Молекулярно-генетические изменения при немелкоклеточном раке легкого. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат наук Шикеева, Амуланг Алексеевна

• Шикеева, Амуланг Алексеевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Шикеева, Амуланг Алексеевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Этиология, классификация, диагностика и лечение НМРЛ

1.2. Молекулярно-генетические изменения при НМРЛ

1.2.1 Структурные изменения

1.2.2 Эпигенетические изменения

1.2.2.1 Аномальное метилирование промоторов генов

1.2.2.2 МикроРНК

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Клинический материал

2.2. Выделение геномной ДНК

2.3. Выделение микроРНК из парафиновых блоков

2.4. Бисульфитная модификация ДНК

2.5. Микросателлитный анализ

2.6. Фрагментами анализ

2.7. Рестрикционный анализ

2.8. Метил-чувствительная полимеразная цепная реакция (МЧ-ПЦР)

2.9. Метил-специфическая ПЦР (МС-ПЦР)

2.10. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.11. Обратная транскрипция

2.12. ПЦР в режиме реального времени (Real time-ПЦР)

2.12.1 Real time-ПЦР для определения мутаций гена EGFR

2.12.2 Real time-ПЦР для определения уровня экспрессии микроРНК

2.13. Секвенирование

2.14. Электрофорез в ПААГ

2.15. Ультратонкое окрашивание нитратом серебра

2.16. Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)

2.17. Программное обеспечение

2.18. Статистическая обработка данных

3.1. Аллельные нарушения при HMPJ1

Аллельные нарушения в смежной с опухолью условно-нормальной ткани на — различном расстоянии

3.2. Результаты анализа мутации генов EGFR, KRAS и транслокации гена ALK при HMPJI

3.3. Результаты аномального метилирования промоторов генов у пациентов с НМРЛ

Эпигенетические изменения в смежной с опухолью условно нормальной ткани на различном расстоянии

3.4. Результаты экспрессии зрелых микроРНК в НМРЛ

Определение уровня экспрессии микроРНК let-7a, miR-155, miR-205 в смежной условно нормальной ткани на различном расстоянии

3.5. Анализ генетических и эпигенетических изменений в опухолевом окружении

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

FISH - флуоресцентная гибридизация in situ

Real time-ПЦР - полимеразная цепная реакция в режиме реального времени ÄK - аденокарцинома

АПКРЛ - аденоплоскоклеточный рак легкого

ИФР - интерферон

КРЛ - крупноклеточный рак легкого

KT - компьютерная томография

МН - микросателлитная нестабильность

МРТ - магнитно-резонансная томография

МС-ПЦР - метил-специфическая полимеразная цепная реакция

МЧ-ПЦР - метил-чувствительная полимеразная цепная реакция

МЭ - мукоэпидермоидный рак

НМРЛ - немелкоклеточный рак легкого

НХЗЛ - неспецифические хронические заболевания легких

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией

ПААГ - полиакриламидный гель

ПГ - потеря гетерозиготности

ПКРЛ - плоскоклеточный рак легкого

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПЭТ - позитронно-эмиссионная томография

УФ излучение - ультрафиолетовой излучение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетические изменения при немелкоклеточном раке легкого.»

ВВЕДЕНИЕ.

Рак легкого является одним из самых распространенных злокачественных новообразований и одной из основных причин летального исхода у онкологических больных. По данным ВОЗ на 2008 год рак легких стал причиной смерти 1,3 миллиона человек (World health statistics, 2013). В 2011 в России зарегистрировано более 50 тысяч новых случаев рака легкого, при этом 36% случаев выявлено на 4 стадии заболевания (Чиссов В.И., 2011). Курение является одним из главных факторов риска развития рака легкого (курильщиками являются 87% пациентов с этой нозологией).

Летальность на первом году с момента установления диагноза составляет 53%. Пятилетняя выживаемость пациентов с раком легкого очень мала и составляет в разных странах от 5 до 18%, несмотря на высокий уровень развития современных методов диагностики и лечения.

Все раки легкого можно разделить на 2 большие группы: мелкоклеточный и немелкоклеточный раки легкого.

Группа немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) включает примерно 85% всех раков. Среди гистологических типов НМРЛ - аденокарцинома, плоскоклеточный рак легкого, аденоплоскоклеточный, крупноклеточный рак. Первые два типа составляют 80-90% всех НМРЛ. Показано, что для каждого гистологического типа существует свой профиль генетический изменений, так, например, мутации генов EGFR, KRAS, транслокация EML4/ALK характерны для аденокарцином легкого. Для плоскоклеточного рака легкого показана амплификация генов FGFR1 и SOX2. Характерной особенностью нашей страны является преобладание плоскоклеточного рака, что обусловлено большим количеством курящего населения.

В ряде работ показано, что молекулярно-генетические изменения характерны не только для опухолевой ткани, но часто выявляются в смежных с опухолью условно нормальных тканях. Недавние исследования показали, что опухолевое окружение НМРЛ имеет гетерогенную структуру и играет важную роль в прогрессировании опухоли и эффективности лечения.

В последнее время в связи с развитием персонализированного подхода к выбору тактики лечения онкологических больных большое значение имеют не только клинические характеристики пациента, а также гистологический тип опухоли, но и молекулярно-генетические особенности опухоли и их применение для диагностики, прогноза заболевания и определения чувствительности к таргетной терапии.

Настоящее исследование посвящено изучению генетических и эпигенетических нарушений в опухоли и смежных с опухолью условно нормальных тканях, а также оценке практической (диагностической и прогностической) значимости этих нарушений.

Цель работы - комплексное изучение молекулярно-генетических изменений в немелкоклеточном раке легкого и смежных с опухолью условно нормальных тканях.

Задачи исследования.

1. Изучить аллельный дисбаланс локусов D2S405, D2S164, D3S1300, D3S1768, D3S1539, D9S925, D17S938 в НМРЛ и смежных с опухолью условно нормальных тканях на различном расстоянии от опухоли.

2. Изучить аномальное метилирование промоторов генов FHIT, TIMP3, CDH1, MGMT, RASSF1A, DAPK1, CD44 в НМРЛ и смежных с опухолью условно нормальных тканях на различном расстоянии от опухоли.

3. Определить частоты мутаций генов EGFR и KRAS и транслокацию гена ALK в не плоскоклеточном НМРЛ для определения чувствительности к таргетным препаратам.

4. Определить уровни экспрессии микроРНК: let-7a, miR-155, miR-205 -в опухолевой ткани и смежных с опухолью условно нормальных тканях на различном расстоянии от опухоли.

5. Провести сравнительный анализ выявленных молекулярно-генетических нарушений для различных гистологических типов НМРЛ и других клинических параметров.

Научная новизна.

Впервые на российской выборке проведено комплексное исследование молекулярно-генетических изменений НМРЛ: потери гетерозиготности, микросателлитной нестабильности, эпигенетических изменений на материале опухолевой ткани, смежной условно нормальной ткани на различном расстоянии. Впервые на российской выборке проведено исследование уровней экспрессии ряда микроРНК в опухолевой ткани, смежных с опухолью нормальных тканях пациентов с НМРЛ. Впервые изучено состояние опухолевого окружения на различных расстояниях от опухолевого очага.

Практическая значимость.

С развитием таргетной терапии, направленной против специфических молекулярных мишеней, точная гистологическая верификация опухолей легкого стала еще более необходимой. Выявленные в нашей работе молекулярно-генетические изменения локусов D9S925, D17S928, а также гиперметилирование промоторов генов CDH1 и CD44 могут рассматриваться в качестве маркеров плоскоклеточного рака легкого в сложных диагностических случаях в дополнение к данным иммуноморфологического исследования.

Выявленные в нашей работе аллельные нарушения микросателлитов D2S405, D3S1300, гиперметилирование промоторов генов RASSF1A, FHIT, DAPK1, а также снижение экспрессии микроРНК let-7a и miR-155 могут рассматриваться в качестве маркеров прогноза.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены: на десятой конференции «Нанотехнологии в онкологии», 15 декабря 2012г., Москва, на конференции «European Conference of Human Genetics», 8-11 июня, 2013г., Париж, Франция.

Положения, выносимые на защиту.

1. Для НМРЛ характерны высокие частоты потери гетерозиготности/микросателлитной нестабильности локусов 028405, Б28164, Б381300, 0381768, Б381539, 098925,Ш78938~, гиперметилирование промоторов" " генов ДЛЖМ, РН1Т, ЭАРК1, СИН!, СИ44, Т1МРЗ, МвМТ и снижение экспрессии микроРНК 1е1-7а.

2. В смежных с опухолью условно нормальных тканях на расстоянии 2 и 5 см от опухоли выявлены эпигенетические изменения и отсутствуют аллельные нарушения. В ряду: опухоль - смежная условно нормальная ткань на расстоянии 2 см - смежная условно нормальная ткань на расстоянии 5 см - происходит уменьшение частоты эпигенетических изменений.

3. Выявленные молекулярные повреждения: потеря гетерозиготности/микросателлитная нестабильность локусов Б98925, 0178928 и метилирования генов СДШ и СБ44 — ассоциированы с плоскоклеточным раком легкого и могут использоваться в качестве маркеров для гистологической верификации опухоли; аллельные нарушения регионов Б28405, Б381300, метилирование промоторов генов ЯАББРЫ и РН1Т, снижение уровня экспрессии микроРНК 1е1>7а и гш!1-155 ассоциированы со стадией заболевания, степенью дифференцировки опухоли и метастазированием и могут рассматриваться в качестве маркеров прогноза.

4. Смежные с опухолью морфологически не измененные нормальные ткани, содержащие молекулярно-генетические изменения, формируют «опухолевое окружение» выявленное на расстоянии 5 см от опухолевого очага.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Этиология, классификация, диагностика и лечение НМРЛ.

Рак лёгкого — обобщенное понятие, включающее разные по происхождению, клиническому течению, гистологической структуре и прогнозу злокачественные эпителиальные новообразования. В 2011 в России зарегистрировано более 50 тысяч новых случаев рака легкого, при этом 36% случаев выявлено на 4 стадии заболевания (Чиссов В.И., 2011). Летальность на первом году с момента установления диагноза составляет 53%. Пятилетняя выживаемость пациентов с раком легкого очень мала и составляет в разных странах от 5 до 18%.

Курение является одним из главных факторов риска развития рака легкого. Курильщиками являются 87% пациентов с этой нозологией. Также, в группу риска развития рака легкого могут попасть люди, имеющие: профессиональные вредности (асбест, уголь, хром и т.д.), хронические заболевания легких (туберкулез, НХЗЛ и т.д.), генетическую предрасположенность (зачастую прослеживаются семейные случаи рака легких), воздействия различных канцерогенов, встречающихся в повседневной жизни (УФ излучение, выхлопные газы и пр.), онкологические заболевания в анамнезе. Однако наличие этих факторов не всегда ведет к развитию рака легкого, что скорее говорит о мультифакториальной природе данного заболевания.

В зависимости от места возникновения новообразования выделяют (Чиссов В.И., 2007):

центральный (новообразование возникает из эпителия главных, долевых, сегментарных бронхов)

периферический (опухоль возникает из эпителия мелких бронхов и альвеол)

медиастинальный (множественное метастатическое поражение лимфатических узлов средостения, без выявления первичного очага в легком)

диссеминированный (множественное поражение легких, без выявления первичной опухоли в других органах)

В зависимости от гистологического строения выделяют (ВОЗ, 2001):

плоскоклеточный (происходит из покровного эпителия

бронхов)

аденокарциному (происходит из железистого эпителия

бронхов)

мелкоклеточный

крупноклеточный

аденоплоскоклеточный

карциномы с плеоморфными, саркоматиодными и саркоматозными компонентами.

С целью унификации подходов в лечении и прогнозе выживаемости пациентов в онкологии выделяют мелкоклеточный и немелкоклеточный раки легкого.

Немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) составляет 85% всех раков легкого. Группа немелкоклеточного рака легкого довольно многочисленна и включает в себя аденокарциному, плоскоклеточный, крупноклеточный, аденоплоскоклеточный раки легкого. При этом первые два подтипа составляют 80-90% всех НМРЛ (Рис 1, 2).

Первоначальное состояние, так же как и прогрессирование заболевания любого онкологического больного, описывается с помощью ТМЫ классификации. В табл. 1 приведена ТЫМ классификация для пациентов с НМРЛ.

Для определения общей характеристики степени развития заболевания разные сочетания показателей Т>1М классификации объединены в группы - стадии (табл. 2).

Таблица 1. Современная TNM классификация рака легкого (Mirsadraee S., 2012).

Т (tumor) - размер опухоли

ТХ Первичная опухоль не может быть определена или опухоль при наличии злокачественных клеток в мокроте или бронхиальном смыве не наблюдается при рентгенографии или бронхоскопии

ТО Нет признаков первичной опухоли

Tis Карцинома in situ

TI Опухоль менее 3 см в наибольшем направлении, окружена легочной или висцеральной плеврой, без бронхоскопических признаков инвазии проксимальнее, чем дольковый бронх (например, нет в главном бронхе)

Tía Опухоль менее 2 см в наибольшем направлении

Tib Опухоль более 2 см, но менее 3 см в наибольшем направлении

T2 Опухоль более 3 см, но менее 7 см, или опухоль с каким-либо из признаков: Вовлечен главный бронх, более чем на 2 см дистальнее киля трахеи Инвазия в висцеральную плевру Ассоциирована с аталектазом или обструктивным пневмонитом, который распространяется на прикорневую область, но не на целое легкое

T2a Опухоль более 3 см, но менее 5 см в наибольшем направлении

T2b Опухоль более 5 см, но менее 7 см в наибольшем направлении

ТЗ Опухоль более 7 см или при инвазии в одно из следующего: Грудная стенка (включая опухоль Панкоста), диафрагма, диафрагмальный нерв, медиастинальная плевра, париетальный перикард Опухоль в главном бронхе менее чем 2 см дистальнее киля трахеи, но без его вовлечения Ассоциированный аталектаз или обструктивный пневмонит целого легкого Наличие других опухолевых очагов в этой доле легкого

Т4 Опухоль любого размера при инвазии в одно из следующего: Средостение, сердце, большие сосуды, трахея, возвратный гортанный нерв, пищевод, тело позвонка, киль трахеи Наличие других опухолевых очагов в других ипсилатеральных долях легкого

N (nodes) - лимфатические узлы

NX Метастазы в региональные лимфатические узлы не могут быть определены

N0 Нет метастазов в региональные лимфатические узлы

N1 Метастазы в ипсилатеральные перибронхиальные лимфатические узлы и/или ипсилатеральные прикорневые лимфатические узлы и внутрилегочные лимфатические узлы, включая их вовлечение непосредственным увеличением размеров

N2 Метастазы в ипсилатеральные медиастинальные лимфатические узлы и/или трахеобронхиальные лимфатические узлы

N3 Метастазы в контралатеральные медиастинальные, контралатеральные прикорневые, ипсилатеральные или контралатеральные лестничные, или супрклавикулярные лимфатические узлы

М (metastases) - метастазы

MX Отдаленные метастазы не могут быть определены

МО Нет отдаленных метастазов

Ml Отдаленные метастазы

Mia Отдельные опухолевые узлы в контралатеральной доле Опухоль с плевральными опухолевыми узлами или злокачественным плевральным/ перикардиальным экссудатом

Mlb Отдаленные метастазы

Таблица 2. Стадии рака легкого (Ми-8ас1гаее 8, 2012).

Стадия по TNM N0 N1 N2 N3

Т1а I А IIA III А III В

Tib IА II А III А III В

Т2а IB IIА III А III в

Т2Ь II А ИВ III А III в

ТЗ II В III А III А III в

Т4 III А III А III В III в

М1а IV IV IV IV

Mlb IV IV IV IV

Рис 1. Аденокарцинома легкого. Окр. г/э. Ув. 200.

Рис 2. Плоскоклеточный рак легкого. Окр. г/э. Ув. 200.

Клинические проявления НМРЛ различны и зависят от локализации первичного очага. Так, к примеру, центральный рак легкого, особенно если он возник из эпителия слизистой крупного бронха, проявляет себя рано. В отличие от периферического рака легкого, который на начальных этапах в виду возникновения в паренхиме легкого, где отсутствует чувствительная иннервация, протекает практически бессимптомно. Этот факт в большинстве случаев НМРЛ объясняет выявление заболевания на поздних этапах. Однако, несмотря на различные типы течения, НМРЛ имеет общие симптомы, которые свойственны практически всем пациентам и которые могут позволить заподозрить наличие новообразования:

кашель (длительный, не проходящий, в ряде случаев с кровавой мокротой)

боли в груди (особенно если возникают при глубоком вдохе/выдохе, кашле)

повышенная температура (продолжительное время, при отсутствии других очагов воспаления) ~

частые и продолжительные воспалительные заболевания

легких

одышка охриплость

недомогание (общая вялость, отсутствие аппетита) похудание (значительная потеря веса за короткий срок) Зачастую трудности с диагностикой рака легких заключаются в отсутствии специфических симптомов, характерных именно для этого заболевания.

HMPJI довольно быстро метастазирует, что может добавлять дополнительные клинические симптомы. Считается, что HMPJI имеет 3 основных пути метастазирования:

лимфогенный гематогенный

аэрогенный/имплантационный (попадая в центральные или периферические ходы бронхиального древа во время дыхания или кашля)

Для диагностики HMPJ1 и оценки состояния заболевания применяют следующие инструментальные методы:

рентгенологическое исследование органов грудной клетки (зачастую заподозрить наличие рака лёгкого помогает флюорография) КТ, МРТ, ПЭТ органов грудной клетки бронхоскопическое исследование ультразвуковая диагностика торакоцентез

диагностическая торакоскопия медиастиноскопия, медиастинотомия

тонко- и толстоигольные трансторакальные биопсии Симптоматическая картина и инструментальные методы исследования могут только подтвердить или опровергнуть наличие новообразования. Однако точный диагноз немелкоклеточного рака легкого ставится только после гистологического исследования биоптата или операционного материала. В некоторых случаях оказывается полезным цитологические исследования (мазок мокроты, плеврального выпота), особенно в случаях, когда опухоль прорастает в просвет крупных бронхов.

В зависимости от стадии заболевания, состояния пациента и наличия/отсутствия отягощающих факторов тактика лечения пациентов с НМРЛ включает:

оперативное лечение лучевую терапию химиотерапию таргетную терапию В каждом случае подбор тактики лечения пациента с НМРЛ строго индивидуален и может сочетать в себе несколько видов лечения.

Однако, несмотря на постоянно усовершенствующиеся подходы к диагностике и лечению пациентов с НМРЛ, существует ряд проблем, решение которых в настоящее время является актуальным. Так, летальность на первом году с момента установления диагноза НМРЛ составляет 53%, а пятилетняя выживаемость пациентов с раком легкого очень мала и составляет в разных странах от 5 до 18%. Лечение пациентов с НМРЛ зачастую не приводит к ожидаемым эффектам, что обуславливает высокий процент рецидивов и прогрессирования заболевания. В этом аспекте изучение молекулярно-биологических свойств опухолевых клеток может оказать существенную помощь в решении проблем ранней диагностики, эффективности лечения и прогноза течения НМРЛ.

1.2. Молекулярно-генетические изменения при НМРЛ.

1.2.1 Структурные изменения.

К структурным нарушениям генома относятся любые изменения вызывающие нарушение нуклеотидной последовательности ДНК: делеции, дупликации, инсерции, инверсии, транслокации и др. Структурные изменения в генах часто приводят к грубому нарушению функции этого гена, что в свою очередь обуславливает изменение механизмов жизнедеятельности клетки в целом.

Инактивация генов-супрессоров в клетках опухоли часто является результатом делеции участка хромосомы, где локализован этот ген. Подобные изменения можно идентифицировать либо с помощью прямого исследования нуклеотидной последовательности гена, либо, в случаях, когда это по какой либо причине невозможно, с помощью генетического анализа состояния микросателлитных маркёров, локализованных внутри генов-супрессоров или тесно сцепленных с ними. Микросателлиты представляют собой высокополиморфные, тандемно-организованные, ди-, три-, тетрануклеотидные последовательности, повторяющиеся в геноме от нескольких десятков до нескольких сотен раз и представленные большим количеством различных аллелей (Залетаев Д.В., 2009; Горбунова В.Н., 1997). Высокая полиморфность обусловливает наличие у большинства индивидов двух аллелей в исследуемом микросателлитном локусе. Делеция одного аллеля в опухолевой ДНК обозначается термином «потеря гетерозиготности» (ПГ) (Залетаев Д.В., 2009; Горбунова В.Н., 1997).

В ряде случаев признаком инициации опухолевого процесса, наряду с ПГ, может служить «микросателлитная нестабильность» (МН) - изменение длины микросателлитных последовательностей в результате делеции или вставки нескольких нуклеотидов. МН выражается в появлении в опухолевых клетках дополнительных аллелей микросателлитов, которые отличаются по длине от аллелей в нормальных тканях того же пациента (Залетаев Д.В., 2009; Горбунова В.Н., 1997).

Аллельные нарушения могут быть чувствительным маркёром опухолевых клеток и/или внешним проявлением дестабилизации генома в целом (Залетаев Д.В., 2009; Горбунова В.Н., 1997).

НМРЛ характеризуется многочисленными генетическими изменениями, затрагивающими гены-супрессоры опухолевого роста и онкогены, такие как: HUI (1р31), FHIT (Зр14), pl6INK4a (9р21), RASSF1A, FUS1, LIMD1, SEMA3B, SE МАЗ F (Зр21) и р53 (17р13) (Zochbauer-Muller S., 2002; Sekido Y., 2003; Mitsuuchi Y., 2002; Chmara M., 2004; Zienolddiny S., 2001, Шикеева A.A., 2013). Согласно литературным данным, частыми молекулярно-генетическими изменениями при НМРЛ считаются аллельные нарушения (ПГ и МН) в хромосомных регионах 2р23~р24 и 2q35; Зр14 и Зр21~р26 (50 - 80% всех НМРЛ); 9р21~р22; 17р13 (40% всех НМРЛ); 13q; 18q и 9q (Woenckhaus M., 2005; Tseng R.C., 2005; Chmara M., 2004; Girard L., 2000). Другие исследования также показывают частые аллельные нарушения в районах lp, 2р, 2q, Зр, 6q, 7р, 9р, 12р, 16p, 17p, 17q, 19р и 21q, которые чаще встречаются в опухоли, чем в нормальных тканях (Sanchez-Cespedes M., 2001; Marsit C.J., 2005; Pan H., 2005 Hirao T., 2001; Grepmeier U., 2005).

Показано, что для каждого гистологического подтипа тоже существует свой профиль генетический изменений, так, например, мутации генов EGFR, KRAS, транслокация EML4/ALK, хромосомные перестройки в регионах 2р, 9р, 14q, 20р характерны для аденокарцином легкого (Grepmeier U., 2005; Tseng R.C., 2005); для плоскоклеточного рака легкого показана амплификация генов FGFR1 и SOX2 (Sos M.L., 2012), а также хромосомные перестройки в районах Зр и 17р (Chmara M., 2004). Хотя в большинстве случаев проблемы дифференциальной диагностики между различными гистологическими подтипами НМРЛ не стоит, использование генетических маркеров в дополнение к данным формальной морфологии и иммуногистохимии в сложных диагностических случаях может быть полезно.

Несмотря на большое число исследований, данные об ассоциации генетических изменений и клинико-морфологических параметров НМРЛ не

многочисленны. Так, Tseng и соавторы показали, что ПГ локуса 1р36.23 ассоциирована с курением, плоскоклеточным раком и поздней стадией опухолевого процесса (Tseng R.C., 2005). В исследовании Wrage и соавторов потеря гетерозиготности в районе 4q, в частности 4ql2-q23, в HMPJI — статистически достоверно ассоциирована с метастазами в кости (Wrage М., 2009). В этой же работе показано, что аналогичные молекулярно-генетические изменения обнаружены в метастазах HMPJI в головной мозг. Исходя из результатов исследования, авторы предположили, что аллельные делеции в районе 4q могут запускать механизм ранней гематогенной диссеминации опухолевых клеток.

Рассмотрим подробнее данные по отдельным генам, нарушения которых характерны для HMPJ1.

Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), так же известный, как HERI или ErbBl, относится к семейству рецепторов ErbB, в частности к подсемейству тирозинкиназных рецепторов (обладающих внутренней тирозинки-назной активностью): EGFR (Herl/ErbBl), HER2/c-neu (Her2/ErbB2), НегЗ (ErbB-3) и Her4 (ErbB-4) (http://en.wikipedia.org). EGFR играет важную роль в канцерогенезе и прогрессировании опухоли посредством различных механизмов активации: гиперэкспрессии белка, соматических мутаций в гене EGFR и аутокринной продукции лиганда рецептора. Нарушения в гене EGFR вызывают активацию Ras/Raf/Mek/Mapk и PI3K/Akt/mTOR сигнальных путей, что приводит к активному клеточному росту, пролиферации опухолевых клеток, инвазивному росту опухоли, метастазированию и стимуляции опухолевого ангиогенеза (Salomon D.S., 1995). Мутации в гене EGFR встречаются в 15-40% случаев HMPJI. 18-21 экзоны гена EGFR кодируют тирозинкиназный домен рецептора, и мутации в любом из этих регионов определяют чувствительность к терапии низкомолекулярными ингибиторами EGFR. Наиболее распространенными мутациями являются делеции в 19 экзоне и мутация p.L858R в 21 экзоне гена EGFR, реже встречаются мутации в 18 и 20 экзонах этого гена (Lynch Т.J., 2004; Paez J.G., 2004; Sharma S.V., 2007). По данным различных исследований, мутации

в гене EGFR характерны для аденокарцином, чаще встречаются в азиатской популяции, у женщин, некурящих (Bell D.W., 2008; Cappuzzo F., 2010; Lee D., 2011).

Как уже отмечалось, активирующие мутации в гене EGFR определяют — чувствительность пациентов с HMPJ1 к терапии гефитинибом и эрлотинибом -низкомолекулярным ингибиторам EGFR первого поколения, которые блокируют внутриклеточный тирозинкиназный домен рецептора, затрудняя дальнейшую передачу сигнала по сигнальному пути (Reungwetwattana Т., 2012). Клинические исследования: IPASS, NEJSG 002, WJTOG3405, OPTIMAL, EURTAC - показали, что пациенты с поздней стадией HMPJI, имеющие активирующие мутации в гене EGFR и получавшие гефитиниб/эрлотиниб в первой линии терапии, имеют лучшие показатели выживаемости, времени без прогрессирования заболевания и ответа на терапию по сравнению с пациентами, получавшими стандартную химиотерапию. Эти исследования позволили авторам рекомендовать селективный отбор пациентов, основанный на статусе мутаций гена EGFR, для назначения препаратов гефитиниб и эрлотиниб (Maemondo М., 2010; Мок T.S., 2009; Zhou С., 2011; Rosell R., 2011; Mitsudomi Т., 2010).

Ген KRAS — протоонкоген, кодирующий одноименный белок, который является представителем белков семейства Ras. Белок KRAS представляет собой ГТФазу и является компонентом многих сигнальных путей. Мутации в гене KRAS встречаются у 15-35% пациентов с HMPJI (Roberts P.J., 2010). Наиболее частыми являются мутации в 12 и 13 кодонах гена KRAS (90%); мутации в 10 и 61 кодонах встречаются редко (Ihle N.T., 2012). Мутации гена KRAS характерны для аденокарцином легкого, чаще встречаются у европеоидов, чем азиатов (30% и 5%), и ассоциированы с курением (Herbst R.S., 2010; Li М., 2009; Riely G.J., 2008). Согласно литературным данным, наличие мутации в гене KRAS считается неблагоприятным фактором прогноза. Мета-анализ данных показал, что мутации в этом гене ассоциированы со снижением выживаемости пациентов, а также неэффективностью терапии ингибиторами EGFR первого поколения (Li М., 2009).

Сигнальный путь Ras/Raf/Mek/Mapk является одним из ключевых механизмов, участвующих в патогенезе рака легкого. Активация Ras с последующим вовлечением Raf запускает ряд сигнальных каскадов, приводящих к фосфорилированию Mekl/Mek2- и МАР-киназ (Miller V.A., 2010). KRAS является ключевым белком семейства Ras. Различные этапы этого пути являются перспективными мишенями для блокады. Молекулу белка KRAS заблокировать практически невозможно, однако его партнеры по сигнальному пути являются многообещающими мишенями для блокады. Основной из таких мишеней является белок Мек, который функционирует ниже в сигнальном пути Ras. Так как Мек является непосредственным эффектором сигналов с KRAS, то его блокада может оказаться эффективной у пациентов с резистентностью к антагонистам EGFR. В настоящее время проводится ряд клинических исследований различных ингибиторов МЕК как в качестве монотерапии, так и в сочетании с другими препаратами.

Ген BRAF кодирует одноименную серин/треониновую протеинкиназу. Киназа BRAF является членом семейства киназ Raf. BRAF функционирует в сигнальном каскаде ниже Ras, от которого он передает сигналы на Мар-киназу (Linardou Н., 2008). Мутации гена BRAF изначально исследовались только в контексте злокачественных меланом. Однако около 3% случаев БМРЛ также несут мутации BRAF (Paik Р.К., 2011). При этом в отличие от меланом, при которых в подавляющем большинстве случаев выявляется мутация p.V600E, при НМРЛ встречаются различные мутации BRAF, например, p.G468A и p.L596V (Paik Р.К., 2011; Marchetti А., 2011). В настоящее время проводится несколько клинических испытаний по применению ингибиторов BRAF для НМРЛ.

Ген PIK3CA кодирует каталитическую субъединицу, которая участвует в процессах фосфорилирования АТФ и является участником сигнального пути PI3K/Akt/mTOR. Мутации в гене PIK3CA встречаются примерно в 5% плоскоклеточных раков легкого и в настоящее время являются объектом активных клинических исследований (Kawano О., 2006). Сигнальный путь PI3K/Akt/mTOR играет важную роль в пролиферации клеток, синтезе белков и

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шикеева, Амуланг Алексеевна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Горбунова В.Н. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний / В.Н. Горбунова, В.С.Баранов. - СПб, «Специальная литература». - 1997. -286 с.

2. Залетаев Д.В. Системы генетических и эпигенетических маркёров в диагностике онкологических заболеваний / Д.В. Залетаев, М.А. Пальцев.- М.: ОАО Издательство «Медицина», 2009. - 384 с.

3. Кекеева Т.В. Молекулярно-генетические изменения при раке предстательной железы. / Кекеева Татьяна Владимировна - М. - 2008.

4. Кекеева Т.В. Потеря гетерозиготности и микросателлитная нестабильность в стромальных и эпителиальных клетках рака предстательной железы / Т.В. Кекеева, О.П. Попова, Л.Э. Завалишина, П.В. Шегай, Б.Я. Алексеев, Ю.Ю. Андреева, Д.В. Залетаев, М.В. Немцова // Молекулярная биология. - 2008, -№42,-С. 96-109.

5. Чиссов В.И. Злокачественные новообразования в России в 2011 году (заболеваемость и смертность) - М.: ФГБУ «МНИОИ им. П.А.Герцена» Минздавсоцразвития России. - 2012. - 260 с.

6. Чиссов В.И. Онкология / В.И. Чиссов, C.JI. Дарьялова - М.: ГЭОТАР-Медиа, - 2007. - 560 с.

7. Шикеева A.A. Аллельные нарушения у пациентов с немелкоклеточным раком легкого / A.A. Шикеева, Т.В. Кекеева, Л.Э. Завалишина, Ю.Ю. Андреева, Г.А. Франк // Архив Патологии. - 2013. - № 2. - Том 75. - С. 3-8.

8. Шикеева A.A. Анализ молекулярно-генетических изменений в гене EGFR у пациентов с НМРЛ / A.A. Шикеева, Т.В. Кекеева, Л.Э. Завалишина, Ю.Ю. Андреева, Г.А. Франк // Онкохирургия. - 2011. - № 2. - Том 3, - С. 87-88.

9. Шикеева A.A. Эпигенетические изменения при немелкоклеточном раке легкого / A.A. Шикеева, Т.В. Кекеева, Л.Э. Завалишина, Ю.Ю. Андреева, Г.А. Франк // Онкология. Журнал им. П.А. Герцена. - 2013, - №5, - С. 19-25.

10. Шикеева А.А. Молекулярно-генетические аспекты немелкоклеточного рака легкого / А.А. Шикеева, Т.В. Кекеева, Л.Э. Завалишина, Ю.Ю. Андреева, Г.А. Франк // Онкология. Журнал им. П.А. Герцена. - 2013. - №5. - С. 62-67.

11. Ahrendt S.A. Microsatellite instability at selected tetranucleotide repeats is associated with p53 mutations in non-small cell lung cancer / S.A. Ahrendt, P.A. Decker, K. Doffek, B. Wang, L. Xu, M.J. Demeure et al. // Cancer Res. - 2000. -Vol. 60(9).-P. 2488-2491.

12. Aisner D.L. Molecular pathology of non-small cell lung cancer. A Practical Guide / D.L. Aisner, C.B. Marshall // Am J Clin Pathol - 2012. - Vol. 138. - P. 332-346

13. Arai E. Regional DNA hypermethylation and DNA methyltransferase (DNMT) 1 protein overexpression in both renal tumors and corresponding nontumorous renal tissues / E. Arai, Y. Kanai, S. Ushijima, H. Fujimoto, K. Mukai, S. Hirohashi // Int Journal Cancer - 2006. - Vol. 119. - P. 288-296.

14. Bandi N. Mir-15a and Mir-16 are implicated in cell cycle regulation in a Rb-dependent manner and are frequently deleted or down-regulated in non-small cell lung cancer / S. Zbinden, M. Gugger, et al. // Cancer Res - 2009. - Vol. 69. - P. 5553-5559.

15. Bartel D.P. MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function / D.P. Bartel // Cell. - 2004. - Vol. 116. - P. 281-297.

16. Baylin S.B., DNA hypermethylation in tumorigenesis: epigenetics joins genetics / S.B. Baylin, J.G. Herman // Trends Genet. - 2000. - Vol. 16. - P. 168-174.

17. Bean J. Acquired resistance to epidermal growth factor receptor kinase inhibitors associated with a novel T854A mutation in a patient with EGFR-mutant lung adenocarcinoma / G.J. Riely, M. Balak, et al. // Clin Cancer Res. - 2008. - Vol. 14(22).-P. 7519-7525.

18. Bean J. MET amplification occurs with or without T790M mutations in EGFR mutant lung tumors with acquired resistance to gefitinib or erlotinib / J. Bean, C. Brennan, J-Y. Shih, et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 2007. - Vol. 104(52). - P. 20932-20937.

19. Begum S. An epigenetic marker panel for detection of lung cancer using cell-free serum DNA / S. Begum, M. Brait, S. Dasgupta, K.L. Ostrow, M. Zahurak, A.L. Carvalho, J.A. Califano, N. Steven, S.N. Goodman, H. William, W.H. Westra, M.O. Hoque, D. Sidransky // Clin Cancer Res. - 2011. - Vol. 17(13). - P. 4494503.

20. Bell D.W. Increased prevalence of EGFR-mutant lung cancer in women and in East Asian populations: analysis of estrogen-related polymorphisms / B.W. Brannigan, K. Matsuo, et al. // Clin Cancer Res. - 2008. - Vol. 14. - P. 4079-84.

21. Bergethon K. ROS1 rearrangements define a unique molecular class of lung cancers / K. Bergethon, A.T. Shaw, S.H. Ou, et al. // J Clin Oncol. - 2012. - Vol. 30.-P. 863-870.

22. Bishop J.A. Accurate classification of non-small cell lung carcinoma using a novel microRNA-based approach / J.A. Bishop, H. Benjamin, H. Cholakh, A. Chajut, D.P. Clark, W.H. Westra // Clin Cancer Res. - 2010. - Vol. 16. - P. 610619.

23. Brown M.T. Regulation, substrates and functions of Src / M.T. Brown, J.A. Cooper // Biochim Biophys Acta. - 1996. - Vol. 1287. - P. 121-149.

24. Buckingham L. PTEN, RASSF1 and DAPK site-specific hypermethylation and outcome in surgically treated stage I and II non-small cell lung cancer patients / L. Buckingham, L. Penfield Faber, A. Kim, et al. // Int J Cancer. - 2010. - Vol. 126. -P. 1630-1639.

25. Calame K. MicroRNA-155 function in B-Cells / K. Calame // Immunity. - 2007. - Vol. 27(6). - P. 825-827.

26. Calin G.A. Human microRNA genes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved in cancers / G.A. Calin, C. Sevignani, C.D. Dumitru, T. Hyslop, E. Noch, S. Yendamuri, M. Shimizu, S. Rattan, F. Bullrich, M. Negrini, C.M. Croce // Proc Natl Acad Sci USA. - 2004. - Vol. 101. - P. 2999-3004.

27. Cappuzzo F. Erlotinib as maintenance treatment in advanced non-small-cell lung cancer: a multicentre, randomised, placebo-controlled phase 3 study / F. Cappuzzo,

T. Ciuleanu, L. Stelmakh, et al. // Lancet Oncol. - 2010. - Vol. 11(6). - P. 521529.

28. Carnero A. The pten/pi3k/Akt signaling pathway in cancer, therapeutic implications / A. Carnero, C. Blanco-Aparicio, O. Renner, W. Link, J.F. Leal // Curr Cancer Drug Targets. - 2008. - Vol. 8. - P. 187-198.

29. Cha S.T. MicroRNA-519c suppresses hypoxia-inducible factor-lalpha expression and tumor angiogenesis / S.T. Cha, P.S. Chen, G. Johansson, et al. // Cancer Res. -2010. - Vol. 70. - P. 2675-2685.

30. Chang Y.L. Clonality and prognostic implications of p53 and epidermal growth factor receptor somatic aberrations in multiple primary lung cancers / Y.L. Chang, C.T. Wu, S.C. Lin, C.F. Hsiao, Y.S. Jou, Y.C. Lee // Clin Cancer Res. - 2007. -Vol. 13.-P. 52-58.

31. Chen H. Aberrant methylation of FBN2 in human non-small cell lung cancer / H. Chen, M. Suzuki, Y. Nakamura, et al. // Lung Cancer. - 2005. - Vol. 50. - P. 4349.

32. Chmara M. Loss of Heterozygosity at Chromosomes 3p and 17p in Primary Non-small Cell Lung Cancer / M. Chmara, A. Wozniak, K. Ochman, G. Kobierska, R. Dziadziuszko, K. Sosinska-Mielcarek, et al. // Anticancer Res. - 2004. - Vol. 24(6).-P. 4259-4263.

33. Crawford M. MicroRNA 133B targets pro-survival molecules MCL-1 and BCL2L2 in lung cancer / M. Crawford, K. Batte, L. Yu, et al. // Biochem Biophys Res Commun. - 2009. - Vol. 388. - P. 483^89.

34. Davies K.D. Identifying and targeting ROS1 gene fusions in non-small cell lung cancer / K.D. Davies, A.T. Le, M.F. Theodoro, et al. // Clin Cancer Res. - 2012. -Vol. 18(17).-P. 4570-4579.

35. Eads C.A. Fields of aberrant CpG island hypermethylation in Barrett's esophagus and associated adenocarcinoma / C.A. Eads, R.V. Lord, S.K. Kurumboor, K. Wickramasinghe, M.L. Skinner, et al. // Cancer Res. - 2000. - Vol. 60. - P. 5021-

36. Elton T.S. Regulation of the MIR155 host gene in physiological and pathological processes / T.S. Elton, H. Selemon, S.M. Elton, N.L. Parinandi // Gene. - 2013. -Vol. 532(1).-P. 1-12.

37. Engelman J.A. MET amplification leads to gefitinib resistance in lung cancer by activating ErbB3 signaling / J.A. Engelman, K. Zejnullahu, T. Mitsudomi, et al. Science. - 2007. - Vol. 316. - P. 1039-1043.

38. Engelman J.A. PF00299804, an irreversible pan-ErbB inhibitor, is effective in lung cancer models with EGFR and ERBB2 mutations that are resistant to gefitinib / J.A. Engelman, K. Zejnullahu, C.M. Gale, et al. // Cancer Res. - 2007. - Vol. 67. -P. 11924-11932.

39. Esquela-Kerscher A. The let-7 microRNA reduces tumor growth in mouse models of lung cancer / A. Esquela-Kerscher, P. Trang, J.F. Wiggins, L. Patrawala, A. Cheng, L. Ford, et al. // Cell Cycle. - 2008. - Vol. 7. - P. 759-764.

40. Faraoni I. MiR-155 gene: a typical multifunctional microRNA /1. Faraoni, F.R. Antonetti, J. Cardone, E. Bonmassar // Biochim Biophys Acta. - 2009. - Vol. 1792(6).-P. 497-505.

41. Gallardo E. Mir-34a as a prognostic marker of relapse in surgically resected non-small-cell lung cancer / E. Gallardo, A. Navarro, N. Vinolas, et al. // Carcinogenesis. - 2009. - Vol. 30. - P. 1903-1909.

42. Gately K. The role of the molecular footprint of EGFR in tailoring treatment decisions in NSCLC / K. Gately, J. O'Flaherty, F. Cappuzzo, R. Pirker, et al. // J Clin Pathol. - 2012. - Vol. 65. - P. 1-7.

43. Gazdar A.F., Multifocal lung cancers-clonality vs field cancerization and does it matter? / A.F. Gazdar, J.D. Minna // J Natl Cancer Inst. - 2009. - Vol. 101. - P. 3541-543.

44. George R.E. Activating mutations in ALK provide atherapeutic target in neuroblastoma / R.E. George, T. Sanda, M. Hanna, et al. // Nature. - 2008. - Vol. 455.-P. 975-978.

45. Geurts-Giele W. R. Molecular diagnostics of a single multifocal non-small cell lung cancer case using targeted next generation sequencing / W.R. Geurts-Giele,

A. Dirkx-van der Velden, N.M. Bartalits, L.C. Verhoog, W.E. Hanselaar, W.N. Dinjens // Virchows Arch. - 2012. - Vol. 10. - P. 1346-1354.

46. Girard L. Genomewide allelotyping of lung cancer identifies new regions of allelic loss, differences between small cell lung cancer and non-small cell lung cancer, and loci clustering / L. Girard, S. Zöchbauer-Müller, A.K. Virmani, A.F. Gazdar, J.D. Minna // Cancer Res. - 2000. - Vol. 60(17). - P. 4894^1906.

47. Girard N. Genomic and mutational profiling to assess clonal relationships between multiple non-small cell lung cancers / N. Girard, I. Ostrovnaya, C. Lau, B. Park, M. Ladanyi, D. Finley, et al. // Clin Cancer Res. - 2009. - Vol. 15. - P. 5184-5190

48. Grepmeier U. Deletions at chromosome 2q and 12p are early and frequent molecular alterations in bronchial epithelium and NSCLC of long-term smokers / U. Grepmeier, W. Dietmaier, J. Merk, P.J. Wild, et al. // Int J Oncol. - 2005. -Vol. 27(2).-P. 481—488.

49. Greulich H. Oncogenic transformation by inhibitor-sensitive and -resistant EGFR mutants / H. Greulich, T.H. Chen, W. Feng, et al. // PLoS Med. - 2005. -Vol. 2(11).-P. 313.

50. Gu J. Aberrant Promoter Methylation Profile and Association with Survival in Patients with Non-Small Cell Lung Cancer / J. Gu, D. Berman, C. Lu, I.I. Wistuba, J.A. Roth, M. Frazier, M.R. Spitz, X. Wu // Clin Cancer Res. - 2006. -Vol. 12.-P. 7329-7338.

51. Guo M. Promoter hypermethylation of resected bronchial margins: a field defect of changes? / M. Guo, M.G. House, C. Hooker, Y. Han, E. Heath, E. Gabrielson, S.C Yang, S.B. Baylin, et al. // Clin Cancer Res. - 2004. - Vol. 10. - P. 51311513.

52. Hafner C. Clonality of multifocal urothelial carcinomas: 10 years of molecular genetic studies / C. Hafner, R. Knuechel, R. Stoehr, A. Hartmann // Int J Cancer. -2002.-Vol. 101.-P. 1-6.

53. He X. Let-7a elevates P21(WAF1) levels by targeting of NIRF and sup- presses the growth of A549 lung cancer cells / X. He, C. Duan, J. Chen, et al. // FEBS Lett. - 2009. - Vol. 583. - P. 3501-3507.

54. Heller G. Lung cancer: from single-gene methylation to methylome profiling / G. Heller, C.C. Zielinski, S. Zochbauer-Muller // Cancer Metastasis Rev. - 2010. -Vol. 29.-P. 95-107.

55. Herbst R.S. Phase II selection design trial of concurrent chemotherapy and cetuximab versus chemotherapy followed by cetuximab in advanced-stage non-small-cell lung cancer: Southwest Oncology Group study S0342 / R.S. Herbst, K. Kelly, K. Chansky, et al. // J Clin Oncol. - 2010. - Vol. 28. - P. 4747-4754.

56. Hirao T. Tobacco smoke-induced DNA damage and an early age of smoking initiation induce chromosome loss at 3p21 in lung cancer / T. Hirao, H.H. Nelson, T.D. Ashok, J.C. Wain, E.J. Mark, et al. // Cancer Res. - 2001. - Vol. 61(2). - P. 612-615.

57. Husain H. ALK-targeted therapy for lung cancer: ready for prime time / H. Husain, C.M. Rudin // Oncology (Williston Park). - 2011. - Vol. 25(7). - P. 597601.

58. Husgafvel-Pursiainen K. P53 mutations and exposure to environmental tobacco smoke in a multicenter study on lung cancer / L. Husgafvel-Pursiainen, P. Boffetta, A. Kannio, F. Nyberg, G. Pershagen, A. Mukeria, V. Constantinescu, C. Fortes, S. Benhamou // Cancer Res. - 2000. - Vol. 60. - P. 2906-2911.

59. Ihle N.T. Effect of KRAS oncogene substitutions on protein behavior: implications for signaling and clinical outcome / N.T. Ihle, L.A. Byers, E.S. Kim, et al. // J Natl Cancer Inst. - 2012. - Vol. 104. - P. 228-239.

60. Ihle N.T. Mutations in the phosphaidylinositol-3-kinase pathway predict for antitumour activity of the inhibitor PX-866 whereas oncogenic Ras is a dominant predictor for resistance / N.T. Ihle, R. Lemos Jr., P. Wipf, et al. // Cancer Res. -2009.-Vol. 69.-P. 143-150.

61. Irby R.B. Role of Src expression and activation in human cancer / R.B. Irby, T.J. Yeatman // Oncogene. - 2000. - Vol. 19. - P. 5636-5642.

62. Issa J.P. Accelerated age-related CpG island methylation in ulcerative colitis / J.P. Issa, N. Ahuja, M. Toyota, M.P. Bronner, T.A. Brentnall // Cancer Res. -2001,-Vol. 61. - P. 3573-3577.

63. Ji M. Association of promoter methylation with histologic type and pleural indentation in non-small cell lung cancer (NSCLC) / M. Ji, Y. Zhang, B. Shi, P. Hou // Diagnostic Pathol. - 2011. - Vol. 6. - P. 48.

64. Jiang J. Real-time expression profiling of microRNA precursors in human cancer cell lines / J. Jiang, E.J. Lee, Y. Gusev, et al. // Nucleic Acids Res. - 2005. - Vol. 33.-P. 5394-5403.

65. Johnson C.D. The let-7 microRNA represses cell proliferation pathways in human cells / C.D. Johnson, A. Esquela-Kerscher, G. Stefani, M. Byrom, K. Kelnar, D. Ovcharenko, et al.// Cancer Res. - 2007. - Vol. 67. - P. 7713-7722.

66. Johnson S.M. RAS is regulated by the let-7 microRNA family / S.M. Johnson, H. Grosshans, J. Shingara, M. Byrom, R. Jarvis, et al. //Cell. - 2005. - Vol. 120. - P. 635-647.

67. Junker K. HER2/neu expression and amplification in non-small cell lung cancer prior to and after neoadjuvant therapy / K. Junker, U. Stachetzki, D. Rademacher, et al. // Lung Cancer. - 2005. - Vol. 48. - P. 59-67.

68. Kawano O. PIK3CA mutation status in Japanese lung cancer patients / O. Kawano, H. Sasaki, K. Endo, et al. // Lung Cancer. - 2006. - Vol. 54. - P. 209215.

69. Keedy V.L. American Society of Clinical Oncology provisional clinical opinion: epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation testing or patients with advanced non-small-cell lung cancer considering first-line egfr tyrosine kinase inhibitor therapy / V.L. Keedy, S. Temin, M.R. Somerfield, et al. // J Clin Oncol. -2011. - Vol. 29. - P. 2121-2127.

70. Kim L.C. Src kinases as therapeutic targets for cancer / L.C. Kim, L. Song, E.B. Haura // Nat Rev Clin Oncol. - 2009. - Vol. 6. - P. 587-595.

71. Kobayashi S. EGFR mutation and resistance of non-small-cell lung cancer to gefitinib / S. Kobayashi, T.J. Boggon, T. Dayaram, et al. // N Engl J Med. - 2005. - Vol. 352(8). - P. 786-792.

72. Kondo Y. Genetic instability and aberrant DNA methylation in chronic hepatitis and cirrhosis—A comprehensive study of loss of heterozygosity and microsatellite instability at 39 loci and DNA hypermethylation on 8 CpG islands in microdissected specimens from patients with hepatocellular carcinoma / Y. Kondo, Y. Kanai, M. Sakamoto, M. Mizokami, R. Ueda, S. Hirohashi // Hepatology. -2000. - Vol. 32. - P. 970-979.

73. Kumar M.S. Impaired microRNA processing enhances cellular transformation and tumorigenesis / M.S. Kumar, J. Lu, K.L. Mercer, et al. // Nat Genet. - 2007. -Vol. 39.-P. 673-677.

74. Kwak E.L. Anaplastic lymphoma kinase inhibition in non-small cell lung cancer / E.L. Kwak, Y.J. Bang, D.R. Camidge, et al. // N Engl J Med. - 2010. - Vol. 363. -P. 1693-7103.

75. Le Calvez F. TP53 and KRAS mutation load and types in lung cancers in relation to tobacco smoke: distinct patterns in never, former, and current smokers / F. Le Calvez, A. Mukeria J.D. Hunt, et al. // Cancer Research. - 2005. - Vol. 65. - P. 5076-5083.

76. Lebanony D. Diagnostic assay based on hsa-miR-205 expression distinguishes squamous from nonsquamous non-small-cell lung carcinoma / D. Lebanony, H. Benjamin, S. Gilad, M. Ezagouri, A. Dov, K. Ashkenazi, N. Gefen, S. Izraeli, G. Rechavi, H. Pass, et al. // J Clin Oncol. - 2009. - Vol. 27. - P. 2030-2037.

77. Lee D. Phase II study of erlotinib for chemotherapy-naive patients with advanced or metastatic non-small cell lung cancer who are ineligible for platinum doublets / D. Lee, S-W. Kim, C. Suh, Y. Han, J-S. Lee // Cancer Chemother Pharmacol. -2011.-Vol. 67(1).-P. 35-39.

78. Lee Y.S. The tumor suppressor microRNA let-7 represses the HMGA2 oncogene / Y.S. Lee, A. Dutta // Genes Dev. - 2007. - Vol. 21. - P. 1025-1030.

79. Leonhardt H. DNA methylation, nuclear structure, gene expression and cancer / H. Leonhardt, M.C. Cardoso // J Cell Biochem Suppl. - 2000. - Vol. (Suppl 35). -P. 78-83.

80. Li C. Lung adenocarcinomas with HER2-activating mutations are associated with distinct clinical features and HER2/EGFR copy number gains / C. Li, Y. Sun, R. Fang, et al. // J Thorac Oncol. - 2012. - Vol. 7. - P. 85-89.

81. Li M. The status of KRAS mutations in patients with non-small cell lung cancers from mainland China / M. Li, L. Liu, Z. Liu, et al. // Oncol Rep. - 2009. - Vol. 22. -P. 1013-1020.

82. Lin P-Y., Yu S.L., Yang P.C. MicroRNA in lung cancer. Br J Cancer. - 2010. -Vol. 103(8).-P. 1144-1148.

83. Lin Q. RASSF1A, APC, ESR1, ABCB1 and HOXC9, but not P16ink4a, DAPK1, PTEN and MT1G genes were frequently methylated in the stage I non-small cell lung cancer in China / Q. Lin, J. Geng, K. Ma, et al. // J Cancer Res Clin Oncol. -2009.-Vol. 135.-P. 1675-1684.

84. Linardou H. Assessment of somatic K-ras mutations as a mechanism associated with resistance to egfr-targeted agents: a systematic review and meta-analysis of studies in advanced non-small-cell lung cancer and metastatic colorectal cancer / H. Linardou, I.J. Dahabreh, D. Kanaloupiti, et al. // Lancet Oncology. - 2008. -Vol. 9. - P. 962-972.

85. Liu B. Mir-126 restoration down-regulate VEGF and inhibit the growth of lung cancer cell lines in vitro and in vivo / B. Liu, X.C. Peng, X.L. Zheng, et al. // Lung Cancer. - 2009. - Vol. 66. - P. 169-175.

86. Liu X. MicroRNA-31 functions as an oncogenic microRNA in mouse and human lung cancer cells by repressing specific tumor suppressors / X. Liu, L.F. Sempere, H. Ouyang, et al. // J Clin Invest. - 2010. - Vol. 120. - P. 1298-1309.

87. Lynch T.J. Activating mutations in the epider- mal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib / T.J. Lynch, D.W. Bell, R. Sordella R, et al. // N Engl J Med. - 2004. - Vol. 350(21). - P. 2129-2139.

88. M. Gefltinib or chemotherapy for non-small-cell lung cancer with mutated EGFR / M. Maemondo, A. Inoue, K. Kobayashi, et al. // N Engl J Med. - 2010. - Vol. 362.-P. 2380-2388.

89. Marchetti A. Clinical features and outcome of patients with non-small-cell lung cancer harboring BRAF mutations / A. Marchetti, L. Felicioni, S. Malatesta, et al. // J Clin Oncol. - 2011. - Vol. 29. - P. 3574-3579.

90. Markou A. Prognostic value of mature microRNA-21 and microRNA-205 overexpression in non-small cell lung cancer by quantitative real-time RT-PCR / A. Marlou, E.G. Tsaroucha, L. Kaklamanis, et al. // Clin Chem. - 2008. - Vol. 54(10).-P. 1696-1704.

91. Marsit C.J. Alterations of 9p in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of the lung: association with smoking, TP53, and survival / C.J. Marsit, J.K. Wiencke, H.H. Nelson, D.H. Kim, et al. // Cancer Genet Cytogenet. - 2005. - Vol. 162(2). -P. 115-121.

92. Maruyama R. Hypermethylation of FHIT as a prognostic marker in non-small cell lung carcinoma / R. Maruyama, K. Sugio, I. Yoshino, Y. Maehara, A.F. Gazdar // Cancer. - 2004. - Vol. 100. - P. 1472-1477.

93. McDermott U. Genomic alterations of anaplastic lymphoma kinase may sensitize tumors to anaplastic lymphoma kinase inhibitors / U. McDermott, A.J. Iafrate, N.S. Gray, et al. Cancer Res. - 2008. - Vol. 68. - P. 3389-3395.

94. Miller V.A. Phase Ilb/III double-blind randomized trial of afatinib (BIBW 2992, an irreversible inhibitor of egfr/herl and her2) + best supportive care (bsc) versus placebo + bsc in patients with nsclc failing 1-2 lines of chemotherapy and erlotinib or gefltinib (lux-Lung 1) (abstract LBA1) / V.A. Miller, V. Hirsh, J. Cadranel, et al. // Ann Oncol. - 2010. - Vol. 21(suppl 8). - P. 1-12.

95. Mirsadraee S, Oswal D, Alizadeh Y, Caulo A, van Beek E Jr. The 7th lung cancer TNM classification and staging system: Review of the changes and implications. World J Radiol. - 2012. - Vol. 4(4). - P. 128-34.

96. Mitchell P.S. Circulating microRNAs as stable blood-based markers for cancer detection /P.S. Mitchell, R.L. Parkin, E.M. Kroh, et al. // Proc Natl. Acad Sci USA.-2008.-Vol. 105.-P. 10513-10518.

97. Mitsudomi T. Gefitinib versus cisplatin plus docetaxel in patients with non-small-cell lung cancer harboring mutations of the epidermal growth factor receptor (WJTOG3405): an open label, randomised phase 3 trial / T. Mitsudomi, S. Morita, Y. Yatabe, et al. // Lancet Oncol. - 2010. - Vol. 11(2). - P. 121-128.

98. Mitsuuchi Y. Cytogenetics and molecular genetics of lung cancer / Y. Mitsuuchi, J.R. Testa // Am. J. Med. Genet. - 2002. - Vol. 115. - P. 183-188.

99. Miyazaki M. The relation of alcohol consumption and cigarette smoking to the multiple occurrence of esophageal dysplasia and squamous cell carcinoma / M. Miyazaki, S. Ohno, M. Futatsugi, H. Saeki, et al. // Surgery. - 2002. - Vol. 131. -P. 7-13.

100. Mok T.S. Gefitinib or carboplatin-paclitaxel in pulmonary adenocarcinoma / T.S. Mok, Y-L. Wu, S. Thongprasert, et al. // N Engl J Med. - 2009. - Vol. 361(10).-P. 947-957.

101. Mosse Y.P. Identification of ALK as a major familial neuroblastoma predisposition gene / Y.P Mosse, M. Laudenslager, L. Longo, et al. // Nature. -2008. - Vol. 455. - P. 930-935.

102. Nakajima, T. Higher methylation levels in gastric mucosae significantly correlate with higher risk of gastric cancers / T. Nakajima, T. Maekita, I. Oda, T. Gotoda, et al. // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. - 2006. - Vol. 15. - P. 23172321.

103. Nakajima, T. Metachronous gastric cancers after endoscopic resection: how effective is annual endoscopic surveillance? / T. Nakajima, I. Oda, T. Gotoda, H. Hamanaka, T. Eguchi, C. Yokoi, D. Saito // Gastric Cancer. - 2006. - Vol. 9. - P. 93-98.

104. Nakayama M. Hypermethylation of the human Glutation S-Transferase-Jt gene (GSTP1) CpG island is present in a subset of proliferative inflammatory atrophy lesions but not in normal or hyperplastic epitelium of the prostate / M.

Nakayama, C.J. Bennett, J.L. Hicks, et al. // Am J Pathol. - 2003. - Vol. 163(3). -P. 923-933.

105. Naoki K. Missense mutations of the BRAF gene in human lung adenocarcinoma / K. Naoki, T.H. Chen, T.H., W.G. Richards, et al. // Cancer Res.

- 2002. - Vol. 62. - P. 7001-7003.

106. Navarro A. MicroRNAs expressed during lung cancer development are expressed in human pseudoglandular lung embryogenesis / A. Navarro, R.M. Marrades, N. Vinolas, et al. // Oncology. - 2009. - Vol. 76. - P. 162-169.

107. Neilsen P.M. Mutant p53 drives invasion in breast tumors through up-regulation of miR-155 / P.M. Neilsen, J.E. Noll, S. Mattiske, C.P. Bracken, P.A. Gregory, et al. // Oncogene. - 2013. - Vol. 32(24). - P. 2992-3000.

108. Ou S.I. Comparison of crizotinib (PF-02341066) pharmacokinetics between Asian and non-Asian patients with advanced malignancies / S.I Ou, R. Salgia, J.W. Clark, et al. // J Thorac Oncol. - 2010. - Vol. 5(suppl 5). - P. 382.

109. Paez J.G. EGFR Mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefltinib therapy / J.D. Paez, P.A. Jànne, J.C. Lee, et al. // Science. -2004. - Vol. 304(5676). - P. 1497-1500.

110. Paik P.K. Clinical characteristics of patients with lung adenocarcinomas harboring BRAF mutations / P.K. Paik, M.E. Arcila, M. Fara, et al. // J Clin Oncol.

- 2011. - Vol. 29. P. 2046-2051.

111. Pan H. Loss of heterozygosity patterns provide fingerprints for genetic heterogeneity in multistep cancer progression of tobacco smoke-induced non-small cell lung cancer / H. Pan, J. Califano, J.F. Ponte, et al. // Cancer Res. - 2005. -Vol. 65(5).-P. 1664-1669.

112. Pao W. Acquired resistance of lung adenocarcinomas to gefitinib or erlotinib is associated with a second mutation in the EGFR kinase domain / W. Pao, V.A. Miller, K.A. Politi, et al. // PLoS Med. - 2005. - Vol. 2. - P. 73.

113. Partridge M. A case-control study confirms that microsatellite assay can identify patients at risk of developing oral squamous cell carcinoma within a field

of cancerization / M. Partridge, S. Pateromichelakis, E. Phillips, G.G. Emilion, et al. // Cancer Res. - 2000. - Vol. 60. - P. 3893-3898.

114. Porta R. Erlotinib customization based on epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations in stage IV non-small-cell lung cancer (NSCLC) patients / R. Porta, C. Queralt, F. Cardenal, et al. // J Clin Oncol. - 2008. - Vol. 26. - P. 8038.

115. Pulford K. The emerging normal and disease-related roles of anaplastic lymphoma kinase / K. Pulford, L. Lamant, E. Espinos, et al. // Cell Mol Life Sci. -2004. - Vol. 61. - P. 2939-2953.

116. R.M. MicroRNA regulation of inflammatory responses / R.M. O'Connell, D.S. Rao, D. Baltimore // Annu Rev Immunol. - 2012. - Vol. 30. - P. 295-312.

117. Ramalingam S.S. Randomized phase 2 study of PF299804, an irreversible human epidermal growth factor receptor (egfr) inhibitor, versus erlotinib in patients with advanced non-small cell lung cancer (nsclc) after chemotherapy failure: quantitative and qualitative benefits / S.S. Ramalingam, M. Boyer, K. Park, et al. // Ann Oncol. - 2010. - Vol. 21(suppl 8). - P. 122.

118. Ramieri M.T. Detection of HER2 amplification using the SISH technique in breast, colon, prostate, lung and ovarian carcinoma / M.T. Ramieri, R. Murari, C. Botti, et al. // Anticancer Res. - 2010. - Vol. 30. - P. 1287-1292.

119. Raponi M. MicroRNA classifiers for predicting prognosis of squamous cell lung cancer / M. Raponi, L. Dossey, T. Jatkoe, et al. // Cancer Res. - 2009. - Vol. 69.-P. 5776-5783.

120. Reinhart B.J. The 21-nucleotide let-7 RNA regulates developmental timing in Caenorhabditis elegans / B.J. Reinhart, F.J. Slack, M. Basson, A.E. Pasquinelli, J.C. Bettinger, A.E Rougvie, H.R. Horvitz, G. Ruvkun // Nature. - 2000. - Vol. 403.-P. 901-906.

121. Reungwetwattana T. Oncogenic pathways, molecularly targeted therapies, and highlighted clinical trials in non-small-cell lung cancer (NSCLC) / T. Reungwetwattana, S.J. Weroha, J.R. Molina // Clin Lung Cancer. - 2012. - Vol. 13(4).-P. 252-266.

122. Riely G.J. Frequency and distinctive spectrum of KRAS mutations in never smokers with lung adenocarcinoma / G.J. Riley, M.G. Kris, D. Rosenbaum, et al. // Clin Cancer Res. - 2008. - Vol. 14. - P. 5731-5734.

123. Rimkunas V.M. Analysis of receptor tyrosine kinase ROS1-positive tumors in non-small cell lung cancer: identification of a FIG-ROS1 fusion / V.M. Rimkunas, K.E. Crosby, D. Li, et al. // Clin Cancer Res. - 2012. - Vol. 18(16). -P. 4449.4457.

124. Roberts P.J. Personalized medicine in non-small-cell lung cancer: is KRAS a useful marker in selecting patients for epidermal growth factor receptor-targeted therapy? / P.J. Roberts, T.E. Stinchcombe, C.J. Der, M.A. Socinski // J Clin Oncol. - 2010. Vol. 28. - P. 4769-4777.

125. Rodig S.J. Unique clinicopathologic features characterize ALK-rearranged lung adenocarcinoma in the Western populations / S.J. Rodig, M. Mino-Kenudson, S. Dacic, et al. // Clin Cancer Res. - 2009. - Vol. 15. - P. 5216-5223.

126. Rosell R. Erlotinib versus chemotherapy (CT) in advanced non-small cell lung cancer (NSCLC) patients (p) with epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations: Interim results of the European Erlotinib Versus Chemotherapy (EURTAC) phase III randomized trial / R. Rosell, R. Gervais, A. Vergnenegre, et al. // J Clin Oncol. - 2011. - Vol. 29. - P. 7503.

127. Salomon D.S. Epidermal growth factor-related peptides and their receptors in human malignancies / D.S. Salomon, R. Brandt, F. Ciardiello, N. Normanno // Crit Rev Oncol Hematol. - 1995. - Vol. 19. - P. 183-232.

128. Sanchez-Cespedes M. Chromosomal alterations in lung adenocarcinoma from smokers and nonsmokers / M. Sanchez-Cespedes, S.A. Ahrendt, S. Piantadosi, R. Rosell, et al. // Cancer Res. - 2001. - Vol. 61(4). - P. 1309-1313.

129. Sekido Y. Molecular genetics of lung cancer / Y. Sekido, K.M. Fong, J.D. Minna // Ann. Rev. Med. - 2003. - Vol. 54. - P. 73-87.

130. Sequist L.V. First-line gefltinib in patients with advanced non-small-cell lung cancer harboring somatic EGFR mutations / L.V. Sequist, R.G. Martins, D. Spigel, et al. // J Clin Oncol. - 2008. - Vol. 26. - P. 2442-2449.

131. Sequist L.V. Randomized Phase II study of erlotinib plus tivantinib versus erlotinib plus placebo in previously treated non-small-cell lung cancer / L.V. Sequist, J. von Pawel, E.G. Garmey, et al. // J Clinical Oncology. - 2011. - Vol. 29(24).-P. 3307-3315.

132. Sharma S.V. Epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer / S.V. Sharma, D.W. Bell, J. Settleman, D.A. Haber // Nat Rev Cancer. - 2007. -Vol. 7(3).-P. 169-181.

133. Shen L. MGMT promoter methylation and field defect in sporadic colorectal cancer / L. Shen, Y. Kondo, G.L. Rosner, L. Xiao, N.S. Hernandez, J. Vilaythong, P.S. Houlihan, et al. // P.J Natl Cancer Inst. - 2005. - Vol. 97. - P. 1330-1338.

134. Shepherd F.A. Erlotinib in previously treated non-small-cell lung cancer / F.A. Shepherd, J. Rodrigues Pereira, T. Ciuleanu, et al. // N Engl J Med. - 2005. -Vol. 53(2).-P. 123-132.

135. Shigematsu H. Somatic mutations of the HER2 kinase domain in lung adenocarcinomas / H. Shigematsu, T. Takahashi, M. Nomura, et al. // Cancer Res. - 2005. Vol. 65. - P. 1642-1646.

136. Shimizu S. High frequency of clonally related tumors in cases of multiple synchronous lung cancers as revealed by molecular diagnosis / S. Shimizu, Y. Yatabe, T. Koshikawa, N. Haruki, S. Hatooka, et al. // Clin Cancer Res. - 2000. -Vol. 6. - P. 3994-3999

137. Slaughter D.P. Field cancerization in oral stratified squamous epithelium; clinical implications of multicentric origin / D.P. Slaughter, H.W. Southwick, W. Smejkal // Cancer. - 1953. - Vol. 6(5). - P. 963-968.

138. Soda M. Identification of the transforming EML4-ALK fusion gene in non-small-cell lung cancer / M. Soda, Y.L. Choi, M. Enomoto, et al. // Nature. -2007. - Vol. 448. - P. 561-566.

139. Soria J.C. Efficacy of everolimus (RAD001) in patients with advanced nsclc previously treated with chemotherapy alone or with chemotherapy and egfr

inhibitors / J.C. Soria, F.A. Shepherd, J.Y. Douillard, et al. // Ann Oncol. - 2009. -Vol. 20. P. 1674-1681.

140. Sos M.L. Genetic insight and therapeutic targets in squamous-cell lung cancer / M.L. Sos, R.K. Thomas // Oncogene. - 2012. - Vol. 23. - P. 640.

141. Sozzi G. Loss of FHIT function in lung cancer and preinvasive bronchial lesions / G. Sozzi, U. Pastorino, L. Moiraghi, E. Tagliabue, et al. // Cancer Res. -1998. - Vol. 58(22). - P. 5032-5037.

142. Spigel D.R. Final efficacy results from OAM4558g, a randomized phase II study evaluating MetMAb or placebo in combination with erlotinib in advanced NSCLC / D.R. Spigel, T.J. Ervin, R. Ramlau, et al. // J Clin Oncol. - 2011. - Vol. 29(Suppl 15). - P. 7505.

143. Steele N.L. A phase 1 pharmacokinetic and pharmacodynamic study of the histone deacetylase inhibitor belinostat in patients with advanced solid tumour / N.L. Steele, J.A. Plumb, L. Vidal, et al. // Clin Cancer Res. - 2008. - Vol. 14. - P. 804-810.

144. Subramanian J. Lung cancer in never smokers: a review / J. Subramanian, R. Govindan // J Clin Oncol. - 2007. - Vol. 25. - P. 561-570.

145. Summy J.M. Src family kinases in tumor progression and metastasis / J.M. Summy, G.E. Gallick // Cancer Metastasis Rev. - 2003. - Vol. 22. - P. 337-358.

146. Sun Y. Mir-126 inhibits non- small cell lung cancer cells proliferation by targeting EGFL7 / Y. Sun, Y. Bai, F. Zhang, et al. // Biochem Biophys Res Commun.- 2010. -Vol. 391.-P. 1483-1489.

147. Takamizawa J. Reduced expression of the Let-7 microRNAs in human lung cancers in association with shortened postoperative survival / J. Takamizawa, H. Konishi, K. Yanagisawa, et al. // Cancer Research. - 2004. - Vol. 64. - P. 37533756.

148. Takamochi K. Clonality status of multifocal lung adenocarcinomas based on the mutation patterns of EGFR and KRAS / K. Takamochi, S. Oh, J. Matsuoka, K. Suzuki // Lung Cancer. - 2012. - Vol. 75. - P. 313-320.

149. Tam W. bic, a novel gene activated by proviral insertions in avian leukosis virus-induced lymphomas, is likely to function through its noncoding RNA / W. Tam, D. Ben-Yehuda, W.S. Hayward // Mol Cell Biol. - 1997. - Vol. 17(3). - P. 1490-1502.

150. Tang J.M. Phosphorylated Akt overexpression and loss of PTEN expression in non-small cell lung cancer confers poor prognosis / J.M. Tang, Q.Y. He, R.X. Guo, X.L. Chang // Lung Cancer. - 2006. - Vol. 51. - P. 151-191.

151. Tang X. Epidermal growth factor receptor abnormalities in the pathogenesis and progression of lung adenocarcinomas / X. Tang, M. Varella-Garcia, A.C. Xavier, E. Massarelli, et al. // Cancer Prev Res. - 2008. - Vol 1. - P. 192-200.

152. Tessema M. Concomitant promoter methylation of multiple genes in lung adenocarcinomas from current, former and never smokers / M. Tessema, Y.Y. Yu, C.A. Stidley, et al. // Carcinogenesis. - 2009. - Vol. 30. - P. 1132-1138.

153. Tili E. MiR-155: on the crosstalk between inflammation and cancer / E. Tili, C.M. Croce, J.J. Michaille // Int Rev Immunol. - 2009. - Vol. 28(5). - P. 264-284.

154. Tomizawa K. Prognostic and predictive implications of HER2/ERBB2/neu gene mutations in lung cancers / K. Tomizawa, K. Suda, R. Onozato, et al. // Lung Cancer.-2011.-Vol. 74.-P. 139-144.

155. Tseng R.C. Genomewide loss of heterozygosity and its clinical associations in non small cell lung cancer / R.C. Tseng, J.W. Chang, F.J. Hsien, Y.H. Chang, C.F. Hsiao, J.T. Chen, et al. // Int J Cancer. - 2005. - Vol. 117(2). - P. 241-247.

156. Vahakangas K.H. P53 and k-ras mutations in lung cancers from former and never-smoking women / K.H. Vahakangas, W.P. Bennett, K. Castren, et al. // Cancer Res. - 2001. - Vol. 61. - P. 4350-4356.

157. Vaissiere T. Quantitative analysis of DNA methylation profiles in lung cancer identifies aberrant DNA methylation of specific genes and its association with gender and cancer risk factors / T. Vaissierre, R.J. Hung, D. Zaridze, et al. // Cancer Res. - 2009. - Vol. 69. - P. 243-252.

158. Van Den Broeck A. Lung cancer. A modified epigenome / A. Van Den Broeck, P. Ozenne, B. Eymin, S. Gazzeri // Cell Adhesion & Migration. - 2009. -Vol. 4(1)-P. 107-113

159. Verri C. Fragile histidine triad gene inactivation in lung cancer. The European early lung cancer project / C. Verri, L. Roz, D. Conte, T. Liloglou, A. Livio, A. Vesin, et al. // Am J Respir Crit Care Medicine. - 2009. - Vol. 179(5). -P. 396-401.

160. Wang Y.Y. MicroRNA let-7a inhibits the proliferation and invasion of nonsmall cell lung cancer cell line 95D by regulating K-Ras and HMGA2 gene expression / Y.Y. Wang, T. Ren, Y.Y. Cai, X.Y. He // Cancer Biother Radiopharm. - 2013. - Vol. 28(2). - P. 131-137.

161. Warth A. Clonality of multifocal nonsmall cell lung cancer: implications for staging and therapy / A. Warth, S. Macher-Goeppinger, T. Muley, M. Thomas, H. Hoffmann, P.A. Schnabel et al. // Eur Respir J. - 2012. - Vol. 39. - P. 14371442

162. Weir B.A. Characterizing the cancer genome in lung adenocarcinoma / B.A. Weir, M.S. Woo, G. Getz, et al. // Nature. - 2007. - Vol. 450(7171). - P. 893-898.

163. Weiss J. Frequent and focal FGFR1 amplification associates with therapeutically tractable FGFR1 dependency in squamous cell lung cancer / J. Weiss, M.L. Sos, D. Seidel, et al. // Sci Transl Med. - 2010. - Vol. 2. - P. 93.

164. Wen J. Genetic and epigenetic changes in lung carcinoma and their clinical implications / J. Wen, J. Fu, W. Zhang, M. Guo // Modern Pathology. - 2011. -Vol. 24(7).-P. 932-943.

165. Willis R.A. Epithelial tumor of the urinary passages. Pathology of Tumors. London. - 1967. - Ch. 28. - P. 471^85.

166. Willis R.A. Pathology of tumors. London: Butterwoeth, 1953.

167. Wistuba I.I. High resolution chromosome 3p allelotyping of human lung cancer and preneoplastic/preinvasive bronchial epithelium reveals multiple, discontinuous sites of 3p allele loss and three regions of frequent breakpoints / I.I.

Wistuba, C. Behrens, A.K. Virmani, et al. // Cancer Res. - 2000. - Vol. 60. - P. 1949-1960.

168. Wistuba I.I. Lung cancer preneoplasia / I.I.Wistuba, A.F. Gazdar // Annu Rev Pathol. - 2006. - Vol. 1. - P. 331-348.

169. Woenckhaus M. Multitarget FISH and LOH analyses at chromosome 3p in non-small cell lung cancer and adjacent bronchial epithelium / M Woenckhaus, U. Grepmeier, P.J. Wild, et al. // Am J Clin Pathol. - 2005. - Vol. 123(5). - P. 752761.

170. World Health Organization. World health statistics 2013.- ISBN. -2013.

171. Wrage M. Genomic profiles associated with early micrometastasis in lung cancer: relevance of 4q deletion / M. Wragee, S. Ruosaari, P.P. Eijk, J.T. Kaifl, et al. // Clin Cancer Res. - 2009. - Vol. 15(5). - P. 1566-1574.

172. Yan P.S. Mapping geographic zones of cancer risk with epigenetic biomarkers in normal breast tissue / P.S. Yan, C. Venkataramu, A. Ibrahim, J.C. Liu, R.Z. Shen, N.M. Diaz, et al // Clin Cancer Research. - 2006. - Vol. 12. - P. 6626-6636.

173. Yanaihara N. Unique microRNA molecular profiles in lung cancer diagnosis and prognosis / N. Yanaihara, N. Caplen, E. Bowman, M. Seike, et al. // Cancer Cell. - 2006. - Vol. 9. - P. 189-198.

174. Yendamuri S. 3p22.1 and 10q22.3 deletions detected by fluorescence in situ hybridization (FISH): a potential new tool for early detection of non-small cell lung cancer (NSCLC) / S. Yendamuri, A.A. Vaporciyan, T. Zaidi, et al. // J Thorac Oncol. - 2008. - Vol. 3(9). - P. 979-984.

175. Yu S.L. MicroRNA signature predicts survival and relapse in lung cancer / S.L. Yu, H.Y. Chen, G.C. Chang, et al. // Cancer Cell. - 2008. - Vol. 13. - P. 4857.

176. Zhou C. Erlotinib versus chemotherapy as first-line treatment for patients with advanced EGFR mutation- positive non-small-cell lung cancer (OPTIMAL, CTONG-0802): a multicentre, open-label, randomised, phase 3 study / C. Zhou, Y-L. Wu, G. Chen, et al. // Lancet Oncol. - 2011. - Vol. 12(8). - P. 735-742.

111. Zienolddiny S. Loss of heterozygosity is related to p53 mutations and smoking in lung cancer / S. Zienolddiny, D. Ryberg, M.O. Arab, V. Skaug, A. Haugen // Br J Cancer. - 2001. - Vol. 84(2). - P. 226-231. 178. Zochbauer-Muller S. Molecular pathogenesis of lung cancer / S. Zochbauer-Muller, A.F. Gazdar, J.D. Minna // Ann Rev Physiol. - 2002. - Vol. 64. -P. 681-708.