Фенольные и сопутствующие им соединения водного извлечения гриба чаги тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Бурмасова, Марина Александровна

• Бурмасова, Марина Александровна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Бурмасова, Марина Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1 ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Терапевтические свойства водных извлечений и меланинов чаги

1.2 Коллоидная система водного извлечения чаги

1.2.1 Дисперсная фаза коллоидной системы водного извлечения чаги - меланин

1.3 Исследование химического состава водного извлечения и меланина чаги

1.3.1 Применение химического гидролиза в исследовании водного извлечения меланина чаги

1.3.2 Применение колоночной хроматографии в исследовании водного извлечения меланина чаги

1.3.3 Применение экстракции водного извлечения чаги органическими растворителями для исследования его химического состава

1.4 Биологическая активность фенольных и сопутствующих им соединений и их применение в медицине

1.4.1 Фенолы

1.4.2 Фенолоксикарбоновые кислоты

1.4.3 Флавоноиды

1.4.4 Терпены

1.5 Антибактериальная и фунгицидная активности препаратов чаги

1.6 Пробиотики и биоценоз желудочно-кишечного тракта человека

2 ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Материалы исследования

2.1.1 Материалы, необходимые для проведения последовательной обработки водного извлечения чаги органическими растворителями

2.1.2 Материалы, необходимые для проведения микробиологических исследований

2.2 Способы получения объектов исследования

2.2.1 Получение водного извлечения чаги ремацерацией

2.2.2 Получение экстрактов из водного извлечения чаги с помощью органических растворителей

2.2.3 Способ выделения меланина из водного извлечения чаги

2.2.4 Химический гидролиз экстрактов

2.2.5 Проведение колоночной хроматографии на силикагеле

2.2.6 Способы получения экстрактов из меланина с помощью органических растворителей

2.2.7 Получение сухого экстракта М

2.2.8 Подготовка образца для исследования токсичности

2.2.9 Подготовка исследуемых образцов и посевного материала для проведения и испытания образцов на пребиотическую активность

2.3 Общие методы анализа

2.3.1 Определение антиоксидантной активности объектов исследования

2.3.2 Определение суммы экстрактивных веществ в органических экстрактах

2.3.3 Определение размера частиц методом фотон-корреляционной спектроскопии

2.3.4 Количественное определение фенолов в объектах исследования

2.3.5 Количественное определение Сахаров в объектах исследования

2.3.6 Количественное определение белка в объектах исследования

2.3.7 Количественное определение липидов в объектах исследования

2.3.8 Качественная реакция с основным ацетатом свинца

2.3.9 Электронная спектроскопия

2.3.10 Хроматографический анализ - одномерная восходящая бумажная хроматография

2.3.11 Хроматографический анализ - тонкослойная хроматография

2.3.12 Высокоэффективная жидкостная хроматография

2.3.13 Хромато-масс-спектрометрия

2.3.14 ПМР-спектроскопия

2.3.15 Определение острой токсичности

2.3.16 Анализ лекарственного препарата «Бефунгин»

2.3.17 Определение антибактериальной и фунгицидной активностей

2.3.18 Определение количества микроорганизмов (бифидобактерий, лакто-бактерий, кишечных палочек)

2.3.19 Обработка полученных результатов

3 ГЛАВА 3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

3.1 Исследование фенольных и сопутствующих им соединений водного извлечения чаги

3.2 Применение последовательной исчерпывающей экстракции органическими растворителями с возрастающей полярностью для исследования фенольных соединений водных извлечений чаги

3.2.1 Исследование экстракта, полученного с применением диэтилового эфира

3.2.2 Исследование экстракта, полученного с применением хлороформа

3.2.3 Исследование экстракта, полученного с применением этилацетата

3.2.4 Исследование экстракта, полученного с применением бутанола

3.3 Выбор экстракта из меланина чаги, обладающего максимальной анти-оксидантной активностью

3.3.1 Определение химического состава бутанольного экстракта из меланина чаги

3.4 Определение биологических свойств сухого экстракта М

3.4.1 Исследование антибактериальной и фунгицидной активностей

3.4.2 Изучение пребиотических свойств сухого экстракта М и «Бефунги-на»

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фенольные и сопутствующие им соединения водного извлечения гриба чаги»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. В настоящее время в комплексной терапии для лечения хронических гастритов и язвенной болезни желудка успешно применяются галеновые препараты на основе водных извлечений (ВИ) гриба чаги, а именно: «Бефунгин», «Чагалюкс», «Чагавит» и другие. Согласно литературным данным, наряду с меланином чаги основными компонентами, обуславливающими активность этих препаратов, являются фенольные соединения, которые содержатся в ВИ чаги в свободном и связанном с меланином состоянии. Количество «свободных» фенольных соединений незначительно, в основном они входят в состав меланина. К настоящему времени фенольные соединения чаги не достаточно изучены, так как выделить их из меланина чрезвычайно сложно. Ранее с этой целью проводили химический гидролиз ВИ чаги и меланина, приводящий к разрушению части фенольных соединений. ВИ чаги экстрагировали этилацетатом для извлечения липофильной компоненты. Фенольные соединения как сопутствующие выделяли по многоступенчатой схеме с применением щелочных и кислотных агентов, диэтилового эфира, этилацетата и бутанола (В.Р. Хабибрахманова, 2008). При этом проанализированы только те фенольные соединения, которые отделены этилацетатом из ВИ чаги. Этот способ оказался более результативным и позволил определить ряд других фенольных соединений, не обнаруженных ранее. Это свидетельствует о том, что для определения фенольных веществ из ВИ чаги перспективно использовать органические растворители. Для создания более эффективных или усовершенствования уже существующих препаратов на основе ВИ чаги необходимо расширить представления о составе и содержании в нем фенольных соединений.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы» по госконтракту №_01201252915 от 28.02.2012 г. тема: "Разработка биологически активных добавок на основе супрамолекулярных бионаносистем", также автор принимал актив-

ное участие в организации Всероссийской молодёжной научной школы «Биоматериалы и нанобиоматериалы: Актуальные проблемы и вопросы безопасности» по государственному контракту № 12.741.11.0101 федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы.

Цель работы. Определить состав и содержание фепольных и сопутствующих им соединений, содержащихся в ВИ чаги в свободном и ассоциированном состоянии и обеспечивающих его биологическую активность.

Для достижения цели ставились следующие задачи:

• определить количество фепольных соединений, находящихся в ВИ чаги в свободном и ассоциированном состоянии;

• определить состав фепольных и сопутствующих им соединений, находящихся в ВИ чаги в свободном и ассоциированном состоянии;

• выделить фракцию меланина - сухой экстракт М, - обладающую высокой ан-тиоксидантной активностью (АОА), исследовать её компонентный состав, а также определить её токсичность, антибактериальные и фунгицидные свойства;

•исследовать влияние сухого экстракта М и лекарственного препарата «Бе-фунгин» на культуры микроорганизмов родов: Bifidobacterium, Lactobacillus, Escherichia - основных представителей микрофлоры толстого кишечника человека.

Научная новизна. Разработанный и применённый метод последовательной исчерпывающей экстракции ВИ чаги органическими растворителями с возрастающей полярностью позволил: увеличить выход фенольных соединений, извлекаемых из ВИ чаги; впервые выделить и идентифицировать индивидуальные вещества, находящиеся в ассоциированном с меланином состоянии - м-оксифенилпропионовую кислоту, салициловую кислоту, 2,4-диметоксифенол, гликозид 7-гидрокси-6-метоксикумарипа, метилдифенилацетат, 1,1-дифенил-2-пропанон, 2-аллил-3-этокси-4-метоксифенол, изорампетин, лютеолин, а также лейкоантоцианы и метилированные уроновые кислоты, способные обеспечивать биологическую активность ВИ чаги; получить экстракты с наноразмерными частицами меланина.

Впервые на основе меланина чаги получен сухой экстракт М, обладающий высокими антиоксидантными свойствами. С помощью электронной спектроскопии, ВЭЖХ, ЯМР, хромато-масс-спектрометрии определён его состав, а также показана фунгицидная и фунгистатическая активность сухого экстракта M в отношении грибов Candida albicans, Pénicillium notatum, Aspergillus fiimigatus, Trichoderma viride.

Впервые установлены пребиотические свойства лекарственного препарата «Бефунгин» и сухого экстракта М.

Практическая значимость. Разработан способ получения экстракта из меланина чаги, который позволил получить сухой экстракт М, обладающий высокой АОА, фунгистатической активностью и пребиотическими свойствами.

Модифицирована методика определения воздействия лекарственных препаратов и экстрактов на жизнедеятельность микрофлоры толстого кишечника, которая может применяться в научно-исследовательской деятельности на кафедре пищевой биотехнологии КНИТУ и в других научно-исследовательских центрах РФ.

Внедрение результатов исследования. Разработанные методы хроматогра-фического и хромато-масс-спектрометрического анализа экстрактов, полученных из природных объектов, а также методика по определению их пребиотических свойств внедрены в учебный процесс на кафедре пищевой биотехнологии КНИТУ в учебных дисциплинах: «Биоорганическая химия», «Технология продуктов функционального питания», «Технология белков и биологически активных веществ».

На защиту выносятся: положения, сформулированные в разделе Научная новизна и в выводах.

Апробация работы. Результаты работы докладывались и обсуждались на: Межрегиональных и международных конференциях молодых учёных «Пищевые технологии» (г. Казань) 2001, 2004, 2009, 2010 г.г.; III Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (г. Саратов 2004 г.); Всероссийской молодёжной научной школе «Биоматериалы и нанобиоматериалы: Актуальные проблемы и вопросы безопасности» (г. Казань, 18-22 июня 2012 г.).

Публикации. Основные результаты работы изложены в 3 статьях в журналах, рекомендованных для размещения материалов диссертаций, 7 тезисах докладов на конференциях.

Личный вклад автора. Автор принимал участие в постановке цели и задач исследования, проведении экспериментов, обработке и интерпретации полученных результатов, формулировке научных выводов, написании и оформлении статей.

Хромато-масс-спектрометрический анализ проведён: на оборудовании ЦКП ФГБУН Институт органической и физической химии им. А.Е. Арбузова Казанского НЦ РАН совместно с к.х.н. Ризвановым И.Х.; в ГУЧ «Башкирский республиканский научно-исследовательский экологический центр» в г.Уфа совместно с к.х.н. Коржовой Л.Ф. Антибактериальная и фунгицидная активность определена в ФБУН КНИИЭМ к.б.н. Лисовской С.А., к.б.н. Глушко Н.И. Определение токсичности осуществлено в ФГБУН Институт органической и физической химии им. А.Е. Арбузова Казанского НЦ РАН в сотрудничестве с н.с. Ланцовой A.B., д.б.н., проф. Зобовым В.В. Определение АОА образцов проведено в ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» в сотрудничестве с к.х.н. Зи-ятдиновой Г.К., д.х.н., проф. Будниковым Г.К. Фотон-корреляционная спектроскопия проведена на оборудовании ЦКП ФГБУН Институт органической и физической химии им. А.Е. Арбузова Казанского НЦ РАН совместно с д.х.н. Захаровой Л.Я.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, трёх глав, выводов, библиографического списка, приложения. Работа изложена на 138 страницах машинописного текста, содержит 42 рисунка, 11 таблиц и 176 литературных источников.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Терапевтические свойства водных извлечений и меланинов чаги

Чага, растущая на берёзах, служит лекарственным сырьём [1].

В качестве лекарственных средств из ¡попоШб оЬ^иш в России зарегистрированы сам гриб чага (включая плодовые тела), сухой экстракт чаги и препараты из него: «Бефунгин» - водный экстракт, и «Гастрофунгин» - спиртовая настойка на 70%-ном этиловом спирте [2]. Фармацевтическая промышленность выпускает биологически активные добавки (БАД) фитокомплекс «Чаговит», капсулы «Экстракт чаги с витамином С», сироп «Чага-янтарь», криопорошок и другие, которые рекомендуются в качестве общеукрепляющих средств [3-5].

Лекарственные препараты берёзового гриба действуют как активные биогенные стимуляторы, они увеличивают защитные свойства организма, стимулируют центральную нервную и нейрогуморальную системы, улучшают обмен веществ; проявляют противоопухолевое, адаптогенное и противоязвенное действия; обладают радиопротекторными, антиоксидантными и противовирусными свойствами [6-10]. Препараты чаги нетоксичны. При изучении острой токсичности сухого экстракта чаги было показано, что однократное введение препарата в дозах 1000-6000мг/кг при наблюдении в течение 15 суток не вызывает гибели мышей, потери массы тела, изменений состояния кожного покрова и двигательной активности, возникновения диареи. По данным учёных пятидесятых годов, ЫЭ50 препарата чаги (водного извлечения чаги) для белых мышей составляет при перораль-ном введении 0,5 г и при энтеральном введении 6,5г на 1 кг веса [11-12]. Хроническая токсичность исследована на осаждённом препарате чаги [13].

Водные извлечения из чаги применяют для лечения заболеваний, таких как хронический гастрит, полипозы и язва желудка. Действие водных экстрактов чаги на ферментную систему больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки проявляется в нормализации ранее сниженной активности каталазы и

протеазы, что приводит к исчезновению болей, прекращению диспептических расстройств, восстановлению трудоспособности [14-16].

Учёные доказали, что водный экстракт чаги оказывает также выраженное нейротропное (ноотропное) влияние: увеличивает объём кратковременной памяти, ускоряет процессы обучения и пропускную способность зрительного анализатора, уменьшает длительность латентного периода и моторного времени сложной сенсоромоторной реакции здоровых испытуемых. Кроме того, в исследованиях на больных людях с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки установлено, что водный экстракт чаги (в виде препарата «Бефунгип») обладает достаточно стойким стимулирующим действием на умственную работоспособность и может быть рекомендован для более широкого использования, в том числе, в качестве средства для коррекции побочных (седативных) эффектов блокаторов Н2-гистаминовых рецепторов. Это действие чаги может быть обусловлено её влиянием на активность структур гиппокампа [17,18].

По данным [19], действующие вещества чаги ускоряют восстановление нормальных функциональных свойств нерва, утраченных под влиянием хлористого калия и, следовательно, обеззоленпые препараты чаги потенциально могут использоваться в качестве стимулятора, способного возвращать нервную ткань в состояние жизнедеятельности [20].

Препараты чаги предложены для применения больными с раковыми опухолями различной локализации без явлений выраженного истощения, но только в том случае, когда больному не показаны хирургическое вмешательство или лучевая терапия. Опыт применения чаги для лечения больных раком IV стадии свидетельствует о том, что выраженность и стойкость положительного действия зависят от исходного состояния больных и длительности лечения. Выделяли две фазы действия препаратов: 1-4 недели - отчётливое улучшение состояния; 1,5-2года -замедление роста опухоли, уменьшение склонности к метастазированию. При продолжительном приёме чаги менее выражены раковая интоксикация и болевой синдром; длительное применение чаги способствует продлению жизни в большей степени, чем кратковременное. Аналогичные результаты получены при лечении

больных раком легкого, пищевода, молочной железы IV стадии. Имеется положительный опыт применения препаратов из чаги при раке разной локализации [21].

При лечении препаратами чаги больных раком IV стадии, у которых наблюдалось искажение кожных реакций, имелась тенденция к восстановлению нормальных нервных регуляций кожного покрова. Длительное лечение чагой повышало тонус центральной нервной системы, при этом наблюдались сдвиги в сторону нормализации функций периферических вегетативных рецепторных систем. Кроме того, учёными отмечалось ингибиторное действие водных вытяжек на саркому МОП, саркому Крокера, саркому 180, карциному Эрлиха и карциному 755 [22-27]. Исследования водных вытяжек из гриба Inonotus obliquus на грануло-цитарную систему крови человека выявили, что под влиянием 1% вытяжки разрушаются все ядра гранулоцитарных клеток крови, взятой у больных раком. Такое действие вытяжки было сходно с действием фермента, разрушающего рибонуклеиновую кислоту [28]. Защитное действие водных извлечений из гриба чаги обусловлено в значительной мере наличием в них биологически-активных веществ, способных связывать большое количество катионов.

В пятидесятых годах прошлого столетия, Булатов П.К. и Якимов П.А. предположили, что лекарственной основой препаратов являются водорастворимые, интенсивно окрашенные хромогены (или меланины), обладающие биологической активностью. Они образуются из комплекса химически активных фенольпых альдегидов, полифенолов, феиолоксикарбоновых кислот и их хинонов [29].

Доказательством этого послужило изучение физиологического действия на организм выделенного из водного извлечения чаги меланина. Он оказывает стимулирующее влияние на деятельность сердечной мышцы, повышает тонус вегетативной иннервации сердца и увеличивает чувствительность сердца к нервным импульсам, поступающим по экстракардиальным нервам [30, 31]. При этом регу-ляторпые механизмы центральной нервной системы вводят компенсаторные реакции, повышающие деятельность желудочно-кишечного тракта. Улучшение деятельности кишечника при приёме внутрь чаги может быть связано с активированием фосфатаз в организме больного [32]. С учётом нормализующего влияния

препаратов чаги на функции системы пищеварения их целесообразно применять при экземе, экзематозной эритродермии, атопическом дерматите, поскольку у этих больных часто обнаруживаются сопутствующие заболевания поджелудочной железы, печени и желудка [21].

Кроме этого, меланин чаги обладает высокой восстановительной способностью (на окисление 1 г меланина расходуется примерно 350 мг кислорода), что оказывает терапевтический эффект при расстройствах окислительно-восстановительных систем больного организма [29]. При дестабилизации функционирования окислительно-восстановительных систем продукты обмена накапливаются в виде свободных радикалов, следовательно, возникает свободно-радикальное окисление. С химической точки зрения, свободно-радикальное окисление представляет собой цепной самоиндуцирующийся процесс непосредственного переноса кислорода на субстрат с образованием перекисей, альдегидов, ке-тонов. Чаще всего инициируют свободно-радикальное окисление так называемые активные формы кислорода, такие, как перекись водорода, супероксидный анион, гидроксильпый радикал и так далее. Такие ионы стремятся отнять электрон у прочих молекул, например, фосфолипидов, вследствие чего молекула сама становится свободным радикалом - развивается разрушительная цепная реакция, губительно действующая на живую клетку. Для живых клеток наибольшую опасность представляет окисление полиненасыщеиных жирных кислот - перекисное окисление липидов. В реакциях перекисного окисления липидов образуется большое количество липидных гидроперекисей, которые обладают высокой реакционной способностью и оказывают мощное повреждающее действие на клетку [33].

Исследования, проводимые учёными [34, 35] показали, что водные извлечения чаги и меланины чаги обладают высокими значениями антиоксидантной активности. Антиоксидантная активность водных извлечений чаги, полученных ремацерацией из шести видов сырья колеблется от 13,88 до 32,82 кКл/ЮОг меланина, а растворов меланина - от 19,72 до 38,66 кКл/ЮОг меланина (в зависимости от сырья). Значения антиоксидантной активности растворов меланина выше, чем значения антиоксидантной активности водных извлечений чаги. Это объясняется

иной стабилизацией меланина и его пространственной структурой в воде по сравнению с водным извлечением из чаги, более насыщенным соединениями, участвующими в стабилизации. Исследования показали, что антиоксидантная активность растворов меланина также увеличивается при введении в среду комплексо-нов, например: трилоиа Б, ОДЭФ [36]. Японскими учёными была изучена антиоксидантная активность спиртовых экстрактов чаги, с целью идентифицировать компоненты гриба, проявляющие эту активность. Было доказано, что антиокси-дантной активностью обладают фенолы, такие как: 4-гидрокси-3,5-диметокси-2-гидрокси-1-гидроксиметилэтиловый эфир бензойной кислоты, протокатеховая кислота, кофейная кислота, 3,4-дигидроксибензальдегид, 3,4-дигидроксибензалацетон, 2,5-дигидрокситерефталевая кислота [37, 38].

Позднее, учёные КаЫоБ К. и другие подтвердили это предположение, доказав, что терапевтические свойства в чаге проявляют фенольные соединения, входящие в меланин гриба [39].

Таким образом, вещества, входящие в состав препаратов чаги, обуславливают их терапевтические свойства. Поэтому исследование структуры водных извлечений и меланинов чаги является актуальной задачей.

1.2 Коллоидная система водного извлечения чаги

Водное извлечение чаги представляет собой коллоидную гидрофильную полидисперсную систему сложного состава. Дисперсная фаза этой системы представлена меланином, а дисперсионная среда содержит соли органических и минеральных кислот, полисахариды и фенолы. Полидисперсность, которая характеризует коллоидную систему водных извлечений из чаги, предполагает фракционное разделение системы путем добавления постепенно нарастающего количества соответствующих электролитов. При этом выделяются и выпадают в осадок, прежде всего, кинетически наименее устойчивые фракции, которые обладают наибольшей величиной частиц и вследствие этого коагулируют наиболее быстро [40].

Известно также, что агрегативная устойчивость лиофильных коллоидных систем не остается постоянной. Уже при стоянии водных коллоидных растворов самопроизвольно возникают явления агрегации, которые ведут к последовательной седиментации потерявших кинетическую устойчивость укрупнённых коллоидных частиц. Процесс седиментации коллоидных частиц можно ускорить добавлением электролитов из числа нейтральных солей или минеральных кислот, резко изменяющих рН среды. Эффективно осаждают меланин такие электролиты (при использовании их в низкой концентрации) как, хлористый кальций в концентрации 16%, алюминиевые квасцы в концентрации 8% и уксуснокислые соли свинца, меди и цинка в концентрации 2%. Минеральные кислоты (хлористоводородная, серная и фосфорная) осаждают меланин при значениях рН среды =2,2 и ниже. Щавелевая кислота даже при значениях рН среды =1,9 осаждает только две трети меланина; уксусная кислота не осаждает его совсем [40]. На практике меланин осаждают хлористоводородной кислотой. Проведено сравнительное изучение аг-регативной устойчивости водного извлечения чаги в отношении хлористоводородной кислоты и спиртового раствора щёлочи. Установлено, что осаждение дисперсной фазы водного извлечения чаги также можно проводить и спиртовым раствором щёлочи. При этом, выделенные меланины будут отличаться по: компонентам, входящим в их состав, инфракрасным спектрам и антиоксидантной активности [41].

Определён размер частиц дисперсной фазы водных извлечений чаги с помощью фотон-корреляционной спектроскопии. Показано, что в коллоидной системе водного извлечения чаги формируются частицы с размером 11= 148-160 им и могут присутствовать более мелкие частицы. Описываемые коллоидные системы характеризуются процессами ассоциации и диссоциации частиц дисперсной фазы, что соответственно отражается на изменении размера и количества частиц. Определено, что размер частиц и их количество изменяется в зависимости от исходного сырья и концентрации меланина в коллоидной системе, что приводит к различной организации изучаемых коллоидных систем [42,43]. Различные химические воздействия на коллоидную систему (например, экстракция её органическим рас-

творителем, ферментативный гидролиз) также приводят к формированию коллоидной системы отличной от исходной (природной). Так, экстракция коллоидной системы органическими растворителями: петролейным эфиром, хлороформом, этилацетатом позволяет получить водные коллоидные системы, имеющие меньший размер частиц по сравнению с размером частиц водного извлечения чаги (петролейный эфир, этилацетат 11эфф=58-96 нм; хлороформ КЭфф==76-120 нм). Применение в качестве экстрагента хлороформ-этанольной смеси способствует образованию частиц с большим размером в образующейся коллоидной системе (Кзфф=180-253 нм). Сделано предположение, что размер частиц в коллоидных системах зависит не только от количества и природы удаляемых органическими растворителями из водного извлечения чаги компонентов, но и от дисперсионной среды, в которой происходит их формирование [44]. В случае проведения ферментативного гидролиза наблюдается несколько другая картина. Проведён проте-олиз водного извлечения чаги ферментами желудочно-кишечного тракта. При этом исследователями созданы условия (рП и температура), соответствующие протеканию этого процесса в организме человека. Установлено, что после гидролиза водного извлечения чаги ферментами желудочно-кишечного тракта размер частиц меланина становится в три раза меньше, по сравнению с размером частиц водного извлечения чаги (Г1Эфф=50-54 нм). Показано, что устойчивость частиц дисперсной фазы с радиусом около 50 нм увеличивается при низких концентрациях меланина в гидролизате, так как там преобладают процессы дезинтеграции. Возможно, что меньший размер частиц будет увеличивать биодоступность меланина [45].

1.2.1 Дисперсная фаза коллоидной системы водного извлечения чаги - меланин

Как показывают литературные данные, гриб чага вызывает сердцевинную гниль, относящуюся к типу коррозионной или так называемой белой гнили, то есть гриб в большей мере разрушает лигнин, чем клетчатку. Разрушающее дейст-

вие гриба проявляется сначала в нарушении связи между лигнином и клетчаткой и в расщеплении молекулы лигнина на более простые соединения. Процесс разрушения лигнина сопровождается образованием карбоксильных групп из меток-сильных. Меланин занимает положение между лигнином и гуминовыми кислотами по содержанию метоксильных функциональных групп (в % от сухого вещества): (ОСН3) - 5,8 (лигнин берёзы - 15,7, гуминовые кислоты торфа - 1,2). Карбоксильные группы преобладают в меланине по сравнению с лигнином и гуминовыми кислотами (СООН в млэкв/г: меланин - 6,50, лигнин берёзы - 0,00, гуминовые кислоты торфа - 3,58) [46, 47].

Были проведены исследования физико-химических свойств меланина, выделенного из природного объекта - гриба чаги. Показано, что свежеосаждённый меланин растворяется в воде и слабо щелочных растворах, 50% растворе этилового спирта и в 80%) растворе ацетона. Высушенный на воздухе и при повышенной температуре меланин теряет свою растворимость почти целиком и не растворяется в диэтиловом эфире, петролейном эфире, хлороформе, ксилоле и бензоле; высушенный в вакууме сохраняет растворимость только в растворах соды и щелочей [48]. Определены элементный состав функциональных групп, спектральные и парамагнитные свойства, особенности термодеструкции меланина. Молекулярная масса меланина чаги составляет 57 кДа. Из литературы [29] известно, что отличительной особенностью водных извлечений чаги является высокая зольность и малое содержание азота: С-42,0, N-0,7, Н-5,0. Соотношение углерода и водорода позволило исследователям предположить в составе меланина высокое содержание ароматических структур. Для меланина характерно поглощение света в ультрафиолетовом и видимом диапазоне длин волн. Спектр поглощения щелочного раствора имел вид пологой кривой (происходило постепенное уменьшение оптической плотности по мере возрастания длин волн от 220 до 470 нм) и был типичен для грибного меланина. При этом коэффициент экстинции составил 0,04. Высокая интенсивность поглощения света объяснена наличием кислородсодержащих групп в частице. Причем образование связи С=0 за счёт окисления ОН-групп в меланине способствовало её увеличению. Такая корреляция подтверждена при

количественном определении С=0 и СООН-групп. Содержание С=0 групп в меланине чаги составило 3,0%, а СООН-групп - 0,9%.

Для характеристики меланинов очень часто используется инфракрасная спектроскопия. ИК - спектры поглощения позволяют выявить характерные функциональные группы и связи. В ИК-спектрах меланина присутствуют полосы: в области 1650-1590 см"1 и в области 3430-3370 см Полосы в области 1650-1590 см"1 подтверждают наличие большого количества сопряженных систем, а полосы в области 3430-3370 см "' обуславливают валентные колебания ОН-групп.

Присутствующие системы сопряженных связей в меланине чаги подтверждают наличие в его структуре неспаренных электронов. Поэтому для меланина чаги характерны парамагнитные свойства. Меланин чаги характеризуется сигналом ЭПР с g-фaктopoм 2,0044 (равным §-фактору свободного электрона), шири-

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Бурмасова, Марина Александровна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР,-11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. -400с.

2 Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. - М.: ООО «Издательство Новая Волна», 2005. - 1200 с.

3 Пат. 2259841 Российская Федерация, МПК7 С1 А 61 К 35/78, А 61 Р 35/00. Экстракт чаги сухой «Фито-продукт» / Цой Г.А., Кобиашвили Г.А., Метленкин A.A.; заявитель и патентообладатель ЗАО НПП «Фито-продукт». - №2004107950/15; заявл. 19.03.2004; опубл. 10.09.2005.

4 Пат. 2238751 Российская Федерация, МПК7С1 А 61 К 35/78, А 61 К 33/00. Реабилитационное средство на основе растительного сырья / Сергеев A.B., Шашкина М.Я.; заявитель и патентообладатель ООО «Лаборатория натуральных и лечебно-профилактических средств». - №2003102863/15; заявл. 03.02.2003; опубл. 27.10.2004.

5 ТУ 9365-019-01899876-07

6 Якимов, П.А. Препарат «Бин-чага» / П.А. Якимов, П.К. Булатов, М.П. Березина // Вестник АН СССР. - 1957. - №4. - С.88-91.

7 Пашинский, В.Г. Противоязвенная, адаптогенная и противоопухолевая активность сухого экстракта из чаги INONOTUS OBLIQUUS (PERS.) PIL. / В.Г. Пашинский, Н.В. Грибель, Т.Н. Поветьева, Г.Л. Рыжова, С.С. Кравцова, К.А.Дычко // Растительные ресурсы. - 1999. - вып.1. - С.68-71.

8 Гаврилов, A.C. Адаптогенное действие препарата чаги / A.C. Гаврилов, A.A. Щеголёв, Е.В. Гуселышкова, Л.П. Ларионов, Н.Д. Бреднева // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - Том 37, №2. - С.43-46.

9 Пат. 2375073 Российская Федерация, МПК7 С1 А 61 К 38/06, А 61 Р 31/18. Ингибитор репродукции вируса иммунодефицита человека первого типа / Теплякова Т.В., Гашникова Н.М., Пучкова Л.И., Проняева Т.Р., Косогова Т.А.; заявитель и патентообладатель ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора. -№2008124179/15; заявл. 11.06.08; опубл. 10.12.09.

10 Айнабекова, Б.А. Об использовании препарата чаги как антиоксиданта / Б.А. Айнабекова // Клиническая геронтология. - 2001. - Том7, №3-4. - С.59-60.

11 Рыжова, Г.Л. Химические и фармакологические свойства сухого экстракта чаги / Г.Л. Рыжова, С.С. Кравцова, С.А. Матасова, Н.В. Грибель, В.Г. Пашинский, К.А. Дычко // Химико-фармацевтический журнал. - 1997. - №10. - С.44-47.

12 Лазовская, A.B. О токсичности чаги / A.B. Лазовская // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. - С.96-102.

13 Петряевская, Н.В. О фармакологических свойствах осаждённого препарата чаги / Н.В. Петряевская, Е.А. Спалва // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - М.: Наука, 1966. - С.69-71.

14 Маттисон, II.Л. Влияние чаги на активность некоторых ферментов крови у больных раком IV стадии / Н.Л. Маттисон, П.А. Якимов // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. - С.119-121.

15 Мартынова, Е.Я. Клинические наблюдения за больными хроническим гастритом и полипами желудка, лечебными препаратами чаги / Е.Я. Мартынова // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. - М.: Наука, 1961. - С.225-235.

16 Ефименко, О.М. Влияние лечения чагой на активность каталазы и протеазы больных язвенной болезнью / О.М. Ефименко // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. - М.: Наука, 1961. - С. 157-160.

17 Переверзева, Е.В. Клинико-физиологические особенности нейротропного действия водного экстракта трутового гриба чаги / Е.В. Переверзева, C.B. Шиманец, A.A. Антипенко, Ю.С. Гаркун, Г.Э. Рожнова, А. Авад, С.Г. Пашкевич, Т.С. Кан-дыбо, В.А. Переверзев, В.А. Кульчицкий // Вестник Смоленской медицинской академии. Медико-биологический журнал. - 2005. - №3. - С. 17-21.

18 Переверзева, Е.В. Анализ влияния бефунгина на умственную работоспособность больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки и желудка, леченных блокатором Н2-гистаминовых рецепторов гистаком / Е.В. Переверзева // Труды молодых ученых. Под общей ред. Проф. С.Л. Кабака. - Мн.: МГМИ, 2001. - С.116-122.

19 Березина, М.П. К анализу действия чаги на организм / М.П. Березина, М.В. Еременко, Е.А. Гусева, С.М. Андреева, П.А. Якимов // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. - М.: Наука, 1961. - С.

20 Шашкина, М.Я. Химические и медико-биологические свойства чаги (обзор) / М.Я. Шашкина, П.Н. Шашкин, A.B. Сергеев // Химико-фармацевтический журнал. - 2006. - Т.40. - № 10. - С.37-44.

21 Турищев, С.А. Чага в медицине / С.А. Турищев // Врач: ежемесячный научно-практический и публицистический журнал. -2004. -№11.- С.63-64.

22 Березина, М.П. Влияние чаги на развитие привитой саркомы МОП у крыс / М.П. Березина, П.К. Булатов, Ф.Я. Вандышева // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. - С. 103-112.

23 Козлов, В.В. О действии больших доз чаги на организм животного и развитие перевиваемой карциномы Эрлиха / В.В. Козлов // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. - С.127-131.

24 Кроткина, H.A. Влияние чаги на перевиваемые опухоли у крыс / H.A. Кроткина // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. — С. 114118.

25 Kier, L.B. Triterpenes of Poria obligue / L.B. Kier // Pharmac. Sei 1961. - Vol.50, №6. - P.471-474.

26 Гурский, Т. О влиянии препарата БИН чага на перевиваемую саркому М-1 и на перевиваемую мышиную аденокарциному Эрлиха / Т. О. Гурский // Тез.докл. -Л.: Медгиз, 1956.-С.21-22.

27 Piaskowski, S. Prelliminary studies on the preparation and application of preparations from black birch touchwood in human cases of malignant tumors/ S. Piaskowski // Sylwan 105: 5 -1 1, 1957.

28 Krauss-Zaki, J. Agueous extracts of Inonotus obliguus in the diagnosis of leukemias /J. Krauss-Zaki //Postery hig. Med. Dosw. 1961. - 16. - P.855-859.

29 Булатов, П.К. Биохимические свойства хромогенного комплекса чаги / П.К. Булатов // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. _ С.44-49.

30 Березина, M.П., К вопросу об экспериментальном изучении действия чаги на животных / М.П. Березина, П.К. Булатов // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. -М. - Л.: АН СССР, 1961. - С. 161-165.

31 Еременко, М.В. Внутривенное введение чаги / М.В. Еременко, С.М. Андреева, П.А. Якимов // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - М.: Наука, 1966.-С.71-77.

32 Березина, М.П. О механизме физиологического действия осажденного пигментного комплекса чаги на организм / М.П. Березина, М.В. Еременко, Е.Я. Мартынова, В.К. Васильева, Н.Л. Маттисон, А.Н. Шиврина // С.190-192.

33 Свойства антиоксидантов флавоноидов красного винограда // http: // www, i m m о rte 1. ru

34 Кузнецова, О.Ю., Антиоксидантная активность водных извлечений и полифенолов чаги / О.Ю. Кузнецова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова, Г.К. Будников, Г.К. Зиятдинова // В матер. III Всероссийской концеренции «Химия и технология растительных веществ». - Саратов: 2004. - С. 149-151.

35 Кузнецова, О.Ю. Физико-химические характеристики и биологическая активность водных извлечений и полифенолоксикарбонового комплекса чаги: автореф. дис. .. .канд. хим. наук: 15.00.02 / Кузнецова Ольга Юрьевна. - Казань, 2004. - 20 с.

36 Сысоева, М.А., Исследование золя водных извлечений чаги. IV. Антиоксидантная активность. Влияние способа извлечения и применение комплексонов, гидроокиси натрия / М.А. Сысоева, О.Ю. Кузнецова, B.C. Гамаюрова, П.П. Суханов, Г.К. Зиятдинова, Г.К. Будников // Химия растительного сырья. - 2005. - №1. - С.41-47.

37 Yuki, Nakajima Antioxidant Small Phenolic Ing-redients in Inonotus obliquus (per-soon) Pilat (Chaga) / Yuzo Sato, Tet Suya Konishi // Chem. Pharm. - 2007. -Bull.55(8).- 1222-1226.

38 Lee, In-Kyoung New antioxidant polyphenols from the medicinal mushroom Inonotus obliquus / In-Kyoung Lee, Young-Sook Kim, Yoon-Woo Jang, Jin- Young Jung and Bong-Sik Yun // Bioorganic and Medicinal Chemistry. - 2007. -ЕЛ7. - 6678-6681.

39 Kahlos 1С, Hitunen R.: Acta Pharm. Fenn. 92, 220 (1983).

40 Якимов, П.А. О причинах изменения устойчивости пигментного комплекса в водных экстрактах из чаги / П.А. Якимов, С.М. Андреева, Е.В. Алексеева // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений - М. - JI.: Наука, 1961.-С. 113-120.

41 Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. XII. Осаждение дисперсной фазы водного извлечения чаги при изменении рН среды / М.А. Сысоева // Химия растительного сырья. -2009. -№1. - С.131-135.

42 Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. IX. Определение размеров частиц дисперсной фазы золя водных извлечений из чаги / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, JI.A. Кудрявцева // Химия растительного сырья. - 2008. - №2. - С.75-80.

43 Сысоева, М.А. Высокоактивные антиоксиданты на основе гриба Inonotus ob-liguus: автореф. дис. ... д-ра хим. наук: 15.00.02 / Сысоева Мария Александровна. - Казань, 2009. - 20 с.

44 Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. VIII. Размеры частиц дисперсных фаз, образующихся при экстракции водных извлечений чаги органическими растворителями / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, JI.A. Кудрявцева//Химия растительного сырья. -2008. -№4. - С. 129-132.

45 Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. X. Протеолиз водного извлечения чаги ферментами желудочно-кишечного тракта / М.А. Сысоева, Е.В. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, JI.A. Кудрявцева // Химия растительного сырья. - 2008. - №2. - С.81-86.

46 Шиврина, А.Н. К вопросу о природе и происхождении водорастворимого комплекса, образуемого трутовым грибом чага / А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина, Е.Г. Платонова // РЖ Биохимия, - 1959. - Т.24, Вып.1. - С.67-72.

47 Шиврина, А.Н. Гуминоподобные соединения, образуемые древоразрушающи-ми грибами / А.Н. Шиврина // Биологически активные вещества высших грибов. -М.-Л.: Наука, 1965,- 199с.

48 Шиврина, А.Н. К характеристике комплекса сложных органических соединений чаги / А.Н. Шиврина // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. -Л.: Медгиз, 1959. - С.72-84.

49 Кукулянская, Т.А. Физико-химические свойства меланинов, образуемых чагой в природных условиях и при культивировании / Т.А. Кукулянская, Н.В. Курченко, В.П. Курченко, В.Г. Бабицкая // Прикладная биохимия и микробиология. - 2002. -Т. 38, №1. - С.68 -72.

50 Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилаце-тата. II. Парамагнитные свойства хромогенов чаги / М.А. Сысоева, В.Р. Хабиб-рахманова, B.C. Минкин, B.C. Гамаюрова, В.Е. Петрашень // Химия растительного сырья. - 2007. - №4. - С. 105-109.

5 Юрлов, Д.С. Гуминовые вещества в биосфере / Под ред. Д.С. Орлова. - М.: Наука, 1993.-238 с.

52 Бабицкая, В.Г. Меланиновый комплекс гриба Inonotus obliguus /В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба, Н.В. Иконникова // Прикладная биохимия и микробиология. - 2000. -Том 36, №4. - С.439-444.

53 Щерба, В.В. Антиоксидантные свойства меланиновых пигментов грибного происхождения / В.В. Щерба, В.Г. Бабицкая, В.П. Курченко, Н.В. Иконникова, Т.А. Кукулянская // Прикладная биохимия и микробиология. - 2000. - Том 36, №5. - С.569-574.

54 Иванова, Г.А. Влияние гиперразвлетвлённых полимеров на антиоксидантную активность водных извлечений и меланинов чаги: автореф. дис. ... канд. хим. наук: 15.00.02 / Иванова Гузель Адгамовна. - Казань, 2011. -20с.

55 Бриттон, Г. Биохимия природных пигментов / Г. Бриттон. - М.: Мир, 1986. -279 с.

56 Харина, М.В. Сравнительный анализ меланинов чаги с помощью электронной микроскопии / М.В. Харина, П.Р. Хуснутдинов, М.А. Сысоева, В.А. Гревцев // XI Международная конференция молодых ученых « Пищевые технологии» (г. Казань, 13-16 апреля 2010.). Сборник тезисов докладов. Часть 1. - Казань: Издательство «Отечество», 2010. - 312 с.

57 Florian Tribl «Subcellular Proteomics» of Neuromelanin Granules Isolated from the Human Brain // Molecular and Cellular Proteomics 4:945-957, 2005.

58 Платонова, Е.Г. О содержании белка в плодовых телах древоразрушающих грибов / Е.Г. Платонова // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. - М. - Л.: Наука, 1965. - С. 55-57.

59 Шиврина, А.Н. О химическом составе чаги / А.Н. Шиврина // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. - М. - Л.: Наука, 1961. - С.55-62.

60 Шиврина, А.Н. Химическая характеристика действующих начал чаги / А.Н. Шиврина // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - М. - Л.: Паука, 1966. - С.49-55.

61 Ловягина, Е.В. Исследование карбонильной фракции гидролизатов водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага / Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина // Биохимия. - 1960. - Т.25, вып.4. - С. 640-645.

62 Шиврина, А.Н. О полисахаридных комплексах гуминоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами / А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - М. - Л.: Наука, 1966. - С.135-1.

63 Калашникова, Е.А. Изучение химического состава и стандартизация сырья чаги и лекарственного препарата «БЕФУНГИН»: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 15.00.02 / Калашникова Екатерина Александровна. - Пятигорск, 2003. - 20 с.

64 Пат. №2231786 Российская Федерация, МПК7 CI G 01 N 33/15, G 01 N 31/00. Способ определения углеводного состава полифенольного комплекса чаги / Сысоева М.А., Гамаюрова B.C., Кузнецова О.Ю.; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технологический университет. - №2002132770/04; за-явл. 27.11.2002; опубл. 27.06.2004 от 27.06.2004, Бюл. №18.

65 Зарипова, Г.И. Отнесение фенольных соединений, полученных при гидролизе хромогенов водного извлечения чаги / Г.И. Зарипова, В.Р. Хабибрахманова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // VIII Всероссийская конференция молодых учёных с

международным участием «Пищевые технологии»: Тезисы докладов. - Казань: Издательство «Отечество», 2007. - 408 с.

66 Mazurkiewicz, W. Analysis of aqueous extract Inonotus obliquus / W. Mazurkiewicz // Acta Poloniae Pharmaceutica. - Drug Research, Vol. 63 No.6 pp.497-501.2006.

67 Mazurkiewicz, W. Separation of an aqueous extract Inonotus obliquus (Chaga) / W. Mazurkiewicz // Acta Poloniae Pharmaceutica - Drug Research, Vol.67 No.4 pp.397-406.2010.

68 Запрометов, M.H. Основы биохимии фенольных соединений. Учебное пособие / М.Н. Запрометов. - М.: «Высшая школа», 1974. - 214 с.

69 Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. XI. Липиды водного извлечения чаги / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, А.Х. Тазеева // Химия растительного сырья. - 2008. - №3. - С.119-122.

70 Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилаце-тата. III. Состав липидов, отделяемых из водного извлечения чаги этилацетатом / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, Э.Ф. Зайнетдинова // Химия растительного сырья. - 2008. - №1. - С.111-114.

71 Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилаце-тата. IV. Состав веществ фенольной и терпеновой природы, отделяемых из водного извлечения чаги этилацетатом / М.А. Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, Г.И. Кыямова // Химия растительного сырья. - 2009. - №4. -С.117-122.

72 Блажей, А. Фенольные соединения растительного происхождения / А. Блажей, Шутый Л. - М.: Мир, 1977. - 239 с.

73 Племенков, В.В. Введение в химию природных соединений / В.В. Племенков. -Казань: 2001.-376 с.

74 Барабой, В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений / В.А. Барабой. - Киев: Наукова думка, 1976. - 260 с.

75 Мелентьева, Г.А. Фармацевтическая химия / Г.А. Мелентьева, Л.А. Антонова. - М.: Медицина, 1985. - 480 с.

76 Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия. В 2-х частях: учебное пособие / В.Г. Беликов. - М.: МЕДпресс - информ, 2007. - 624 с.

77 Бандюкова, В.А. Фенолкислоты растений, их эфиры и гликозиды / В.А. Бандю-кова // Химия природных соединений. - 1983. - №3. - С.263-273.

78 Барабой, В.А. Растительные фенолы и здоровье человека / В.А. Барабой. - М.: Мир, 1984.- 160 с.

79 Кочетова, М.В. Определение биологически активных фенолов и полифенолов в различных объектах методами хроматографии / М.В. Кочетова, Е.Н. Семенистая, О.Г. Ларионов, А.А. Ревина // Успехи химии. - 2007. - Т. 76, №1. - С.88-100.

80 Биохимия фенольных соединений / под ред. Дж. Харборна. - М.: Изд-во «Мир», 1968.-451 с.

81 Крылов, А.А. Руководство по фитотерапии / А.А. Крылов, В.А. Марченко. -СПб.: Питер, 2000.-416 с.

82 Ветчинкин, А.Р. Естественные органические красящие вещества / А.Р. Ветчин-кин. - Саратов: Приволжское книжное изд-во, 1966. - 250 с.

83 Минаева, В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование / В.Г. Минаева. - Новосибирск: Наука, 1978. - 255 с.

84 Kapche, G.D.W.F. Hepatoprotective and antioxidant arylbenzofiirans and flavonoids from the twigs of MORUS MESOZYGIA / G.D.W.F. Kapche, D. Amadou, C.D. Foz-ing, B.T. Ngadjui, P. Waffo-Teguo, J.M. Merillon, J.H. Donfack, A.N. Tchana, P.F. Moundipa, D. Harakat, B.M. Abegaz // Planta Medica. - 2011. - 1 c.

85 Bertrand, J. FIAMMADA SCOPARIA flavonoids and rutin kill adherent and chemo-resistant leukemic cells / J. Bertrand, M. Despeaux, C. Demur, J.J. Fournie, C. Racaud-Sultan, E. Bourogaa, R. Jarraaya, M. Damak, A.E. Feki, N. Fabre, L. Payrastre //Leukemia Research. - 2011. - 1 c.

86 Bhouri, W. Flavonoids from RHAMNUS ALATERNUS L. (RHAMNACEAE): kempferol-3-o-(3-isorhamninoside and rhamnocitrin 3-o-p- isorhamninoside protect against dna damage in human Iymphoblastoid gell and enhance antioxidant activity // W. Bhouri, J.Boubaker, S. Kilani, L. Chekir-Ghedira, K. Ghedira // South African Journal of Botany. - 2012. - T.80. - C.57-62.

87 Patra, J.С. Artificial neural network-based drug design for diabetes mellitus using flavonoids / J.C. Patra, B.H. Chua // Journal of Computational Chemistry. - 2011. -T.32, №4. - C.555-567.

88 Manaharat, T. Flavonoids isolated from SYZYGIUM aqueum leaf extract as potential antihyperglycaemic agents / T. Manaharat, H.M. Cheng, D. Appleton, U.D. Palani-samy // Food Chemistry. - 2012. - T.132, №4. - C. 1802-1807.

89Тюкавкина, H.A., Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки / Н.А. Тюкавкина, И.А. Руленко, Ю.А. Колесник // Вопросы питания. - 1996. - №2. - С.33-37.

90 Han, R.M. Reaction dynamics of flavonoids and carotenoids as antioxidants / R.M. Han, J.P. Zhang, L.H. Skibsted // Molecules. - 2012. - T. 17, №2. - C.2140-2160.

91 Захарова, Н.А. Антирадикальная эффективность некоторых природных фе-нольных соединений / Н.А. Захарова, Г.Н. Богданов, М.Н. Запрометов, Н.А. Тюкавкина, К.Е. Круглякова, Н.М. Эмануэль // Журнал общей химии. - 1972. - Т.42, №6. -С. 1414-1420.

92 Дейнека, J1.A.Определение сквалена в семенах некоторых растений семейства AMARANTHACEAE / Л.А. Дейнека, В.И. Дейнека, И.А. Гостищев, В.Н. Сороко-пудов, А.А. Сиротин // Химия растительного сырья. - 2008. - №4. - С.69-74.

93 Тутельян, В.А. Применение масла амаранта в диетотерапии сердечнососудистых заболеваний : Метод. Рекомендации / В.А. Тутельян. - М.: Наука, 2006.-32 с.

94 Kelly, G.S. Squalene and its potential clinical uses / G.S. Kelly // Altern Med Rev. 1999 Feb; 4(l):29-36.

95 Newmark, H.L. Squalene, olive oil, and cancer risk: a review and hypothesis / H.L. Newmark//Cancer Epidem. Biomark. Prevent. 1997.V. 6. P. 1101-1103.

96 Пат. 2182480 Российская Федерация, МПК7А 61 К 31/01, А 61 Р 35/00. Противоопухолевый препарат и способ его получения / Хохлов А.П., Доценко А.Н.; заявители и патентообладатели Хохлов Александр Петрович, Доценко Александр Николаевич.-№2001113007/14; заявл. 16.05.2001; опубл. 20.05.2002.

97 Lishuai, Ma Anti-inflammatory and anticancer activities of extracts and com pounds from the mushroom Inonotus obliquus / Ma Lishuai, Chen Haixia, Dong Peng, Lu Xueming // Food Chemistry. - 2013. - C.l-26.

98 Краснов, E.A. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А. Краснов, Т.П. Березовская, Н.В. Алексеюк, Н.И. Белоусова, JI.A. Демиден-ко, В.В. Дудко, С.Е. Дмитрук, Г.И. Калинкина, Г.А. Романова. - Томск: Издательство Томского университета, 1987. - 178 с.

99 Низковская, О.П. К биологии возбудителя чаги на берёзе / О.П. Низковская // Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. - Л.: Медгиз, 1959. - С.32-35.

100 Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 1 / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.-448 с.

101 Бикетова, Д.Х. Тихие враги / Д.Х. Бикетова, Л.В. Коломбет // «Жизнь без опасностей. Здоровье. Профилактика. Долголетие». - 2009. - №3. - С. 1-5.

102 Иванова, Е.В. Биологические свойства бифидобактерий и их взаимодействие с микросимбионтами кишечной микрофлоры человека: автореф. дис. ...канд. мед. наук: 03.02.03 / Иванова Елена Валерьевна. - Оренбург, 2010. -22 с.

103 Шендеров, Б.А. Пробиотики и функциональное питание / Б.А. Шендеров. -М.: Гранть, 2001.-288 с.

104 Краткий справочник химика / В.И. Перельман. - М.: Изд-во «Химия», 1964. -624 с.

105 Фармакопейная статья предприятия 42-0134-0725-01 на «Бифидумбактерин порошок».

106 Фармакопейная статья предприятия 42-0135-2415-02 на «Лактобактерин сухой».

107 Фармакопейная статья предприятия 42-3365-97 на «Колибактерин».

108 Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева. - М.: Изд-во «Колос», 1993. - 175 с.

109 Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. М.: Медицина, 1989.-400с.

110 Захарова, И.Я. Методы изучения микробных полисахаридов / И.Я. Захарова, JI.B. Косенко. - Киев: Наукова думка, 1982. - 192 с.

111 Черняева, Г.Н. Флавоноиды коры BETULA PENDULAROTH / Г.Н. Черняева, Пермякова Г.В. // Растительные ресурсы. - 2003. -Вып.1. - С.64-68.

112 Гост Р 51446-99 «Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований».

113 Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. М.: Медицина, 1987. - 336с.

114 Абдуллин, И.Ф. Электрогенерированный бром - реагент для определения антиоксидантной способности соков и экстрактов / И.Ф. Абдуллин, Е.Н. Турова, Г.К. Будников // Заводская лаборатория. - 2002. - Т.68, №9. - С. 12-15.

115 Полюдек-Фабини, Р., Органический анализ / Р. Полюдек-Фабини, Т. Бейрих. -Л.: Химия, 1981.-624 с.

116 Michel, Dubois, К.A. Gilles, J.K. Hamilton, P.A. Rebers, and Fred Smith. Colori-metric Method for Determination of Sugars and Related Substances. Division of Biochemistry, University of Minnesota, St. Paul, Minn. Analytical chemistry, vol. 28, N0.3, March 1956.

117 Дункан, А. Применение спектроскопии в химии / А. Дункан, В. Горди, Н. Джоно. - М.: Издат. ин. лит., 1959. - 260 с.

118 Северин, С.Е. Практикум по биохимии / С.Е. Северин, Г.А. Соловьева. - М.: Мир, 1989.-509 с.

119 Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений / Н.И. Гринке-вич, Л.Н. Сафронич. - М.: «Высшая школа», 1983. - 175 с.

120 Казицына, Л.А. Применение УФ-, ИК-, и ЯМР-спектроскопии в органической химии. Учеб. Пособие для вузов / Л.А. Казицына, Куплетская Н.Б. - М.: «Высшая школа», 1971.-254 с.

121 Хроматография на бумаге / под ред. И.М. Хайса, К. Мацека. М.: Изд-во иностранной литературы, 1962. - 851с.

122 Кейтс, М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липи-дов / М. Кейтс. - М.: Мир, 1975. - 322 с.

123 Физико-химические методы анализа биологически активных веществ растительного происхождения / В.П. Георгиевский, H.A. Казаринов, М.О. Каррыев. -Ашхабад: Изд-во «Ылым», 1976. -240 с.

124 Хроматография в тонких слоях / под ред. Э. Шталя. - М.: Изд-во «Мир», 1965. -508 с.

125 Георгиевский, В.П. Биологически активных веществ лекарственных растений / В.П. Георгиевский. - Новосибирск: Наука, 1990. - 250 с.

126 Ахрем, А.А, Тонкослойная хроматография / A.A. Ахрем, А.И. Кузнецова. -М.: Наука, 1964.- 176 с.

127 Кемертелидзе, Э.П. Физико-химические методы анализа некоторых биологически активных веществ растительного происхождения / Э.П. Кемертелидзе, В.П. Георгиевский. - Тбилиси: Мецниереба, 1977. - 240с.

128 Алексеева, Л.И. Фенольные соединения THYMUS TALIJEVII KLOK. ET SCHOST // Л.И. Алексеева, Л.В. Тетерюк // Химия растительного сырья. - 2008. -№4. - С.65-68.

129 Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Изд. 2-е переработанное и дополненное. - М.: ЗАО ИИА Ремедиум, 2005. - 829 с.

130 Измеров, Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении (справочник). - М.: Медицина, 1977. - С. 196-197.

131 Фармакопейная статья наБефунгин ФС-42-659-94.

132 Нетрусов, А.И. Практикум по микробиологии: учебное пособие для студентов высших учеб. заведений / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук. - М.: Издательский центр «Академия», 2005. - 608 с.

133 Першин, Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии / Г.Н. Першин. - М.: «Медицина», 1971. - С. 171-192.

134 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов: Методические указания. - М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 1998. - 95 с.

135 Шлегель, Г. Общая микробиология / Г. Шлегель. - М.: Мир, 1987. - 567 с.

136 Хабибрахманова, В.Р. Состав и свойства дисперсной фазы золя водных извлечений чаги: автореф. дис. ...канд. фарм. наук: 15.00.02 / Хабибрахманова Венера Равилевна. - Казань, 18 с.

137 Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. II. Изменение изучаемой системы при проведении экстракции различными способами / М.А. Сысоева, O.IO. Кузнецова, B.C. Гамаюрова, Ф.Г. Халитов // Вестник Казанского технологического университета (КГТУ). - 2003. - №2. - С.172-179.

138 Бурмасова, М.А. Ферментативный гидролиз чаги / М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // III Всероссийская конференция «Химия и технология растительных веществ»: Тез. докл. - Саратов, 2004. - С.229-231.

139 Сальникова, E.H. Химическое исследование флавоноидов полыни горькой (ARTEMISIA ABSINTHIUM L.), п. сиверса (A. SIEVERSIANA WILLD.) и п. якутской (A. JACUTICA DROB.) / E.H. Сальникова, Г.Н. Калинкина, С.Е. Дмитрук // Химия растительного сырья. - 2001. - №3. - С.71-78.

140 Ботиров, Э.Х. Химическое исследование флавоноидов лекарственных и пищевых растений / Э.Х. Ботиров, A.A. Дренин, A.B. Макарова // Химия растительного сырья. - 2006. - №1. - С.45-48.

141 Ларькина, М.С. Василёк шероховатый как перспективный источник гепато-протективного средства: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 14.04.02 / Ларькина Мария Сергеевна. - Самара, 2011. - 24 с.

142 Исаева, Е.В. Флавоноиды почек тополя бальзамического (POPULUS BALZAMIFERA L.), произрастающего в Красноярске. 1. Флавоноиды этилаце-татного экстракта почек тополя бальзамического / Е.В. Исаева, Г.А. Ложкина, Т.В. Рязанова и др. // Химия растительного сырья. - 2008. - №2. - С.47-53.

143 Ангаскиева, A.C. Исследование химического состава серпухи венценосной, культивируемой в Сибири / A.C. Ангаскиева, В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина и др. // Химия растительного сырья. - 2003. - №4. - С.47-50.

144 Сысоева, М.А. Нейтральные липиды водной вытяжки чаги / М.А. Сысоева, H.A. Маякова, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова // VIII Всероссийская кон-

ференция молодых учёных с международным участием «Пищевые технологии»: Тез. докл. - Казань, 2007. - С. 199.

145 Бурмасова, М.А. Последовательная обработка водной вытяжки чаги органическими растворителями /М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова, Г.К. Зиятдинова, Г.К. Будников // Научная сессия: Аннотации сообщений. - Казань, 2009.-С.239.

146 Бурмасова, М.А. Экстракция водного извлечения чаги диэтиловым эфиром / М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева // Башкирский химический журнал. - 2012. - Т.19.

- № 2. - С.50-52.

147 Шиврина, А.Н. О полисахаридных комплексах гумипоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами / А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - М. - Л.: Наука, 1966.

- С.38-41.

148 Кузнецова, О.Ю. Изменение углеводного состава водных вытяжек чаги при смене её получения / А.Н. Кузнецова, O.E. Боцманова, A.A. Кудашкин, М.А. Сысоева, Л.М. Шестакова, B.C. Гамаюрова // В материалах I Форума молодых учёных и специалистов Республики Татарстан. - Казань: Мастер Лайн, 2001. - С.39.

149 Бурмасова, М.А. Определение веществ флавоноидной природы в водных извлечениях чаги / М.А. Бурмасова, A.B. Порфирьева, О.Ю. Кузнецова, Сысоева, B.C. Гамаюрова // VIII Всероссийская конференция молодых учёных с международным участием «Пищевые технологии»: Тез. докл. - Казань, 2007. - С. 188.

150 Бурмасова, М.А. Фенолкарбоновые кислоты и флавоноиды водной вытяжки чаги / М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // Научная сессия: Аннотации сообщений. - Казань, 2008. - С.248.

151 Бурмасова, М.А. Получение коллоидных систем с наноразмерными дисперсными фазами на основе водного извлечения чаги / М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева // Всероссийская молодежная научная школа «Биоматериалы и нанобиоматериалы: Актуальные проблемы и вопросы безопасности»: Тез. докл. - Казань, 2012. - С.94.

152 Бурмасова, М.А. Последовательная обработка компонентов золя водной вытяжки чаги органическими растворителями. I. Исследование хлороформного экс-

тракта / M.А. Бурмасова, M.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // Вестник Казанского технологического университета. - 2009. - №1. - С.51-55.

153 Сысоева, М.А. Извлечение липидов из водной вытяжки чаги / М.А. Сысоева, J1.P. Юмаева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова // Общероссийская конференция молодых учёных с международным участием «Пищевые технологии»: Тез. докл. - Казань, 2006, - С. 118-119.

154 Сысоева, М.А. Изучение липидного состава водных извлечений чаги / М.А. Сысоева, Е.А. Ларионова, Г.А. Иванова, B.C. Гамаюрова // IX Международная конференция молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии»: Тез. докл. - Казань, 2008, - С.188.

155 Сысоева, М.А. Состав липидов водного извлечения чаги / М.А. Сысоева, Н.В. Куракина, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова // IX Международная конференция молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии»: Тез. докл. - Казань, 2008,-С. 193.

156 Mizuno, Т. The extraction and development of antitumoractin polysaccharides from medicinal mushrooms in Japan / T. Mizuno // Int. J. Med. Mushrooms. - 1999. - №1. -P. 9-29.

157 Сысоева, E.B. Свойства водных извлечений и меланинов чаги, полученных с применением СВЧ: автореф. дис. ...канд. фарм. наук: 14.04.02 / Сысоева Елена Владиславовна. - Казань, 18 с.

158 Климочкина, М.А. (Бурмасова, М.А.) Подбор условий для выделения флаво-ноидов из полифенолов чаги / М.А. Климочкина (М.А. Бурмасова), М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // Вторая межрегиональная конференция молодых учёных «Пищевые технологии»: Тез. докл. - Казань, 2001. - С.64.

159 Бурмасова, М.А. Подбор условий для выделения биологически активных соединений из водного извлечения чаги этилацетатом / М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // X Международная конференция молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии» : Тез. докл. - Казань, 2009. - С.616.

160 Джонстон, Р. Руководство по масс-спектрометрии для химиков-органиков / Р. Джонстон. - М.: Изд-во «Мир», 1975. - 236 с.

161 Электронная база - NIST (Chemistry Web Book).

162 Бурмасова, М.А. Исследование компонентов меланина чаги / М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева // XI Международная конференция молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии»: Тез. докл. - Казань, 2010. - С. 289.

163 Шиврина, А.Н. Характеристика древоразрушагащих грибов по содержанию в них стероидных соединений / А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. - М., - Л.: Наука, 1965. -С.59-64.

164 Shin, Yusoo Chemical Constituents of Inonotus obliquus / Yusoo Shin, Tamai Y., Terazawa M. // Eurasian J. For. Res. 2000. 1: 43-50.

165 Электронная база - SBSD (Spectral Data Base System for Organic Compounds).

166 Лебедев, A.T. Масс-спектрометрия в органической химии / А.Т. Лебедев. -М.: Бином лаборатория знаний, 2003. - 493 с.

167 Сычев, К.С. Методы ВЭЖХ и твердофазной экстракции / К.С. Сычев. - М.: Высшая школа, 2006. - 350 с.

168 Бурмасова, М.А. Состав веществ бутанольного экстракта из меланина чаги / М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева // Химия растительного сырья. - 2012. - № 1. -С.149-152.

169 Лукша, Е.А., Коломиец Н.Э. Исследование фенольных соединений урологического сбора методом ВЭЖХ-МС / Е.А. Лукша, Г.И. Калинкина // Химия растительного сырья. - 2009. - №4. - С. 139-142.

170 Бурмасова, М.А. Экстрагирование компонентов берёзового гриба чаги сверхкритическим диоксидом углерода / М.А. Бурмасова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова, E.H. Тремасов, А.Е. Новиков, Р.Н. Максудов // Межрегиональная конференция молодых учёных «Пищевые технологии»: Тез. докл. - Казань, 2004. - С. 148.

171 Физические методы определения строения органических соединений / под ред. Б.В. Иоффе. - М.: Высшая школа, 1984. - 336 с.

172 Лазарев, Н.В. Вредные вещества в промышленности / Н.В. Лазарев, Э.Н. Левина. - М.: Химия, 1976. - Зт.

173 Ревякина, В.А. Атопический дерматит у детей. Осложнённые формы / В.А. Ревякина // Лечащий врач. - 2003. - №3. - С.35-40.

174 Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 2 / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 480 с.

175 Гаврилин, М.В. «Нистатин» / М.В. Гаврилин, Подлужная A.B. // Химико-фармацевтический журнал. -2002. -№3. - С.51-53.

176 ГОСТ Р 52349-2005 «Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения».