Культивирование можжевельника сибирского (Juniperus sibirica B.) в условиях in vitro и получение биологически активных веществ на его основе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат технических наук Аёшина, Екатерина Николаевна

• Аёшина, Екатерина Николаевна
• кандидат технических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат технических наук Аёшина, Екатерина Николаевна

Введение.

• 1 Аналитический обзор.

1.1 Народнохозяйственное значение можжевеловых лесов.

1.2 Химический состав хвои Juniperus.

1.3 Культура клеток и тканей растений в решении задач биотехнологии.

1.3.1 Вторичный метаболизм в условиях in vitro.

1.3.1 Культивирование хвойных пород в условиях in vitro. г 2 Методическая часть. ф 2.1 Объект исследования.

2.2 Исследование химического состава хвои Juniperus sibirica В.

2.3 Определение влажности.

2.4 Определение суммарного содержания алкалоидов.

2.5 Определение содержания подофиллотоксина в хвое.

2.6 Определение флавоноидов.

2.7 Определение сапонинов.

2.8 Количественное определение витаминов.

2.9 Определение содержания хлорофилла А, Б и каротина.

• 2.10 Разделение липидов на силикагеле.

2.11 Спектрометрическое определение содержания белка.

2.12 Определение минеральных компонентов.

2.13 Определение концентрации редуцирующих веществ.

2.14 Определение легкогидролизуемых полисахаридов.

2.15 Определение трудногидролизуемых полисахаридов.

2.16 Определение содержания лигнина.

2.17 Определение содержания эфирного масла.

2.18 Определение экстрактивных веществ.

• 2.19 Введение в культуру Juniperus sibirica В.

2.20 Получение каллусной ткани Juniperus sibirica В.

2.21 Иммобилизация растительных тканей на инертные носители.

2.22 Методы оценки физиологического состояния культуры.

2.23 Определение содержание подофиллотоксина в клеточной биомассе методом ВЭЖХ.

2.24 Определение подофиллотоксина в клеточной биомассе методом ИК спектров.

3 Экспериментальная часть.

3.1 Химический состав хвои Juniperus sibirica В.

3.2 Культивирование Juniperus sibirica В. в условиях in vitro.

3.2.1 Получение интактных стерильных растений и введение в культуру in vitro.

3.2.2 Влияние фитогормонов на каллусогенез Juniperus sibirica В.

3.2.3 Влияние типа эксплантов Juniperus sibirica В. на каллусогенез.

3.2.4 Получение каллусных культур.

3.2.5 Влияние способа культивирования на рост каллусной ткани Juniperus sibirica В.

3.2.6 Микроклональное размножение Juniperus sibirica В.

3.2.6.1 Стимулирование развития пазушных (спящих) почек.

3.2.6.2 Культивирование побегов Juniperus sibirica В.

3.2.6.3 Укоренение размноженных побегов Juniperus sibirica В. и адаптация к условиям in vivo.

4 Выделение подофиллотоксина из хвои и каллусной ткани

Juniperus sibirica В.

5 Микроклональное размножение Juniperus sibirica В. в условиях in vitro.

Выводы.

Список используемых источников.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Культивирование можжевельника сибирского (Juniperus sibirica B.) в условиях in vitro и получение биологически активных веществ на его основе»

В настоящее время существуют традиционные биотехнологии для получения пищевых продуктов, фармацевтических средств с использованием животных, растении, микроорганизмов.

Современный этап биотехнологии связан не только с интенсификацией и улучшением имеющихся биологических технологий, но и с появлением принципиально новых объектов, которыми являются культивируемые ткани и клетки высших растений.

Культивируемые клетки высших растений способны синтезировать традиционно используемые продукты растительного происхождения, создавать принципиально новые вещества, трансформировать дешевые предшественники • в ценный продукт. Преимуществом данного метода является возможность получения продукта независимо от внешних климатических, почвенных условий, круглогодично и сохраняя при этом естественные ареалы ценных лекарственных растений

Культура клеток и тканей растений, как один из разделов биотехнологии, является не только одним из альтернативных источников необходимых биологически активных веществ, но и нетрадиционным методом охраны и восстановления генофонда лекарственных растений. Длительное микрочеренкование in vitro является одним из путей упрощения и повышения ® эффективности клонального микроразмножения ценных лесных пород.

Применение метода культуры изолированных меристем in vitro открывает большие перспективы для оздоровления генофонда древесных и травянистых растительных форм от грибных и бактериальных патогенов, вирусов, микоплазменных, вироидных и нематодных инфекций. Этот метод широко используется для получения и оздоровления посадочного материала многих экономически важных видов.

Одним из таких видов, нуждающимся в изучении и защите, является можжевельник. Несмотря на многовековую историю применения ® можжевельника, как лекарственного средства, данный вид - Juniperus sibirica В является малоизученным. Можжевельник широко применяется в народной медицине различных стран из-за значительного содержания в хвое и ягодах биологически активных веществ. В последнее время, благодаря своим антисептическим и декоративным свойствам, можжевельник используется в озеленении парков и садов.

Традиционные способы восстановления и переработки можжевельника не обеспечивают высокие потребительские свойства производимой продукции.

В целях совершенствования использования данного уникального вида необходимо применять меры к внедрению современных биотехнологий переработки сырья, ориентированных на выпуск экологически чистой продукции с высокими потребительскими качествами.

Одной из таких технологий является культура клеток и тканей растений in vitro, которая является альтернативным источником для получения биологически активных веществ и, кроме того, рассматривается как нетрадиционный метод охраны лекарственных растений.

1 Аналитический обзор

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Аёшина, Екатерина Николаевна

Выводы

1 Впервые подобраны условия для введения в культуру in vitro Juniperus sibirica В. Установлено, что наилучшей средой, обеспечивающей процессы жизнедеятельности эксплантов Juniperus sibirica В., является стандартная среда с минеральной основой по Murashige and Skoog.

2 Разработана технология микроклонального размножения Juniperus sibirica В. в условиях in vitro. Дано технико-экономическое обоснование ее целесообразности.

3 Выявлены существенные отличия в активности каллусогенеза у различных видов эксплантов Juniperus sibirica В. Наиболее высокий процент калусогенеза (до 100%) наблюдался при использовании в качестве эксплантов почек и побегов.

4 Получены штаммы каллусной ткани Juniperus sibirica В., характеризующиеся стабильностью роста. Установлена зависимость накопления клеточной биомассы Juniperus sibirica В. от качественного и количественного гормонального состава среды.

5 Установлено влияние способа культивирования на накопление подофиллотоксина в каллусной ткани Juniperus sibirica В. Наибольшее содержание подофиллотоксина обнаружено в каллусной ткани, выращенной на пенополиуретановых подложках.

6 Определено содержание наиболее ценных биологически активных соединений и обнаружено фармакологически значимое соединение лигнановой природы - подофиллотоксин.

7 Предложена принципиальная схема выделения подофиллотоксина из хвои и каллусной ткани Juniperus sibirica В. Приведены технико-экономические расчеты, которые показали эффективность биотехнологической переработки Juniperus sibirica В.

8 Впервые показана возможность получения кормового продукта из послеэкстракционного остатка хвои и каллусной ткани Juniperus sibirica В. методом биоконверсии с использованием дереворазрушающего гриба Pleurotus ostreatus.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Аёшина, Екатерина Николаевна, 2006 год

1. Шретер, А. И. Методика определения запасов лекарственных растений / А. И. Шретер, JL Е. Курлович, И. В. Богаров. М.: Наука, 1986. - 42 с.

2. Государственный доклад о состоянии окружающей природной среды

3. Красноярского края в 1996 году : гос. доклад / ред. Г. В. Кельберг, Ю. М. Мальцев ; Гос. комитет Краснояр. края по охране окружающей среды. -Красноярск, 1998. 514 с.

4. Гаммерман, А. Ф. Лекарственные растения / А. Ф. Гаммерман, Г. Н. Кадаев,

5. А. А. Яценко-Хмелевский. 4-е изд., испр. и доп. - М. : Высш. шк., 1990. -542 с.

6. Мухамедшин, К. Д. Можжевеловые леса / К. Д. Мухамедшин, Н. К.

7. Таланцев. -М.: Лесн. пром-сть, 1982. 184 с.

8. Воробьев, Д. П. Декоративные деревья и кустарники Дальнего Востока / Д.

9. П. Воробьев. Л.: Наука, 1987.-277 с.

10. Токин, Б. П. Вероятная роль фитонцидов в природе / Б. П. Токин // Природа.-1946.-№4.-С. 29-38.

11. Мухамедшин, К. Д. Чемпионы долголетия / К. Д. Мухамедшин, С. К.

12. Сартбаев. 2-е изд., изм. и доп. - Алма-Ата : Кайнар, 1988. -168 с.

13. Peter, F. Rediscover junipers. Source / F. Peter // Horticulture. 1995. - Vol. 73.1. P. 50-55.

14. Шиманюк, А. П. Эколого-лесоводственная характеристика и физикомеханические свойства древесины можжевельника обыкновенного / А. П. Шиманюк, Л. М. Перелыгин // Труды института леса. 1950. - Т. 3. - С. 319-323.

15. Кьосев, П. А. Полный справочник лекарственных растений / П. А. Кьосев. -М.: ЭКСМО-Пресс, 2001. 992 с.

16. Клышев, Л. К. Флавоноиды растений / Л. К. Клышев, В. А. Бандюкова, Л. С. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 78 с.

17. Пашинина, JI. Т. Димерные процианидины Juniperus sabina / Л. Т. Пашинина, С. А. Абилькаева // Химия природ, соединений. 1980. - № 3. -С. 420.

18. Абилькаева, С. А. Флавоноиды хвои Juniperus sabina / С. А. Абилькаева, Л. Т. Пашинина // Химия природ, соединений. 1981. — № 6. - С. 798 - 799.

19. Пашинина, Л. Т. Димерные флаванолы Juniperus Sabina / Л. Т. Пашинина, С. А. Абилькаева, В. И. Шейченко // Химия природ, соединений. 1982. - № 3. -С. 307-312.

20. Григорьев, В. П. Запас фитомассы Juniperus communis L. и содержание в хвое хлорофиллов, каротиноидов и аскорбиновой кислоты / В. П. Григорьев, Л. Ф. Поплавская // Раст. ресурсы. 1985. -№ 2 - С. 164-169.

21. Азаров, В. И. Химия древесины и синтетических полимеров / В. И. Азаров, А. В. Буров, А. В. Оболенская. СПб.: СПбЛТА, 1999. - 628 с.

22. Накопление лигнинов в каллусных культурах Lignum austriacum L. под действием элиситоров / Г. Р. Вардапетян и др. // Биотехнология. 2002. -№ 3. - С. 37-41.

23. Экстрактивные вещества древесины и значение их в целлюлозно-бумажном производстве / под ред. В. Э. Хиллиса. М.: Лесн. пром-сть, 1965.-504 с.

24. Семенов, А. А. Очерк химии природных соединений / А. А. Семенов. -Новосибирск : Наука, 2000. 664 с.

25. Duke, J. A. Medicinal plants of China / J. A. Duke, E. S. Ayensu // Algonac (Mich.): reference publ. 1985. - Vol. 1-2. - P. 705.

26. Муравьева, Д. А. Тропические и субтропические лекарственные растения / Д. А. Муравьева. М.: Наука, 1971. - 414 с.

27. Duke, J. A. CRC handbook of medical herbs / J. A. Duke // Boca Raton (Fla.): CRC press.- 1986.-P. 677.

28. Машковский, M. Д. Лекарственные средства: пособие по фармакопии для врачей / М. Д. Машковский. М. : Медицина, 1984. - Т. 1. - 624 с.; Т. 2. -576 с.

29. Hegnauer, R. Chemotaxonomie der Pflanzer / R. Hegnauer // Birkhauser. 1986. -Bd. 1-7.

30. Носов, A. M. Лекарственные растения / A. M. Носов. M.: ЭКСМО-Пресс, 2001.-350 с.

31. Горяев, M. И. Растения, обладающие противоопухолевой активностью / М. И. Горяев, Ф. С. Шарипова. Алма-Ата: Наука, 1983. - 174 с.

32. Production of podophyllotoxin in juniperus chinensis callus cultures treated with oligosaccharides and a diogenetic precursor / Toshio Muranaka et al. // Phytochemistry. 1998. - Vol. 49, № 2. - P. 491-496.

33. Растительные ресурсы СССР. JI.; СПб.: Наука, 1985-1993. - Вып. 1.

34. Hong-Yen, Hsu. The chemical constituents of oriental herbs / Hong-Yen Hsu, Yuh-Pan Chen, Mina Hong // Oriental Healing Arts Inst. Los Angeles : OUP, 1982.-P. 15-46.

35. Кустова, С. Д. Справочник по эфирным маслам / С. Д. Кустова. М.: Пищ. пром-сть, 1978.-175 с.

36. Горяев, М. И. Эфирные масла флоры СССР / М. И. Горяев. Алма-Ата : Акад. наук КССР, 1952. - 380 с.

37. Гаммерман, А. Ф. Дикорастущие лекарственные растения СССР / А. Ф. Гаммерман, И. И. Гром. М.: Медицина, 1976. - 288 с.

38. Садыков, Ж. С. Идентификация некоторых компонентов воска / Ж. С. Садыков // Химическая фармация. 1978. - № 4. - С. 24-28.

39. Кузнецова, М. А. Лекарственное растительное сырье и препараты / М. А. Кузнецова. М.: Высш. шк., 1987. - 191 с.

40. Носов, А. М. Культура клеток высших растений уникальная система, модель, инструмент / А. М. Носов // Физиология растений. - 1999. - Т. 46, №6.-С. 837-844.

41. Культура клеток растений / под ред. Р. Г. Бутенко. М. : Наука, 1981. -167 с.

42. Биотехнология получения берберина из клеточной культуры Tralictrum minis L. / А. В. Смирнов и др. // Биотехнология. 2000. - № 1. - С. 14-22.

43. Особенности регуляции каллусогенеза и биосинтез таксола in vitro у тисса ягодного / JI. Г. Филонова и др. // Биотехнология. 1996. - № 8. - С. 3844.

44. Генетическая коллекция как способ сохранения биоресурсов планеты / А. Т. Мокроносовов и др. //Вестн. РАН. 1994.-№ 11.-С. 991-1001.

45. Гамбург, К. 3. Ауксины в культурах тканей и клеток растений / К. 3. Гамбург, Н. И. Рекославская, С. Г. Швецов. Новосибирск : Наука, 1990. -243 с.

46. Гамбург, К. 3. Фитогормоны и клетки / К. 3. Гамбург. М. : Наука, 1970. -102 с.

47. Биотехнология растений : культура клеток / Г. П. Болвелл и др.. М. : Агропромиздат, 1989. - 280 с.

48. Бутенко, Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе / Р. Г. Бутенко. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. -160 с.

49. Kirby, Е. G. Colony formation from protoplasts derived from Douglas fir cotyledons / E. G. Kirby, P. Y. Chang // Plant Sci. Letter. - 1979. - V. 14. - P. 145-154.

50. David, A. Evaluation of parameters affecting the yield, variability and cell division of Pinus pinaster protoplasts / A. David, H. David, T. Mateille // Physol. Plantarum. 1982. - V. 56. - P. 108-113.

51. Isolation and culture of protoplasts from cotyledons of Pinus coulteri D. Don. / K. R. Patel et al. // Piant Cell, Tissue and Organ Culture. 1984. - V. 3. - P. 85-90.

52. Lane, E. Somatic embryogenesis in immature embryos and protoplasts of Pinus caribaea / E. Lane, H. David // Plant Science. 1990. - Vol. 69. - P. 215-224.

53. Скрипаченко, В. В. Культивирование in vitro тканей хвойных Сибири: автореф. дис. канд. биол. наук / В. В. Скрипаченко. Красноярск, 1992.— 30с.

54. Новый подход к изучению зависимости между структурой и функцией цитокининов / Я. В. Земляченко и др. // Докл. РАН. 1997. - Т. 353, № 2. -С. 261-263.

55. Полевой, В. В. Физиология растений / В. В. Полевой. М. : Высш. шк., 1989.-464 с.

56. Картель, Н. А. Фитогормоны и фитопатогенность бактерий / Н. А. Картель, В. В. Лобанок. Минск : Наука и техника, 1994. - 182 с.

57. Дерфлинг, К. Гормоны растений. Системный подход / К. Дерфлинг. М. : Мир, 1985.-304 с.

58. Круглова, Н. Н. Морфогенез в культуре изолированных пыльников: роль фитогормонов Электронный ресурс. / Н. Н. Круглова, В. Ю. Горбунова, П. А. Куксо. Режим доступа: http://www.anrb.ru /inbiocyto/2.htm

59. Skoog, F. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro / F. Skoog, С. O. Miller // Sympos. Soc. Exp. Biol. 1957. - V. 11, № 2. — P. 118.

60. Skoog, F. Aspects of growth factor interaction in morhogenesis of tobacco tissue cultures / F. Skoog // Les cultures de tissus de plantrs. Paris, 1971. - P. 115.

61. Тивари, Ш. Действие 2,4-Д на морфогенез в культуре пыльников и микроспор ячменя / Ш. Тивари, И. Р. Рахимбаев // Регуляторы роста и развития растений : тез. докл. II Всесоюз. конф. Киев, 1989. - С. 295.

62. Карабаев, М. К. Каллусогенез и морфогенез в культуре генеративных органов весенне-цветущих видов Crocus L. / М. К. Карабаев, Ж. К. Джардемалиев // Физиология растений. 1994. - Т. 41, № 6. - С. 807-814.

63. Чайлахян, М. X. Гормональная регуляция роста и развития высших растений / М. X. Чайлахян // Успехи современной биологии. 1982. - Т. 95, вып. 1.-С. 23-34.

64. Вильданова, Г. В. Индуцированный органогенез у некоторых видов среднеазиатских можжевельников в культуре тканей / Г. В. Вильданова // Изв. вузов. Лесн. журн. 2002. -№ 5. - С. 22-28.

65. Разработка методов культивирования тканей копеечника in vitro / Н. С. Ляпкова и др. // Биотехнология. 1999. - № 1. - С. 55-61.

66. Calixto, F. Adventitious shoot formation and plant regeneration from Pinus pinaster Sol. / F. Calixto, S. M. Pais // Development Biology-Plant. 1997. - № 3.-P. 119-124.

67. Бутенко, P. Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений / Р. Г. Бутенко. М.: Наука, 1964. - 272 с.

68. Запрометов, М. И. Влияние кинетина на образование фенольных соединений и ультраструктурную организацию каллусных тканей чайного растения / М. И. Запрометов, Г. А. Субботина, Т. Н. Николаева // Физиология растений. 1994. - Т. 41, № 3. - С. 354-358.

69. Payne, G. N. Bioreactor considerations for secondary metabolite production from plant cell tissue culture: indol alkaloids from Catharanthus roseus / G. N.

70. Payne, N. N. Payne, M. L. Shuler // Biotechnology and bioeng. 1988. - Vol. 31, №9.-P. 905-912.

71. Бутенко, P. Г. Культура клеток растений / P. Г. Бутенко. М.: Наука, 1971. -46 с.

72. Фаулер, М. В. Экономические аспекты промышленного культивирования клеток растений / М. В. Фаулер // Биотехнология сельскохозяйственных растений. — М.: Агропромиздат, 1987. С. 19-32.

73. Бутенко, Р. Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений / Р. Г. Бутенко. М.: Наука, 1964. - 272 с.

74. Бутенко, Р. Г. Рост и дифференциация в культуре клеток растений / Р. Г. Бутенко // Рост растений и природные регуляторы. М.: Наука, 1977. С. 621.

75. Sare von Arnold. Effect of Sucrose on Initiation of Embryogenic Callus Cultures from Mature Zygotic Embryos of Picea abies (L.) Karst / Sare von Arnold, Inger Hakman // Plant Physiology. 1986. - Vol. 122, № 3. - P. 261-265.

76. Калашникова, E. А. Оптимизация условий культивирования сосны и ели в культуре ткани / Е. А. Калашникова // Лесн. хоз-во. 1992. - № 8. - С. 4143.

77. Козубов, Г. М. Современные голосеменные / Г. М. Козубов, Е. Н. Муратова. Л.: Наука, 1986. - 115 с.

78. Егорова, Т. А. Основы биотехнологии / Т. А. Егорова. М. : Академия, 2003.-208 с.

79. Sakuta, М. Cell growth and accumulation of secondary methabolites / M. Sakuta, A. Kommane // Cell culture and somatic cell genetics of plants. 1987. -P. 97-114.

80. Биотехнология сельскохозяйственных растений / пер. с англ. В. И. Негрука ; предисл. Р. Г. Бутенко. -М.: Агропромиздат, 1987. 301 е.: ил.

81. Величко, Н. А. Научные основы индуцированного синтеза алкалоидов в клеточной культуре Cathrantyus roseus L.: автореф. дис. д-ра техн. наук / Н. А. Величко. Красноярск : СибГТУ, 2004. - 45 с.

82. Запрометов, М. Н. Вторичный метаболизм в культуре клеток и тканей растений: Культура клеток растений / М. Н. Запрометов. М. : Наука, 1981.-С. 37-51.

83. Загоскина, Н. В. Особенности метаболизма фенольных соединений гетеротрофных и фотомиксотрофных каллусных культур чайного растения (Camellina sinensis L.) : автореф. дис. докт. биол. наук / Н. В. Загоскина. -М., 1997.-49 с.

84. Носов, А. М. Регуляция синтеза вторичных соединений в культуре клеток растений / А. М. Носов // Биотехнология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: Агропромиздат, 1987. С. 5-20.

85. Влияние фитогормонов на процессы роста и синтеза вторичных веществ в культуре in vitro василисника малого / Е. В. Скуратова и др. // Биотехнология. 1999. - № 2. - С. 46-52.

86. Уразбахтина, Н. А. Получение каллусной ткани из листьев Taxus baccata L. / Н. А. Уразбахтина, Мардамшин // Биотехнология. 1999. - № 4. - С. 5556.

87. Некора, С. В. Способность к каллусогенезу у эксплантов хвои пяти видов рода Taxus L. / С. В. Некора, В. П. Комов // Раст. ресурсы. 2001. - Т. 37, вып. 4.-С. 100-107.

88. Ball, Е. Studies on the nutrition of the callus culture of Sequoia sempervirens / E. Ball // Annee biol. 1955. -№ 1. - P. 4.

89. Straus, J. Response of Cupressus funebris tissue cultures to gibberellins / J. Straus, R. Epp // Science. 1960. -№ 3. - P. 4-16.

90. Torok, D. The auxin requirement and the effect of an auxin-antagonist on tumorous and normal tissues of Picea glauca / D. Torok, K. Thimann // Physiol, plant. 1961.-№3.-P. 18-24.

91. Reinert, J. The cultivation in vitro of tumor tissues and normal tissues of Picea glauca / J. Reinert, P. R. White // Physiol, plant. 1956. -№ 2. - P. 41-53.

92. White, P. R. Some aspects of differentiation in cell of Picea glauca cultivated in vitro / P. R. White // Am. J. Bot. 1967. - № 3. - P. 11-21.

93. White, P. R. Some basic parameters in the cultivation of spruce tissues / P. R. White, P. G. Risser // Physiol, plant. 1964. - № 3. - P. 41-48.

94. Aulikki Salmia, M. Cytological stadies on tissue culture of Pinus sembra / M. Aulikki Salmia //Physiol, plant. 1975. -№ 1. -P. 16-24.

95. Brown, C. L. Culture of pine callus on a defined medium / C. L. Brown, R. H. Lawrence // Forest Sci. 1968. - № 1. - P. 32-48.

96. David A. Obtention d'une souche tissulaire de Pinus pinaster Sol. A partir de tissus du tronc de l'arbre / A. David //Acad. Sci. -1971. -№ 23. P. 13-27.

97. Jorgensen, E. Formation of heartwood phenoles in callus tissbe of red pine (Pine resinosa) / E. Jorgensen, D. Balsillie // Can. J. Bot. 1969. - № 17. - P. 32-1.

98. Lavaud, J. Action conjuguee de quelques auxines et de la kinetine on du meso-inositol, sur les tissus de Pin maritime cultives in vitro / J. Lavaud // Acad. Sci. -1969.-№ 8.-P. 38-47.

99. Lavaud, J. Phenomenes d'histogenese se produisant au cours du development des cultures initiales de tissus de pin maritime; influence de certains modificateurs de croissance / J. Lavaud // Acad. Sci. 1970. - № 8 - P. 18-24.

100. Murashige, T. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures / T. Murashige, F. Skoog // Physiol, plant. 1962. - № 15 - P. 31-42.

101. Harvey, A. Procedures and media for obtaining tissue cultures of 12 conifer species / A. Harvey, J. Grasham // Can. J. Bot. 1969. - № 4 - P. 18-24.

102. Быченкова, Э. А. Подбор оптимальной питательной среды для выращивания первичных культур тканей ряда представителей сосновых и изучение их роста / Э. А. Быченкова // Изв. вузов. Лесн. журн. 1977. - № 1.-С. 22-28.

103. Gjuleva, V. Maturation capacity of somatic embryos of Picea abies after prolonged proliferation culture / V. Gjuleva, S. Arnold // Biologia plantarum. -1999.-Vol. 42, №2.-P. 161-168.

104. Ingram, B. Effect of bioreactor configuration on the growth and maturation of Picea sitchensis somatic embryo cultures / B. Ingram, F. Mavituna // Plant. Cell. -2000.-Vol. 61.-P. 87-96.

105. Wang, К. X. Adventitious bus production from mature Picea abies: rejuvenation associated with female strobili formation / К. X. Wang, D. F. Karnosky, R.Timmis // Woody Plant Biotechnology. 1991. - P. 83-90.

106. Байбурина, P. К. Микроклональное размножение взрослых гибридных деревьев BETULA PENDULA ROTH VAR. CARELICA MERCKL. / P. K. Байбурина // Раст. ресурсы. 1998. - Т. 34, № 2. - С. 9-22.

107. Negussie, F. In vitro induction of multiple bads in tissue culture of Juniperus excelsa / F. Negussie // Forest Ecology and Management. 1997. - Vol. 98. - P. 115-123.

108. Berha, D. Asexual propagation of Juniperus procera from Ethiopia: a contribution to the conservation of African pencil cedar / D. Berha, L. Negash // Forest Ecology and Management. 1998. - Vol. 112. - P. 179-190.

109. Leopold, A. C. Plant Growth and Development / A. C. Leopold, P. E. Kriedemann. 2 ed. - McGraw-Hill, 1975. - 545 p.

110. White, J. Factor influencing adventitious root production in cuttings of Griselinia littoralis and Griselinia lucida / J. White, P. H. Lovell // Ann. Bot. -1984.-Vol. 53.-P. 443-446.

111. White, J. The anatomy of root initiation in cuttings of Griselinia littoralis and Griselinia lucida / J. White, P. H. Lovell // Ann. Bot. 1984. - Vol. 54. - P. 720.

112. Zajczkowski, S. Auxin stimulation of cambial activity in Pinus silvestris. I. The differential cambial response / S. Zajczkowski // Physio. Plant. 1973. - Vol. 29.-P. 281-287.

113. Hortmann, H. T. Plant cell / H. T. Hortmann, D. E. Kester, F. T. Davies // Plant Propagation: Principles and Practices : 5th ed. Prentice-Hall, Englewood Cliffs. -New Jersey, 1990.-P. 16-27.

114. Mesen, J. F. The effects of propagation environment and foliar area on the rooting physiology of Cordia alliodora (Ruiz and Pavon) Oken cuttings / J. F. Mesen, A. C. Newton, R. R. B. Leakey // Trees. 1997. - № 11. - P. 404-411.

115. Катаева, H. В. Клональное микроразмножение растений / H. В. Катаева, Р. Г. Бутенко. -М.: Наука, 1983. -168 с.

116. Декоративное садоводство / Н. В. Агафонов и др.. М. : Колос, 2000. -320 с.

117. Мухамедшин, К. Д. Арча / К. Д. Мухамедшин. М. : Лесн. пром-сть, 1980. -96 с.

118. Лагони, Н. О можжевеловых ягодах / Н. Лагони // Аптечное дело. 2002. -№5.-С. 8-9.

119. Псурцева, Н. В. Биотехнология / Н. В. Псурцева, Н. В. Белова, И. А. Алехина. М.: Наука, 1978. - 14 с.

120. Химический анализ лекарственных растений / под ред. Н. И. Гринкевич, Л. Н. Сафронич. -М.: Высш. шк., 1983. 175 с.

121. Ловкова, М. Я. Почему растения лечат / М. Я. Ловкова, А. М. Рабинович, С. Н. Пономарева. -М.: Наука, 1989.-256 с.

122. Противораковый экстракт. Anti-cancer extract // Chem. Eng. (USA). 2000. -Vol. 107, № 8.-C. 17.

123. Адихотдаев, К. Б. Определение флавонойдов в растительном сырье / К. Б. Адихотдаев, А. И. Баньковский, В. И. Глызин // Фармация. 1977. - № 3. -С. 3-27.

124. Мальчуковский, JI. Б. Определение тритерпеновых сапонинов в порошке и таблетках "сапарал " / JI. Б. Мальчуковский, Н. И. Либизов // Фармация. -1971.-№ 2.-С. 68-71.

125. Девяткина, В. А. Методы определения витаминов / В. А. Девяткина. М. : Пшцепромиздат, 1954. - 135 с.

126. Кейтс, М. Техника липидологии / М. Кейтс. М.: Наука, 1975. - 322 с.

127. Нижний, С. А. Скрининг физиологически активных веществ / С. А. Нижний, Н. В. Дмитриева. М.: Медицина, 1985. - С. 158.

128. Левин, Э. Д. Современные физиолого-химические методы исследования : метод, указ. к проведению лаб. работ для студентов спец. 2603 всех форм обучения / Э. Д. Левин, П. В. Миронов. Красноярск : СТИ, 1988. - 28 с.

129. Рязанова, Т. В. Химия древесины / Т. В. Рязанова, Н. А. Чупрова, Е. В. Исаева. Красноярск : КГТА, 1996. - 358 с.

130. Практические работы по химии древесины и целлюлозы / Л. В. Оболенская и др.. М.: Наука, 1965. - 411 с.

131. Кузнецова, М. А. Лекарственное растительное сырье и препараты / М. А. Кузнецова. М.: Высш. шк., 1987. - 191 с.

132. Баренбойм, Г. М. Биологически активные вещества. Новые принципы поиска / Г. М. Баренбойм, А. Г. Маленков. М.: Наука, 1985.

133. Бутенко, Р. Г. Культура тканей и физиология морфогенеза растений / Р. Г. Бутенко. М.: Наука, 1964. - 272с.

134. Gamborg, О. L. Plant cell, tissue, and organ culture: fundamental methods / O. L. Gamborg, G. C. Phillips. Berlin : Springer-Verlag, 1995. - 557 p.

135. Бутенко, P. Г. Рост и дифференциация в культуре клеток растений / Р. Г. Бутенко // Рост растений и природные регуляторы. М. : Наука, 1977. - С. 697-710.

136. Момот, Т. С. Технология изолированных культур для микроразмножения лесных древесных растений / Т. С. Момот // Биология клеток растений invitro, биотехнология и сохранение генофонда : тез. докл. 7-ой Междунар. конф.-М., 1997.-С. 441-442

137. Высоцкий, В. А. Регенерационная способность изолированных меристе-матических верхушек черной смородины и вишни и методы получения из них целых растений / В. А. Высоцкий. JI.: ВИР, 1978. - С. 28-34.

138. Биотехнология. Принципы и применение : пер. с англ. / Г. Бич и др.; под ред. И. Хиггинса. М.: Мир, 1988. - 480 с.

139. Кретович, В. JI. Биохимия растений / В. JI. Кретович. М. : Высш. шк., 1986.-С. 356-357.

140. Гродзинский, А. М. Краткий справочник по физиологии растений / А. М. Гродзинский, Д. М. Гродзинский. Киев : Наук, думка, 1973. - 380 с.

141. Гоберман, В. А. Технология научных исследований методы, модели, оценки : учеб. пособие / В. А. Гоберман, JI. А. Гоберман. - 2-е изд. стереотип. - М.: МГУЛ, 2002. - 390 с.