Химическая модификация природных полимеров меланинов гриба Inonotus obliquus (чага) с целью получения высокоактивных антиоксидантов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат наук Грачева, Наталья Владимировна

• Грачева, Наталья Владимировна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Грачева, Наталья Владимировна

Оглавление

Введение

ГЛАВА 1 Современное состояние и основные тенденции развития в области исследований меланинов гриба 1попо1и8 оЬНцш^

1.1 Характеристика меланинов гриба ¡попоШб оЬ^иш и их

антиоксидантные свойства

1.2 Модификация меланинов гриба 1попоШб оЬ^иш и близких им по химической природе природных полимерных соединений

1.3 Выделение меланинов гриба 1попо1ш оЬПциш из сырья

ГЛАВА 2 Объекты и методы исследования

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования

2.ЗТехника эксперимента

ГЛАВА 3 Экспериментальна часть

3.1 Структурно-химическая характеристика меланинов гриба 1попоШ8 оЪЩит (чага)

3.2 Химическая модификация меланинов гриба 1попоЫ8 оЬЩит (чага)

3.2.1 Модификация меланинов методом окислительного

гидроксилирования по Эльбсу

3.2.2 Модификация меланинов методом периодатного окисления

3.2.3 Модификация меланинов методом восстановления сульфитом

натрия в щелочной среде

3.3 Разработка способов выделения меланинов гриба ЫопоШб оЬНдиш

(чага) из сырья

3.3.1 Разработка способа выделения меланинов из чаги экстракцией в электрическом поле

3.3.2 Разработка способа выделения меланинов из чаги с использованием

в качестве экстрагента этилового спирта

3.3.3 Разработка способа выделения меланинов из чаги методом

щелочного гидролиза

3.4 Антиоксидантная активность меланинов грибаЫопоШб оЫ'щит (чага)

и их модифицированных продуктов

Выводы

Список литературы

Приложение 1 Основные формулы и расчет элементного состава

образцов меланинов

13

Приложение 2 Отнесения сигналов в спектрах С ЯМР

Приложение 3 Матрица планирования униформ-ротатабельного пятифакторного плана исследования экстрагирования меланинов

в условиях наложения электрического поля

Приложение 4 Обработка результатов униформ-ротатабельного пятифакторного плана исследования экстрагирования меланинов в условиях наложения электрического поля

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Химическая модификация природных полимеров меланинов гриба Inonotus obliquus (чага) с целью получения высокоактивных антиоксидантов»

Введение

В настоящее время в области химии высокомолекулярных соединений наблюдается всплеск интереса к биополимерам с целью разработки на их основе материалов с различными функциями [1-3]. Особое место среди природных полимеров занимают меланины - представители класса мало изученных конденсированных полифенолов [4-6]. Наличие высокостабильных парамагнитных центров, разнообразие функциональных групп, а также система сопряженных связей в молекулах определяют их полифункциональность [7-11].

Уникальным свойством меланинов является устойчивое свободно-радикальное состояние. В зависимости от условий мономеры меланиновых пигментов способны находиться в виде феноксильных или семихинонных радикалов [12, 13]. Вступая в окислительные реакции, эти природные полимеры действуют не только в восстановленной гидрохинонной форме фенолов, но и как система полифенол-хинон, в которой в качестве обязательного промежуточного продукта присутствует радикал-семихинон. Компоненты этой системы определяют проявление меланинами антиоксидантных свойств [6, 9, 14]. Экономическая доступность природных полимерных пигментов обусловливает возможность получения на их основе высокоактивных антиоксидантов, которые могут найти применение, как в медицине, так и в различных отраслях промышленности. Фенольная природа меланинов и присутствие реакционноспособных функциональных групп обеспечивают возможность разнообразных химических модификаций, позволяющих усиливать присущие им свойства.

Одним из перспективных сырьевых ресурсов природных полимеров меланинов является гриб трутовик скошенный 1попоШ оЬЩит (чага) [6, 8, 9, 14]. Известно, что меланиновые полимеры чаги представлены несколькими фракциями, различающимися по химическому составу, степени ароматизации,

молекулярно-массовому распределению и содержанию функциональных групп [6,14,15]. Однако вопрос их структурно-химической организации остается открытым, что не позволяет регулировать их свойства в необходимом направлении. В связи с этим актуальным и необходимым является исследование ♦ структурно-химической организации природных полимеров меланинов гриба 1попоШз оЬЩит (чага) и разработка способов повышения их антиоксидантной активности. Особенно перспективным представляется их направленная химическая модификация с целью введения или усиления требуемой функции.

Цель работы заключается в получении высокоактивных антиоксидантов путем химической модификации природных полимеров меланинов гриба ЫопоШб оЪИдит.

Для реализации цели были поставлены и решены следующие задачи:

- исследовать структурно-химическую организацию природных полимеров меланинов гриба 1попоШ оЬИдиш;

- разработать способы химической модификации меланинов гриба ЫопоШб оЪИцит исходя из особенностей их структурно-химической организации;

- провести модификацию природных полимеров меланинов различными химическими способами;

- исследовать антиоксидантную активность исходных и модифицированных пигментных полимеров;

- разработать способы выделения меланинов из сырья.

Научная новизна. Впервые разработаны и научно обоснованы способы химической модификации меланиновых полимеров чаги методами окислительного гидроксилирования по Эльбсу, периодатного окислительного деметилирования и восстановления сульфитом натрия, позволяющие увеличить содержание фенольных групп на 30-40% и в 4-5 раз соответственно. Определено,

что увеличение содержания фенольных групп обусловливает повышение антиоксидантной активности полимеров.

Впервые доказано, что в составе меланинов присутствует химически связанный с полисахаридами лигниноподобный полимер, образованный структурными звеньями гваяцил-сирингильного типа, соединенными между собой сложноэфирными связями. Предложена схема строения фрагмента этого полимера. Разработаны способы выделения лигниноподобного меланина, позволяющие увеличить его выход в 2 и 3 раза.

Разработан способ получения меланина из шрота гриба I. оЪИцит методом щелочного гидролиза, позволяющий увеличить выход в 6-8 раз.

Практическая значимость. Разработаны сравнительно простые одностадийные процессы получения производных природных полимеров меланинов гриба чаги. Получены модифицированные меланины, характеризующиеся высокой антиоксидантной активностью. Разработаны способы выделения природных полимеров меланинов из сырья, позволяющие повысить выход при низких энергетических затратах и использовать в качестве сырья отходы переработки гриба чаги. Разработан способ выделения меланина, основанный на его осаждении ацетоном из щелочных растворов, что позволяет получить водорастворимую фракцию.

Основные положения, выносимые на защиту.

- теоретическое и экспериментальное обоснование возможности химической модификации природных полимеров меланинов гриба I. оЬИдит чаги, обусловленные особенностями их структурно-химической организации;

- теоретическое и экспериментальное обоснование эффективности химической модификации природных полимеров меланинов гриба I. оЬИдиш чаги с целью получения на их основе высокоактивных антиоксидантов;

- результаты химической модификации меланинов чаги методами

окислительного гидроксилирования по Эльбсу, периодатного окислительного деметилирования и восстановления сульфитом натрия, которые могут быть использованы для разработки способов регулирования антиоксидантных свойств полимеров;

- способы выделения природных полимеров меланинов из сырья, позволяющие повысить выход при низких энергетических затратах, использовать в качестве сырья отходы переработки гриба чаги, получать водорастворимую фракцию меланинов.

Основные полученные с 2008 по 2013 год результаты исследований докладывались и обсуждались на 7 международных и 2 российских конференциях.

По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, из них 5 статей - в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки России; получен 1 патент РФ на изобретение.

Диссертация изложена на 128 страницах, содержит 27 рисунков и 29 таблиц. Работа включает введение, 3 главы, выводы, библиографический список, содержащий 133 наименования, и 4 приложения.

Достоверность результатов. Достоверность результатов основывается на

использовании современных методов исследований таких как: элементный

1 ^

анализ, ИК-Фурье спектроскопия, С ЯМР-спектроскопия, ЭПР- спектроскопия, УФ-спектроскопия, рК-спектроскопия, вискозиметрия, криоскопия и др., проведенных в различных сертифицированных лабораториях и на поверенных приборах, и обработке полученных результатов методами математической статистики.

Личный вклад. Личный вклад автора заключается в проведении теоретических и экспериментальных исследований. Основные результаты работы

получены лично автором при его непосредственном участии в планировании и проведении экспериментов.

Благодарности. Автор выражает благодарность д.х.н., профессору Лебедеву А.Т. (МГУ им. М.В. Ломоносова) и Таказовой Р.У. (ИНЭОС им. Несмеянова РАН) за проведение элементного анализа; д.х.н., профессору Перегудову A.C. (ИНЭОС им. Несмеянова РАН) и к.х.н. Курковской Л.Н. (ИБХФ РАН) за содействие в проведении исследований методом ЯМР-спектроскопии; д.х.н., профессору Солодовникову С.П. (ИНЭОС им. Несмеянова РАН) за помощь в проведении исследований методом ЭПР-спектроскопии; д.х.н., профессору

Рязанову М.А.| (Институт химии Коми НЦ УрО РАН) за помощь в обработке результатов рК-спектроскопических исследований. Глубокую признательность автор выражает д.т.н., профессору Желтобрюхову В.Ф. (ВолгГТУ), д.т.н., профессору Каблову В.Ф. (ВолгГТУ) и к.х.н., доценту Хохловой Т.В. (ВолгГТУ) за участие в постановке цели и обсуждении результатов.

Исследования проводились при поддержке Минобрнауки РФ в рамках базовой части госзадания НИР №20-53/676-14.

Глава 1 Современное состояние и основные тенденции развития в области исследований меланинов гриба 1попо1:1№ оЬ^ииэ 1.1 Характеристика меланинов гриба 1попо1и8 оЬНцииз

Основным действующим веществом, по содержанию которого согласно Государственной Фармакопее (ГФ) [16] проводят стандартизацию сырья и препаратов на основе чаги, являются хромогенные вещества, содержание которых в сырье составляет около 50% от экстрагируемых веществ. В последнее время эти вещества относят к группе меланинов.

Меланины - высокомолекулярные пигменты, синтезируемые растениями, грибами, бактериями, и представляющие собой полимеры фенольной и (или) индольной природы [4]. Исследование вопросов происхождения и образования хромогенных веществ чаги (Шиврина и др., 1959) выявило, что меланины являются, результатом ферментативной окислительной полимеризации продуктов деструкции лигнина, разрушенного полифенолоксидазной системой гриба [17]. Наличие разнообразных мономерных и олигомерных предшественников, нескольких типов межмономерных связей обусловливают нестехиометричный состав, нерегулярное строение и полидисперность меланинов [6, 14, 17].

Среди меланинов чаги выделены и идентифицированы алломеланины (ВаЬкБкауа е1 а1., 2000), относимые к пирокатехиновому типу [18]. Кроме того, высказано предположение, что меланины могут также являться производными гиспидина [6].

Установлено, что меланины чаги представлены несколькими фракциями, различающимися по химическому составу, степени ароматизации, молекулярно-массовому распределению и содержанию функциональных групп (Олейников, 2012; Сухих и др., 2009) [6, 19].

Обобщение данных элементного состава меланиновых пигментов чаги, представленных в литературных источниках, выявило, что пигменты можно условно разделить на 2 группы: с высоким и низким содержанием углерода (таблица!).

Таблица 1 - Элементный состав и мольные отношения атомов меланинов 1попоШ оЬНдит

Соединение содержание элементов, масс.% мольные отношения*

С Н N О и/с О/С

Меланины I. оЪИдит [20] 53,28 4,45 0,40 41,87 1,00 0,59

Меланиновый комплекс [21] 57,88 4,22 0,32 37,58 0,87 0,49

Меланин/. оЬИдит [14] 42,00 5,00 0,70 51,80 1,42 0,93

Меланины I. оЬИдит [6] - - - 1,18*" 0,44***

Меланины I. оЪНдит [6] - - - - 0,98*** *** 0,48

Меланины I. оЪИдит [6] - - - - *** 1,05 0,52***

Меланины I. оЪИдит [6] - - - - _ л *** 1,10 0,52***

Меланины I. оЬИдиш [6] - - - - . „ *** 1,48 *** 0,65

Меланины I. оЬИдиш [6] - - - - *** 0,98 0,55***

Меланин I. оЪИдит [6] - - - - 1,18*** 0,40***

Меланин I. оЪИдит [6] - - - - 1,35*** 0,95***

Меланин I. оЪИдииэ [6] - - - - 1,65*** 0,98***

Меланин I. оЪИдииэ [6] - - - - 1,67*** 1,25***

- Отношение числа молей 2-х сравниваемых элементов. Число молей элемента определяют как частное деления процентного содержания данного элемента (% масс.) на его атомную массу.

-нет данных

-определено по диаграмме Ван-Кревелена

Первую группу относят к гуминоподобным соединениям (Шиврина, 1965; Магигк^ешюг, 2006; Королева и др., 2007), вторую - к грибным меланинам

близким Aspergillus niger (Королева и др., 2007), Uloclodium botrydis (Мирчинк, 1988), Ganoderma lucidum (Fr.) Kast и Aspergillus carbonarius (Bainer) Thorn. (Огарков и др., 2005) и ранним сведениям о меланинах Inonotus obliquus (Babitskaya et all, 2000; Кукулянская и др., 2002) [6,14, 18- 24].

Сравнение величин мольных отношений НУС и О/С выявило, что гуминоподобные меланины характеризуются большей ароматичностью, а грибные - меньшей ароматичностью и высокой окисленностью. Это предполагает присутствие в структуре значительного количества кислородсодержащих функциональных групп [6].

Анализ данных содержания функциональных групп в меланинах чаги, представленных в литературных источниках, показал малую изученность данного вопроса. В меланинах обнаружены следующие функциональные группы: карбоксильные [14, 17, 20, 22], фенольные [6], хиноновые [13, 14, 22, 26], метоксильные [17, 20-21, 27], сложноэфирные [15, 27]. При этом количественно определены только карбоксильные и метоксильные группы [17, 20].

Наличие хиноновых групп определено методом электронного парамагнитного резонанса в работах [13, 14, 18, 22]. Выявлено присутствие сигнала ЭПР с g=2,00, равному g-фактору свободного электрона, слегка ассиметричной формы, что соответствует феноксильному и семихинноному радикалу. Выдвинуто предположение, что в меланинах чаги устанавливается энергетически выгодное равновесие: фенол - семихинон - хинон [13]:

Концентрация парамагнитных центров (ПМЦ) в меланинах составляет

Наличие сложноэфирных групп определено при исследовании карбонильной фракции гидролизатов хромогенов-меланинов [27]. Показано

не

3,5-1017-6,8-1018 спин/г [13,14,18,20-21].

(Ловягина и др., 1960), что в ароматическом ядре пропилфенольные соединения этерифицированы с сиреневыми и гваяцильными структурами.

Наличие кислых функциональных групп определено методами ИК- и 13С ЯМР-спектроскопии [6, 14, 17, 20, 22, 27]. Анализ данных содержания карбоксильных групп в меланинах показал значительный разброс значений: от 0,9% (Сушинская, 2004) до 6,5% (Шиврина и др., 1959; Ловягина и др., 1960), что обусловлено, прежде всего, различными способами выделения и очистки меланинов, и, как следствие, различной структурой.

Количественное определение кислых функциональных групп в меланинах грибов, отличающихся содержанием углерода, выявило высокое содержание карбоксильных и гидроксильных фенольных групп для гуминоподобных меланинов, в то время как для меланинов с низким содержанием углерода содержание этих функциональных групп в 2-3 раза ниже [23].

Наличие метоксильных групп определено в работах [17, 20-21, 27]. Выявлено, что по содержанию метоксильных групп гуминоподобные меланиновые полимеры занимают промежуточное положением между полностью метоксилированной «молекулой» лигнина и почти полностью деметоксилированными гуминовыми кислотами [17, 20].

С целью исследования структурной организации ароматической составляющей меланинов был применен гидролиз с последующим хроматографическим разделением полученных продуктов [15, 27].

В результате были выделены и идентифицированы следующие соединения: эфиры синапового и кониферилового альдегидов, ванилин, сиреневый альдегид, сиреневая, ванилиновая, п-оксибензойная, галловая, эллаговая и протокатеховая кислоты и др. (Ловягина и др., 1958) (рисунок 1.1).

НО

о

У/

С—ОН

I

1

он

сн=сн — сно

ОСН;

он

СН =СН — сно

!

г ]

НзСО ' " г'' " ОСНз

он

-и/"» с/ГС

и

сно сно

НзСО

сно

ОСНз НзСО

ОСН;

он

СН—СН

.1

сно

НОСНг V ОСНз

I I

НС - О

I

неон

к

л

||

он

ОСНз

м

Рисунок 1.1- Структурные формулы некоторых продуктов гидролиза ПГЖ а- сиреневая кислота, б- ванилиновая кислота, в- оксикоричная кислота, г- п-оксибензойная кислота, д- эллаговая кислота, е- галловая кислота, ж-протокатеховая кислота, з- конифериловый альдегид, и- синаповый альдегид, к-дегидрованилин, л- сиреневый альдегид, м- гваяцил-глицерол-[3-конифериловый эфир

Так как гидролиз относится к деструктивным методам исследования, не позволяющим сохранять структуру в неизменном состоянии, то наличие данных веществ не указывает на их присутствие в исходных «молекулах», но свидетельствует о том, что для ароматических колец меланинов I. оЪИдиш характерно такое число С-заместителей.

Таким образом, обобщение литературных данных по структурно-химической характеристике меланинов I. оЬИдиж выявило недостаточную изученность вопроса. На сегодняшний день нельзя дать однозначный ответ о структуре меланинов чаги.

На рисунке 1.2 представлены фрагменты предполагаемых структур меланинов. Анализ предполагаемых структур показал, что меланины, состоящие из фрагментов а и в, должны характеризоваться высоким содержанием углерода и низкими величинами мольных отношений Н/С и О/С. Для меланинов чаги исходя из литературных данных это условие не выполняется. Структуры типа д и г также не могут быть применены для описания структуры меланинов, так как в них отмечается довольно высокое содержание азота и низкое кислорода.

Присутствие в меланинах чаги структур типа б представляется возможным: рассчитанное содержание элементов углерода и водорода близко экспериментальным, можно объяснить растворимость меланинов в воде и некоторые другие свойства. Однако содержание азота также высоко.

В работах [30-32] показано, что в составе меланинов чаги присутствуют химически связанные углеводы. При исследовании полисахаридных соединений меланинов выявлено [30], что общее количество Сахаров, содержащихся в гидролизате, не превышает 10,00%. Их качественный состав представлен глюкозой и ксилозой. При этом глюкозы значительно больше, на основании чего данный полисахарид отнесен к глюкозанам [30].

г

Рисунок 1.2- Фрагменты предполагаемых структур меланинов а- фрагмент предполагаемой структуры пирокатехиновых меланинов [4], б-фрагмент предполагаемой структуры меланоидина - дикетопиразинохиноидная структура [28], в — фрагмент предполагаемой структуры периленовых меланинов [4], 2- фрагмент предполагаемой структуры феомеланина [4], д- фрагмент предполагаемой структуры эумеланинов [4]

Немногочисленные данные по изучению молекулярной массы меланинов чаги подтверждают их отнесение к полимерам [6, 22, 33]. При этом значения молекулярной массы колеблются от 2-20 кЭа (Олейников, 2012) до 37-57 кОа (Кукулянская и др., 2002) и 35-50 кОа (Бабицкая и др, 2005).

Одной из важных характеристик меланиновых пигментов, обусловливающей возможность и способы их применения, а также выделения из

сырья, является растворимость. Меланины чаги хорошо растворимы в растворах щелочей [14, 18, 22 и др.]. Их отличительной особенностью является способность частично растворяться в воде [14 ,22], диметилсульфоксиде, диметилформамиде [34].

Характерным свойством меланинов чаги является генерализованное поглощение света в ультрафиолетовом и видимом диапазоне длин волн [14, 22, 34]. Спектры поглощения меланинов имеют вид пологих кривых с постепенным уменьшением оптических плотностей по мере возрастания длин волн от 200 до 600 нм. Согласно мнению ряда ученых (Лях, 1981; Butler, 1998) высокая интенсивность светопоглощения обусловлена наличием кислородсодержащих групп, а появление С=0 связи за счет окисления ОН-групп увеличивает ее значения [12, 35].

Использование электрофореза при исследовании меланинов чаги выявило их гетерогенность [36]. Показано, что меланины-хромогены в условиях электрофореза с использованием раствора муравьиной кислоты (pH 2,4), ацетатного (pH 5,2) и борно-боратного (pH 8,6) буферов подвергаются разделению. При этом, электрофорез с использованием раствора муравьиной кислоты позволил отделить слабо связанные и свободные хромогены, подвижные как в сторону анода, так и в сторону катода. Электрофорез в боратном буфере выявил, что в щелочной среде более подвижны индивидуальные соединения и частицы, несущие как отрицательный, типа полианионов, так и положительный заряды [36]. Неоднородность по химическому составу и свойствам меланинов чаги доказана и в других работах (Олейников, 2012; Сухих и др., 2009; Сысоева и др., 2007) [6, 19, 26,37].

Белорусскими учеными (Сушинская и др., 2006) была предпринята попытка исследования меланинов методом термоокислительной деструкции [34]. В результате исследования установлено: деструкция меланинов чаги, обусловленная

нагреванием, протекает в 2 основных этапа и несколько дополнительных, что характерно для меланинов грибов, вызывающих белую гниль [34].

Таким образом, обобщение данных литературных источников выявило недостаточную изученность вопроса структурной организации меланинов. Определено, что основной тенденцией в области исследования меланинов на данном этапе развития является их фракционирование различными методами и изучение физико-химических характеристик. Одновременно с этим наблюдается и другая тенденция - исследование свойств меланинов, имеющих прикладное значение: антиоксидантных, фотопротекторных, сорбционных и других [6-11, 14, 22,25, 33].

К основополагающим свойствам, определяющим интерес ученых к меланинам, относится антиоксидантная способность. Исследованию антиокислительных свойств меланинов чаги посвящено большое количество работ и отечественных, и зарубежных ученых.

Учеными Казанского технологического университета (КНИТУ) проведены комплексные исследования антиоксидантной активности водных извлечений чаги [37-39] и меланинов, выделенных из них [38, 40].

При изучении антиоксидантной активности меланинов чаги значительное внимание уделяется исследованию вопроса инактивации различных инициаторов окислительного стресса. В работе (Олейников, 2012) представлены результаты исследования связывания меланинами чаги радикальных частиц [6]. Установлено, что наиболее выраженной активностью меланины чаги обладают в отношении свободных радикалов: 1,1-дифенил-2-пикрилгидразил радикала и 2,2'-азино-бис(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты) катион-радикала (ОРРН', АВТ8'+), а также некоторых активных форм кислорода (02 ОН', Н202). Эти данные соотносятся с результатами исследований зарубежных ученых [9, 41-44]. Определено, что на процесс связывания молекул оксида азота (II) меланины чаги

оказывают меньшее влияние [6]. Концентрация меланинов 1С50, при которой происходит инактивация 50% радикальных частиц, для молекул оксида азота (II) увеличивается на 2-3 порядка по сравнению с 1С5о в отношении активных форм кислорода и составляет от 335,24 до >1000 мкг/мл. С применением регрессионного анализа были определены дескрипторы антиоксидантной активности. Выявлено, что для фракций с высоким содержанием пирокатехиновых, кислородсодержащих функциональных групп (мольное отношение О/С) и высокой степенью ароматичности (мольное отношение Н/С) характерна большая антиоксидантная активность [6]. В этой же работе показано, что для меланинов чаги характерны значительные Ре2+- хелатирующие и Ре3+-восстанавливающие способности.

Учеными Белоруссии исследовались антиоксидантные свойства меланинов чаги в реакциях пероксидазного окисления бензидина и его производных (Бабицкая и др., 2005; Иконникова и др., 2006). Определено, что при концентрации 20 мг/мл меланины чаги ингибируют реакцию пероксидазного окисления аминобифенолов [33, 45]. В более ранних исследованиях ингибирующей активности меланинов в реакциях пероксидазного окисления бензидина установлено, что меланины взаимодействуют с ферментом пероксидазой с образованием комплексов. Это взаимодействие проявляется в уменьшении скорости реакции по истечении времени индукции и подтверждено результатами гель-хроматографии [46]. Прямое взаимодействие фермента и ингибитора снижает каталитическую активность пероксидазы. Показано, что меланины могут выполнять роль ловушек радикальных продуктов и служить полимерной матрицей для ковалентной модификации пероксидазными оксидантами [46]. В работах по исследованию ингибирования пероксидазы меланинами и гуминовыми веществами выявлена (Демин и др., 2006) прямо

пропорциональная зависимость между степенью ингибирования и величиной молекулярной массой однотипных соединений [47].

Обобщая представленные литературные данные, можно констатировать, что меланины чаги характеризуются высокой антиоксидантной активностью. Однако, несмотря на это делаются попытки усиления антиокислительных свойств меланинов. Актуальным направлением в области получения высокоактивных антиоксидантов является модификация исходных меланинов.

1.2 Модификация меланинов гриба 1попо1и$ оЬПциш и близких им по химической природе природных полимерных соединений

Казанскими учеными разработаны способы повышения антиоксидантной активности меланинов чаги. Показано (Сысоева, 2010), что обработка водных извлечений водными растворами гиперразветвленных полимеров Вокогп Н30 и Н40 приводит к изменению размеров частиц меланинов, обусловливающих повышение их антиоксидантной активности [40, 48-50].

Возможным направлением модификации является также образование комплексов (Бакулин, 2009), например хитозан-меланиновых [51]. Доказано, что хитозан-меланиновые комплексы обладают значительно более высокой антиоксидантной активностью. Корреляционный анализ выявил прямую зависимость антиоксидантной активности от концентрации парамагнитных центров [51].

Анализ литературных данных показал, что исследования в области модификации меланинов являются достаточно новым направлением и еще не получили широкого развития. В то время как в области химии близких по природе соединений (гуминовых веществ, лигнина) это направление хорошо

развито, и различные методы модификации широко используются для придания и (или) регулирования тех или иных свойств.

Одним из направлений модификации является введение в структуру новых или увеличение содержания имеющихся фрагментов с целью придания новых или усиления существующих свойств. В работе по изучению антиоксидантной активности природных полимерных соединений выявлена ее зависимость от содержания фенолов [52]. Установлено (МаИЫеБзеп, 1995), что фракции гуминовых веществ, обогащенные фенольными группами, обладают большей окислительно-восстановительной емкостью [53]. Так как окислительно-восстановительная емкость характеризует способность соединения к переносу электрона в окислительно-восстановительных реакциях, то увеличение значения этого показателя свидетельствует о повышении антиоксидантных свойств и подтверждает наличие корреляции между содержанием фенольных групп и антиоксидантной активностью.

Также предполагается, что за проявление антиоксидантных свойств гуминовыми соединениями ответственны хиноновые фрагменты [54-56]. Подтверждено, что между концентрацией парамагнитных центров и Ре3+-восстанавливающей способностью существует прямая зависимость [55]. Однако необходимо иметь в виду, что в реакциях восстановления Ре3+ в переносе электрона могут принимать участие и комплексы переходных металлов, присутствующих в этих соединениях. Зависимость антиоксидантной активности от содержания фенольных и хиноновых групп определяет возможные направления регулирования антиокислительных свойств.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Грачева, Наталья Владимировна, 2014 год

Список литературы

1. Кузьмин, Д. В. Мхи и лишайники как сырье для получения сорбционных материалов [Текст] // Химия высокомолекулярных соединений, лесохимия и органический синтез : тр. Коми науч. центра УрО РАН (№ 167) / Д. В. Кузьмин, М. Ф. Попова, О. В. Броварова, А. П. Карманов, JI. С. Кочева. -Сыктывкар, 2002. - С. 39-44. - ISBN 5-89606-118-8.

2. Кочева, JI. С. Исследование структуры и антиоксидантных свойств лигнинов пшеницы и овса [Текст] / Л. С. Кочева, М. Ф. Борисенков, А. П. Карманов, В. П. Мишуров, Л. В. Спирихин, Ю. Б. Монаков // Журн. прикл. химии, 2005. -№ 8.-Т. 78.-С. 1367-1374.-ISSN 0044-4618.

3. Дам Тхи Тхань Хай. Целенаправленная переработка фенольных компонентов биомассы древесины в ингибиторы полимеризационных процессов [Текст] / Дам Тхи Тхань Хай, До Тьем Тай // Научная инициатива иностранных студентов и аспирантов российских вузов : Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции. - Томск, ТПУ. - 24-26 мая 2011. - С. 328-332.

4. Бриттон, Г. Биохимия природных пигментов [Текст] / Г. Бриттон. - М.: Мир, 1986.-422 с.

5. Скорбина, Е. А. Разработка технологии получения и исследование биологической активности меланин содержащих препаратов [Текст] : дис. ... канд. биолог, наук / Е. А. Скорбина. - Ставрополь, 2005. - 142 с.

6. Олейников, Д. Н. Структурно-функциональное исследование биополимеров растительного и грибного происхождения и совершенствование методов их анализа [Текст] : автореф. дис. ... док-ра фарм. наук / Д. Н. Олейников. -Улан-Уде, 2012.-40 с.

7. Иконникова, Н. В. Сорбционная способность биомассы меланинсинтезирующего базидиомицета Phellinus robustus М-10 [Текст] / Н. В. Иконникова, И. А. Гончарова, Н. М. Ровбель // Успехи медицинской микологии. - 2005. - т. V. - С. 187-190.

8. Lu, X. Phytochemical characteristics and hypoglycaemic activity of fraction from mushroom Inonotus obliquus [Текст] /X. Lu , H. Chen , P. Dong , L. Fu , X. Zhang // J Sci Food Agric. - 2010. - Vol. 90(2). - P. 276-280.

9. Yong, Cui. Antioxidant effect of Inonotus obliquus [Текст] / Yong Cui, Dong-Seok Kim and Kyoung-Chan Park // J. of Ethnopharmacology. - 2005. - Vol. 96. -I. 1-2.-P. 79-85.

10. Ichimura, T. Inhibition of HIV-1 protease by water-soluble lignin-like substance from an edible muchroom Fuscoporia obliques [Текст] / Т. Ichimura, О. Watanabe, S. Maruyama // Biosci Biotechnol Biochem. - 1998. - N 62. - P. 575577.

11. Бакулин, А. В. Получение хитин-меланиновых комплексов из Apis mellifera и изучение возможности их использования в качестве сорбентов радионуклидов [Текст] / А. В Бакулин и др. // Доклады РАСХН. - 2011. -№5.-С. 48-51.

12. Лях, С. П. Микробный меланогенез и его функции [Текст] / С. П. Лях. - М.: Наука, 1981.- 150 с.

13. Соловьев, В. А. Применение метода парамагнитного резонанса для изучения чаги и продуктов метаболизма некоторых других дереворазрушающих грибов [Текст] / В. А. Соловьев, А. М. Кутневич // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. - Л., 1973. - С. 35-39.

14. Сушинская, Н. В. Получение и физико-химические свойства меланинов из базидиомицетов [Текст] / Н. В. Сушинская, Т. А. Кукулянская, В. П.

Курченко, JT. М. Шостак // Труды Белорусского государственного технологического университета. Серия IV: Химия и технология органических веществ - Вып. XII. - Минск, 2004. - С. 193-196.

15. Ловягина, Е. В. Изучение продуктов гидролиза действующего начала чаги методами распределительной хроматографии [Текст] / Е. В. Ловягина, А. Н. Шиврина, Е. Г. Платонова // Биохимия. - 1958. - т. 23. - вып. 1. - С. 41-46.

16. Государственная фармакопея СССР [Текст]. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987.-389 с.

17. Шиврина, А. Н. К вопросу о природе и происхождении водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага [Текст] / А. Н. Шиврина, Е. В. Ловягина, Е. Г. Платонова // Биохимия. - 1959. - Т. 24. - вып. 1.-С. 67-72.

18. Babitskaya, V. G. Melanin complex of the fungus Inonotus obliquus [Текст] / V. G. Babitskaya, V. V. Shcherba and N. V. Lkonnikova // Appl. Biochem. Microbiol. - 2000.-36.-P. 377-381.

19. Сухих, А. С. Гель универсального назначения - сефадекс LH-20 в разделении и очистке гуминовых кислот и гуминоподобных веществ [Текст] / А. С. Сухих, П. В. Кузнецов // Сорбционные и хроматографические процессы. -2009. - Т. 9. - Вып. 2. - С. 266-274.

20. Шиврина, А. Н. Биологически активные вещества высших грибов. [Текст] / А. Н. Шиврина. - М.-Л.: Наука, 1965.- 199 с.

21. Mazurkiewicz, W. Analysis of aqueous exract of Inonotus obliquus [Текст] / Witold Mazurkiewicz // Acta Poloniae Pharmaceutica - Drug Research. - 2006. -Vol. 63.-No. 6.- P. 497-501.

22. Кукулянская, Т. А. Физико-химические свойства меланинов, образуемых чагой в природных условиях и при культивировании [Текст] / Т. А.

Кукулянская, Н. В. Курченко, В. П. Курченко, В. Г. Бабицкая // Прикладная биохимия и микробиология. - 2002. - Т. 38 - №1- С. 68-72.

23. Королева, О. В. Сравнительная характеристика грибного меланина и гуминоподобных веществ, синтезируемых Cerrena maxima 0275 [Текст] / О. В. Королева, Н. А. Куликова, Т. Н. Алексеева и др. // Прикладная биохимия и микробиология. - Т. 42 - № 1. - 2007. - с. 69-76.

24. Мирчинк, Т. Г. Почвенная микология [Текст] / Т. Г. Мирчинк - М.: МГУ, 1988.-220 с.

25. Огарков, Б. Н. Комбинированный грибной препарат с высокой антиоксидантной активностью [Текст] / Б. Н. Огарков, Т. В. Теплякова, Г. Р. Огаркова, JI. В. Самусенок // Успехи медицинской микологии. - 2005. - т 5. -гл. 6.-С. 210-213.

26. Сысоева, М. А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилацетата. II. Парамагнитные свойства хромогенов [Текст] / М. А. Сысоева, В. Р. Хабибрахманова, В. С. Минкин, В. С. Гамаюрова, В. Е. Петрашень // Химия растительного сырья. - 2007. - № 4. - С. 105-109.

27. Ловягина, Е.В. Исследование карбонильной фракции гидролизатов водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага / Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова// Биохимия. - 1960. -Т.25. - вып. 4. - С.640-645.

28. Давидянц, С.Б. Дикетопиразинхиноидная структура //Химия и жизнь. - 1980. -№ 3 - С. 44-48.

29. Селеменев, В.Ф. Пигменты пищевых производств (меланоидины)/ В.Ф. Селеменев, О.Б. Рудаков, Г.В. Славинская, Н.В. Дроздова. - М.: ДеЛипринт, 2008.-246с.

30. Шиврина, А.Н. О полисахаридных комплексах гуминоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами/ А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - M.-JL: Наука, 1966. - С.38-41.

31. Сысоева, М. А. Углеводы растительного сырья - чаги [Текст] / М. А. Сысоева, О. Ю. Кузнецова, В. С. Гамаюрова // Межрегиональная конференция молодых ученых "Пищевые технологии". - Казань, 2002, - С. 63.

32. Кузнецова, О. Ю. Сравнительный анализ содержания углеводной компоненты водных извлечений трутового гиба Inonotus obliquus [Текст] / О. Ю. Кузнецова, М. А. Сысоева, В. С. Гамаюрова // Химия и биология углеводов : III Всероссийская школа - конференция. - Саратов, 2004. - С. 41.

33. Бабицкая, В. Г. Антиокислительное и генопротекторное действие лекарственных базидиальных грибов Inonotus obliquus и Phellinus robustus [Текст] / В. Г. Бабицкая, В. В. Щерба, Н. В. Иконнникова, Н. А. Бисько, Н. Ю. Митропольская, В. Т. Билай // Успехи медицинской микологии. - 2005. -т. V.-C. 174-175.

34. Сушинская, Н. В. Меланины трутовых грибов [электронный ресурс] [Текст] // Труды Белорусского государственного университета : научный журнал URL: http://elib.bsu.by/handle/123456789/17770 (дата обращения 23.12.2013).

35. Butler, М. J. Fungal melanins [Текст] / М. J. Butler, J. Day // Can. J. Microbiol. - 1998. - Vol. 44. - P. 1115-1136.

36. Сысоева, M. А. Электрофоретическая подвижность хромогенов водного извлечения чаги [Текст] / М. А. Сысоева, В. Р. Хабибрахманова, О. Ю. Кузнецова, В. С. Гамаюрова, А. С. Опарина // Новые достижения в химии и

химической технологии растительного сырья : III Всероссийская конференция. - Барнаул, 2007. - кн. 2. - С. 210-214.

37. Сысоева, М. А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилацетата. I. Антиоксидантная активность [Текст] / М. А. Сысоева, В. Р. Хабибрахманова, В. С. Гамаюрова, Г. К. Зиятдинова, Г. К. Будников // Химия растительного сырья. - 2007. - № 4. - С. 101-104.

38. Кузнецова, О. Ю. Антиоксидантная активность водных извлечений и полифенолов чаги [Текст] / О. Ю. Кузнецова, М. А. Сысоева, В. С. Гамаюрова, Г. К. Будников, Г. К. Зиятдинова // Химия и технология растительных веществ : тез. докл. III Всероссийской конференции. - Саратов, 2004.-С. 149-151.

39. Сысоева, М. А. Исследование золя водных извлечений чаги. IV. Антиоксидантная активность. Влияние способа извлечения и применение комплексонов, гидроксида натрия [Текст] / М. А. Сысоева, О. Ю. Кузнецова, В. С. Гамаюрова, П. П. Суханов, Г. К. Зиятдинова, Г. К. Будников // Химия растительного сырья. - 2005. - № 1. - С. 41-47.

40. Сысоева, М. А. Повышение антиоксидантной активности водных извлечений и меланинов чаги. I. Обработка водных извлечений чаги водными растворами гиперразветвленных полимеров [Текст] // Химия растительного сырья. -2010.-№ 2.- С. 105-108.

41. Zheng, W. Oxidative stress response of Inonotus obliquus induced by hydrogen peroxide [Текст] / W. Zheng et al. // Medical Mycology. - 2009. - Vol. 47. - № 8. -P. 814-823.

42. Ju, H. K. Effect of steam treatment on soluble phenolic content and antioxidant activity of the Chaga muchroom (Inonotus obliquus) [Текст] / H. K. Ju et al. // Food Chemistry. - 2010. - Vol. 119. - № 2. - P. 619-625.

43." Park, YK. Chaga muchroom extract inhibits oxidative DNA damage in human lymfhocytes as assessed by comet assay [Текст] / YK Park et al. // BioFactors. -2004.-Vol. 21. -№ 1-4.-P. 109-112.

44. Ни, H. Comparative study of antioxidant activity and antiproliferative effect of hot water and ethanol extracts from the mushroom Inonotus obliquus [Текст] / H. Hu et al. // Journal of Bioscience and Bioengineering. - 2009. - Vol. 107. - N1. - P. 42-48.

45. Иконникова, H. В. Биологическая активность меланинового пигмента гриба Inonotus obliquus [Текст] / Н. В. Иконникова, Д. А. Смирнов, А. Н. Капич, В. Г. Бабицкая, В. В. Щерба // Успехи медицинской микологии. - 2006. - т. VI. -С. 236-237.

46. Червяковский, Е. М. Генопротекторные свойства флаволигнинов и конденсированных фенольных соединений [Текст] / Е. М. Червяковский и др. // Клеточные ядра растений - экспрессия и реконструкция : Материалы 1-ой региональной научной конференции. - Минск, 2001. - С. 136-142.

47. Демин, В. В. Взаимодействие пероксидазы с биополимерами: гуминовыми кислотами, лигнином и меланином [Текст] / В. В. Демин, А. В. Жуков, Ю. А. Завгородняя // Доклады по экологическому почвоведению. - 2006. - № 1. -Вып. 1.-С. 57-71.

48. Пат. 2425686 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 D 11/02. Способ получения осажденного препарата из березового гриба чага [Текст] / Сысоева М. А., Иванова Г. А., Зобов В. В., Минеханова О. А. ; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технический университет - № 2010125735/15 ; заявл. 23.06.10 ; опубл. 10.08.11, Бюл. № 22. - 5 с.

49. Пат. 2392953 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, А 61 Р 39/06. Способ получения осажденного препарата чаги [Текст] / Гамаюрова В. С.,

Сысоева М. А., Иванова Г. А., Будников Г. К., Знятдинова Г. К. ; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технический университет - № 2009100422/15 ; заявл. 11.01.09 ; опубл. 27.06.10, Бюл. № 18.-4 с.

50. Пат. 2366439 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06. Способ получения осажденного препарата из березового гриба чага [Текст] / Сысоева М. А., Гамаюрова В. С., Иванова Г. А., Кутырев Г. А. ; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технический университет - № 2008123969/15 ; заявл. 06.06.08 ; опубл. 10.09.09, Бюл. № 25. - 5 с.

51. Бакулин, А. В. Физико-химические характеристики хитозан-меланиновых комплексов [электронный ресурс] [Текст] // Труды Белорусского государственного университета: научный журнал URL: http://elib.bsu.by/handle/123456789/16278 (дата обращения 23.12.2013).

52. Прида, А. И. Природные антиоксиданты полифенольной природы (Антирадикальные свойства и перспективы использования) [Текст] / А. И. Прида, Р. И. Иванова // Пищевые ингридиенты. Сырье и добавки. - 2004. -№2.-С. 76-78.

53. Matthiessen, A. Determining the redox capacity of humic substances substances as a function of pH [Текст] // Vom Wasser. - 1995. - Vol. 84. - P. 229-235.

54. Nurmi J. T. Electrochemical properties of natural organic matter (NOM), fractions of NOM, and model biogeochemical electron shuttles [Текст] / J. T. Nurmi, P. G. Tratnyek // Environ. Sci. Technol. - 2002. - Vol. 36. - N 4 - P. 617-624.

55. Scott, D. T. Quinone moieties act as electron acceptors in the reduction of humic substances by humics-reducing microorganisms [Текст] / D.T. Scott et al. // Environ. Sci. Technol. - 1998. - Vol. 32. - P. 2984-2989.

56. Юдина, Н. В. Оценка биологической активности гуминовых кислот торфов [Текст] / Н. В. Юдина, С. И. Писарев, А. С. Саратиков // Химия твёрдого топлива. - 1996.-№ 5.-С. 31-34.

57. Коваленко, А. Н. Использование направленной химической модификации для получения гуминовых производных с заданным электродным потенциалом [Текст] / А. Н. Коваленко, А. Н. Волкова, И. В. Перминова // Тезисы докладов XVIII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии. - 23-28 сентября 2007. - Москва, Россия. - т. 5. - с. 410.

58. Толстяк, А. С. Механохимическая гумификация торфа [Текст] / А. С. Толстяк и др. // Вестник Югорского государственного университета. - 2012. - Вып. 3. -№26.-С. 50-56.

59. Пат. 2442763 Российская Федерация, МПК С 05 Б 11/02. Способ гумификации растительного сырья [Текст] / Дудкин Д. В., Евстратова Д. А. ; заявитель и патентообладатель Югорский государственный университет - № 2010122182/13 ; заявл. 31.05.10 ; опубл. 20.02.12, Бюл. №5.-6 с.

60. Дудкин, Д. В. Взаимодействие лигноуглеводных материалов с окислителями в водном растворе аммиака при механохимическом воздействии [Текст] : автореф. дис. ... канд. хим. наук / Д. В. Дудкин. -Красноярск, 2004. - 24 с.

61. Змановская, А. С. Изменение химического состава основных компонентов торфа при кавитационном воздействии [Текст] / А. С. Змановская, Д. В. Дудкин // Химия в интересах устойчивого развития. - 2013. - № 3. - С. 357361.

62. Ефанов, М. В. Окислительный аммонолиз лигноуглеводных материалов при их взаимодействии с персульфатом аммония в среде аммиака [Текст] / М. В. Ефанов, Л. А. Першина, А. Г. Клепиков // Химия растительного сырья. -2000.-№4.-С. 73-80.

63. Пат. 2370478 Российская Федерация, МПК С 05 Б 11/02. Способ получения оксигуматов из торфа [Текст] / Ефанов М. В., Галочкин А. И., Петраков А. Д., Черненко П. П., Латкин А. А. ; заявитель и патентообладатель Югорский государственный университет - № 2007134557/12 ; заявл. 17.09.07 ; опубл. 20.10.09, Бюл. №29. -6 с.

64. Бамбалов, Н. Н. Деструкция гуминовых кислот торфа пероксидом водорода [Текст] / Н. Н. Бамбалов, Т. П. Смычник // Вестник АН БССР. Сер. Химическая. - 1986. - № 3. - С. 75-78.

65. Хейнс, А. Методы окисления органических соединений: Алканы, алкены, алкины и арены [Текст]. - Пер. с англ. - М.: Мир, 1988. - 400 с.

66. Губен, И. Методы органической химии. В 2 т. Т.2, Вып. 1. Окисление и восстановление [Текст]. / Пер. с немец. ; под ред. Г. И. Браза и Д. Н. Курсанова. - М.-Л.: Гос. науч.-тех. изд. хим. лит., 1941. - 720 с.

67. Полина, И. Н. Модификация сульфатного лигнина методом периодатного окисления [Текст] / И. Н. Полина, А. П. Карманов // Физико-химия лигнина : III Международная конференция. - Архангельск, 2009. - С. 222-224.

68. Полина, И. Н. Модификация технических лигнинов методом периодатного окисления [Текст] / И. Н. Полина, А. П. Карманов // Научно-практическая конференция, посвященная 10-летию создания учебно-научного центра «Физико-химическая биология» в Республике Коми. - Сыктывкар, 2009. - С. 68.

69. Сарканен, А. В. Лигнины [Текст] / А. В. Сарканен, К. X. Людвига ; пер. с англ. - М.: Лесная промышленность, 1975. - 632 с.

70. Закис, Г. Ф. Функциональный анализ лигнинов и их производных [Текст] / Г. Ф. Закис. - Рига: Зинатне, 1987. - 230 с.

71. Дам Тхи Тхань Хай. Ингибиторы полимеризации жидких продуктов пиролиза нефтяных углеводородов на основе полифенолов древесины и технического сульфатного лигнина [Текст] : автореф. дис. ... к-та хим. наук / Дам Тхи Тхань Хай. - Томск, 2011. - 24 с.

72. Яркова, Т. А. Химическая модификация структуры торфяных гуминовых кислоте целью повышения биологической и сорбционной активности [Текст] : автореф. дис. ... к-та хим. Наук / Т. А. Яркова. - Москва, 2007. - 22 с.

73. Азаров, В. И. Химия древесины и синтетических полимеров [Текст] / В. И. Азаров, А. В. Буров, А. В. Оболенская. - СПб.: СПбЛТА, 1999. - 628 с.

74. Муравьев И. А. Технология лекарств. Т. 1. [Текст]. - М.: Медицина, 1981391 с.

75. Пат. 2406514 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 В 11/02, А 61 Р 39/06. Способ получения водных экстрактов чаги [Текст] / М. А. Сысоева, Е. В. Сысоева, А. В. Сысоева, В. С. Гамаюрова; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технологический университет - № 2009113400/15 ; заявл. 09.04.09; опубл. 20.12.10, Бюл. № 35. - 5 с.

76. Пат. 1805968 Российская Федерация, МПК А 61 К 35/78. Способ получения средства, обладающего противоязвенной и адаптагенной активностью [Текст] / Г. Л. Рыжова, С. С. Кравцова, И. В. Богданова, А. Я. Корбут, В. И. Гребнев, М. П. Гарбусенко, В. Т. Пашинский, Н. В. Трисель; Томский гос. унт, Томск, - опубл. 30.03.93, Бюл. № 12.

77. Пат. 2450817 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 Б 11/02. Способ получения хромогенного комплекса чаги [Текст] / Кузнецова О. Ю., Сысоева М. А. ; заявитель и патентообладатель Казанский национальный исследовательский технологический университет - № 2011105353/15 ; заявл. 14.02.11 ; опубл. 20.05.12, Бюл. № 14.-5 с.

78. Пат. 2463064 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 Б 11/02, А 61 Р 39/06. Способ получения экстракта чаги [Текст] / Кузнецова О. Ю. , Сысоева М. А. ; заявитель и патентообладатель Казанский национальный исследовательский технологический университет - № 2011130148/15 ; заявл. 19.07.11 ; опубл. 10.10.12, Бюл. № 28. - 6 с.

79. Пат. 2465911 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 Б 11/02. Способ получения осажденного полифенольного комплекса чаги [Текст] / Кузнецова О. Ю., Сысоева М. А. ; заявитель и патентообладатель Казанский национальный исследовательский технологический университет - № 2011133436/15 ; заявл. 09.08.11 ; опубл. 10.11.12, Бюл. № 31. - 4 с.

80. Пат. 2509567 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 В 11/02. Способ получения экстракта из шрота чаги [Текст] / Кузнецова О. Ю. ; заявитель и патентообладатель Казанский национальный исследовательский технологический университет - № 2012157066/15 ; заявл. 25.12.12 ; опубл. 20.03.14, Бюл. № 8.-6 с.

81. Пат. 2502516 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 Б 11/02. Способ получения экстрактов гриба чаги [Текст] / Кузнецова О. Ю., Сысоева М.А. ; заявитель и патентообладатель Казанский национальный исследовательский технологический университет - № 2010124207/15 ; заявл. 11.06.10 ; опубл. 20.10.12, Бюл. № 29. - 5 с.

82. Пат. 2464032 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 Б 11/02. Способ получения экстракта из шрота чаги [Текст] / Кузнецова О. Ю. ; заявитель и патентообладатель Казанский национальный исследовательский технологический университет - № 2010124076/15 ; заявл. 25.12.12 ; опубл. 20.03.14, Бюл. №8.-6 с.

83. Пат. 2448721 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 Б 11/02. Способ получения экстракта чаги [Текст] / Кузнецова О. Ю., Сысоева М. А. ; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технический университет - № 2010124076/15 ; заявл. 11.06.10 ; опубл. 27.04.12, Бюл. № 12. -4 с.

84. Пат. 2442596 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 Б 11/02. Способ получения хромогенного комплекса чаги [Текст] / Сысоева М. А., Сысоева Е. В.; заявитель и патентообладатель Казанский национальный исследовательский технологический университет - № 2010153498/15 ; заявл. 27.12.10 ; опубл. 20.02.12, Бюл. №5.-4 с.

85. Пат. 2438685 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, В 01 В 11/02. Способ получения экстракта из березового гриба чаги [Текст] / Сысоева М. А., Харина М. В.; заявитель и патентообладатель Казанский национальный исследовательский технологический университет - № 2010125737/15 ; заявл. 23.06.10 ; опубл. 10.01.12, Бюл. № 1. - 5 с.

86. Пат. 2392952 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, А 61 Р 39/06. Способ получения осажденного полифенольного комплекса чаги [Текст] / Кузнецова О. Ю., Сысоева М. А., Гамаюрова В. С.; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технологический университет - № 2009113399/15 ; заявл. 09.04.09 ; опубл. 27.06.10, Бюл. № 18. -4 с.

87. Пат. 2336085 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06. Способ получения полифенолов из чаги [Текст] / Сысоева М. А., Хабибрахманова В. Р., Гамаюрова В. С., Юмаева Л. Р. ; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технологический университет - № 2006134108/15 ; заявл. 13.09.06 ; опубл. 27.03.08, Бюл. № 29. - 5 с.

88. Пат. 2339390 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, А 61 Р 39/06. Способ получения водных извлечений и полифенолов чаги, обладающих антиоксидантной активностью [Текст] / Сысоева М. А., Хабибрахманова В. Р., Гамаюрова В. С., Зиятдинова Г. К., Будников Г. К. ; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технологический университет - № 2007109396/15 ; заявл. 06.03.07 ; опубл. 27.11.08, Бюл. № 33. -6 .

89. Пат. 2336888 Российская Федерация, МПК А 61 К 36/06, А 61 Р 39/06, А 61 Р 35/00, А 61 Р 37/02, А 61 Р17/02, А 61 Р 9/14. Способ получения спиртового экстракта чаги [Текст] / Сысоева М. А., Хабибрахманова В. Р., Гамаюрова В. С., Юмаева Л. Р. ; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технологический университет - № 2007115936/15 ; заявл. 20.04.07 ; опубл. 27.10.08, Бюл. № 30. - 5 с.

90. Промышленный регламент РП № 64-89-89 на производство Бефунгина [Текст], утвержден 25.01.1989.

91. Якимов, П. А. Методы переработки чаги в лекарственные формы [Текст] / П. А. Якимов, С. М. Андреева, Е. В. Алексеева // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. - М.-Л.: Наука, 1961. -С. 129-138.

92. Химический анализ лекарственных растений [Текст] / под ред. Гринкевич Н. И., Сафронич Л. Н. - М.: Высш. Школа, 1983.- 176 с.

93. Орлов, Д. С. Практикум по химии гумуса [Текст] : Учеб. Пособие / Д. С. Орлов, Л. А. Гришина. - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1981. - 272 с.

94. Орлов, Д. С. Химия почв [Текст] / Д. С. Орлов. - М.: Изд-во МГУ, 1992. - 400 с.

95. Казицина, Jl. А. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии [Текст] / Л. А. Казицина, Н. Б. Куплетская - М.: Химия, 1971. - 264 с.

96. Pain, S. Characterization of fungal melanins and soil humic acids by chemical analysis and IR spectroscopy [Текст] / S. Paim, L. F. Linhares, A. S. Mangrich, J. P. Manin // Biol. Fenil. Soils. - 1990. - № 10. - P. 72-76.

97. Смит, А. Прикладная ИК-спектроскопия [Текст] : пер. с англ. - М.: Мир, 1982.-328 с.

98. Калабин, Г. А., Количественная спектроскопия ЯМР природного органического сырья и продуктов его переработки [Текст] / Г. А. Калабин, Л. В. Каницкая, Д. Ф. Кушнарев - М.: Химия, 2000. - 408 с.

99. Сергеев, Н. М. Спектроскопия ЯМР [Текст] (для химиков-органиков). - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1981. - 279 с.

100. Chang Chien, Schui-Wen Analitycal and Spectroscopic Characteristics of Refuse Compost-Derived Humic Substances [Текст] / Schui-Wen Chang Chien, Chun-Chia Huang, Min-Chao Wang // Int. J. Appl. Sci. Eng. - 2003. - V. 1. - N 1. - P. 62-71.

101. Senthilkumar, R. D. CP/MAS l3C NMR spectral studies on humic acids derived [Текст] / R. D. Senthilkumar, S. Kabilan and R. Narayanasamy [электронный ресурс] // Asian Conference on Remote Sensing (ACRS 2007). URL: http://www.a-a-r-s.org/acrs/proceedings2007.php (дата обращения: 20.09.2011).

102. Shiying, Tian. Unlocking the Molekular Structure of Fungal Melanin Using I3C Biosynthetic Labeling and Solid-State NMR [Текст] / Shiying Tian, Javier Garcia-Rivera, Bin Yan, Arturo Casadevall and Ruth E. Stare // Biochemestry. - 2003. -Vol. 42. -№47. -P. 8106-8109.

103. Черкасов, В. К. Методы ЭПР и ЯМР в органической и элементорганической химии [Текст] / Черкасов В. К., Курский Ю. А., Кожанов К. А., Бубнов М. П.,

Куропатов В. А. / электронное учебное пособие. - Ниж.Новгогрод: Нижегородский ун-т, 2010. - 53 с.

104. Enochs, W. S. A standartized test for the identification and characterization of melanin using electron paramagnetic (EPR) spectroscopy [Текст] / W. S. Enochs, M. J. Nilges, H. V. S wanz // Pigm.Cell Res. - 1993. - Vol. 6. - N 1. - P. 91 -99.

105. Saiz-Jimines, C. Electron spin resonance spectroscopy of fungal melanins [Текст] / С. Saiz-Jimines, F. Safizadeh // Soil Sei. - 1985. - Vol. 139. - N 4. - P. 319325.

106. Брауне, Ф. E. Химия лигнина [Текст] / Ф. Е. Брауне, Д. А. Брауне. : пер. с англ. -М., 1964.-864 с.

107. Рязанову М. А. Использование метода рК-спектроскопии для оценки кислотно-основных свойств фульвокислот [Текст] / М. А. Рязанов, Е. Д. Лодыгин, В. А. Безносиков // Почвоведение, 2001. - № 11. - С. 1309-1315.

108. Калинина, Л. С. Анализ конденсационных полимеров [Текст] / Л. С. Калинина и др. - М.: Химия, 1984. - 296 с.

109. Рафиков, С. Р. Введение в физикохимию растворов полимеров [Текст] / С. Р. Рафиков, В. П. Будтов, Ю. Б. Монаков. - М.: Наука, 1978. - 328 с.

110. Тагер, А. А. Физико-химия полимеров [Текст] / А. А. Тагер. - М.: Химия, 1968.-538 с.

111. Карманов, А. П. Исследование структуры макромолекул лигнина [Текст] / А. П. Карманов, В. Ю. Беляев, Л. С. Кочева // Химия растительного сырья. -2010.-№ 1.-С. 27-34.

112. Практикум по химии и физике полимеров [Текст] / Под ред. В.Ф. Куренкова. -М: Химия, 1990.-304 с.

ПЗ.Келети, Т. Основы ферментативной кинетики [Текст] / Т. Келети ; пер. с англ. - М.: Мир, 1990. - 350 с.

114. Ахназарова, С. JI. Методы оптимизации эксперимента в химической технологии [Текст] : Учеб. пособие для хим. - технол. спец. Вузов; - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Высшая школа, 1985. - 327 с.

115. Трофимова, Н. Н. Изучение кислотного гидролиза полисахаридов древесины лиственницы для получения кристаллической глюкозы [Текст] / Н. Н. Трофимова, В. А. Бабкин // Химия растительного сырья. - 2009. - №3. - С. 31-37.

116. Перминова, И. В. Анализ, классификация и прогноз свойств гумусовых кислот [Текст] : дис. ... док-ра хим. наук / И. В. Перминова : 02.00.02 : защищена 2000 / Москва, 2000. - 359 с.

117. Белый, В. А. Исследование кислотно-основных свойств эмульсионного экстракта хвои пихты методом рК-спектроскопии [Текст] / В. А. Белый, И. Ю. Чукичева, Т. В. Хуршкайнен, Р. А. Садыков, М. А. Рязанов, А. В. Кучин, Е. Б. Салтысова // Электронный научный журнал «Исследовано в России»: http://zhurnal.Ape.Relan.ru/articles/201 l/036.pdf. - С. 480-486.

118. Хвиюзов, С. С. Исследование лигнина можжевельника Juniperus [Текст] / С. С. Хвиюзов, К. Г. Боголицын, М. А. Гусакова, И. Н. Зубов // Физико-химия растительных полимеров: материалы IV Международной конференции/ под. ред. д-ра хим. наук, проф. К. Г. Боголицына. - Архангельск, 2011. - С. 135136.

119. Белый, В. А. Изучение кислотно-основных свойств лигнина с использованием метода рК-спектроскопии [Текст] / В. А. Белый, Р. А. Садыков, М. А. Рязанов // Физико-химия растительных полимеров: материалы IV Международной конференции / под. ред. д-ра хим. наук, проф. К. Г. Боголицына. - Архангельск, 2011. - С. 137-141.

120. Ragnar, M. pKa-values of Guaiacyl and Syringyl Phenols Related to Lignin [Текст] / M. Ragnar, С. T. Lindgren, N.O. Nilvebrant // Journal of Wood Chemistry and Technology. - 2000. - V. 20.-I. 3. - P. 277-305.

121. Рязанов M. А. Кислотно-основные свойства красного вина [Текст] / М. А. Рязанов // Химия растительного сырья. - 2010. - № 2. - С. 109-112.

122. Белая, Н. И. Экстрагирование антиоксидантов из листьев толокнянки (Arctostaphylos Adans) в электрическом поле [Текст] / Н. И. Белая, Т. А. Филиппенко, А. В. Белый, Н. Ю. Грибова, А. Н. Николаевский, А. А. Бирюкова // Химико-фармацевтический журнал. - 2006. - №9. - С. 42-46.

123. Голованчиков, А.Б. Основные закономерности процесса экстрагирования чаги в электрическом поле [Текст] / А. Б. Голованчиков, Н. В. Грачева // Вестник Тамбовского государственного технического университета. - 2011. -Т. 17.- №4.-С. 950-958.

124. Голованчиков, А Б. Экспериментальное исследование экстрагирование пигментного полимерного комплекса из березового гриба чаги /

A. Б. Голованчиков, Н. В. Грачева, Н. Н. Дикарева [Текст] // Изв. ВолгГТУ. Сер. Реология, процессы и аппараты химической технологии: межвуз. сб. науч. ст. - 2013. - Т. 6. - № 1 (104). - С. 115-118.

125. Никитин, В. М. Химия древесины и целлюлозы [Текст] / В. М. Никитин, А.

B. Оболенская, В.П. Щеголев. - М. - 1978. - 368с.

126. Сысоева, М. А. Структурная организация и свойства полифенолов чаги [Текст] / М. А. Сысоева, О. Ю. Кузнецова, В. С. Гамаюрова // Вестник Казанского технологического университета. — 2005. - № 1. — С. 244-250.

127. Андреева, С. М. К характеристике доброкачественности препарата из чаги [Текст] // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений.-М.-Л.: Наука, 1961. -С. 144-150.

128. Барабой, В. А. Биологическое действие растительных фенольных соединений [Текст] / В. А. Барабой. - Киев: Наукова думка, 1976. - 260 с.

129. Рогинский, В. А. Фенольные антиоксид анты: способность и реакционная эффективность [Текст] / В. А. Рогинский. - М.: Наука, 1988. - 247 с.

130. Данченко, Н. Н. Функциональный состав гумусовых кислот: определение и взаимосвязь с реакционной способностью [Текст] : дисс. ... канд. хим. наук / Н. Н. Данченко. - Москва, 1997. - 137 с.

131.Моссэ, И. Б. Разработка на основе меланина средства профилактики генетических и онтогенетических последствий облучения [Текст] / И. Б. Моссэ, Л. П. Жаворонков, В. П. Молофей, О. С. Изместьева, В. М. Посадская, В. И. Изместьев // Вестник ВОГиС. - 2005. - Т. 9. - № 4. - С. 527-533.

132. Новиков, Д. А. Влияние растительных меланинов на степень повреждения ДНК радикальными промежуточными продуктами пероксидазного окисления аминобифенилов бензидинового ряда [Текст] / Д. А. Новиков, В. П. Курченко // Биохимия: сб. научн. ст. / Бел. гос. ун-т; авт.-сост. В.В. Сенчук [и др.] - Минск, 2005. - С. 94-99.

133. Грищук, В. П. Спектрально-люминисцентные свойства пленок меланина [Текст] / В. П. Грищук, С. А. Давиденко, И. Д. Жолнер, А. Б. Вербицкий, М. В. Курик, Ю. П. Пирятинский // Письма в Журнал Технической Физики. -2002. - Т. 28.-Вып. 21.-С. 36-41.