Химическая адсорбция поли-п-нитрофенилакрилата как метод формирования привитых фаз композиционных сорбентов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат химических наук Белов, Сергей Викторович

• Белов, Сергей Викторович
• кандидат химических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат химических наук Белов, Сергей Викторович

ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1. Композиционные сорбенты для хроматографии биополимеров и частиц

1.1. Сорбенты, модифицированные путем проведения прививочной полимеризации

1.2. Сорбенты, модифицированные адсорбированными полимерами

2. Адсорбция полимеров из растворов на поверхностях твердых тел

2.1. Адсорбция неионогенных полимеров

2.2. Адсорбция полиэлектролитов 32 РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Химическая адсорбция поли-п-нитрофенилакрилата на аминопропилсилилированных кремнеземах

2. Композиционные сорбенты с привитым поли-п-нитрофенилакрилатом

2.1. Особенности взаимодействия полимерных и композиционных сорбентов с сывороточным альбумином

2.2. Аффинные сорбенты с групповой специфичностью к цис-диолам

ВЫВОДЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Химическая адсорбция поли-п-нитрофенилакрилата как метод формирования привитых фаз композиционных сорбентов»

Жидкостная хроматография является одним из ведущих и наиболее интенсивно развивающихся методов разделения высокомолекулярных соединений природного происхождения. В связи с развитием высокоэффективной жидкостной хроматографии и активным внедрением крупномасштабных хроматографических процессов в биотехнологию, особое значение приобретает разработка сорбентов, способных выдерживать высокие давления в колонках, обеспечивая в то же время высокие выходы разделяемых компонентов при сохранении их биологической активности. В наибольшей степени перечисленным требованиям отвечают композиционные сорбенты, синтезируемые на основе пористых кремнеземов с привитой полимерной фазой, позволяющие выделять биополимеры в неденатурирующих условиях. Создание на поверхности кремнезема тонкого сплошного полимерного покрытия дает возможность объединить в одном композиционном материале жесткость, механическую прочность, контролируемую пористость кремнеземов с адсорбционной инертностью, высокой емкостью и биосовместимостью, присущим мягким органическим гелям, традиционно используемым для хроматографии биополимеров.

Разработка композиционных сорбентов является, таким образом, комплексной проблемой возникшей на стыке химии полимеров и биоорганической химии. Одним из перспективных методов синтеза композиционных сорбентов является химическая адсорбция гибкоцепных полимеров на поверхности кремнеземов. Дальнейшая модификация полученных таким образом носителей путем полимераналогичных реакций позволяет синтезировать сорбенты с различной функциональностью. В качестве полимерного модификатора в данной работе был выбран поли-п-нитрофенилакрилат (ПНФА), полимер, обладающий значительной реакционной способностью в полимераналогичных превращениях и использованный ранее для синтеза биосовместимых сорбентов [1]. Особый интерес представляет изучение механизма химической адсорбции ПНФА, а также изучение особенностей синтезированных таким способом сорбентов по сравнению с традиционными сорбентами, т.е. сшитыми полимерными гелями.

Настоящая работа является частью структурно-функциональных исследований новых сорбентов, проводимых в лаборатории «Полимеры для биологии» ИБХ им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН. Цель работы состоит в изучении фундаментальных аспектов хемосорбции полимеров, синтеза полимерномодифицированных кремнеземных сорбентов для биохроматографии, а также включает сравнительный анализ и изучение механизмов сорбции на традиционных и новых композиционных сорбентах.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме «Высокомолекулярные соединения», Белов, Сергей Викторович

Выводы.

1. Показано, что реакция химической адсорбции поли-п-нитрофенилакрилата на поверхности аминопропилсилилированных кремнеземах протекает путем образования амидных связей. При этом часть сегментов адсорбированной макромолекулы не взаимодействуют с поверхностью, а образуют "петли" и "хвосты", экспонированные в раствор, что позволяет проводить дальнейшую химическую модификацию носителей с получением сорбентов с различными функциональными группами.

2. Изучена кинетика хемосорбции поли-п-нитрофенилакрилата на поверхности модифицированных пористых стекол и силикагелей и построена качественная модель механизма хемосорбции гибкоцепного полимера.

3. Выявлено влияние молекулярной массы полимера, концентрации раствора полимера, пористости носителя на структуру образующегося адсорбированного слоя полимера.

4. Синтезированы сорбенты с анионообменной (БЕАЕ) и аффинной (групповая специфичность к цис-диолам) функциональностью.

5. Впервые показаны различия в механизмах анионообменного связывания белков с композиционным сорбентом и рядом традиционных сорбентов на основе сшитых полимерных частиц. Установлено отсутствие прямой корреляции между количеством поверхностных зарядов анионобменника и его белковой емкостью.

6. Показано, что композиционный анионообменник обладает высоким значением отношения величины сорбционной белковой емкости к ион-парной емкости и невысоким значением усредненного количества зарядов, участвующих во взаимодействии с молекулой белка. Эти особенности композиционного сорбента определяют его высокие хроматографические качества (хорошее разделение белков и высокие емкости хроматографических пиков).

7. Показано, что композиционный сорбент с борильной функциональностью может с успехом применяться для фракционирования гликопротеинов, использоваться в клинической практике для анализа гликозилированных белков в гемолизатах эритроцитов крови человека, а также для очистки сериновых протеаз. Показано, что сорбционные свойства борильных сорбентов сильно зависят от условий их синтеза. Разработан метод определения специфической емкости этих сорбентов, который может быть использован для контроля качества синтезированного сорбента.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Исходные вещества, реагенты и материалы. у-Аминопрпилтриэтоксисилан марки АГМ-9 (СССР) перегоняли в вакууме (110°С, 1мм рт.ст.), диметилацетамид перегоняли в вакууме (60°С, 10 мм. рт. ст.) и бензол перегоняли (80°С).

Диметилсульфоксид марки х.ч., ацетон (VEB Chemische Werke Buna, Германия), диметилформамид марки х.ч., поли-К-винилкапролактам, о-фталевый альдегид (Serva, ФРГ), п-аминометилфенилборную кислоту, 2-диэтиламиноэтиламин (Fluka, Швейцария) дополнительной очистке не подвергали. В работе использовали концентрированный водный раствор аммиака марки ч.д.а., п-нитрофенол (Bio-Rad, США), бычий сывороточный альбумин ("Boehringer-Mannheim", Австрия), гемолизаты эритроцитов крови человека были любезно предоставлены Т.А.Чимитовой (НИБХ СО РАН, Новосибирск).

Пористые стекла МПС-2000 ВГХ со средним диаметром пор 2000±150 Á, зернистостью 0,1-0,2 мм и удельной площадью поверхности 30 м2/г производства Горьковского опытного завода ВНИИ нефтепереработки, мелкодисперсная аморфная двуокись кремния (аэросил-175) с удельной площадью поверхности 175 м2/г, непористый сферический силикагель "Monospher" зернистостью 1,4±0,1 мкм был любезно предоставлен профессором К.Унгером (Университет им. Гутенберга, Майнц, ФРГ). В работе использовали силикагель XWP-1500 (ФРГ) с размером частиц 16-23 мкм и диаметром пор 1500Á, коммерческие сорбенты DEAE-Toyopearl 650 М (TOSOH, Япония) и DEAE-Sepharose CL-6B (Pharmacia, Швеция).

Стеклянные пластинки (покровные стекла для микроскопии) для получения спектров ЭСХА и атомно-силовой микроскопии перед химической модификацией оплавляли в пламени газовой горелки, обрабатывали концентрированной серной кислотой, затем 0,1 М соляной кислотой, промывали дистиллированной водой, сушили на воздухе и под вакуумом.

Синтез вспомогательных веществ. п-Нитрофенилакрилат получали по методике [113], т. пл. 53-54 °С.

Синтез РЕ1-силикагеля

1-3 г силикагеля при интенсивном перемешивании заливают десятикратным объемом 10%-го раствора полиэтиленимина в метаноле, после дегазации смеси силикагель отфильтровывают под вакуумом водоструйного насоса до удаления метанола. Затем силикагель переводят в 10-ти кратный объем 10%-го раствора триглицидилового эфира глицерина в диоксане и выдерживают в течение 2-х часов. Силикагель отфильтровывают и промывают диоксаном, метанолом и сушат. [34]

Определение ион-парной емкости сорбентов по пикриновой кислоте.

К 100 мг сорбента прибавляют при встряхивании 4 мл метиленхлорида и центрифугируют. Супернатант декантируют, после чего к сорбенту прибавляют 4 мл 0,2М раствора пикриновой кислоты в метиленхлориде. Несвязанную пикриновую кислоту отмывают 4 мл метиленхлорида (4 раза), после чего к сорбенту прибавляют 4 мл 5%-го раствора триэтиламина в метиленхлориде. Сорбент перемешивают с этим раствором в течение нескольких минут. После седиментации супернатант собирают в отдельную пробирку. Промывку раствором триэтиламинаамина повторяют несколько раз до тех пор, пока супернатант не перестанет давать желтую окраску (около 4 раз), а собранные порции супернатанта объединяют. Количество образовавшегося пикрата триэтиламина в супернатанте определяют спектрофотометрически (е=14500, Х=358 нм) [34].

Синтез поли-п-нитрофенилакрилата.

В 100 мл сухого бензола растворяют 20 г. п-нитрофенилакрилата и 1 г. азобисизобутиронитрила. Раствор перемешивают 8-10 минут слабым током аргона, после чего нагревают, после чего нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течении 4 часов при 70 °С и равномерном пропускании пузырьков аргона. Полученный осадок полимера растворяют в смеси ацетона и диметилформамида (9:1) и прибавляют по каплям при перемешивании в холодный диэтиловый эфир. Выпавший осадок ПНФА отделяют фильтрованием и сушат на воздухе и под вакуумом. Чистоту полученного полимера контролируют методом ТСХ на силуфоле в системе хлороформ:этанол = 2:1. Rf мономера в данной системе 0,5, в то время как Rf полимера 0,1-0,2. Полученный указанным способом полимер не содержит мономера. Полимер переосаждали из ацетона в метанол и характеризовали методом ГПХ.

Расчеты хроматограмм фракций ПНФА выполнялись по калибровке для стандартного полисульфона в хлороформе на колонках m-Bondagel Е-125, 500, 1000, Linear (Knauer, ФРГ). Хроматография ПНФА выполнялась в диметилацетамиде с 0,05 М LiBr.

Модификация силикагелей у-аминопропилтриэтоксисиланом.

20 г силикагеля промывают в экстракторе Сокслета 6,1 М соляной кислотой, представляющую собой азеотропную смесь, кипящую при 1100С, до полного обесцвечивания, затем промывают дистиллированной водой, ацетоном, после чего сушат на воздухе и под вакуумом (1500С, 6-8 часов). 20 г сухого силикагеля прибавляют при перемешивании к 200 мл 3%-го раствора у-аминопрпилтриэтоксисилана в сухом толуоле и перемешивают в течении 20 ч в колбе с обратным холодильником при 90-1000С. Модифицированный силикагель промывают 200 мл сухого толуола и далее ацетоном. Промытый силикагель сушат на воздухе и затем при 1000С 2 ч под вакуумом.

Химически модифицированный Аэросил-175 содержал привитые аминогруппы в количестве 700 мкмоль/г, макропористое стекло МПС-2000 -210 и мкмоль/г, силикагель Monospher - 38 мкмоль/г.

Синтез носителей, содержащих привитую фазу ПНФА.

К 200 мл 2-3% раствора ПНФА в диметилформамиде или диметилсульфоксиде при медленном встряхивании добавляют 20 г модифицированного силикагеля, после чего перемешивают еще 1 час при комнатной температуре. Полученный носитель промывают тем же растворителем до отмывки полимера (600-800 мл). После этого носитель промывают 300 мл эфира и сушат на воздухе 1 час, затем в вакууме 2 часа и хранят в сухом состоянии без доступа влаги.

Синтез аффинного сорбента с групповой специфичностью к цис-диолам.

К 30 г носителя на основе макропористого стекла МПС-2000 ВГХ с привитым ПНФА, содержащим 163 мкмоль/г сложноэфирных групп , добавляли 150 мл раствора п-аминометилфенилборной кислоты (ПАМФБК), взятой в различных молярных соотношениях к сложноэфирным группам носителя, а также триэтиламин в эквимолярном количестве к ПАМФБК. Реакцию проводили в течение двух суток при небольшом перемешивании при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляли 1 мл морфолина для блокирования непрореагировавших сложноэфирных групп носителя, выдерживали еще двое суток, после чего сорбент промывали 0,25 М аммиачным буферным раствором (рН 8) до полного удаления выделившегося в процессе реакции п-нитрофенола. Сорбент хранили в том же буферном растворе.

Определение NH2-rpynn в аминопропилсилилированных силикагелях.

Навеску 100мг) силикагеля смачивают 1-2 каплями дистиллированной воды и растворяют в 0,5-1 мл концентрированной плавиковой кислоты. Раствор разбавляют водой до 10 мл и титруют 4 М КОН до рН 7-8. После этого добавляют объем раствора до 25 мл добавлением 0,1 М раствора тетрабората натрия. В полученном растворе спектрофотометрически определяют концентрацию растворенного амина по реакции с о-фталевым диальдегидом в присутствии меркаптоэтанола. Калибровку проводили по н-бутиламину (s=7100, А/=340 нм). Относя общее количество амина в 25 мл раствора к количеству взятого силикагеля, находят содержание в нем NH2-групп.

Измерение размера частиц носителя и размеров пор.

Измерение распределения частиц силикагеля "Monospher" по размерам проводили методом автокорреляционной лазерной спектроскопии на приборе "Coulter N4" (Coulter Electronics, Франция). Средний диаметр частиц составлял 1,4 мкм, что совпадало с паспортными данными.

Размеры пор макропористых стекол определяли методом ртутной порометрии. В основе метода ртутной порометрии лежит вдавливание металической ртути в поры сорбента, осуществляемое под давлением до 2000 атм. Давление, которое требуется приложить к образцу сорбента для заполнения его пор ртутью, обратнопропорционально диаметру этих пор: в р = -4усо%— d, где d - диаметр цилиндрических пор, у - поверхностное натяжение ртути, 0 - угол смачивания сорбента ртутью (принят равным 1450). Зависимость объема пор сорбента, занятых ртутью при данном давлении от их диаметра представлена на рис. 8 в виде интегральных кривых вдавливания, или, что то же самое, интегральных кривых распределения пор сорбента по их эффективным диаметрам. Измерения проводились на ртутном порометре "Роге 9300" (МйготеШсз, США).

Определение количества п-нитрофенола в растворе.

Концентрацию п-нитрофенола в растворе определяли спектрофотометрически. Для водных растворов с рН>7 А.тах=405 нм и в=15300л/моль см, для растворов в диметилсульфоксиде ^тах=325 нм и 8=11 ОООл/моль см.

Кинетика хемосорбции ПНФА и изотермы адсорбции.

Химическую адсорбцию ПНФА проводили, выдерживая 3 мл 1%-го раствора ПНФА в диметилсульфоксиде с 0,1 г носителя при умеренном встряхивании в термостатированном реакторе (25°С). Количество полимера в растворе соотвествовало трех- пятикратнму молярному избытку сложноэфирных групп по отношению к количеству аминогрупп на поверхности носителей, что позволяло считать концентрацию полимера в растворе приблизительно постоянной.

Кинетику адсорбции изучали с помощью отбора проб носителя и супернатанта из реакционной смеси ( количество мономерных звеньев, химически связанных с поверхностью носителя, соответствует количеству п-нитрофенола, выделившегося в раствор, так как адсорбция п-нитрофенола в условиях эксперимента незначительна). Для измерения количества п-нитрофенола, выделившегося при адсорбции, отбирали 10 мкл супернатанта, разбавляли до 1 мл и определяли концентрацию п-нитрофенола спектрофотометрически.

Для определения количества сложноэфирных групп, локализованных в петлях и хвостах химически адсорбированных макромолекул, из реакционной смеси отбирали пробы носителя (~5 мг), которые после промывки 50-кратным объемом диметилсульфоксида, 20-кратным объемом ацетона, последующей сушки под вакуумом и взвешивания подвергали аминолизу концентрированным (25%) водным раствором аммиака (1 мл) в течении 2-х суток, после чего определяли концентрацию п-нитрофенола в растворе, как описано выше, и рассчитывали исходное содержание сложноэфирных групп на носителе.

Описанную методику определения сложноэфирных групп, иммобилизованных на поверхности носителя использовали при построении изотермы адсорбции. Время контакта носителя с раствором ПНФА составляло 48 часов, т.е. было близко к времени насыщения. Поэтому с некоторым приближением можно рассматривать полученные концентрационные зависимости как изотерму адсорбции.

Определение специфической емкости боратных сорбентов по аденозину.

Емкость боратных сорбентов оценивали методом фронтальной хроматографии аденозина и дезоксиаденозина, проводимой на колонке диаметром 1 см и длиной 10см при скорости потока 0,1 мл/мин. Вещества растворяли в 0,25 М водном растворе ацетата аммония с различными значениями рН (7-9) при добавлении и без добавления 1М раствора №С1. Детекцию аденозина и дезоксиаденозина проводили спектрофотометрическим методом (Атах=250 нм и 8=12800 л/моль см для аденозина и в=11900л/моль см для дезоксиаденозина, рН 9.0) на спектрофотометре Весктап П11-70 (Весктап, США). Концентрация аденозина или дезоксиаденозина в буферном растворе составляла 10-4М.

Ионообменная хроматография бычьего сывороточного альбумина.

Хроматографию белка на синтезированных и коммерческих сорбентах проводили на колонках 1x3 см в 0,02 М трис-НС1 буфере (рН 7,8) в градиенте концентрации ИаС! от 0 до 0,8 М, а так же в режиме изократической элюции при различных концентрациях NaCl (0,2 - 0,5 М). Объем пробы 0,5 мл, концентрация белка 1 мг/мл, скорость элюции 1 мл/мин. Оптическую плотность (А,тах=280 нм) хроматографических элюатов регистрировали на проточном спектрофотометре "Holochrome" ("Gilson", Франция).

Аффинная хроматография гликозилированного гемоглобина.

Аффинную хроматографию гликозилированного гемоглобина из гемолизата эритроцитов крови человека проводили на колонке диаметром 1 см и длиной 10 см при скорости потока 0,72 мл/мин. В качестве растворителя использовали 0,25М аммоний-ацетатный буферный раствор, содержащий 0,05М ацетата магния, рН 8,5. С сорбентом № 1 (см. таб. ) использовали также буфер следующего состава: 0,25 М ацетата аммония, 0.02 М ацетата магния, 0,05М HEPES, рН 9. Элюирование проводили 1М раствором сорбита в исходном буфере. Детекцию проводили спектрофотометрически (Яшах=415 нм) на проточном спектрофотометре "Holochrom" (Gilson, Франция).

Дополнительные методы.

ИК спектры носителей (Аэросил-175) с хемосорбированным полимером снимали на спектрофотметре Specord 75IR (ГДР). Образцы для исследования получали прессованием таблеток диаметром 1 см и массой 5-7 мг.

Изучение тонких поверхностных слоев полимера, адсорбированного на аминопропилсилилированных покровных стеклах для оптической микроскопии, проводили методом рентгеновской спектроскопии для химического анализа (ЭСХА). Метод дает информацию об элементном составе поверхности и типе функциональных групп полимера и носителя в поверхностном слое до 50А. Спектры ЭСХА получали на приборе "ISA RJBER ESCA" (Франция) с использованием излучения MgKa в вакууме о порядка 1(Г Па при помощи источника 300 Вт. Количественный анализ спектров осуществляли с использованием сечений ионизации.

Атомно-силовая микроскопия поверхности аминопропил-силилированных покровных стекол с адсорбированным ПНФА проводилась в лаборатории электронной микроскопии ИБХ РАН с помощью прибора для атомно-силовой и сканирующей тунельной микроскопии Nanoscop 2 (США).

Электрофорез выделенных фракций при градиентной хроматографии фракций БСА проводили в акриламидном геле (градиент концентрации акриламида от 4 до 30%), в присутствии SDS в восстанавливающих условиях. Проявление - Coumassie Brilliant Blue.

Эффективную емкость сорбентов по БСА определяли методом фронтальной хроматографии на колонках 1x1 см в 0,02 М трис-HCl буфере (рН 7,8).

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Белов, Сергей Викторович, 2000 год

1. А.Е.Иванов. Пористые кремнеземы, модифицированные привитыми сополимерами N-замещенных акриламидов сорбенпы для хроматографии биополимеров. Канд. Диссертация, Москва, 1986, с. 5-41.

2. A.E.Ivanov, V.V.Saburov, V.P.Zubov. Polymer-coated adsorbents for the separation of biopolymers and particles. Advances in Polymer Science, 1992, V. 104, p. 135-175.

3. M.Hanson, K.K.Unger. Polymer coatings as stationary phases in high performance liquid chromatography. Trends in analyticalchemistry, 1992, V. 11, № 10, p. 368-373.

4. M.Hanson, A.Kurganov, K.K.Unger, V.A.Davankov. Polymer-coated reversed-phase packings in high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography A, 1993, V. 656, p. 369-380.

5. G.Wegner. Functional polymers. Acta mater, 2000, V. 48, p. 253-262

6. О.Н.Мервужева, В.М.Молодкин, А.В.Смирнов, Б.В.Мчедлишвили.

7. А.С СССР № 747513, опубликовано в Б.И. № 26, 1980.

8. F.E.Regnier. Bonded carbohydrate stationary phases for chromatography. Патент США№ 3.983.299. РЖ Химия 11Б1456П, 1977.

9. K.Mosbach, M.Glad, P.O.Larsson, S.Ohlson. Affinity precipitation and high perfomance liquid affinity chromatography. In: Affinity chromatography and related techniques. Ed. T.C J.Gribnau, J. Visser, R.J.F.Nivard, Elsevier, Amsterdam, 1982.

10. S.Gupta, E.Pfannkoch, F.E.Regnier. High performance cationexchange chromatography of proteins. Analitical Biochemistry, 1983, V. 128, p. 196-201.

11. S.H.Chang, F.E.Regnier. Chromatographic supports and methoda and apparatus for preparing the same. Патент США № 4.029.583. РЖ Химия 8Г40П, 1978.

12. J.P.C.Bootsma, H.W.Wolsink, G.Challa, F.Miller. Polymer-bound flavins. 2: Immobilization of linear flavin-containing polyelectrolites by adsorption onto silica. Polymer, 1984, V. 25, p. 1327-1332.

13. M.Bleha, E. Vatavova, M.Tlustakova, J.Kalal. Internal structure of porous glass coated with a polymer layer of poly(2,3-epoxypropylmethacrylate). Angew. Macromol. Chem., 1982, V. 107, p. 25-32.

14. В .В. Сабуров. Синтез композиционных перфторполимерсодержащих сорбентов и их использование в хроматографии биополимеров. Автореферат канд. дисс., Москва, 1989.

15. S.Imure, K.Fukano. Solid support for liquid chromatography. Патент США№ 4.140.653. РЖ Химия 20Б158711, 1979.

16. Y.Kosaka, M.Vemura, T.Hashimoto, K.Fukano. High-energy radiation induced polymerization on a chromatographic solid supports. Патент CIHA№ 4.045.353. Chemical Abstracts 85: 47865f.

17. В.П.Варламов, А.В.Власов, Т.Е.Банникова, Б.Л.Цетлин,

18. С.В .Рогожин. Способ получения водонерастворимых биологически-соединений. А.С. СССР № 689200, опубликовано в Б.И. № 44,1980.

19. В.И.Лозинский, В.П.Варламов, С.В.Рогожин. Способ получения тиолсодержащих сорбентов. А.С. СССР № 771106, опубликовано в Б.И. № 38, 1980.

20. K.Fukano, E.Kageyama. Study of radiatio-induced polymerization of vinyl monomers adsorbed on inorganic substances. X. Influence of H2O in the styrene-silica gel system. J.Polym. Sci. Polym. Chem Ed., 1977, V. 15, p. 65-72.

21. K.Fukano, E.Kageyama. Effect of p-benzoquinone and ammonia on radiation-induced polymerization of styrene adsorbed on silica gel. J. Polym. Sci., 1975, V. 13, p. 2103-2115.

22. С.Л.Мунд, М.А.Брук, А.Д.Абкин. Некоторые зависимости раздельной и совместной полимеризации винилацетатаи акрилонитрила в адсорбированном слое на поверхности аэросила. Высоколекулярные соединения., А, 1976, т. 18, с. 2631-2638.

23. М.Т.Брык. Полимеризация на твердой поверхности неорганических веществ. Киев, Наукова думка, 1981, с. 127.

24. Г.Флир, Я.Ликлема. Адсорбция полимеров. В кн.: Адсорбция из растворов на поверхностях твердых тел. Ред. Г.Парфит, К.Рочестер. М., Мир, 1986, с. 182-288.

25. T.Darling, J.Albert, P.Russel, D.M.Albert, T.W.Reid. Rapid purification of an RNA tumor virus and proteins by high performance steric exclusionchromatography on porous glass beads columns. J. Chromatogr., 1977, V. 131, p. 383-390.

26. В.Я.Мокеев, В.В .Поддужный, И.Д.Баранник. Способ получения пористого материала для хроматографии. А. С. СССР № 467883, опубликовано в Б.И. № 15, 1975.

27. Ch.Dulot, A.Peyrouset, R.Panaris, C.Hennoun, J.Vincent. Process of separation from an aqueous medium a protein or a morphologically organized unit by liquid exclusion chromatography. Патент США № 4.199.450, Chemical Abstracts 90: 134770t.

28. J.-L.Tayot, M.Tardy. Nouveau matériau capable de fixer de façon reversible des macromolecules biologiques, sa preparation et son application. Патент Франции № 2403098, Chemical Abstracts 91: 52235d.

29. Chromatography, 1979, V.185, p. 375-392.

30. G.Vanecek, F.E.Regnier. Variables in the high-performance anion-exchange chromatography of proteins. Analytical Biochemistry, 1980, V.109, p. 315-353.

31. G.Vanecek, F.E.Regnier. Macropourous high-performance anion-exchange supports for proteins. Analytical Biochemistry, 1982, V.121, p. 156-169.

32. A.V.Pirogov, M.M.Platonov, O.A.Shpigun. Polyelectrolyte sorbents based on aliphatic ionenes for ion chromatography. Journal of Chromatogrphy, A, 1999, V. 850, p. 53-63.

33. M.Wilchek. Stable and high capascity Sepharose derivatives for affinity chromatography. FEBS Lett., 1973, V. 33, p. 70-74.

34. P.A.Anderson, L.Jervis. Affinity purification on malate dehydrogenase and lactate dehydrogenase fromfish muscle on micro-spherical porous ceramic adsorbents. Biochem. Soc. Trans., 1977, V. 5, p. 728-731.

35. В.А.Кадушявичус, О.Ф.Суджувене, И.-Г.И.Песлякас. Способ получения сорбента для очистки белков. А.С. СССР № 1061828, опубликовано в Б.И. № 47, 1983.

36. F.Meiller, C.Bonnebat, M.Delenil. Modified porous bodies. Патент США№ 3.984.349, Chem. Abs. 78: 128813v.

37. А.В.Ильина, В.И.Лозинский, Ю.А.Давидович, С.В.Рогожин. Модифицированный полимерами макропористый кремнезем в качестве носителя для дисульфиднообменной хроматографии белков и способ его получения. А.С. СССР № 687081, опубликовано в Б.И. № 35, 1979.

38. A.Kurganov, O.Kuzmenko, V.A.Davankov, В. Eray, K.K.Unger, U.Trudinger. Effect of polystyrene coating in pore, structural and chromatographic properties of silica packings. J. Chromatogr., 1990, V. 506, p. 391.

39. V.A.Davankov, A.A.Kurganov, K.K.Unger. Reversed-phase highperformance liquid chromatography of proteins and polypeptides on polystyrene-coated silica supports. J. Chromatogr., 1990, V. 500, p. 519.47. см. 2, c. 86-98.

40. Хлорангидридсодержащне композиционные носители дляиммобилизации биоспецифических лигандов. Биоорганическаяхимия, 1985, № 11, с. 1527-1532.

41. A.E.Ivanov, N.V.Bovin, E.Yu.Korchagina, V.P.Zubov. Favourable biospecific reactivity of blood group В antigenic trisaccharide chemically attached to poly-N-(2-hydoxyethyl)acrylamide-coated porous glass. Biomedical Chromatography, 1992, V. 6, p. 39-42.

42. F.H.Arnold, H.W.Blanch, C.R.Wilke. Analysis of affinity adsorbents. I: Predicting the performance of affinity adsorbents. The Chemical Engineering Journal, 1985, V. 30, p. B9-B23.

43. F.H.Arnold, H.W.Blanch, C.R.Wilke. Analysis of affinity adsorbents. II: The characterization of affinity columns by pulse techniques. The Chemical Engineering Journal, 1985, V. 30, p. B25-B36.

44. W.Xu, F.E.Regnier. Electrokinetically-driven cation-exchange chromatography of proteins and its comparison with pressure-driven high-performanceliquid chromatography. Journal of Chromatogrphy, A, 1999, V. 853, p. 243-256.

45. I.S.Jones, P.Richmond. Effects of excluded volume on the conformation of adsorbed polymers. J. of the Chemical Society, 1977, V. 73, № 8, p. 1062-1070.

46. S.Nagaoka, Y.Mori. Interaction between blood components and hydrogels with poly(oxyethilene) chains. In: Sh.W.Shalaby (Ed.) Polymers as Biomaterials, 1983, Plenum Press, N.Y. and London, p. 361374.

47. A.S. Lea, J.D.Andrade, V.Hlady. Measurement of steric exclusion forces with the atomic force microscope. ACS Symposium Series, 1993, V. 532, p. 266-279.

48. Ю.С.Липатов, Л.М.Сергеева. Адсорбция полимеров. Наукова думка, 1972, с. 90.

49. Т.М.Бирштейн. Фазовые переходы при адсорбции макромолекул. Высокомолекулярные соединения, 1982, т. 24 А, с. 1828-1835.

50. C.AJ.Hoeve. General theory of polymer absorption at a surface. J. Polym. Sci., 1971, V. 34, p. 1

51. A.J.Silberberg. Adsorption of flexible macromolecules. IV. Effect of solvent-solute interaction, solute concentration and molecular weight. J. Chem. Phys., 1968, V. 48, p. 3835

52. R.J.Roe. Multilayer theory of adsorption from a polymer solution. J. Chem. Phys., 1974, V. 60, p. 4192

53. I.S Jones, P.Richmond. Effects of excluded volume on the conformation of adsorbed polymers. J. of the Chemical Society, 1977, V. 73, № 8, p. 1062-1070.

54. K.F.Freed. Excluded volume effects in polymers attached to surfaces: chain conformational renormalization group. J. Chem. Phys., 1983, V. 79, №6, p. 3121-3132.

55. M.Daoud, E.Leclerc. Adsorption from a mixture of a short and long chains. ACS Symposium Series, 1993, V. 532, p. 23-34.

56. A.M.Skvortsov, A.A.Gorbunov, D.Berekcan, B.Trathnigg. Liquid chromatography of macromolecules at the critical adsorption point: behaviour of a polymer chain inside pores. Polymer, 1998, V.39, № 2, p. 423-429.

57. E.Dickinson, S.R.Euston. Monte-Carlo simulation of colloidal systems. Advances in Colloid and Interface Science, 1992, V. 42, № OCT p. 89148.

58. S.M.King, T.Cosgrove. A dynamical Monte Carlo model of polymer adsorption. Macromolecules, 1993, V. 26, p. 5414-5422.

59. K.Binder, A.Milchev, J.Baschnagel. Simulation studies on the dynamics of polymers at interface. Annual Review of Materials Science, 1996, V. 26, p. 107-134.

60. P.Cifra, T.Bleha. Steric exclusion/adsorption compensation in partitioning of polymers into micropores in good solvents. Polymer, 2000, V. 41, p. 1003-1009.

61. M.Muthukumar, J.-Sh.Ho. Self-consistent field thery of surfaces with terminally attached chains. Macromolecules, 1989, V. 22, p. 965-973.

62. Ю.С.Липатов, Т.Т.Тодосийчук, В.Н.Черная. Адсорбция полимеров из разбавленных и концентрированных растворов. Успехи химии, 1995, т. 64, № 5, с. 497-504.-9079. K.Debell, T.Lookman. Surface phase-transitions in polymer systems.

63. Reviews of Modern Physics, 1993, V. 65, № 1, p. 87-113.

64. F.Rouland, F.Eirich. Flow rates of polymer solutions through porous disks as a function of solute. II. Thickness and structure of adsorbed polymer films. J. Polymer Sci., 1966, A-l, V. 4, p. 2401-2421.

65. I.Koral, R.Ullman, F.Eirich. The adsorption of a copolymer of vinyl pyrrolidoneand allylamine at the silica-solution interface. Eur. Polymer J., 1974, V.10,p. 1005-1010.

66. N.L.Filipova. Adsorption isotherms on planar surface under flow conditions by ellipsometry. Chemical Engineering Science, 1999, V. 54, p. 35-40.

67. S.Dasgupta. Adsorption behavior of macromolecules on colloidal magnetic oxide particles interfacial interaction and dispersion characteristics. Progress in Organic Coatings, 1991, V. 19, № 2, p. 123139.

68. K.S.Jeon, A.M.Lane. Polymer adsorption on magnetic particles. Journal of Magnetism and Magnetic Materials, 1999, V. 193, p. 300-302.

69. M.A.C.Stuart, G.J.Fleer. Adsorbed polymers in nonequilibrium situations. Annual Review of Materials Science, 1996, V. 26, p. 463-500.

70. M.M.Santore, M.S.Kelly, E.Mubarekyan, V.A.Rebar. Influence of polymer end-group chemistry and segment-substrate interactions on polymer adsorption-kinetics case-studies with polyethylene oxide. ACS Symposium Series, 1995, V. 615, p. 183-195.

71. P.G.Tong, B.L.Carvalho, J.S.Huang, L.J.Fetters. Light-scattering of adsorption of end-fonctionalized polymers in colloidal solutions. ACS Symposium Series, 1993, V. 532, p. 96-110.

72. T.Cosgrove, R.D.C.Richards, J.A.Semlien, J.P.R.Webster. Adsorption of end-fuctionalized and cyclic polymers. ACS Symposium Series, 1993, V. 532, p. 111-120.

73. V.Koutsov, E. W. van der Vegte, G.Hadziioannou. Direct view of structural regimes of end-grafted polymer monolayers: a scaning force microscopy study. Macromolecules, 1999, V. 32, p. 1233-1236.

74. A.E.Ivanov. Covalent adsorption of poly(p-nitrophenyl acrylate): kinetics at the early stage of the reaction. Macromolecular Reports, 1994, A31(suppl.5), p. 521-524.

75. Physica A, 1998, V. 249, p. 315-320.

76. S.C.Goheen, J.L.Hilsenbeck. High performance ion-exchange chromatography and adsorption of plasma proteins. J. Chromatogr. A, 1998, V. 816, p. 89-96.

77. W.Kopaciewicz, M.A.Rounds, J.Fausnaugh, F.E.Regnier. Retention model for for high-performance ion-exchange chromatography. J. Chromatogr., 1983, V. 266, p. 3-21.

78. K.Miyabe, G.Guiochon. Kinetic study of the mass transfer of bovine serum albumin in anion-exchange chromatography. J. Chromatogr. A, 2000, V. 866,p. 147-171.

79. Q.Luo, J.D.Andrade, K.D.Caldwell. Thin-layer ion-exchange chromatography of proteins. J. Chromatogr. A, 1998, V. 816, p. 97-105.

80. A.Baszkin, M.M.Boissonnade. Competitive adsorption of albumin and solution polyethylene interfaces In-Situ measurements. ACS Symposium Series, 1995, V. 602, p. 209-227.

81. H.Quiquampoix, J.Abadie, M.H.Baron, F.Leprince, P.T.Matumotopintro, R.G.Ratcliffe, S.Staunton. Mechanisms and consequences of protein adsorption on soil mineral surfaces. ACS Symposium Series, 1995, V. 602, p. 321-333.

82. W.Barford, R.C.Ball, C.M.M.Nex. A non-equlibrium configuration theory of polyelectrolyte adsorption. J. Chem. Soc., Faradey Trans. I, 1986, V. 82, p. 3233-3244.

83. W.Barford, R.C.Ball. Towards a complete configuration theory of non-equlibrium polymer adsorption. J. Chem. Soc., Faradey Trans. 1,1987, V. 83, p. 2515-2523.

84. M.C.Cafe, I.D.Robb. The adsorption of polyelectrolytes on barium sulfate crystals. J. Colloid Interface Sci., 1982, V. 86, p. 411-421.

85. S.H.Chang, K.M.Gooding, F.E.Regnier. High-performance liquid chromatography of proteins. J. Chromatogr., 1976, V. 125, p. 103-114.

86. A.Alpert. High-performance hydrophobic-interaction chromatography. J. Chromatogr., 1983, V. 359, p. 85-97.

87. Z.E1 Rassi, Cs. Horvath. Hydrophobic interaction chromatography of t-RNA's and proteins. J. Liq. Chromatogr., 1986, V. 6, p. 3245-3268.

88. Л.А.Остерман. Хроматография белков и нуклеиновых кислот, 1985, М. "Наука", с. 53-54.

89. T.Peters. Serum albumin. Adv. in Protein Chem., 1985,V. 37, p. 161-245.

90. G.-L.Freidli. Doctoral (PhD) thesis. Электронная публикация: http//www.friedli.com/research/home.