Химико-токсикологическое исследование отдельных биологически активных веществ производных 3-трифторметиланилина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Андреева Юлия Владимировна

• Андреева Юлия Владимировна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Андреева Юлия Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Физические свойства, получение и применение отдельных производных 3-трифторметиланилина

1.2 Токсикологическая характеристика и метаболизм

1.3 Идентификация объектов исследования

1.4 Количественное определение

1.5 Изолирование и очистка производных 3-трифторметиланилина

1.6 Распределение в организме теплокровных животных и сохраняемость в

трупном материале производных 3-трифторметиланилина

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, МАТЕРИАЛЫ, ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАКТИВЫ. СИНТЕЗ РАБОЧИХ СТАНДАРТОВ И ПОДТВЕРЖДЕНИЕ СТРУКТУРЫ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ТРИФТОРМЕТИЛАНИЛИНА

2.1 Объекты исследования

2.1.1 Синтез, очистка и определение содержания 4-нитро-3-трифтор-метиланилина

2.1.2 Синтез, очистка и определение содержания 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида

2.1.3 Синтез, очистка и определение содержания №(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида

2.2 Приборы и оборудование

2.3 Реактивы

2.4 Материалы

2.5 Посуда

2.6 Характеристика лабораторных животных и условий их содержания

2.7 Подтверждение структуры производных 3-трифторметиланилина

2

2.7.1 Ядерный магнитный резонанс

2.7.2 Колебательная ИК-спектрофотометрия

2.8 Идентификация производных 3-трифторметиланилина

2.8.1 Идентификация фотометрическими методами

2.8.1.1 Идентификация методами электронной спектрофотометрии

2.8.2 Идентификация хроматографическими методами

2.8.2.1 Идентификация методом нормальнофазовой ТСХ

2.8.2.2 Идентификация методом обращеннофазовой ТСХ

2.8.2.3 Идентификация методом нормальнофазовой ВЭЖХ

2.8.2.4 Идентиификация методом обращеннофазовой ВЭЖХ

2.8.3 Идентификация методом хромато-масс-спектрометрии

Выводы ко второй главе

ГЛАВА 3 КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ТРИФТОРМЕТИЛАНИЛИНА

3.1 Определение спектрофотометрическим методом

3.1.1 Определение 2-метил-Ы-(4-нитро-3-(трифторметил)фенил)-пропанамида (флутамида)

3.1.2 Определение 4-нитро-3-трифторметиланилина

3.1.3 Определение 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)-пропанамида

3.1.4 Определение К-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида

3.2 Определение нормальнофазовой ВЭЖХ

3.2.1 Определение 2-метил-Ы-(4-нитро-3-(трифторметил)фенил)-пропанамида (флутамида)

3.2.2 Определение 4-нитро-3-трифторметиланилина

3.2.3 Определение 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)-пропанамида

3.2.4 Определение К-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида

3.3 Определение обращеннофазовой ВЭЖХ

3.3.1 Определение 2-метил-Ы-(4-нитро-3-(трифторметил)фенил)-пропанамида (флутамида)

3.3.2 Определение 4-нитро-3-трифторметиланилина

3.3.3 Определение 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)-пропанамида

3.3.4 Определение К-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида

Выводы к третьей главе

ГЛАВА 4 МОДЕЛИРОВАНИЕ УСЛОВИЙ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ТРИФТОР-МЕТИЛАНИЛИНА

4.1 Очистка с применением экстракционных методов

4.1.1 Жидкость-жидкостная экстракция производных 3-трифторметиланилина из водных растворов

4.1.2 Жидкость-жидкостная экстракция производных 3-трифторметил-анилина из водно-ацетонитрильных растворов

4.2 Очистка с применением методов хроматографии

4.2.1 Нормальнофазовый вариант тонкослойной хроматографии

4.2.2 Обращеннофазовый вариант тонкослойной хроматографии

4.2.3 Хроматография в макроколонке нормальнофазового сорбента

4.2.4 Хроматография в макроколонке обращеннофазового сорбента

4.3 Экспериментальное подтверждение эффективности очистки извлечений из биологического материала в контрольных опытах

4.3.1 Подтверждение эффективности очистки извлечений методом жидкостной колоночной хроматографии

4.3.2 Подтверждение эффективности очистки извлечений методом тонкослойной хроматографии

4.3.3 Подтверждение эффективности очистки извлечений методом жидкость-жидкостной экстракции

4.3.4 Подтверждение эффективности очистки извлечений сочитанием методов жидкость-жидкостной экстракции и колоночной

хроматографии

Выводы к четвертой главе

ГЛАВА 5 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ТРИФТОРМЕТИЛ-

АНИЛИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ МАТРИЦАХ

5.1 Определение оптимальных условий изолирования группы рассматриваемых веществ из биологического материала

5.1.1 Выбор жидкого изолирующего агента, оптимального для изолирования производных 3-трифторметиланилина методом настаивания

5.1.2 Исследование влияния продолжительности контакта ацетона и биологической матрицы на степень извлечения раасматриваемой группы веществ

5.1.3 Исследование влияния зависимости от количественного соотношения «изолирующий агент-биоматериал» и кратности настаивания на степеь извлечения анализируемой группы веществ

5.1.4 Изолирование производных 3-трифторметиланилина из ткани печени

5.1.5 Изолирование производных 3-трифторметиланилина из крови

5.1.6 Изолирование производных 3-трифторметиланилина из плазмы крови

5.1.7 Изолирование производных 3-трифторметиланилина из мочи

5.1.8 Определение производных 3-трифторметиланилина с применением очистки методом хроматографии в макроколонке нормальнофазового сорбента

5.1.9 Определение производных 3-трифторметиланилина с применением

очистки методом хроматографии в макроколоке обращеннофазового

сорбента

5

5.1.10 Определение производных 3-трифторметиланилина с применением очистки сочетанием методов жидкость-жидкостной экстракции и хроматографии в макроколонке нормальнофазового сорбента

5.2 Определение определяемого минимума производных 3-трифторметиланилина в биологическом материале

5.2.1 Определение определяемого минимума производных 3-трифтор-метиланилина с применением очистки методом хроматографии в макроколонке нормальнофазового сорбента

5.2.2 Определение определяемого минимума производных 3-трифтор-метиланилина с применением очистки сочетанием методов жидкость-жидкостной экстракции и ъроматографии в макроколонке нормальнофазового сорбента

5.3 Общая схема исследования биоматериала при отравлении

производными 3-трифторметиланилина

Выводы к пятой главе

ГЛАВА 6 ИЗУЧЕНИЕ ХАРАКТЕРА РАСПРЕДЕЛЕНИя ПРОИЗВОДНЫХ 3-ТРИФТОР-МЕТИЛАНИЛИНА У ТЕПЛОКРОВНЫХ ЖИВОТНЫХ И ИХ СТАБИЛЬНОСТЬ В ТРУПНОМ МАТЕРИАЛЕ

6.1 Распределение производных 3-трифторметиланилина у теплокровных животных (лабораторные крысы)

6.2 Изучение стабильности прозводных 3-трифторметиланилина в

разлагающемся биологическом материале

Выводы к шестой главе

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Химико-токсикологическое исследование отдельных биологически активных веществ производных 3-трифторметиланилина»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Производные 3-трифторметиланилина (флутамид - 2-метил-Ы-(4-нитро-3-(трифторметил)фенил)пропанамид - и его метаболиты: 4-нитро-3-трифторметиланилин, 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)-пропанамид и К-(4-ацетамино-3-

(трифторметил)фенил)ацетамид - являются соединениями, обладающими биологической активностью. Флутамид применяется в медицине как противоопухолевое лекарственное средство для лечения рака предстательной железы. Базовыми структурами, на основе которых синтезируются прекурсоры рассматриваемой группы веществ, являются анилин и 4-нитроанилин (базовые структуры).

Соединения рассматриваемой группы токсичны для теплокровных организмов, в том числе и человека. Например, LD50 флутамида для крыс при пероральном введении 787 мг/кг, при внутрибрюшинном - 289 мг/кг. ЬС50 у крыс, отравленных ингаляционно превышает 0,25 мг/л. ЬЭ50 данного вещества для собак при пероральном введении >2 мг/кг. Несколько меньшие показатели токсичности имеют другие рассматриваемые соединения. Токсичность данной группы веществ чаще всего сопряжена с нарушением функций печени, почек и щитовидной железы.

Известны случаи острого отравления человека производными 3-трифторметиланилина, в частности, флутамидом. При длительном применении флутамида неоднократно регистрировались тяжелые случаи поражения печени, что в итоге иногда приводило к летальному исходу. Производные 3-трифторметиланилина как отравляющие агенты представляют потенциальную опасность для человека в процессе контакта с ними на производстве, при ошибочном приеме токсических доз или при возможных попытках самоубийств.

Всё вышеперечисленное служит необходимым основанием для изучения этих соединений в химико-токсикологическом отношении. Повышение объективности доказательства отравлений флутамидом, в том числе летальных, возможно на основе определения в биологических объектах не только исходного отравляющего вещества, но и близких по структуре продуктов его биотрансформации. Учитывая высокую токсичность ряда метаболитов флутамида, возможно их рассмотрение в качестве самостоятельных объектов химико-токсикологического анализа.

Степень разработанности темы исследования. Анализ литературных данных показал, что многие вопросы изолирования флутамида и его метаболитов из тканей органов и биожидкостей, их очистки от эндогенных веществ биологических матриц, обнаружения, идентификации и оценки количественного содержания остаются малоразработанными. В научной литературе нами не обнаружены данные о распределении токсических доз изучаемых веществ в организме теплокровных животных и об их стабильности в гнилостно разлагающемся биоматериале.

Таким образом, проведение исследований в области разработки методик химико-токсикологического анализа производных 3-трифторметиланилина (флутамида и его метаболитов) является актуальным.

Цель исследования. Разработка методик изолирования, очистки и определения производных 3-трифторметиланилина (флутамида и его метаболитов) для химико-токсикологического анализа.

Задачи исследования. Задачами данного исследования явились:

- синтезировать и очистить рабочие стандартные образцы 4-нитро-3-трифторметиланилина, 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)-

фенил)пропанамида и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида,

доказать соответствие синтезированных веществ ожидаемой химической структуре;

- изучить хроматографическое поведение (методы тонкослойной и колоночной хроматографии) и особенности экстракции производных 3-трифторметиланилина из водных и смешанных сред;

- разработать способы количественной оценки содержания флутамида, 4-нитро-3-трифторметиланилина, 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида хроматографическими (ВЭЖХ) и спектрофотометрическими методами;

- определить оптимальные условия изолирования производных 3-трифторметиланилина из биологических матриц с применением метода настаивания, предложить варианты экстракционных и хроматографических способов очистки извлечений от эндогенных веществ биоматериала;

- изучить особенности распределения токсических доз исследуемых веществ в организме теплокровных животных;

- определить влияние температуры и времени на стабильность соединений исследуемой группы, контактирующих с гнилостно разлагающимися биологическими тканями.

Научная новизна. Определены основные ионы характерных кластеров положительно заряженных частиц в масс-спектрах флутамида, 4-нитро-3-трифторметиланилина, 2-метил-Ы-(4-амино-3-

(трифторметил)фенил)пропанамида и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)-фенил)ацетамида после фрагментации их молекул методом электронного удара.

Выявлены и обоснованы оптимальные условия

хроматографирования в различных типах сорбентов и рассчитаны

параметры, характеризующие хроматографическую активность и

9

особенности разделения производных 3-трифторметиланилина при использовании ряда методов плоскостной и колоночной жидкостной хроматографии (ТСХ, макроколоночной хроматографии низкого давления, ВЭЖХ), а также комбинации методов ГЖХ и масс-спектрометрии.

Разработаны и статистически охарактеризованы методики количественной оценки группы рассматриваемых соединений в субстанциях и извлечениях из биологических матриц на основе применения методов нормальнофазовой и обращённофазовой ВЭЖХ, а также электронной спектрофотометрии.

Выявлены основные параметры и условия очистки соединений рассматриваемой группы от эндогенных веществ биологических матриц с использованием хроматографических (тонкослойная и макроколоночная хроматография) и экстракционных (жидкость-жидкостная экстракция) методов.

Обоснована возможность применения ацетона как наиболее универсального жидкого извлекающего агента для изолирования производных 3-трифторметиланилина из биоматериала методом настаивания. Определены оптимальные условия и предложены варианты определения флутамида, 4-нитро-3-трифторметиланилина, 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида в твёрдых (органы и ткани) и жидких (кровь, плазма, моча) биологических матрицах на основе использования ацетона как изолирующего агента и очистки методами жидкость-жидкостной экстракции и хроматографии в тонких слоях и колонках сорбентов.

Выявлены характерные особенности распределения производных 3-трифторметиланилина в теплокровных организмах (на примере крыс), отравленных токсическими дозами соединений исследуемой группы.

Установлены сроки, в течение которых соединения рассматриваемой группы сохраняют стабильность в среде гнилостно разлагающихся биологических тканей при трёх различных температурных режимах.

Теоретическая и практическая значимость работы. Установлен рост хроматографической активности производных 3-трифторметиланилина в тонких слоях и колонках нормальнофазовых сорбентов сорбентов с увеличением полярности подвижных фаз и наличия в молекулах адсорбатов активных центров, способных к образованию с поверхностью сорбента временных связей, в ряду флутамид < 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамид < 4-нитро-3-трифторметил-анилин < К-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамид. Обратная зависимость наблюдается при хроматографировании в обращённофазовых сорбентах. Наибольшая степень экстракции рассматриваемых соединений из водных и смешанных сред достигается сложными эфирами алифатических кислот, причём степень экстракции возрастает с увеличением алкильного радикала в спиртовом фрагменте экстрагента. Степень экстракции возрастает при введении в водную фазу электролитов группы галогенидов К и №. На степень экстракции не оказывает заметного влияния рН гидрофильных фаз. Из-за малой гидрофильности молекул и невыраженности кислотно-основных свойств производных 3-трифторметиланилина наибольшая их степень извлечения из биоматериала достигается гидролипофильными растворителями, в частности, ацетоном, очистку веществ от эндогенных соединений биологических матриц целесообразно проводить экстракцией из гидрофильных водно-органических сред гидрофобными органическими экстрагентами в сочетании с нормальнофазовым или обращённофазовым вариантами колоночной хроматографии.

При моделировании отравлений теплокровных смертельными

дозами флутамида отравляющее вещество в организме крыс

11

метаболизируется в основном в печени и тонком кишечнике с образованием продукта восстановления - 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида.

Выполненный комплекс экспериментов обеспечил возможность разработки двух оригинальных вариантов общей схемы исследования производных 3-трифторметиланилина (флутамида и его метаболитов) при доказательстве отравлений соединениями данной химической группы. Первый вариант предусматривает изолирование рассматриваемых соединений из органов и биожидкостей ацетоном, очистку в колонке силикагеля Ь 40/100 мкм, идентификацию и количественное определение методами ТСХ, ИК-, электронной спектрофотометрии, ГХ-МС и ВЭЖХ. Второй вариант предусматривает дополнительную очистку экстракцией из водно-ацетонитрильных растворов.

Внедрены и апробированы результаты работы:

методика определения флутамида и его метаболитов методом

нормальнофазовой ВЭЖХ внедрена в работу Экспертно-

криминалистического центра УМВД России по Орловской области (акт

внедрения № 3 от 10.02.2016); методика определения производных 3-

трифторметиланилина в биологическом материале методом ТСХ и

нормальнофазовой ВЭЖХ внедрена в работу Экспертно-

криминалистического центра УМВД России по Орловской области (акт

внедрения № 4 от 10.02.2016); методика идентификации 2-метил-Ы-(4-

нитро-3-(трифторметил)фенил)пропанамида (флутамид) сочетанием

методов хроматографии в тонком слое гидроксилированного сорбента и

электронной спектрофотометрии внедрена в работу ФГБУ

«Информационно-методический центр по экспертизе, учету и анализу

обращения средств медицинского применения» Росздравнадзора (Курский

филиал) (акт внедрения № 55 от 05.02.2016); методика определения 2-

метил-Ы-(4-нитро-3-(трифторметил)фенил)пропанамида (флутамид) в

12

лекарственных формах методом обращённофазовой ВЭЖХ внедрена в

работу ФГБУ «Информационно-методический центр по экспертизе, учету

и анализу обращения средств медицинского применения» Росздравнадзора

(Курский филиал) (акт внедрения № 54 от 03.02.2016); методика

изолирования производных 3-трифторметиланилина из биожидкостей и

определения методами ТСХ и УФ-спектрофотометрии после очистки в

колонке нормальнофазового сорбента внедрена в учебную (практические

занятия) и научную работу кафедры фармацевтической,

токсикологической и аналитической химии Курского государственного

медицинского университета (акт внедрения № 6 от 01.02.2016); методика

изолирования производных 3-трифторметиланилина из животного

биологического материала (тканей органов) путем настаивания с ацетоном

и последующей очистки в колонке гидроксилированного сорбента

внедрена в учебную (практические занятия) и научную работу кафедры

фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского

государственного медицинского университета (акт внедрения № 5 от

01.02.2016); методика идентификации 2-метил-Ы-(4-нитро-3-

(трифторметил)фенил)пропанамида (флутамид) в лекарственных формах

методами ТСХ и электронной спектрофотометрии внедрена в научную

работу кафедры фармацевтической технологии Курского государственного

медицинского университета (акт внедрения № 4 от 15.02.2016); методика

количественного определения 2-метил-Ы-(4-нитро-3-(трифторметил)-

фенил)пропанамида (флутамид) в лекарственных формах методом

электронной спектрофотометрии внедрена в научную работу кафедры

фармацевтической технологии Курского государственного медицинского

университета (акт внедрения № 3 от 16.02.2016); методика определения

флутамида (2-метил-Ы-(4-нитро-3-(трифторметил)фенил)-пропанамида и

близких по структуре соединений при судебно-химическом исследовании

биологического материала апробирована в ОБУЗ «Бюро судебно-

13

медицинской экспертизы» Комитета здравоохранения Курской области (акт апробации от 11.02.2016).

Основные положения, выносимые на защиту:

- синтез рабочих стандартных образцов 4-нитро-3-трифторметиланилина, 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)-фенил)-пропанамида и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида, способы очистки синтезированных субстанций и подтверждение структуры основных веществ;

- результаты поиска оптимальных условий проведения процесса хроматографирования и параметры, характеризующие хроматографическую активность рассматриваемых производных 3-трифторметиланилина в гидроксилированных и привитых неподвижных фазах, сформированных в виде тонких слоёв и колонок;

- способы качественной и количественной оценки содержания флутамида, 4-нитро-3-трифторметиланилина, 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида хроматографическими в различных объектах с применением методов фотометрии, хроматографии и комбинации хроматографии с масс-спектрометрией;

- особенности экстракции производных 3-трифторметиланилина из жидких гидрофильных сред экстрагентами различной природы и параметры их хроматографического поведения в колонках гидроксилироанного и привитого сорбентов при моделировании очистки производных 3-трифторметиланилина от эндогенных веществ биологических матриц;

оптимальные условия и методики изолирования производных 3-трифторметиланилина из биологических матриц путём настаивания с ацетоном и очистки извлечений от эндогенных веществ биоматериала

экстракционными и хроматографическими способами;

14

- характер локализации производных 3-трифторметиланилина в организме теплокровных животных при отравлениях летальными дозами этих соединений и стабильности соединений исследуемой группы в гнилостно разлагающихся биологических тканях.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов диссертационного исследования обусловлена достаточным объемом экспериментального материала, использованием современных методов исследования, валидацией разработанных методик, статистической обработкой данных по требованиям ГФ XI с использованием пакета прикладных программ «Micrisoft Excel 2013».

Основные положения работы представлены и доложены на II Международной научно-практической интернет-конференции

«Аналитическая химия в фармации» (Украина, Харьков, 17 марта 2016); 79-ой Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность», посвященной 79-летию КГМУ (Курск, 2014 г.); 80-ой Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность», посвященной 80-летию КГМУ (Курск, 2015 г.); на VII и VIII Всероссийских научно-практических конференциях с международным участием: «Биомедицинская инженерия и биотехнология» (Курск, 2014 г., 2015 г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ кафедры фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета и соответствует проблеме «Фармация» межведомственного научного совета № 36 РАМН и научной проблеме 35.04 «Научные проблемы судебно-медицинской токсикологии,

токсикологической и судебной химии» по специальности «Судебная медицина» при РАМН. Номер госрегистрации 01201377075.

Личный вклад автора. Автор принимал непосредственное участие во всех этапах исследования: им составлен общий план и разработана структура исследований, проведен анализ отечественных и зарубежных литературных источников по теме диссертации, выполнены экспериментальные исследования, проведены статистическая обработка и анализ данных, сделаны выводы и заключения. В работах, выполненных в соавторстве, использованы результаты исследования с долей участия автора 80-95%.

Публикации. Содержание работы отражено в 15 публикациях, 6 из них в журналах, рекомендуемых ВАК к опубликованию материалов диссертационных исследований. Имеется 1 патент.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), экспериментальной части (главы 2, 3, 4, 5 и 6), выводов, списка литературы и приложения, изложенного на 128 страницах. Диссертационная работа изложена на 196 страницах машинописного текста, содержит 5 таблиц и 40 рисунков. Библиографический список состоит из 175 источника, в том числе 144 - на иностранном языке.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Физические свойства, получение и применение отдельных производных 3-трифторметиланилина

2-метил-Ы-(4-нитро-3-(трифторметил)фенил)пропанамид (флутамид) - это светло - желтый порошок, без запаха, температура плавления - 111 -113оС. Молекулярная масса - 276,21; брутто формула - C11H11F3N2O3. Температура кипения 400,3 оС при 760 мм.рт.ст.. Оптически неактивен [107, 126].

Флутамид практически нерастворим в воде 9,45 мг/л, легко растворим в ацетоне, этилацетате, спирте этиловом 50 г/л и в метаноле. Растворим в ацетонитриле [14, 126, 130].

Флутамид - нестероидный препарат, обладающий антиандрогенным действием, флутамид получают несколькими способами. Первым способом получают путем ацетилирования 4-нитро-3-трифторметиланилина хлорангидридом изомасляной кислоты [1, 150, 155].

Второй (альтернативный) метод основан на нитровании м-трифторметилизобутиранилида в пара положении. Для этого м-трифторметилизобутиранилид добавляют к 15-18% олеума при температуре 5оС и по каплям добавляют 90% азотную кислоту, при этом поддерживают температуру 5оС. Смесь выливают в ледяную воду при

постоянном перемешивании, затем фильтруют. После флутамид промывают водой для удаления избытка кислоты и высушивают [47].

Также предложен способ синтеза флутамида на основе нитрования бензотрифторида, далее осуществляют ацетилирование в присутствии порошка железа и изомаслянной кислоты. Таким образом получают 3-трифторизобутирамид. В дальнейшем производят нитрование [86].

В проявлении биологической активности флутамида важное значение имеют ароматическая часть молекулы, содержащая две мощные электроноакцепторные группы (трифторметильную в мета-положении и нитрогруппу в пара-положении) и его конформационные особенности, которые позволяют молекуле приобрести конфигурацию, наиболее близкую к структуре 5а - ДТС (дигидростерона) [1, 16].

Флутамид был впервые введен в клиническую практику в 1975 году [117]. В США был одобрен в качестве лекарственного средства для лечения метастатического рака предстательной железы в сочетании с аналогом гонадотропин-рилизинг гормоном в 1989 году [134].

Флутамид широко применяется в медицинской практике при паллиативном лечении прогрессирующего рака предстательной железы, местнораспространенного рака предстательной железы [51, 67, 140]. Также применяют при дифференциальной диагностики гипогонадизма у мужчин и лечении гирсутизма у женщин, при поликистозе яичников [13, 85, 129, 159, 165, 166]. В виду своей высокой токсичности флутамид применяют в комбинации с различными лекарственными средствами для лечения рака предстательной железы, в результате достигается высокая степень эффективности лечения с минимальными побочными эффектами [76].

4-нитро-3-трифторметиланилин (4-Н-3-ТФМА) - ярко-желтый порошок, без запаха с температурой плавления 125-129оС. Молекулярная масса - 206,12. Брутто формула - С7И5Р3К202 [143].

N142

N0

Порошок 4-нитро-3-трифторметиланилина плохо растворим в воде, гексане, растворах щелочей и кислот, хорошо растворим - в спирте этиловом, ацетоне, ацетонитриле, диметилформамиде, диоксане и этилацетате. Является метаболитом флутамида.

2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамид (2-М-Ы-4-А-3-ТФМФП) - красно-коричневый порошок, без запаха с температурой плавления 54-58оС. Молекулярная масса - 246,00. Брутто формула -

С7И7р3М2.

Порошок 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида хорошо растворим в спирте этиловом, этилацетате, ацетоне, ацетонитриле и диметилформамиде. Практически нерастворим в воде, растворах щелочей и кислот.

К-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамид (Ы-4-АА-3-

ТФМФАА) - красно-багровый кристалический порошок, без запаха с температурой плавления 43-460С. Молекулярная масса - 288,00. Брутто формула - С16И14О6. К-(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамид хорошо растворим в спирте этиловом, ацетоне, этилацетате, ацетонитриле. Практически нерастворим в воде, растворах кислот и щелочей.

Н3с

н

Для установления структуры применяют ядерный магнитный резонанс 1Н, инфракрасную спектроскопию, масс-спектроскопию [10, 11].

ИК-спектроскопию использовали в качестве дополнительного метода, подтверждающего структуру производных 3-трифторметил-анилина [10, 22].

Масс-спектроскопию применяли для установления массы исследуемого вещества и косвенно подтверждали химический состав.

1.2 Токсикологическая характеристика и метаболизм

Производные 3-трифторметиланилина являются ароматическими соединениями с нитро- и амино-группами, которые токсичны для теплокровных животных и человека [19, 53]. Соединения с ароматической нитрогруппой, обладают избирательной токсичностью и вызывают повреждения печени [42].

При лечении рака предстательной железы у пациентов, применяющих, флутамид развивалась тяжелая печеночная дисфункция, вследствие образования токсичных метаболитов [83, 109]. Поражение печени связано с ингибированием оттока желчной кислоты в результате метаболизма флутамида и образования 2-гидроксифлутамида [100, 163].

Прием флутамида влияет на развитие внутренних органов. Так самцам крыс каждый день через желудочный зонд вводили флутамид в дозе 5 и 25 мг /кг/сут после последней дозы крыс забивали. При вскрытии

крыс было выявлено, что применение флутамида привело к значительному уменьшению веса придатков, предстательной железы, желез Купера, веса надпочечников, в то время как семенники и вес других органов оставались неизменными [66].

Также в течение 28 дней крысам-самцам каждый день вводили 0 мг (контрольная группа), 0,25 мг, 1 мг и 4 мг флутамида. Крыс-самцов забивали через день после 28-дневного введения. У крыс, которым вводили 1 и 4 мг флутамида, были выявлены следующие морфологические изменения: снижение веса придатков, предстательной железы и повышение уровня тестостерона [136].

Генотоксичность флутамида изучалась на гепатоцитах крыс и человека. В результате было выявлено, что флутамид снижает скорость синтеза ДНК в предстательной железе [72, 119].

Гепатотоксичность флутамида связывают с наличием ароматической нитрогруппы, которая усиливает цитотоксичность гепатоцитов [52, 57].

Гепатотоксичность флутамида изучалась на изолированных гепатоцитах крыс. Флутамид приводил к ковалентному связыванию реактивных, электрофильных метаболитов гепатоцитов [163].

В США с февраля 1989 года по март 1991 года у 19 пациентов, применявших флутамид для лечения рака предстательной железы, были зарегистрированы тяжелые случаи поражения печени. Пять пациентов умерли от прогрессирования заболевания печени [81, 161]. При вскрытии были выявлены причины смерти: гепатоцеллюлярный некроз и холестаз [74, 82, 98, 103, 172].

При лечении флутамидом поликистоза яичников у женщин так же были зарегистрированы случаи летального исхода. При вскрытии было выявлена острая печеночная недостаточность [124, 162].

Особые случаи гепатотоксичности при приеме флутамида могут

привести к холестазу, желтухе, асциту, некрозу печени, тяжелой

21

печеночной недостаточности, печеночной коме и также может привести к необходимости трансплантации печени [103, 114].

При применении флутамида у 4 пациентов, наблюдалось кожная сыпь которая образовывалась под действием солнечных лучей. При отмене флутамида сыпь исчезала [106, 171].

Признаки отравления флутамидом: тошнота, рвота, метгемоглобинемия, волчаночноподобный синдром, желтуха, нарушение функции печени и почек [13, 74]. При проявлении признаков отравления флутамидом необходимо немедленно прекратить лечение [103, 172].

Побочные эффекты включают в себя: усталость или слабость, отечность лица, пальцев ног, лихорадку или озноб, слабость в конечностях, кожную сыпь или сухость кожи, гинекомастию и боли в области молочных желез, галакторею, задержку жидкости, снижение сексуального влечения, импотенцию, тошноту, рвоту, диарею или запор, повышение или отсутствие аппетита, нарушение функции печени и/или почек, желтуху, бессонницу, головную боль, парестезию, аллергические реакции, подкожные кровоизлияния, подавление сперматогенеза (при длительном лечении) [8, 77].

При наружном применении: кожные аллергические реакции (покраснение, ощущение жжения, сыпь) [8, 13].

Флутамид является мощным гепатотоксическим соединением, поэтому в первые несколько месяцев применения флутамида необходимо контролировать уровень аминотрансферазы крови [103, 172].

Также флутамид является мощным раздражителем, вызывает раздражение глаз, кожных покровов, дыхательных путей и дальнейшее повреждение легких [77].

При лечении опухолевых новообразований предстательной железы

необходимо регулярно проверять функцию печени (анализы следует

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Андреева Юлия Владимировна, 2016 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аналоги флутамида: синтез, биоактивность и перспективы медицинского применения / А.В. Катлинский, Е.С. Северин, С.Е. Северин [и др.] // Молекулярная медицина. - 2003. - № 2. - С. 60.

2. Андреева, Ю.В. Идентификация 4-нитро-3-(трифторметил)-анилина методом электронной спектрофотометрии / Ю.В. Андреева, В.К. Шорманов // Биомедицинская инженерия и биотехнология: сборник материалов VII всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Минздрава России.

- 2014. - С. 80-82.

3. Андреева, Ю.В. Идентификация флутамида методом электронной спектрофотометрии / Ю.В. Андреева, В.К. Шорманов // Биомедицинская инженерия и биотехнология: сборник материалов VI всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Минздрава России. - 2013. - С. 31-33

4. Андреева, Ю.В. Количественное определение 2-метил-n-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида на основе поглощения в среде этанола / Ю.В. Андреева, В.К. Шорманов // Биомедицинская инженерия и биотехнология: сборник материалов VII всероссийской научно-практической конференции с международным участием. -Курск: ГОУ ВПО КГМУ Минздрава России. - 2014. - С. 52-55.

5. Андреева, Ю.В. Количественное определение 4-нитро-3-(трифторметил)-анилина на основе поглощения в среде этанола / Ю.В. Андреева, В.К. Шорманов // Биомедицинская инженерия и биотехнология: сборник материалов VII всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Минздрава России.

- 2014. - С. 47-49.

6. Андреева, Ю.В. Количественное определение 4-нитро-3-

трифторметил-изобутиранилида на основе поглощения в среде

168

этанола / Ю.В. Андреева, В.К. Шорманов // Биомедицинская инженерия и биотехнология: сборник материалов VI всероссийской научно-практической конференции с международным участием. -Курск: ГОУ ВПО КГМУ Минздрава России. - 2013. - С. 39-42.

7. Вартанян, Р. С. Синтез основных лекарственных средств / Р. С. Вартанян. - М.: Медицинское информационное агентство, 2004. -845 с.

8. Вышковский, Г. Л. Регистр лекарственных средств России: РЛС-пациент / Г. Л. Вышковский, В. В. Абрамов. - М.: РЛС, 2002. - 1052 с.

9. Доброриз, А.М. Обнаружение нимесулида в биологическом материале / А.М. Доброриз // Судебно-медицинская экспертиза. -2009. - Т. 52, № 4. - С. 32-34.

10. Идентификация лекарственных средств группы 1,4-бензодиазепина по электронным и колебательным спектрам поглощения / М. А. Жиляева, А. Р. Трофимов, Г. В. Раменская [и др.] // Фармация. -1996. - Т. 45, № 5. - С. 35-36.

11. Идентификация производных 1,4-бензодиазепина методом спектроскопии ЯМР 1Н / В. С. Карташов, С. В. Шоршнев, А. Н. Лощинин, А. П. Арзамасцев // Фармация. - 1992. - Т. 41, № 1. - С. 70-71.

12.Коренман, И. М. Экстракция в анализе органических веществ / И. М. Коренман. - М.: Химия, 1977. - 196 с.

13. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей / М.Д. Машковский. - М.: Новая волна, 2010. - 1216 с.

14. Определение равновесной биофармацевтической растворимости субстанции флутамида / Т.А. Ярушок, И.Е. Шохин, А.Ю. Савченко, Ю.С. Картиева // Разработка и регистрация лекарственных средств. -2012. - № 1 - С. 30-35.

15. Особенности определения отдельных биологически активных производных анилина в тонком слое обращенно-фазового сорбента / В.К. Шорманов, Ю.В. Андреева, Ю.А. Сухомлинов, В.А. Омельченко // Сорбционные и хроматографические процессы. -

2016. - Т. 16. - №. 1. - С. 87-92.

16. Пат. 2186057 Российская Федерация, С07С233/66, А61К31/167. 4-нитро-3-трифторметил-перфторнонаноиланилид (Флустат), способ его получения и фармацевтическая композиция на его основе / Р.Н. Аляутдин, Е.А. Воронцов, А.А. Иванов (и др.); заявитель и патентообладатель / НИИ "Молекулярной медицины" Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова; Московский научно -исследовательский институт медицинской экологии. - № 2001107498/04; заявл. 22.03.2001; опубл. 27.07.2002.

17. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики».

18. Применение хроматографических методов для определения производных 3-(трифторметил)-анилина в биологическом материале / В.К. Шорманов, Ю.В. Андреева, Ю.А. Сухомлинов, В.А. Омельченко // Сорбционные и хроматографические процессы. -2016. - Т. 16. - №. 1. - С. 100-109.

19. Прогнозирование класса опасности органических соединений по их структуре / Т. Р. Зулькарнаев, Т. С. Соломинова, Л. А. Тюрина, С. М. Новиков // Гигиена и санитария. - 1999. - № 1. - С. 56-59.

20. Флутамид. Капсулы // Американская фармакопея на русском языке. Т. 2. - Москва: «ГЭОТАР-Медиа», 2012. - С. 1890-1891.

21. Флутамид. Субстанция // Американская фармакопея на русском языке. Т. 2. - Москва: «ГЭОТАР-Медиа», 2012. - С. 1889-1890.

22. Флутамид. Субстанция // ОАО «Фармакон». - 2005. - ФСП 420008574004. - С. 1-11.

23. Фурсова, И. А. Особенности экстрагирования 2-амино-4-нитрофенола и 4-фенилфенола из водных растворов / И. А. Фурсова, В. К. Шорманов // Суд.-мед. экспертиза. - 2002. - Т. 45, № 6. - С. 3841.

24. Харчевникова, Н. В. Соотношения «структура -метгемоглобинобразующая активность» в ряду ароматических аминов / Н. В. Харчевникова, З. И. Жолдакова // Гигиена и санитария. - 1997. - № 3. - С. 41-44.

25. Шорманов, В.К. Идентификация 2-метил-п-(4-амино-3-(трифтор-метил)фенил)пропанамида методом электронной спектрофотометрии / В.К. Шорманов, Ю.В. Андреева // Биомедицинская инженерия и биотехнология: сборник материалов VII всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Минздрава России. - 2014. - С. 91-94.

26. Шорманов, В. К. Особенности изолирования дипиридамола из биологического материала / В. К. Шорманов, Л. Л. Квачахия // Суд.-мед. экспертиза. - 2007. - Т. 50, № 5. - С. 39-42.

27. Шорманов, В.К. Применение производной спектрофотометрии для определения флутамида в таблетках / В.К. Шорманов, Ю.В. Андреева, Д.А. Герасимов // Научные ведомости белгородского государственного университета. Медицина, фармация. - 2014. - № 24 (195). - Выпуск 28. - С. 231-234.

28. Шорманов, В.К. Разработка методики химико-токсикологического определения трифлуралина / В.К. Шорманов, А.С. Зайцева // Судебно-медицинская экспертиза. - 2011. - Т. 54, № 3. - С. 50-52.

29. Шорманов, В. К. Сохраняемость нимесулида в трупном материале /

B. К. Шорманов, Д. А. Герасимов, Л. Е. Сипливая // Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье". - 2012. - № 3. - С. 102-107.

30. Шорманов, В.К. Экстракция флутамида из водно-ацетонитрильных растворов / В.К Шорманов, Ю.В. Андреева // Научные ведомости белгородского государственного университета. Медицина, фармация. - 2014. - № 24 (195). - Выпуск 28 - С. 191-194.

31. Шорманов, В.К. Экстракция флутамида из водных растворов / В.К. Шорманов, Ю.В. Андреева, В.А. Омельченко // Судебно-медицинская экспертиза. - 2014. - Т. 57. - № 5. - С. 18-20.

32. A new reverse-phase high performance liquid chromatographic method for determination of flutamide in liposomes, rat blood plasma and tablet dosage forms / M. L. Umrethia, P. K. Ghosh, R. J. Majithiya, R. S. R. Murthy // Ars Pharmaceutics - 2005. - Vol. 46, N 2. - P. 109-124.

33. A rapid and sensitive HPLC method for the determination of 2-hydroxyflutamide in human plasma / H. Jalalizadeh, E. Souri, H. R. J. Ghanami [et al.] // International Journal of Pharmacology. - 2006. - Vol. 2, N 2. - P. 221-225.

34. Amadio, J. Production of human metabolites of the anti-cancer drug flutamide via biotransformation in Cunninghamella species / J. Amadio,

C. D. Murphy // Biotechnology Letters. - 2011. - Vol. 33, N 2. - P. 321326.

35. Anti-androgenic activities of the triterpenoids fraction of Ganoderma lucidum / Jie Liu, Kuniyoshi Shimizu, Fumiko Konishi [et al.] // Food Chemistry. - 2007. - Vol. 100, N 4. - P. 1691-1696.

36. Asakawa, N. Studies on the metabolic fate of flutamide / N. Asakawa, K. Yamashita // Antibiot Chemother. - 1995. - N 11. - P. 1418-1427.

37. Ayub, M. Suppression of plasma androgens by the antiandrogen flutamide in prostatic cancer patients treated with zoladex, a gnrh analogue / M. Ayub, M. J. Levell // Clinical Endocrinology. - 1990. -Vol. 32, N 3. - P. 329-340.

38. Badawi, H. M. A comparative study of the conformational equilibria, vibrational, (1)H and (13)C NMR spectra of isobutyranilide and its derivative the anticancer drug flutamide / H. M. Badawi, W. Förner, S. A. Ali // Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. - 2014. - Vol. 131, N 15. - P. 249-260.

39. Bakdash, A. Lethal Poisoning with p-Nitroaniline / A. Bakdash, M. Ganswindt, S. Herre // Toxichem+Krimtech. - 2006. - Vol. 73, N 2. - P. 61-65.

40. Balon, Ya. G. Chromatographic determination of 4-nitro-3-trifluoromethylaniline in niftolid / Ya. G. Balon, O. I. Lazebnaya, I. S. Dukhovnaya // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 1985. - Vol. 19, N 5. - P. 364-365.

41. Bandgar, B. P. Novel and gram-scale green synthesis of flutamide / B. P. Bandgar, S. S. Sawant // Synthetic Communications. - 2006. - Vol. 36, N 7. - P. 859 - 864.

42. Bioactivation and hepatotoxicity of nitroaromatic drugs / U. A. Boelsterli, H. K. Ho, S. Zhou, K.Y. Leow // Current Drug Metabolism. -2006. - Vol. 7, N 7. - P. 715-727.

43. Bioactivation of flutamide metabolites by human liver microsomes / P. Kang, D. Dalvie, E. Smith [et al.] // Drug metabolism and disposition. -2008. - Vol. 36, N 7. - P. 1425-1437.

44. Bioequivalence evaluation of two flutamide preparations in healthy female subjects / K. Doser, R. Guserle, R. Kramer [et al.] // ArzneimittelForschung. - 1997. - Vol. 47, N 2. - P. 213-217.

45. Brahman, P. K. Voltammetric study of ds-DNA-flutamide interaction at carbon paste electrode / P. K. Brahman, R. A. Dar, K. S. Pitre // Arabian Journal of Chemistry. - 2012. - Vol. 12, N 2. - P. 122-134.

46. British Pharmacopoeia 2009. - London: The Stationery Office, 2008. -10952 p.

47. Brittain, H. G. Analytical Profiles of Drug Substances and Excipients / H. G. Brittain. - London: Academic Press, 2010. - 388 p.

48. Brogden, R. N. Flutamide. A preliminary review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, and therapeutic efficacy; in advanced prostatic cancer / R. N. Brogden, S. P. Clissold // Drug Evaluation. -1989. - Vol. 38, N 2. - P. 185-203.

49. Castelo-Brancoa, C. Hepatotoxicity during low-dose flutamide treatment for hirsutism / C. Castelo-Brancoa, Marta del Pino // Gynecological Endocrinology. - 2009. - Vol. 25, N 7. - P. 419-422.

50. Coe, K. J. Metabolism and cytotoxicity of the nitroaromatic drug Flutamide and its cyano analog in hepatocyte cell lines / K. J. Coe. -University of Washington, 2008. - 229 p.

51. Combination therapy with flutamide and castration (LHRH agonist or orchiectomy) in advanced prostate cancer: A marked improvement in response and survival / F. Labrie, A. Dupont, A. Belanger [et al.] // Journal of Steroid Biochemistry. - 1985. - Vol. 23, N 5. - P. 833-841.

52. Comparison of in vitro bioactivation of flutamide and its cyano analogue: evidence for reductive activation by human NADPH: cytochrome P450 reductase / B. Wen, K. J. Coe, P. Rademacher [et al.] // Chemical Research in Toxicology. - 2008. - Vol. 21, N 12. - P. 2393-2406.

53. Comparison of the cytotoxicity of the nitroaromatic drug flutamide to its cyano analogue in the hepatocyte cell line tamh: evidence for complex i inhibition and mitochondrial dysfunction using toxicogenomic screening /

K. J. Coe, Y. Jia, H. K. Ho [et al.] // Chemical Research in Toxicology. -2007. - Vol. 20, N 9. - P. 1277-1290.

54. Comparison of the pharmacological effects of a novel selective androgen receptor modulator, the 5a-reductase inhibitor finasteride, and the antiandrogen hydroxyflutamide in intact rats: new approach for benign prostate hyperplasia / W. Gao, J. D. Kearbey, V. A. Nair [et al.] // Endocrinology. - 2004. - Vol. 145, N 12. - P. 5420-5428.

55. Complexation and oxidation of flutamide with Fe3+ and 1,10-phenanthroline: few analytical applications / A. A. P. Khan, A. Khan, A. M. Asiria [et al.] // Arabian Journal of Chemistry. - 2014.

56. Cserhati, T. Chromatography of anticancer drugs / T. Cserhati, M. Szogyi // European Chemical Bulletin. - 2013. - Vol. 10, N 2. - P. 715-721.

57. Cytotoxicity of flutamide and 2-hydroxyflutamide and their effects on CYP1A2 mRNA in primary rat hepatocytes / H.X. Wang, X.C. Ma, Q.L. Deng, D. Li // Acta Pharmacologica Sinica. - 2002. - Vol. 23, N 6. - P. 562-566.

58. Deepakumari, H. N. Spectrophotometric estimation of flutamide in pure and in pharmaceutical preparations / H. N. Deepakumari, H. D. Revanasiddappa // ISRN Spectroscopy. - 2012. - Vol. 2012. - P. 1-7.

59. Detection of flutamide in pharmaceutical dosage using higher electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) tandem mass coupled with Soxhlet apparatus / N. Khana, H. N. Abdelhamida, J. Y. Yana [et al.] // Analytical Chemistry Research. - 2015. - Vol. 3. - P. 8997.

60. Detection of a new N-oxidized metabolite of flutamide, N-[4-nitro-3-(trifluoromethyl)phenyl]hydroxylamine, in human liver microsomes and urine of prostate cancer patients / R. Goda, D. Nagai, Y. Akiyama [et al.] // Drug Metabolism and Disposition. - 2006. - Vol. 34, N 5. - P. 828835.

61. Determination of celecoxib in human plasma by high-performance liquid chromatography / H. Jalalizadeh, M. Amini, V. Ziaee [et al.] // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 2004. - Vol. 35, N 3. - P. 665-670.

62. Determination of flutamide and hydroxyflutamide in dog plasma by a sensitive high performance liquid chromatography method utilizing mid-bore chromatography / D. Farthing, D. Sica1, I. Fakhry1 [et al.] // Biomedical Chromatography. - 1994. - Vol. 8, N 5. - P. 251-254.

63. Determination of 2-hydroxyflutamide in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS): application to a bioequivalence study on Chinese volunteers / H. Zheng, D. Wu, Z. Y. Qian, Y. Xiang // Journal of chromatography. B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences. - 2010. - Vol. 878, N 19. - P. 16111615.

64. Development of analytical methods for the determination of flutamide in bulk drug and its pharmaceutical formulation / M. Z. Fathima, T. S. Shanmugarajan, I. Somasundaram // International Journal of PharmTech Research. - 2015. - Vol. 8, N 7. - P. 146-153.

65. Drug levels: Therapeutic and toxic serum/plasma concentrations of common drugs / R. Regenthal, M. Krueger, C. Koeppel [et al.] // Journal of Clinical Monitoring and Computing. - 1999. - Vol. 15, N 7. - P. 529544.

66. Effects of flutamide on puberty in male rats: an evaluation of the protocol for the assessment of pubertal development and thyroid function / J. H. Shin, H. S. Kim, H. J. Moon [et al.] // Journal of Toxicology and Environmental Health. - 2002. - Vol. 65, N 5-6. - P. 433-445.

67. Efficacy of flutamide-combined androgen blockade therapy in advanced prostate cancer patients: a phase III randomized, comparative trial / H.

Kanetake, M. Usami, Y. Ohashi [et al.] // Gan To Kagaku Ryoho. - 2014.

- Vol. 41, N 13. - P. 2591-2597.

68. El-Shaheny, R. N. The influence of pH and temperature on the stability of flutamide. An HPLC investigation and identification of the degradation product by EI+-MS // R. N. El-Shaheny, K. Yamada // RSC Advances. -2015. - N 5. - P. 3206-3214.

69. Electrochemical characterization and determination of the anticancer drug, Flutamide by cyclic voltammetry / A. A. El-Shanawany, S. M. El-Adl, D. S. Abd El Haleem, S. Abd El Wanees // Annalen der Chemschen Forshung. - 2014. - Vol. 2, N 2. - P. 29-40.

70. Electrochemical reduction of flutamide and its determination in dosage forms and biological media / G. V. S. Reddy, C. L. N. Reddy, V. N. Myreddy, S. J. Reddy / Journal of Clinical Medicine and Research. -2011. - Vol. 3, N 3. - P. 35-39.

71. Electrochemical study of flutamide, an anticancer drug, and its polarographic, UV spectrophotometric and HPLC determination in tablets / A. Alvarez-Lueje, C. Pena, L. J. Nunez-Vergara, J. A. Squella // Electroanalysis. - 1998. - Vol. 10, N 15. - P. 1043-1051.

72. Evaluation of flutamide genotoxicity in rats and in primary human hepatocytes / A. Martelli, G. B. Campart, R. Carrozzino [et al.] // Pharmacology & Toxicology. - 2000. - N 86. - P. 129-134.

73. Farid, N. F. Two different spectrophotometric determinations of potential anticancer drug and its toxic metabolite / N. F. Farid, N. S. Abdelwahab // Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy.

- 2015. - Vol. 145, N 15. - P. 360-367.

74. Fatal and nonfatal hepatotoxicity associated with flutamide / D. K. Wysowski, J. P. Freiman, J. B. Tourtelot, M. L. Horton // Annals of Internal Medicine. - 1993. - Vol. 118, N 11. - P. 860-864.

75. Feasibility and potential gains of enhancing the subacute rat study protocol (OECD test guideline no. 407) by additional parameters selected to determine endocrine modulation. A pre-validation study to determine endocrine-mediated effects of the antiandrogenic drug flutamide / P. Andrews, A. Freyberger, E. Hartmann // Archives of Toxicology. - 2001. - Vol. 75, N 2. - P. 65-73.

76. Fleshner N. E. Combination finasteride and flutamide in advanced carcinoma of the prostate: effective therapy with minimal side effects / N. E. Fleshner, J. Trachtenberg // The Journal of Urology. - 1995. - Vol. 154, N 5. - P. 1642-1646.

77. Flutamide CAS No 13311-84-7 / Environment, Health and Safety

78. Flutamide alters the distribution of c-Src and affects the N-cadherin-P-catenin complex in the seminiferous epithelium of adult rat / M. Zarzycka, K. Chojnacka, D. D. Mruk [et al.] // Andrology. - 2015. - Vol. 3, N 3. -P. 569-581.

79. Flutamide-associated liver toxicity during treatment with total androgen suppression and radiation therapy for prostate cancer / S. A. Rosenthal, D. E. Linstadt, M. H. Leibenhaut [et al.] // Radiology. - 1996. - Vol. 199, N 2. - P. 451-455.

80. Flutamide-induced hepatic dysfunction in relation to steady-state plasma concentrations of flutamide and its metabolites / Y. Aizawa, I. Ikemoto, K. Kishimoto [et al.] // Molecular and Cellular Biochemistry. - 2003. -Vol. 252, N 1. - P. 149-156.

81. Flutamide-induced liver toxicity including fatal hepatic necrosis / R. L. Crownover, J. Holland, A. Chen [et al.] // International Journal of Radiation. Oncology. Biology. Physics. - 1996. - Vol. 34, N 4. - P. 911915.

82. Flutamide-induced toxic hepatitis. Potential utility of ursodeoxycholic

acid administration in toxic hepatitis / C. Cicognani, M. Malavolti, A. M.

178

Morselli-Labate [et al.] // Digestive Diseases and Sciences. - 1996. - Vol. 41, N 11. - P. 2219-2221.

83. Flutamide metabolism in four different species in vitro and identification of flutamide metabolites in human patient urine by high performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry / A. Tevell, H. Lennernas, M. Jonsson [et al.] // Drug Metabolism and Disposition. -2006. - Vol. 34, N 6. - P. 984-992.

84. Gas choromatographic determination of flutamide, nimodipine and ticlopidine hydrochloride from their pharmaceutical preparations / R. T. Sane, M. G. Gangrade, V. V. Bapat [et al.] // Indian drugs. - 1993. - Vol. 30, N 4. - P. 147-151.

85. Generali, J. A. Flutamide: hirsutism in women / J. A. Generali, D. J. Cada // Hospital pharmacy. - 2014. - Vol. 49, N 6. - P. 517-520.

86. Ghaffarzadeh, M. A novel method for synthesis of flutamide on the bench-scale / M. Ghaffarzadeh, S. Rahbar // Journal of Chemical Research. - 2014. - Vol. 38, N 4. - P. 200-201.

87. Hendershot, S. Appropriate column configurations for the rapid analysis and semipreparative purification of the radiolabeled drug flutamide by high-performance liquid chromatography / S. Hendershot, D. Koharski // Journal of Chromatography A. - 2001. - Vol. 914, N 1. - P. 23-27.

88. Herath, W. Microbial metabolism. Part 11. Metabolites of flutamide / W. Herath, I. A. Khan // Chemical and Pharmaceutical Bulletin. - 2010. -Vol. 58, N 4. - P. 562-564.

89. Herath, W. Microbial Transformation of Flutamide / W. Herath, I. A. Khan // Planta Medica. - 2010. - Vol. 76, N 5. - P. 69.

90. HPLC monitoring of flutamide drug used in the prostate cancer treatment / M. Filip, V. Coman, V. Avram, I. Coman // MediTech. - 2007. - N 2729. - P. 397-400.

91. Huang, D. Study on the stability of flutamide / D. Huang, Q. Li // China Medical Herald. - 2008. - Vol. 5, N 2. - P. 27-30.

92. Human arylacetamide deacetylase is a principal enzyme in flutamide hydrolysis / A. Watanabe, T. Fukami, M. Nakajima [et al.] // Drug Metabolism and Disposition. - 2009. - Vol. 37, N 7. - P. 1513-1520.

93. Human CYP1B1 and anticancer agent metabolism: mechanism for tumor-specific drug inactivation? / B. Rochat, J. M. Morsman, G. I. Murray [et al.] // Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. - 2001. - Vol. 296, N 2. - P. 537-541.

94. Hydroxyflutamide alters the characteristics of live boar spermatozoa / M. Zarzycka, M. Kotwicka, M. Jendraszak [et al.] // Theriogenology. - 2014. - Vol. 82, N 7. - P. 988-996.

95. Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin-flutamide inclusion complex. II. Oral and intravenous pharmacokinetics of flutamide in the rat / Z. Zuo, Y. K. Tam, J. Diakur, L. I. Wiebe // Journal of Pharmacy & Pharmaceutical Science. - 2002. - Vol. 5, N 3. - P. 292-298.

96. Identification of a novel glutathione conjugate of flutamide in incubations with human liver microsomes / P. Kang, D. Dalvie, E. Smith // Drug Metabolism and Disposition. - 2007. - Vol. 35, N 7. - P. 10811088.

97. Improved liquid chromatographic method for the determination of flutamide in pharmaceutical formulation/ A.A. Smith, R. Manavalan, K. Kannan, N. Rajendiran // International Journal of PharmTech Research. -2009. - Vol. 1, N 2. - P. 360-364.

98. Incidence of liver toxicity associated with the use of flutamide in prostate cancer patients / J. L. Gomez, A. Dupont, L. Cusan [et al.] // The American Journal of Medicine. - 1992. - Vol. 92, N 5. - P. 465-470.

99. Induction of liver cytochrome P450 1A2 expression by flutamide in rats / H. X. Wang, X. Liu, C. J. Xu [et al.] // Acta Pharmacologica Sinica. -2005. - Vol. 26, N 11. - P. 1382-1386.

100. Involvement of bile salt export pump in flutamide-induced cholestatic hepatitis / T. Iwanaga, M. Nakakariya, H. Yabuuchi [et al.] // Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2007. - Vol. 30 N 4. - P. 739744.

101. In vitro effects of fluoroquinolone anti-bacterial agents on flutamide metabolism in human liver microsomes / N. Watanabe, R. Goda, T. Irie, K. Yamashita // Japanese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics. - 2001. - Vol. 32, N 4. - P. 65-71.

102. Katchen, B. Percutaneous penetration and metabolism of topical [14C] Flutamide in men / B. Katchen, S. Dancik, G. Millington // Journal of Investigative Dermatology. - 1976. - Vol. 66, N 6. - P. 379-382.

103. Katsanos, K.H. Patterns of flutamide-related liver toxicity. Analysis of two cases // K.H. Katsanos, L. Christou, E.V. Tsianos // Archives Of Hellenic Medicine. - 2011. - Vol. 28, N 6. - P. 825-828.

104. Lakshmanan, D. Synthesis and characterization of poly (pyrrole-co-flutamide) / D. Lakshmanan, G. Selvanathan // International Journal of ChemTech Research. - 2015. - Vol. 7, N 7. - P. 2917-2923.

105. Leibinger, J. New and validated high-performance liquid chromatographic method for determination of hydroxyflutamide in human plasma / J. Leibinger, M. Kapas // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 1996. - Vol. 14, N 8-10. - P. 1377-1381.

106. Leroy, D. Flutamide photosensitivity / D. Leroy, A. Dompmartin, C. Szczurko // Photodermatology, Photoimmunology & Photomedicine. -1996. - Vol. 12, N 5. - P. 216-218.

107. Manikandan, P. Improvement in dissolution rate of flutamide by

using gelucire50/13 and pvp k 30 by solid dispersion technique / P.

181

Manikandan, K. P. S. Kumar // Human Journals. - 2015. - Vol. 2, N 4. -P. 144-164.

108. Metabolic activation of the nitroaromatic antiandrogen flutamide by rat and human cytochromes P-450, including forms belonging to the 3A and 1A subfamilies / A. Berson, C. Wolf, C. Chachaty [et al.] // Japanese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics. - 1993. -Vol. 265, N 1. - P. 366-372.

109. Metabolism and hepatic toxicity of flutamide in cytochrome P450 1A2 knockout SV129 mice / Y. Matsuzaki, D. Nagai, E. Ichimura [et al.] // Journal of Gastroenterology. - 2006. - Vol. 41, N 3. - P. 231-239.

110. Metabolism of the antiandrogenic drug (Flutamide) by human CYP1A2. / M. S. Shet, M. McPhaul, C. W. Fisher [et al.] // Drug Metabolism and Disposition. - 1997. - Vol. 25, N 11. - P. 1298-1303.

111. Metabolite profiles of flutamide in serum from patients with flutamide-induced hepatic dysfunction / E. Takashima, K. Iguchi, S. Usui [et al.] // Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2003. - Vol. 26, N 10. - P. 1455-1460.

112. Metabolomics-on-a-chip of hepatotoxicity induced by anticancer drug flutamide and Its active metabolite hydroxyflutamide using HepG2/C3a microfluidic biochips / S. L. Choucha, A. Bunescu, M. Naudot [et al.] // Toxicological Sciences. - 2013. - Vol. 132, N 1. - P. 820.

113. Miranda, A. Stability study of flutamide in solid state and in aqueous solution / A. Miranda, I. Caraballo, M. Millan // Drug Development and Industrial Pharmacy. - 2002. - Vol. 28, N 4. - P. 413422.

114. Moller, S. Flutamide-induced liver failure / S. Moller, P. Iversen, M. B. Franzmann // Journal of Hepatology. - 1990. - Vol. 10, N 3. - P. 346-349.

115. Nagaraja, P. New spectrophotometric method for the determination of flutamide in pharmaceutical preparations / P. Nagaraja, K. R. Sunitha, M. F. Silwadi // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. -2000. - Vol. 23, N 4. - P. 617-622.

116. Nakagawa, Y. Flutamide-induced hepatic disorder and serum concentrations of flutamide and its metabolites in patients with prostate cancer / Y. Nakagawa, M. Koyama, M. Matsumoto // Hinyokika Kiyo. -1999. - Vol. 45, N 12. - P. 821-826.

117. Neal, D. E. Tumours in urology / D. E. Neal // Springer Science & Business Media. - 1994. - 233 p.

118. Nehal, F. F. Two different spectrophotometric determinations of potential anticancer drug and its toxic metabolite / F. F. Nehal, N. S. Abdelwahab // Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. - 2015. - Vol. 145, N 15. - P. 360-367.

119. Neri, R. Pharmacology and pharmacokinetics of flutamide / R. Neri // Urology. - 1989. - Vol. 34, N 4. - P. 19-21.

120. New spectrophotometric methods for the determination of flutamide / M. N. Reddy, T. K. Murthy, D. G. Sankar [et al.] // Indian Drugs. - 2001. - Vol. 38, N 3. - P. 140-142.

121. New spectrophotometric method for the determination of flutamide in pharmaceutical preparation using chromotropic acid as a coupling agent / K. M. Reddy, K. Suvardhan, K. Suresh [et al.] // Proceedings of the Third International Conference on Environment and Health, Chennai. - 2003. P. 400-416.

122. Niopas, I. Determination of 2-hydroxyflutamide in human plasma by high-performance liquid chromatography and its application to pharmacokinetic studies / I. Niopas, A. C. Daftsios // Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. - 2001. -Vol. 759, N 1. - P. 179-183.

123. Novel reagents for the sensitive spectrophotometry determination of flutamide, an anticancer drug in pharmaceutical preparations / P. Nagaraja, H. R. Arun Kumar, R. A. Vasantha, H. S. Yathirajan // International Journal of Pharmaceutics. - 2002. - Vol. 235, N 1-2. - P. 113-120.

124. Osculati, A. Fatal liver complications with flutamide / A. Osculati, C. Castiglioni // Lancet. - 2006. - Vol. 367, N 9517. - P. 1140-1141.

125. Pharmacokinetics of flutamide in patients with renal insufficiency / S. Anjum, S. K. Swan, L. J. Lambrecht [et al.] // British Journal of Clinical Pharmacology. - 1999. - Vol. 47, N 1. - P. 43-47.

126. Pharmacokinetic solubility and dissolution profile of anti-cancer drugs / A. Goel, S. Saini, V. Chowdhry [et al.] // International Journal of Pharma Professional's Research. - 2011. - Vol. 2, N 4. - P. 502-539.

127. Photochemistry of flutamide in various media: Investigation of the reaction mechanism as revealed by external magnetic field effects on product yields / C. Udagawaa, S. Fukuyoshia, S. Morimoto [et al.] // Journal of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry. - 2011. - Vol. 226, N 1. - P. 57-63.

128. Plasma levels of hydroxy-flutamide in patients with prostatic cancer receiving the combined hormonal therapy: an LHRH agonist and flutamide / A. Bélanger, M. Giasson, J. Couture [et al.] // The Prostate. -1988. - Vol. 12, N 1. - P. 79-84.

129. Polycystic ovarian syndrome: evidence that flutamide restores sensitivity of the gonadotropin-releasing hormone pulse generator to inhibition by estradiol and progesterone / C. A. Eagleson, M. B. Gingrich, C. L. Pastor [et al.] // The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. - 2000. - Vol. 85, N 11. - P. 4047-4052.

130. Posti, J. Dissolution rate limited bioavailability of flutamide, and

in vitro - in vivo correlation / J. Posti, K. Katila, T. Kostiainen // European

184

Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. - 2000. - Vol. 49, N 1. -P. 35-39.

131. Profiling the hepatic effects of flutamide in rats: a microarray comparison with classical aryl hydrocarbon receptor ligands and atypical cyp1a inducers / K. J. Coe, S. D. Nelson, R. G. Ulrich [et al.] // Drug metabolism and disposition. - 2006. - Vol. 34, N 7. - P. 1266-1275.

132. Rangappa, K. S. New extractive spectrophotometric determination of flutamide in pure and pharmaceutical formulations / K. S. Rangappa, P. nagaraja, K. C. S. Murthy // Analytical Sciences. - 2000. - Vol. 16, N 6. -P. 637-639.

133. Reduction of nitroaromatic compounds by NAD(P)H: quinine oxidoreductase (NQO1): the role of electron-accepting potency and structural parameters in the substrate specific ity / L. Misiviciene, J. Anusevicius, J. Sarlauskas, N. Cenas // Acta Biochim. Pol. - 2006. - Vol. 53, N 3. - P. 569-576.

134. Regitz-Zagrosek, V. Sex and gender differences in pharmacology / V. Regitz-Zagrosek, // Springer Science & Business Media. - 2012. - 577 p.

135. Relative potencies of Flutamide and Casodex: preclinical studies / S. Luo, C. Martel, G. LeBlanc // Endocrine-Related Cancer. - 1996. - N 3. - P. 229-241.

136. Repeated dose (28 days) oral toxicity study of flutamide in rats, based on the draft protocol for the 'Enhanced OECD Test Guideline 407' for screening for endocrine-disrupting chemicals / K. Toyoda, M. Shibutani, T. Tamura [et al.] // Archives of Toxicology. - 2000. - Vol. 74, N 3. - P. 127-132.

137. Role of enzymatic n-hydroxylation and reduction in flutamide metabolite-induced liver toxicity / M. Ohbuchi, M. Miyata, D. Nagai [et

al.] // Drug metabolism and disposition. - 2009. - Vol. 37, N 1. - P. 97105.

138. Salgado, H.R.N. Determination of flutamide in tablets by highperformance liquid chromatography / H. R. N. Salgado, M. Menezes, M. P. B. Storti // Acta Farm. Bonaerense. - 2005. -Vol. 24, N 2. - P. 246249.

139. Saravanan, S. Spectroscopic investigation of 4-nitro-3-(trifluoromethyl)aniline, NBO analysis with 4-nitro-3-(trichloromethyl)aniline and 4-nitro-3-(tribromomethyl)aniline / S. Saravanan, V. Balachandran, K. Viswanathan // Spectrochimica Acta Part A Molecular and Biomolecular Spectroscopy. - 2014. - N 121. - P. 685697.

140. Scher, H. I. Flutamide withdrawal syndrome: its impact on clinical trials in hormone-refractory prostate cancer / H. I. Scher, W. K. Kelly // Journal Clinical Oncology. - 1993. - Vol. 11, N 8. - P. 1566-1572.

141. Sex-difference on flutamide metabolism in rat liver microsomal cytochrome P450 1A2 / H.X. Wang, D. Li, C.J. Xu, X. Liu // Yao xue xue bao (Acta pharmaceutica Sinica). - 2002. - Vol. 37, N 8. - P. 608-610.

142. Single and multiple dose pharmacokinetic evaluation of flutamide in normal geriatric volunteers / E. Radwanski, G. Perentesis, S. Symchowicz, N. Zampaglione // The Journal of Clinical Pharmacology. -1989. - Vol. 29, N 6. - P. 554-558.

143. Smith, R. J. Analysis of drug impurities / R. J. Smith, M. L. Webb.

- London: Wiley-Blackwell Publishing, 2007. - 288 p.

144. Snycerski, A. Polarographic determination of flutamide / A. Snycerski // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 1989.

- Vol. 7, N 12. - P. 1513-1518.

145. Species differences in tissue distribution and enzyme activities of

arylacetamide deacetylase in human, rat, and mouse / Y. Kobayashi, T.

186

Fukami, A. Nakajima [et al.] // Drug Metabolism and Disposition. - 2012. - Vol. 40, N 4. - P. 671-679.

146. Spectrofluorimetric determination of flutamide in pharmaceutical preaparations / A. A. Smith, R. Manavalan, K. Kannan, N. Rajendiran // Oriental Journal of Chemistry. - 2008. - Vol. 24, N 1. - P. 189-194.

147. Spectrophotometric determination of flutamide, nimesulide and meloxicam / T. K. Murthy, M. N. Reddy, R. M. Dharma, D. G. Sankar // Asian Journal of Chemistry. - 2001. - Vol. 13, N 3. - P. 915-918.

148. Spectrophotometric estimation of flutamide in pharmaceutical dosage forms / M. N. Reddy, T. K. Murthy, M. D. Reddy, D. G. Sankar // Asian Journal of Chemistry. - 2001. - Vol. 13, N 3. - P. 1261-1262.

149. Spectrophotometric methods for the determination of flutamide in tablets / P. Nagaraja, H. S. Yathirajan, H. R. A. Kumar, R. A. Vasantha // Indian Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2002. - Vol. 64, N 3. - P. 272-274.

150. Stabile, R. G. Microscale synthesis and spectroscopic analysis of flutamide, an antiandrogen prostate cancer drug / R. G. Stabile, A. P. Dicks // Journal of Chemical Education. - 2003. - Vol. 80, N 12. - P. 1439-1443.

151. Steady-state hydroxyflutamide plasma levels after the administration of two dosage forms of flutamide / R.H. Asade, L. Prizont, J. P. Muino, J. Tessler // Cancer Chemotherapy and Pharmacology. -1991. - Vol. 27, N 5. - P. 401-405.

152. Stiborova, M. Nitroaromatic compounds: environmental pollutans with carcinogenic potential for humans / M. Stiborova // Chem. Listy. -2002. - Vol. 96. - P. 784-791.

153. Studies on the metabolic fate of flutamide. (2): absorption, distribution and excretion after single oral administration in rats / N.

Asakawa, M. Koyama, Y. Hashimoto [et al.] // Drug Metabolism and Pharmacokinetics. - 1995. - Vol. 10, N 4. - P. 454-463.

154. Study of flutamide-induced liver disorders / A. Yamaguchi, S. Ozono, T. Kitauchi [et al.] // Nishinihon Journal of Urology. - 2001. -Vol. 63, N 1. - P. 469-471.

155. Synthesis and bacteriostatic activity of some nitrotrifluoro methylanilides / J. W. Baker, G. L. Bachman, I. Schumacher [et al.] // Journal of Medicinal Chemistry. - 1967. - Vol. 10, N 1. - P. 93-95.

156. Synthesis and biodistribution of [99mTc]-N-[4-nitro-3-trifluoromethyl-phenyl] cyclopentadienyltricarbonyltechnetium carboxamide, a nonsteroidal antiandrogen flutamide derivative / T. Dallagi, S. Top, S. Masi [et al.] // Metallomics. - 2010. - Vol. 2, N 4. - P. 289-293.

157. Synthesis of Ag nanoparticles for the electrochemical detection of anticancer drug flutamide / F. Ahmadia, J. B. Raoof, R. Ojania [et al.] // Chinese Journal of Catalysis. - 2015. - Vol. 36, N 3. - P. 439-445.

158. The pharmacokinetics of flutamide and its major metabolites after a single oral dose and during chronic treatment / M. Schulz, A. Schmoldt, F. Donn, H. Becker // European Journal Clinical Pharmacology. - 1988. -Vol. 19, N 34. - P. 633-636.

159. The use of flutamide in the management of hirsutism / M. Marugo, D. Bernasconi, M. Meozzi [et al.] // Journal of Endocrinological Investigation. - 1994. - Vol. 17, N 3. - P. 195-199.

160. Three validated stripping voltammetric procedures for determination of the anti-prostate cancer drug flutamide in tablets and human serum at a mercury electrode / E. Hammam, H. S. El-Desoky, K. Y. El-Baradie, A. M. Beltagi // Canadian Journal of Chemistry. - 2004. -Vol. 82, N 9. - P. 1386-1392.

161. Toxic hepatitis and liver failure under therapy with flutamide / C. Lübbert, M. Wiese, R. Haupt, B. R. Ruf // Internist (Berl). - 2004. - Vol. 45, N 3. - P. 333-340.

162. Toxic hepatitis caused by flutamide and hirsutism / F. J. Román Llórente, C. Alvarez Navascués, A. Suárez González, A. C. González Bernal // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 2000. - Vol. 23, N 5. - P. 258.

163. Toxicity of the antiandrogen flutamide in isolated rat hepatocytes / D. Fau, D. Eugene, A. Berson [et al.] // Japanese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics. - 1994. - Vol. 269, N 3. - P. 954-962.

164. Transport, metabolism, and hepatotoxicity of flutamide, drug-drug interaction with acetaminophen involving phase I and phase II metabolites / S. E. Kostrubsky, S. C. Strom, E. Ellis [et al.] // Chemical Research in Toxicology. - 2007. - Vol. 20, N 10. - P. 1503-1512.

165. Treatment of hirsutism, hyperandrogenism, oligomenorrhea, dyslipidemia, and hyperinsulinism in nonobese, adolescent girls: effect of flutamide / L. Ibáñez, N. Potau, M. V. Marcos, F. de Zegher // The Journal of clinical endocrinology and metabolism. - 2000. - Vol. 85, N 9. - P. 3251-3255.

166. Treatment of hirsutism in women with flutamide / J. A. Marcondes, S.L. Minnani, W.W. Luthold [et al.] // Fertil Steril. - 1992. - Vol. 57, N 3. - P. 543-547.

167. Tzanavaras, P. D. Automated determination of flutamide by a validated flow-injection method: Application to dissolution studies of pharmaceutical tablets / P. D. Tzanavaras, D. G. Themelis // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 2007. - Vol. 43, N 5. - P. 1820-1824.

168. Voltammetric determination of anticancer drug flutamide in

surfactant media at polymer film modified carbon paste electrode / P. K.

189

Brahman, R. A. Dar, S. Tiwari, K. S. Pitre // Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. - 2012. - Vol. 396, N 20. - P. 8-15.

169. Voltammetric determination of flutamide and its metabolite 4-nitro-3-trifluoromethylaniline at a hanging mercury drop minielectrode / K. Peckovaa, M. Pruchovaa, J. C. Moreirab [et al.] // Collect. Czech. Chem. Commun. - 2011. - Vol. 76, N 12. - P. 1811-1823.

170. Vyskocil V. Voltammetric determination of anticancer drug flutamide at screen-printed carbon electrodes / V. Vyskocil, T. Navratil, J. Barek // Conference: Modern Electrochemical Methods XXXI, At Jetrichovice, Czech Republic. - 2011. - Vol. 31. - P. 190-194.

171. Watanabea, Y. Comparison of photoreactions of flutamide in acetonitrile and 2-propanol solvents in the absence of cage-forming compounds / Y. Watanabea, S. Fukuyoshia, A. Oda // Journal of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry. - 2015. - Vol. 298. - P. 55-61.

172. Wysowski, D. K. Flutamide hepatotoxicity / D. K. Wysowski, J. L. Fourcroy // The Journal of Urology. - 1996. - Vol. 155, N 1. - P. 209212.

173. Xu, C. J. Pharmacokinetics of 2-hydroxyflutamide, a major metabolite of flutamide, in normal and CCl4-poisoned rats / C. J. Xu, D. Li // Zhongguo Yao Li Xue Bao (Acta Pharmacologica Sinica). - 1999. -Vol. 20, N 7. - P. 655-658.

174. Xu, C. J. Pharmacokinetics of flutamide and its metabolite 2-hydroxyflutamide in normal and hepatic injury rats / C. J. Xu, D. Li // Zhongguo Yao Li Xue Bao (Acta Pharmacologica Sinica). - 1998. - Vol. 19, N 1. - P. 39-43.

175. Youssef, N. M. Morpholinolysis of esters analogous to flutamide in 90% methanol-water / N. M. Youssef, S. Elshazly, E. A. Hamed // International Journal of Chemistry. - 2015. - Vol. 7, N 1. - P. 111-121.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Рисунок 1 - ЯМР 1Н спектр флутамида

Рисунок 2 - ЯМР 1Н спектр 4-нитро-3-(трифторметил)анилина

Рисунок 3 - ЯМР 1Н спектр 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамида

Рисунок 4 - ЯМР 1Н спектр №(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)ацетамида

196

Светопропускание, %

эко их ж их лю зо» гяо гам гга ж» гоо газ гот ггл гтао т да од гаю 1800 !«о 1« ш '.я> чж то яо ко гао юо

Волновое число, см -1

Рисунок 5 - ИК - спектр флутамида

Рисунок 6 - ИК - спектр 4-нитро-3-трифторметиланилина

Рисунок 7 - ИК - спектр 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)-

пропанамида

Рисунок 8 - ИК - спектр №(4-ацетамино-3-(трифторметил)фенил)-

ацетамида

РЙ

0,8 0,6 0,4 0,2 0

0,8 0,6 0,4 0,2 0

РЙ

Я^' ^ о?4' V

Процентное содержание полярного компонента Определение производных 3-трифторметиланалина методом ТСХ при использовании подвижных фаз ацетон - гексан

- - - Фл —•— 2-М-1Ч-4-А-3-ТФМФП

—•—4-Н-3-ТФМА -■•-■ 1Ч-4-АА-3-ТФМФАА

••••♦•" Ан

^ ф

Процентное содержание полярного компонента Определение производных 3-трифторметиланилина методом ТСХ при использовании подвижных фаз этилацетат - гексан

—Фл —4-Н-3-ТФМА ■♦"■ Ан

—2-М-К-4-А-3-ТФМФП К-4-АА-3-ТФМФАА

1

1

Условные обозначения в таблице: Ан- анилин; 4-НА - 4-нитроанилин; Фл - флутамид; 4-НА-3-ТФМА - 4-(нитро)-3-трифторметиланилин; 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамид (2-М-Ы-4-А-3-ТФМФП) и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)-фенил)ацетамид (N-4-АА-3 -ТФМФАА)

Рисунок 9 - Диаграммы хроматографирования производныз 3-трифторметиланилина в системах ацетон-гексан и этилацетат-гексан

1

0,8 0,6 0,4 0,2 0

1

0,8 0,6 0,4 0,2 0

Процентное содержание полярного компонента

Определение производных 3-трифторметиланилина методом ТСХ при использовании подвижных фаз этанол - гексан

Фл

■4-Н-3-ТФМА

Ан

—•— 2-М-К-4-А-3-ТФМФП - ■•-■ К-4-АА-3-ТФМФАА

1

0,8 0,6 0,4 0,2 0

1

4 0,8 0,6 0,4 0,2 0

Процентное содержание полярного компонента

Определение производных 3-трифторметиланилина методом ТСХ при использовании подвижных фаз диоксан-1,4 - гексан

-•- Фл

— 4-Н-3-ТФМА •♦•" Ан

—•— 2-М-К-4-А-3-ТФМФП -•-■ К-4-АА-3-ТФМФАА

Условные обозначения в таблице: Ан- анилин; 4-НА - 4-нитроанилин; Фл - флутамид; 4-НА-3-ТФМА - 4-(нитро)-3-трифторметиланилин; 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамид (2-М-Ы-4-А-3-ТФМФП) и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)-фенил)ацетамид (N-4-АА-3 -ТФМФАА)

Рисунок 10 - Диаграммы хроматографирования производных 3-трифторметиланилина в системах этанол-гексан и 1,4-диоксан-гексан

^ ^ ^ ^

Процентное содержание динамического модификатора Определение производных 3-трифторметиланилина методом ТСХ при использовании подвижных фаз ацетон - вода

--•- Фл

—•—4-Н-3-ТФМА Ан

—•— 2-М-К-4-А-3-ТФМФП -•-■ К-4-АА-3-ТФМФАА

1

0,8 0,6 0,4 0,2 0

1

0,8 0,6 0,4 0,2 0

ф. у». О^-. ^

Процентное содержание динамического модификатора

Определение производных 3 -трифторметиланилина методом ТСХ при использовании подвижных фаз ацетонитрил - вода

Фл

■4-Н-3-ТФМА

Ан

-•— 2-М-К-4-А-3-ТФМФП •- К-4-АА-3-ТФМФАА

Условные обозначения в таблице: Ан- анилин; 4-НА - 4-нитроанилин; Фл - флутамид; 4-НА-3-ТФМА - 4-(нитро)-3-трифторметиланилин; 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамид (2-М-Ы-4-А-3-ТФМФП) и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)-фенил)ацетамид (N-4-АА-3 -ТФМФАА)

Рисунок 11 - Диаграммы хроматографирования производных 3-

трифторметиланилина в системах ацетон-вода и ацетонитрил-вода

201

0,8 0,6 Й 0,4 0,2 0

Л

е»-

Л

0,8 0,6 0,4 0,2 0

Процентное содержание динамического модификатора Определение производных 3-трифторметиланилина методом ТСХ при использовании подвижных фаз диоксан -1,4 - вода

-•- Фл

4-Н-3-ТФМА •♦•" Ан

-•— 2-М-К-4-А-3-ТФМФП •- К-4-АА-3-ТФМФАА

Условные обозначения в таблице: Ан- анилин; 4-НА - 4-нитроанилин; Фл - флутамид; 4-НА-3-ТФМА - 4-(нитро)-3-трифторметиланилин; 2-метил-Ы-(4-амино-3-(трифторметил)фенил)пропанамид (2-М-Ы-4-А-3-ТФМФП) и №(4-ацетамино-3-(трифторметил)-фенил)ацетамид (N-4-АА-3 -ТФМФАА)

Рисунок 12 - Диаграммы хроматографирования производных 3-трифторметиланилина в системе 1,4-диоксан-вода

Таблица 1 - Характеристика ИК-спектра флутамида

Максимумы характеристических полос, см-1 Отнесение колебаний

3356 Валентные колебания связанной (транс) -ЫН-

3128 Валентные колебания связанной (цис) -ЫН-

3056 Валентные колебания ароматической =С-Н

2985 Валентные асимметрические -СН3

2943 Валентные асимметрические -СН3

1713 Валентные С=О

1610 С=С колебания ароматического кольца

1539 Деформационные колебания -ЫН- и С-Ы

1508 Асимметричные валентные колебания ЫО2

1342 Симметричные валентные колебания ЫО2

1314 Валентные колебания С-Ы ?

1272 Валентные колебания С-Ы ?

1243 Валентные колебания С-Ы ?

1172 Скелетные валентные колебания, маятниковые колебания метильной группы в изопропильной группе ?

1135 Скелетные валентные колебания в изопропильной группе ?

1101 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

1038 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

963 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

901 Внеплоскостные деформационные колебания С-Н группы

862 Внеплоскостные деформационные колебания С-Н группы

838 Внеплоскостные деформационные колебания С-Н группы

Таблица 2 - Характеристика ИК-спектра 4-нитро-3-трифторметиланилина

Максимумы характеристических полос, см-1 Отнесение колебаний

3480 Валентные асимметрические колебания ЫН связанной первичной аминогруппы

3368 Валентные симметрические колебания ЫН связанной первичной аминогруппы

3105 Валентные колебания =С-Н ?

1621 С=С колебания ароматического кольца

1488 Асимметричные валентные колебания ЫО2

1455 С=С колебания ароматического кольца

1320 Симметричные валентные колебания ЫО2

1259 Валентные колебания С-Ы в первичных аминах ?

1185 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

1036 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

879 Внеплоскостные деформационные колебания =С-Н группы

836 Внеплоскостные деформационные колебания =С-Н группы

Таблица 3 - Характеристика ИК-спектра 2-метил-Ы-(4-амино-3-

(трифторметил)фенил)пропанамида

Максимумы характеристических полос, см-1 Отнесение колебаний

3451 Валентные асимметрические колебания ЫН связанной первичной аминогруппы

3419 Валентные симметрические колебания ЫН связанной первичной аминогруппы

1630 Деформационные колебания ЫН ?

1506 С=С колебания ароматического кольца

1456 С=С колебания ароматического кольца

1305 Валентные колебания С-Ы в первичных аминах ?

1233 Валентные колебания С-Ы в первичных аминах ?

1175 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

1096 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

1046 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

878 Внеплоскостные деформационные колебания =С-Н группы

831 Внеплоскостные деформационные колебания =С-Н группы

Таблица 4 - Характеристика ИК-спектра №(4-ацетамино-3-(трифтор-

метил)фенил)ацетамида

Максимумы Отнесение колебаний

характеристических

полос, см-1

3230 Валентные колебания NH связанной вторичной аминогруппы

2921 Ассиметричные валентные колебания СН3

2852 Симметричные валентные колебания СН3

1657 Валентные колебания C=O

1612 С=С колебания ароматического кольца

1523 С=С колебания ароматического кольца

1327 Валентные колебания C-N ?

1283 Валентные колебания С-N ?

1252 Валентные колебания С-N ?

1052 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

1015 Плоскостные деформационные колебания =С-Н группы

893 Внеплоскостные деформационные колебания =С-Н группы

823 Внеплоскостные деформационные колебания =С-Н группы

флутамида

Растворитель Экстремумы Длины волн, нм ^1% е

ДМФА Xmax 315 375 8776

Ацетон Xmax 230 207 5799

Xmax 351 139 3892

Xmin 348 - -

Ацетонитрил Xmax 236 324 9233

Xmax 308 278 7936

Xmin 257 - -

Этанол Xmax 204 557 15720

Xmax 228 433 12209

Xmax 297 285 8032

Xmin 218 - -

Xmin 256 - -

Этилацетат Xmax 305 306 7555

Метиленхлорид Xmax 231 773 12896

Xmax 302 265 4426

Xmin 256 - -

Бензол Xmax 281 522 13186

Диоксан Xmax 305 324 6944

Гексан Xmax 220 862 29150

Xmax 282 293 9920

Xmin 251 - -

Пропанол-2 Xmax 225 528 14880