Комплексный анализ противомикробных пептидов в биологических средах организма тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат медицинских наук Карташов, Дмитрий Дмитриевич

• Карташов, Дмитрий Дмитриевич
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Карташов, Дмитрий Дмитриевич

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Противомикробные пептиды. Классификация и характеристика.

1.2. Продуценты противомикробных пептидов.

1.3. Регуляция экспрессии противомикробных пептидов и связь с Toll-подобными рецепторами.

1.4. Механизм действия противомикробных пептидов.

1.5. Механизмы клеточной гибели при взаимодействии с противомикробными пептидами.

1.6. Роль противомикробных пептидов во врожденном и приобретенном иммунитете.

1.7. Противомикробные пептиды в женской репродуктивной системе.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика клинических групп пациентов.

2.2. Схема эксперимента.

2.3. Получение клеток слизи цервикального канала.

2.4. Выделение нейтрофилов периферической крови.

2.5. Культивирование нейтрофилов.

2.6. Выделение РНК из клеток слизистой цервикального канала и нейтрофилов крови.

2.7. Реакция обратной транскрипции.

2.8. Полимеразная цепная реакция в реальном времени.

2.9. Электрофорез в агарозном геле.

2.10. Подсчёт и стандартизация результатов полимеразной цепной реакции в реальном времени.

2.11. Иммуноферментный анализ.

2.12. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты и обсуждение.

3.1. Разработка систем количественного определения уровня экспрессии генов Р-дефенсина 1 (HBD-1) и а-дефенсина 1 (HNP-1) с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени.

3.2. Оценка дефенсинов на локальном и системном уровне в норме и при урогенитальной инфекции.

3.2.1. Экспрессия гена HBD-1 в слизистой урогенитального тракта в норме и при урогенитальной инфекции.

3.2.2. Концентрация HNP1-3 в норме и при урогенитальной инфекции.

3.3. Изменение экспрессии HBD-1 у женщин с физиологически протекающей беременностью и патологией беременности инфекционного генеза.

3.3.1 Оценка уровня экспрессии HBD-1 при физиологически протекающей беременности.

3.3.2. Экспрессия гена HBD-1 клетками слизистой цервикального канала при патологии беременности инфекционного генеза.

3.4. Уровень а-дефенсинов (HNP1-3) при физиологически протекающей беременности и при патологии беременности.

3.5. Динамика экспрессии гена и выработки HNP-1 нейтрофилами периферической крови in vitro.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Комплексный анализ противомикробных пептидов в биологических средах организма»

Актуальность темы

Механизмы врожденного иммунитета представляют первую филогенетически наиболее древнюю линию защиты организма от различных патогенов. Врожденный иммунитет предотвращает развитие инфекции на ранних этапах, когда механизмы адаптивного иммунитета еще не задействованы, так как для реализации механизмов врожденного иммунитета не требуется предварительного контакта с антигеном (58).

В течение последнего десятилетия активно изучают биологию, структуру и функции нового класса эффекторных молекул врожденного иммунитета — противомикробных пептидов (ПМП).

ПМП представляют собой обширную группу небольших катионных белков, способных поражать различные микроорганизмы, среди которых вирусы, бактерии, грибы и простейшие (135).

Противомикробные пептиды представляют собой естественные эндогенные антибиотики и осуществляют функцию так называемого мгновенного иммунитета — «instant immunity». С другой стороны они являются сигнальными молекулами, вовлеченными в процессы регуляции и активации клеток иммунной системы и репарации тканей (28, 122). ПМП формируют молекулярную основу врожденного иммунитета и участвуют в реализации ряда защитно-приспособительных реакций.

Полифункциональность ПМП в значительной степени определяет эффективность иммунных процессов, протекающих при воспалении, урогенитальных инфекциях, септическом шоке и др.

В настоящее время урогенитальная инфекция рассматривается как одна из основных причин развития хронических простатитов, бесплодия, патологии беременности, таких как внутриутробное инфицирование плода, невынашивание,, неразвивающаяся беременность и др. (35). Однако остается' неясным, почему одни и те же инфекционные агенты в одних случаях вызывают реализацию внутриутробной инфекции и преждевременные роды, а в других - практически не влияют на течение беременности. Это вызывает необходимость поиска новых подходов к изучению роли механизмов врожденного иммунитета при урогенитальной инфекции, разработки новых диагностических критериев.

Исследование экспрессиии (3-дефенсинов клетками слизистой оболочки урогенитального тракта и а-дефенсинов в плазме и в культуре нейтрофилов периферической крови здоровых доноров, больных с патологиями инфекционного генеза (УГИ, ВУИ, хронический простатит и другие) актуально, так как дает возможность понять роль противомикробных пептидов в защите репродуктивной системы от воздействия различных патогенов, широко представленных в урогенитальном тракте. Исследование экспрессии дефенсинов на уровне генов и синтеза белка у беременных с урогенитальной инфекцией может иметь диагностическую и прогностическую значимость при невынашивании беременности и подозрении на внутриутробное инфицирование плода.

В связи с этим целью работы явилось комплексное исследование противомикробных пептидов (дефенсинов) в биологических средах организма в норме и при инфекциях.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1) Разработать лабораторные варианты систем ПЦР в реальном времени для количественного определения экспрессии генов катионных противомикробных пептидов HBD-1 и HNP-1.

2) Определить уровень экспрессии гена HBD-1 в клетках слизистой урогенитального тракта мужчин и женщин в норме и при урогенитальной инфекции.

3) Оценить экспрессию HBD-1 в слизистой цервикального канала у женщин с физиологически протекающей беременностью и у беременных с урогенитальной инфекцией.

4) Определить уровень нейтрофильных пептидов HNP1-3 в плазме крови здоровых женщин и при патологии беременности инфекционного генеза.

5) Исследовать динамику экспрессии гена и выработки пептида (а-дефенсина HNP-1) нейтрофилами периферической крови беременных с урогенитальной инфекцией и у больных сепсисом в сравнении с группой здоровых доноров.

Научная новизна

Разработан комплексный подход к оценке противомикробных пептидов у человека, основанный на изучении ПМП на системном и локальном уровнях. Анализ а-дефенсинов проведен на уровне экспрессии гена и синтеза молекулы пептида.

С помощью разработанного подхода и систем ПЦР-РВ для количественного определения уровня экспрессии генов исследована роль (3-дефенсина 1 (HBD-1) и а-дефенсина 1 (HNP-1) в защите от патогенов у здоровых доноров и у больных с урогенитальной инфекцией.

Особую значимость представляют полученные данные о экспрессии ПМП на уровне слизистой цервикального канала и в нейтрофилах крови при физиологически развивающейся беременности и при беременности, осложненной урогенитальной инфекцией (невынашивание, внутриутробное инфицирование, неразвивающаяся беременность). Показано, что при преждевременных родах и реализации ВУИ происходит снижение экспрессии HBD-1 в клетках слизистой цервикального канала и увеличение экспрессии TLR2. При неразвивающейся беременности существенное значение имеет снижение концентрации нейтрофильных пептидов HNP1-3 в плазме крови.

Обнаруженное снижение уровня экспрессии гена |3-дефенсина - HBD-1 в эпителиальных клетках уретры и снижения концентрации нейтрофильных пептидов HNP-1-3 в секрете простаты при хроническом простатите позволяет обозначить их роль в развитии иммунодефицитного состояния.

Положения, выносимые на защиту

1. Разработаны лабораторные варианты систем ПЦР в реальном времени для количественного определения экспрессии генов катионных противомикробных пептидов HBD-1 и HNP-1 и гена «домашнего хозяйства» - р-актина.

2. С использованием разработанных систем были получены данные, свидетельствующие о том, что слизистая урогенитального тракта в норме защищена противомикробными пептидами. При урогенитальной инфекции происходит уменьшение экспрессии гена HBD-1 в клетках слизистой уретры и цервикального канала.

3. Физиологическое течение беременности сопровождается активацией системы противомикробных пептидов, что проявляется в увеличении экспрессии гена HBD-1 в слизистой цервикального канала и концентрации HNP1-3 в периферической крови.

4. Разработанные тест-системы позволили выявить нарушения в системе противомикробных пептидов: на уровне экспрессии гена HNP-1 и выработки молекулы данного пептида при урогенитальной инфекции и сепсисе.

Практическая значимость работы

Выявленные изменения в экспрессии и продукции ПМП у больных УГИ помогают уточнить патогенез данной патологии, а при беременности могут служить прогностическими маркерами течения беременности.

Внедрение результатов работы в практику

Разработаны и внедрены в клиническую практику системы на основе ПЦР-РВ для определения экспрессии генов противомикробных пептидов (р-дефенсина 1 (HBD-1) и а-дефенсина 1 (HNP-1).

С использованием разработанных систем определены маркеры развития преждевременных родов, внутриутробного инфицирования. Создан комплекс маркеров на основе исследования экспрессии генов HBD-1 и TLR2 в цервикальном канале женщин, позволяющих с большей долей вероятности прогнозировать преждевременные роды и развитие внутриутробного инфицирования. Снижение концентрации HNP-1-3 в плазме крови менее 0,1 нг/мл ассоциировано с развитием неразвивающейся беременности. Публикации результатов исследования

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 6 статей в центральной печати, включая патент №2009108294 «Способ прогнозирования преждевременных родов инфекционного генеза» (положительное решение от 07.05.2010).

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, указателя литературы, содержащего 178 источников. Работа выполнена на 104 страницах машинописного текста иллюстрирована 7 таблицами и 37 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Карташов, Дмитрий Дмитриевич

Выводы

1) Разработаны лабораторные варианты систем ПЦР в реальном времени для количественного определения экспрессии генов катионных противомикробных пептидов HBD-1 и HNP-1.

2) По сравнению со здоровыми донорами при урогенитальной инфекции происходит снижение bj 2-3 раза экспрессии гена HBD-Г в клетках слизистой цервикального канала и в клетках слизистой уретры мужчин.

3) Физиологическое течение беременности сопровождается увеличением экспрессии генов р-дефенсина HBD-1 в клетках слизистой цервикального канала и возрастанием концентрации нейтрофильных а-дефенсинов -HNP1-3 в периферической крови.

4) У беременных с урогенитальной инфекцией выявлено уменьшение экспрессии гена HBD-1 в эпителиальных клетках цервикального канала и снижение концентрации нейтрофильных пептидов HNP1-3 в плазме и амниотической жидкости.

5) При неразвивающейся беременности концентрация нейтрофильных пептидов HNP1-3 в плазме крови резко снижается, у 40% HNP1-3 не определяются.

6) В культуре in vitro изучена динамика экспрессии нейтрофилами дефенсина HNP-I на уровне мРНК и белка. Спонтанная экспрессия гена не отличается у здоровых беременных и беременных женщин с урогенитальной инфекцией. Тогда как, секреция этого пептида у беременных с урогенитальной инфекцией происходит на 6 часов позднее, чем у здоровых беременных.

7) У беременных с урогенитальной инфекцией стимуляция нейтрофилов ЛПС в низкой дозе вызывала более выраженный рост экспрессии гена HNP-1, что может быть обусловлено праймингом клеток при урогенитальной инфекции.

8) Уровень экспрессии гена HNP-1 нейтрофилами при сепсисе в 10 раз превышал таковой в группе здоровых доноров, в то время, как выработка а-дефенсинов (HNP1-3) нейтрофилами в течение 6-ти часов культивирования была снижена более, чем в 15 раз по сравнению со здоровыми донорами.

Практические рекомендации

Предложенный способ оценки экспрессии гена HBD-1 в клетках слизистой цервикального канала целесообразно включать при оценке показателей врожденного иммунитета для своевременного прогнозирования внутриутробной инфекции и преждевременных родов у беременных с урогенитальной инфекцией.

Снижение концентрации HNP1-3 в плазме крови ниже 30 пг/мл позволяет с высокой точностью отнести данных пациенток к группе высокого риска по развитию неразвивающейся беременности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Карташов, Дмитрий Дмитриевич, 2010 год

1. Абрамченко В. В., Костючек Д.Ф., Хаджиева Э.Д. Гнойно-септическая инфекция в акушерстве и гинекологии. Руководство — СПб, 2005, 464 с.

2. Абуд И.Ю., Прилепская В.Н. Хламидийная инфекция в акушерстве и гинекологии // РМЖ, 1998, том 6, № 5

3. Адаскевич В.П. Инфекции, передаваемые половым путём. Руководство для врачей. —Н. Новгород, Изд-во НГМА, 1999: 415.

4. Анохин В.А., Хаертынов Х.С., Хасанова Г.Р. Внутриутробная инфекция (Клиника, диагностика и профилактика) — М., Медицина,1999, 95 с.

5. Байрамова Г.Р., Прилепская В.М. Кандидозные инфекции в акушерстве и гинекологии // Cons Prov.-2001, Tl, №3, с. 20-21

6. Бахарева И.В., Таранец А.Н., Ковальчук JI.B, Ганковская JI.B., Долгина Е.Н. Функциональная активность нейтрофилов и система цитокинов у беременных с урогенитальной инфекцией // Вестник РГМУ, 2004; 5 (36), с. 41—45.

7. Башмакова Н.В., Моторнюк Ю.И. Особенности иммунного ответа в зависимости от характера течения урогенитальной хламидийной инфекции у беременных // Рос. вестн. акуш.-гинек., 2001, №2, с. 8-11

8. Бубнова Н.И., Младковская Т.Б., Гуртовой Б.Л., Пустотина О.А. Значение исследования околоплодной жидкости в диагностике врожденных инфекций // Материалы II всерос. Форума «Мать и дитя»,2000, с. 22-23

9. Будихина А. С., Пинегин Б. В. Альфа-дефензины антимикробные пептиды нейтрофилов: свойства и функции // Иммунология. - 2008. - Том 29,N5 .-С.317-320

10. Будихина А. С., Пинегин Б. В. Дефензины мультифункциональные катионные пептиды человека // Иммунопатология, Аллергология, Инфектология, 2008, №2

11. Ганковская Л.В., Романовская В .В., Фензелева В.А., Увеличение уровня экспрессии TLR2 у беременных женщин при урогенитальной инфекции//Аллергология и иммунология в педиатрии, 2006, №2-3(9): 66

12. Гланц Стентон, Медико-биологическая статистика, «Практика», Москва, 1999

13. Гриноу А., Осборн Д., Сазерленд Ш. Врождённые, перинатальные и неонатальные инфекции. — М., Медицина, 2000: 287.

14. Дж. Клаус и др., Лимфоциты и методы//М., изд. «Мир», 1990

15. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций.— М.,2003.—336с.

16. Долгушина Н.В., Макацария А.Д. Вирусные инфекции у беременных (руководство для врачей). Москва, «Триада-Х», 2004

17. Кан Н.Е. Диагностика внутриутробной инфекции в современных условиях (обзор литературы) Проблемы репродукции №5/2004

18. Кисина В.И., Урогенитальные инфекции у женщин. 2005.-276с.

19. Ковальчук Л.В., Антигенные маркеры клеток иммунной системы человека. CD (cluster differentiation) система//М., 2005

20. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В, Баркевич О.А., Лавров В.Ф., Естественный иммунитет герпетическая инфекция, Вопросы вирусологии. 2006; 3; 4—9.

21. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Макаров О.В., Бахарева И.В., Таранец А.Н. Клеточные и гуморальные компоненты амниотической жидкости в норме и при внутриутробной инфекции // Иммунология, 2003; 6: 350—352.

22. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Мороз А.Ф., Аведова Т.А., Москвина С.Н. Противомикробные пептиды иммунной системы: клинические аспекты // Аллергология и иммунология. 2003; 4(2): 20—26.

23. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Хорева М.В. и др., Система цитокинов, современные методы иммунного анализа// М., 2001

24. Ковальчук Л.В., Долгина Е.Н., Ганковская Л.В. Анализ цитокинов в биологических жидкостях организма. // Аллергология и иммунология, 2006.

25. Ковальчук Л.В., Хорева М.В, Варивода А.С. Врождённые компоненты иммунитета: То11-подобные рецепторы в норме и при патологии. ЖМЭИ 2005; 4: 96-104.

26. Козлова В.И., Пухнер А.Ф. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий: Руководство для врачей. Изд.б-е, обновл. и доп. М., Триада-Х, 2003: 440

27. Кокряков В.Н., Биология антибиотиков животного происхождения// Монография, Наука, С-П, 1999, с. 29-32

28. Кокряков В.Н. Очерки о врождённом иммунитете. СПб., «Наука», 2006: 261.

29. Кулаков В.И., Гуртовой Б.Л., Анкирская А.С., Антонов А.Г. Актуальные31. проблемы антимикробной терапии и профилактики инфекций в акушерстве, гинекологии и неонатологии. Акушерство и гинекология, 2004; 1:3-6

30. Макаров О.В., Ганковская Л.В., Бахарева И.В., Кузнецов П.А., Карташов Д.Д. Современные методы лечения при преждевременных родах//Российский вестник акушера-гинеколога №2, 2009

31. Макаров О.В., Бахарева И.В., Ганковская Л.В. Современные представления34. о диагностике ВУИ. Российский вестник акушера — гинеколога. 2006; 6:11—15

32. Макаров О.В., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Бахарева И.В., Ганковская О.А., Невынашивание беременности, инфекция, врожденный иммунитет//М., изд. «ГЭОТАР-Медиа», 2007

33. Макаров О.В., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В и др. Изменения цитокинов в периферической крови и слизи цервикального канала у женщин с невынашиваением беременности инфекционного генеза//Материалы VI российского форума «Мать и дитя». 2004.— с. 123

34. Маниатис Т. и др., Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование.// М., «Мир», 1984

35. Пинегин Б.В., Феденко Е.С., Цывкина Е.А. Антимикробные пептиды факторы противомикробной защиты при атопическом дерматите и пиодермии //Российский аллергологический журнал, 2010, №3

36. Симбирцев А.С. Цитокины — новая система регуляции защитных реакций организма. Цитокины и воспаление, 2002; 1(1): 9—16.

37. Симбирцев А.С. Громова А.Ю. Цитокины и воспаление, 2005, т. 4, № 1.2, с. 3-10

38. Сумеди Т.Н. Содержание цитокинов в периферической крови и слизи цервикального канала у женщин с невынашиванием беременности инфекционного генеза. Дис. канд.мед.наук, М., 2005

39. Сухих Г.Т., Ванько JLB., Кулаков В.И., Иммунитет и генитальный герпес//Н.Новгород-Москва, 1997

40. Сухих Г.Т., Ванько JI.B. Иммунология беременности, М., 2003, 40с.

41. Тетруашвили Н.К. Цитокины в диагностике ВУИ// Материалы II всероссийского форума «Мать и дитя», М., 2000: с. 18—22

42. Тетруашвили Н.К., Сухих Г.Т. Роль цитокинов в невынашивании беременности. Материалы V всероссийского форума «Мать и дитя», М., 2003: с. 231—232

43. Урогенитальные инфекции у женщин: Клиника, диагностика, лечение / под ред. В.И.Кисиной, К.И.Забирова М: ООО «Медицинское информационное агентство», 2005 - 280 с.

44. Федоров Н.А., Суханов Ю.С., Асади Мобахан А.Х. и др., Полимеразная цепная реакция (ПЦР) // Москва, 1996

45. Фрейдлин И.С., Цитокины и межклеточные контакты в противоинфекционной защите организма// Соросовский образовательный журнал, 1996, №7, 19-25

46. Фризе К., Кахель В. Инфекционные заболевания беременных и новорожденных//пер. с нем. -М.:Медицина, 2003, 424 с.

47. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы//М., 2001, 188 с.

48. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии. Иммунология, 2001; 4: 4—6

49. Херрингтон С., Макги Дж., Молекулярная клиническая, диагностика. Методы// М. изд. «Мир», 1999

50. Черешнев В.А., Рыбина И.В., Бейкин Я.Б., Обоскалова Т.А. Иммунологические и генетические факторы нарушения репродуктивной функции. Екатеринбург, 2005, УрО РАН, 174 с.

51. Шмагель К.В., Черешнев В.А., Иммунитет беременной женщины, М., Медкнига, Н.Новгород, Изд. НГМА, 2003, 226 с.

52. Ярилин А.А. Интерфероны. Молекулярное многообразие и биологические свойства. Иммунология 2006; 1: 2-4

53. Ярилин А.А. Основы иммунологии//М., «Медицина», 1999

54. Aarbiou J, Ertmann М, van Wetering S, van Noort P, Rook D, Rabe KF, Litvinov SV, van Krieken JH, de Boer WI, Hiemstra PS. Human neutrophil defensins induce lung epithelial cell proliferation in vitro. J Leukoc Biol. 2002 Jul;72(l): 167-74.

55. Abrahams V.M., Мог G. Toll-like Receptors and their Role in the Trophoblast, Placenta 2005; 26: 540-547

56. Akira S., Takeda K. Toll-like receptor signalling. Nat.Rev.Immunol. 2004; 4:

57. Alvarez-de-la-Rosa M., Rebollo F J., Codoceo R., Gonzalez A. Maternal serum interleukin 1, 2, 6, 8 and interleukin-2 receptor levels in preterm labor and delivery//Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2000 Jan;88(l)::57-60

58. Becker MN, Diamond G, Verghese MW, Randell SH. CD14-dependent lipopolysaccharide-induced beta-defensin-2 expression in human tracheobronchial epithelium. J Biol Chem. 2000 Sep 22;275(38):29731-6.

59. BeigiRH, Yudin MH, Cosentino L, Meyn LA, Hillier SL. Cytokines, pregnancy, and bacterial vaginosis: comparison of levels of cervical cytokines in pregnant and nonpregnant women with bacterial vaginosis J Infect Dis. 2007 Nov 1; 196(9): 1355-60

60. Bensch KW, Raida M, Magert HJ, Schulz-Knappe P, Forssmann WG. hBD-1: a novel beta-defensin from human plasma. FEBS Lett. 1995 Jul 17;368(2):331-5.

61. Bhat S, Milner S. Antimicrobial peptides in burns and wounds. // Curr Protein Pept Sci. 2007 0ct;8(5):506-20.

62. Boman H.G. Antibacterial peptides: basic facts and emerging concepts. Journal of Internal Medicine 2003; 254: 197-215

63. Breukink E, de Kruijff B. The lantibiotic nisin, a special case or not? Biochim Biophys Acta. 1999 Dec 15;1462(l-2):223-34

64. Brown NL, Alvi SA, Elder MG, Bennett PR, Sullivan MH The regulation of prostaglandin output from term intact fetal membranes by anti-inflammatory cytokines. Immunology 2000, 99:124-133

65. Buhimschi CS, Dulay AT, Abdel-Razeq S, Zhao G, Lee S, Hodgson EJ, Bhandari V, Buhimschi IA. Fetal inflammatory response in women with proteomic biomarkers characteristic of intra-amniotic inflammation and preterm birth. // В JOG. 2009 Jan;116(2):257-67

66. Buhimschi IA, Zambrano E, Pettker CM, Bahtiyar MO, Paidas M, Rosenberg VA, Thung S, Salafia CM, Buhimschi CS. Using proteomic analysis of the human amniotic fluid to identify histologic chorioamnionitis.// Obstet Gynecol. 2008 Feb;l 11(2 Pt 1):403-12.

67. Byrne В., Morrison JJ. Preterm birth Clin Evid. 2003 Dec;(10):1700-15

68. Casey LC. Immunologic response to infection and its role in septic shock. // Crit Care Clin. 2000 Apr; 16(2): 193-213.

69. Challis J.R., Smith S.K. Fetal endocrine signals and preterm labor Biol Neonate. 2001;79(3-4): 163-7

70. Chrousos G.P. Organization and Integration of the Endocrine System SleepMed Clin. 2007 Jun;2(2): 125-145

71. Com E, Bourgeon F, Evrard B, Ganz T, Colleu D, J6gou B, Pineau C. Expression of antimicrobial defensins in the male reproductive tract of rats, mice, and humans. // Biol Reprod. 2003 Jan;68(l):95-104.

72. Darville T. O'Neill JM, Andrews CW Jr, Nagarajan UM, Stahl L, Ojcius DM. Toll-like receptor-2, but not Toll-like receptor-4 is essential for development of oviduct pathology in chlamydial genital tract infection. J. Immunol. 2003; 171:6187-6197

73. Dijkstra K., Kuszynski E., Lockwood C.J., Visser G.H.A. Matrix metalloproteinase-1 and -9 in cervicovaginal fluid from women during pregnancy and in labor//Prenat Neonat Med 2001; 6: 12228.

74. Ding L., Yang L., Weiss T.M. Interaction of antimicrobial peptides with lipopolysaccharides. Biochemistry, 2003; Oct 28, 42(42): 12251-9

75. Duerst R. Innate Immunity to Herpes Simplex Virus Type 2. Viral immunology, 2003; 16(4): 475-490

76. Dyson D.C, Danbe K.H., Bamber J.A., Crites Y.M., Field D.R., Maier J.A., Newman L.A., Ray D.A., Walton D.L., Armstrong M.A. Monitoring women at risk for preterm labor. N Engl J Med. 1998 Jan 1;338(1): 15-9.

77. Edwards Kirstin, Logan Julie, Saunders Nick, Real-Time PCR. An essential guide//horizon bioscience, 2004

78. Entrican G, Wheelhouse NM. Immunity in the female sheep reproductive tract. // Vet Res. 2006 May-Jun;37(3):295-309.

79. Fang ХМ, Shu Q, Chen QX, Book M, Sahl HG, Hoeft A, Stuber F. Differential expression of alpha- and beta-defensins in human peripheral blood. Eur J Clin Invest. 2003 Jan;33(l):82-7

80. Fazelil A., Bruce C, Anumba D.O. Characterization of Toll-like receptors ir the female reproductive tract in humans. Human Reprod. 2005; 20 (5): 1372-1378

81. Feng Y., Pan X., Huang N. et al. The human beta-defensins expression in female genital tract and pregnancy-related tissues. Sichuan Da Xue Bao Yi Xue Ban 2003; 34(2): 217-219

82. Froy, О. Седдгдфк Microbiology (2005) 7(10), 1387-1397

83. Giuliani A, Pirri G, Rinaldi AG. Antimicrobial peptides: the LPS connection.//Methods Mol Biol. 2010;618:137-54.

84. Goepfert A.R., Schwebke J., Andrews W. et al. Perinatal emphasis research center (PERC): Vaginal markers of preterm birth. Am.J.Obstet.Gynecol. 2002; 187: SI26

85. Goldenberg R.L. Andrews W.W., Mercer B.M., Moawad A.H., Meis

86. Goldenberg R.L., lams J.D., Mercer B.M., Meis P., Moawad A., Das A., Copper R., Johnson F. What we have learned about the predictors of preterm birth//Semin Perinatol. 2003 Jun;27(3): 185-93.

87. Goldenberg R.L., Thompson C. The infectious origins of stillbirth. Am.J.Obstet.Gynecol. 2003; 189: 861

88. Goncalves L.F., Chaiworapongsa Т., Romero R. Intrauterine infection and prematurity. Ment.Retard.Dev.Disabil.Res.Rev. 2002; 8: 3-13

89. Gustafsson A, Olin AI, Ljunggren L. LPS interactions with immobilized and soluble antimicrobial peptides. Scand J Clin Lab Invest. 2010 Apr 19;70(3):194-200.

90. Harder J, Bartels J, Christophers E, Schroder JM. A peptide antibiotic from human skin. Nature. 1997 Jun 26;387(6636):861

91. Harder J, Meyer-Hoffert U, Teran LM, Schwichtenberg L, Bartels J, Maune S, Schroder JM. Mucoid Pseudomonas aeruginosa, TNF-alpha, and IL-lbeta, but not IL-6, induce human beta-defensin-2 in respiratory epithelia.

92. Herbst-Kralovetzl M.M., Pyles R.B., Toll-like Receptors, Innate Immunity and HSV Pathogenesis 2006, HERPES, 13:2, 37-41

93. Herr C, Shaykhiev R, Bals R. The role of cathelicidin and defensins in pulmonary inflammatory diseases. // Expert Opin Biol Ther. 2007 Sep;7(9): 1449-61.

94. Home AW, Stock SJ, King AE. Innate immunity and disorders of the female reproductive tract. // Reproduction. 2008 Jun; 135(6):739-49.

95. Hultmark D. Drosophila immunity: paths and patterns. Curr Opin Immunol. 2003 Feb;15(l):12-9

96. Ivanov IB In vitro resistance to human platelet microbicidal protein among urethral staphylococcal and enterococcal isolates with its correlation with prostatitis // Indian J Med Microbiol. 2005 Oct;23(4):253-5.

97. Ivanov IB, Gritsenko VA, Kuzmin MD. Staphylococcal secretory inhibitor of platelet microbicidal protein is associated with prostatitis source// J Med Microbiol. 2006 Dec;55(Pt 12):1645-8.

98. Ivanov IB, Gritsenko VA, Kuzmin MD. Distribution of secretoryinhibitor of platelet microbicidal protein among urethral isolates with its correlation with prostatitis I I Asian J Androl. 2008 Mar; 10(2): 189-92.

99. Ivanov IB, Gritsenko VA. Distribution of secretory inhibitor of platelet microbicidal protein among anaerobic bacteria isolated from stool of children with diarrhea. World J Gastroenterol 2008; 14(35): 5428-5431

100. Ivanov IB, Kuzmin MD, Gritsenko VA. Microflora of the seminal fluid of healthy men and men suffering from chronic prostatitis syndrome // Int J Androl. 2009 Oct;32(5):462-7.

101. Janeway Jr C.A., Medzhitov R. Innate immune recognition. Annu Rev. Immunol. 2002; 20: 197-216.

102. Jeng L, Yamshchikov AV, Judd SE, Blumberg HM, Martin GS, Ziegler TR, Tangpricha V. Alterations in vitamin D status and anti-microbial peptide levels in patients in the intensive care unit with sepsis. // J Transl Med. 2009 Apr 23;7:28.

103. K.V.R. Reddy, R.D.Yedery, C. Aranha. Antimicrobial peptides: premisses and promisses

104. Kao, C.y., Chen, Y., Thay,P. et al., 2003, ORFeome-based search of airway epithelial cell-specific novel human beta-defensin genes. Am О Respir Cell Mol Biol 29л 71-80

105. Kawauchi K, Yagihashi A, Tsuji N, Uehara N, Furuya D, Kobayashi D, Watanabe N. Human beta-defensin-3 induction in H. pylori-infected gastric mucosal tissues.World J Gastroenterol. 2006 Sep 28;12(36):5793-7.

106. Kim HJ, Jung JR, Kim HJ, Lee SY, Chang IH, Lee TJ, Kim W, Myung SC. Expression of human beta-defensin-2 in the prostate. // BJU Int. 2010 Jun 23

107. King AE, Critchley HO, Kelly RW. Innate immune defences in the human endometrium. Reprod Biol Endocrinol. 2003 Nov 28;1:116

108. King AE, Fleming DC, Critchley HO, Kelly RW. Differential expression of the natural antimicrobials, beta-defensins 3 and 4, in human endometrium. J Reprod Immunol. 2003 Jun;59(l):l-16.о

109. King AE, Kelly RW, Sallenave JM, Bocking AD, Challis JR. Innate immune defences in the human uterus during pregnancy // Placenta. 2007 Nov-Dec;28(l 1-12): 1099-106.

110. KLUT M. E., WHALEN B. A., AND. HOGG J. С Dynamic Changes in Neutrophil Defensins during Endotoxemia, INFECTION AND IMMUNITY, 2001, Vol. 69, No. 12, p. 7793-7799

111. Lehrer RI, Barton A, Daher KA, Harwig SS, Ganz T, Selsted ME. Interaction of human defensins with Escherichia coli. Mechanism of bactericidal activity. J Clin Invest. 1989 Aug;84(2):553-61

112. Luders T, Birkemo GA, Fimland G, Nissen-Meyer J, Nes IF. Strong synergy between a eukaryotic antimicrobial peptide and bacteriocins from lactic acid bacteria. Appl Environ Microbiol. 2003 Mar;69(3): 1797-9

113. Michael F., Tosi M.D. Innate immune responses to infection. Current reviewsif allergy and clinical immunology, 2005; 9: 241-248

114. Milner SM, Bhat S, Buja M, Gulati S, Poindexter В J, Bick RJ. Expression of human beta defensin 2 in thermal injury. // Burns. 2004 Nov;30(7):649-54.

115. Moffett A., Loke Y.W. The immunological paradox of pregnancy: a reappraisal. Placenta, 2004; 25: 1-8

116. Munk C. et al., The q-defensin, Retrocyclin, inhibits HIV-1 entry, AIDS Res. Hum. Retroviruses, 2003, 19, 875-881

117. Oppenheim J.J., Biragyn A., Kwak L.W., Yang D. Roles of antimicrobial peptides such as defensins in innate and adaptive immunity. Ann. Rheum. Dis. 2003; 62: 17-21.

118. Peng, ОюРюб Schutte, B.C., Schudy, A, et al., 2001 Discovery of new beta-defensins using a genomic-based approach. Gene 263,211-218

119. Platz J, Beisswenger C, Dalpke A, Koczulla R, Pinkenburg O, Vogelmeier C, Bals R. Microbial DNA induces a host defense reaction of human respiratory epithelial cells. J Immunol. 2004 Jul 15;173(2):1219-23

120. Quinn K, Henriques M, Parker T, Slutsky AS, Zhang H. Human neutrophil peptides: a novel potential mediator of inflammatory cardiovascular diseases. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2008 Nov;295(5):H1817-24. Epub 2008 Sep 19.

121. Raj PA, Dentino AR. Current status of defensins and their role in innate and adaptive immunity. FEMS Microbiol Lett. 2002 Jan 2;206(1):9-18

122. Rocco H. van den Berg, Maria C. Faber-Krol, Sandra vanWetering, Pieter S. Hiemstra, and Mohamed R. Daha Inhibition of Activation of the Classical Pathway of Complement by Human Neutrophil Defensins // Blood, 2010, Vol 92„pp 3898-3903

123. Romero R., Espinoza J., Goncalves L.F., Kusanovic J.P., Friel L., Hassan S. The Role of Inflammation and Infection in Preterm Birth W Semin Reprod Med. 2007;25(l):21-39

124. Romero R, Erez O, Espinoza J Intrauterine Infection, Preterm Labor, and CytokinesWJ Soc Gynecol Investig. 2005 Oct;12(7):463-465

125. Sawada M, Otsuki K, Mitsukawa K, Yakuwa K, Nagatsuka M, Okai T. Cervical inflammatory cytokines and other markers in the cervical mucus of pregnant women with lower genital tract infection. // Int J Gynaecol Obstet. 2006 Feb;92(2):l 17-21.

126. Schaefer T.M., Desouza K., Fahey J.V. et al. Toll-like receptor (TLR) expression and TLR-mediated cytokine/chemokine production by human uterine epithelial cells. Immunology, 2004; 112: 428-436

127. Shai Y, Oren Z. From "carpet" mechanism to de-novo designed diastereomeric cell-selective antimicrobial peptides. Peptides. 2001 0ct;22(10): 1629-41

128. Shim SS, Romero R, Hong JS, Park CW, Jun JK, Kim BI, Yoon ВН. Clinical significance of intra-amniotic inflammation in patients with pretermpremature rupture of membranes. Am J Obstet Gynecol. 2004 Oct; 191(4): 1339-1145

129. Singh PK, Jia HP, Wiles K, Hesselberth J, Liu L, Conway В A, Greenberg EP, Valore EV, Welsh MJ, Ganz T, Tack BF, McCray PB. Production of beta-defensins by human airway epithelia. Proc Natl Acad Sci USA. 1998 Dec 8;95(25):14961-6

130. Stephen A. Bustin et all, A-Z of quantitative PCR//International university line, 2004

131. Stolzenberg ED, Anderson GM, Ackermann MR, Whitlock RH, Zasloff M. Epithelial antibiotic induced in states of disease. Proc Natl Acad Sci USA. 1997 Aug 5;94(16):8686-90.

132. Stiiber F. Effects of genomic polymorphisms on the course of sepsis: is there a concept for gene therapy? // J Am Soc Nephrol. 2001 Feb;12 Suppl 17:S60-4.

133. Szukiewicz D, Szewczyk G, Pyzlak M, Klimkiewicz J, Maslinska D. Increased production of beta-defensin 3 (hBD-3) by human amniotic epithelial cells (HAEC) after activation of toll-like receptor 4 in chorioamnionitis. Inflamm Res. 2008;57 Suppl l:S67-8.

134. Taylor D., Kenyon S., Tarnow-Mordi W. Infection and preterm birth //Br. J. Obstet. Gynecol. — Vol. 104. —P. 1338-1340

135. Tjabringa GS, Vos JB, Olthuis D, Ninaber DK, Rabe KF, Schalkwijk J, Hiemstra PS, Zeeuwen PL. Host defense effector molecules in mucosal secretions.//FEMS Immunol Med Microbiol. 2005 Aug l;45(2):151-8.

136. Thomas NJ, Carcillo JA, Doughty LA, Sasser H, Heine RP. Plasma concentrations of defensins and lactoferrin in children with severe sepsis // Pediatr Infect Dis J. 2002 Jan;21(l):34-8.

137. Torossian A, Gurschi E, Bals R, Vassiliou T, Wulf HF, Bauhofer A. Effects of the antimicrobial peptide LL-37 and hyperthermic preconditioning in septic rats. //Anesthesiology. 2007 Sep;107(3):437-41.

138. Tsutsumi-Ishii Y, Nagaoka I. NF-kappa B-mediated transcriptional regulation of human beta-defensin-2 gene following lipopolysaccharide stimulation. J Leukoc Biol. 2002 Jan;71(l):154-62.

139. Valore EV, Park CH, Quayle AJ, Wiles KR, McCray PB Jr, Ganz T. Human beta-defensin-1: an antimicrobial peptide of urogenital tissues. J Clin Invest. 1998 Apr 15;101(8):1633-42.

140. Vora P, Youdim A, Thomas LS, Fukata M, Tesfay SY, Lukasek K, Michelsen KS, Wada A, Hirayama T, Arditi M, Abreu MT. Beta-defensin-2 expression is regulated by TLR signaling in intestinal epithelial cells. J Immunol. 2004 Nov l;173(9):5398-405

141. Wuthrich K, editor. NMR of proteins and nucleic acids. New York: Wiley; 1986

142. XuJ, Holzman CB, Arvidson GG, Chung H, Goepfert AR. Midpregnancy vaginal fluid defensins, bacterial vaginosis, and risk of preterm delivery.// Obstet Gynecol. 2008 Sep;l 12(3):524-31.

143. Yang, L., Harroun ТА, Weiss TMi 2001 Barrel-stave model or toroidal model? A case study on melittin pores. Biophys О 81: 1475-1485

144. Yeaman MR, Yount NY. Mechanisms of antimicrobial peptide action and resistance. Pharmacol Rev. 2003 Mar;55(l):27-55

145. Zanetti, M. Cathelicidins, multifunctional peptides of the innate immunity. J. Leukoc. Biol.2004; 75 39-48175) Zasloff M. Antimicrobial peptides of multicellular organisms. Nature. 20021. Jan 24;415(6870):389-95

146. Zhao C, Wang I, Lehrer RI. Widespread expression of beta-defensin hBD-1 in human secretory glands and epithelial cells // FEBS Lett. 1996 Nov 4;396(2-3):319-22.

147. Deckers D, Masschalck B, Aertsen A, Callewaert L, Van Tiggelen CG, Atanassova M, Michiels CW. Periplasmic lysozyme inhibitor contributes to lysozyme resistance in Escherichia coli . // Cell Mol Life Sci. 2004 May;61 (10): 1229-37.