Клинические и иммуногистохимические параллели в диагностике опухолей сосудистого тракта глаза и в прогнозировании неопластического процесса тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.08, кандидат медицинских наук Верещагина, Марина Владимировна

• Верещагина, Марина Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Верещагина, Марина Владимировна

Введение

Глава 1. Обзор литературы

Глава 2, Материалы и методы исследования 3]

2.1 Характеристика клинического материала

2.2 Методы лечения

2.3 Характеристика гнстологи'юского материала

2.4 Офтальмологические методы обследования больных

2.5 Морфологические методы исследования

2.6 Статистические методы анализа 48 Г. л! НИ 3. Hly'lfHW им МУИОГИСПЯ Мм И ItCKOl O профиля сосудистой оболочки глаза человека на 22-24 неделе гестацнн

3.1 Анализ экспрессии внментмна в структурах сосудистой оболочки глаза человека на 22-24 неделе гестацин

3.2 Анализ экспрессии маркерои нейрональнен днфференцировкн в структурах сосудистой оболочки глаза человека на 22-24 неделе гестацнн

3.3 Анализ экспрессии цитокератимоа ь структурах сосудистой оболочки человека на 22-24 неделе гесташш

3.4 Анализ экспрессии маркеров многекного ряда в структурах сосудистой оболочки глаза человека на 22-24 неделе геетацин

3.5 А калит экспрессии меланоиитарных маркеров и структура* сосудистой оболочки глаза человека иа 22-24 неделе геепщнн

3.6 Изучение иммучюфенотнпа различных тканей эмбриона человека 63 Гдлна4 Клинические, морфологические и нммуногистохимические параллели в диагностике опухолей сосуд петого тракта глаза

4.1 Анаянэ экспрессии вимеигина в опухолях сосудистого тракта глаза

4.2 Авалю экспрессии маркера нервной ткани S-IOO в опухолях сосудистого тракта глаза

4.3 Анализ специфичности и чувствительности меланоцитарных маркеров в диагностике опухолей сосудистого тракта глаза

4.3.1 Диализ экспрессии тирсэнназы в опухолях сосудистого тракта глаза

4-3-2 Анализ экспресс ни меланнна-А в опухолях сосудистого тракта глаза

4.3.2 /Violin эксирессни НМВ-45 в опухолях сосудистого тракта глаза 96 4.4 Диагностика опухолей сосудистого тракта глаза на основе клинических, морфологических и нммуногнетохимичсскнх исследований [

Глава 5. Результаты н v мук о гнето химического анализа экспрессии молекулярно-бнологических маркероо-регуляюроа клегочного пикта, маркеров клеток эндотелия и туиор-инфнльтрнруютих клеток

5.1 Изучение же пресс и и маркеров-регуляторов клеточного цикла н возможностей прогнозирования на их основе

5.1.1 Анализ 'экспрессии Mi IF в у.велл иных мсланомах 122 5, ] ,2 Анализ жлрекнн CD1 17/C-Ktt а уасальнъгх мсланомах 127 5. 1 ,3 Анализ экспрессии пт23 в у неал иных мсланомах 135 5,] .4 Анализ экспрессии винища t>l в укшшшк мсланомах

5.2 Изучение экспрессии маркеров эндотелнальных клеток сосудов н возможностей прогнозирования на их основе

5-2.1 Анализ экспрессии маркера эндотелнальных клток CD34 а сосудах увеалииых мслаиом

5.2.2 Анализ экспрессии маркера эшотелналышх клток CD31 в сосудах увсалиных меланом

5.3 Изучение экспрессии маркеров тумор-ннфмлырирузощнх клеток ауае зльных мсланомах и возможностей прогнозирования на нх основе

5.3.1 Анализ экспрессии маркера общего лейкогуггарнота антигена CD45 опухоль-инфняьтрнрующимн лнмфошгглчн в у реальны* мсланомах

5.3.2 Анализ экспрессии CD68 макрофагами, инфильтрирующими строку увеальных мелвиом

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинические и иммуногистохимические параллели в диагностике опухолей сосудистого тракта глаза и в прогнозировании неопластического процесса»

Актуальность теиы

Несмотря на значительные достижения современной офтвльмоонкологнн. сегодня проблему диагностики м лечения опухолей сосудистого тракта глаза нельзя считать решенной На протяжении многих лет верификация внутриглазных опухолей основывалась па данных морфолотческнх исследований, проведенных на сотовом уровне, которые изредка дополнялись эл с кгро н но- м и крое ко пич ее к и м 11 исследованиями. Гистологические исследования позволяли определить тнн клеточного строения опухоли, степень клеточной атнпнн, митогическую активность, уточнить гистологическую стадию нео с li асти чес ко го про нес с л на основании инвазии склеры и/или сетчатки. Точность гистологического диагноза зависела от уровня профессионал той подготовки гистолога и не исключала ошибок субъективного характера (гак называемый «человеческий)» фактор) 'Элевтронно-ынкроскопические исследования помогали выявить улирветруктурные признаки, характерные для опухолей того или иного рада, подтверждая гистологический диагноз, при этом, они не предоставляли информацию о степени злокачественности. Этот метод требовал не только высокой квалификации, наличия дорогостоящего оборудования, но и были связаны с большими затратами рабочего времени, Выполнение двух этапов исследований (гистологического и электронно-микроскопического) существенно удлиняло сроки проведения диагностики.

В конце 90-х годов в арсенале онкологов'морфологов появился новый, доступный метод диагностики. Его специфичность, информативность и достоверность достигают, гю данным различных авторов, от 75 до I0Q % (17, 29, 47, 55], Этот метод получил название иммуногнстохимичсского метода исследований (ИГХ),

В основе ИГХ-лнагностикн лежат уникальные свойства различных тканей вырабатывать (или выражаясь языком специфической терминологии -экспресснровагь) на различных структурах клетки (в цитоплазме, ядре, мембране) антигены (АП, характерные только для одного типа тканей, Эли АГ получили название тканеспецифических или ткйнслнфферснтаинониых- Впоследствии на основе этих АГ были синтезированы высоко специфические (моио- или иолнклональные) антитела (МкАТ, ПкАТ, соответственно) которые, связывались именно с этими АГ. окрикивая структуры клетки, жепрееенрующие их. Таким образом, исследователь мог визуализировать положительную ИГХ-реахцию II верифицировать гистогенез опухоли

Внедрение в широкую практику ИГХ-исследований показало, чго многие из аспектов диагностики н лечения внутриглазных опухолей нуждаются в ревизии и пересмотре имеющихся представлений. Так, пересмотр архивного материала по опухолям радужки выяви, что частота заболеваемости меланомой доминирует над аналогичным показателем для опухолей многенного ряда- Многие из веретаюклеточних опухолей, ранее диагностированные как лейомномы, были верифицированы на основании И ГХ-исследований как чепаном ы. А, следовательно, их клинический снмлтомокомнлекс должен быть пересмотрен и уточнен, также, впрочем, как и данные инструментального обследования (флуоресцентной анпюграфнн. ультразвуковой бномнкросконнн). Это чрезвычайно важно для выявления характерных отличительных признаков, позволяющих дифференцировать одни тип опухоли от другого на этапе клинической диагностики.

Столетие назад патологоанатомы при постановке диагноза стремились оценит (• степень клинической агрессивности опухоли, Именно этот принцип взаимосвязи клинического или витального исхода н микроскопической картины ставился во главе многих первых гистологических классификаций опухолей, например, увеальных мелаком (УМ) [31]. Сегодня раскрыты многие механизмы контроля клеточного деления и смерти, поддержания генетической стабильности. Оказалось, что эти механизмы кипролнруются специфическими белками, получившими название молекулярно-бнодог нческих маркеров клеточной пролиферации н unorrroia [5. 17]. Баланс их продукции определяет скорость опухолевого роста, метастатический потенциал, а, следовательно, и вероятность развргтия метастатического процесса. Важной вехой в развитии ИГХ стало появление антител к биологическим маркерам о сточного цикла: р53, bc]-2, ki-67,c-kit, ba* и др, Количественный их анализ в опухолях стал важным показателем, характеризующим степень агрессивности, а также отражающим витальный прогноз и определяющим чувствительность новообразования к лечебному воздействию [II, 17, 37, 89]. Роль многих из них (пт23, MITF, c-kit) на этом этапе знаний молекулярной биологии и генетики не ясна и се еще предстоит выяснить. И ГХ-исследования раскрыли невиданные возможности для прогнозирования исходов неоцдастичсекого и лечебного процесса и отбора пациентов в группу риска разв!гтня метастазов, Идвитнфипцня фенотипа опухоли на основе анализа экспрессии белков-регуляторов клеточного цикла позволяли наметить рычаги управления нлн точкн-мишекн для лечебного воздействия [23, 99, 112]. Однако уже сейчас появилась возможность классифицировать тестируемую опухоль на основании ее иммунофенотипа, сопоставив се с другими неоплазмами этого гистогенеза. Примером такой классификации служит классификация неходжкинскнх лныфом. Не случайно, идущие офтальмоонкологи чира указывают на то, что сгабильно высокие показатели смертности ори УМ с в it л стел ьст&у кг i об отсутстнин надежных способов прогнозирования исхода заболевания с отбором пациентов в группу риска развития метастазов и отсутствии эффективной программы мероприятий, направленных на профилактику метастатического процесса (35]. Указанные мометггы и обосновали проведение настоящих исследований.

Це,1ь работы; сопоставить клинические и ичмуногисгохимическис данные по опухолям сосудистого тракта глаза, проанализировал возможности ИГХ-ыегода в диагностике н в прогнозировании неопластнческого процесса. Для достижения нелн были поставлены следующие задача:

1. Изучить иммунофенотнп сосудистой оболочки глаза человека на 22-24 неделе геста пин.

2. Разработать и внедрить в практик)' паиель ткансднфферентационных маркеров, позволяющую дифференцировать опухоли сосудистой оболочки глаза на основе ИГХ-исследований с определением специфичности и чувствительности каждого из предложенных маркеров, а также с учетом нммунофенотнпа сосудистой ободочки глаза человека на 22-24 неделе геепшин.

У Сопоставит* клинические и нкмуногистохиннческнс данные дм уточнения клинического сичптомокомллекса, характерного опухолям сосудистого тракта глаза различного геиеза.

4. Раскрыл, возможности прогнозирования неонластнческого процесса на основе тканеднфферентаннонных маркеров с отбором наиболее информативных и достоверных.

5. Изучить роль экспрессии белков-регуляторов клеточного цикла шп23, MJTF, с-kit, cychn D| в прогрессированни нсопластического процесса с определением возможных точек-мишеней для таргентной терапии.

6. Проанализировать точность и надежность прогнозирования неопластического процесса на основе ИГХ-маркеров, отражающих васкуларизанню (CD31, CD34) к лнмфоцитарную инфильтрацию (CD6S. CD45) опухоли.

1. Разработать и обосновать систему прогнозирования на основе ИГХ-исследоваиий с отбором пациентов высокого риска развития метастазов дли рекомендации им антнмегаетзтнчеекого курса.

Няучния новизна

Впервые представлен иммунофенотнп сосудистой оболочки глаза человека на 22-24 неделе гестацин.

Разработана и научно обоснована ИГХ-пансль маркеров, позволяющие проводить дифференциальную диагностику опухолей сосудистого тракта глаза.

Проведены параллели между клиническими и иммуногнстохнмическнмн данными с уточнением роли отдельных симптомов в клиническом енмптомокомплексс опухолей сосудистого тракта глаза различного гистогенеза.

Впервые представлено полное описание клинического симптомокомплскса и иммунофенотипа лсйомиосаркомы сосудистого тракта глаза.

Проанализировано и представлено описание клинического сим птомокомплекса и иммунофенотипа лнмфомы сосудистого тракта глаза.

Доказана ключевая роль васкулярнзацни и лимфоцитарнон инфильтрации, как основных этапов онкогеиеза, а также экспрессии маркеров, их отражающих (CD31, CD34, CD68, CIM5) в прогрссснрованни неопластического процесса при УМ; раскрыты возможности прогнозирования исхода заболевания на нх основе

Изучена роль белков-регуляторов клеточного цикла nm23, M1TF, c-kit, cyclin Г)1 n прогрессировали!! УМ н предложена перспективная точка-мишень для лекарственной терапии метастазов,

Практическая значимость

Разработай в внедрен в практик)' протокол ИГХ-лиагностики с панелью маркеров, позволяющий проводить дифференциальную диагностику опухолей сосудистого тракта глаза.

Проведены клинические и иммуногнетохимичсские параллели, позволяющие проанализировать и уточнить роль отдельных клннико- морфологических симптомов {степени пигментации, васкуляризацин и лимфоцнтарной инфильтрации}, а также экспрессии маркеров, их отражающих (CD3I, CD34, CD6S, CD45) в прогрессироалмнн УМ.

Разработана и внедрена система прогнозировали* клинического течения н исхода неонластнческого процесса при УМ на основе ИГХ-маркеров, позволяющая осуществлять отбор пациентов с УМ в группу высокого рнска развитии метастазов для рекомендации им античстастатического курса.

Идентифицирована, научно обоснована и предложена перспективная точка-мишень для таргыггной лекарственной терапии четастазов УМ

Положения, выносимые на защиту;

Комплексная чноготгапная система Ш'Х-диагностики и прогнозирования исходов заболевания при УМ на оснош ткаиеднфферентацнонных и молскулярно-биолотнческих маркеров

Расшифровка ключевой роди hkmiпиorcitcia. лнмфоцитарной инфильтрации, отражающих амплитуду реакций иммунного ответа, а также некоторых механизмов регуляции клеточного цикла в патогене» УМ с выходом на патогенетически ориентированное лечение.

Научное обоснование патогенетической ориентации и рекомендации к проведению клинических испытаний перспективного препарата таргентного назначения — Dim века, при увеальной мелнноме.

Основные положения работы Сложены: на 8-ом Конгрессе РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии н иммунофармахологнн" (г, Москва, 2005 г). на VII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академии В И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г, С-Петсрбург, 2003г) на Всероссийской научно-практической конферсииин «Отечественные противоопухолевые препараты.>>, Москва» 21-24 марта 2005 ка Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты.», Москва. 21-24 марта 2006 на 20м Европейском конгрессе патологии, Франция. Париж, сентябрь 2005

Публикация.

Опубликовано 11 работ, из них б по теме диссертации.

Объем я структура диссертации.

Диссертация изложена на 188 страницах машинописного текста и состоит их введения, описания материала и методов исследований. 5 глав, отражающих результаты собственных исследований, заключения, обидах выводов, списка литературы, включающего 21 отечественных и 118 зарубежных источника. Работа иллюстрирована 46 рисунками. 2 схемами, 3 графиками и 75 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Глазные болезни», Верещагина, Марина Владимировна

177 Выводы.

I, Впервые представлен нммунофенотнп сосудистой оболочки глаза человека на 2224 неделе тестации, позволяющий рекомендовать и И) Х-паиелн, предназначенной для диагностики опухолей этой локализации маркер мезенхимальной ткани - анмеигнн, маркер нейроналыгой даффере!IШipoiirai S-fOO, меланоцигарные маркеры - НМВ-45, гирозинвду. меланин-А н МГГТ, маркер промежуточных фнпамситои • деемнн, а также миогенные маркеры • гладкомышечный актин, калпоннн к'нлн Н-калдесмон.

2 Получены данные, позволяющие полагать, что все опухали сосудистого тракта глаза, независимо от клетки-источника. позитивны к маркеру вимекгину, опухоли, развившиеся нз ГТЭ, мслажчпггоп, гладкомыгасчиых структур радужки и нилиарного тела, а также нервных элементов позитивны к S-I0O, меланоцигарные опухоли, независимо от места их развнгня и характера неоплаетического процесса, зкепреесируют НМВ-45, гирепшеазу, мелаюш-А и MITF, а неоплазмы миогенного происхождения позитивны к маркерам промсжуто«пшх фнламенгои деемкну. к глддкомы щечному актину, калпоннну и/нли Н-кллдссмону на фоне негативной реакции с мслонином-А, НМВ45, MTTF и тнрозиназой и слабо положительной реакции с S-100, «по н обосновывает присутствие упомянутых маркеров в диагностической ИГХ-панеДН.

3, Разработай и внедрен в практику м1югозпшныП Протокол для ИГХ-днагностики первичных опухолей сосудистого тракта глаза, в котором первые 2 этапа позволяют определить пригодность материала к ИГХ-исследованиям и отдифференцировать медаиомы, удельный вес которых превалирует над опухолями исмеланоциторного ряда, а же последующие этапы посвящены верификации гистогенеза немеланоцнтарных опухолей.

4. Проведенные клинические и нммуногисгохимические параллели позволили выделить и описал, редкие типы опухолей сосудистого тракта таза: так, для яейаииосаркомы были характерны серовато-розовый цвет и узловой рост, гладкая поверхность с участками серого цвета за счет гиперплазии ПЭ, опухоль имела иммунофенопш: влметни (+++), глалкомьпиечш^й актин (+++), Н-калдесмон (+++), деемнн {++), S-IOO (+),р53 (+++ в 80 % ядер), Ki-67 (+, 1-3 клетки) при негативной реакции на НМВ-45, MITF. тнроэиназу, меминн-А; яимфома хориаидеи имела вил солидного белого, бугристого, ватообразиото образования без четких границ, с тонкими сосудами ив (юверхности опухоли, диаметр которых был сопоставим с диаметром ретннальных сосудов, опухоль имела нммузюфеногип: внменшн (++), CD20 (+++), OJ1A (++), CD7 (+),CD5 (+).CD3 (++), CW5 (++) с каппа лямбда + Ig. и IgM в единичных клетках, Ьс12{-).нспггивиай реакции на НМВ-45, MITF, тнрозиназу. меланинА.

5. Представлены доказательства ключевой роли белков-регуляторов клеточного цикла в патогенезе УМ: важная роль су din DI (913% экспрессии) в регуляции вертикального и горизонтального роста УМ, высокий потенциал белка гап23 в контроле се клего"сной дифференцирован, участие MITF а росте опухоли в высоту и регуляции шпоплккой активности; и также контрально-регуляторных функций мембранного белка c-Kit в процессах клеточного роста, пролиферации и днфференцировкн

6. Достоверная корреляционная связь трансмембранного рецептора CD 117/c-fCjl с процессами скорости роста, усиления клеточной и ядерной анаплазии являются научным обоснованием для рекомендации его в качестве возможной точхи-мншени дня лекарственной терапии УМ.

7, Представленные доказательства высоки достоверной коррелятивной евюи экспрессии маркере» змдотелиалышх клегок сосудов CD34 и CD3I в УМ (р0,001 и р<0,05, соогаетстветшо) с исходами заболевания, свидетельствующие о там, что процессы нарастания клеточной и ядерной липши, усиления васкулярнзшши и нрогрессираваиия онкологического процесса протекают параллельно друг Другу, что позволяет рекомендовать CD34 и CD31 в качестве надежных самостоятельных и независимых маркеров витального прогноза

8, Установлено, что инфильтратом УМ нммунокомпстснтными клетками, маркирующимися антителами CD45 н CD68, нарастает параллельно с прогрессированием онкологического процесса в виде усиления васкулярнзацни и мзпотнческой активности опухоли, увеличения се размеров; выраженная позитивная реакция с CD45 и CD68 в УМ является сигналом неблагоприятного нропюза (к=0,2440, р=0,1) и критерием дня отбора пациента в фунпу высокого риска развития метастазов

9, Представленные доказательства тесной обратно пропорциональной связи экспрессии S-100 со степенью малнптизацни опухолевых клеток и витальным прогнозом УМ на фоне негативной реакции меданоцнтав сосудистою тракта глаза к маркером нейроэкгадермы nf и CD56, позволяют »е только рекомендовать маркер S-100 в качестве диалюетческого маркера ntom прогностического фактора, но и предположит!., "по меланома этой локализации относится к опухолям, эмбриотенегнчеекн связанным с нервным гребнем

10. Разработана, научно обоснована и внедрена в практику высоко достоверная система прогнозирования исхода нсопластичеекого процесса при УМ, позаюлякицая осуществить отбор пациентов в группу высокого риска разлития метастазов для рекомендации им антиметастатнческой терапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известно» что качество диагностики и точность прогнозирования исхода -залог успеха в лечении отологических заболеваний, Отсутствие единства взглядов на происхождение многих опухолей, а порой, и упорное отрицание рядом авторов существования ряда нозологических единиц (например, пазопролнферативиых опухолей) привели к серьезным ошибкам при определении клинического снмптомокомллскса той нлн иной опухоли, поставили под сом ненке уже имеющиеся данные эпидемиологического характера. До сих пор на сграннцах специальной печати дискутируется вопрос о долях меланом и лейомиом радужки в общей когорте пациентов с опухолями переднего отрезка сосудистого тракта глаза, Сегодня в офтальмооикологнческих петгтрах различных стран проводится пересмотр архивного материала (парафиновых гистологических блоков и историй болезни) с ретроспективным анализом клинической симптоматики. Акцент при постановке диагноза ставится на данных ИГХ-нсследованнй [46, 74, 129]- Их проведение рекомендовано международным стандартом диагностики опухолей человека, При зтом, отсутствует единый международный Протокол с рекомендациями но ИГХ-иерифнкации опухолей сосудистого тракта глаза. Это обусловлено отсутствием информации об иммунофснатипс сосудистого трахта глаза. Проще говоря, до настоящих исследований было не ясно какие ткансспсцифическнс АГ экспрессируюг тс или иные клеточные элементы этой оболочки, которые служат источниками различных опухолей. Их выявление в опухолях служит опознавательным признаком, по которому ориентируются при уточнении тканевой принадлежности опухоли. Потеря экспрессии ткансспецнфических АГ как. впрочем, и изменение спектра экспресснрусмых белков в сторону гнпер- нлн гипозкснресснн потенциально может ассоциироваться с нарастанием малнгннзаинн опухоли н ухудшением исхода заболевания, Однако какие из белков могут быть нспользоваиы в качестве диагностических н/клн прогностических маркеров, их точность и надежность при постановке диагноза и определении прогноза неопластичсского процесса не определены, Это и обосновало настоящие исследования, цель которых: сопосгавжь клинические и иммуногнстохимнческис данные по опухолям сосудистого тракта глаза, проанализировав возможности ИГХ-метода в диагностике и в прогнозировании нсоплпсттпескога процесса

Поскольку отсутствовали сведения об иммунофенотннс сосудистого тракта глаза, определяющие спектр маркеров в панели для ИГХ-днапюстнки опухолей зтой локализации, то свою работу мы начали с изучения иммунофенотипа сосудистого тракта глаза человека на 22-24 неделе гесташпг При выборе сроков ггствнии ориентировались на известные факты: сроки заперпкнностн формирования различных отделов сосудистого тракта глаза.

Известно, что процесс малнгинзацин опухолей сопровождается возвратом опухолевых клеток к тому нммунофенотюту, который свойственен клеткам-источникам их развитии на завершающем этапе эмбриогенеза [7J. Знание иммунофенотипа различных клеточных -элементов позволяет идентифицировать гистогенез опухолей независимо от степени их мхтигннзацин. При изучении иммунофенотнпа сосудистого тракта глаза мы использовали ткансднффереитаиионные маркеры меланоцнтарного, нейрогенного, миогенного. ^шггелналыюго и мсэенхимального ряда. Столь широкий спектр антител объяснялся разнообразием клеточного состава сосудистой оболочки.

Проведенные ИГХ- исследования показали, что различные структуры и клеточные элементы сосудистого тракта глаза человека имеют различный иммунофенотип. Так, в клегках Г1Э и меланоцитвх стромы радужки, выявлялась экспрессия таких маркеров, как S-I00. меланин-А. НМВ45, Ml I F, тирозннвзы и виментина н не выявлялась экспрессия цитокератннов. В клетках сфинктера и дилятатора экспресснровалнсь маркеры промежуточных фнламситов - вннсктнн, дссмин, калггоннп и маркер мышечных фнламентов - гладкомышечный актин, а также маркер нейрогенного ряда ■ S-100. ПЭ и мелааоцнты ннлнарного тела экспресснровали S-100, меланин-А, НМВ45, МПТ, тнрознназу, Клетки цилиариой мышцы окраши вались деемнном, колполином и гладком ышечным актином; выявлялась слабая экспрессия белка S-100.

Во всех компонентах и структурных элементах цнлнарного тела визуализировалась реакция с внмеитнном,

Клетки стромы хорионден, имевшие мсэенхималыгое происхождение, окрашивались внментином; а се мсланопнты экспресснровали меланин-А, HMB4S, тнрознназу, MITF. Все многениые компоненты сосудистой стенки в хорноидальных сосудах окрашивались гладко-мышечным актином, каляоннном, ВНМС1ГГИНОМ и десмином. иобыли негативны no oi ношению к S-100.

Таким образом, меланоцнгарные маркеры ИМВ-45, тирознназа. меланин-А и MITF маркировали ПЭ и мсланоцнты всех отделов сосудистой оболочки.

S-100 экс премировался в ПЭ и меланоцитвх всех анатомических отделов сосудистого тракта глаза, в сфинктере, дилятаторе и цдонарной мышце.

GFAP давал выраженную позитивную реакцию в эндотелии сосудов и » меланоцитвх хорнондсн.

CD56 зкспресснровался исключительно нервными волокнами сосудистого тракта глаза.

Вимснтин, белок промежуточных филамеигов. напротив, окрашивал все слон и структуры радужки, хор но идеи, цнлнарного тела, включав стенку сосудов всего сосудистого тракта,

Гладкомышечный актин, калпоннн и дссмин фиксировались в многенных компонентах сосудистой стенки всех отделов сосудистого тракта глаза, в мышцах циливрного тело, сфинктере и дилятаторе радужки.

Таким образом, ИГХ-нсслсдования нммуиофенотипа сосудистого тракта глаза на 22-24 неделе гестаиин позволяли сделать следующие выводы:

1. Опухоли, развивающиеся из сосудистого тракта глаза, независимо от кпеткн-источнкка, теоретически должны быть позитивны по отношению к маркеру виментнну, что обосновывает его присутствие в диагностической панели ИГХ-наркеров. Этот маркер позволяет судить о присутствии АГ-репертуара на тестируемой опухоли, то есть, определить ее пригодность к ИГХ-нсследованиям. Однако на основании этого маркера нельзя верифицировать гистогенез опухоли. Исследования с внментнном должны предшествовать исследованиям с другими маркерами.

2. Положительная ИГХ-реакция с маркером S-100 113 и мсланоцитов всех отделов сосудистого тракта глаза, нервных волокон цнлнарного тела, радужки и чориоцдеи, а также клеток сфинктера, дилятатора н ннлиарной мышпы даст основание предполагать, что опухоли, исходящие из ГО, мсланоцитов, клеток сфинктера, нервных волокон, дилятатор* и цилиарной мышпы будут S-I00-нозитнвны. Этот маркер охватывает наибольший спектр опухолей сосудистой оболочки глаза (нейрональные. меланоцнтарные, миогениые), чего нельзя сказать об остальных маркерах нейрональной днфференцировкн. GFAP теоретически может экспресснроваться только в опухолях меллноцнтарното ряда и неоплазмах, исходящих из эндотелия сосудистой стенки, экспрессия CD56 и NF теоретически возможна только в опухолях нейрональной днфференцировкн Выявленный факт обосновывает включение в диагностическую ИГХ-панель маркера нейрональной днфференцировки S-I00. Вместе с тем, этот маркер не может быть использован в качестве единственного маркера для днфф- диагностики- Для уточнения гистогенеза целесообразно применение более высоко специализированных ткансспеоифичсскнх маркеров.

3. Позитивная реакция в меланоцнтах всех отделов сосудистого тракта глаза с ткаиеспенифическими маркерами НМВ-45. тнрозиназой, с мелаиином-А к MITF. позволяет предположить, что опухоли мсланощггарной днфференцировкн, независимо от места их развития и характера неопластичсского процесса, будут позитивны к этим маркерам. Это обосновывает присутствие НМВ-45, гирозиназы. мсланнна-А и MITF в ИГХ-нанели, предназначенной для диагностики опухолей сосудистого тракта глаза.

4. Позитивная реакция в клетках сфинктера, дилятатора, «илиарной мышцы с деемнном, гладкомышечньш актином, калпоиином н/нли Н-калдесмоном, а также с S-100 позволяет думать, о том, что опухоли многеиното происхождения будут позитивны по отношению к зтн маркерам, однако, они будут негативны по отношению к маркерам мслан-А, НМВ45, MITF н тирозиназс. Миогенные маркеры могут быть пригодны в верификации опухолей сосудистого тракта глаза мышечного происхождения.

Результаты проведенных исследований имели для нас существенное значение; они позволяли предположить иммунофеиотии опухолей сосудистого тракта глаза различного гистогенеза, тих предположительно мелаиомы цнлиарной локализации будут иметь иммунофенотнп: внментин +/+++, меланнн-А +/+++, НМВ45 +/+++, MITF +/+++, тнрознназа +/-Н-+, S-100 +/+++. Однако зтн теоретические предположения полагалось подтвердить на практике. Дня этого на первом этапе мы провели ИГХ-исследовання архивных блоков, верифицированных на световом уровне как неланомы, проверяя надежность предлагаемой диагностической ИГХ-панели эмпирическим путем, тахже, впрочем, как и правильность выдвигаемых научных гипотез Параллельно мы отрабатывали Протокол ИГХ-диагностики для опухолей сосудистого тракта глаза.

Пригодность архивных блоков для НГХ-нсследования проверяли с помощью маркера внментииа. На втором этапе проводили углубленную диагностику с тхаисднффсрснтвпионными маркерами нейрокальной н меланоцитарной днффереипировкн, проверяя их специфичность и чувствительность. При этом ориентировались на количество ложно-позитивных и ложно-нсгатнвньгх случаев.

Полученные результаты (100 % экспрессия S-IOO всеми тестируемыми опухолями, п=82) подтверждали высокую чувствительность и надежность маркера S-100 в диагностике опухолей сосудистого тракга глаза Вместе с тем, специфичность этого маркера, как и предполагали, нуждалась в попишегаш: позитивную реакцию давапн не только УМ, но н лейомиосаркома. Это ставило под сомнение возможность использования S-100 в качестве единственного маркера ИГХ-двагностики и обосновывало включение более высоко специфичных тхвнсднффсренлщиоюпАХ маркеров (табл.75)

Надежность HI "Х-диагностики с меланоцигарнымн маркерами проверяли на беегшментных УМ. Од|шко при количественной оценке ложно-негативных и ложио-пеп пленных случаев учитьшалн результаты в обеих подгруппах: пигментированных и бссингментнъех УМ Устанонлс1Ю, что все меланопнгарпые маркеры обладают высокой специфичностью и практически равноценной чувствительностью. Так, специфичность MITF как маркера меланоцитарных опухолей достигала 100 %, чувствительность -98%. Это характеризовало его как высоко специфичный и достоверный маркер и обосновывало его присутствие в ИГХ-пянели, предназначенной для дифференциальной диагностики опухолей сосудистого тракта глаза. При этом оставались 1 % ложно-нсплиаиых случаев.

Тирозина» показала себя также как надежный диагностический маркер, Вместе с тем, несмотря на высокую специфичность (100%) тирозииазы в диагностике опухолей сосудистого тракта глаза, се чувствительность была несколько ниже (98%) Пик ошибок приходился на наиболее сложные случаи - беспигменшые УМ: частота позюнвных случаев среди амсланотнчиых мсланом составила 94,2%. Это свидетельствовало о возможности ошибок в ИГХ-диагностике.

Маркер НМВ-45, как и меланин-А, иотаатнд в 100 % случаев распознать беспнгментные УМ Однако экспрессия мсланина-А в беспигмснтных УМ была в 1,9 раза слабое. Это затрудняло визуализацию ИГХ-рсакцин в клетке и диагностику в целом, повышая вероятность ошибки, Пошетт, надежность ИГХ метода можно было, включив в панель сразу несколько мелаиощггарных маркеров. Обоснованность такою технического приема доказываюсь статистически: в УМ, гкперзкпзресснруютих НМВ-45 (+++), как правило, имела место гнложспрессня (+) мелвнкна-А (р<0,1). Мы обыкни.'ш это тем, что экспрессия НМВ-45 ограничена мсланосомамн с незавершенным сишсюм меланина (Ш стадия созревания мсллносом), а экспрессия мсланина-А осуществляется премелшюсомамн I, П и 1Г1 типов. Таким образом, по-видимому, зги маркеры отражают разные стадии мслшюгенеза, а, следовательно. 11МВ-45-нсгзтивные меланомы будут экспрессировать меланнн-А. И наоборот, слабо ■экепреееируюшне меланнн-Л УМ б>'Д>т окрашиваться НМВ-45,

Выявленный факт имел важное значение для решения поставленных перед нами задач Он обосновывал включение нескольких маркеров мсланощпарного ряда в днапюстическую панель для повышения качества ИГХ-лизгноешкн. Этот прием позволил нам, проводя ИГХ-ксследоншия с архивными нарафшювымн блоками, исключить в 2 случаях диагноз лейомносаркомы и лейомномы радужки, поставленный на световом уровне, верифицировав с помощью ИГХ-мсгода верстеиоклеточиую мслаиому в обеих случаях. В двух других случаях, в текущем материале, напротив, мы исключили тестируемые опухоли из неоплазм меланошпарного ряда, диагностировав лейомиосяркому и лнмфому.

Результаты проведенных исследований позволили разработать и предтозагть собственный Протокол для ИГХ-диагиостики опУШ*гйеосп>истаго тракта глаза. Он состоит hi нескольких этапов. Пригодность парафиновых блоков для ИГХисследований проверяют с помощью виментнна ft этап). На U этапе проводят угаубленную диагностику с тханеднфференгащюнными маркерами нейрональной и мсланоцнтирной днфферснпировкн - S-IOO. тнроэнназой, меланнном-А и НМВ-45, Такой спектр маркеров позволит отдифференцировать УМ. составляющие подавляющее большинство опухолей сосудистого Tpjuoa глаза, от нсмеланоцнтврных опухолей. При отрицательной реакции с челатюнктарными маркерами ИГХ-диагностику бсс пигментных опухолей, в зависимости от их гистологического строения (1»фстсноклегом1юго или мелко клеточного), дополняют маркерами кноге иного и лимфешпарного ряда (Ш этап), В дальнейшем панель маркеров расширяют индивидуально, ориентируясь на результаты предыдущей лапой (схема 1). Многоэтапные Ш"Х-исследовання повышали точность диагностики. Таким образом, мы решили основную, поставленную перед нами задачу: разработку и внедрение а практику Протокола и гаа«ли для ИГХ-даагностики опухолей сосудистого тракта глаза.

Схема 2

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Верещагина, Марина Владимировна, 2006 год

1. Вайнштейн Е-С, Нцкннсон ЛЛ-, Бурдяиская Е.И. Материалы I Всероссийского съезда офтальмологов,- М. 1963, стр.204.

2. Витт В-В. Строение зрительной системы человека,- Одесса, Астропрнит. 2003;стр,562-601,

3. Дбар Ж,Н. Экспрессия ангиогсииых факторов при раке яичников III-IV стадии,-Дисс. канд. биол. наук М., 20ОЗ

4. Демидов JIB. Изучение факторов прогноза при мелаиоме кожи,- Авгореф, дисс. канд. М.,1982, стр. 19

5. Зиангирова ГГ., Лихваниева В Г, Опухоли сосудистого тракта глаза,- M.t Последнее слово, 2003, стр.454,

6. Зиангирова Г Г., Федоров А.А. Патология клеток в слабоншментированных веретеноклеточных опухолях сосудистой оболочки глаза,- XIII Всесоюзная конференция но электронной микроскопии. М., 1989; стр.113,

7. Канцерогенез, Под ред. Д.Г. Заряде, Руководство,- М., Медицина, 2006, стр^74.в. Корсика* IO.M, Клиника, диагностика, морфология хюкачсственныхмеленом сосудистого тракта глаза.- Автореф, дисс. канд. М, 1964.

8. Костюкова Т.Д., Тадз А.А , Знангироад Г-Г. Материалы I Всероссийского съезда офтальмологов,- М,, 1963, стр. 274,

9. Левкоева Э.Ф. Опухоли глаза,- М., Медицина. 1973, стр.215.

10. Офтальмоонкологня. Под ред. проф. А.Ф. Бровккной- М, Медицина. 2002, стр. 421.

11. Пальцев М-А„ Аничков Н.М. Атлас патологии опухолей человека.- М., Медицина, 2005, стр. 132-139.

12. Начес А. И„ Бровкина А. Ф-, Зиашцрова Г Г. Клиническая онкология органа зрения, М., Медицина, 1980. стр.325.

13. Руководстве по иммуногистохимнческой диагностике опухолей человека. Под ред. С В. Петрова и Н.Т Райхлина Казань, Титул, 2004, стр.451.

14. Учебник глазных болезней. Под ред Э.Фукса, Пер. В.П. Одинцова и С.А. Бахыутской М-, Мсднздаг, 1932.

15. Хамидова MX PuBtmie глаза н проводниковых зрительных путей у человека до и после рождения. Ташкент, Медицина, 1972. стр.73,

16. Хьюбе.1 Д. Глаз, мозг, зрение-- М., Мир, 1990, стр. 237.

17. Шепкадойа В.М., Хорасаиян-Таде АЛ,, Дислср О.Н. Внутриглазные опухоли. Атлас.* М, Медицина, 1965, стр, 6-86,

18. A alto. Y. Eriksson, L, Scregard. S, Larsson. O, Knuutila, S. Concomitant toss of chromosome 3 and whole arm losses and gains of chromosomes I, 6, or 8 in metastasizing primary uveal melanoma.// Invest Ophthalmol Vis Sci. 2001, vol.42, p.313-317

19. All-Ericsson C, Gitnila L, Muller-Bnmoflc A, Brodin B. Scregard S. Ostman A, Larsson O. c-Kit-dependcnl growth of uvea. melanoma cells: a potential therapeutic target?// Invest Ophthalmol Vis Sci, 2004, vol.45, p.2075-2082.

20. Anastassiou G, HeiJigenhaus A, Bechrakis N, Bader E, Bornfeld N, Sieuht K-P. Prognostic value of clinical and histopathologic parameters in conjunctival melanomas: a retrospective study J! Br J Ophthalmol, 2002, vol.86, p. 163-167.

21. Ashlon N. Primary tumors of the ins. Br J Ophthalmol, 1964,48:650-668.

22. Bacehi CE, Bonetti F. Pea M, et al HMB-45; a review Л Appl Immunohistochcm, 1996, vol. 4, p.73

23. Barishak Y. R, Embriology of tike eye and its adnexa,// Karger, 2001, p. 128,

24. Bortkova J, Lukaj. J, Strauss M, Bartek J- . Cyclin D1 oncoprotein aberrantly accumulates in malignancies of diverse histogenesis Л Oncogene, 1995, voLlO, p.775-778

25. Beckcnkamp G. Schafer H, von Domarus D. tmmunocytochcmical parameters in ocular malignant melanoma-// Eur J Cancer Clin Oncol, 1988, vol.24, p.41-45.

26. Bumier MN Jr, McLean IW, Gamel JW, Immunohistochcmicol evaluation of uveal melanocyte tumors.// Cancer, 1991, vol. 68, p.809-14.

27. Callender G-R- Malignant melanotic turned of the eye: study of histologic types in 111 cases//Trans, Am. Acad, Ophthalmol, Otolaringol., 193l.voE.36. p,l3l-E42.

28. Callender GR, Wilder HC, Ash JE. Five hundred melanomas of the choroid and cilliary body: Followed live years or longer.// Am J Ophthalmol, 1942, vol.25, p.962-967.

29. Chana J.S-, Wilson G.D., Сгее I.A. et al. c-myc, p53, and Bcl-2 expression and clinical outcome in uveal melanoraaJ/ Br J Ophthalmol, 1999, vol.83, p.l 10-114.

30. Chen X., Maniotis AJ,, Majumdar D,, Pe'er J., Folberg R. Uveal melanoma cell staining for CD34 and assessment of tumor vascularityV/ Invest Ophthalmol Vis Set, 2002, vo. 42. No.8, p. 2533-2539

31. Chiquet C., Grange J,D.4 Ayzac L. et al. Effects of proton beam irradiation on uvea. melanomas: a comparative study of Ki-67 expression in irradiated versus non-imuliased melanomas Л Br J Opftthaimot, 2000. vol .84, p.98-102.

32. Clanjis R, Sehalkwijk L, Ruiter DJ, de Waal RMW. Lack of lymphangiogencsis despite coexpresston of VEGF-C and its receptor Flt-4 in uveal metanomaV/ Invest Ophthafmol Vis Sci., 2001, vol.42, p. 1422-1428.

33. Cochran AJ. Lu HF, Li PX, Saxton R, Wen DR. S-100 protein remains a practical marker for melanocyte and other tumors.// Melanoma Res, 1993, vol,3, p.325-330.

34. Cohran AJ, Holland GN. Wen D, Hcrschman HR. Lee WR, Foots RY, et at. Detection of cytoplasmic S-100 protein in primary* and metastatic intraocular melanomas.// Invest Ophthalmol V» Sci, 1983, vol.24, p.l 153-1155.

35. Coupland S.E-, Anasiassiou G , Sung A. et al. The prognostic value of cyclin Dl, p53, and MDM2 protein expression in uveal melanoma.// J Pathol 2000. vol. 1911 p. 120126,

36. Couptand SH, Bechrakis N, Schutcr A, et al. Expression patterns of cyclin 01 and related proteins regulating Gl-S phase transition in uveal melanoma and retinoblastoma Л Br J Ophthalmol, 1998. vol.82, p,961-970.

37. Couptand SE, SidLki S, Clark BJ, McClaren K, Kyle P, L« WR. Mctaststic choroidal melanoma to the contra lateral orbit 40 years after enucleation.// Arch Ophthalmol, 1996, vol, 114, p.751-756.

38. Cree IA. Cell cycle and melanoma two different tumors from the same cell type.// J Pathol, 2000, vol. 19 3, p, 112-114.

39. Cu-Unjicng AB. Shields CL, Shields JA. Iris melanoma in congenital ocular melanocytosis,// Cornea, 1995, vol. 14. p.206-209.

40. Dei Tos AP, Doglioni C, Piccinin S, et al. Molecular abnormalities of the p53 pathway in differentiated liposarcomaj1/ J Pathol, 1997, vol, I SI, p.S.

41. Dome В,, Somfui В., Timor J. I"hc loss of nm23 protein in malignant melanoma predicts lymphatic spread without affecting survival// Anticancer Res, 2000, vol, 20, p,3971-3974.

42. Dowdy SF. Hinds PW. Louie K, Reed SI. Arnold A. Weinberg RA, Physical interaction of the retinoblastoma protein with human D cyclins// Cell, 1993, vol. 73, p.499-511.

43. Duke & Dun Primary tumors of the iris,// Arch Ophthalmol. 1958,vol. 59, p.204-214.

44. Durie. FH, Campbell, AM, Lee, WR, Damato, BE. Analysis of lymphocytic infiltration in uveal melanoma,// Invest Ophthalmol Vis Sci, 1990, vol.31, p.2106-2110.

45. Egan, KM, Seddon, JM. Glynn, PJ. Gragoudas, ES, Albert, DM, Epidemiologic aspects of uveal melanoma// Surv Ophthalmol. 1988, vol ,32, p,239-251,

46. Ewen ME, Sluss HK, Sherr CJ, Matsushime H, Kalo J, Livingston ОМУ/ Functional interactions of the retinoblastoma protein with mammalian D-type cyclins./,1' Cell, 1993. vol.73, p.487-497.

47. Fernando S$, Johnson S, Bate J Immurmtustochenucai analysis of cutaneous malignant melanoma: comparison of S-100 protein, KMB-45 monoclonal antibody and NKI-C3 monoclonal antibody// Pathology, 1994, vol,26, p. 16-19.

48. Fioreniini G . Rossi S. Lanzanova G Potential use of imatinib mesylate in ocular melanoma and Itposarcoma expressing immunohistochermcal c-KIT (CDI 17)// Annals of Oncology, 2003,vol. 14, p.805.

49. Folberg R, McLean 1W, Zimmerman LE, Malignant melanoma of the conjunctiva// Hum Pathol. 1985, vol. 16, p, 136-43,

50. Folberg R. Rum melt V, Parys-Van Ginderdeuren R, ei al. The prognostic value of tumor blood vessel morphology in primary uveal melanoma// Ophthalmology, 1993, vol.100, p. 1389-139B.

51. Font R. L., Croxatto J.O., Pao N.A. Tumors of the eye and ocular adnexa// AF1P series 4, Washington, 2006, pp,339.

52. Foss AJ, Pecorella I, Alexander RA, Hangerford JL, Gamer A. Are most intraocular «leiomyomas)» really melanocyte lesions?// Ophthalmology, 1994, vol. 101, p.919-924.

53. Freedman DA, Wu L, Levtne AJ. Functions of the MDM2 oncoprotein// Cell Mol Lire Set, 1999, vol.55, p.96-107

54. Fuchs U, Kivcla T, Liesto K, Trkkanen A. Prognosis of conjunctival melanomas in relation to hislopatbological features// Br J Cancer, 1989, vol.59, p.261-267.

55. Gallagher RP, Elwood JM. Rootman J, Epidemiologic aspects of intraocular malignant melanoma//Cancer Treat Res, 1988, vol.43, p.73-84.

56. Ganley JP. Comstock, Benign ncvi and malignant melanomas of the choroids.// Am. J. Ophthalmol, 1973, vol. #6, p. 19-25.

57. Gass J. Differential diagnosis of intraocular tumors. U St Louts, Mosby, 1974; p. 14-58.

58. Gillct C, Smith Pr Gregory W, et al. Cyclin D! and prognosis in human breast cancer,// Int J Cancer, 1999, vol.69, p.92-99

59. Gown AM, Voget AM, Hoak D, et al. Monoclonal antibodies specific for melanocyte tumors distinguish subpopdatioos of melanocytes.// Am J Pathol. 1986, vol 123, p .1 95-203.

60. Greco I.M. C'alvisi G , Ventura L, Ccnrito F. An immunotiistochcmital analysis of nm23 gene product expression in uveal melanoma.// Melanoma Res, 1997, vol.7, p,231-236,

61. Gregorius PM Luyten, Cornelia M Mooy, Jennie Post et al. Metastatic uveal melanoma. Morphologic and immunohistochernical analysis.// Cancer, 1996, vol,78, p. 1967-1971.

62. Grossing tails HE, LLm JL Adenoma of the nonpigmcnted ciliary epithelium.// Retina, 1994, vol.14, p,452-456.

63. Grossinklaus HE, Zimmerman LE, Kaehmer ML. Pleomorphic adenocarcinoma of the cilliary body: immunohistochernical and electron microscopic features.// Ophthalmology', 1990, vol,97, p.763-768,

64. Gustafsson B, Stal O, Gustafsson B, Overcxprcssion of MDM2 oncoprotein in acute childhood lymphoblastic leukemiaj'/ Pcdtatr Hematol Oncol. 1998, vol. 15, p,5I9-526.

65. Holbrook KA, Underwood RA, Vogel Am, et al. The appearance, density and distribution of melanocytes in human embryonic and fetal skin revealed by the anti-melanoma monoclonal antibody, НМВ-457/Anat Embryol, 1989. vol. 180, p.443-455,

66. Human malignant melanoma, Ed. by Clark W.H., Goldman L.I., Mastrangclo ШЛ Gmne and Stratton, 1979, p. 509.

67. Iscovich J, Abdulrazik M, Pc'ef J. Posterior uveal malignant melanoma: temporal stability and ethnic variation in rates in Israeli/ Anticancer Res, 2001, vol.21, p.I449-1454.

68. Iscovich J, Ackerman С, Andreev H, Ре'ет J. Steinitz R- An epidemiological study of posterior uveal melanoma in Israel. 196Ы989// Int J Cancer, 1995. vol,61, p,29l-295,

69. Isola J, Hclin H. Kallioniemi OP. Immunoelectron-mieroscopie localization of a proliferation-associated antigen Ki-67 in MCF-7 cells// Hislochcm J, 1990, vol.22, p.498.

70. Iwamoto S, Burrows RC, Grossinklaus HE. Orcutt J, Kalina RE, Boehm M, Bothwcll M, Schmidt R Immunophenolype of conjunctival melanomas.// Arch Ophthalmol, 2002, vol, 120. p,1625-1629,

71. Iwamoto S, Burrows RC, Kalina RE el al. Immunophenotypic differences between uveal and cutaneous melanomas.// Arch Ophthalmol, 2002, vol.120, p.466-470.

72. Jakobicc FA. Gilbert S. Are most iris "melanomas" really nevi?// Arch Opthalmol, 1981, vol.99, p.2H 7-213283, Jeon Y.K-, Cha HJ . Kim N,R. et at. Leiomyoma in the posterior choroids: a casereport.// J Korean Med Sci, 2002, vol.17, p.429-33.

73. Кал-Mitchell J, Rao N, Albert DM, van Eldrik, Taylor CR. S-100 immwKiphenotypcs of uveal melanomas,// Invest Ophthalmol Vis Sci, 1990, vol,31, p. 1492-1496,

74. Kaufmann O, Koch. Burglwdt J, et si. Tyrosinase, Meian-A, and КВЛ62 as markers for the Lmrmmohistochemical identification of metastatic amelanotic melanomas on paraffin sections.// Mod Pathol, 1998, vol.ll, p.740.

75. Kincaid M. Uveal melanoma.'1/ Cancer. 2002;vol .5, p. 1 -11.

76. Klaus-Peter Steuhl, Jens Martin Rohrbach, Marcus Knorr, Hans-Jurgen Thicl. Significance, specificity, and ultrastructural localization of HMB-45 antigen in pigmented ocular tumors// Ophthalmology, 1993, vol.100, p.208-215

77. Kuchle M., Holbach L., Schlotzer-Schrchardt U. et al. Swannoma of the ciliary body treated by block excision// British J Ophthalmology. 1994, vol.78, p.397-400.

78. Lefevre G, Glotin AL, Caltpel A, Mouriaux F, Tran T, Kherrouche Z, Maurage CA, Auctair C, Mascarelli F, Roles of stem cell factor/c-Kit and effects of Glivec/ST157l in human uveal melanoma cell tumorigencsis// J Biol Chem, 2004, vol.279, p.31769-31779.

79. Lt W., Jugde FL, Gradoudas E-S., Seddon J.M., Egan K,M. Paueras of lumor initiation in choroidal melanoma''/ Cancer Res, 2000, vol.60, p.3757-3760.

80. Makitie Т., Summanen P., Tarkkanen A., Kivela T. Tumor-infiltrating macrophages (CD68" cells) and prognosis in malignant uveal melanoma// Invest Ophthalmol Vis Sci, 2001, uol.42, p.1414-1421.

81. Mantovani A. Tumor-associated macrophages in neoplastic progression: a paradigm for the in vivo function ofchemokincs// Lab Invest, 1994, vol.71, p.5-16

82. Marcus DM, Sahel JA, Jakobiec FA, Albert DM. Pigmented tumors of the iris. In: Jakobiec FA, Albert DM (eds). Principle and practice of ophthalmology.// Saunders, Philadelphia, 1994, p.3198-3208.

83. Matsuo Т., Notohara K. Choroidal Schwannoma: immunohistochcmical and electron microscopic study.// Ophthalmologics, 2000, vol.214, p. 156-160.

84. McDonnell JM, Sun YY, Wagner D. HMB-45 Immunohistochemical staining of conjunctival melanocytic lesions.// Ophthalmology. 1991, vol.98, p.453-458,

85. McLean I, Uveal nevi and malignant melanomas. In: Spenser W, ed. Ophthalmic Pathology; An Attas and Textbook. 4ft t&Jt Saunders Co, Philadelphia, 19%, p.2l2l2217.

86. McLcan IW Prognostic features of meal malignant melanoma// Ophthalmol Clin North Am, 1995, voL 8, p. 143-153.

87. Michalides R, van Veelen Nr Han A, Lollus B, Weintjens E, Balm A. Ovetexpression of cyclin D1 correlates with recurrence in a group of forty-seven operable squamous cell carcinomas of the head and neck// Cancer Res, 1995, vol.55, p.975-978.

88. Mouriax P., Khcrrouche Z„ Maursge C.A- et al. Expression of c-fcit receptor in choroidal melanomas.// Melanoma Res, 2003, vol.13, p. 161-166.

89. Mouriax F-, Vincent S., Kherrouchc Z„ Maurage C.A. ct al. Microphthalmia transcription factor analysis in posterior uveal melanomas/'1 Exp Eye Res, 2003, vol,76, p.653-661.

90. Muro-Cacbo CA, Holt T, Klotch D, Mora L, Livingston S, Fuuan N. Cyclin D1 expression as a prognostic parameter in papillary carcinoma of the thyroid Л Otolaryngol Head Neck Surg, 1999, vol.120, p.200-207.

91. Nakajima T, Watanabc S, Sato Y, ct al. Immunohistochcmical demonstration of S-100 protein in human mali^iant melanoma and pigmented nevi// Garni, 1981, vol.72,p335,

92. Nakajima T. Watanabc S, Sato Y, ct al. Immunohistochcmical demonstration of S-100 protein in malignant melanoma and pigmented nevus, and its diagnostic application// Cancer, 1982, vol.50, p.912.

93. Nakajima T, Watanabc S. Sato Y. Karncya T, Hirota T, Shimosato Y An immunoperoxidase study of S-100 protein distribution in normal and neoplastic tissues// Am J Surg Pathol. 1982, vol.6, p.715-727

94. Nils tide. Inger Nina Farstad. Magnus Roger Л leiomyoma of the iris documented by immunohislochemtslry and electron microscopy Л Acta Ophthalmol Scand, 1997, vol.75, p.470-473.

95. Noden DM. Periocular mesenchyme: neural crest and mesodermal interactions. In: Jacobicc FA, ed. Ocular Anatomy, Embryology, and Тотtology.//Harper & Row Publishers, Philadelphia, I982,p.97-I19.

96. Oh KJ., Kwon BJ., Han M.H. et al MR imaging of uveal leiomyoma: three cases.'/ Am J Ncuroradiol, 2005. vol 26, p. 100-103.

97. Ordonez NG. Ji XL, Htckcy RC, Comparison of HMB-4S monoclonal antibody and S-IOO protein in the immunohistochcmical diagnosis of mdinom*// Am J Clin Pathol. 1998, vol.90, p.385-390.

98. Orosz Z, Melan-A/Mart-1 expression in various mctanocytic lesions and in non-mcfanocytic soft tissue tumors.// Histopathology, 1999, voL34T p.517-525

99. Pereira PR., Odashtro AN. Marshall J Cocxea Z.M et al. The role of e-kit and imatinib mesylate in uveal melanoma.// Journal of Carcinogenesis, 2005, vol.4, p. 19,

100. Raichcv R. Structure and control оГЛе melanocyte.// Springer-Verlag, New York. 1966, p 219-227.

101. Raivio I. Uveal melanoma in Finland: an epidemiological, clinical, histological and prognostic study Ji Acta Ophthalmol, 1997, vol.55, p,5-64,

102. Ramaefccn FCS, Puts IJG, Moesker O, et al Antibodies to intermediate filament proteins in immunohistochcmical identification of human tumors: an overview-// Histochem J, 1983, vol.15, p.691-713,

103. Ringens PJ. van Hapercn R, Vcnncgoor C, de Jong PTVM, van Dumen SG, Ruiter DJ. el al. Monoclonal antibodies in detection of choroidal melanoma.// Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol, 1989, p.227-290.

104. Roque M.R, Leiomyoma, iris Л march 2005 httpJ/www.emedicine.conv'OPH/topic 589-htm.

105. Serbia M, Stahl M, Fink U. et al, Prognostic significance of cyclin DI in esophageal squamous cell carcinoma patients treated with surgery alone or combined therapy modalities JI Int J Cancer, 1999, vol .84. p.86-91.

106. Scotto J, Fraumcni JF, Lec J A- Melanomas of the eye and other noncutaneous sites: epidemiological aspects.// J Natl Cancer Inst, 1976, vol.56, p,489-91.

107. Scull J J., Alcocer C.E„ Deschettes J. et at. Primary choroidal melanoma in a patient with previous cutaneous melanoma.// Arch Ophthalmol, 1997, vol.115, p.796-798.

108. Seregard S, Conjunctival melanomai/ Surv Ophthalmol, 1998. vol.42, p.321-350.

109. Shields CL, Shields J A, Kiratli, H. Dc Patter, P, Cater, JR. Risk factors for growth and metastasis of small choroidal melanocyte faiansjV Opbtha/mofogy, 1995, voJJ02, p. 1351-1361.

110. Shields JA, McDonald PR, Improvements in the diagnosis of posterior uveal melanoma-// Arch. Ophthalmol, 1974. vol.91. p.S26-829.

111. Shields JA, Ramon L. Eagle RC ct al. Melanotic Swannoma of the choroid.'1/ Ophthalmology', 1994. vol.101, p, 8*13-848.

112. Shields JA, Shields CL. Eagle RC, De Potter P Observations on seven cases of intraocular leiomyoma. The 1993 Byron Dcmorest Lecture.// Arch Ophthalmology. 1994. vol.112, p.521-528

113. Shields JA, Shields CL. Intraocular tumors. A text and atlas.// W.B, Saunders, Philadelphia. 1992, p-252-255.

114. Silvers D, Jakobiec FA, Freeman T, Melanoma of the conjunctiva: u cltnicopathological study. In: Jakobiec FA, ed. Ocular and adncxal tumors.// Birmingham: Aesculapius Publishing company, 1978, p.583-599,

115. Skalli O., Ropraz P., Trzectak A., et al. A monoclonal antibody against alpha-smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation.// J Cell Biol, 1986, vol.103, p.2787.

116. Soft tissue tumors. Enzinger and Weiss's 4* edition-// Mosby, 2001, p. 199-240.

117. Sundcrfcotter, C, Steinbrmk, K, Goebeler, M, Bhardwaj, R, Sorg, C. Macrophages and oncogenesis.// J Lcukoc Biol. 1994, vol.55, p.410-422.

118. Tcrrito C, Shields J A, Shields CL, et al. Natural course of melanocyte tumors of the iris// Ophtalmol, 1988, vol.94, p.1251-1255.

119. Tobal, K, Deublc, K, McCartney, A, Lighiman, S. Characterization of cellular infiltration in choroidal melanoma.// Melanoma Res, 1993. vol.3t p,63-65,

120. Toivonot P., Makitic T„ Kujala E., Kivcla T. Microcirculation and tumor-infiltrating macrophages in choroidal and ciliary body melanoma and corresponding metastases.// Invest Ophthalmol Vis Set, 2004, vol,45, p, 1-6.

121. Tulvauma W. et al Epstein-Ban Virus-Associatcd Leiomyosarcoma of the iris in a child infected with human immunodeficiency Virus// Arch Ophthalmol, 2003. vol. 121, pT 478-1481

122. Van de Rijn M, Rouse R. CD34: a review// Appl Immimohistochem, 1994. vol.2. p.7l.

123. Welchel J.C., Farah S,E Fmmunohistochemistry of infiltrating lymphocytes in uveal malignant melanoma// Invest Ophthalmol Vis Set. 1993, vol, 34, p.2603-2606,

124. Yanoff M. Fine BS. Ocular Pathology; A Text and Atlas, ed// JB Lippincott, Philadelphia, I989,p.336

125. Zictz C, Rossle M, Haas C. et al. MDM2 oncoprotein overcxptcssion, p53 gene mutation, and VHGF up-regulation in angiosarcomas.// Am J Pathol, 1998, vol.153, p, 1425-1433.

126. Zimmerman L.E. Malignant melanoma- In: Spencer W.H., Ophthalmic Pathology 3 rd Ed// W.B. Saunders Company, Philadelphia, 1986, p 2072-2139,