Культивирование эфедры односемянной (Ephedra monosperma) в условиях in vitro и получение биологически активных веществ на ее основе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат технических наук Плынская, Жанна Александровна

• Плынская, Жанна Александровна
• кандидат технических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат технических наук Плынская, Жанна Александровна

Введение.

1 Аналитический обзор.

1.1 Характеристика семейств эфедровые {Ephedraceae).

1.2 Культура клеток и тканей растений - источник биологически активных соединений.

1.3 Каллусная ткань в изолированной культуре.

1.4 Вторичный метаболизм в растениях in vivo и in vitro.

1.4.1 Физико-химические факторы среды.

1.4.2 Способы культивирования и их влияние на вторичный синтез в культуре ткани.

2 Методическая часть.

2.1 Объект исследования.

2.2 Исследование химического состава интактного растения Ephedra monosperma.

2.3 Определение влажности.

2.4 Определение суммарного содержания алкалоидов.

2.5 Количественное определение L-эфедрина

2.6 Определение флавоноидов.

2.7 Определение сапонинов.

2.8 Количественное определение витаминов.

2.9 Определение содержания хлорофилла АиБ.

2.10 Разделение липидов на силикагеле.

2.11 Спектрометрическое определение содержания белка.

2.12 Определение минеральных компонентов.

2.13 Определение легко- и трудногидролизуемых полисахаридов.

2.14 Определение содержания лигнина.

2.15 Определение экстрактивных веществ.

2.16 Определение L-эфедрина в интактном растении и клеточной биомассе методом ГХ/МС.

2.17 Определение L-эфедрина в интактном растении и клеточной биомассе методом ИК спектров.

2.18 Определение содержания жирных кислот.

2.19 Получение каллусных тканей Ephedra monosperma.

2.20 Статистическая обработка результатов эксперимента.

3 Экспериментальная часть.

3.1 Химический состав Ephedra monosperma.

3.2 Культивирование Ephedra monosperma в условиях in vitro.

3.2.1 Получение интактных стерильных растений и введение в культуру in vitro.

3.2.2 Влияние регуляторов роста на каллусогенез Ephedra monosperma.

3.2.3 Влияние способа культивирования на рост каллусной ткани Ephedra monosperma.

4 Получение алкалоидов из каллусной ткани Ephedra monosperma.

Выводы.

Список используемых источников.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Культивирование эфедры односемянной (Ephedra monosperma) в условиях in vitro и получение биологически активных веществ на ее основе»

В последнее время проблемы охраны окружающей среды и её рационального использования стали предметом серьёзных научных исследований и неотъемлемой стороной организации современного производства.

Традиционно биологически активные вещества растений получают на основе использования природного сырья. Зачастую используют биомассу дикорастущих лекарственных растений, часть получают с полей специализированных хозяйств, где растения культивируют, повышают урожайность различными мероприятиями и собирают механическим способом. Широкое использование растений,для получения биологически активных веществ, привело к стремительному сокращению их в природе. Некоторые из них относятся к редким и исчезающим видам, многие растения долго восстанавливают свои площади произрастания.

Поэтому для получения > и сохранения растений - источника биологически активных веществ, кроме традиционных методов, таких как интродукция, организация заповедников, заказников, создание плантаций, существуют иные методы. Одним из них является культура клеток и тканей высших растений in vitro.

Препараты из растений по сравнению с синтетическими лекарствами имеют ряд преимуществ. Будучи сложными, по составу, они содержат много ингредиентов, которые придают им ценные свойства и обеспечивают многостороннее действие на организм, более сильное, чем действие каждого в отдельности. Культура клеток и тканей высших растений является нетрадиционным методом охраны лекарственных растений, сохранения ценного генофонда древесных и травянистых растительных форм, методом получения, оздоровления, возобновления и размножения растений за счёт круглогодичного продуцирования регенерантов и массового выхода посадочного материала путём клонального микроразмножения [1].

В настоящее время для создания рентабельного производства на основе клеточных культур цена продукта должна быть достаточно высокой. В перспективе, при увеличении продуктивности клеточных штаммов и создании технологий, позволяющих увеличить количество продукта и уменьшить время его наработки, клетки растений могут выступать как конкуренты микроорганизмов в синтезе незаменимых аминокислот, некоторых ценных растительных белков, витаминов и других веществ [2,15].

В связи с этим культивирование тканей и клеток высших растений in vitro (в частности Ephedra monosperma) с целью их промышленного использования для получения соединений специализированного обмена и сохранение генофонда определяет актуальность данного исследования.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Плынская, Жанна Александровна

Выводы

1 Впервые подобраны условия для введения в культуру in vitro Ephedra monosperma и получена высокопродуктивная каллусная культура Ephedra monosperma из дикорастущего растения-донора, характеризующаяся стабильностью роста. Установлено, что модифицированная питательная среда с минеральной основой по Murashige and Skoog наилучшим образом обеспечивает процессы жизнедеятельности эксплантов Ephedra monosperma и накопление биологически активных веществ в каллусной ткани.

2 Установлено, что гормональный состав среды влияет на накопление клеточной биомассы Ephedra monosperma и количество алкалоидов в ней.

3 Определено, что каллусная ткань по сравнению с молодыми побегами интактного растения содержит большее количество алкалоидов, практически в 2 раза превышающее таковое в интактном растении, а также витамина Си В] (в 1,2 раза).

4 Установлено, что наибольшее количество алкалоидов (2,20 %) содержится в каллусной ткани, выращенной на пенополиуретановых подложках.

5 Предложена технологическая схема получения алкалоидов из каллусной ткани Ephedra monosperma и проведена оценка экономической эффективности получения алкалоидов из клеточной культуры Ephedra monosperma.

Предприятие является рентабельным, чистая прибыль составляет 3490,82 тыс.руб. Срок окупаемости - 2,5 года.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Плынская, Жанна Александровна, 2009 год

1. Яковлева, Г.П. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия/ Г. П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. СПб.: СпецЛит, 2004.- 289 с.

2. Новиков. В. С. Популярный атлас-определитель. Дикорастущие растения / B.C. Новиков, И. А. Губанов. М.: Дрофа, 2004. - 518 с.

3. Гиляров, М.С. Биологический энциклопедический словарь / М.С. Гиляров, А.А. Баев, Г.А. Заварзин. М.: Наука, 1989. - 465 с.

4. Воробьев, Г. И. Лесная энциклопедия / Г. И. Воробьев, Н. А. Ану-чин, В. Г. Атрохин М.: Наука, 1986. - 350с.

5. Орлов, Б. Н. Ядовитые животные и растения СССР: Справочное пособие для студентов вузов по спец. "Биология" / Б.Н. Орлов, Д.Б. Гелашвили, А.К. Ибрагимов. М.: Высш. шк., 1990.

6. Минаева, В. Г. Лекарственные растения Сибири / В.Г. Минаева. -Новосибирск: Наука , 1970. 270 с.

7. Орехов, А. П. Химия алкалоидов / А.П. Орехов. М.: Химия , 1975.- 672 с.

8. Журинов, М. Ж. Химия эфедриновых алкалоидов / М.Ж. Журинов.- Алма-Ата: Наука, 1990. 140 с.

9. Рубцов, М. В. Синтетические фармацевтические препараты / М. В. Рубцов, А. Г. Байчиков. М.: Медицина , 1971. - 320 с.

10. Абдувахабов, А. А. Алкалоиды и их производные как инструмент для изучения холиэнергетической системы / А. А Абдувахабов. — М.: Ме-децина, 1976.- 209 с.

11. Грандберг, И. И. Органическая химия / И. И. Грандберг. -М.: Высш. Шк., 1987.- 480 с.

12. Бузук, Г. Б. Метаболизм алкалоидов: регуляция на молекулярном уровне, пространственная организация / Г. Б. Бузук, М. Я. Ловкова // Прикладная биохимия и микробиология. 1995. - Т.31. С. 467-479

13. Бутенко, Р. Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений / Р. Г. Бутенко. М.: Наука, 1964. - 272 с.

14. Бутенко, Р. Г. Культура тканей и клеток растений / Р. Г. Бутенко. М.: Знание, 1971.-46 с.

15. Бутенко, Р.Г. Культура изолированных клеток и тканей в решении задач физиологии растений / Р.Г. Бутенко // Новые направления в физиологии растений. М.: Наука, 1985.- С. 270.

16. Бутенко Р.Г. Клеточные технологии для получения экономически важных веществ растительного происхождения / Р.Г. Бутенко // Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука, 1986. - С. 3 -28.

17. Болвелл, Г. П. Биотехнология растений: культура клеток / Г. П. Болвелл, К. Р. Вуд., Р. А. Гонзалес.- М.: Агропромиздат, 1989. 280 с.

18. Бродепиус, П. Иммобилизованные растительные клетки: методы получения и способность к биосинтезу / П. Броделиус // Иммобилизованные клетки и ферменты. М.: Мир, 1988.- С. 156-176.

19. Воллосович, А. Г. Культура ткани раувольфии змеиной как продуцент алкалоидов / А. Г. Воллосович, Р. Г. Бутенко // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1981.- С.235-257.

20. Высоцкая, Е. Ф. К вопросу о природе фактора кондиционирования при изолированной культуре растительных клеток / Е. Ф. Высоцкая, К. 3. Гамбург // Физиология растений. -1975. Т.22. - №.1. - С.63-69.

21. Глеба, Ю. Ю. Клеточная инженерия растений / Ю. Ю.Глеба, К.М.Сытник. Киев: Наукова думка, 1984.- 160с.

22. Глеба, Ю.Ю. Биотехнология растений / Ю. Ю. Глеба // Тез.докл. VII Международной конференции «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда». —М.: Наука, 1997. С. 6-7.

23. Бутенко, Р. Г. Экспериментальный морфогенез в культуре клеток растений. / Р. Г. Бутенко. М.: Наука, 1975.-87 с.

24. Бич, Г. Биотехнология. Принципы и применение / Г. Бич, Д. Бесг, К Брай-ерли. Пер. с англ. Под ред. И. Хиггинса- М.: Мир, 1988. 480 с.

25. Воллосович, А. Г. Культура ткани раувольфии змеиной как продуцент алкалоидов / А. Г. Воллосович, Р. Г. Бутенко // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1981. - С. 235-257.у

26. Высоцкая, Е.Ф. К вопросу о природе фактора кондиционирования при изолированной культуре растительных клеток / Е.Ф. Высоцкая, К. З.Гамбург // Физиология растений. 1975. - Т.22. - С. 63-69.

27. Константинова, Н. А. Исследование ростовых и биосинтетических способностей длительнопассируемой суспензионной культуры женьшеня / Н. А. Константинова, Г. В. Зайцева, В. С. Фаустов, //Биотехнология М.: Наука 1989. -№5. -С. 571-575.

28. Кунах, В. А. Геномная изменчивость соматических клеток растений, каллу сообразован ие in vitro / В.А. Кунах // Биоцолимеры и клетка М.: Наука 1997. -Т. 13.- №5. С.362-371

29. Лукнер, М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных. / М. Лукнер. М.: Мир. 1995. - 548 с.

30. Масек, Т. Иммобилизованные растительные клетки некоторые аспекты их непрерывного культивирования / Т. Масек, Т. Ванек, И.Бениш // Труды 16-й конф». - М.: Наука, 1984. - № 2.- С. 313-316.

31. Машковский, М. Д. Лекарственные средства. / М. Д. Машковский. -М.: Медицина, 1986.-Т.2.-576 с.

32. Ментел, С.Т.Факгоры культивирования, влияющие на накопление вторичных метаболитов в культуре клеток и тканей растений / С. Т. Ментел,

33. Т. Смит // Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987.-С. 154-198.

34. Муромцев, Г. С. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений. / Г. С. Муромцев, Д. И.Чекаников, О. Н. Кулаева. М.: Агропромиздат, 1987. - С. 316-322.

35. Мясоедов, Н. А. Выращивание биомассы ткани женьшеня с применением поддерживающего субстрата /НА. Мясоедов, Р. Г. Бутенко, JI. Н Слешш // Растительные ресурсы. 1986. - Т.З.- С. 314-344.

36. Моррис, П. Образование продуктов вторичного метаболизма в суспензионных культурах клеток. / П. Моррис М.: Агропрмиздат, 1987.-С. 154-203.

37. Носов, А.М. Регуляция синтеза вторичных соединений в культуре клеток растений / А. М. Носов // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С. 5-20.

38. Пейве, Я.В. Биологическая роль микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и медицине. / Я.В. Пейве. М.: Наука, 1974.-438 с.

39. Носов, А. М.Физиологическая регуляция синтеза стероидов культурой клеток диоскореи дельтовидной / А. М. Носов, В. Н. Пауков, Р. Г. Бутенко // Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука, 1986. - С. 76 -79.

40. Носов, А.М. Функции вторичных метаболитов растений in vivo и in vitro / А. М. Носов // Физиология растений. 1994. - Т.41. -№ 6. - С. 876 - 878.

41. Попов, Ю. Г. Вопросы производства лекарственных средств растительного происхождения / Ю. Г. Попов, М. А. Саркисова // ВНИИ систем, упр., экон. исслед. и НТИ. М.: Наука, 1989.- С. 1-27.

42. Самыгин, Г. А. Сравнение разных методов для оценки жизнеспособности клеток суспензионных и каллусных кулыур / Г.А.Самыгин, Л.А.Волкова // Физиология растений. 1983. -Т.32. - № 4.- С. 813-815.

43. Сассон, А. Биотехнология и повышение продуктивности растений / А. Сассон v //Биотехнология свершения и надежды. -М.: Мир, 1987. - С. 150-164.

44. Соколов, С. Л. Справочник по лекарственным растениям/ С. Л. Соколов, И. П. Замотаев. М.: Наука, 1990. -189 с.

45. Рощина, В. Д. Выделительная функция высших растений. / В. Д. Рощина,

46. B. В. Рощина.-М.: Наука. 1989. 214с.

47. Albersheim, P. Oligosaccharins: naturally occurring carbohydrates with biological regionaly function / P. Albersheim, A. G. Darvill, M. Neil // Structure and functeon of plant genomes. N.Y.: Plenum press, 1983. P.293-312.

48. Albersheim, P. Oligosaccharins that regulate growth, developments and defense responses in plant // Glycobiology. -1992. Vol 2.- № 3 P.181-198.

49. Archambault, J. Production of indol alkaloids by surface immobilized

50. C.roseus cells / J. Archambault, B. Volesky, W. Kurtz // Biochemical engineering research unit. Monreal. 1990. -Vol.35. - P.660-667.

51. Amann, M. (S)-tethrahydroprotoberberine oxidase the final enzyme in pro-toberberine biosynthesis / M. Amann, N. Nakagura, M. Zenk // Tetrahedron Lett. -1984. Vol.25. - № 9. - P. 953-954.

52. Bailey, С. M. Catharanthus roseus L. Don. A model for the biosyntheth-sis of indol alkaloids by cell suspensions / С. M. Bailey, H. Nicholson, A. Stafford // Appl.YBiochem. Biotechnol.- 1986. -Vol 12. -№ 3 P. 215-227.

53. Beecher, C. The incorporation of berberine into jattorthizine / C. Beecher W. J. Kelleher // Tetrahedron Lett. -1983. -Vol.24. № 5. P. 469- 472.

54. Beck, C. Cell culture bioreactors/ C. Beck, P. Stifl // Chem. Eng, -1987.-T.21. P. 121-129.

55. Bender, L. On the photosynthetic system and assimilate methabolism of Daucus and Arachis cell cultures / L. Bender, B. Pauler, К. H. Neumann // Primary and secondary methabolism of plant cell cultures. Bets.: Springer, 1985. - P. 2542.

56. Biswas, G. Callus formation and plant regeneration from protoplasts derived from suspension culture of rise / G. Biswas, F. Zapata // Plant breed. 1990. - T.2. -P. 95-100.

57. Breuling, M. Cultivation of cell cultures of Berberis wilsonae in 20-1 airlift bioreactors / M. Breuling, A. W. Alfermann, E. Reinhard // Plant Cell Reports. 1985. - Vol.4. - P. 220-223.

58. Brodelius, P. Entrapment of plant cells in different matrices / P. Brodelius, K. Nilson // FEBS Left. 1985. - T.2.- P.312-316.

59. Brodelius, P. Increasing secondary metabolic production in plant cell culture by redirecting transport / P. Brodelius, H. Pedersen // Trends in Biotechnology. -1993.-VoL.ll. №1.- P. 30-36.

60. Cabral, Q. M. Comparison of immobilisation metods for plant cells and protoplasts / Q. M. Cabral, P. Fevereiro // Current Sciene. 1985, T.7. - P. 335336.

61. Cadra, M. S.Plant cells, tissue and organ culture: potential sourses for plant secondary metabolites / M. S. Cadra, M. P. Heble // Proc. DAE Symp. Never Appr. Biol. Appl.- 1985.-P. 183-191.

62. Chasan, R. Phytochemical Forecasting / R. Chasan // Plant Cell. -1994.- Vol.6 -.№1. P. 3-9.

63. Cordell, G. A. Introduction to Alcaloids. / G. A. Corde. NewYork. 1981. -P. 118.

64. Cosgrove, C. Biophlsical control of plant cell growth / C. Cosgrove // Ann. Rev. Plant Phisiol. -1985 .-№37.-P. 377- 405.

65. Dalton, C.C. Produrt formation and plant cell specialization: A case of pho-tosynthetic development in plant cell cultures / С. C. Dalton, E. Peel // ProgrJndust. Microbiol. 1983. -Vol.17. - P. 109-166.

66. Drapeau, D. Ajmalicln, serpentin and catharanthine accumulation in Catharanthus roseus bioreactor cultures / D. Drapeau, W. Harvey // Planta med.-1987. №4. -P. 154-201.

67. Fuller, K.V. Chemicals from plant cell cultures some biochemical and physiological pointers / K.V. Fuller // Chemistry and industry. - Oxford. 1984. Vol.23.-P.825-833.

68. Fujiwara, H. Expression of (S)-scoulerine- 9-O-methyltransferase in Coptis japonica plants / H. Fujiwara, N. Takeshita, Y. Terano // Phytochem. -1993.-Vol.34.-P. 949-954.

69. Furuya, T. Isolation of berberine from callus tissue of Coptis japonica / T. Furuya, K. Syono, A. Ikuta//Phitochem.-1972.-Vol.-P.175.

70. Gray, D. Rapid grouwth in plant cell culture // Trend blotechnol. 1988.-T.10. -P.233-234.

71. Gugler, K. Elisitor-induced tyrosine decarboxylase in berberine-synthesizing suspension cultures of Thalictrum rugosum / K. Gugler, C. Funk, P. Brodelius // Eur. J. Biochem. -1988. -Vol.170. P.661-666.

72. Gulik, W. M. Growth of a Catharanthus roseus cell suspension culture in a modified chemostat under glucoselimiting conditions / W. M. Gulik, J. J. Meijer, H. J. Hoopen // Appl. Microbiol, and biotechnol. 1989. - Vol.30. -P. 270-275.

73. Goodchild, J. Influence of ammonium and extra cellular pH on the amino and organic acid contents of suspension culture cell of Aser pseudoplatanus / J. Goodchild, C. Givan //Phisiol. Plant. 1990. - №1. -P.29-37.

74. Нага, M. Induction of a specific methyltransferase activity regulating by cytokinine in Thalictrum minus cell cultures/ M. Hara, S. Tanaka, M. Tabata // Phytochem. -1994. -Vol.36.-№.2. P.327-332.

75. Hara, Y. Enhancement of berberine production in suspension cultures of Coptis japonica by gibberellic acid treatment / Y. Hara, T. Yoshioko, T. Morimoto // PlantPhysiol. 1988. - Vol.133. - P. 12-15.

76. Kelleher, W.J. Enzymatic formation of protoberberine alkaloids/ W. J. Kelleher, A. Rother, E. Wellman // Planta Med. 1980. - Vol.40. -P. 127-136.

77. Ketel, D. Inorganic nutriention of callus tissues of tagetes species: the effects on morphogenesis and accumulation of thiophenes and non-polar secondary methabolithes / D. Ketel // J. Plant physiol. 1986. - Vol.125. - № 1-2. - P.69-77.

78. Matsubara, К. High density culture of Coptis japonica cells increases berberine production/ K. Matsubara, S. Kitani, T. Yoshioka// J. Chem. Tech. Bio-technol. -1989. -Vol.46.- P.61-68.

79. Misawa, M. Production of useful metabolites by plant tissue culture/ M. Misawa//BiomassConvers. Technol.PrinsiplesandPract- 1887. P.193-199.

80. Morimoto, T. Berberine production by cultured Coptis japonica cells in a one-stage culture usingmedium with a high cooper concentration / T. Morimoto, Y. Нага, Y. Kato // Agric. Biol. Chem. 1988. -Vol.2 - №7. - P. 1830-1836.

81. Morris, P. Regulation of product synthesis in cell culture of Catharanthus roseus.Ci'mparison of production media / P. Morris // Planta med. 1986. - №2. -P.121-126

82. Muller, M. The norcoclaurine pathway in operate in berberine biosynthesis in Coptis japonica / M. J. Muller, M. H. Zenk // Planta Med. 1992. -Vol.58. -№6.-P. 524-527.

83. Nakagawa, K. Release and crystallization of berberine liquid medium of Thalictrum minus cell suspension cultures / K. Nakagawa, A. Konagai, H. Fukui // Plant Cell Reports. -1984. Vol.3. - P. 254-257.

84. Гутман, Г.С. Новый способ получения культуры тканей высших растений / Г. С. Гутман, Г. А. Ширяева // Растительные ресурсы. -1980.- № 4.-С. 601-606.

85. Калинин, Ф.Л. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. / Ф.Л.Калинин, В.В. Сарнацкая, В.Е.Полшцук Киев: Наукова думка, 1980. -487 с.

86. Бутенко, Р.Г. Выращивание клеток растений в суспензионной культуре / Р.Г. Бутенко // Известия АН СССР, Серия биологическая. 1977.- №5-С. 697-710.

87. Диксон, Р. А. Изолирование и поддержание каллусных и суспензионных культур клеток / Р. А. Диксон // Биотехнология растений: культура клеток М.: Аг-ропромиздат, 1989,-С. 8-31.

88. Бутенко, Р. Г. Рост и дифференциация в культуре клеток растений / Р. Г. Бутенко // Рост растений и природные регуляторы. — М.: Наука, 1977.-С. 697-710.

89. Момот, Т. С. Технология изолированных культур для микроразмножения лесных древесных растений / Т. С. Момот // Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда : тез. докл. 7-ой междунар. конф. М.: Наущц 1997. - С. 441-442

90. Бутенко, Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе. / Р. Г. Бутенко. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. - 160 с.

91. Агафонов, Н. В. Декоративное садоводство / Н. В. Агафонов. -М.: Колос, 2000.-320 с.

92. Рязанова, Т. В. Химия древесины / Т. В. Рязанова, Н. А. Чупро-ва, Е. В. Исаева. Красноярск: КГТА, 1996. - 358 с.

93. Гринкевич, Л. Н. Химический анализ лекарственных растений / Н. И. Гринкевич, Л. Н. Сафронич. М.: Высш. шк., 1983. - 175 с.

94. Лазуревский Г.В. Практические работы по химии природных соединений. / Г.В. Лазуревский, И.В. Тереньтьева, А.А. Шамшурин. М.: Высш. Шк., 1966.-335 с.

95. Адихотдаев, К. Б. Определение флавоноидов в растительном сырье / К. Б. Адихотдаев, А. И. Баньковский, В. И. Глызин // Фармация. — 1977. -№3.- С. 3-27.

96. Мальчуковский, Л. Б. Определение тритерпеновых сапонинов в порошке и таблетках "сапарал " / Л. Б. Мальчуковский, Н. И. Либизов // Фармация. 1971. - № 2. - С. 68-71.

97. Девяткина, В. А. Методы определения витаминов/

98. B. А. Девяткина. -М.: Пищепромиздат, 1954. — 135 с.

99. Нижний, С. А. Скрининг физиологически активных веществ /

100. C. А. Нижний, Н. В. Дмитриева. -М.: Медицина, 1985. 158 с.

101. Левин, Э. Д. Современные физиолого-химические методы исследования : метод, указ. к проведению лаб. работ для студентов спец. 2603 всех форм обучения. / Э. Д. Левин, П. В. Миронов. Красноярск: СТИ, 1988.-28 с.

102. Кейтс, М. Техника липидологии / М. Кейтс. М.: Наука, 1975. - 322 с.

103. Оболенская, Л. В. Практические работы по химии древесины и целлюлозы / Л. В. Оболенская. М.: Наука, 1965. - 111 с.

104. Ушанова, В.М. Основы научных исследований / В.М. Ушанова, О. И. Лебедева. Красноярск, 2003.- кн.2 - 98 с.

105. Кретович, В. Л. Биохимия растений / В. Л. Кретович. М.: Высш. шк., 1986.-С. 356-357.

106. Лазуревский, В. Г. Практические работы по химии природных соединений. / В. Г. Лазуревский, И. В. Терентьева, А. А. Шамшурин. — М.: Высш. шк., 1966. 335 с.

107. Гороховская, В. И. Практикум по электрохимическим методам анализа. / В. И. Гороховская, В. М. Гороховский. М.: Мир, 1987. - 191 с.

108. Гоберман, В.А. Технология научных исследований — методы, модели, оценки: Учеб. пособие. 2-е изд. стереотипное / В.А. Гоберман, Л.А. Гоберман.- М.: МГУЛ, 2002. 390 с.

109. Gamborg, О. L. Plant cell, tissue, and organ culture: fundamental methods / O. L. Gamborg, G. C. Phillips. Berlin: Springer-Verlag, 1995. -557 p.

110. Болвелл, Г. П. Биотехнология растений: культура клеток. / Г. П. Болвелл. М.: Агропромиздат, 1989. - 280 с.

111. Бутенко, Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе / Р. Г. Бутенко. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. — 160 с.

112. Гоберман, В. А. Технология научных исследований методы, модели, оценки : учеб. пособие / В. А. Гоберман, JI. А. Гоберман. - М.: МГУЛ, 2002. - 390 с.

113. Калашникова, Е. А. Получение посадочного материала древесных, цветочных и травянистых растений с использованием методов клеточной и генной инженерии. / Е. А. Калашникова.- М.: МГУЛ, 2001.- 73 с.

114. Сассон, А. Биотехнология и повышение продуктивности растений / А. Сассон. -М.: Мир, 1987. С. 150-164.

115. Муромцев, Г. С. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений / Г. С. Муромцев, Д. И. Чекаников, К. 3. Гамбург М.: Агропром-издаг, 1987.-С. 316-322.