Консервирование тромбоцитов замораживанием по экспоненциальной программе при - 80[О]С (экспериментальное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат медицинских наук Кузнецов, Константин Васильевич

• Кузнецов, Константин Васильевич
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Кузнецов, Константин Васильевич

Список использованных сокращений

ВВЕДЕНИЕ . .4

ГЛАВА I. Обзор литературы. Современное состояние проблемы консервирования тромбоцитов при низких температурах.9

ГЛАВА II. Материалы и методы исследований.21

ГЛАВА III. Изучение стерильности внутренней среды отечественных полимерных контейнеров при замораживании до -80°С.28

ГЛАВА IV. Разработка экспоненциальной программы замораживания тромбоцитов в полимерных контейнерах при -80° С с криоконсервантами, на основе ГМБТОЭМ и ДМАЦ.35

ГЛАВА V. Биологическое и трансфузиологическое испытания криоконсерванта на основе ГМБТОЭМ для тромбоцитов. 57

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Консервирование тромбоцитов замораживанием по экспоненциальной программе при - 80[О]С (экспериментальное исследование)»

Актуальность проблемы. Широкое применение в лечебной практике вы-сокодозной полихимиотерапии при гематологических и онкологических заболеваниях и аппаратов искусственного кровообращения при кардиохирургиче-ских операциях, ведущих к существенному снижению уровня тромбоцитов в крови пациентов, вызвало большую и все возрастающую потребность в использовании концентратов кровяных пластинок [1, 3, 31, 78, 179, 188].

Высокая потребность в тромбоцитных концентратах диктует создание их достаточных запасов, которые необходимы в экстренных случаях для остановки кровотечения у больных с глубокой тромбоцитопенией, особенно остро такой запас требуется, если указанные пациенты имеют редкую группу крови.

При положительной температуре (+22° С) в зависимости от вида концентрата тромбоцитов, они сохраняются только от 3 - 5 [5, 10, 181, 184] до 7 дней [ 151, 133] и в специальных растворах - до 15 дней [ 118, 121]. Поэтому разработаны методы долгосрочного хранения данных клеток при —196°С с применением криопротекторов диметилацетамида - ДМАЦ [ 5, 6], производных глицерина [ 44, 47], полиолов [ 66, 67, 68], диметилсульфоксида - ДМСО [ 8, 122, 202], вещества ГМБТОЭМ [ 83, 84, 85, 90, 91].

Использование ультранизких температур для консервирования клеток крови оказалось весьма дорогостоящим методом [ 49]. По этой причине этот способ замораживания тромбоцитов с целью их длительной консервации оказался доступным лишь для отдельных крупных медицинских центров и в широкой практике службы крови практические не применяется.

Возникла необходимость в разработке экономичного, доступного метода замораживания тромбоцитов в электроморозильниках до -80° С для их долгосрочного хранения. Весьма важно, чтобы криоконсерванты при этом были бы мало - токсичными и не нуждались в отмывании, т. к. при данной процедуре теряется значительное количество клеток.

Необходимо создать программу замораживания наиболее щадящую мор-фофункциональные свойства тромбоцитов.

Цель исследования. Целью исследования явилось создание метода консервирования тромбоцитов замораживанием по экспоненциальной программе до -80° С с криоконсервантом, не требующим отмывания после оттаивания.

Задачи исследования. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1.Изучить возможность применения отечественных полимерных контейнеров для замораживания тромбоцитов в электроморозильниках до -80°С.

2. Разработать экспоненциальную программу замораживания тромбоцитов с криоконсервантом на основе вещества ГМБТОЭМ, которое не требует отмывания после оттаивания.

3. Исследовать морфологические и функциональные свойства донорских тромбоцитов, замороженных с усовершенствованным криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ в полимерных контейнерах до -80° С по экспоненциальной программе, при разных сроках хранения.

4. Провести биологические испытания усовершенствованного криокон-серванта на основе ГМБТОЭМ и определить переносимость концентрата тромбоцитов, консервированных по предложенному методу, при переливании экспериментальным животным.

Научная новизна. Впервые разработана экспоненциальная программа замораживания тромбоцитных концентратов с усовершенствованным криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ (гексаметиленбистетраоксиэтилмочевины), который дает высокий выход функционально полноценных тромбоцитов после криоконсервирования при -80° С и не требуют отмывания после оттаивания.

Впервые установлено, что тромбоциты, замороженные по экспоненциальной программе с усовершенствованным криоконсервантом с ГМБТОЭМ, сохраняют свои морфологические и функциональные свойства в течение года (срок наблюдения).

Изучена возможность использования отечественных полимерных одноразового применения контейнеров «Компопласт 300» и «Гемакон 500/300» для криоконсервирования тромбоцитов в электроморозильниках при низкой температуре и впервые установлена сохранность стерильности внутренней полости данных контейнеров при замораживании до - 80°С.

Впервые показана хорошая переносимость трансфузий тромбоцитных концентратов, консервированных в пластикатных отечественных контейнерах по экспоненциальным программам охлаждения и без отмывания использованного криоконсерванта, экспериментальными животными (собаками).

Практическая значимость и внедрение в практику.

Определена возможность и надежность применения одноразовых полимерных контейнеров «Компопласт 300» и «Гемакон 500/300», выпускаемых ОАО «Синтез» (г. Курган), для криоконсервирования тромбоцитов до -80° С.

Усовершенствован криозащитный раствор на основе ГМБТОЭМ для тромбоцитов. Установлено, что для их консервирования замораживанием достаточно содержания в нем ГМБТОЭМ, лимонной кислоты и воды для инъекций.

Разработана эффективная экспоненциальная программа консервирования тромбоцитных концентратов с криоконсервантом, не требующим отмывания после оттаивания клеточной суспензии.

Установлены в эксперименте на животных отсутствие отрицательного влияния на организм усовершенствованного криоконсерванта с ГМБТОЭМ. Показана полная переносимость переливаемых аутологичных тромбоцитных концентратов, консервированных с ним по разработанной программе.

Показана высокая доступность и удобство предложенного метода замораживания тромбоцитов. Разработанный метод криоконсервирования при -80°С внедрен в экспериментальную практику лаборатории консервирования крови и тканей ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови Росздрава».

Основные положения, выносимые на защиту.

Полимерные контейнеры «Компопласт 300» и «Гемакон 500/300» могут быть использованы для замораживания тромбоцитов при -80° С.

Криоконсервирование тромбоцитов может производиться по экспоненциальной программе с применением электроморозильников на -30°С и -80°С.

Экспоненциальная программа замораживания тромбоцитов, выполняемая в электроморозильниках на -30°С и -80°С является эффективной, доступной и удобной.

Тромбоциты, замороженные по экспоненциальной программе с криокон-сервантом на основе ГМБТОЭМ, не требующим отмывания после оттаивания, сохраняют на высоком уровне свои морфофункциональные свойства в течение 1 года (время наблюдения).

Разработанный метод криоконсервирования тромбоцитов может быть рекомендован для клинической апробации.

Апробация работы.

Результаты работы и основные положения диссертации обсуждены на научных сессиях Пермской медицинской академии (2001); Кировского филиала Академии естествознания РФ (2001); Российской научно-практической конференции, посвященной 70-летию РосНИИГиТ (2002); научной конференции «Актуальные вопросы современной медицины» (Киров, 2003); заседаниях Ученого совета Кировского НИИГиПК (2001, 2002, 2003, 2006).

Основные результаты диссертации опубликованы в 10 печатных работах.

Объем и структура диссертации.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Кузнецов, Константин Васильевич

выводы

1. Создан доступный и экономичный метод консервирования тромбоцитов замораживанием в полимерных контейнерах отечественного производства по экспоненциальной программе с модифицированным безотмывочным криоконсервантом и последовательным применением электроморозильников на

- 30°С и -80°С.

2. Отечественные полимерные контейнеры «Гемакон 500/300» и «Компо-пласт 300», не имеющие микробной и грибковой контаминации внутренней полости, после замораживания до -80°С сохраняют ее стерильность.

3. Модифицированный криоконсервант для замораживания тромбоцитов, содержащий гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину (ГМБТОЭМ) безводную х.ч. 10,0 г, лимонную кислоту безводную х.ч. - 1,1 г, воду для инъекций до 100 мл, безвреден для кровяных пластинок и не оказывает отрицательного воздействия на организм подопытных животных.

4. Предложенный метод криоконсервирования тромбоцитов по экспоненциальной программе с модифицированным криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ обеспечивает сохранность при -80°С в течении 3 недель 88,4 ± 7,6%, шести месяцев - 89,0 ± 1,2%, года - 82,4 ± 5,3% кровяных пластинок с высокой функциональной активностью.

5. Трансфузии размороженных тромбоцитных концентратов, криоконсервированных при -80°С по созданному методу, крупные экспериментальные животные (собаки) переносят без реакций и осложнений, что позволяет рекомендовать данный способ консервации кровяных пластинок и их применения для клинической апробации.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Высокая и все возрастающая потребность при лечении гематологических [1,2, 78, 80, 81, 86], онкологических [96] и кардиохирургических [61] больных в тромбоцитных концентратах и необходимость их иметь для применения в плановых и, особенно, в ургентных условиях во время кровотечения при глубокой тромбоцитопении послужили веским основанием для разработки методов сохранения и, в первую очередь, длительного сохранения кровяных пластинок в функционально полноценном состоянии, что возможно только при отрицательных температурах [142].

Следует отметить, что применение криоконсервированных аутологичных тромбоцитов позволяет их хранить и применять через продолжительные сроки у онкогематологических больных. Такие кровяные пластинки не вызывают у них аллосенсибилизации, рефрактерности, дают надежное приживление, так как идеально совпадают по антигенному составу с клетками организма реципиента [79, 88, 199, 204].

Первоначально положительные результаты криоконсервирования тромбоцитов были получены при применении ультранизкой температуры (-196°С). Изучали криопротекторы проникающие, непроникающие в клетку и смешанного действия.

Первыми были применены эндоцеллюлярные протекторы: ДМАЦ [3, 6, 132], диметилсульфоксид - ДМСО [8, 102, 115, 122, 198]. На основе ДМАЦ создан криоконсервант «Тромбокриодмац» [5, 6]. Препарат разрешен МЗ РФ для использования в ОДХК и клинической практике. Но да настоящего времени в Российской Федерации препарат не выпускается, т.к. отсутствует промышленное производство ДМАЦ. ДМСО же под названием «Димексид» разрешен в РФ Фармакологическим Государственным комитетом Минздрава только для наружного применения.

Из криопротекторов смешанного действия для замораживания тромбоцитов стали применять вещество ГМБТОЭМ с молекулярной массой - 378, обладающее выраженным криозащитным действием. ЛД50 нового протектора составляет 15,5 ± 0,6 г/кг массы мыши. Не требует отмывания от клеток после их размораживания (Сведенцов Е.П.и соавт., 1997). На основе ГМБТОЭМ был создан криоконсервант для замораживания тромбоцитов при -196°С, на который получен патент РФ №1561227 от 1993 г [89]. Криоограждающий раствор получил название «Кримолит». Он содержит: ГМБТОЭМ - 10,0 г; лимонную кислоту обезвоженную 1,1 г; ЭДТА Na2 - 0,1 и до 100 мл воды для инъекций. Стерилизуется автоклавированием. Его рН - 6,5 - 6,8. Были проведены клинические испытания ТК, криоконсервированных при - 196°С и размороженных без отмывания ГМБТОЭМ в 3 центрах. Получены выраженные положительные результаты.

В последние годы выявилась четкая тенденция перехода от ультранизких температур к низким - 80°С [26, 49, 108]. Это вызвано тем, что метод консервирования при - 196°С является высокозатратным. Для его использования требуется дорогостоящее криогенное оборудование, регулярные поставки специализированным транспортом и заправка хранилищ жидким азотом, квалифицированный персонал (включая инженера-электронщика), в некоторых условиях -приобретение аппарата для сжижения атмосферного азота. Поэтому в широкой практике службы крови данный метод не получил распространения, став достоянием лишь отдельных крупных медицинских центров.

Было установлено, что клетки крови, в частности, лейкоциты [49, 108] сохраняют свои морфофункциональные свойства на высоком уровне в течение года при -80°С. Такую температуру надежно обеспечивают современные электроморозильники, выпускаемые фирмами "Queue", "Revco" (USA); "Sanyo" (Japan) с 15 - часовой аварийной сохранностью низкой температуры. Подобные холодильные аппараты стал выпускать в РФ Омский завод электрорефрижераторного оборудования.

В.В. Захаров (1996) показал, что тромбоциты, замороженные при -80°С с 2,5% раствором ДМАЦ в конечной концентрации, по всем показателям функциональной активности превосходили таковые контрольных образцов, крио-консервированных с препаратом «Тромбокриодмац» при температуре - 196°С.

Целью исследования явилось создание метода консервирования тромбоцитов замораживанием в полимерных контейнерах по экспоненциальной программе до -80°С с криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ, не требующим отмывания после оттаивания.

Первоначально были выполнены исследования по оценке инфекционной безопасности внутренней полости полимерных отечественных контейнеров при замораживании в них различных жидких сред, так как предупреждение контаминации инфекционными агентами является одной из важнейших задач службы крови.

Исследования проведены со 110 полимерными контейнерами «Гемакон 500/300» и «Компопласт 300», выпускаемых ОАО «Синтез» (г. Курган) для заготовки и хранения крови и ее компонентов при положительной температуре. Такие полимерные контейнеры были применены для замораживания тромбоцитов при -80°С В.В. Захаровым (1996), так как до настоящего времени отсутствуют специальные пластикатные отечественные контейнеры для замораживания клеток крови. Инфекционная безопасность их внутренней полости при замораживании до -80°С не изучалась.

На первом этапе были исследованы 30 контейнеров «Компопласт 300» с изотоническим 0,9% раствором натрия хлорида по методике, изложенной в «Инструкции по контролю стерильности консервированной крови, ее компонентов, препаратов, консервированного костного мозга, кровезаменителей и консервирующих растворов», утвержденной МЗ РФ 29. 05. 1995. После посева смывного указанного раствора на тиогликолевую среду до замораживания и после замораживания (-80°С) - оттаивания и выдерживания в термостате 14 суток при температуре +35°С (одних) и +22°С (других, являющимися аллелями первых) роста микроорганизмов не обнаружено.

Аналогичные исследования проведены до и после замораживания (-80°С) с нативной донорской плазмой при использовании 35 контейнеров «Гемакон

300» и 45 контейнеров «Компопласт 300». При этом перед замораживанием плазмы в контейнерах «Гемакон 300» ее смешивали с криоконсервантом «Тромбокриодмац» 1:1, в таком же соотношении ее смешивали с криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ в контейнерах «Компопласт 300». Замораживали по экспоненциальной программе до -80°С и хранили в контейнерах «Гемакон 300» в течении 1-4 месяцев, а в контейнерах «Компопласт 300» 1-6 месяцев (срок наблюдения).

До замораживания и после оттаивания образцы плазмы направляли для посевов на тиогликолевую среду и, согласно методическим рекомендациям «Лабораторная диагностика микозов, вызванных плесневыми грибами» (МЗ СССР, 1986), жидкую среду Сабуро с 2% глюкозой. После термостатирования в первой среде в течение 14 суток при +35°С и +22°С, а во второй - 10 суток при температуре +37°С и +28°С роста микроорганизмов и плесневых грибов не обнаружено. Это свидетельствует о том, что при замораживании указанных отечественных полимерных контейнеров не образуется даже микроскопических сквозных повреждений их стенок, и внутреннее содержимое их полости остается стерильным.

Следующим этапом экспериментальных исследований были модификация «Водного раствора для криоконсервирования тромбоцитов» (патент РФ №1561227) и разработка экспоненциальной программы замораживания тромбоцитов в полимерных контейнерах до -80°С, а также их хранение при указанной температуре длительные сроки.

Отличие примененного криоконсерванта от запатентованного заключается в том, что в нем отсутствует токсичный антикоагулянт - динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты. Его состав включает: гексаметиленби-стетраоксиэтилмочевину (ГМБТОЭМ) безводную х.ч. 10,0 г, лимонную кислоту безводную х.ч. - 1,1 г, воду для инъекций до 100 мл. После стерилизации ав-токлавированием при +120°С в течении 30 мин рН раствора была равна 6,67 ±0,07 (п = 23).

С целью замораживания тромбоцитов при -80°С криоконсервант на основе ГМБТОЭМ ранее не применялся. Для экспериментальных исследований он был изготовлен на станции переливания крови ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови Росздрава».

Для сравнения были проведены исследования по замораживанию тромбоцитов до -80°С с криоконсервантом «Тромбокриодмац». Его приготовили на Нижегородской областной станции переливания крови. Стерилизовали при +120°С в течении 30 минут, рН раствора составляла 4,5 - 5,5.

Для замораживания тромбоцитного концентрата (ТК) была разработана щадящая, доступная и экономичная экспоненциальная программа с использованием отечественных полимерных контейнеров одноразового применения и двух электроморозильников: на - 30°С и -80°С. Первым был электроморозильник, разработанный Институтом проблем криобиологии и криомедицины Национальной Академией Наук Украины и ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови Росздрава». Вторым холодильным аппаратом на - 80°С был либо «Queue» (USA), либо «Sanyo» (Japan).

Объектом исследования служил ТК, выделенный из 500 мл цельной донорской крови (гемоконсервант CDF) при тромбоцитаферезе с использованием строенных контейнеров «Гемакон 500/300/300» и центрифуги «Sorvall» (USA). При первой фазе центрифугирования с охлаждением в течение 6 минут применяли скорость вращения ротора 2500 об/мин (1700 g). Когда в верхнем слое разделенной крови получали обогащенную тромбоцитами плазму (ОТП), ее переводили с помощью плазмаэкстрактора в первый соединенный контейнер «Гемакон 300». Его центрифугировали с охлаждением 20 минут со скоростью 3500 (3300g), тромбоциты оседали на дно контейнера. Над ними оставляли 2540 мл плазмы, а остальной ее объем переводили в следующий контейнер «Гемакон 300». Аутологичные плазму и эритроциты (разбавленные 5:1 0,9% раствором NaCl) переливали донору. Из 500 мл крови получали единицу ТК, содержащую 0,55 х 1011 -0,71 х 1011 тромбоцитов в среднем объеме плазмы 64,6 ± 5,2 мл.

Перед замораживанием ТК смешивали 1:1 с модифицированным криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ и выдерживали при комнатной температуре 20 мин. При изучении влияния (п = 7) данного консерванта на тромбоциты не отмечено достоверного уменьшения числа тромбоцитов, адгезии к стеклу, агрегационной активности, индуцированной ристомицином; обнаружено умеренное уменьшение РГШ и агрегации с АДФ.

При замораживании по экспоненциальной программе подготовленную и выдержанную смесь ТК с криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ в полимерных контейнерах отечественного производства помещали в металлический холдер и погружали для замораживания в 4-х литровую ванну электроморозильника «Криостат», заполненную 96°С этиловым спиртом, охлажденным до -30°С. Контроль за температурой охлаждения осуществляли с помощью прибора ГСП - 04 и датчика ТСМ - 3-02, помещенного в аналогичный полимерный контейнер с имитатором (криоконсервант на основе ГМБТОЭМ, смешанный 1:1с бидистиллированной водой), находящийся в спиртовой ванне электроморозильника.

При изучении термограмм (п = 21) установлено изменение скорости охлаждения тромбоцитов в смеси с криоконсервантом ГМБТОЭМ в трех диапазонах температур: на первом этапе до 0°С со скоростью 2,7 ± 0,2°С/мин, затем от 0°С 28°С - 1,35 ± 0,08°С/мин, затем экспозицией при температуре - 28°С^--80°С по 3,2 ± 0,ГС/мин до температуры постоянного хранения - 80°С.

При температуре -28°С контейнеры переносили в электроморозильник на

- 80°С для дальнейшего замораживания и хранения.

По экспоненциальной программе с использованием двух электроморозильников замораживали ТК в аналогичных полимерных контейнерах с криоконсервантом «Тромбокриодмац» до - 80°С и хранили при данной температуре.

Размораживали ТК в 40 - литровой водяной ванне при +38°С в течение 45

- 60 сек, при больших объемах (до 180 мл) - 90 секунд, до температуры биообъекта +2°С- +4°С.

Влияние разработанной экспоненциальной программы замораживания в полимёрных контейнерах отечественного производства с криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ на тромбоциты при размораживании их в течении первых трех недель было определено в лабораторных экспериментах с 25 образцами ТК. Установлено, что сохранность тромбоцитов составила 88,4 ± 7,6%, их функциональная активность по РГШ равнялась 41,9 ± 9,3%; адгезия к стеклу — 22,3 ± 6,3%; агрегация с АДФ на 10 минуте - 23,0 ± 7,1%; агрегация с ристоми-цином 27,0 ± 5,2%. Следовательно, как и количество кровяных пластинок, так и их функция сохраняются на высоком уровне: РГШ и индуцированная агрегация в 76,6% и 83,5% от исходного состояния, а адгезия к стеклу существенно не изменяется.

Изучение количества тромбоцитов и их функций через 6 месяцев их хранения при -80°С (п = 24) выявило, что остались на прежнем уровне сохранность данных клеток - 89,0 ± 1,2% (р>0,05) ; РГШ - 46,6 ± 2,8%; индуцированная агрегация с АДФ - 24,3 ± 1,4% и с ристомицином - 30,4 ± 1,5%, но достоверно уменьшилась лишь адгезия к стеклу до 20,9 ± 0,8 (р<0,05).

Можно уверенно констатировать стабильную сохранность количества и основных функций тромбоцитов, криоконсервированных по экспоненциальной программе с ограждающим раствором на основе ГМБТОЭМ и хранившихся при - 80°С в течение 6 месяцев.

Результаты хранения в течение 1 года (срок наблюдения) ТК, криоконсервированных по экспоненциальной программе с криоконсервантом на основе ГМБТОЭМ, свидетельствуют о том, что их сохранность уменьшилась несущественно до 82,4 ± 5,3% (р>0,05), а функциональная активность осталась на том же уровне, какой была после 6 - месячного хранения тромбоцитов.

Для оценки полученных данных было необходимым провести сравнительный анализ результатов криоконсервирования по экспоненциальной программе и хранения при - 80°с с ограждающими растворами на основе ГМБТОЭМ и ДМАЦ. Это важно не только с научной, но и практической точки зрения, т.к. раствор «Тромбокриодмац» разрешен МЗ РФ для клинического применения.

Для сравнительного анализа вычислили процент сохранности тромбоцитов и их отдельных функций относительно исходных показателей клеток. При сравнении этих данных по хранению тромбоцитов в короткие сроки (3 - 3,5 недели), криоконсервированных с ограждающими растворами на основе ГМБТОЭМ и ДМАЦ, установили, что после экспоненциального замораживания получены статистически одинаковые результаты. Кроме агрегационной активности, индуцированной АДФ, достоверно лучший результат наблюдали у размороженных кровяных пластинок, криоконсервированных с протекторным раствором на основе ГМБТОЭМ (82,4 ± 2,1% против 72,1 ± 3,2% при р<0,05). Данные сравнительного анализа показали, что криоконсервант на основе ГМБТОЭМ по своим хладоограждающим свойствам не уступает криоконсерванту на основе ДМАЦ («Тромбокриодмац») при замораживании тромбоцитов в полимерных контейнерах до -80°С и хранения при той же температуре как короткие сроки, так и продолжительные - до 1 года.

Проведенные биологические испытания криоконсерванта с ГМБТОЭМ показали, что все три группы белых мышей (весом 20,0 г), которым однократно внутривенно вводили по 0,5 мл испытуемого раствора в токсической дозе 1,25 г/кг массы животного, через 5 суток после получения тест-дозы выжили. «Острая» токсичность у консерванта не обнаружена.

При испытании на «хроническую» токсичность 15 белым мышам с массой 20,0 г вводили тест-дозу 0,5 мл криоконсерванта в конечной концентрации, содержащей 5% раствор ГМБТОЭМ, внутрибрюшинно, ежедневно 10 дней. Аналогичный объём 0,9% раствора натрия хлорида вводили внутрибрюшинно 10 дней контрольной группе мышей. Все животные хорошо перенесли 10 -дневное введение обоих растворов: их поведение и внешний статус не отличались от обычных. После 10 дня мыши были подвергнуты эвтаназии ингаляционной передозировкой эфиром. При гистологическом исследовании внутренних органов и желез животных (сердце, лёгкие, печень, почки, селезенка, тонкий кишечник, надпочечники, поджелудочная железа, щитовидная железа, половые железы) деструктивных изменений не было выявлено. Проведенные испытания не обнаружили «хронической» токсичности криоконсерванта на основе ГМБТОЭМ.

При испытаниях на кроликах - неальбиносах обоего пола массой 2,0 — 3,5 кг тест-дозу криоконсерванта с ГМБТОЭМ в конечной 5% концентрации 6,6 мл/кг массы тела вводили ежедневно 10 дней в краевую вену ушной раковины 10 животным опытной группы. С аналогичной массой тела и в том же объеме 5 кроликам контрольной группы вводили 0,9% раствор натрия хлорида. Общее состояние всех 15 кроликов после 10-дневного введения растворов не изменилось. Исследования периферической крови в 1-й и 10-й дни испытания не выявили достоверных изменений показателей гемограмм у основной опытной и контрольной групп. Показатели ЭКГ у кроликов в 1 -й и 6-й дни после инфузии криоконсерванта с ГМБТОЭМ в конечной концентрации указывают на отсутствие отрицательного влияния на их сердечную деятельность.

Изучение массы тела кроликов выявило в опытной группе после,, 10-дневного введения криоконсерванта с ГМБТОЭМ несущественное снижение веса (с 2323 ± 105 г до 2303 ±189 при р> 0,05). Отсутствие существенного снижения массы кроликов опытной группы и негативного влияния на общее состояние свидетельствует о том, что испытуемый криоконсервант не оказывает токсического воздействия на организм животных при длительном введении.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Кузнецов, Константин Васильевич, 2006 год

1. Абдулкадыров К.М. Гемокомпонентная терапия при заболеваниях системы крови // Юганич. Медицина.-1994.- т.72, №2. -С. 10 13.

2. Абдулкадыров К.М./ Гематология. Новейший справочник.-2005.-С.Пб: Изд-во Совет.М; Изд-во ЭКСМО.- 928 с.

3. Аграненко В.А., Бахрамов С.М., Жеребцов JI.A. Компонентная гемотерапия. Ташкент, 1995. - 279 с.

4. Аграненко В.А., Лисовская И.Л., Компаниец A.M. Функциональная полноценность тромбоцитов в консервированной крови в 1-7 день хранения // Проблемы гематологии и переливания крови. 1981. - № 2. - С. 36-41.

5. Аграненко В.А., Тибилова Н.Н. Консервирующие растворы для крови и ее компонентов // Кровезаменители, консерванты крови и костного мозга. Справочник.- М.: Медицина, 1997.- С. 120-161.

6. Аграненко В.А., Файнштейн Ф.Э., Голубева В.Л. и др. Криоконсер-вированные тромбоциты и их клиническая эффективность // Гематология'- й трансфузиология. 1987. - № 5. - С. 22-24.

7. Азовская С.А., Волкова Р.И., Сокольцов В.Ф. Криоконсервирование тромбоцитов и их функциональная полноценность // Гематология и трансфузиология. 1995. - Т. 40, № 5. - С. 44-47.

8. Азовская С.А., Суханов Н.С., Жуковская Н.М. Сравнительное изучение криопротекторных свойств диметилацетамида и диметилсульфоксида при хранении тромбоцитов в условиях умеренно-низких температур// Гематология и трансфузиология. 1989. - № 12. - С. 18-21.

9. Актуальные проблемы криобиологии /Под ред. Н.С. Пушкаря. Киев: Наукова думка, 1981. - 605 с.

10. Балезина Л.В. Выделение и консервирование концентратов тромбоцитов из отдельных доз донорской крови : Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1991.-28 с.

11. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Замораживание и крио-протекция// М.: "Высшая школа".- 1987,- 80 с.

12. Белоус A.M., Грищенко В.И. Криобиология. Киев: Наукова думка, 1994.-431 с.

13. Биохимия/ Под ред. Е.С. Северина. М. ГЭОТАР-МЕД.- 2003. - С. 36-296

14. Брюсов П.Г., Данильченко В.В. Актуальные вопросы трансфузио-логического обеспечения в медицине катастроф // Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии : Тез. докл. Рос. конф. СПб., 1995. - С. 322.

15. Быков В.Л. Цитология и общая гистология (функциональная морфология клеток и тканей человека). СПб.: СОТИС, 1999. - 520 с.

16. Вода и водные растворы при температурах ниже 0°С / Пер. с англ.; Под ред. Ф. Франкса. Киев: Наукова Думка, 1985. - 387 с.

17. Волков Н.Н., Горшкова Н.Н., Крючков М.И., Петренко Л.И. Реальные потребности в компонентах крови в клинической практике // Терапевт, арх. 1989.-Т. 61, №7.-С. 121-123.

18. Воробьев А.И. Новый этап в развитии службы крови страны // Проблемы гематологии и перел. крови. 1995. - Т. 1, № 1. - С. 3-6.

19. Гальченко С. Е. Особенности криоконсервирования биологических объектов с применением высоких скоростей охлаждения: Автореф. Дис. к.б.н.- Харьков, 1990.-16 с.

20. ГланцС. Медико-биологическая статистика.-М:Практика,1998-459с.

21. Голосова Т.В., Гутерман Р.Л., Терпсихорова Е.В. и др. Инструкция по контролю стерильности консервированной крови, ее компонентов, препаратов консервированного костного мозга, кровезаменителей и консервирующих растворов от 29.05.1995.- Москва.- 34 с.

22. Гордиенко Е.А., Осецкий А.И., Розанов Л.Ф. Научное обоснование способов низкотемпературного консервирования клеточных суспензий// Проблемы криобиологии,- 1997.- №1,- С.67 -71.

23. Гордиенко Е.А., Пушкарь Н.С. Физические основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий Киев: Наукова думка, 1994.-144С.

24. Государственная фармакопея СССР. Десятое издание.-М.'.Медицина, 1968.- 1079 с.

25. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа, лекарственное растительное сырье / 11-е изд.-М. Медицина, 1990.-С.182-185

26. Деветьярова О.Н. Функциональная активность лейкоцитов, перенесших криоанабиоз при -20°С. Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Киров, 2005.- 20 с.

27. Дегтярева И.Н. Разработка эффективного метода получения лечеб- -ных доз тромбоцитов от минимального количества доноров, обеспечивающих проведение курса гемокомпонентной терапии : Автореф. дис. канд. мед. наук. -Л., 1986.-20 с.

28. Джумбаева Б.Т., Васильев С.А., Городецкий В.М. Способ хранения тромбоцитов. А.с. №1526697 от 7. 12. 1989 г.

29. Джумбаева Б.Т., Городецкий В.М., Васильев Е.А. Клиническая эффективность трансфузий краткосрочно хранившихся тромбоцитов// Тер. архив. 1988.-№5-С. 70-73.

30. Дуткевич И.Г. Варианты аутогемотрансфузий в хирургической практике : Автореф. дис. д-ра мед. наук. Л., 1987. - 34 с.

31. Жибурт Е.Б. Трансфузиология. СПб.: Питер, 2002. -736 с.

32. Заготовка в полимерных контейнерах концентрата тромбоцитов и концентрата лейкоцитов из лейкотромбоцитарного слоя консервированной крови : Метод, рекомендации. М., 1984. - 10 с.

33. Заготовка и хранение концентрата тромбоцитов из консервированной крови : Метод, указания. М.,1982. - 11 с.

34. Захаров В.В. Консервирование тромбоцитов замораживанием при — 80°С под защитой диметилацетамида: Автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб, 1996.

35. Инструкция по заготовке тромбоцитов от одного донора методом прерывистого тромбоцитафереза с применением полимерных контейнеров. -М., 1995. 15 с.

36. Инструкция по клиническому изучению концентратов тромбоцитов, замороженных с раствором тромбокриодмац. -М., 1979.- 9 с.

37. Инструкция по контролю стерильности консервированной крови, ее компонентов, препаратов, консервированного костного мозга, кровезамените- -лей и консервирующих растворов. М., 1995.- 30 с.

38. Инструкция по криоконсервированию клеток крови МЗ РФ № 18,-от. 26.02.1995

39. Инструкция по применению полимерных контейнеров «Гемакон» и «Компопласт» / В.П. Кошивая, Е.М. Макарова, Н.М. Шишов и др.-М.,1983-1 Зс.

40. Иткин Ю.А. Оптимизация технологического процесса криоконсервирования клеточных суспензий/ Вторая Всесоюзная конференция по теоретическим и прикладным вопросам криобиологии: тезисы докл.-Харьков. 1984.-Т.1-С. 141.

41. Калинин Н.Н. Получение и применение концентрата тромбоцитов и лейкоцитов // Пробл. гематологии и переливания крови.- 1980.- №10. С. 50-56.

42. Клестова В.И., Шабанова Л.И., Рябов Н.В., Ипатов С.Г. Получение чистой фракции тромбоцитов из периферической крови доноров // Гравитационная хирургия крови / Под ред. О.К.Гаврилова. М.: Медицина, 1983. - С. 154-155.

43. Клиническая онкогематология: Руководство для врачей/ Под ред. М.А.Волковой.- М.: Медицина, 2001. 576с.: ил.

44. Компаниец A.M. Консервирование концентратов тромбоцитов и их клиническая эффективность : Автореф. дис. .д-ра мед. наук.- М., 992. 52 с.

45. Компаниец A.M. Функциональная полноценность тромбоцитов, сохраняемых при различных температурных режимах: Автореф. дис. . канд. мед. наук.-М., 1980.-22 с.

46. Компаниец A.M., Аграненко В.А., Файнштейн Ф.Э. Трансфузии консервированных концентратов тромбоцитов показания, дозировка, лечебная эффективность // Ш-й Всесоюз. съезд гематологов и трансфузиологов : Тез. докл. Т. 1. - Киров, 1991. - С. 433-434.

47. Компаниец A.M., Николенко А.В., Луговой В.И. Криоконсервиро-вание тромбоцитов с веществами ряда полиолов // П-й Международный, конф.по криобиологии : Тез. докл. Харьков, 1992. - С. 86.

48. Консервирование концентратов тромбоцитов, выделенных из, обо- , гащенной тромбоцитами плазмы донорской крови // Гематология и трансфу-зиология. 1992. - № 4. - С. 32-35.

49. Костяев А.А. Низкотемпературное консервирование гемопоэтиче-ских стволовых клеток при -80°С в режиме быстрого двухступенчатого замораживания (экспериментальное исследование). Автореф. дис. . д-ра мед. наук. -С.П6.-2003. 35 с.

50. Кошивая В.П., Макарова Е.М., Шишов Н.М. и др. Полимерные контейнеры для заготовки крови и получения крови и ее компонентов// Информационный бюллетень службы крови. -1982.- Вып.б.-С. 3 -6 .

51. Криоконсервирование гемопоэтических стволовых клеток из кордовой крови человека/ А.А. Цуцаева, В.И. Грищенко, О.В. Кудоковцева и др.//Пробл. криобиологии.-2000.-№1 .-С.59-63.

52. Криоконсервирование клеточных суспензий / Под общ. ред. А.А. Цуцаевой. Киев: Наукова думка, 1983. - 240 с.

53. Криопротекторы./ Н.С. Пушкарь, М.И. Шраго, A.M. Белоус, Ю.В. Калугин. Киев: Наукова думка, 1978. - 204 с.

54. Лабораторная диагностика микозов, вызванных плесневыми грибами. Методические рекомендации МЗ СССР. Л.,-1986. 29 с.

55. Лаврик С.С. Консервирование костного мозга.-Киев: Наукова думка, 1975.- 149 с.

56. Лисовская И.Л., Аграненко В.А. Новый метод приготовления функционально активных концентратов тромбоцитов из консервированной крови 15 дней хранения // Гематология и трансфузиология. 1983. - № 10. - С. 55-58.

57. Лобынцева Г.С., Тимошенко Ю.П. Влияние скорости отогрева на выживаемость клеток крови//Криобиология и криомедицина.-1981.-№8-С.15-18

58. Лыткин М.И., Шевченко Ю.Л., Матвеев С.А. Применение криокон-сервированных аутотромбоцитов в кардиохирургии // Грудная и сердечнососудистая хирургия. 1990. - № 10. - С. 37-39.

59. Максимов Н.А. О замерзании и холодостойкости растений. СПб.: Изд. Лесн. института, 1913. - 136 с.

60. Мовшев Б.Е., Витвицкий В.М., Лисовская И.Л. и др. Трансфузионные среды: прикладные и фундаментальные аспекты// Гематология и трансфу-зиология.- 2001. -№3.-С. 74-82.

61. Никитин И.К., Козинец Г.И. Кровь, компоненты крови: хранение, фракционирование, качество и стандарты //Гематология и трансфузиология.-2002- Т.47, №4.-С.36-40.

62. Николенко А.В. Криопротекторные свойства полиолов и их производных при замораживании тромбоцитов. Автореф. дис. . канд. биол. наук. -Харьков, 1991,- 19 с.

63. Николенко А.В. Низкотемпературное консервирование тромбоцитов под защитой соединений ряда амидов // Криобиология.-1985.- №3.- С.51.

64. Николенко А.В., Компаниец A.M., Иванова И.А. Криопротекторные свойства веществ ряда полиолов при замораживании тромбоцитов/ В кн: Визи-ко-химические свойства и биологическое действие криопротекторов. Харьков, 1990.- С.94-99.

65. О возможных факторах повреждения биологических объектов и их ДНК при криоконсервации/А.В. Зинченко, В.Д. Зинченко, Е.Ф. Копейка, Е.В. Онищенко// Цитология. 2004. - Т. 46, №9. - С. 796.

66. Основы трансфузиологии / Под ред. М.Ф. Заривчацкого Пермь: Изд-во Пермского ун-та, 1995.- С. 475.

67. Осташко В.Ф., Осташко Ф.И. Температурный шок клеток как гидравлический удар в резонансной системе // Цитология. 2004. - Т. 46, №9. - С. 831-832.

68. Пичугин Ю.И. Итоги и перспективы поиска новых эндоцеллюляр-ных криопротекторов// Проблемы криобиологии.- 1993.-№2.- С.3-10.

69. Практическая трансфузиология / Г.И. Козинец, JT.C. Бирюкова, Н.А. Горбунова и др. М., 1997. - 435 с.

70. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию. Киев: Нау-кова думка, 1975. - 344 с.

71. Пушкарь Н.С., Капрельянц А.С., Панков Е.Я. Ультраструктура клетки при низкотемпературном консервировании. Киев: Наукова думка, 1978.- 149 с.

72. Розанов Л.Ф., Гордиенко Е.А., Кулешова Л.Г. Неспецифичёские ре.--* акции клеток на физико-химические факторы криоконсервирования // Биохимические аспекты криоповреждения и криозащиты клеточных систем.- Харьков: Б.И., 1989.- С. 48-52.

73. Розанов Л.Ф., Смольянинова Е.И., Луценко Е.Д. и др. Осмотическое поведение клеток костного мозга мыши в водных растворах криозащитных веществ// Пробл. криобиологии.- 2000. №2, - С. 10

74. Руководство по общей и клинической трансфузиологии / Ю.Л. Шевченко, В.Н. Шабалин, М.Ф. Заривчацкий, Е.А. Селиванов. СПб.: Фолиант, 2003.-608 с.

75. Руководство по трансфузионной медицине / Под ред. Е.П. Сведен-цова- Киров, 1999. 715 с.

76. Румянцев А.Г. , Аграненко В.А. Гемотрансфузионная терапия в педиатрии и неонатологии: Руководство для врачей. М.: МАКС ПРЕСС, 2002. -644с.

77. Румянцев А.Г., Аграненко В.А. Основные принципы проведения гемотрансфузионной терапии в педиатрии.//Вопросы гематологии, онкогемато-логии и иммунопатологии в педиатрии.- 2002. -Т. 1, №2.- С. 5 9 .

78. Сведенцов Е.П. К классификации разных уровней отрицательных температур, используемых для консервирования биообъектов // Материалы научной сессии (30-31 марта 2004 г.). Киров, 2004. - С. 117-120.

79. Сведенцов Е.П. Получение и криоконсервирование костного мозга для клинического применения: Автореф. дис. д-ра мед. наук. Л., 1987- 45 с.

80. Сведенцов Е.П. Современное состояние проблемы консервирования клеточных суспензий при отрицательных температурах // Современные проблемы гематологии и трансфузиологии: Сб. тр. науч.-практ. конф.- Киров, 2002.- С.30-31.

81. Сведенцов Е.П., Архиереев В.П., Симкин Д.С., Кузнецов Е.В. Средство для криоконсервирования костного мозга. Патент №2049391 (РФ) от 10.12.1995.

82. Сведенцов Е.П., Костин А.И., Селезнёва О.М. и др. Аутодонорство тромбоцитов у онкогематологических больных // Вестн. службы крови России.-1998.-№2.-С. 17-19.

83. Сведенцов Е.П., Костяев А.А. Отечественные криоконсерванты для костного мозга // Вестник службы крови России.- 1997. -№1. С. 26-28.

84. Сведенцов Е.П., Рахматуллаев А.Р., Сахибов Я.Д. Заготовка и консервирование тромбоцитов для клинического применения.- Ташкент: изд-во Ибн Сина.- 1996.-С 73.

85. Сведенцов Е.П., Селезнева О.М., Симкин Д.С., Новосадов В.М. Водный раствор для криоконсервирования тромбоцитов.- 1993.- Патент №1561227 (Роспатент).

86. Селезнёва О.М. Криоконсервирование тромбоцитов с применением нового ограждающего раствора: Автореф. дис. . канд. биол. наук,- С.Петербург, 1996.- 21 с.

87. Селезнёва О.М., Новосадов В.М., Сведенцов Е.П. Сравнительное изучение воздействия некоторых криопротекторов на ультраструктуру и функции консервированных тромбоцитов/ В сб.: Актуальные вопросы трансфуз. и клин, медицины. Киров, 1993.-С.13-14

88. Селиванов Е.А., Мельникова В.Н., Плешаков В.Т. и др. Разработка и первый опыт применения отечественного устройства для удаления лейкоцитов из донорской крови и других эритроцитных сред// Пробл. гематологии и переливания крови. 1999. - N1. - С. 54-59.

89. Справочник ВИДАЛЬ. Лекарственные препараты в России/ Изд. 7 перераб., испр. и доп. М.: Астра ФармСервис, 2001. - 1536 с.

90. Стрибуль Т.Ф. Обзор методов криоконсервирования культуры растительных клеток//Пробл. криобиологии. 2000.- №1.- С. 52-58.

91. Техническое руководство американской ассоциации банков крови. 12-е издание. Пер. с англ. Милан, Европейская школа трансфузионной медицины, 2000.- 1056с., ил.

92. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток у детей./ А.Г. Румянцев, А.А. Масчан.- М.: МИА, 2003.- 912 с.

93. Федотенков А.Г., Шишкина И.Д. Данилова Л.Д. и др. Ограждающие растворы для криоконсервирования костного мозга// Гематол. и трансфу-зиол.- 1992. №7-8.- С.12-15.

94. Фефелова И.В., Мхеидзе Д.М., Селидовкин Г.Д. и др. Криоконсер-вирование тромбоцитов с диметилсульфоксидом // Гематология и трансфузио-логия. 1991. - № 6. - С. 30-32.

95. Физико-химические механизмы криоповреждений биологических структур / Под ред. Н.С.Пушкаря. Итоги науки и техники, вып. Биофизика, Т.9 -Москва, 1978.

96. Хестер Д. Применение методов сепарации крови//Гематология и трансфузиология 1985. - N1. - С. 49-52.

97. Чуйков В.А. Механизм криозащитной эффективности и фармакологические свойства диметилсульфоксида//Криобиология.- 1989.- №1.- С. 3-10.

98. Шарова Ю.А., Аграненко В.А., Самсонова Н.Н. Клиническое применение тромбоцитоконцентрата в сердечно-сосудистой хирургии // Гематология и трансфузиология 1989. - Т.32,-№5. - С. 12-14.

99. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б. Безопасное переливание крови.- СПб., 2000.- С.153-154.

100. Шевченко Ю.Л., Шабалин В.Н., Заривчацкий М.Ф., Селиванов Е.А.// Руководство по общей и клинической трансфузиологии.- СПб: ООО «Издательство Фолиант», 2003. 608 е.: ил.

101. Шраго М.И., Гучок М.М., Калугин Ю.В. и др. О некоторых путях создания криопротекторов// Пробл. гематологии и переливания крови.- 1981.-№6.-С. 3 -6

102. Шраго М.И., Новиков А.Н. и др. Криопротекторы и криоконсерван-ты (основные направления исследований) //Криобиология.- 1985.-№3. -С. 8-13.

103. Щеглова О.О. Функциональное состояние лейкоцитов после выхода из холодового анабиоза при умеренно-низкой температуре. Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Киров, 2005.- 20 с.

104. A new cryopreservative agent for freezing platelets / E.P. Svedentsov, O.M. Selezneva, V.M. Novosadov, D.S. Simkin et.al.// In. ISBT.- 5-th. Regional (4th European) Congress.-Venezia, 1995.- P. 95.

105. Abdel-Mageed A., Rosalio M.L.U., Hutcheson C.E. Effect of temperature variation on cell number, viability and clonogenic potential // Blood. 1997.-Vol.90.-P. 321.

106. Andersen K.S., Harris R.S., Chen K.K. Toxicological studies on syntetic glycerin // J. Americ. Assoc. Sci.- 1950.- Vol.39, N8.- P. 583 586.

107. Angelini A., Dragani A., Berardi A. et al. Evalution of Four Different Methods for Platelet Freezing // Vox. Sang. 1992. - V. 62, №1. - P. 146-151.

108. Archer G.T., Grimsley P.O., Lindra J. et al. Survival of Transfused Platelets Collected into New Formulation Plastic packs // Vox. Sang. 1982. - V. 43, №4. - P. 223-230.

109. Armitage W.J., Parmar N. The response of human platelets to osmotic stress // Cryobiology.- 1983.- Vol.20, N6.- P. 709.

110. Ashwood-Smith M.J. Preservation of mouse bone marrow of-79°C with dimethylsulfoxide//Nature.- 1961.- Vol.120, N4778.- P. 1204- 1205.

111. Becker G.A.,Tuccelli M.T., Kunicki T. et. al. Studies of platelet concentrates stored at 22°C and 4°C //Transfusion.- 1973.-Vol.-13.-P.61-68.

112. Bertolini F., Porreti L., Lauri E. et al. Role of Lactate in Platelet Storage Lesion // Vox. Sang. 1993. - V. 65, №2. - P. 194-198.

113. Bertolini F., Rebulla P., Porretti L., et al: Platelet quality after 15-day storage of platelet concentrates prepared from buffy coats and stored in a glucose-free crystalloid medium. //Transfusion.- 1992.- №32.- P. 9-16

114. Blajchman M.A., Goldman M., Baeza F. Improving the bacteriological safety of platelet transfusions // Transfus. Med. Rev.- 2004.- Vol. 18.- P. 11-24.

115. Blood Component international society of blood transfusion, ISBT GUIDE // Therapy. Paris, 1980. - 19 p.

116. Bock M, Rahrig S., Kunz D., et all. Platelet concentrates derived from buffy coat and apheresis: biochemical and functional differences// Transfusion Medicine." 2002.-Vol. 12, Is.5, P.317.

117. Воск M.M., Schleuning. M.U., Heim, and W. Mempel. Cryopreserva-tion of human platelets with dimethyl sulfoxide: changes in biochemistry and cell function//Transfusion.- 1995.- Vol. 35.- P. 921-924.

118. Born G.V.R. Affregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal // Nature.- 1962.- vol. 194, № 4832.- P. 927 929.

119. Brodthagen U.A., Armitage W.J., Parmar N. Platelet Cryopreservation with Glicerol, Dextran and Mannitol: Recovery of 5-Hydroxytiyptamine Uptake and Hypotonic Stress Response // Cryobiology.- 1985. V. 22, №1- P.l-9.

120. Car R., Hutton J.L., Jenkins J.A. et al. Transfusion of ABO-mismatched platelets leads to early platelet refractoriness // Br. J. Haematol. 1990. - V. 75, №3. -P. 408-413.

121. Coffe C., Couteret Y., Pouthier F., Peters A. Prevention of Platelet Alloimmunization //Transfus. Sci. 1990. - Vol. 11, №2. - P. 133-139.

122. Cryopreservation Manual Nalge Nunc International. Written by Frank P. Simione, M.S. of the American Type Culture Collection (ATCC) in cooperation with Nalge Nunc International Corp. ©Nalge Nunc International Corp. 1998

123. Cry (preservation of hematopoetic progenitor cells with 5-percent dimethyl sulfoxide at -80°C without ratecontrolled freezing / A. Galmes, I. Besalduch, I. Barday et al. // Transfusion. 1996. - Vol.36. - P.794-797.

124. Dayian G., Harris H.L., Vlahides G.D., Pert J.H. Improved Procedure for Platelet Freezing // Vox.Sang. 1986. - V. 51, № 2. - P. 292-298.

125. Djerassi I., Roy A., Kim J., Cavins J. Dimethylacetamide, a New Cryo-protective Agent for Platelets // Transfusion. 1971. - V. 11, № 2. - P. 72-76.

126. Dumont L. J., AuBuchon J.P., Whitley et al. Seven day storage of single-donor platelets: recovery and survival in an autologus transfusion. Study// Transfusion. - 2002. - Vol. 42 - P. 809 - 811.

127. Effect of dimethylsulphoxide on lipoproteins stored at low temperatures / Klein E., Luman R.B., Peterson L. et al. // Cryobiology.- 1967. 4, №3, p. 328-334.

128. Ekdawi-Sever N., Pablo J.J. Optimization of the Freeze-Drying Protocol for Maximum Cell Recovery//Chemical Engineering Department, University of Wisconsin-Madison, USA, 2000, P. 146.

129. Elliott C., McCarthy D. A survey of methods of processing and storage of bone marrow and blood stem cells in the EBMT // Bone Marrow Transplant.-1994.-Vol.l4(3).-P. 419-23.

130. Fabris F., Belloni M., Casonato A. et al. Girolami A. Improvement of Platelet Aggregation Abnormalities in Thrombocytosis after Thrombocytopheresis // Folia Haematologica. 1981. - Vol. 108, № 6. - P. 853-862.

131. Farrant J., Morris G.J. Thermal shock and dilution shock as the causes of freezing injuru // Cryobiology.- 1973 Vol.10. №2.- P. 134-140.

132. Farrant J., Woolgar A. Possible relationship between the physical properties of solutions and cell damage during freezing / In: The Frozen cell.- London.-1970.- P. 97-120.

133. Filip D.J., Aster R.H. Relative hemostatic effectiveness of human platelets stored at 40C and 220C // J. Clin. Med.- 1978.- Vol.91 P.618-624.

134. Fournell J.J., Zingsem J., Riggert J., et al: A multicenter evaluation of the routine use of a new white cell-reduction apheresis system for collection of platelets.//Transfusion.- 1997. Vol.- 37.- P. 487-492.

135. Fuller В., Lane N., Benson E. Life in the frozen State.- London, New York, Washington: CRS Press, 2004. 672 P.

136. Galmes A., Besalduch I., Barday I. et al. Cryopreservation of hematopo-etic progenitor cells with 5-percent dimethyl sulfoxide at -80°C without ratecon-trolled freezing//Transfusion.- 1996.- Vol. 36, N 9. P.794-797.

137. Gordone B.C., Coliano F.R., Turtle S.A., Ervin T.J. A quick and efficient way to pool platelets // Transfusion. 1983. - V. 23, № 1. - P. 70-71.

138. Guide to the preparation use and qiality assurance of blood components. Council of Europe. Strasbourg, 1995. - 196 p.

139. Gunson H.H., Makar I.F., Fletcher S., Merry A.H. Five day storage of platelet concentrates //Brit. J. Haematol. 1982. - V. 52, № 1. - P. 141.

140. Handin R.I., Fortier N.L., Valeri C.R. Platelet respons to hypotonic stress after storage // Transfusion. -1970.- Vol.10, №6 P. 305-309.

141. Hay S.H., Brecher M.E. Validation of pH and glucose determination for bacteria detection screening in platelet concentrates stored in the Terumo Teruflex XT612 platelet container//Transfusion.-2004.-Vol.44.-P.1395.

142. Heal J.M., Singal S., Sardisco E., et al: Bacterial proliferation in platelet concentrates. //Transfusion- 1986.- Vol. 26 .- P. 388-390

143. Hogge D.E., Thompson B.W., Schiffer C.A. Platelet storage for seven days in second generation CLXTM blood bags // Transfusion.- 1986.- Vol.26.- P. 131-135.

144. Hogman C.F., Berseus O., Eriksson L., et al: International forum: Europe. Buffy-coat-derived platelet concentrates: Swedish experience.// Transfiis Sci. 1997.-№ 18.-P. 3-13

145. Holme S. Storage and quality assessment of platelets // Vox. Sang. -1998. Vol.74, № 2. - P. 207-216.

146. Isomura H., Yoshida M., Namba H. et al. Suppressive effects of human herpesvirus-6 on thrombopoietin-inducible megakaryocyte colony formation in vitro// J Gen Virol.- 2000.- Vol. 81.- Pt.3.- P.663-673.

147. James P., AuBuchon, Louise Herschel, Jill Roger, and Scott Murphy. Preliminary validation of a new standard of efficacy for stored platelets // Transfusion.- 2004.- Vol.44.- P. 36 .

148. Kahn R.A., Meryman H.T. Storage of Platelet Concentrates // Transfusion. 1976. - V. 16, № l. - p. 13-16.

149. Kakaiya R.M., Katz A.J. Platelet preservation in lange containers // Vox. Sang. 1984. - V. 46, № 2. - P. 111-118.

150. Kim B.K., Baldini M.G. The Platelet Response to Hypotonic Shock.Its Value as an Indicator of Platelet Viability After Storage // Transfusion. 1974. - V. 14,№2.-P. 130-138.

151. Law P. The tolerance of human platelets to osmotic stress // Exp. Hema-tol.- 1983.- Vol.l 1(5).-P. 351-357

152. Lazarus H.M., Kaniechi-green E.A., Warm L.E. Therapeutic effectiveness of frozen platelet concentrates for transfusion // Blood. 1981.- V. 57, № 2. - P. 243-249.

153. Lee A.G. Functional properties of biological membranes, physical-chemical approach // Progr. Biophys. and Mol. Biol.-1975.- Vol.20, N 1- P.3-56.

154. Lee D.H., Blajchman M.A. Platelet substitutes and novel platelet products. // Expert Opin Investig Drugs. 2000. Vol. 9.- P.457-469

155. Luo D., Han X., He L., Cui X., Cheng S., Lu C., Liu J., Gao D. A modified differential scanning calorimetry for determination of cell volumetric change during the freezing process.// Cryo Letters.- 2002. Vol. 23.- P. 229-36.

156. Lyons J.M. Phase transitions and control of cellular metabolism at low themperatures// Cryobiology.- 1972.- №2.- P. 341-350.

157. Makino M., Baba M. A cryopreservation method of human peripheral blood mononuclear cells for efficient productica of dendritic cells// Scand. J. Immunol.- 1997.- Vol.-45, N6-P.618 622.

158. Marx R., Derlath S. Never eine Method zur verggleihend quantitativen Bestimmung der thrombocyten adhasivitat an blutfremden overflachen // Blut-1957.-№3. S.247 - 254.

159. Mazur P. Cryobiology. The freezing of biological systems // Science. -1970. V. 169, № 5135. - P. 939-949.

160. Mazur P. Principles of Cryobiology // In: Life in the frozen state.L.,N.Y. W: CRC Press, 2004.- P.3 -66.

161. Mc.Gann L.E., Farrant J. Survival of tissue culture cells frozen by two-step procedure to 196°C. Holding temperatures and time // Cryobiology.- 1976.-Vol.13.- P.261-269.

162. McLeod B.C., Sassetti R.J., Weens J.H., Vaithianthan T. Haematolytic Transfusion Reaction Due to ABO Incompatible Plasma in a Platelet Consentrare // Scand. J. Haematol. 1982. - V. 28, № 3. - P. 193-196.

163. McShine R.L., Weggemans M., Das P.C. et al. The Use of Fresh Plasma and a Plasma-free Medium to Enhance the Aggregation Response of Stored Platelets // Platelets. 1993. - № 4. - P. 338-340.

164. Meryman H.T. Crioprotective agents: A review // Criobiology. — 1971. — Vol.3, N2.-P. 173-183

165. Meryman H.T. Freezing injure and its prevention in living cells // Annu. Rev. Biophys. and Bioeng. 1974. - № 3. - P. 341-363.

166. Michelson A.D., Barnard M.R., Khuri S.F., Rohrer M.J., MacGregor H., Valeri C.R. The effects of aspirin and hypothermia on platelet function in vivo. // British Journal ofHaematology 1999.- Vol. 104(1).- P.64-68

167. Mrowiec Z.R., Kotelba-Witkowska В., Lechart E. et al. Clinical usefulness of blood platelets cryopreserved in liquid nitrogen // Acta Haematol Pol.- 1990.-Vol. 21(1).- P.22-25.

168. Mugishima H., Harada K., Chin M. et al. Effects of long-term cryopre-servation on hematopoietic progenitor cells in umbilical cord blood// Bone Marrow Transplant.- 1999.- Vol. 23.- N. 4.- P. 395-396.

169. Owens M., Werner E., Holme S., Afflerbach C. Membrane Glycoproteins in Cryopreserved Platelets // Vox. Sang. 1994. - V. 64, № 1. - P. 28-31.

170. Pennell C.A. Heat shock proteins in immune response in the Fall of 2004 // Immunology.- 2005.- Vol. 114.№3.- P. 297 300.

171. Pisciotto P.T., Benson K., Hume H., Glassman A.B., Oberman H., Pop-ovsky M., Hines D., Anderson K. Prophylactic versus therapeutic platelet transfusion practices in hematology and/or oncology patients. //Transfusion.- 1995.- Vol.35.- P. 498

172. Ramphilon D.H., Potter M., Cutts M. et al. Platelet concentrates irradiated with ultraviolet ligth retain satisfactory in vitro storage characteristics and in vivo survival // Br. J. Haematol. 1990. - V. 75, № 2. - P. 240-244.

173. Rock G., Scerring V.A., Tittley P. A. Five-day storage of platelet concentrates // Transfusion. 1984. - V. 24, № 2. - P. 147-152.

174. Rock G., Titley P.A. A comparison of results obtained by two different chromium-51 methods of deteminind platelet survival and recovery // Transfusion. 1990. V. 30, № 5. - P. 407-410.

175. Rosenfeld B.A., Herfel В., Faraday N., Fuller A., Brain H. Effect of storage time on quantitative and qualitative platelet function after transfusion // Anesthesiology. 1995.- Vol.83, P. 1167-1172.

176. Schiffer C.A., Anderson K.C., Bennett C.L. Platelet transfusion for patients with cancer: Clinical practice guidelines of the American Society of Clinical Oncology//J Clin Oncol.-2001.-Vol.19, P. 1519-1538.

177. Schiffer C.A., Lee E.J., Ness P.M. Clinical evaluation of platelet concentrates stored for one to five days.// Blood.- 1986.- Vol. 67 .- P. 1591-1594

178. Schneider W., Frohling Ch., McCarty L.J. Blood Component Preparation in Single Plastic Bags // Blut. 1974. - V. 29, N 1. - P. 1-12.

179. Simon T.L., Neison E.I., Murphy S. Extension of platelet storage to 7 days in second-generation bays. // Transfusion.- 1987.- Vol.27.- P. 6-9.

180. Simon T.L., Sierra E.R., Ferdinando B, et al: Collection of platelets with a new cell separator and their storage in a citrate-plasticized container.// Transfusion.-1991.-№31.- P. 335-339

181. Sputtek A, Korber Ch. Cryopreservation of red blood cells, platelets, lymphocytes, and stem cells // In: Fuller B.J., Grout B.W.W. (eds). Clinical Applications of Cryobiology.- Boca Raton: CRC Press, 1991.- P. 95-147.

182. Srivastova P.R. Immunotherapy for human cancer using heat shock pro-tein-peptide complexes // Curr. Oncol. Rep.- 2005.- Vol.7, N2.- P. 104 108.

183. Stiff P.J., Koester A.R., Weidner M.K. et al. Autologous bone merrow transplantation using unfractionated cells cryopreserved in dymethylsulfoxide and hydroxyethyl starch without controlled-rate freezing// Blood.- 1987.- Vol.70.- N4.-P.974-978.

184. Toner M. Nucleation of ice crystals in biological cells//Advances in low temperature biology. P.L.Steponkus, Ed. Vol.1.- London: JAI Press, 1992.- P. 1-51.

185. Turner V.S., Hawker R.J., Mitchell S.G., et al: Paired in vivo and in vitro comparison of apheresis and "recovered" platelet concentrates stored for five days.// J Clin Apheresis.- 1994.- № 9.- P. 189-194

186. Valeri C.R., Macgregor H., Barnard M.R., Summaria L., Michelson A.D., Ragno G. In vitro testing of fresh and lyophilized reconstituted human and baboon platelets.// Transfusion. -2004. Vol.44. P. 1505-12.

187. Valery C.R. An integrated Liquid-Frozen Blood Banking System // Vox. Sang. 1983. - Vol. 45.- № i. - p. 25-39.

188. Valery C.R., Feingold H., Marchioni L.D. A Simple Method for Freezing Human Platelets Using 6 % Dimethylsulfoxide and Storage at -80°C // Blood. 1974. - Vol. 43.-№ l.-P. 131-136.

189. Wagner S.J., Moroff G., Katz A.J.// Comparison of bacteria growth in single and pooled platelet concentrates after deliberate inoculation and storage// Transfusion.- 1995.- Vol.35.- P. 298 302.

190. Wautier J.L. Safety and usefulness of autologous cryopreserved platelets. // Lancet.- 2002 .- Vol.-22.- P 2145-2152.

191. Woods E.J., Liu J., Gilmore J.A., et al. Determination of human platelet membrane permeability coefficients using the Kedem-Katchalsky formalism: estimates from two- vs three-parameter fits // Cryobiology.- 1999.- Vol.38(3).-P.200-208