Характеристика цитотоксических глюкозилтрансфераз Legionella pneumophila тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат биологических наук Совкова, Ирина Владимировна

• Совкова, Ирина Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Совкова, Ирина Владимировна

Оглавление

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Бактериальные токсины

1.1.1 .Механизмы действия бактериальных токсинов на клетку

1.1.1.1. Токсины, воздействующие на клетку снаружи

1.1.1.2. Токсины, подавляющие синтез белка эукариотической клетки

1.1.1.3. Токсины, влияющие на митотический цикл эукариотической клетки

1.1.1.4. Токсины, влияющие на процессы экзоцитоза эукариотической клетки

1.1.1.5. Токсины, влияющие на передачу сигналов в эукариотической клетке

1.1.1.6. Токсины, влияющие на актиновый скелет эукариотической клетки

1.2. Токсические факторы бактерий с глюкозилирующей активностью

1.3. Глюкозилтрансфераза Lgtl L. pneumophila - родоначальник новой группы бактериальных эффекторов системы IV типа секреции

1.4. Заключение

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Материалы для клонирования

2.1.2. Реактивы

2.1.3. Вещества, используемые при культивировании

2.1.4. Бактериальные штаммы и клеточные линии

2.1.5. Материалы для хроматографии

2.1.6. Радиоактивные материалы

2.1.7. Лабораторное оборудование

2.2. Методы

2.2.1. Культивирование бактериальных штаммов

2.2.2. Постановка ПЦР

2.2.3. Молекулярное клонирование фрагментов ДНК

2.2.4. Экспрессия рекомбинантных белков

2.2.5. Определение концентрации белков

2.2.6. Электрофорез в SDS - полиакриламидном геле

2.2.7. Ферментативные исследования

2.2.8. Введение рекомбинантных белков в эукариотические клетки методом электропорации

2.2.9. Реакция транскрипции/трансляции in vitro

2.2.10. Определение уровня белкового синтеза в клетках

2.2.11. Изучение внутриклеточной инфекции Acanthamoeba castellanii

2.2.12. ПЦР в режиме реального времени

2.2.13. Определение антигенной специфичности белков методом имму ноб лоттинга

2.2.14. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Обнаружение генов потенциальных глюкозилтрансфераз в секвенированных геномах L. pneumophila

3.2. Клонирование и экспрессия генов lgt2 и lgt3

3.3. Глюкозилирующая активность новых белков L. pneumophila - Lgt2 и Lgt3

3.4. Механизм реакции глюкозилирования при участии Lgt L. pneumophila

3.5. Ингибирование белкового синтеза и цитотоксическая активность Lgt, Lgt2 и Lgt3

3.6. Продукция глюкозилтрансфераз L. pneumophila in vitro

3.7. Продукция глюкозилтрансфераз L. pneumophila in vivo

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЬ1

Список использованной литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

иптг изопропил-Р-О-тиогалактопиранозид

КД килодальтон

КОЕ колониеобразующая единица

1^1/2/3 глюкозилтрансферазы легионелл 1/2/3

БТ дифтерийный токсин

ВТ-А субъединица А дифтерийного токсина

еЕР1А эукариотический фактор элонгации 1А

ЕВЬ клетки легкого эмбриона коровы

Сасо2 клетки колоноректальной аденокарциномы человека

НеЬа клетки карциномы шейки матки

ВСУЕ забуференный угольно - дрожжевой экстракт

ВРРВ забуференный бульон на основе Протеозо-пептона №3

ЬВ среда Луриа - Бертани

МЕМ модифицированная среда Игла

ЭДТА этилендиамин тетраацетат

взт глутатион - Б - трансфераза

с№? дезоксинуклеозидтрифосфат

БОБ додецилсульфат натрия

ТАЕ трис - ацетатный буфер

ТЕМЕБ N,N,14' ,Ы'тетраметилэтилендиамин

ТВ 8 трис солевой буфер

ИАБ никотинамид аденин-динуклеотид

мкКи микрокюри

ПЛАТ полиакриламидный гель

УДФ уридиндифосфат

ТОСвУ полная корреляционная спектроскопия

ррт миллионная доля (единица химического сдвига)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика цитотоксических глюкозилтрансфераз Legionella pneumophila»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Легионелла является грам - отрицательной бактерией, вызывающей острую тяжелую пневмонию - болезнь легионеров (В. S. Fields, R. F. Benson et al., 2002). Известно более 50 видов легионелл, для 22 из них доказана роль в инфекционной патологии человека. Более чем в 90% случаев заболевания основной возбудитель - Legionella pneumophila. L. longbeachae, L. bozemanii, L. dumoffii и L. micdadei являются следующими по значимости этиологическими агентами легионеллеза, составляющие менее 10% легионеллезных инфекций в Европе и в США (Müder R.R., Yu V.L., 2002). Интересно, что в Австралии и Новой Зеландии L.longbeachae отвечает за 30% случаев заболевания легионеллезом (Yu V. L., Plouffe J. F. et al., 2002).

В России также фиксируются случаи заболевания легионеллезом. Так например, в 2003 и в 2004 годах зафиксировано 18 случаев легионеллеза (Беляев E.H., Ясинский A.A. и др., 2005). В 2005 году всего описано 26 случаев легионеллеза в России (Верещагин А.И., Чернявская О.П. и др., 2006). В 2004 году по 7 случаев легионеллеза отмечалось в Воронежской области и Санкт-Петербурге. В 2005 году из всех зарегистрированных случаев заболевания 3 отмечалось в Воронежской области, 12 случаев— в Санкт-Петербурге, по 2 в Ставропольском крае и Волгоградской области, 7 случаев в Мордовии (Верещагин А.И., Чернявская О.П. и др., 2006). Вспышка легионеллезной пневмонии была зафиксирована на Среднем Урале в июле 2007 года в Верхней Пышме.

С инфицированным аэрозолем легионеллы попадают в легкие, где и происходит их контакт с клетками-мишенями. Бактерии активно размножаются в макрофагах, моноцитах крови- и эпителиальных клетках, что приводит к накоплению возбудителя в высокой концентрации и развитию острого воспалительного процесса. Вслед за проникновением в клетку в составе фагосомы, легионеллы индуцируют ряд нарушений процессов фагоцитоза включая подавление закисления содержимого фагосомы, предотвращение слияния фагосом и лизосом, и формируют так называемые «репликативные

вакуоли», где и происходит активное размножение возбудителя (Bozue J. А., Johnson W., 1996; Tzivelekidis T., Jank T. et al., 2011; Horwitz M. A., 1983; Summersgill J. T., Raff M. J. et al., 1988). В завершении внутриклеточного цикла эукариотические клетки гибнут в результате индукции апоптоза или некроза, микроорганизмы выходят во внеклеточную среду и вновь инфицируют фагоциты.

Сложность взаимодействия легионелл с эукариотическими клетками обусловелена вовлечением в процесс специализированных молекул, продуцируемых бактериями и действующих на определенные эукариотические мишени. Действительно, были выделены и охарактеризованы многочисленные факторы, которые потенциально могут участвовать в процессах взаимодействия бактерий и хозяина. Они включали в себя низкомолекулярный цитотоксин, жгутики, белок теплового шока Hsp60, цитолизин - металлопротеиназа, фосфолипазы, фосфокиназы (Dowling J. N., Saha A. К. et al., 1992).

Значительный прогресс в исследовании механизмов патогенности легионелл был достигнут с использованием различных генетических подходов. В результате была показана важная роль нескольких генетических локусов и продуктов конкретных генов во внутриклеточной биологии возбудителя. К подобным продуктам относились белок Mip, PilD и система белковой секреции II типа, аргинин - зависимый транслокационный аппарат, жгутики IV типа, продукты локусов Ivh, enh, mil, pmi и так (Heuner К., Bender-Beck L. et al., 1995). Система секреции IVB типа, известная как Dot/Icm (Aragon V., S. Kurtz A., et al., 2000; Brand В. С., Sadosky А. В. et al., 1994) транспортирует в клетку-мишень многочисленные эффекторы, нарушающие сигнальные пути в эукариотических клетках (Belyi Y., Jank Т, Aktories К., 2011).

К группе новых факторов патогенности легионелл относится глюкозилтрансфераза Lgtl - бактериальный фермент, модифицирующий фактор элонгации 1А и вызывающий гибель эукариотических клеток путем блокирования синтеза белка. Lgtl был впервые обнаружен и охарактеризован в нашей лаборатории и представлял собой новый эффектор системы секреции IVb типа (Belyi I., Popoff M. R., Cianciotto N. P., 2003). Предварительные данные говорили о

возможности существования у легионелл и гомологичных белков со сходной ферментативной активностью. Это послужило основанием для проведения настоящей диссертационной работы по поиску новых глюкозилирующих токсинов у данных бактерий.

Цель диссертационной работы. Целью работы являлось идентификация и молекулярная характеристика новых глюкозилирующих ферментов L. pneumophila.

В связи с этим были поставлены следующие конкретные задачи:

• идентифицировать нуклеотидные последовательности, кодирующие глюкозилирующие токсины, в базе данных секвенированных геномов легионелл;

• клонировать, экспрессировать гены и получить рекомбинантные, очищенные, растворимые и биохимически активные глюкозилирующие ферменты;

• исследовать биохимические и цитотоксические свойства полученных рекомбинантных белков легионелл;

• исследовать продукцию глюкозилтрансфераз при росте Legionella pneumophila на питательных средах и в амебах.

Научная новизна работы. Впервые была обнаружена и охарактеризована группа глюкозилирующих эффекторных белков у возбудителя болезни легионеров. Наряду с уже описанным ранее ферментом Lgtl к этой группе относились вещества Lgt2 и Lgt3. Показано, что субстратом глюкозилирующих белков легионелл являлся эукариотический фактор элонгации 1А (eEFIA), компонент аппарата трансляции эукариотических клеток. Участком модификации eEFIA служил аминокислотный остаток серии в положении 53, глюкозилирование которого сопровождалось остановкой белкового синтеза и гибелью клеток млекопитающих. С использованием метода ядерно-магнитного резонанса (ЯМР) впервые показано, что присоединение остатка глюкозы к серину-53 под действием фермента легионелл происходит с сохранением а-конфигурации гликозидной связи, что позволяет отнести Lgtl к семейству "Retaining glucosyltransferases" GT88 (http://www.cazy.org/GT88.html). Впервые

установлено, что продукция Lgtl и Lgt2 осуществляется преимущественно в стационарной фазе роста микробной популяции, тогда как Lgt3 синтезируется в начальной фазе, предшествующей экспоненциальному росту культуры.

Практическое значение работы. Установлено, что гены, кодирующие белки Lgtl, Lgt2 и Lgt3, обнаруживались у представителей наиболее патогенного для человека вида - L. pneumophila и являются видоспецифическими маркерами для индикации наиболее значимого в инфекционной патологии человека вида легионелл - L. pneumophila.

По результатам работы подготовлены Методические рекомендации «Способ выявления высоковирулентных штаммов легионелл», утвержденные Советом по внедрению научных достижений в практику ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России 22 ноября 2012 г., протокол № 22 и «Определение токсичности факторов патогенности бактерий с использованием дрожжей Saccharomyces cerevisiae», утвержденные Советом по внедрению научных достижений в практику ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России 25 января 2013 г., протокол № 23.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Показано, что белки, кодируемые 11 рамками считывания, обнаруженными среди пяти секвенированных геномов штаммов L. pneumophila, высокогомологичны глюкозилтрансферазе Lgtl и образуют три семейства: Lgtl, Lgt2 и Lgt3.

2. Впервые показано, что глюкозилтрансферазы Lgt2 и Lgt3 L. pneumophila обладают глюкозилирующей активностью и блокируют белковый синтез путем модификации эукариотического фактора элонгации 1А в положении серин - 53.

3. Впервые выявлено, что синтез ферментов клетками L. pneumophila подвержен строгому контролю. Глюкозилтрансферазы Lgtl и Lgt2 вырабатываются бактериями в поздней стационарной фазе их роста in vitro в жидкой питательной среде и на поздней стадии взаимодействия с амебами in vivo в отличие от Lgt3, который определяется в культурах на ранней стадии роста in vitro и на ранних этапах взаимодействия с эукариотическими клетками.

Апробация работы. Результаты работы доложены на Международной заочно - практической конференции «Современные вопросы науки и образования - XXI век» (Тамбов, 2012), на Международной конференции «Биология - наука XXI века» (Москва, 2012), на X съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2012), на Международной заочно - практической конференции «Биология, Химия, Физика: вопросы и тенденции развития» (Новосибирск, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 научные статьи в зарубежных издательствах, рекомендованных ВАК, а также опубликовано 4 тезисов докладов.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, описание материалов и методов, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы и список использованной литературы, содержащий ссылки на 159 источников. Работа иллюстрирована 5 таблицами и 28 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Совкова, Ирина Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Впервые показано, что геномные последовательности штаммов L. pneumophila Philadelphia-1, Lens, Paris, Alcoy и Corby содержат 11 открытых рамок считывания, кодирующих гомологичные глюкозилтрансферазе Lgtl белки. Кодируемые белки образуют три семейства: Lgtl, Lgt2 и Lgt3.

2. Установлено, что клонированные гены глюкозилтрансфераз lgtl, lgt2 и lgt3 экспрессируются в Е. coli с образованием растворимых ферментов, сохраняющих свою биологическую активность, что позволяет получать ферменты в препаративных количествах.

3. Показано, что все исследованные штаммы L. pneumophila обладают генами lgtl и Igt 3, в то время как ген lgt2 присутствует не у всех штампов легионелл.

4. Показано, что субстратом глюкозилирующих белков легионелл Lgtl, Lgt2 и Lgt3 является эукариотический фактор элонгации 1А (eEFIA). Сайтом модификации субстрата служит серин-53, а реакция протекает с сохранением альфа-конфигурации гликозидной связи.

5. Выявлено, что глюкозилирование eEFIA приводит к остановке белкового синтеза и гибели клеток млекопитающих.

6. Впервые показано, что синтез глюкозилтрансфераз вирулентными клетками L. pneumophila подвержен специфичному контролю. Lgtl и Lgt2 вырабатываются преимущественно в стационарной фазе роста микробной популяции, тогда как Lgt3 синтезируется в лаг-фазе, предшествующей экспоненциальному росту культуры.

1.4. Заключение

После открытия Эмилем Ру и Александром Иерсиным в 1888 г. дифтерийного токсина интерес исследователей к данной группе факторов патогенности бактерий не ослабевает. Среди многообразия бактериальных токсинов можно выделить токсины, которые осуществляют свое биологическое действие путем присоединения остатка гексозы к определенной аминокислоте молекулы-мишени. Это так называемые «гликозилирующие токсины».

Гликозилирование эукариотических белков под действием бактериальных продуктов является важным процессом, определяющим патогенез многих инфекционных заболеваний. До последнего времени основной поток информации об участии бактериальных гликозилтрансфераз в вирулентности возбудителей был связан с изучением больших токсинов клостридий (С. difficile, С. novyi, С. sordellii и С. perfringens). Однако результаты исследований последнего десятилетия указывали на важную роль гликозилтрансфераз и у других возбудителей инфекционных заболеваний человека. С увеличением объема информации о структуре геномов различных инфекционных возбудителей появляются данные о наличии гликозилирующей активности у новых белков. Весьма вероятно, что исследования вирулентных свойств возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных в ближайшем будущем приведут к обнаружению новых веществ, выполняющих свою функцию путем гликозилирования тех или иных эукариотических белков.

Ярким подтверждением этому является цикл работ по обнаружению и изучению глюкозилтрансферазы Lgtl у L. pneumophila. Фермент обладал способностью глюкозилировать эукариотический фактор элонгации 1А, подавлять рибосомный синтез белка и убивать эукариотические клетки. Полученные экспериментальные данные послужили основой для дальнейшего углубленного изучения природы глюкозилирующей активности у легионелл и поиска новых ферментов сходного типа в клетках возбудителя легионеллеза.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы 2.1.1. Материалы для клонирования

В работе использовали следующие материалы для клонирования: дезоксинуклеотидтрифосфаты, FideliTaq ДНК-полимераза, ферменты для рестрикции EcoRI, Salí, ВатШ, Sma, Xhol (GE Helthcare, Москва, Россия). Экспрессирующие векторные системы pGEX-4Tl, pGEX-4T2, pGEX-4T3 (GE Helthcare, Москва, Россия), pET-28a и pET-28c (Novagen, Madison, WI).

2.1.2. Реактивы

Изопропил-Р-О-тиогалактопиранозид (IPTG) (Sigma, Moscow, Russia); ампициллин, канамицин; тромбин; наборы для выделения ДНК (GE Helthcare, Москва); набор для выделения РНК RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Germany); набор для проведения ПЦР с обратной транскриптазой QuantiTect Rev transcription kit (Qiagen); набор для проведения ПЦР в реальном времени QuantiTect SYBR green PCR kit (Qiagen), Кумасси бриллиантовый голубой G-250 (Serva, Германия); бычий сывороточный альбумин; хлорид натрия; хлорид марганца; хлорид магния; хлорид никеля; бромистый этидий (Applichem); додецилсульфат натрия (SDS) (Sigma); М,Ы,1\Р,1\Гтетраметилэтилендиамин (TEMED); глицерин; мочевина (Рапгеас); акриламид; N'N'- метилен -бисакриламид; персульфат аммония; Твин-20; L-цистеин; Тритон Х-100; ЭДТА двунатриевая соль (таблица 1).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Совкова, Ирина Владимировна, 2013 год

Список использованной литературы

1. Беляев Е.Н. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации в 2003 - 2004 гг. / Е.Н. Беляев, А.А. Ясинский, Е.А. Котова, Т.Т. Штинова // Информационный сборник статистических и аналитических материалов. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии, 2005.

2. Верещагин А.И. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации в 2004 - 2005 гг. / А.И. Верещагин, О.П. Чернывская, Е.А. Котова, Т.Т. Штинова // Информационный сборник статистических и аналитических материалов. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии, 2006.

3. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. - М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

4. Супотницкий, М.В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии / М.В.Супотницкий. — 2-е изд. — М.: Вузовская книга, 2005. — 376 с.

5. Тартаковский, И. С. Легионеллез: роль в инфекционной патологии человека / И. С. Тартаковский, А. И. Синопальников // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2007. - № 3. - С. 219 -232.

6. Abu-Zant, A. Anti-apoptotic signalling by the Dot/Icm secretion system of L. Pneumophila / A. Abu-Zant, S. Jones, R. Asare, J. Suttles, C. Price, J. Graham, Y. A. Kwaik // Cell. Microbiol. - 2007. - Vol. 9. - P. 246 - 264.

7. Acheson, D.W. Translocation of Shiga toxin across polarized intestinal cells in tissue culture / D. W. Acheson, R. Moore, S. De Breucker, L. Lincicome, M. Jacewicz, E. Skutelsky, G. T. Keusch // Infect. Immun. -1996. - Vol. 64. - P. 3294 - 3300.

8. Aktories, K. ADP-ribosylation of actin by clostridial toxins / K. Aktories, A. Wegner // J. Cell Biol. - 1989. - Vol. 109. - P. 1385 - 1387.

9. Aktories, K. A new turn in Rho GTPase activation by Escherichia coli cytotoxic necrotizing factors / K. Aktories, G. Schmidt // Trends Microbiol. - 2003. - Vol. 11, №4. - P. 152 - 5.

10. Aktories, K. Reviews of physiology, biochemistry and pharmacology / K. Aktories, I. Just (eds.). - Springer, Berlin, Germany., 2004. - Vol. 152.

11.Alii, O.A.T. Temporal pore formation-mediated egress from macrophages and alveolar epithelial cells by Legionella pneumophila / O.A.T. Alii, L.-Y. Gao, L.L. Pedersen, S. Zink,M. Radulic, M. Doric, Y. Abu Kwaik // Infect. Immun. - 2000. - Vol. 68. - P. 6431 - 6440.

12.Allured, V. S. Structure of exotoxin A of Pseudomonas aeruginosa at 3.0-Angstrom resolution / V. S. Allured, R. J. Collier, S. F. Carroll, D. B. McKay // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1986. - Vol. 83, №5. - P. 1320 -1324.

13.Alouf, J.E. The comprehensive sourcebook of bacterial protein toxins / J.E. Alouf, M.R. Popoff (eds). - Third edition. - Elsevier Ltd, Oxford, UK., 2006.- 1047 p.

14.Aragon, V. Secreted enzymatic activities of wild type and /?z7Z)-deficient Legionella pneumophila / V. Aragon, S. Kurtz, A. Flieger, B. Neumeister, N. P. Cianciotto // Infect. Immun. - 2000. - Vol. 68. - P. 1855 - 1863.

15.Bachman, M. A. RpoS co-operates with other factors to induce Legionella pneumophila virulence in the stationary phase / M. A. Bachman, M. S. Swanson//Mol. Microbiol. -2001. -Vol. 40, №5.-P. 1201 - 1214.

16.Banga, S. Legionella pneumophila inhibits macrophage apoptosis by targeting pro-death members of the Bcl2 protein family / Banga, S., Gao, P., Shen, X., Fiscus, V., Zong, W. X., Chen, L., and Luo, Z. Q. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2007. - Vol. 104. - P. 5121 - 5126.

17.Barroso, L.A. Mutagenesis of the Clostridium difficile toxin B gene and effect on cytotoxic activity / L. A. Barroso, J. S. Moncrief, D. M. Lyerly, T. D. Wilkins // Microb. Pathog. - 1994. - Vol. 16. - P. 297 - 303.

18.Barth, H. Binary bacterial toxins: biochemistry, biology, and applications of common Clostridium and Bacillus proteins / H. Barth, K. Aktories, M. R. Popoff, B. G. Stiles // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 2004. - Vol. 68. - P. 373 - 402.

19.Belyi, I. Purification and characterization of a UDP-glucosyltransferase produced by Legionella pneumophila / I. Belyi, M. R. Popoff, and N. P. Cianciotto // Infect Immun. - 2003. - Vol. 71. - P. 181 - 186.

20.Belyi, Y. Legionella pneumophila glucosyltransferase inhibits host elongation factor 1A / Y. Belyi, R. Niggeweg, B. Opitz, M. Vogelsgesang, S. Hippenstiel, M. Wilm, K. Aktories // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. -2006.-Vol. 103.-P. 16953 - 16958.

21.Belyi, Y. Lgt: a family of cytotoxic glucosyltransferases produced by Legionella pneumophila / Y. Belyi, I. Tabakova, M. Stahl, K. Aktories // J. Bacteriol. - 2008. - Vol. 190. - P. 3026 - 3035.

22.Belyi, Y. Region of elongation factor 1A1 involved in substrate recognition by Legionella pneumophila glucosyltransferase Lgtl: identification of Lgtl as a retaining glucosyltransferase / Y. Belyi, M. Stahl, I. Sovkova, P. Kaden, B. Luy, K. Aktories // J. Biol. Chem. - 2009. - Vol. 284, № 30. -P. 20167-20174.

23.Belyi, Y. Bacterial toxin and effector glycosyltransferases / Y. Belyi, K. Aktories // Biochim. Biophys. Acta. - 2010. - Vol. 1800, № 2. - P. 134 -143.

24. Belyi Y., Effector glycosyltransferases in Legionella / Y. Belyi, T. Jank, K. Aktories // Front. Microbiol. - 2011.- Vol. 2. - P. 76.

25.Berger, K. H. Two distinct defects in intracellular growth complemented by a single genetic locus in Legionella pneumophila / K. H. Berger, R. R. Isberg // Mol. Microbiol. - 1993. - Vol. 7, № 1. - P. 7 - 19.

26.Bhakdi, S. Alpha-toxin of Staphylococcus aureus / S. Bhakdi, Jensen J. Tranum // Microbiol. Rev. - 1991. - Vol. 55. - P. 733 - 751.

27.Bhakdi, S. Staphylococcal alpha-toxin, streptolysin-0 and Escherichia coli hemolysm: prototypes of pore-forming bacterial cytolysins / S. Bhakdi, H. Bayley, A. Valeva, I. Walev, B. Walker, M. Kehoe, M. Palmer // Arch. Microbiol. - 1996. - Vol. 165. - P. 73 - 79.

28.Blumenthal, B. The Cytotoxic Necrotizing Factors from Yersinia pseudotuberculosis and from Escherichia coli Bind to Different Cellular Receptors but Take the Same Route to the Cytosol / B. Blumenthal, C. Hoffmann, K. Aktories, S. Backert, G. Schmidt // Infect. Immun. - 2007. -Vol. 75, №7. - P. 3344 - 3353.

29.Boquet, P. The cytotoxic necrotizing factor 1 (CNF1) from Escherichia coli / P. Boquet // Toxicon. - 2001. - Vol. 39. - P. 1673 - 1680.

30.Bozue, J.A. Interaction of Legionella pneumophila with Acanthamoeba castellanii: uptake by coiling phagocytosis and inhibition of phagosome-lysosome fusion / J. A. Bozue, W. Johnson // Infec. Immun. - 1996. - Vol. 64.-P. - 668 - 673.

31.Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / M. M. Bradford // Anal. Biochem. - 1976. - Vol. 72. - P. 248 -254.

32.Bradley, K. A. Identification of the cellular receptor for anthrax toxin / K.A. Bradley, J. Mogridge, M. Mourez, R.J. Collier, J.A. Young // Nature. - 2001. - Vol. 414, № 6860. - P. 225 - 229.

33.Brand, B. C. The Legionella pneumophila icm locus: a set of genes required for intracellular multiplication in human macrophages / B. C. Brand, A. B. Sadosky, H.A. Shuman // Mol. Microbiol. - 1994. - Vol. 14, №4.-P. 797 - 808.

34.Brassinga, A. K. A 65-kilobase pathogenicity island is unique to Philadelphia-1 strains of Legionella pneumophila / A. K. Brassinga, M. F. Hiltz, G. R. Sisson, M. G. Morash, N. Hill, E. Garduno, P. H. Edelstein, R.

A. Garduno, P. S. Hoffman // J. Bacteriol. - 2003. - Vol. 185. - P. 4630 -4637.

35.Brennan, M. J. Lectin-like binding of pertussis toxin to a 165-kilodalton Chinese hamster ovary cell glycoprotein / M. J. Brennan, J. L. David, J. G. Kenimer, C. R. Manclark // J. Biol. Chem. - 1988. - Vol. 263, №10. - P. 4895 - 4899.

36.Broich, M. The global regulatory proteins LetA and RpoS control phospholipase A, lysophospholipase A, acyltransferase, and other hydro lytic activities of Legionella pneumophila JR32 / M. Broich, K. Rydzewski, T. L. McNealy, R. Marre, A. Flieger // J. Bacteriol. - 2006. -Vol. 188, №4.-P. 1218- 1226.

37.Browne, G. J. Regulation of peptide-chain elongation in mammalian cells / G. J. Browne, C. G. Proud // Eur. J. Biochem. - 2002. - Vol. 269, № 22. -P. 5360 - 5368.

38.Bruggemann, H. C. Adaptation of Legionella pneumophila to the host environment: role of protein secretion, effectors and eukaryotic-like proteins / H. Bruggemann, C. Cazalet, C. Buchrieser // Curr. Opin. Microbiol. - 2006. - Vol. 9, № 1. - P. 86 - 94.

39.Burkhard, P. Coiled coils: a highly versatile protein folding motif / P. Burkhard, J. Stetefeld, S. V. Strelkov // Trends Cell Biol. - 2001. - Vol. 11, №2.-P. 82- 88.

40.Busch, C. A common motif of eukaryotic glycosyltransferases is essential for the enzyme activity of large clostridial cytotoxins / C. Busch, F. Hofmann, J. Selzer, S. Munro, D. Jeckel, K. Aktories // J. Biol. Chem. -1998.-Vol. 273, №31.-P. 19566- 19572.

41.Busch, C. Biological activity of a C-terminal fragment of Pasteurella multocida toxin / C. Busch, J. Orth, N. Djouder, K. Aktories // Infect. Immun. - 2001. - Vol. 69, № 6. - P. 3628 - 3634.

42.Byrne, B. Expression of Legionella pneumophila Virulence Traits in Response to Growth Conditions / B. Byrne, Michele S. Swanson // Infect. Immun. - 1998. - V. 66, №7. - P. 3029.

43.Carbonetti, N. H. Pertussis toxin and adenylate cyclase toxin: key virulence factors of Bordetella pertussis and cell biology tools / N. H. Carbonetti // Future Microbiol. - 2010. - Vol. 5, №3. - P. 455 - 469.

44.Carroll, S. F. Amino acid sequence homology between the enzymic domains of diphtheria toxin and Pseudomonas aeruginosa exotoxin A / S. F. Carroll, R. J. Collier //Mol. Microbiol. - 1988. - Vol. 2. - P. 293 - 296.

45.Chopra, A. P. Anthrax lethal factor proteolysis and inactivation of MAPK kinase / A. P. Chopra, S. A. Boone, X. Liang, N. S. Duesbery // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278. - P. 9402 - 9406.

46.Coburn, J. Exoenzyme S of Pseudomonas aeruginosa ADP-ribosylates the intermediate filament protein vimentin / J. Coburn, T. S. Dillon, B. H. Iglewski, D. M. Gill // Infect. Immun. - 1989. - Vol. 57. - P. 996 - 998.

47.Cruz-Migoni, A. A Burkholderia pseudomallei toxin inhibits helicase activity of translation factor eIF4A / A. Cruz-Migoni, G. M. Hautbergue, P. J. Artymiuk, P. J. Baker, M. Bokori-Brown, C. T. Chang et al. // Science. -2011.-Vol. 334, №6057.-P. 821-4.

48.de Felipe, K. S. Evidence for acquisition of Legionella type IV secretion substrates via interdomain horizontal gene transfer / K. S. de Felipe, S. Pampou, O. S. Jovanovic, C. D. Pericone, S. F. Ye, S. Kalachikov, H. A. Shuman // J. Bacteriol. - 2005. - Vol. 187, № 27. - P. 7716 - 7726.

49.Den Boer, J. W. A large outbreak of Legionnaires' disease at a flower show, the Netherlands, 1999 / J. W. Den Boer, E. P .Yzerman, J. Schellekens, K. D. Lettinga, H. C. Boshuizen, J. E. Van Steenbergen, A. Bosman, S. Van den Hof, H. A. Van Vliet, M. F. Peeters, R. J. Van Ketel, P. Speelman, J. L. Kool, M. A. Conyn - Van Spaendonck // Emerg. Infect. Dis. - 2002. - Vol. 8, № 1. - P. 37 - 43.

50.de Visser, J. A. Perspective: evolution and detection of genetic robustness / J. A. de Visser, J. Hermisson, G. P. Wagner et al. // Evolution. - 2003. -Vol. 57.-P. 1959- 1972.

51.Dolly, J.O. The structure and mode of action of different botulinum toxins / J. O. Dolly, K. R. Aoki // Eur. J. Neurol. - 2006. - Vol. 13, №4. - p. 1 - 9.

52.Dove, C.H. Molecular characterization of the Clostridium difficile toxin A gene / C. H. Dove, S. Z. Wang, S. B. Price, C. J. Phelps, D. M. Lyerly, T. D. Wilkins, J. L. Johnson // Infect. Immun. - 1990. - Vol. 58. - P. 480 -488.

53.Dowling, J.N. Virulence factors of the family Legionellaceae / J. N. Dowling, A. K. Saha, R. H. Glew // Microbiol. Rev. - 1992. - Vol. 56, №1. - P. 32 - 60.

54.Eidels, L. Membrane receptors for bacterial toxins / L. Eidels, R. L. Proia, D. A. Hart // Microbiol. Rev. - 1983. - Vol. 47, №4. - P. 596 - 620.

55.Edelstein, P. H. Improved semiselective medium for isolation of Legionella pneumophila from contaminated clinical and environmental specimens / P. H. Edelstein//J. Clin. Microbiol. - 1981. -Vol. 14, № 3.-P. 298 - 303.

56.Esminger, A. W. Legionella pneumophila Dot/Icm translocated substrates: a sum of parts / A. W. Esminger, R. R. Isberg // Curr. Opin. Microbiol. -2009.- Vol.12, №1.-P. 67-73.

57.Fabbri, A. Escherichia coli Cytotoxic Necrotizing Factor 1 (CNF1): Toxin Biology, in Vivo Applications and Therapeutic Potential / A. Fabbri, S. Travaglione, C. Fiorentini // Toxins (Basel). - 2010. - Vol. 2, №2. - P. 283 -96.

58.Faucher, S. P. Legionella pneumophila during intracellular multiplication in human macrophages / S. P. Faucher, Muller C. A., Shuman H. A. // Front. Micribiol. - 2011. - Vol. 2. - Article 60.

59.Feldman M. A Specific Genomic Location within the icmldot Pathogenesis Region of Different Legionella Species Encodes Functionally Similar but

Nonhomologous Virulence Proteins / M. Feldman, G. Segal // Infect. Immun. - 2004. - P. 4503 -4511. 60.Fields B. S. Legionella and Legionnaires' Disease: 25 Years of Investigation / B. S. Fields, R. F. Benson, R. E. Besser // Clin. Micr. Rew. -2002.-Vol. 15, №3.-P. 506-526. öl.Fliermans, C. B. Ecology of Legionella: From Data to Knowledge with a Little Wisdom / C. B. Fliermans // Microb. Ecol. - 1996. - V. 32, №2. - P. 203 - 28.

62.Florin, I. Internalization of Clostridium difficile cytotoxin into cultured human lung fibroblasts / I. Florin, M. Thelestam // Biochim. Biophys. Acta. - 1983. - Vol. 763. - P. 383 - 392.

63.Friedman, R. L. Identification of a cytotoxin produced by Legionella pneumophila / R. L. Friedman, B. H. Iglewski, R. D. Miller // Infect. Immun. - 1980. - Vol. 29, № 1. - P. 271 - 274.

64.Fukui, A. Horiguchi Y. Bordetella dermonecrotic toxin exerting toxicity through activation of the small GTPase Rho / A. Fukui, Y. Horiguchi // J. Biochem. - 2004. - Vol. 136, №4. - P. 415 - 9.

65.Fukuta, S. Comparison of the carbohydrate-binding specificities of cholera toxin and Escherichia coli heat-labile enterotoxins LTh-I, LT-IIa, and LT-Iib / S. Fukuta, J. L. Magnani, E. M. Twiddy, R. K. Holmes, V. Ginsburg // Infect. Immun. - 1988. - Vol. 56, №7. - P. 1748 - 1753.

66.Gal-Mor, O. Analysis of DNA regulatory elements required for expression of the Legionella pneumophila icm and dot virulence genes / O. Gal-Mor, T. Zusman, G. Segal // J. Bacteriol. - 2002. - Vol. 184, № 14. - P. 3823 -3833.

67.Gao, L.-Y. Apoptosis in macrophages and alveolar epithelial cells during early stages of infection by Legionella pneumophila and its role in cytopathogenicity / L.-Y. Gao, Y. Abu Kwaik // Infect. Immun. - 1999. -Vol. 67.-P. 862-870.

68.Gao, L.-Y. The mechanism of killing and exiting the protozoan host Acanthamoeba polyphaga by Legionella pneumophila / L.-Y. Gao, Y. Abu Kwaik // Environ. Microbiol. - 2000. - Vol. 2. - P. 79 - 90.

69.Garcia-Fulgueiras, A. Legionnaires' disease outbreak in Murcia, Spain / A. García-Fulgueiras, C. Navarro, D. Fenoll, J. García, P. González-Diego, T. Jiménez-Buñuales, M. Rodriguez, R. Lopez, F. Pacheco, J. Ruiz, M. Segovia, B. Balandrón, C. Pelaz // Emerg. Infect. Dis. - 2003. - Vol. 9, № 8. - P. 915 - 921.

70.Ge, Z. In vivo virulence properties of bacterial cytolethal-distending toxin / Z. Ge, D. B. Schauer, J. G. Fox // Cell. Microbiol. - 2008. - Vol. 10. -P. 1599- 1607.

71.Gross, S. R. Translation elongation factor 1A is essential for regulation of the actin cytoskeleton and cell morphology / S. R. Gross, T. G. Kinzy // Nat. Struct. Mol. Biol. - 2005. - V. 12, №9. - P. 772 - 778.

72.Harrison, R. Plasticity of genetic interactions in metabolic networks of yeast / R. Harrison, B. Papp, C. Pal, S. G. Oliver, D. Delneri // Proc. Natl. Acad. Sci.- 2007. - Vol. - 104. - P. 2307 - 2312.

73.Hartman, J. L. Principles for the buffering of genetic variation / J. L. Hartman, B. Garvik, L. Hartwell // Science. - 2001. - Vol. 291. - P. 1001 - 1004.

74.Heuner, K. Cloning and genetic characterization of the flagellum subunit gene (flaA) of Legionella pneumophila serogroup 1 / K. Heuner, L. Bender-Beck, B. C. Brand, P. C. Lück, K. H. Mann, R. Marre, M. Ott, J. Hacker // Infect. Immun. - 1995. - Vol. 63, №7. - P. 2499 - 2507.

75.Hoffmann, C. The Yersinia pseudotuberculosis cytotoxic necrotizing factor (CNFY) selectively activates RhoA / C. Hoffmann, M. Pop, J. Leemhuis, J. Schirmer, K. Aktories, G. Schmidt // J. Biol. Chem. - 2004. - Vol. 279. -P. 16026- 16032.

76.Horwitz M. A. The Legionnaires' disease bacterium (Legionella pneumophila) inhibits phagosome-lysosome fusion in human monocytes / M. A. Horwitz//J. Exp. Med. - 1983. -Vol. 158. - P. 2108 - 2126.

77.Horwitz, M. A. Legionella pneumophila inhibits acidification of its phagosome in human monocytes / M. A. Horwitz, F. R. Maxfield // J. Cell Biol. - 1984. - Vol. 99. - P. 1936 - 1943.

78.Ivanov, S. S. Modulation of ubiquitin dynamics and suppression of DALIS formation by the Legionella pneumophila Dot/Icm system / S. S. Ivanov, C. R. Roy // Cell. Microbiol. - 2009. - Vol. 11, №2. - P. 261 - 278. 79.Ingmundson, A. Legionella pneumophila proteins that regulate Rabl membrane cycling / A. Ingmundson, A. Delprato, D. G. Lambright, C. R. Roy // Nature. - 2007. - Vol. 450. - P. 365 - 369.

80.Jank, T. Structure and mode of action of clostridial glucosylating toxins: the AB CD model / T. Jank, K. Aktories // Trends Microbiol. - 2008. - Vol. 16.-P. 222-229.

81.Jernigan, D. B. Outbreak of Legionnaires' disease among cruise ship passengers exposed to a contaminated whirlpool spa / D. B. Jernigan, J. Hofmann, M. S. Cetron, C. A. Genese, J. P. Nuorti, B. S. Fields, R. F. Benson, R. J. Carter, P. H. Edelstein, I. C. Guerrero, S. M. Paul, H. B. Lipman, R. Breiman // Lancet. - 1996. - Vol. 347, № 9000. - P. 494 -499.

82.Just, I. Glucosylation of Rho proteins by Clostridium difficile toxin B / I. Just, J. Selzer, M. Wilm, C. Von Eichel-Streiber, M. Mann, K. Aktories // Nature. - 1995. - Vol. 375, № 6531. - P. 500 - 503.

83.Just, I. Large clostridial cytotoxins / I. Just, R. Gerhard // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. - 2004. - Vol. 152. - P. 23 - 47.

84.Krueger K. M. The family of bacterial ADP-ribosylating exotoxins / K. M. Krueger, J.T. Barbieri // Clin. Microbiol. Rev. - 1995. - Vol. 8. - P. 34 -47.

85.Kaslow, H. R. Pertussis toxin and target eukaryotic cells: binding, entry, and activation / H. R. Kaslow, D. L. Burns // FASEB J. - 1992. - Vol. 6. -P. 2684-2690.

86.Kubori, T. Legionella translocates an E3 ubiquitin ligase that has multiple U-boxes with distinct functions / A. Hyakutake, H. Nagai // Mol. Microbiol. - 2008.-Vol. 67.-P. 1307- 1319.

87.Ladant, D. Bordetella pertussis adenylate cyclase: a toxin with multiple talents / D. Ladant, A. Ullmann // Trends Microbiol. - 1999. - Vol. 7. - P. 172- 176.

88.Laemmli, U. K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4/ U. K. Laemmli // Nature. - 1970. - V. 227. - P. 680-685.

89.Laguna, R. K. A Legionella pneumophila-translocated substrate that is required for growth within macrophages and protection from host cell death / R. K. Laguna, E. A. Creasey, Z. Li, N. Valtz, R. R. Isberg // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2006. - V. 103, №49. - P. 18745 - 18750.

90.Lenski, R. E. Balancing robustness and evolvability / R. E. Lenski, J. E. Barrick, C. Ofria // PloS. Biol. - 2006 - Vol. 4, №12. - P. 428.

91.Lesieur, C. Membrane insertion: the strategies of toxins / C. Lesieur, Semjen B. Vecsey, L. Abrami, M. Fivaz, Gisouvan der Goot F. // Mol. Membr. Biol. - 1997. - Vol. 14. - P. 45 - 64.

92.Lomma, M. The Legionella pneumophila F-box protein Lpp2082 (AnkB) modulates ubiquitination of the host protein parvin B and promotes intracellular replication / M. Lomma, D. Dervins-Ravault, M. Rolando, T. Nora, H. J. Newton, F. M. Sansom, T. Sahr, L. Gomez-Valero, M. Jules, E. L. Hartland, C. Buchrieser // Cell. Microbiol. - 2010. - Vol. 12. - P. 1272 - 1291.

93.LU, W. Structural basis of the action of glucosyltransferase Lgtl from Legionella pneumophila / W. Lii, J. Du, M. Stahl, T. Tzivelekidis, Y.

Belyi, S. Gerhardt, K. Aktories, O. Einsle // J. Mol. Biol. - 2010. - Vol. 396.-P. 321 -331.

94.Luo, Z. Q. Multiple substrates of the Legionella pneumophila Dot/Icm system identified by interbacterial protein transfer / Z. Q. Luo, R. R. Isberg // Proc. Natl. Acad. Sei. USA - 2004. - Vol. 101, № 3. - P. 841 - 846.

95.Machner, M. P. Targeting of host Rab GTPase function by the intravacuolar pathogen Legionella pneumophila / M. P. Machner, R. R. Isberg // Dev. Cell. - 2006. - Vol. 11. - P. 47 - 56.

96.Machner, M. P. A bifunctional bacterial protein links GDI displacement to Rabl activation / M. P. Machner, R. R. Isberg // Science. - 2007. - Vol. 318.-P. 974-977.

97. Malyukova, I. Macropinocytosis in Shiga toxin 1 uptake by human intestinal epithelial cells and transcellular transcytosis /1. Malyukova, K. F. Murray, C. Zhu, E. Boedeker, A. Kane, K. Patterson, J. R. Peterson, M. Donowitz, O. Kovbasnjuk // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver. Physiol.-2009. - Vol. 296, №1. - P.G78 - G92.

98.Marra, A. Identification of a Legionella pneumophila locus required for intracellular multiplication in human macrophages / A. Marra, S. J. Blander, M. A. Horwitz, H. A. Shuman. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -1992. - Vol. 89, № 20. - P. 9607 - 9611.

99.Mattoo, S. Molecular pathogenesis, epidemiology, and clinical manifestations of respiratory infections due to Bordetella pertussis and other Bordetella subspecies / S. Mattoo, J. D. Cherry // Clin. Microbiol. Rev. - 2005. - Vol. 18. - P. 326 - 382.

100. Moffat, J. F. A quantitative model of intracellular growth of Legionella pneumophila in Acanthamoeba castellanii / J. F. Moffat, L. S. Tompkins // Infect. Immun. - 1992. - Vol. 60, № 1. - P. 296 - 301.

101. Molmeret, M. The C-terminus of IcmT is essential for pore formation and for intracellular trafficking of Legionella pneumophila within Acanthamoeba polyphaga / M. Molmeret, O.A. Alii, M. Radulic, M.

Susa, M. Doric, Y. Abu Kwaik // Mol. Microbiol. - 2002. - Vol. 43. - P. 1139- 1150.

102. Molmeret, M. icmT is essential for pore formation-mediated egress of Legionella pneumophila from mammalian and protozoan cells / M. Molmeret, O.A. Alii, S. Zink, A. Flieger, N.P. Cianciotto, Y. Abu Kwaik // Infect. Immun. - 2002. - Vol. 70. - P. 69 - 78.

103. Molmeret M. Cell biology of the intracellular infection by Legionella pneumophila / M. Molmeret, D. M. Bitar, L. Han, Y. A. Kwaik // Microbes. Infect. - 2004. - Vol. 6, № 1. - P. 129 - 139.

104. Muder, R.R., Infection due to Legionella species other than L.pneumophila / R. R. Muder, V. L. Yu // Clin. Infect. Dis. - 2002. - Vol. 35.-P. 990-998.

105. Muller, M. P. The Legionella effector protein DrrA AMPylates the membrane traffic regulator Rablb / M. P. Muller, H. Peters, J. Blumer, W. Blankenfeldt, R. S. Goody, A. Itzen // Science. - 2010. - Vol. 329. - P. 946 -949.

106. Murata, T. The Legionella pneumophila effector protein DrrA is a Rabl guanine nucleotide-exchange factor / T. Murata, A. Delprato, A. Ingmundson, D. K. Toomre, D. G. Lambright, C. R. Roy // Nat. Cell Biol. -2006.-Vol. 8.-P. 971 -977.

107. Nagai, H. The DotA protein from Legionella pneumophila is secreted by a novel procces that requires the Dot/Icm transporter / H. Nagai, C. R. Roy // EMBO J. - 2001. - Vol. 20. - P. 5962 - 5970.

108. Nagai, H. A bacterial guanine nucleotide exchange factor activates ARF on Legionella phagosomes / H. Nagai, J. C. Kagan, X. Zhu, R. A. Kahn, C. R. Roy. // Science. - 2002. - Vol. 295, № 5555. - P. 679 - 682.

109. Naglich, J. G. Expression cloning of a diphtheria toxin receptor: identity with a heparinbinding EGF-like growth factor precursor / J. G. Naglich, J. E. Metherall, D. W. Russell, L. Eidels // Cell. - 1992. - Vol. 69. -P. 1051 - 1061.

110. Nash, T. W. Interaction between the Legionnaires' disease bacterium {Legionella pneumophila) and human alveolar macrophages. Influence of antibody, lymphokines, and hydrocortisone / T. W. Nash, D. M. Libby, M. A. Horwitz // J. Clin. Investig. - 1984. - Vol. 74. - P. 771 - 782.

111. Newton, H.J. Molecular pathogenesis of infections caused by Legionella pneumophila / H. J. Newton, D. K. Ang, I. R.van Driel, E. L. Hartland // Clin. Microbiol. Rev. - 2010. - Vol. 23. - P. 274 - 298.

112. Ninio, S. Effector proteins translocated by Legionella pneumophila: strength in numbers / S. Ninio, C. R. Roy // Trends Microbiol. - 2007. -Vol. 15, №8.- P. 372 -380.

113. O'Brien A. D. Shiga and Shiga-like toxins / A. D. O'Brien, R. K. Holmes // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 1987. - Vol. 51. - P. 206 - 220.

114. O'Connor T. J. Aggravating genetic interactions allow a solution to redundancy in a bacterial pathogen / T. J. O'Connor, D. Boyd, M. S. Dorer, R. R. Isberg // Science. - 2012. - Vol. 338.- P. 1440 - 1444.

115. Paton J.C. Pathogenesis and diagnosis of Shiga toxin-producing Escherichia coli infections / J. C. Paton, A.W. Paton // Clin. Microbiol. Rev.-1998.-Vol. 11. P. 450-479.

116. Ristroph, J. D. Liquid medium for growth of Legionella pneumophila / J. D. Ristroph, K. W. Hedlund, R. G. Allen // J. Clin. Microbiol. - 1980. -Vol. 11, № l.-P. 19-21.

117. Rossetto, O. Tetanus and botulinum neurotoxins: turning bad guys into good by research / O. Rossetto, M. Seveso, P. Caccin, G. Schiavo, C. Montecucco // Toxicon. - 2001. - Vol. 39. - P. 27 - 41.

118. Roux, E. Contribution a l'etude de la diphtherie / E. Roux, A. Yersin - Ann Inst Pasteur, 1888. - P. 629 - 661.

119. Roy, C. R. The Dot/Lcm transporter of Legionella pneumophila: a bacterial conductor of vesicle trafficking that orchestrates the establishment of a replicative organelle in eukaryotic hosts / C. R. Roy // Int. J. Med. Microbiol. - 2002. - Vol. 291. - P. 463 - 467.

120. Saito, A. Comparison of liquid growth media for Legionella pneumophila / A. Saito, R. D. Rolfe, P. H. Edelstein, S. M. Finegold // J. Clin. Microbiol. - 1981. - Vol. 14, № 6. - P. 623 - 627.

121. Sambrook, J. Molecular cloning: a laboratory manual / J. Sambrook, E. F. Fritsch, T. Maniatis. - Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989.

122. Sandvig, K. Endocytosis, intracellular transport, and cytotoxic action of Shiga toxin and ricin / K. Sandvig, B. Van Deurs // Physiol. Rev. - 1996. -Vol. 76, №4.-P. 949-966.

123. Sarge, K. D. Surprising features of transcriptional regulation of heat shock genes / K. D. Sarge, R. I. Morimoto // Gene. Expr. - 1991. - Vol. 1, №3.-P. 169- 173.

124. Schirmer, J. Large clostridial cytotoxins: cellular biology of Rho/Ras-glucosylating toxins / J. Schirmer, K. Aktories // Biochim. Biophys. Acta. - 2004. - Vol. 1673. - P. 66 - 74.

125. Schlessinger, D. Bacterial toxins // Mechanisms of microbial disease / D. Schlessinger, M.Schaechter. - 2nd ed. - Baltimore: Williams and Wilkins, 1993. - P. 162- 175

126. Schmitt, C. K. Bacterial Toxins: Friends or Foes? / C. K. Schmitt, K. C. Meysick, A. D. O'Brien // Emerg. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 5, № 2. - P. 224 - 234.

127. Sexton, J. A. Type IVB secretion by intracellular pathogens / J. A. Sexton, J. P. Vogel // Traffic. - 2002. - Vol. 3. - P. 178 - 185.

128. Shohdy, N. Pathogen effector protein screening in yeast identifies Legionella factors that interfere with membrane trafficking / N. Shohdy, J. A. Efe, S. D. Emr, H. A. Shuman // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2005. -V. 102, №13. - P. 4866-4871.

129. Song, L. Structure of staphylococcal alpha-hemolysin, a heptameric transmembrane pore / L.Song, M. R. Hobaugh, C. Shustak, S. Cheley, H. Bayley, J. E.Gouaux // Science. - 1996. - Vol. 274. - P. 1859 - 1866.

130. Spangler B.D. Structure and function of cholera toxin and the related Escherichia coli heat-labile enterotoxin / B.D. Spangler // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 1992. Vol. 56. - P. 622 - 647.

131. Spano, S. A novel pathway for exotoxin delivery by an intracellular pathogen / S. Spano, J. E. Galan // Curr. Opin. Microbiol. - 2008. - Vol. 11.-P. 15-20.

132. Sturgill-Koszycki, S. Legionella pneumophila replication vacuoles mature into acidic, endocytic organelles / S. Sturgill-Koszycki, M. S. Swanson // J. Exp. Med. - 2000. - Vol. 192. - P. 1261 - 1272.

133. Summersgill, J. T. Interactions of virulent and avirulent Legionella pneumophila with human polymorphonuclear leukocytes / J. T. Summersgill, M. J. Raff, R. D. Miller // Microb. Pathog. - 1988. - Vol. 5. -P. 41 -47.

134. Swanson, M. S. Identification of Legionella pneumophila mutants that have aberrant intracellular fates / M. S. Swanson, R. R. Isberg // Infect. Immun. - 1996. - Vol. 64. - P. 2585 - 2594.

135. Thompson, M. R. In vitro production of an extracellular protease by Legionella pneumophila / M. R. Thompson, R. D. Miller, B. H. Iglewski // Infect. Immun. - 1981. - Vol. 34, № 1. - P. 299 - 302.

136. Tiaden, A. The Legionella pneumophila response regulator LqsR promotes host cell interactions as an element of the virulence regulatory network controlled by RpoS and LetA / A. Tiaden, T. Spirig, S. S. Weber, H. Bruggemann, R. Bosshard, C. Buchrieser, H. Hilbi // Cell. Microbiol. -2007. - Vol. 9, № 12. - P. 2903 - 2920.

137. Tomita, T. Molecular biology of the pore-forming cytolysins from Staphylococcus aureus, alpha- and gamma-hemolysins and leukocidin / T. Tomita, Y. Kamio // Biosci. Biotechnol. Biochem. - 1997. - Vol. 61. - P. 565 - 572.

138. Tonello, F. Tetanus and botulism neurotoxins: a novel group of zinc-endopeptidases / F. Tonello, S. Morante, O. Rossetto, G. Schiavo, C. Montecucco // Adv. Exp. Med. Biol. - 1996. - Vol. 389. - P. 251 - 260.

139. Towbin, H. Electrophoretic transfer of proteins from Polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets / H. Towbin, T. Staehelin, J. Gordon // Proc. Natl. Acad. Sei. USA - 1979. - Vol. 76, № 9. - P. 4350 - 4354.

140. Turk B.E. Manipulation of host signalling pathways by anthrax toxins / B.E. Turk // Biochem. J. - 2007. Vol. 15. - P. 405 - 417.

141. Tzivelekidis, T. Aminoacyl-tRNA-Charged Eukaryotic Elongation Factor 1A Is the Bona Fide Substrate for Legionella pneumophila Effector Glucosyltransferases / T. Tzivelekidis, T. Jank, C. Pohl, A. Schlosser, S. Rospert, C. R. Knudsen, M. V. Rodnina, Y. Belyi, K. Aktories // PloS. One. - 2011. - Vol. 6, №12. - P. e29525.

142. Vincent, C. D. Identification of the core transmembrane complex of the Legionella Dot/Icm type IV secretion system / C. D. Vincent, J. R. Friedman, K. C. Jeong, E. C. Buford, J. L. Miller, J. P. Vogel // Mol. Microbiol. - 2006. - Vol. 62, № 5. - P. 1278 - 1291.

143. Vogel, J. P. Conjugative transfer by the virulence system of Legionella pneumophila / J. P. Vogel, H. L. Andrews, S. K. Wong, R. R. Isberg // Science. - 1998. - Vol. 279, № 5352. - P. 873 - 876.

144. Vogel, J.P. Cell biology of Legionella pneumophila / J. P. Vogel, R.R. Isberg // Curr. Opin. Microbiol. - 1999. - Vol. 2. - P. 30 - 44.

145. Von Eichel-Streiber, C. Clostridium difficile toxin A carries a C-terminal structure homologous to the carbohydratebinding region of streptococcal glycosyltransferase / C. Von Eichel-Streiber, M. Sauerborn // Gene. - 1990. - Vol. 96. - P. 107 - 113.

146. Von Eichel-Streiber, C. Evidence for a modular structure of the homologous repetitive C-terminal carbohydrate-binding sites of Clostridium difficile toxins and Streptcoccus mutans glucosyltransferases /

C. Von Eichel-Streiber, M. Sauerborn, H. K. Kuramitsu // J. Bacteriol. -1992. - Vol. 174. - P. 6707 - 6710.

147. Von Eichel-Streiber, C. Large clostridial cytotoxins~a family of glycosyltransferases modifying small GTP-binding proteins / C. von Eichel-Streiber, P. Boquet, M. Sauerborn, M. Thelestam // Trends Microbiol. - 1996. - Vol. 4, №10. - P. 375 - 82.

148. Wagner, A. Distributed robustness versus redundancy as causes of mutational robustness / A. Wagner // Bioessays. - 2005. - Vol. 27. - P. 176- 188.

149. Wagner, A. Robustness and Evolvability in Living Systems / A. Wagner. - Princeton University Press, Princeton, NJ, 2005.

150. Warren, W. J. Growth of Legionnaires' disease bacterium {Legionella pneumophila) in chemically defined medium / W. J. Warren, R. D. Miller // J. Clin. Microbiol. - 1979. - Vol. 10, № 1. - P. 50 - 55.

151. Watarai, M. Legionella pneumophila is internalized by a macropinocytotic uptake pathway controlled by the Dot/Icm system and the mouse Lgnl locus / M. Watarai, I. Derre, J. Kirby, J.D. Growney, W.F. Dietrich, R.R. Isberg // J. Exp. Med. - 2001. - Vol. 194. - P. 1081 - 1096.

152. Welch, R.A. Pore-forming cytolysins of Gram-negative bacteria / R.A.Welch // Mol. Microbiol. - 1991. - Vol. 5. - P. 521 - 528.

153. Wilson, B. A. Diphtheria toxin and Pseudomonas aeruginosa exotoxin A: active-site structure and enzymic mechanism / B. A. Wilson, R. J. Collier // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 1992. - Vol. 175. - P. 27 -42.

154. Witvliet, M. H. Binding of pertussis toxin to eucaryotic cells and glycoproteins / M. H. Witvliet, D. L. Burns, M. J. Brennan, J. T. Poolman, C. R. Manclark // Infect. Immun. - 1989. - Vol. 57, №11. - P. 3324 - 30.

155. Young, J.A. Anthrax toxin: receptor binding, internalization, pore formation, and translocation / J.A. Young, R.J. Collier // Annu. Rev. Biochem. - 2007. - Vol. 76. - P. 243 - 265.

156. Yu, V. L. Distribution of Legionella species and serogroups isolated by culture in patients with sporadic community-acquired legionellosis: an international collaborative survey / V. L.Yu, J. F. Plouffe, M. C. Pastoris, J. E. Stout, M. Schousboe, A. Widmer, J. Summersgill, T. File, C. M. Heath, D. L. Paterson, A. Chereshsky // J. Infect. Dis. - 2002. - Vol. 186. - P. 127 - 128

157. Zink, S.D. The Dot/Icm type IV secretion system of Legionella pneumophila is essential for the induction of apoptosis in human macrophages / S.D. Zink, L. Pedersen, N.P. Cianciotto,Y. Abu Kwaik // Infect. Immun. - 2002. - Vol. 70. - P. 1657 - 1663.

158. Zusman, T. Characterization of a Legionella pneumophila relA insertion mutant and roles of RelA and RpoS in virulence gene expression / T. Zusman, O. Gal-Mor, G. Segal // J. Bacteriol. - 2002. - Vol. 184, № 1. -P. 67 - 75.

159. Zusman, T. The response regulator PmrA is a major regulator of the Icm/Dot type IV secretion system in Legionella pneumophila and Coxiella burnetii / T. Zusman, G. Aloni, E. Halperin, H. Kotzer, E. Degtyar, M. Feldman, G. Segal // Mol. Microbiol. - 2007. - vol. 63, № 5. - P. 1508 -1523.