Разработка комбинированного криоконсерванта для замораживания и хранения тромбоцитов при низких и ультранизких температурах (лабораторно-экспериментальное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат наук Ветошкин, Константин Александрович

• Ветошкин, Константин Александрович
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Ветошкин, Константин Александрович

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ ТРОМБОЦИТОВ (обзор

литературы)

1. ] Современные методы замораживания донорских

тромбоцитных концентратов

1.2 Криопротекторы для замораживания тромбоцитов

1.2.1 Криопротекторы внутриклеточного типа действия

1.2.2 Криопротекторы внеклеточного типа действия

1.2.3 Криопротекторы смешанного типа действия

1.3 Программы замораживания тромбоцитных концентратов

1.4. Оценка эффективности криоконсервирования тромбоцитных

концентратов

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА III РАЗРАБОТКА КОМБИНИРОВАННОГО

КРИОКОНСЕРВАНТА ДЛЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ

ТРОМБОЦИТОВ

3.1 Характеристика нативных тромбоцитных концентратов

3.2 Состав комбинированного криоконсерванта

3.3 Оценка физико-химических характеристик комбинированного криоконсерванта для замораживания тромбоцитов

3.4 Физико-химические свойства донорских тромбоцитных концентратов на этапе смешивания и экспозиции с растворами

3.5 Функциональные свойства донорских тромбоцитов после смешивания с криоконсервантами

3.6 Оценка хладоограждающей способности комбинированных растворов при замораживании тромбоцитных концентратов до

температуры -80°С

3.7 Биологические испытания криоконсерванта

3.8 Оценка стабильности ограждающего раствора при хранении

ГЛАВА IV РЕЗУЛЬТАТЫ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ

ДОНОРСКИХ ТРОМБОЦИТНЫХ КОНЦЕНТРАТОВ

4.1 Сохранность свойств тромбоцитных концентратов при различных сроках низкотемпературного хранения

4.2 Хладоограждающая способность нового криоконсерванта в сравнении с раствором «Тромбокриодмац»

4.3 Результаты замораживания донорских тромбоцитных

концентратов с новым криоконсервантом до-196°С

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ВЫВОДОВ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АДФ - аденозиндифосфорная кислота

ГМБТОЭМ - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина

ГФ - Государственная Фармакопея

ГЭК - гидроксиэтилкрахмал

ДМАЦ - диметилацетамид

ДМСО - диметилсульфоксид

ЛД 50 - средняя летальная доза

ММ - молекулярная масса

ПВП - поливинилпирролидон

ПЭО - полиэтиленоксид

РГШ - реакция на гипотонический шок

ТК - тромбоцитный концентрат

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка комбинированного криоконсерванта для замораживания и хранения тромбоцитов при низких и ультранизких температурах (лабораторно-экспериментальное исследование)»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Современная клиническая трансфузиология предусматривает использование гемокомпонентной терапии, в том числе с применением донорских тромбоцитных концентратов (ТК) [1, 4, 76, 78]. Трансфузии указанного компонента крови являются одним из основных средств профилактики и лечения угрожающей жизни тромбоцитопенической кровоточивости, обусловленной лечением по современным протоколам высокодозной химиотерапии, радиационного облучения больных с онкологическими, гематологическими заболеваниями, ДВС-синдромом и применением аппаратов экстракорпорального кровообращения [3, 47, 50, 57, 76, 118]. Названные методы терапии вызывают повышенное разрушение и/или потребление тромбоцитов.

Обеспечение частых трансфузий ТК, особенно в экстренных случаях, требует наличия постоянных запасов функционально полноценных клеток. Традиционно для лечебных целей применяют тромбоциты, хранящиеся при комнатной температуре с постоянным помешиванием. Однако срок их хранения составляет не более 5 дней [47, 58, 60, 130].

В этой связи вопросы заготовки, консервирования и переливания тромбоцитов приобрели большую актуальность. С целью удлинения срока хранения тромбоцитов разработаны новые полимерные контейнеры [101, 116, 124], аддитивные растворы для сохранения ТК до 7 - 12 суток [23, 68, 73, 91, 93, 97, 123, 129, 131]. Однако если задача выделения больших количеств тромбоцитов отчасти решается внедрением в практику работы специальной аппаратуры (сепараторов клеток крови) [10, 11, 23, 34, 35, 42, 43, 45, 56, 61, 72, 80, 112], то проблема долгосрочного их хранения далека от окончательного разрешения.

Одним из способов увеличения сроков хранения кровяных пластинок является их замораживание [37, 40, 59, 62]. Совершенствование методов криоконсервирования тромбоцитов в значительной степени определяется разработкой хладоограждающих растворов, призванных защитить клетку от

разрушающих факторов в процессе замораживания и хранения.

В настоящее время набор криопротекторов для замораживания ТК весьма ограничен. Разрешенным Министерством здравоохранения Российской Федерации криоконсервантом для хранения тромбоцитов при -196°С является раствор «Тромбокриодмац» [21]. В Кировском научно-исследовательском институте гематологии и переливания крови разработан хладоограждающий раствор на основе гексаметиленбистетраоксиэтилмочевины (ГМБТОЭМ), изучены его криозащитные свойства при замораживании ТК до температур -196°С [53], -80°С [31], -40°С [65, 66]. Указанные растворы обладают выраженными криосберегающими свойствами.

При этом анализ научных публикаций [6 - 9, 25, 30, 41, 46, 104] показал, что перспективным направлением криомедицины является разработка криоконсервантов с использованием комбинаций хладоограждающих агентов, позволяющих увеличить количественную и качественную сохранность ТК при замораживании. Однако исследования в указанном направлении носят единичный характер. Поэтому актуальной задачей по созданию эффективных криоконсервантов для ТК следует считать получение ограждающего раствора на основе комбинации криопротекторов ГМБТОЭМ и ДМАЦ.

Цель работы

Создание нового комбинированного криоконсерванта для замораживания и хранения донорских тромбоцитных концентратов.

Задачи исследования

1. Разработать криоконсервант на основе комбинации криопротекторов ГМБТОЭМ и ДМАЦ для замораживания донорских тромбоцитов.

2. Изучить количественную и качественную сохранность тромбоцитных концентратов на этапах смешивания с криоконсервантом и после замораживания до температур -80°С и -196°С.

3. Определить оптимальный состав комбинированного криоконсерванта для замораживания тромбоцитов, оценить биологическое действие нового хладоограждающего раствора на лабораторных животных.

4. Сравнить эффективность замораживания и хранения кровяных пластинок с разрешенным к клиническому применению криоконсервантом («Тромбокриодмац») и разработанным криофилактиком.

Научная новизна

Впервые разработан и экспериментально изучен комбинированный хладоограждающий раствор на основе ГМБТОЭМ и ДМАЦ для замораживания и хранения ТК при низких и ультранизких температурах. Представлены доказательства того, что новый криоконсервант не оказывает существенного влияния на количество и функции тромбоцитов на этапах смешивания и экспозиции.

Теоретическая и практическая значимость работы

Разработанный комбинированный криоконсервант позволяет создавать запасы ТК для длительного хранения при -80°С и -196°С. Показано, что тромбоциты после замораживания до низких (-80°С) и ультранизких (-196°С) температур со сроком хранения до 1 года и последующего оттаивания сохраняют свою функциональную активность по тестам in vitro на высоком уровне. На основании результатов изучения острой и хронической токсичности криозащитного раствора установлена его безвредность для лабораторных животных. Определена стабильность свойств криоконсерванта при длительном хранении.

Личный вклад автора

Автор принимал непосредственное участие в разработке нового криоконсерванта, приготовлении опытных образцов, определении их свойств, подготовке ТК к замораживанию, оценке количественной и функциональной сохранности донорских тромбоцитов до и после криоконсервирования. Автором лично проведена статистическая обработка и анализ полученных результатов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработан оригинальный комбинированный криоконсервант на основе комбинации криопротекторов гексаметиленбистетраоксиэтилмочевины и диметилацетамида для замораживания тромбоцитов.

2. Криоконсервирующий раствор обеспечивает высокую количественную сохранность и функциональную полноценность донорских тромбоцитов при замораживании и хранении при -80°С -196°С.

3. Новый криофилактик для донорских ТК обладает хладоограждающей способностью, не уступающей раствору «Тромбокриодмац».

4. Разработанный криоконсервант отличается низкими токсическими свойствами при однократном и многократном введении лабораторным животным.

Апробация материалов диссертации

Материалы по теме диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Вопросы трансфузиологии и клинической медицины (Епифановские чтения)» (г.Киров, 2-3 октября 2012 г.); на заседаниях Кировского научного общества гематологов и трансфузиологов (сентябрь, 2013 г.); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» (г. Санкт-Петербург, 24 - 25 июня 2014 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 2 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ, получен один патент на изобретение.

Объем и структура диссертации

Диссертация представляет собой рукопись объемом 86 страниц машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка литературы, который содержит 131 наименование работ, в том числе 66 отечественных и 65 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 15 рисунками.

Диссертация выполнена на базе лаборатории консервирования крови и тканей (руководитель - д.м.н., доцент A.A. Костяев), вивария и станции переливания крови ФГБУН «Кировского научно-исследовательского института гематологии и переливания крови ФМБА России» (директор - И.В.Парамонов).

Автор выражает благодарность за помощь и содействие в выполнении

работы научному руководителю д.м.н., профессору [Е.П. Сведенцову|, заместителю директора, д.м.н., профессору Г.А. Зайцевой, руководителю лаборатории консервирования крови и тканей, д.м.н. A.A. Костяеву, в.н.с., к.м.н. С.В. Утемову, ученому секретарю, к.м.н., доценту М.Е. Ковтуновой, лаборанту с высшим образованием H.JI. Ежовой, врачам-трансфуз иол огам М.Г. Князеву, Ф.С. Шерстневу, сотруднику вивария Р.В. Климовой.

ГЛАВА I

СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ

ТРОМБОЦИТОВ (обзор литературы)

1.1 Современные методы замораживания донорских тромбоцитных концентратов

Современное состояние клинической трансфузиологии характеризуется применением заместительной гемокомпонентной терапии [1, 50]. В настоящее время все большее значение придается трансфузиям тромбоцитов [4, 27, 76, 78, 118, 119], особенно в условиях онкологических и гематологических отделений и клиник [3, 57]. Увеличение числа трансфузий кровяных пластинок диктует необходимость наличия запасов функционально полноценных клеток [17, 45, 57, 40, 108]. Создание резерва донорских ТК ограничено короткими сроками хранения указанного гемокомпонента. При положительных температурах (22±2°С) с постоянным перемешиванием длительность консервирования ТК составляет 5 суток [33, 40, 47, 58, 60]. Короткие сроки сохранности трансфузионной среды определяют необходимость создания постоянных запасов кровяных пластинок. Однако, общепринятый способ хранения тромбоцитов обладает рядом недостатков. Во-первых, происходит «истощение» кровяных пластинок, что проявляется увеличением степени их активации и влечет за собой значительное снижение эффективности их трансфузий [109, 122]. Во-вторых, при температуре хранения 20 - 24°С существенно возрастает риск роста бактерий и контаминации трансфузионной среды [70, 75, 95, 130]. В связи с указанными факторами предложены различные подходы к удлинению продолжительности хранения ТК при положительных температурах: хранение тромбоцитов при +4 ^ +8°С [90, 102], разработка плазмозамещающих сред и сбалансированных растворов [23, 68, 73, 74, 81, 93, 99, 100, 111], лиофилизация [77, 110, 121], а также применение специализированных контейнеров с повышенной газопроницаемостью [101, 116, 124]. Указанные методы

позволяют увеличить срок консервирования тромбоцитов при положительных температурах до 7 - 12 суток [89, 129]. Однако они не нашли применения из-за ряда недостатков, присущих каждому методу.

Так, при хранении ТК при температурах +4 +6°С дисковидные «покоящиеся» кровяные пластинки преобразуются в сферические формы [90], что является причиной быстрого выведения таких тромбоцитов из кровеносного русла после переливания. Применение плазмозамещающих сред не предотвращает истощения кровяных пластинок [74]. В связи с этим, предложенные методы увеличения сроков хранения донорских ТК не позволяют создать запас полноценной трансфузионной среды.

Современным способом увеличения продолжительности хранения кровяных пластинок является их замораживание [12, 24, 37, 40, 59, 62, 88]. Криоконсервирование дает возможность создавать запасы донорских ТК, в том числе типирванных по антигенам система НРА [49], а так же аутологичных тромбоцитов. Наличие банка криоконсервированных кровяных пластинок значительно облегчает обеспечение растущих потребностей клиник лечебными дозами кровяных пластинок, придает гибкость учреждениям службы крови в управлении ресурсами ТК.

В процессе замораживания клеток процессы их жизнедеятельности временно останавливаются или значительно затормаживаются, но после размораживания восстанавливаются [13, 96]. Для долгосрочного хранения клетки крови замораживают до низких (-80°С) и ультранизких (-196°С) температур [28, 31, 36, 37, 52, 59, 63, 64]. Необходимость применения указанных температурных режимов связана с тем, что только при таких условиях в клетках практически полностью прекращаются биохимические процессы. Однако при замораживании любых биообъектов необходимым условием является их защита от губительного воздействия низких температур. Для разработки эффективных способов защиты от низкотемпературного воздействия, необходимо выявить факторы, отрицательно влияющие на биологические объекты, и всесторонне изучить механизмы их действия.

В настоящее время известно, что повреждение клетки при замораживании происходит в результате чрезмерных потерь клеточной воды и вследствие образования внутриклеточного льда [96, 105]. Интенсивность повреждающего эффекта кристаллов льда зависит от активности процессов кристаллизации и свойств образованных кристаллов. При умеренно низких температурах (-15 -20С°) кристаллы льда увеличивают объем на 10%. По мере дальнейшего понижения температуры происходит сжатие ледяных структур. Уже при -20°С объем льда равняется исходному объему воды, а при температуре -183°С он составляет 2,6% от исходного.

Непосредственная механическая травма клеток внеклеточными кристаллами льда не наблюдалась. Клетки повреждаются из-за деформации их при захвате растущими кристаллами, а также сжатия в каналах, которые образуются между этими структурами [13].

При медленном замораживании процессы формирования льда во внеклеточном пространстве приводят к концентрированию солевых растворов, увеличению их осмотического давления и изменению рН среды [44]. В ответ на возникший осмотический градиент вода покидает клетки. Они теряют не только свободную воду, процент которой крайне мал (порядка 10%), но и жидкость, связанную с белковыми макромолекулами [39, 44, 67]. Дегидратация клетки и резкое уменьшение ее объема ниже критического уровня приводят к повреждению мембраны.

При быстром замораживании основным повреждающим фактором для клеток является формирование внутриклеточных кристаллов льда, оказывающих разрушительное воздействие на структуры клетки. Интенсивность повреждающего действия внутриклеточных кристаллов зависит от их формы, размеров, количества, скорости кристаллизации. Неоднократно отмечено, что внутриклеточные кристаллы могут вызывать как необратимые, так и обратимые повреждения в клетках [13].

Анализируя результаты исследований, следует отметить, что в настоящее время имеется арсенал способов, с помощью которых можно максимально

снизить отрицательное действие повреждающих факторов замораживания на клетки. К ним относится варьирование скоростями замораживания и размораживания биологических объектов, что позволяет изменять в нужном направлении скорость образования кристаллов льда и характер кристаллизации [13, 51, 52]. Однако даже при использовании оптимальных скоростей замораживания не удается достичь высокой сохранности клеток после размораживания.

Вторым способом, с помощью которого можно регулировать процессы кристаллизации, является введение в биологические системы кри о протекторов. К криопротекторам относят вещества, взаимодействующие с биологическими структурами и защищающие клетки от губительного влияния физико-химических факторов замораживания [51, 52]. Основная цель применения криопротекторов - это увеличение концентрации растворимых веществ, что влечет за собой снижение точки замерзания и уменьшение количества льда, образующегося при субзамораживающих температурах.

Одной из фундаментальных проблем криоконсервирования тромбоцитов является выбор криопротекторного агента и создание на его основе раствора, защищающего клетки от гибели в процессе замораживания. Подбор криопротектора зависит от его химической природы, концентрации и токсичности в отношении замораживаемых клеток. Цитотоксичность имеет в своей основе биохимические взаимодействия, преимущественно на уровне клеточных мембран [94]. Токсичность криопротектора проявляется через изменения функционального состояния клеток. Тромбоциты являются чрезвычайно чувствительными форменными элементами крови, для них характерна ограниченная резистентность к изменениям изотонических условий [2]. Нарушение ультраструктуры и функций клеток могут вызваться цитотоксическим действием криопротекторов [94].

Различают эндоцеллюдярные (проникающие через плазматическую мембрану в клетки) и экзоцеллюлярные (непроникающие в клетки) криопротекторы. К эндоцеллюлярным криопротекторам относятся

криофилактики с молекулярной массой (ММ) до 101, а к экзоцеллюлярным -выше указанной [51]. Н.С. Пушкарь, М.И. Шраго и соавт. [51] добавили к этим двум группам третью - криопротекторы смешанного действия.

Среди всего многообразия химических веществ с криопротекторными свойствами обнаружено несколько, проявляющих весьма выраженное хладоограждающее действие. В основном они представлены эндоцеллюлярными криофилактиками: глицерином, диметилсульфоксидом (ДМСО), диметилацетамидом (ДМАЦ), 1,2-пропиленгликолем, этиленгликолем. Криопротекторы этой группы противодействуют концентрационным изменениям при внеклеточном образовании льда и уменьшают сморщивание клеток. Проникнув в клетку, они стабилизируют в ней свободную воду, способствуя при замораживании переходу ее в аморфное мелкокристаллическое и стеклообразное состояние, неопасное для клеточных мембран.

К группе криопротекторов экзоцеллюлярного (внеклеточного) типа действия относят поливинилпирролидон (ПВП), гидроксиэтилкрахмал (ГЭК), полиэтиленоксид (ПЭО) - фракция с ММ 1500, декстран. Характер действия экстрацеллюлярных криофилактиков иной. Поскольку эти вещества не проникают в клетку, они не могут влиять на концентрацию солей в цитоплазме в процессе замораживания. Хладоограждающие агенты этой группы покрывают защитным слоем своих макромолекул цитоплазматическую мембрану, уплотняют ее, предупреждая переход кристаллизации воды из внеклеточной среды во внутриклеточную, повышают устойчивость мембраны к повреждающему действию кристаллов [51, 52].

Группа криопротекторов смешанного (экзо-, эндоцеллюлярного) действия представлена ПЭО с ММ 400 и

гексаметиленбистетраоксиэтилмочевиной (ГМБТОЭМ) [51, 52].

1.2 Криопротекторы для замораживания тромбоцитов

Из числа веществ, проявляющих криопротекторные свойства, для замораживания кровяных пластинок были изучены глицерин [24, 79], ДМСО

[26, 29, 69, 82, 84], 1,2 - пропандиол [38], ДМАД [18, 28, 36, 63], ГМБТОЭМ [20,31,53,65,66].

1.2.1 Криопротекторы внутриклеточного типа действия

Глицерин быстро проникает в клетку через мембрану, его гидроксильные группы активно взаимодействуют с молекулами воды, предотвращая образование крупных внутриклеточных кристаллов льда. Выявлено [24, 51, 79], что 5 - 7,5% конечная концентрация глицерина обеспечивает сохранность тромбоцитов при охлаждении, не нарушая значительно их функции. При умеренных скоростях охлаждения сохранялось до 70 - 80% интактных кровяных пластинок, которые при тестировании in vitro (распределение по размерам, обратный захват серотонина, агрегация и ретракция сгустка) мало отличались от нативных клеток.

Однако отмечено, что при размораживании часто возникает спонтанная необратимая агрегация кровяных пластинок, а также наблюдаются серьезные нарушения их ультраструктуры и энергетического метаболизма [2, 51]. При использовании более высоких концентраций глицерина (выше 7,5%) происходили значительные разрушения тромбоцитных лизосом. Эти повреждения усиливались при замораживании и последующем оттаивании.

Другой проблемой криоконсервирования тромбоцитов под защитой глицерина является осмотический стресс, возникающий при отмывании клеток от криопротектора [2]. В связи с указанными недостатками глицерин не нашел применения при замораживании ТК.

Ряд исследователей выступает за использование ДМСО в качестве криоконсервирущего вещества для тромбоцитов [26, 29, 69, 82, 85, 128] в конечной концентрации от 4 до 6% [69]. Количественные потери клеток после размораживания составляют от 5 до 30%, при этом функциональная полноценность сохраняется по различным тестам на уровне 30 - 70% от контрольных величин [26].

Клинические наблюдения показали, что криоконсервированные с ДМСО

тромбоциты дают гемостатический эффект и способны к циркуляции в кровяном русле реципиента. Оптимальной конечной концентрацией ДМСО считают 5%, программное замораживание производится с медленным охлаждением [82]. При таких условиях криоконсервирования введение концентрата тромбоцитов больным с тромбоцитопенией вызывало значительное укорочение времени кровотечения.

С повышением концентрации ДМСО его криозащитный эффект нивелируется токсичностью этого соединения и выживание тромбоцитов снижается. При цитохимическом исследовании (содержание гликогена) и определении функциональных показателей кровяных пластинок (тест обратного захвата серотонина, способность к агрегации) после замораживания и длительного хранения были обнаружены значительные изменения активности ферментов и снижение способности клеток к агрегации. Но, несмотря на указанные дефекты, размороженные клетки не только сохраняли способность к циркуляции, но и были гемостатически эффективны [29].

Однако имеются и существенные недостатки указанного вещества: неприятный запах, местный веноспазм при введении, токсичность [5]. Токсичность ДМСО диктует необходимость отмывания тромбоцитов от криопротектора.

При замораживании кровяных пластинок под защитой 1,2-пропандиола в конечной концентрации 2,5 - 3% в аутологичной плазме получены данные, свидетельствующие о хорошей сохранности клеток по тестам in vitro [38]. Однако этот способ криоконсервирования тромбоцитов находится в стадии экспериментального изучения. Криоконсервированные с пропиленгликолем ТК в клинических условиях не изучены.

Поиск эффективных криопроте кторов для низкотемпературного консервирования тромбоцитов привлек внимание исследователей к ДМАЦ -наиболее изученному и перспективному веществу в химическом ряду амидов.

Разработан раствор «Тромбокриодмац», содержащий 5% ДМАЦ и 5% глюкозу [18, 21]. Способ криоконсервирования тромбоцитов при температуре -

196°С с указанным криоконсервантом разрешен для клинического применения в РФ [21]. При замораживании ТК со скоростью 8 - 10°С/мин с 2,5% конечной концентрацией ДМАЦ сохранялось порядка 80% количества клеток, 20±4% АДФ-агрегации, 45±4% способности к реакции на гипотонический шок (РГШ) и 70±3% ретракции сгустка [18, 24].

Основным преимуществом тромбоцитов, криоконсервированных с «Тромбокриодмац», является возможность их трансфузий без предварительного удаления криопротектора, что позволяет избежать дополнительной травматизации клеток и значительно сократить время их подготовки к клиническому использованию.

Изучение функциональных свойств размороженных тромбоцитов свидетельствует о том, что ДМАЦ по степени криозащитного действия приближается к ДМСО, хотя и уступает ему по результатам сохранности отдельных параметров функциональной полноценности (реакции на гипотонический шок, агрегационной активности) [2, 18].

Недостатком ДМАЦ является токсичность: средняя летальная доза (ЛД5()) для крыс составляет 3,56 г/кг. Он может вызывать судороги, парезы, повреждает клетки нервной системы, печени, крови [51].

1.2.2 Криопротекторы внеклеточного типа действия

Криопротекторы внеклеточного типа действия составляют большую группу веществ с криофилактическими свойствами и являются полимерными соединениями. Среди таких криопротекторов при замораживании тромбоцитов изучены ГЭК [51, 86, 126], ПВП [51, 87], декстран, ПЭО [120].

После замораживания ТК с 4% ГЭК (ММ 450 ООО) были получены неудовлетворительные результаты: сохранялось 54% способности кровяных пластинок к РГШ, активация тромбоцитарного фактора 3 (тромбопластина) на поверхности мембраны тромбоцитов составляла 35,6±7,6%, более 90% клеток в размороженных образцах имели сферическую форму [126].

Установлено, что результат замораживания тромбоцитов с ГЭК молекулярного веса 40 ООО и 200 ООО несколько лучше, чем при использовании высокомолекулярного вещества (ММ 450 ООО) [86]. Показано [87], что ПВП и декстран (ММ 7 ООО) сохраняли лишь 35 - 40% ретракции сгустка тромбоцитов. В концентрате тромбоцитов, замороженных с ПВП, после декриоконсервирования выявляются латентные повреждения значительного количества клеток (до 15%), поэтому указанный криопротектор не нашел широкого применения [87].

Определено, что при замораживании тромбоцитов с 15% декстраном происходят значительные потери количества клеток в отогретых образцах (до 57±11%) и отсутствует способность к РГШ. При замораживании тромбоцитов с 9% декстраном достигнута сохранность 15% агрегации, индуцированной арахидоновой кислотой [79]. При отмывании ТК от декстрана происходит потеря более половины сохранившихся после отогрева тромбоцитов.

Таким образом, ГЭК и декстран являются неприемлемыми криопротекторами для низкотемпературного хранения тромбоцитов [126].

1.2.3 Криопротекторы смешанного типа действия

Из криопротекторов смешанного действия внимание исследователей привлекло вещество ГМБТОЭМ с ММ 378, обладающее выраженным хладоограждающим действием. ГМБТОЭМ в химически чистом виде представляет собой мелкокристаллическое вещество белого цвета без запаха, горьковато-сладковатое на вкус, хорошо растворимое в воде, а при нагревании - в метаноле, этаноле, хлороформе, четыреххлористом углероде [51].

Большая, чем у эндоцеллюлярных криопротекторов ММ свидетельствует о преимущественно экзоцеллюлярном типе действия ГМБТОЭМ [51]. Криопротектор образует прочные связи с внеклеточной водой, замедляет скорость образования кристаллов, взаимодействует с мембраной клеток, следствием чего является повышение ее устойчивости к повреждающему действию кристаллов.

Криофилактик обладает и эндоцеллюлярным механизмом криозащиты: проникает в клетку, связывает воду, изменяет кристаллообразование, стимулируя образование преимущественно мелких кристаллов льда при замораживании, снижает концентрацию солей внутри и вне клеток, тем самым предохраняя их от чрезмерного обезвоживания и уменьшая повреждение белковых структур клеток, образует связи с структурными компонентами мембраны клеток, что ведет к снижению степени ее повреждений при замораживании [51, 52].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ветошкин, Константин Александрович, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

]. Абдулкадыров, K.M. Гематология: Новейший справочник [Текст] / K.M. Абдулкадыров. - СПб.: Совет, 2005. - 928 с.

2. Азовская, С.А. Криоконсервирование тромбоцитов и их функциональная полноценность [Текст] / С.А. Азовская, Р.И. Волкова, В.Ф. Сокольцов // Гематология и трансфузиология. - 1995. - Т. 40, №5.

- С. 44-47.

3. Анализ использования компонентов и препаратов крови в отделении гематологии [Текст] / О.П. Чайковский, Н.И. Шпаковская, Н.Ф. Василевская, Ю.Н. Селило // Проблемы гематологии. - 2006. - Т. 51, №1. - С. 84.

4. Анализ обеспеченности медицинских организаций компонентами донорской крови [Текст] / Е.А. Селиванов, A.B. Чечеткин, М.Ш. Григорьян, А.Б. Макеев // Трансфузиология. - 2012. - № 3. - С. 91 - 92.

5. Берсенев, A.B. Судороги и кома как осложнение, связанное с токсичностью криопротектора (ДМСО) при инфузии гемопоэтических клеток в клинике трансплантации костного мозга [Текст] / A.B. Берсенев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2006.

- Т.1, №1. - С. 31-32.

6. Богданчикова, O.A. Замораживание тромбоцитов в криозащитных средах, содержащих различные комбинации криопротекторов [Текст] / O.A. Богданчикова, Т.М. Турина, A.M. Компаниец // Проблемы криобиологии. - 2008. - Т. 18, № 1. - С. 109 - ИЗ.

7. Богданчикова, O.A. Криоконсервирование тромбоцитов. Разработка криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов и исследование их эффективности [Текст] / O.A. Богданчикова, A.M.

Компанией,//Проблемы криобиологии-2009- Т. 19, №3,- С. 324 - 337.

8. Богданчикова, O.A. Физико-химические свойства растворов криопротекторов, их взаимосвязь с цитотоксичностью и криозащитной эффективностью на этапах криоконсервирования тромбоцитов донорской крови человека [Текст] / O.A. Богданчикова, В.В. Чеканова, A.M. Компанией // VII Международная научно-техническая конференция: Актуальные вопросы биологической физики и химии (26 - 30 апреля 2011 г.): тез. докл. - Севастополь, 2011. - С. 263 - 265.

9. Богданчикова, O.A. Замораживание тромбоцитов в криозащитных средах, содержащих различные комбинации криопротекторов [Текст] / O.A. Богданчикова, Т.М. Турина, A.M. Компаниец // Проблемы криобиологии. - 2008. - Т. 18, № 1. - С. 109-113.

10. Выбор метода заготовки тромбоцитного концентрата [Текст] / Н.М. Иваногло, Т.В. Крылова, И.В. Шапошникова, O.A. Каптюг // Трансфузиология. - 2014. - Т. 15, № 2. - С. 70 - 71.

11. Выбор способа получения концентрата тромбоцитов цельной крови [Текст] / М.Н. Губанова, Т.Г. Копченко, Е.Б. Жибурт // Вестник службы крови России. - 2009. - № 3. - С. 20 - 22.

12. Высочин, И.В. Криоконсервирование тромбоцитов. Технологические подходы замораживания и методы контроля качества (обзор литературы) [Текст] / И.В. Высочин, E.H. Кобзева // Трансфузиология. -2012. -№4. -С. 31-41.

13. Гордиенко, Е.А. Физические основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий [Текст] / Е.А. Гордиенко, Н.С. Пушкарь. - Киев: Наукова думка, 1994. - 144 с.

14. Государственная Фармакопея Российской Федерации: Часть 1. - 12-е

изд. - М.: Изд-во научн. центр экспертизы средств медицинского применения, 2008 г. - 704 с.

15. Долгов, В.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза [Текст] / В.В. Долгов, П.В. Свирин // М. - Тверь: Изд-во Триада, 2005. - 227 с.

16. Долгов, В.В. Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство. В 2 томах [Текст] / В.В. Долгов, В.В. Меньшиков // Изд-во Геотар-Медиа, 2012. - Т. 1. - 928 с.

17. Донорство компонентов крови в Российской Федерации [Текст] / A.B. Чечеткин, А.Б. Макеев, В.Е. Солдатенков [и др.] // Трансфузиология. -2013. -№2. -С.4- 11.

18. Захаров В.В. Консервирование тромбоцитов замораживанием при -80°С под защитой диметилацетамида [Текст]: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - СПб, 1996. - 21 с.

19. Ивашкина, Е.П. Методы оценки агрегационных свойств тромбоцитов [Текст] / Е.П. Ивашкина, С.А. Садков // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины Всероссийское совещание (27 - 28 мая 2008 г.). - Киров, 2010. - С. 72 - 73.

20. Изучение токсичности нового криоконсерванта для тромбоцитов [Текст] / А.Ю. Яленский, Е.П. Сведенцов, Г.А. Гребенева [и др.] // Актуальные вопросы современной медицины (Епифановские чтения). -Киров, 2003. - С. 104- 105.

21. Инструкция по криоконсервированию клеток крови. - М., 1995. - 21 с.

22. К решению проблемы криоконсервирования тромбоцитов [Текст] / В.Н. Вильянинов, A.B. Нечеткий, С.М. Романенко [и др.] // Известия СПбГУНиПТ. - 2009. - С. 53 - 55.

23. Качественная оценка тромбоцитных концентратов, полученных различными методами [Текст] / Е.С. Клементьева, C.B. Сидоркевич, Г.И. Петренко [и др.] // Трансфузиология. - 2011. - Т. 12, № 2. - С. 71.

24. Компаниец A.M. Консервирование концентратов тромбоцитов и их лечебная эффективность [Текст]: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 1992.- 52 с.

25. Компанией, A.M. Криоконсервирование тромбоцитов с криозащитными растворами, содержащими комбинации криопротекторов [Текст] / A.M. Компанией, O.A. Богданчикова // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины: Всерос. научн.-практ. конф. посвящ. 50-летию ФГУ КНИИГиПК ФМБА России (6-7 окт., 2010 г.). - Киров, 2010. - С. 108.

26. Контроль качества криоконсервированных тромбоцитов [Текст] / И В. Высочин, М.И. Лазаренко, E.H. Кобзева [и др.] // Трансфузиология. -2011.-Т. 12, №2.-С. 49 - 50.

27. Концепция обеспечения тромбоцитными компонентами пациентов в многопрофильном лечебном учреждении [Текст] / В.Н. Вильянинов, С.П. Калеко, С.М. Романенко [и др.] // Трансфузиология. - 2012. - № 3. -С. 40-41.

28. Криоконсервирование терапевтических доз тромбоцитных концентратов [Текст] / Ф.С. Шерстнев, A.A. Костяев, C.B. Утемов [и др.] // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины Всероссийское совещание (27 - 28 мая 2008 г.). - Киров, 2008. - С. 52 -53.

29. Криоконсервирование тромбоцитов с диметилсульфоксидом [Текст] / И.В. Фефелова, Д.М. Мхеидзе, Г.Д. Селидовкин [и др.] // Гематология и

трансфузиология - 1991. - №6. - С. 30 - 32.

30. Криоконсервирование тромбоцитов. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания [Текст] / O.A. Богданчикова, В.А. Киреев, А.Т. Ходько, A.M. Компанией // Проблемы криобиологии. - 2010. - Т.20, №4. - С. 443 - 452.

31. Кузнецов, К.В. Консервирование тромбоцитов замораживанием при -80°С по экспоненциальной программе (экспериментальное исследование) [Текст]: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - СПб., 2006. -23 с.

32. Мазуров A.B. Физиология и патология тромбоцитов [Текст] / A.B. Мазуров. - М.: Литтерра. - 2011. - 480 с.

33. Метаболические изменения при хранении тромбоцитных концентратов, заготовленных разными методами [Текст] / О.В. Карпова, ЕВ. Ройтман, И.М. Колесникова [и др.] // Трансфузиология. - 2014. - Т. 15, №2.-С. 75 -76.

34. Методы приготовления лечебных доз тромбоцитных концентратов [Текст] / М.В. Мартынова, H.A. Маслова, C.B. Сидоркевич [и др.] // Трансфузиология. - 2012. - № 3. - С. 78 - 79.

35. Морфофункциональная оценка тромбоцитов, полученных на сепараторах клеток крови [Текст] / C.B. Варламова, М.М. Петров, Т.А. Балакина [и др.] // Гематология и трансфузиология. - 2006. - Т.51, № 6. -С. 24-30.

36. Низкотемпературное замораживание тромбоцитов с криоконсервантом «Тромбокриодмац» по экспоненциальной программе [Текст] / Е.П. Сведенцов, C.B. Утемов, К.В. Кузнецов, Н.М. Турина //

Трансфузиология. - 2007. - т.8, № 1 - 2. - С. 68 - 69.

37. Низкотемпературные технологии хранения клеток крови и костного мозга [Текст] / A.B. Чечеткин, В.Н. Вильянинов, Ш.М. Багаутдинов [и др.] // Здравоохранение и медицинская техника. - 2005. - Т. 18, № 4. -С. 16- 18.

38. Николенко, A.B. Криопротекторные свойства полиолов и их производных при замораживании тромбоцитов [Текст]: автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Харьков, 1991. - 19 с.

39. О возможных факторах повреждения биологических объектов и их ДНК при криоконсервации [Текст] / A.B. Зинченко, В.Д. Зинченко, Е.Ф. Копейка, Е.В. Онищенко // Цитология. - 2004. - Т. 46, №9. - С. 796.

40. О качестве концентратов тромбоцитов [Текст] / Н.Г. Филина, В.А. Иванчин, Н.Ю, Трофимова [и др.] //Трансфузиология. - 2011. - Т. 12, № 4.-С. 32 - 37.

41. О механизме защиты криоконсервируемых биообъектов с помощью многокомпонентных криопротекторных растворов [Текст] / А.К. Осецкий, Т.М. Турина, A.J1. Кирилюк, Н.В. Репин // Проблемы криобиологии. - 2008. - Т. 18, №2. - С. 231.

42. Опыт работы КГУЗ «Красноярский краевой центр крови №1» по заготовке концентрата тромбоцитов методом автоматического тромбоцитафереза на аппарате «Haemonetics MCS+» [Текст] / Н.Г. Филина, Н.Ю. Трофина, В.Е. Хегай, O.A. Склярова // Вестник службы крови России. - 2008. - №3. - С. 23 - 27.

43. Организация производства по заготовке донорского тромбоцитного концентрата в КГБУЗ «Красноярский краевой центр крови №1». Поиск

новых решений [Текст] / Н.Г. Филина, В.А. Иванчин, Н.Ю. Трофина, Т.Э. Гончаренко // Вестник службы крови России. - 2010. - №2. - С. 18 -20.

44. Осташко, В.Ф. Температурный шок клеток как гидравлический удар в резонансной системе [Текст] / В.Ф. Осташко, Ф.И. Осташко // Цитология. - 2004. - Т. 46, №9. - С. 831 - 832.

45. Оценка эффективности деятельности учреждений службы крови по заготовке тромбоцитного концентрата [Текст] / A.B. Чечеткин, В.В. Данильченко, М.Ш. Григорьян [и др.] // Трансфузиология. - 2014. - Т. 15, №2.-С. 8-15.

46. Полежаева, Т.В. Комбинированные криоконсерванты в сохранении функций лейкоцитов [Текст]: автореф. дис. ... д-ра биол. наук - СПб., 2013.-39 с.

47. Получение, контроль качества и клиническое применение концентратов тромбоцитов (перевод с английского) [Текст] / Н. Schrezenmeier, М. М. Miiller, W. Sireis [et al.] // Трансфузиология. -2012. - Т. 13, №2. - С. 69 - 82.

48. Пособие по изучению адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов [Текст] / A.J1. Берковский, С.А. Васильева, J1.B. Жердева [и др.]. - М.: Русский врач, 2003. - 29 с.

49. Распределение аллелей НРА у доноров компонентов крови города Кирова [Текст] / Е.В. Бутина, A.A. Елов, Г.А. Зайцева, Ф.С. Шерстнев // Трансфузиология. - 2011. - Т. 12, № 2. - С. 44 - 45.

50. Руководство по общей и клинической трансфузиологии [Текст] / Ю.Л. Шевченко, В.Н. Шабалин, М.Ф. Заривчацкий, Е.А. Селиванов. - СПб.: Фолиант, 2003.-608 с.

51. Сведенцов, Е.П. Криоконсерванты для живых клеток [Текст] / Е.П. Сведенцов. - Сыктывкар: Информационно-издательский отдел Коми НЦ УрО РАН, 2010.-80 с.

52. Сведенцов, Е.П. Функциональное состояние лейкоцитов после выхода из криоанабиоза [Текст] / Е.П. Сведенцов, Т.В. Туманова // Екатеринбург: УрО РАН, 2007. - 81 с.

53. Селезнёва О.М. Криоконсервирование тромбоцитов с применением нового ограждающего раствора [Текст]: автореф. дис. ... канд. биол. наук,- СПб., 1996.-21 с.

54. Совершенствование криоконсервирования тромбоцитов [Текст] / Е.Б. Жибурт, В.Н. Вильянинов, С.П. Калеко [и др.] // Медицинская техника. -2000. -№1.-С. 45 -47.

55. Совершенствование подсчета клеток в компонентах крови [Текст] / Е.А. Перфильева, Л.Г. Плеская, Т.В. Фокина, H.H. Калинин // Гематология и трансфузиология. - 2003. - Т.48, №2. - С. 44 - 46.

56. Совершенствование получения концентрата тромбоцитов [Текст] / Т А. Коденев, Г.А. Ващенко, В.И. Капустов, Е.Б. Жибурт // Вестник службы крови России. - 2010. - №2. - С. 22 - 25.

57. Современные возможности обеспечения тромбоцитным концентратом пациентов онкогематологического профиля [Текст] / С.А. Трофимова, О.П. Килимчук, Л.А. Уткина [и др.] // Трансфузиология. - 2012. - № 3. -С. 100-101.

58. Стандарты качества в службе крови [Текст] / под ред. Е.Б. Жибурта. -М.: НПЦ Интелфорум, 2005. - 256 с.

59. Становление, современное состояние и перспективы развития криоконсервирования клеток крови в России [Текст] / В.Н.

Вильянинов, A.B. Чечеткин, Ш.М. Багаутдинов, A.B. Копелец // Проблемы социальной гигиены, здравоохранения и истории медицины. -2005. - №2. - С. 38-41.

60. Технический регламент о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии: утв. постановлением Правительства Рос. Федерации от 26 января 2010 г. № 29.-М., 2010.-33 с.

61. Трофимова, С. А. Сравнение морфологических характеристик тромбоцитного концентрата, полученного методами автоматического афереза и пулирования из лейкотромбослоя (востановленного из дозы крови) [Текст] / С.А. Трофимова, О.П. Килимчук, Ю.И. Новикова // Трансфузиология. - 2011. - Т. 12, № 2. - С. 118 - 119.

62. Хубутия, М.Ш. Карантинизация криоконсервированных эритроцитов и тромбоцитов - основа безопасности гемотрансфузий [Текст] / М.Ш. Хубутия, E.H. Кобзева, И.В. Высочин // Трансфузиология. - 2014. - Т. 15, №2.-С. 108- 109.

63. Шерстнев, Ф.С. Эффективность трансфузий криоконсервированных при -80°С донорских тромбоцитных концентратов у больных гемобластозами [Текст]: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - СПб., 2013. -23 с.

64. Эффективность трансфузий нативных и криоконсервированных тромбоцитов у больныхы гемобластозами [Текст] / Ф.С. Шерстнев, A.A. Костяев, C.B. Утемов [и др.] // Вестн. службы крови России. -2013. -№3. - С. 31 -34.

65. Яленский, А.Ю. Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза [Текст]: автореф. дис. ... канд. мед. наук-

Киров,2007,- 20 с.

66. Яленский, А.Ю. Новый метод криоконсервирования тромбоцитов при температуре -40°С [Текст] / А.Ю. Яленский, Е.П. Сведенцов // Пермский медицинский журнал. - 2003. - Т. XX, № 2. - С. 197 - 199.

67. A modified differential scanning calorimetry for determination of cell volumetric change during the freezing process [Текст] / D. Luo, X.Han, L.He, X.Cui [et al.] // Cryo Letters. - 2002. - Vol. 23,- P. 229-36.

68. A multicenter randomized study of the efficacy of transfusions with platelets stored in platelet additive solution II versus plasma [Текст] / J.L.H. Kerkhoffs, J.C. Eikenboom, M.S. Schipperus [et al.] // Blood. - 2006. - Vol. 108, N9.-P. 3210-3215.

69. A randomized controlled trial evaluating recovery and survival of 6% dimethyl sulfoxide-frozen autologous platelets in healthy volunteers [Текст] / L.J. Dumont, J.A. Cancelas, D. F. Dumont [et al.] // Transfusion. - 2013. -Vol. 53, Is. 1. - P. 128-137.

70. Ahmed, A.S. In vitro assessment of platelet storage lesion in leucoreduced random donor platelet concentrates [Текст] / A.S. Ahmed, O. Leheta, S. Younes // Blood Transfus. - 2010. - Vol. 8, N1. - P. 28 - 35.

71. Arnaud, F.G. Cryopreservation of human platelets with 1,4 M glycerol at -196°C [Текст] / F.G. Arnaud, D.E. Pegg // Tromb. Res. - 1989. - Vol.53, N6.-P. 585 - 594.

72. Automated preparation of platelet concentrates from pooled buffy-coats: in vitro studies and experiences with the OrbiSac system [Текст] / S. Larsson, P. Sandgren, A. Sjodin [et al.] // Transfusion. - 2005. - Vol. 45, N5. - P. 743-751.

73. Automated preparation of whole blood-derived platelets suspended in two different platelet additive solutions and stored for 7 days [Текст] / J. Cid, L. Magnano, P. Molina [et al.] // Transfusion - 2014. - Vol. 54, Is. 2. - P. 426

-433.

74. Badlou, B.A. Prolonged platelet preservation by transient metabolic suppression [Текст] / B.A. Badlou, M.J.W. Useldijk, W.M. Smidt // Transfusion. - 2005. - Vol. 45, N4. - P. 2 - 4.

75. Blajchman, M.A. Improving the bacteriological safety of platelet transfusions [Текст] / M.A. Blajchman, M. Goldman, F. Baeza // Transfus. Med; Rev. - 2004. - Vol. 18. - P. 11-24.

76. Blood collection and transfusion in the United States in 2001 [Текст] / M.T. Sullivan, R. Cotten, E.J. Read, E.L. Wallace // Transfusion.- 2007,- Vol. 47, №3- P. 366-368.

77. Bode, A.P. Lyophilized platelets: fifty years in the making [Текст] / A.P. Bode, Т.Н. Fischer // Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol. - 2007. - Vol.35, N1,-P. 125 - 133.

78. Brand, A. Platelet transfusion therapy: from 1973 to 2005 [Текст] / A. Brand, V. Novotny, B. Tomson // Hum. Immunol. - 2006. - Vol. 67, N6. -P. 413-418.

79. Brodthagen, U.A. Platelet cryopreservation with glycerol, dextran, and mannitol: recovery of 5-hydroxytryptamine uptake and hypotonic stress response [Текст] / U.A. Brodthagen, W.J. Armitage, N. Parmar // Cryobiology. - 1985. - Vol. 22, N1. - P. 1-9.

80. Collection of hyperconcentrated platelet with Trima Accel [Текст] / J. Ringwald, T. Duerler, O. Frankow [et al.] // Vox Sanguinis. - 2006. - Vol. 90, Is. 2.-P. 92-96.

81. Comparative in vitro evaluation of apheresis platelets stored with 100% plasma versus bicarbonated Ringer's solution with less than 5% plasma [Текст] / Sh. Oikawa, D. Sasaki, M. Kikuchi [et al.] //Transfusion. - 2013. -Vol. 53. - Is. 3. - P. 655-660.

82. Comparison of various dimethylsulphoxide containing solutions for cryopreservation of leucoreduced platelet concentrates [Текст] / M.J. Dijkstra-Tiekstra, D. de Korte, R.N. Pietersz [et al.] // Vox Sang - 2003,-Vol. 85, №4,- P. 276-282.

83. Controlled-rate versus uncontrolled-rate freezing as predictors for platelet cryopreservation efficacy [Текст] / Balint В., Paunovic D., Vucetic D. [at al.] // Transfusion.- 2006,- Vol. 46, №2,- P. 230-235.

84. Cryopreservation of buffy-coat-derived platelet concentrates in dimethyl sulfoxide and platelet additive solution [Текст] / L.N. Johnson, K.M. Winter, S. Reid [et al.] // Cryobiology. - 2011. - Vol. 62, Is. 2. - P. 91 -160.

85. Cryopreservation of canine platelets [Текст] / E.H. Appleman, B.S. Sachais, R. Patel [et al.] // J. Vet. Intern. Med. - 2009. - Vol. 23, N1. - P. 138-145.

86. Cryopreservation of human platelets with hydroxyethyl starch in a one-step procedure [Текст] / A. Sputtek, A. Brohm, I. Classen [et al.] // Cryo Letters. - 1987. - Vol. 8, N2. - P. 216-229.

87. Cryopreservation of human platelets with polyvinylpyrrolidone [Текст] / J.A. Smillie, A C. Munro, G.C. Wood, R. Mitchell // Transfusion. - 1981. - Vol. 21, N5. -P. 552 - 556.

88. Ding, G.L. Cryopreservation of platelets after storage at normal temperature for 3 days and its clinical practice [Текст] / G.L. Ding // Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. - 2008. - Vol. 16, N5.-P. 1196- 1200.

89. Dumont, L.J. Seven-day storage of apheresis platelets: report of an in vitro study [Текст] / L.J. Dumont, T. Vanden Broeke // Transfusion. - 2003. -Vol.43, Is.2.-P. 143 - 150.

90. Effects of the addition of second-messenger effectors to platelet concentrates separated from whole-blood donations and stored at 4 degrees С or -80 degrees С [Текст] / M. Lozano, G. Escolar, R. Mazzara [et al.] // Transfusion. - 2000. - Vol. 40, N5. - P. 527 - 534.

91. Evaluation of biochemical parameters in platelet concentrates stored in glucose solution [Текст] / A. M. Amorini, M. Tuttobene, G. Lazzarino, G. Denti // Blood Transfusion. - 2007. - №1. - P. 24 - 32

92. Evaluation of four different methods for platelet freezing. In vitro and in vivo studies [Текст] / A. Angelini, A. Dragani, A. Berardi [et al.] // Vox Sang. -1992,- Vol. 62, N3,-P. 146-151.

93. Evaluation of in vitro storage properties of apheresis platelets suspended in a bicarbonate-containing additive solution with low levels of plasma and stored with a 24-hour interruption of agitation [Текст] / A. Skripchenko, A. Turgeon, D. Thompson-Montgomery [et al.] // Vox Sanguinis. - 2014. -Vol.106, Is. 4.-P. 337 -343.

94. Fahy, G.M. Cryoprotectant toxicity neutralization [Текст] / G.M. Fahy // Cryobiology. - 2010. - Vol. 60, N3. - P. 45-53.

95. From the donor's arm to blood product: a study on bacterial contamination of apheresis platelet concentrates [Текст] / A. M. Leo, M. M. Salvadego, M. G. Pi va [et al.] // Blood Transfusion. - 2007. - Is. 3. - P. 120 - 129.

96. Fuller В., Lane N., Benson E. Life in the frozen State. - London, New York, Washington: CRS Press, 2004. - 672 p.

97. Glucose ameliorates the metabolic profile and mitochondrial function of platelet concentrates during storage in autologous plasma [Текст] / A.M. Amorini, M. Tuttobene, F. M. Tomasello [et al.] // Blood Transfusion. -2013.-Is. 1.-P. 61-70.

98. Handin, R.I. Platelet respons to hypotonic stress after storage [Текст] / R.I. Handin, N.L. Fortier, C.R. Valeri // Transfusion. -1970. - Vol.10, №6 - P. 305 -309.

99. Heaton, W. A. Costs and benefits of PAS platelets: A mix of science, quality, and value [Текст] / W. A. Heaton // Transfusion. - 2013. - Vol. 53, Is. 11. - P. 2597-2602.

100. Impact of glucose and acetate on the characteristics of the platelet storage lesion in platelets suspended in additive solutions with minimal plasma [Текст] / C.Saunders, G.Rowe, K.Wilkins, P.Collins // Vox Sang. - 2013. -Vol. 105, Is. 1. - P. 1 - 10.

101. Improved extension of platelet storage in a polyolefin container with higher oxygen permeability [Текст] / T.Yuasa, H.Ohto, R.Yasunaga [et al.] // British Journal of Haematology. - 2004. - Vol.126, Is.l. - P. 153 - 159.

102. Kaufman, R.M. Uncommon cold: could 4 degrees С storage improve platelet function? [Текст] / R.M. Kaufman // Transfusion. - 2005. - Vol.45., Is. 9. -P. 1407 - 1412.

103. Kickler, T.S. Platelet biology - an overview [Текст] / T.S. Kickler // Transfusion Alternatives in Transfusion Medicine. - 2006. - Vol. 8, Is. 2. — P. 79 - 85.

104. Компаниець A.M. Дослщження морфофункцюнально! збереженност1 тромбоцшчв на етапах крюконсервування / A.M. Компашець, О.В. Книш, Т.М. Гурша [та ш.] // Проблемы криобиологии. - 2006. - Т. 16,

№2.-С. 182-191.

105. Mazur, P. A biologist's view of the relevance of thermodynamics and physical chemistry to cryobiology [Текст] / P. Mazur // Cryobiology. -2010.-Vol. 60, Is. 1,-P. 4-10.

106 Mazur, P. Principles of Cryobiology [Текст] / P.Mazur // In: Life in the frozen State. - London, New York, Washington: CRS Press, 2004. - 672 p.

107. Michelson, A.D. How platelet work: platelet function and dysfunction [Текст] / A.D. Michelson // J. Thromb. Thrombolysis. - 2003. - Vol. 16, N1-2. -P. 7-12.

108. Mohanty, D. Current concepts in platelet transfusion [Текст] / D. Mohanty // Asian J. Transfus. Sci. - 2009. - Vol. 3, N1. - P. 18 - 21.

109. Murphy, S. What's so bad about old platelets? [Текст] / S. Murphy // Transfusion. - 2002. - Vol. 42, Is. 7. - P. 809 - 811.

110. Nasiri, S. Infusible platelet membrane as a platelet substitute for transfusion, an overview [Текст] / S.Nasiri // Blood Transfusion. - 2013. - Is. 3. - P. 337 -342.

111. Paired in vitro and in vivo comparison of apheresis platelet concentrates stored in platelet additive solution for 1 versus 7 days [Текст] / A.Shanwell, B.Diedrich, C.Falker [et al.] // Transfusion. - 2006. - Vol.46, lss.6. - P. 973 -979.

112. Platelet concentrates produced from whole blood using the Atreus processing system [Текст] / S. Thomas, M. Beard, M. Garwood [et al.] // Vox Sanguinis. - 2009. - Vol. 97, Is. 2. - P. 93 - 101.

113. Platelet cryopreservation using a combination of epinephrine and dimethyl sulfoxide as cryoprotectants [Текст] / H. Xiao, K. Harvey, C.A. Labarrere,

R. Kovacs // Gryobiology. - 2000. - Vol. 41, N2. - P. 97-105.

114. Platelet cryopreservation using dimethylsulfoxide/polyethylene glycol/sugar mixture as cryopreserving solution [Текст] / P. Borzini, G. Assali, M.R. Riva [et al.] // Vox Sang. - 1993. - Vol. 64, N4. - P. 248-249.

115. Platelet cryopreservation using a reduced dimethyl sulfoxide concentration and second-messenger effectors as cryopreserving solution [Текст] / M. L. Lozano, J. Rivera, J. Corral [et al.] // Cryobiology. - 1999. - Vol. 39, N1. -P. 1-12.

116. Platelet storage in Fresenius/NPBI polyolefin and BTHC - PVC bags: a direct comparison [Текст] / V.S. Hornsey, K. McColl, I.R. MacGregor [et al.] // Transfusion Medicine. - 2008. - Vol.18, Is. 4. - P. 223 - 227.

117. Quantitative, functional, morphological and ultrastructural recovery of platelets as predictor for cryopreservation [Текст] / В. Balint, D. Vucetic, Z. Trajkovic-Lakic [et al.] // Haematologia (Budap). - 2002. - Vol. 32, N4. -P. 363-375.

118. Slichter, S. New thoughts on the correct dosing of prophylactic platelet transfusions to prevent bleeding [Текст] / S. Slichter // Curr. Opin. Hematol.

— 2011. — 18 (6) — P. 427 - 435.

119. Slichter S.J. Platelet transfusion: future directions [Текст] // Vox Sang.-2004,- Vol. 8, Suppl. 2,-P. 47-51.

120. Sputtek, A. Cryopreservation of red blood cells and platelets [Текст] / A. Sputtek // Methods Mol. Biol. - 2007. - Vol. 368. - P. 283-301.

121. Stability of lyophilized human platelets loaded with small molecule carbohydrates [Текст] / J. X. Wang, C. Yang, Y. Wang [et al.] // CryoLetters.

- 2011. - Vol.32, Is. 2. - P. 123 - 130.

122. Storage of platelets: effects associated with high platelet content in platelet storage containers [Текст] / H. Gulliksson, P. Sandgren, A. Sjodin, K. Hultenby // Blood Transfusion. - 2012. - Is. 2. - P. 205 - 212.

123. Storage of platelets in additive solutions: a multicenter study of the in vitro effects of potassium and magnesium [Текст] / H. Gulliksson, J.P. AuBuchon, R. Cardigan, P.F. Van Der Meer [et al.] // Vox Sang. - 2003. - Vol 85, Is. 3. -P. 199-205.

124. Survival and recovery of apheresis platelets stored in a polyolefin container with high oxygen permeability [Текст] / S. Ezuki, T. Kanno, H. Ohto [et al ] // Vox Sang. - 2008. - Vol.94, Is.4. - P. 292 - 298.

125. Tanaka, K.A. The assessment of platelet function [Текст] / К.A. Tanaka // Transfusion Alternatives in Transfusion Medicine. - 2006. - Vol.8, Is. 2. -P. 95 - 105.

126. Taylor, M.A. Cryopreservation of platelets: an in-vitro comparison of four methods [Текст] / M.A. Taylor // J. Clin. Pathol. - 1981. - Vol. 34, N1. - P. 71-75.

127. Transfusion of platelet concentrates cryopreserved with ThromboSol plus low - dose dymethylsulfoxide in patients with severe thrombocytopenia: a pilot study [Текст] / P.Pedrazzoli, P.Noris, C.Perotti [et al.] // British Journal of Haematology. - 2000.- Vol. 108(3). - P.653 - 659.

128. Valeri, C.R. Freezing human platelets with 6 percent dymethylsulfoxide with removal of the supernatant solution before freesing and storage at -80°C without postthaw processing [Текст] / C.R. Valeri, G. Rango, S. Khuri // Transfusion.- 2005,- Vol. 45, №12,- P. 1890-1898.

129. Van der Meer, P.F. Storage of platelets in additive solution for up to 12 days with maintenance of good in vitro quality [Текст] / P.F. Van der Meer,

R.N.I. Pietersz, H.W. Reesink // Transfusion. - 2004. - Vol. 44, N8. - P. 1204-1211.

130. Veneziano, F. A. Commentary - Platelet therapy: open problems [Текст] / F. A. Veneziano // Blood Transfusion. - 2005. - Is. 4. - 257 - 267.

131. Viability and function of 8-day-stored apheresis platelets [Текст] / S.J.Slichter, D.Bolgiano, M.K.Jones [et al.] // Transfusion. - 2006. - Vol.46, Iss.10. - P. 1763 - 1769.