomic relationships among the genus Rickettsia / V.Roux // Rickettsiae and rickettsial diseases at the turn of the third millennium / D.Raoult, P.brouqui (ed.). Elsevier, Marseille, France, 1999.-P. 52-66.

152. Roux, V. Phylogenetic analysis of the genus Rickettsia by 16S rDNA sequencing / V. Roux, D. Raoult // Res. Microbiol. 1995. - Vol.146. - P. 385-396.

153. Sant'Anna, J.F. On a disease in man following tick-bites and occurring in Lourenco Marques / J.F.Sant'Anna // Parasitology. — 1911. — Vol.4. — P. 8788.

154. Sequence analysis of the 17-kilodalton-antigen gene from Rickettsia ricketsii / B.E. Anderson et al. // J. bacterial. 1987. - Vol.169. - P. 23852390.

155. Serological studies of antigenic similarity between Japanese spotted fever group rickettsiae and Weil-Felix test antigens / K.I. Amano // J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol.30. - P. 2441-2446.

156. Serological studies of the antigenic similarity between typhus group rickettsiae and Weil-Felix test antigens / K.I. Amano et al. // Microbiol. Immunol. 1995. - Vol.39. - P. 63-65.

157. Seven years' experience of isolation of Rickettsia spp. From clinical specimens using the shell vial cell culture assay / G. Vestris et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2003. - Vol.990. - P. 371-374.

158. Spotted fever group rickettsioses in China / M.Y. Fan et al. // Rickettsiae and rickettsial diseases at the turn of the third millennium / D. Raoult, P. Brouqui (ed.). Elsevier, Paris, France, 1999. - P. 247-257.

159. Stewart, R.S. flinders Island spotted fever: a newly recognized endemic focus of tick typhus in Bass Strait. Part 1. Clinical and epidemiological features / R.S.Stewart // Med. J. aust. 1991. - Vol. 154. - P. 94-99.

160. Stothard, D.R. Ancestral divergence of Rickettsia bellii from the spotted fever and typhus groups of Rickettsia and antiquity of the genus Rickettsia / D.R. Stothard, J.B. Clark, P.A. Fuerst // J. Syst. Bacterid. 1994. - Vol. 44. -P. 798-804.

161. Stothard, D.R. Evolutionary analysis of the spotted fever and typhus groups of Rickettsia using 16S rRNA gene sequences / D.R. Stothard, P.A. Fuerst // Syst Appl. Microbiol. 1995. - Vol.18. - P. 52-61.

162. Studies of a «new» rickettsiosis: «Astrakhan» spotted fever / I.V.Tarasevich et al. // Eur. J. Epidemiol. 1991. - Vol.7. - P. 294-298.

163. The first report of the rickettsial infections of spotted fever group in Japan; three clinical cases / F.Mahara et al. // Jpn. J. Assoc. Infect. Dis. — 1985.-Vol.59.-P. 1165-1172.

164. The reactivity between rickettsiae and Weil-Felix test antigens against sera of rickettsial disease patients / K. Amano et al. // Acta Virol. — 1992. — Vol.36.-P. 67-72.

165. The re-emergence of Siberian tick typhus: field and experimental observations / N/V/ Rudakov et al. // Rickettsiae and rickettsial diseases at the turn of the third millennium. Paris, 1999. - P. - 269-273.

166. The Rocky Mountain spotted fever group of rickettsiae / D.B.Lackman et al. // Health Lab. Sci. 1965. - Vol.2. - P. 135.

167. Uchida, T. Isolation of spotted fever group rickettsiae from humans in Japan / T.Uchida, T.Uchiyama, A.H.Koyama // J. Infect. Dis. — 1988. — Vol.158.-P. 664-665.

168. Use of highly variable intergenic spacer sequences for multispacer typing of Rickettsia conorii strains / P.E.Fournier et al. // J. Clin. Microbiol. 2004. - Vol.42. - P. 5757-5766.

169. Weil, E. Zur serologischen Diagnose des Fleckfiebers / E. Weil, A. Felix // Wien. klin. Wochenschr. 1916. - Bd.29. - S. 33-35.

170. Weiss, E. Order I. Rickettsiales Gieszczkiewicz / E.Weiss, J.W.Moulder // Bergey's manual of systematic bacteriology / N.R.Krieg, J.G.Holt (ed.). — The Williams & Wilkins Co., Baltimor, Md., 1939. P. 687-703.

171. Weiss, E. Rickettsias / E.Weiss // Encyclopedia of microbiology. — N.Y., Academic Press Inc., 1992. P. 585-610.

172. Western immunoblot analysis of Haemobartonella muris and comparison of 16S rRNA gene sequences of H.muris, H.felis, and Eperythrozoon suis / Y.M.Rikihisa et al. // J. Clin. Microbiol. 1997. -Vol.35.-P. 823-829.

173. Wu, Y.M. Western-blot analysis of Rickettsia heilongjiangi / Y.M. Wu, S.R. Yu, D. Lou // J. Prev. Med. P. L. A. 1994. - Vol.12, - P. 28-30.

174. Zdrodovskii, P.F. Systematics and comparative characterization of endemic rickettsioses / P.F.Zdrodovkii // Z. Microbiol. Epidemiol. — 1949. — Vol.10.-P. 19-28.

175. Zinsser, H. Study of rickettsiae grown on agar tissue culture / H. Zinsser, F. Fitzpatric, H. Wei // J. Exp. Med. 1939. - Vol.69. - P. 179.