Совершенствование серологической диагностики легионеллеза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор биологических наук Карбышев, Гериард Львович

• Карбышев, Гериард Львович
• доктор биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации доктор биологических наук Карбышев, Гериард Львович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЛЕГИОНЕЛ

ЛЕЗА [ОЫОР Л ИТЕРАТУ РЬ1)

1 I Характеристика возбудшелл. экология к таксономическое положе- 16 вне

1.2. Антигенная структура и структурно-функциональная оргаиимшы 22 факторов гатогенкостн I, pneumophila

1.3, Распространение предстпмгтслсЛ рола Legionella среди человек- 57 с it ей популяции 11 в объектах окружающей среды .4. Серологическая диагностика аспинсллеш

1.4Л. Реакция непрямой ■имунофлюоресдяшни

1 А 2 Ими\ноферме1ТП1ЫЙ анализ

1.43. Реакция ынхроштлкггннвцни S

4.4, Реакция непрямой гемагглютииаини

1 AS, Реакция латексиой агломерации S

14.6, Ролноиммунный анализ SS

1.4.7. Реакция прямо» иммуиофлюорсеиениин

1.4.8. Им му н охро м это графический »налил »

1.4.9. Реакция агглютинации 90 М-10. Реакция коагглщтинацни 91 СОБСТВЕННЫ Е ИССЛ ЕДОВАННЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ Ы И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ АНТИГ ЕННОЙ СТРУКТУРЫ £. pneumophila [

3.1, Изучение белков L pneumophila серо групп 1 - 7 10S

3.2. Изучение белковым антигенов L pneumophila ceporpyim ! - 7 lit 3-3. Изучение ЛПС лнтигеноя L pmtiMOphtb ссрогрупп 1

ГЛАВА 4, КОНСТРУИРОВАНИЕ И ИСПЫТАНИЯ ДИАГНО-СТИКУМА ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНОГО СЕРОГРУИПЫ I АНТИГЕННОГО ПОЛИМЕРНОГО СУХОГО ДЛЯ РАО Г52 4,1. Получение м характеристика полимерного носители 153 4 J. Подбор условий получения растворимого лепмхнеллмhoj-o антигена в качестве сенситина и «га характеристик:!

4.3. Патучение диапюсткуча деикжеллсэиого серогрутш 1 антнгсл

1ЮГО полимерного сухого для РАО

4.4. ЭксперимеНтиЛШИе исследования днапюстнкума дзгионеллсзного еерогрушш ] антигенного полимерного сухого

4.5. Исследования больных с острыми заболеваниями органов дыхания с помощь» диагностику ив легиоиедлезного серогруплы 1 антигенного полимерного сухого

4,6- Изучение длительности сроков xpiuien их диагностику мм

4,7. Государственные испытания дилгиостихуыа легиоиелленюго серо-фуппи [ антигенного полимерною а ГИСК им. Л, А. Тарасовича

4.S. Свойства дкогностикума ВМЯЛЛять антитела к L pneumophila других серогрупп

ГЛАВА Я, КОНСТРУИРОВАНИЕ И ИСПЫТАНИЯ ДИАГНОСТИКУ МА ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНОГО СЕРОГРУИПЫ I ИММУНОГ-ЛОБУЛИНОВОГО ПОЛИМЕРНОГО СУХОГО

3.1. Получение кроличьих легиоиелдезнык сывороток

5.1 Конструирование диагностику*« летонеллечною серогруппы 1 шмуноглсбулл нового Полимерного сухого для РАО

SJ. Экспериментальные нсслсдоточшя днапюешкума ]

5.4. Испытания днвгноепшума легнонеллстного серогруплы 1 нмму-коглобу лннриого полимерного

ГЛАВА 6. КОНСТРУИРОВАНИЕ I! ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИСПЫТАНИЯ НАБОРА ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНЫХ СЕРОГРУПП I -7 КОАГГЛЮТИИ ИРУ Hilm IX дн АГНОСШКУМОВ

6.1. ПшуЮик стафилококкового реагента 206 6 2 Получение гниернммуннык кроличьих сывороток протнк /■ рп?иторЬИа еерогрупп 1

6 3 Коиструнроганпк побора ЛвГППШйНШ Ссрчгрупп 1-7 коагтлюти пирующих диагнастикумоя

6.4. Изучение специфичности набора лепнммшдоных серогрумн 1 воягглютинирующих диашоетикумов

ГЛАВА 7, КРИТЕРИИ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

ЛЕГИОНЕЛЛЕЗА

7.1. Диагностическая ценность методов выявления аипггсл

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование серологической диагностики легионеллеза»

А 1сгуал1. коси. орайлемы

Болезнь легионеров - острое лихорадочное заболевание, вшиваемое группой микроорганизмов, относящихся к семейстпу [х^юпсПаака. Ведущее гкя-челне имеет ^юпеЧа р/нптор)»1а ссротруппы I. с иомушио-квиелъным мс-хяшгиюм передач» и поражением верхних дыхательных п>тей в виде респираторной лихорадки Поитнак и нижних дыхательных путей н виде острых пиел-мояиЯ (Прозоровский С В, с соавт.» 1984),

История изменил болезни лепюнеров начхзаеь е 1976 Г- и били сдагвна с иэ>-кинем вспышки острых респираторных заболеваний среди участников конференции <[Американского легиоиа», которая проходила с 2? по 28 июля 1976 г. в отеле Белио-Стратфорд и Филадельфии. Уже 2 августа в Центр па контролю за болезнями в г. Атланте поступила информации о смерти трех пациентов с диагнозом тяжелой пнеямонии из г ТЪгпсбурга Вскоре было установлено масса нос поступление больных е симптомами атипичной пневмонии, а эпидемиологическое расследование покоило, что большинство больных были участниками указанной конференции Всего был гоетгталнзирован 221 участник конференции с симптомами пневмония, из которых 34 умерли.

В последние годы отмечен ряд крупных эпидемических вспышек лепю-нелдеза. В [996 г. во время круизных рейсов 1га теплоходах по Карибскому морю зарегистрировано 50 случаев лепнжеллеза (¿сп^^аи О.В е1 1996), В 1999 г. в Бельгии при проведении торговой ярмарки зарегистрировали» 93 случая ле-гионедлеи. щ которых 5 больных умерли (Раястм! МТ. « а!, 2002). В г. в Нидсрлаидох при проведении выставки цветов зарегистрировано 188 случаев легионеллеза (Осп ВоетЫ а]., 2002; 1.сшпва К .О , е< Ы-, 2002), В 2001 Г- во Франции от больных с пневмониями иыдслено 259 игтамчов лепюнелл различ» пых мыии и серогрупп (Е)о1сап* А- е! а1,2002). В 2001 г. в Испании зарегистри* ровллл крупнейшая вспышка легионеллеза, во время которой заболело около «Ю больных (ОогсЪ-РЫ^иигаз А.« а1„ 2003).

Частота иппними среди Genutws. roc питал иэ1грусчых в стационары с jummcnOM «гаиевдоиня», » среднем * Еиропе и США оценивается от 2 до 15% (Muder R-R-. «я »1-. 1W). По даннмч Центра по контролю и болезнями в г. Атланте (CDC) (ЯЩП» " США регистрируют от 10000 до 18000 случаев легионе ллеза По данным агснтстал но производственной безопасности it здравоохранению США (OSHA) число ежегодник случаен легионсл-теза составляет 25000, из потиры* 4000 умирают, a ito данным Американского общества микробиологов (ASM) среди больных с пневмониями, госпитализируемы* и отделения интенсивной терапии, легнонедлез является причиной 15-30% случили (LcgHmtlia 2003, AWT. 2003 > Частота внутрнбольничиого лепюиеялеза может колебаться от 16,3% среди больных е приобретенным« пиемзиишн до 76% среди больных с различными формами вторичных пшуяоифншпных состоя* ний (Gresserode М„ 1993; Jun^-Mathys Е, Maihys W„ 1994).

На территории нашей страны легионеллез впервые зарегистрирован в 1979 1', (Прозоровский СБ с еоавт., 1984; 19871, а в последующем отмечены спорадические ir отдельные групповые ВСПЫШКИ нббМШМЙ (БелекькнП С.Н„ 1984; Покровский В.И. с еоавт., 1988; Прозоровский С.В, с соявт., 1987; Сакварелндзс J1.А. с еоавт , 1990) Частота выявления лепюнеллеза средн больных пневмонией колеблется от 10,7% до 12,2% (Покровский В .И. е еоавт., 19fl.fi, ТартлковскиЙ НС, с соявт,, 19»9; Меморандум ВОЗ, >990).

Спорадический лепюнемеэ cpe;ui населения по данным пассивного зни-днздзора в США составляет 0,2, 9 по данным активного мйнкмм ■ 12 на 100000 тселеиня (Меморандум ВОЗ, 1940). При сероэпндемнолотческом ik-следованин а группах риска частота положительных результатов колеблется от 1% до 55.4% (Васильева В.И. с еоавт,, 1986).

В своем обзоре «Лспюисллез: 25 лет изучению В S Fields, ft S: Benson, R,E Besser (2002) xnpaticpHiytor лепюнеллез как экзотическую чуму,

В настоящее время описано 4S видов Legion*На, включающих 69 отдельных серогрупи (Fields В.5. ci al-, 2002). Вид! pneumophila представлен 15 серогруппами. В США 90% случаен летиммядей склоны с L рпеияюрЫЬ и 79% и-» них - с ceporpynnofl t (Marsien BJ.et al. I99J).

По данным Weekly Epidemiology Record (WER>, мпбулктелем Легионелле-за в Европе в период с 1996 по 1999 гг. в 95.9% случае» яилялась L pneumophila, а среди еерогрупп лидирующее место шшчала серотруппа I. которую выделили от больных в 70,8% случаен- Среди других есрогрунп от больных ЯЫДОМИ еерогруппу 3 в 5% случае» »г еерогруппу 6 - в 3,! % случаен

Однако это заболевание продолжает оставить» малоизвестным и нашей стране. Все вышеизложенное делает проблему диагностики легионеллеза актуальной ли практического здравоохранении. Отсутствие патопюмоннчноП клинической картины, нчоесу» неопределенные данные эпидемиологического анамнеза делают лабораторные методы решающими при установлении дин поза Солезн и легионеров

Безусловно, «золотым стандартом» диагностики инфекционных зоболем-ний ямяетс* боиермологическн& метод. В то же время, практика диагностики инфекционных болезней сиидетел«твует о большой роли и значимости серологических методов,

Анализ данных литературы Свидетельствует о важной рати серологических методов диагностики легионеллеза, необходимости иелолмошния коммерческих тест-систем для выявления возбудится *, его pací »зримых антигенов в клиническом матермшк к объектах окружающей среды, шкигтифмкшши и серологического тмпмрОМЛНЯ, Г1о данным WTUt. информирующего о заболеваемости легнонеллезом в Европе, с 3995 по [999 tr. удельный вес серологических методов диагностик и колебался от 70% до 78,2%, бактериологического метода от 17% до 21,6% и 1ЩР - от 0.83% до 11 %.

П настоящее время для выявления днтител к возбудителю легионеллеза нстюльзуют три метода: реакцию непрямой нчмунофдюоресценнин (РНИФ1. иммунофсрмснтпыЙ «ЮЛЮ (ИФА) и михроагглютнианию (РА) (Меморандум ВОЗ. 1990) Неполную* II реакцию латексноП агломерации, которая является более чувствительной, чем РНИФ и выявляет антитела в диагностических тнтрах нв ранних, стадии заболевания - до 10 дня (Harrison Т.С с( ni. 1987: Friis-MnUcr A. et al. 1986; Marrie TJ. et al . 1986; Sewlinj G. ci al, 1986).

Методы обнаружения легион елдо H «o антигена используют я качестве экспрессных ИЛ pUINHX егадцях здбопеЫШН* к широко применяют ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ легионеллгм Они включают ИФА, родноимыуииый аиалю и реакцию прямой иммуиофлюоресиенцнн (РИФ) (Меморандум ВОН, 1990) Легнонеллеэ-ный антиген методом ИФА был обнаружен в моче больных еще во прем я ucrluuuiit заболеваний в Филадельфии в 1976 г. (lkrdni B P el al., 1979). Дальнейшие ИССЛеДОваИНЯ 1КЯНЛ11ЛИ ПрСЛЛОЖИТЬ МГТОД ИФА ЦДЛ ОКОИЧЛ ttlI.HÙfO подтверждения диагноза (Ploufie J.F. et al., 1995) на ранних стадиях заболевания - в первые 2-3 дн* (Birttes RJ, « 1990; Formica N. et al., 2001, HelbiglH. et в!. 1989: Knsluifca A,D. « Al. 1996; Plotiffe J.F. et al , 1995). По данным WER, среди серологических методов, используемых для диагностики я Европе, доля методов выявления антигена в моче в ИФА выросла с 16% до >15%.

Особый интерес представляют данные по нсполкммннню других методом выявления антигена к. в частности, метода латексноЛ агглютинвиии, Этот метод исиодь-юпался для идентификации культур (Rictowisofl I.R. ci al., 1992)t обнаружения лепюнелл о oGkknX окружающей ерелы и в клиническом материале (плевральном экссудате и мокроте) (Délia F et в]., 1993).

Для выявления и серологической дифференциации легмонеяя японские неследователи впервые предложили реакцию юттяютмацш iYoh M, et al. I9B5). Показано преимушеетт» рМКщн ЖШТЛЮТюищин в сравнении с лгглю-пашивй на стекле по чувствительности и специфичности, поскольку коагтлю-тинкрмочдий днагностпкум не давал перекрестных реакций (Yoh M et aL, 1985) В сравнении e РИФ, реакция копгглкпннвшш проста в исполнении и не требует дорогостоящего приборного обеспечения, оставаясь по чувствительности и специфичности щ одном уровне.

В настоящее время я России отсутствуют сертифицированные тест-сиетемы для серологической диагностики легнонедле». О

В связи с изложенным, актуальной проблемой в настоящее время является соиеровснсггиованне серодошческой л»*пмспкк легионеллеза путем создания НШШКК отечеотжшшх препрпп И тест-систем для выявлении специфических а мл «тел ■ сыадротках крови, антигена в биологическом материале и объектах окружающей среды, идентификации и серологическою тпнроиння во1-булителей. а также раадебот ка критериев диагностики

Цгп. и нцачи нее^едпиаиии

Цель» работы яыястсм научное обоснование метолнческнч подходов к конструированию препаратов для серологической диагностики легконелдста, создание антигенных н нмыуноглобу лнновых дналюетикумов с известными свойствам». получение диагиосгнку.мов для серологической идентификации I ртиторШа. оценка диагностической значимости методов н разработка крипе» риса н илгор1гтма днплюстики лепюнеллем

Дяв достижения указанной цели необходимо решение следующих тадач:

1. Изучение антигенной структуры £ рптторИНа различии* серофунп, поиск иммутгепнх белковых и лцлополисяхаридных антмгемм, имеющих диагностическое значение.

2. Полбор условий получения растворимого антигена £ рнптсрЫЬ серо-группы I с известным Лнтнгсикыы составам дд* использования его п качестве сенснтин.1 1гр» конструировании антигенных вариантов днагностнкумов и характеристика сю антигенных свойств.

3. Подбор схем иммуннзаани и екмучеяяе рпшшк вариантой гкпернм-ыунних кролич ьнх легиоаюллезных сыкороюк.

4. Конструирование днагиостикума ЖГММШШШ ссрогруппы I антигенного Iполимерного сухого для реакции объемной впяом«ршни (РАО) Изучение чувстшгтедьности и специфичности Оценка диагностической иенноети препарата.

5. Конструирование днагностнкума легнонеллезиого серогруппы 1 нмму-I(оглобулIтоного полимерного сухого для РАО. Изучение чувствительное™, специфичности и определение наказаний к использованию диагностику™

6. Конструирование набора лепгамеялезных коштяктешфующнх дкогно-стикумов Изучение чувствительности и специфичности Изучение препаратов в практике бактернолопгчсскнх исследований но легноиеллез.

7. Разработка критериев оцпми результатов использования комплекел тестов и алгоритма диагностики легиоиеллеэв

Низва imm«?™

Впервые с использованием современных методов изучен антнгенный состав L p/Kumophila семи серогрунп наиболее часто встречающихся и патологии человека. Получены новые лонные об иммуиогенных свойствах белковых и ли-пешолиеахаридпых антигенов, имеющих диагностическое течение при конструирований тест-систем.

Впервые показано, что, несмотря на гетерогенность по степени кммуни-генности. белковые антигены L paeumopktía являются общими для различных серогрупп

Впсрвые научно обосновал процесс ОПТКЫИЯЩЩ получения растворимого антитела с известными олтзггеиными свойствами для использования его в качестве сснснтмнв при производстве диагностических препаратов.

Впервые получен легионеллезный антигенный полимерный .диаг ностикум для определения в сыворотка* кропи специфических вкпгтед к различным серо группам L pwííinoptiiia

Впервые разработаны новые научно-методические подходы к получению гипернммуниых сывороток для конструирования иммуноглобулинояых полимерных и коаггдюппннрутцнх лиагностнкумов, А также для анализа антигенной структуры L pmmr/iophito различных серо групп,

Впервые получены новые данные о спектре лгшпеиспеиифичсскнх шггн-тсл при формировании iyморальною иммунного ответа в результате имму низании лабораторных животных L ртшркИа семи серагрупп.

Разработаны критерии для оценки результатов применения комплекса ли-олмеплеспи тестов при проведении диагностики болезни легионеров д^аддвям аияииа

Анализ перекрестных нммуноблогг«шоп L pneumophila сечи серогрупп с кроличьими гниернммуиньшн сыворотками прошв семи «prpjnn позволил класс и фнillфоаапь белкопие итнпны по свойству иммуногенностн на высоко, средне и итконммуногениые, что песет высокую степень ннформлгниийстн н перспективно для дальнейшего изучения антигенной структуры L pneumophila Полученные на основе отр»бспМ1ИШ методических подходов Кроличьи гипериммунные сыворотки против I. pmrumophita семи серагруип, обогащенные антителами к белковым и ляпоЕкыгнсахарнлныч лнтнгенач, перспективны для дальнейшего (пучения шгтигеиной стру ктуры L pneumophila различных се-рогрупп и конструирования новых диагностику мов.

Предложенные методические подходы кммобилнмщии растворимого де-гноиеллезиого антигена оозво.'счют оптимизировать проиесс сотлдння препаратов для диагностики легиоиедлеза н получать антигенные варианты диагности-кумов с ыданными свойствамн

Аналит перекрестных кммуиоблотгинго® I, pneumophila сечи серо групп с кроличьими тнериммуиными сыворотклмн против семи серогрупп позволил оценить гуморальный иммунный ответ экспериментальны* животных по аффинности образующихся cneitinjMPtecKiix антител, что перспективно для изучения особенностей иммунного ответа у людей при легионеллеэе Ппвк-гичесння 1нячнм<к11.

Разработана технология получения растворимого антигена L pneumophila ссрогрупны 1 с известным и антигенными свойствами дл* использования в качестве сеиситнна при конструировании антигенных вариантов тест-енстем для серологической диагностики легиоиедпеи.

Разработана технология получения кроличьих гнпериммунных сывороток против L pneumofMh семи серофупп, обогащенных антителами к белковым н лмиоподиеахаридным антигенам с целью анализа антигенной структуры и конструирования иммуноглобулиновых полимерных и коагглютинируюши* диаг-ностику'мои,

Сконструирован и внедрен в практику диагностнкум лсгноисллезный ееро-грулпы I антигенный полимерный сухой дли РАО. предназначенный для серологической диагностики дегиомедлем у людей, мтинога L pneumophila различных мрогрутш. Дклпюсттаум прошел Государственные испытания в ГИСК им, Л.А, Тарасовича и решением Коми teta медицинских нмыумобиологнческнх препаратов рекомендован к регистрвоин d РФ (Протокол №7 от 19.(2.2002 г,).

Сконструировал диагностику* легноиеллезный серогрупш 1 имчуногло-СудииооыЯ полимерный сухой для РАО, Диагностику« может быть нсгамьзо-№И1 для выявления легионеллезиого яшзггена в моче у больных с ислью серологической диагностики заболевания, л также для серологической идентификации L pneumophila серо группы I. Диагностику*! прошел комиссионные испытания, на него няпмсаил инструкция но изготовлению и контролю, одобренная Ученым Ометом РостНИПЧИ (Протокол Ss А от 14.06.2006 г. >.

Сконструирован и предложен для практического использования набор ди-лпгостнкумов коягглютинирующнк лепюиеллезиых ееро<(рулп 1 - 7, предназначенный для «ршиип колоний и серолопсчсской идентификации L pneumophila серо групп 1 - 7 при проведении бикгериолотчсскнх исследований на легиоиедлез Дингностикум прошел комиссионные испытания, на него имжю-иа инструкция по изготовлению и контролю, одобренная Ученым Советом РостНИПЧИ (Протокол №4 от 14.06.2006 г,).

Разработаны и Предложены для практического использования критерии диагностики легноиеллеза на основании анализа эпняемнадогаческвх, клинических, рентгенологических данные и результатов дифференцированных лабораторных исследований различного материала от больных

Положен ня^иПР^ЧНГ К" НИНУ! ГУ

1, Растворимый лсгнонсллезный антиген с известным составом иммуно-Генных белков может быть использован в качестве Сеиситинл при конструировании антигенных вариантов диагностнхумоь

2. Гинсриммуиные кроличьи сыворотки, полученные на основе разработанных наумо-мотодокскнх подходов. (ЮЭКЫНЮТ конструировать слсцифнчные н высокочувствительные дютюстнческне иммуноглобулине«* лрспдрл-ти для серологической лил ностнкн лелшкяяен и идентификации ветбудите-д* i, СпСИифнЧМЫС II IHJСОKÜ4JUCTBИТСЛЬНЫС ТССТ'СНСТСМЫ для выяйлския ЛИ' пггел к niггнгенов в биологическом материале позволяют повысить диагностическую ценность осилен-и'»ее к их методой исследования ira разных стадиях нн-фешоюнисно процесса у больных легнонеллеэом, вызванном L рпеияюрШа различных оерогрупп

4. Набор лсгнонеллезных к оаттаю т i u i и р укн ШК диагностикумов семи се-рогрупп позволяет Проводить скрининг КОЛОНИЯ, идентификацию к серологическое типнрооание куяьтурL pneumophtía различных серогрупл при проведении бактериологических исследований

5. Разработанные критерии и алгоритм серологической диагностики легно-нелдо»ПОЖМЮТ да «а«. объектную «кику результат» жеяыпнм материала от больных и лни, входящих в группы риска, к определить место сероло-гаческих методов в диагностик« лсгнонсллст

Результаты исследований были представлены на НЦЧННХ конферепшк

Конференция Ростовского отделения Всероссийского общества микробиологов. Ростома-Дону. IWi

VII съезд Всероссийского обшестм эпидемиологов. ыюфобнолого» и гм-разитологон, Москва. 1997 г.

Конференция Ростовского отделения Всероссийского общества мнкробноло-гов. Ростов-нп-Дону. ] 999 г.

4-ая Межгосударственная научно-практическая конференция государств -УЧАСТНИКОВ СНГ Современные технологии в диагностике особо опасных болезней Саратов. 2003 г

Научно-практическая конференция «Актуальные проблемы эпидемиологического надзора за природно-очаговыми н особо опасными ннфекииямн в регионе Северного Кавказа», Ставрополь, 2005 г,

VI Межгосударственная научно-практическая конференции государств-участников СНГ «Санитарная охрана территории государств-участников Содружества Независимых Государств: Проблемы биологической беэопасиоста и противодействия бнотеррорнзму в современных условиях». Волгоград, 2005 г.

V-ÍM Межвуэокжн международна* биохимическая научно-практическая конференция «Обмен веществ при ллиггацин и повреждении», Ростов-на-Дону, 2006 г.

Ма ИЦИД.1М inrctoi д л ни получены при выполнении четырех плановых научных тем Per Si 0193 0 003251 «Легнонелло na Северном Кавказе^, Per ft 01.95.0 003715 «Особенности зинлемнолоти легионеллеза в условиях крупного города*. Per. № 01.99.0 002823 «Конструирование препаратов для ее-ролотчесхой диагностики легионеллеза». Per. № 01.200.2 12993 «Изучение Legionella pneumophila с цель» поиска антигенов, имеющих диагностическое вгаченне».

ЦДдщдщ рмульпио» исследования

Но теме диссертации опубликовано 27 научных рчбог, и» ни* 7 - в и шяии-я\. рецензируемых ВАК

План диссертации идЦ утвержден на меедАиин УчетЮГО совет

ФГУЭ РостНИПЧИ Роепотребиалзорл (протокол № 4 от 19.СИ. 2005 г.)

Структура работу

Диссертация изложена на 301 страницах, состоит нз введения, материалов и методов, обзора литератур«, пяти глав ообепкяных исследований, кяжда* in которых ижлючает результаты собственных исследовании, их обсуждение, за которым следуют заключен!«, выводы и список цитируемой литературы. Диссертация иллюстрирована 36 таблицами. 22 рисунками, Кнблиотрофтпеский указатель содержит 395 источника, в тон числе 58 работ отечественных и 337 -зар>бежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Карбышев, Гериард Львович

260 Вывозы

1. Установлено наличие 20 белковых антигенов у L pneumophila серогрупп I - 7, которые разделены по свойству1 иммуногснности и аффинности образующихся антител на высоко, средне н низко имчуниогенные Несмотря на гетерогенность по нммуногеиностн, все белковые антигены являются общими для семи серогрупп.

2. Впервые научно обоснована технология получения растворимого антигена L pneumophila серо группы Ï с известным антигенным составом, который может быть использован в качестве сенситина для конструирования любых антигенных вариантов днагностикумов.

3. Сконструирован диагностику!» лепюисплетиЯ серогрупиы 1 антигенный полимерный сухой для РАО с известным антигенными свойствами Проведенные экспериментальные, клинические н Государственные испытания позволили установить, что чувствительность диагжсзнкума составила 100%, спсвд-фичностъ - 99,1%, а его ЛНПЮвптсай титр - 1 ;80,

4. Установлено, что днагноетнкум логионеллезныЯ серо группы 1 антигенный полимерный взаимодействует с сыворотками против L pneumophila серогрупп 2 -7 с титрами or 1:80 до t :640, что позволяет предполагать возможность определения а сыворотках крови больных антитела к L pneumophila других серогрупп.

5. Разработана технология получения кроличьих гилернммунных сывороток L pneumophila семи серогрупп, обогащенных антителами как к белковым, так н яиподалнеахаркяным антигенам

6. Сконструирован диалюстикум лелюнеллезный серогрупны I иммуног-лобудииолый полимерный сухой для выявления в РАО легнонеллезного антигена в моте у больных и серологической щкигифнкыщн L pntumoptíh серо-группы 1. Чувств1гтелыюсть его составила для ММ№Й L pneumophila 5*10* -10* ы,к./мл и для легнонеллезного растворимою антигена - от 2 до 50 мкг/мл.

1, Сконструирован побор легнонештсзных серо групп I - 7 коагтлютнни* рующнх днвгностикумов, предназначенный для скрининга колоний л серологической идентификации L pneumophila серо групп I ■ 7 при проведении бактериологических исследований иа легнонсллст

В Сформулированы критерии и последовательный длухэтапный алгорагтч диагностики болезни легионеров, включающий анализ эпидемиологических, клинических, рентгенологических данных и результаты лабораторных исследований материала от больныхж

24« Заключение

Диагностики болезни легионеров и лабораторный контроль за циркуляцией возбудители и объектах окружающей среды, является ключевым звеном в системе эпндсмлолопгческого надзора за заболеванием.

Количество новых видов и серогрули лето и едя с каждым голом увеличивается и в настоящее время семейство Legioneffacaea включает 48 видов и 69 ссрогрупп. Известно 15 серо групп для L pneumophila и но две сермруппы для I- ЫяетапИ, L longbeachae, L fetieit, L hacMfae.L taimhelenal, L eryt/rra и L ^HinihtMri. Ит 4S индоп лепюиелл только 20 видов имеют значение в патологии человека. Лидирующим видом является L pneumophila, частота, которой среди штаммов, выделенных от больных, колеблется от 91,3 до 98,8%. Среди них удельный вес ссрогруппы I варьирует от 61,7 до 95,4%. Среди других серог-рупп наиболее часто встречаются серогруппы 3, б и 4. Среди штаммов, выделенных из объектов окружающей среды, частота выделения L ¡mcumophib варьирует от 75,5 до 93,5%, in которых серогруппы I - от 18,2 до 46%, серо-ipyratw 5 - от 4 до 20,3%, серогруппы 6 - от 11Л до 13,2%, серогруппы 3 - от (0,2 до 10,8%.

Безусловно, «золотым стандартом» диапыктикн легионеллсза является баггериолскшческнй метол. В то же врем« практика свидетельствует о большой доле и значимости серологических методов,

Серологические методы являются простыми, ускоренными, экономичными и, что самое главное, обнаружение в крови специфических антител позволяет подтвердить ответ организма на возбудитель, а. следовательно, и доказать наличие инфекционного процесса, связанного с данным микроорганизмом. Последнее обстоятельство является решающим фактором в доказательстве этиологической роли выделенного микроорганизма на ранних стадиях изучения нового инфекционного заболевания. Обнаружение специфических антител в крови серологическими методами подтверждает этнологическую роль микроорганизма. Именно этот способ доказательства этнологической роли выделенного микроба был предложен рядом авторов в 1976 - 1977 ГГ- при изучении филадельфийской вспышки болезни Лсгиомерол

Анализ дтгтературы также свидетельствует о важной роли серологических методов диагностики легнонеллеза, необходимости использования коммерческих тест-систем для выявления возбудителя, его антигенов в клиническом материале и объектах внешней срелы и серологического типироаання. Поданным еженедельника ПОЗ в практике удельный все серологических методов варьирует от 70% до 78,2% бактернодопгкского метода от (7% до 21.6% и Л ЦР-диагностики - от 0.8354 ДО 3%,

В настоящее время для выявления мгтнтел к возбудителю легноиеллеза используют три метода: реакцию непрямой иммунофдюорссценции, иммунсн ферментный анализ и ми кроил л юти и м ш ю. Методы обнаружения антиген* широко применяются и включают нммуиоферментныИ. радиоиммунный анализы, прямую нммутгофлнюрссисншпо н латексную агломерацию (Меморандум ВОЗ. 1990).

В связи с изложенным, актуальной проблемой в настоящее время является создание надежных сертифицированных отечественных тест-систем для выявления сиеиифм'сескмх лимкл. выя&лсии* антигена в биологическом материале и обьектах внешней среда, идентификации и серологического типнроваиия возбудителей, а также разработка критериев серологической диагностики легнонеллеза.

При консгрунроваиии диагностических препарате важное значение имеют знания анпггенной структуры возбудителя и характер сенснтнна, используемого для создания препарата- Выявление высоконммуиогснных антигенов и их комплексов, получение к ним моноспецифическнх сывороток является основой конструирования антигенных и аитительных вариантов тест-систем для диагностики инфекционных заболеваний

Анализ обширной литературы позволил прелепштть современные взгляды на в1ттиге1П1ую структуру возбудителя болезни легионеров -1. рпешяоркИа и структурно-функшюиальиую организацию факторов пвтогеииости, Описана структура и функциональные свойства мембранных белков: главною белка наружной мембраны (МОМР). жгутиков, ЛПС н белка тепловою тока (Н»р-60). Охарактеризованы основные факторы вирулентности р/ютюрЬ^а- М1р-белок ^тплсторЬвве тГеС№иу р<иети1о1огч шлолиим, 1>о1А-белок, Охарактеризована 2-ая секреторная система, обеспечивающая продукцию дополнительных факторов вирулентности - секрецию шести РИО - зависимых белков: протеазы, кислой фосфатазы, нитрофенилфосфоридхштнн (р№РРС И идродизы. липазы, фосфолипзма А и лнзофосфолкпазы А, Представлены данные о генах, кодирующих основные белки и факторы вирулентности микроба, Описаны механизмы внутриклеточной псрснстснции £ рпеиторАи!а в клетках свободножн-•УШКХ простейших и альвеолярных макрофагов, обеспечивающих механизмы патогенен заболевания. Систематизированные данные по антигенной структуре Iд. рпеияюркИа имеют решающее значение при конструировании тест-систем для диагностики болезни легионеров^

Изучение антигенной структуры мы осуществляли с использованием ре-фсрентных штаммов 1гфопс!1а рпсхторЫЬ, штамм РЫккШрМа А'ГСС 33152 серогруппы I, щтамм То%ил АТСС 33154 серофуппы 2, штамм В1ит*п$оп АТСС 33155 серогруппы 3, штамм 1оз*Лп&1а АТСС 33156 серогруппы 4. штамм ОаШи АТСС 33216 серогруппы 5, штамм СЫащо 2 АТСС 33215 серофуппы 6, штамм С1исахо 8 АТСС 33823 серогруппы 7

При изучении здсктрофоретическнх профилей I. рпгиторНИа семи серог-рупп нами было показано наличие 27 белков, из которых 14 были общими для всех семи серогрупн, 10 - общими для отдельных серофупп и 3 - уникальными для конкретных серогрупп, в частности, 3 и 7 серофупп,

Дм изучения иммунотенных свойств белков нами был использован метод нммуиоблотписга с кроличьей гиперкммуниой сывороткой против ¡, рпсито-рЬ>)а серофуппы 1, а для изучения специфичности - с пулом нормальных кроличьих сывороток С точки зрений конструирования диагностических тест-систем этот этап экспериментальных исследований является ключевым, поскольку именно нммуиогенные антигены формируют иммунный ответ н. в частиости. гуморальный, с широким спектром специфически* антител различных классе» к укатанным антигенам,

В нммуиоблоггоиге кроличья гнпсрнммуииая сыворотка против серофуп-ны 1 выявляла 20 иммуиогенных втгтигенов, из которых пять являются песне-пифическим л, взаимодействующими с НКС Общими для всех семи серофупн являются восемь антигенов с молекулярными массами 60, 56,52, 38, 30. 28, 19. 16 kDa, из которых 3 являются («специфическими ■ 72. 60, 56 кПо- В то же время, необходимо отметать* что сыворотка против СсрОфутгпы Í выявляет антигены с молекулярными массами 83, 85,96 н 112 kDa у других серогрупп, которые отсутствуют у ссрогруппы I.

Анализируя полученные результаты, * сравнении с данными литературы, мы предполагаем, что из 8 антигенов, общих лля всех семи серотрупп, шесть являются присущими L pneumophila.

Антиген с молекулярной массой 60 kDa соответствует хоропю известному белку теплового шока (Ivcat shock protelas, Hjp-60). Указанный антиген является родоспсцифичным и широко встречается у лрутх микроорганизмов, являясь наиболее широко рвепроетраиенным ai пшеном различных бактериальных клеток (Plilcaytis B.B. el ûl„ 1987; Lema M.W. et al., 1988; Hoffman P.S. el al , 1989; Urna M.W„ Brown A., 1995; Ze^d U„ Kaufmann S.H. 1999).

Антиген с молекулярной массой 38 kDa. по нашему мнению, соответствует цитолизину (эхетрацеллюлярная протеаза, цннк-металлопротсаза, главный секреторный белок, легиодизии). который имеется у всех серогрупп /- pneumophila (Baifie W.B., 1985; Dreyfus LA, I&Écwïki B.H. 1986; Белый Ю.Ф. с соавт. 1986; Белый Ю.Ф. с соавт. 1988; Белый Ю Ф. с соапг. 1989; Keen M.G-, Hoffman P.S., 19S9; Blander S.J., HofWÎtZ M.A, 1989, 1991«; Wmienneyer E. el al., 1994, Sabney N N. et al., 2001). Несмотря на то, что цитолизин является внеклеточной протеа-jofl, L Síeto, H.A. Shuman (1990) пшии его пито- н псрнпдазматичесхую локализацию, в связи с чем, как мы полагаем, он может выявляться при злектро-форезе не только бульонных экстрактов, но и бактериальных лнзатов.

Антигены с молекулярными массами 30 и 28 kDa, по нашем}' мнению, соответствуют двум мономерным формам главного белка наружной мембраны (MQMP) МОМР является родоспеиифнчсскнм белком и выполнит фуикпни поринп (Htndahl M.S., Iglewskl В Н. 1984. 1986; Ehret W. Л а!. 1984; Butler CA. et а]. 1985; Bull« C.A НоШпвл P-S-. 1990; Hoflhwn PS, e< al„ 1992).

Антиген с молекулярной массой 24 kDa соответствует MIP - белку (macro-pftage infeciivity poienlinior), родоспецифнчеи и является основным фактором вирулентности легионелл (Engleberg N С, с< а!. 1984, Engleberg N. С , Peariman Е-, В Eisenstein 1., 1984; Peaitman Е. « al, 1985; Eisenstein В. I , EngkbctgN. С., 1986; Eoglcfcerg N. С. et al., 1986; Ctanciouo N .P et al., 1990; Wimermeyer E. et al-, 1995; Susa M. et al., 1996; Köhler R. el al., 2003).

Антиген с молекулярной массой 19 kDa также отмечен у всех семи серог-pynn L pneumophila По данным литературы, 19 kDa - белок является пегттн-догликаном, встречается у всех серо групп L pneumophila и других видов ле-moite.ii и участвует в структурной организации мембраны бактериальной клетки (Ott М- et al., 1991; Engleberg N. С et al,, 1991; Ludwig В. et al-, 1991).

При исследовании в иммуноблоттниге различных штаммов тетеролопгч-ных микроорганизмов У pestis, F. häartnsa, 1' pieudonibeteulosis ссроваров 1 -6, В. obortus, В m eh loa is, H mit, К «ueroeohnea cepooapa 09, V. einlerne ettar, £ coli, С jejuni, S. aureus и S typhimwium с кроличьими сыворотками против семи ссрогрунп L pneumophila каких либо родственных антигенов не выявлено, что подтверждает специфичность вышеуказанных антигенов L pneumophila.

В дальнейшем нами были изучены перекрестные взаимодействия белковых антигенов между различными серогруппами L pneumophila. Анализ результатов перекрестного Иммуноблотгн нга L pneumophila семи серо групп с каждой из семи кроличьих сывороток против указанных серо групп позволил сгруппировать все изучаемые белковые антигены L pnetanaphda в следующем порядке Группа антигенов, предстанлешна у всех семи ссрогрунп, которая определяется всеми семью сыворотками Она локализуется широкой полосой в диапазоне молекулярных масс от 30 до 21 kDa, проявляется всеми сыворотками с выраженной интенсивностью и обладает выраженными антигенными с но Истцами На основании данных литерату ры и результатов собственных исследований мы полагаем, что дойная группа антигенов состоит из субьсдиниц МОМР с молекулярными массами 30 и 2® kDa, фрагментов ЛПС (возможно линида А) в диапазоне молекулярных масс от 30 до 20 kDa. лидеров Mip - белка с молекулярной массой 24 kDa и. вероятно, фрагментов пептнлоглнкана Подобное предположение обосиовазю тем, что все указанные компоненты структурно связаны друг с другом н формируют наружную мембрану бактериальной клетки. Указанная группа антигенов является мажорной н, a основном, определяет антигенные свойства /, ртыяюрЫЬ. Образующиеся к ним антитела являются высокоаффнниыми. Выявленный нами исспецнфический компонент с молекулярной массой 28 kDa у I н 2 серо групп, при изучении деиентограмм по величине профиля интенсивности составляет менее 1(М от всей группы н, таким образом, существенно не влияет на специфичность указанной группы антигенов

2» Антиген, представленный у всех серо групп, который определяется большинством, но не всеми, сыворотками против семи серо групп. Антиген с молекулярной массой 38 kDa не определяется сывороткой против 4-ой серотруллы у всех серогрупп, Сыворотка против ссрогруппы 5 не определяет его у 3-еЙ и 5-ой серо групп Сыворотка против ссрогруппы 6 ire определяет его у 2-ой, 5-ой и 7-ой серо групп. Сыворотка против ссрогруппы 7 не определяет его у 1-ой, 2-ой, З-ей, 4-ой и 5-ой серегрупп.

3. Группа антигенов, представленная у всех серогрупп, однако определяется только сыворотками прогни других отдельных серогрупп, Эта ipymia включает следующие антигены: 49» 43,40. 34. 31, 20, 19 н 17 kDa. Они являются гетерогенными по свойству иммуногениостн, на hik есть высоко и низко отвечающие лабораторные животные, популяция образующихся антител гетсротеина по свойству аффинности, однако эти антигены являются обидами для всех семи серогрупп L pneumophila.

I Группа антигенов, которые определяются у отдельных серогрупп сыворотками против других отдельных серогрупп. Эта группа включает следующие антигены - 64. 63.60. 54. 50, 46, 44. 36,35, 33 и 18 kDa. Они являются низко-иммуногеинымн, на них большинство лабораторных животных отвечают слабым иммунным ответом» популяция образующихся антиген преимущественно ниткдаффишмя, указанные антигены являются общими, !ю не для всех серог-рупп,

Налги также изучены антигенные и нымунногенные свойства ЛПС L pneumophila семи серогрупп, Препараты ЛПС семи серо групп L pneumophila выделяли по методу P. J. Hitchcock, T. M Brown (I9S3), woднф ицнрованвоку J.D. Urgens, FJ. Fehrenbach ( 1997). Анализ перекрестных иммуноблоттингов препаратов ЛПС семи серогрупп L pneumophila при взаимодействии с сыворотками против семи серогрупп свидетельствует о том. 'по ЛПС-антигены являются се-рогруппоспецнфнчиымп к присущи только своим серогрунпам Они распределяются в электрофорезе широкими зонами с колебаниями молекулярных масс в верхней границе в диапазоне 140 - 85 kDa и в нижней границе - в диапазоне 30 - 17 kDa. Для L pneumophila серогрупп 1.2,4.5 н 7 характерна злеюрофоретн-ческая картина классической «лесенки» распределения ЛПС- Подобная «лест-гагпгая« картина элехтрофорстичсского профиля препаратов ЛПС отсутствует у серогрупп Зкб. Кроме того, для серогрупп I, 2 и 7 достаточно четко представлена элсктрофорегическая картина распределения ЛПС на высоко- и низкомолекулярные зоны. Остальные антигенные детерминанты ЛПС, определяемые сыворотками против различных серогрупп L pneumophila, являются минорными. имеют низкую интенсивность полос и существенно не влияют на элсктро-форспгкскую картину препаратов ЛПС L pneumophila семи серогрупп Указанные минорные ЛПС - антигены, в основном, локализуются в зоне молекулярных масс 30-17 kDa и представляют собой, по-видимому, пс до коиио разрушенные фрагменты белков и пептидоглиханв, а также фрагменты липнда А

Таким образом, проведенный нами анализ антигенной структуры I- pneumophila семи серогрупп позволил не только классифицировать нммуногениые антигены L pwumophila. но н явился основой целенаправленного конструирования антигенных и иммуноглобулнновых вариантов препаратов для серологической диагностики легнонеллеэа.

Дня конструирования диагностикумов в качестве носителей антигенов н иммуноглобулинов нами использована технология полимерных микросфер. Моиодиеперстные полимерные частицы в виде коллоидных растворов с реак-шкиню-способиымн труппами на поверхности представляют итгтерес дня биотехнологии как носители биологически активных веществ, обеспечивающие их ковзлентное с вязывание и последующее участие полученных конъюгятов в нм-мунохимических процессах. Преимущество полимерных носителей связано с тем, что они стабильны, поверхность биологически инертна и физико-химическая свя л с ееиситниом известна и зависит от характера носителя. Используя метод двойной полимеризации полнакролениа - щелочью в водной среде и обработкой сафранином - были получены сшитые, стабнлызьк, нерастворимые в органических растворители* микросферы, окрашенные в красный цвет, диаметром 1,5 мкм, содержащие 1*3 мМоль/г азвдегидных групп. Полученные серии полнахродеииового мнкросфсрического носителя использовали для конструировали* антигенного и иммуногаобуяиипого легионеллезимх дн-йгиостнкумов.

Для конструирования антигенного варианта диапюстнкуыа нами отработана оригинальная технология получения растворимого легнонеллезного шттн-геиа При его патучении использована двойная технология; ультразвуковой дезинтеграции и обработкой дезокенхолатом натрия бактериальной мвссы L pneutMrphiia серогрушты I в условиях слабокислотной среды. Это позволило в значительной степени избавиться от фрагментов ЛПС и подучить растворимый антиген, обогащенный белками, При злекгрофорегическом исследовании растворимого антигена установлено наличие 23 белков с молекулярными массами от 109 до 15 Ша~ В иммуноблоттинге выявлены 13 нммунногенных антигенов с молекулярными массами от 81 ло 20 kDa, взаимодействующих с кроличьей сывороткой против серогруппы I к пять неспеинфических лтгтитенов <70, 58, 55 47 it 28 к Da), взаимодействующих с пулом нормальной кроличьей сыноротхн. Таким образом. отработана стаидартнаи технологи* получение докнгииа с известными антигенными свойствами для конструирования airra генных вариантов любых диагностикумов.

Отработана стандартная технология иммобилизации растворимого легно-неллезиого антигена и получена антигенная характеристика сенсибилизированного полимерного микросфернческого носителя. На поверхности полимерного микросферического HOCMTCJU в процессе иммобилизации сорбируются [2 им-ыуиогенных антн генов, нз которых одиннадцать с молекулярными массами 20 kD*. 26 kix 30-31 kDa, 38-39 kDa. 40 kDa, 44 kDa. 50-5] kDa, 56-58 kDa, 60 kDa, 62 Шв. 80 kDa являются специфичными для L pitewmtphUa и один, с молекулярной массой 28 kDa - неегкпифический, взаимолействуюший с ИКС. Представленные данные позволяют полагать, что полученный нами растворимы Л лсгно№1лезиыЙ антиген содержит известные полноценные антигенные компоненты L pneumophila, отиечаюиме за аитигенность. вирулентность н нм-муногенноегь возбудителя, которые эффективно сорбируются на полимерный носитель.

При изучении чувств1ггельностн лиапюстнкум взаимодействовал с различными сериями дегионеллезных гипериммунных сывороток с титрами от 1:320 до 1; 2560, При исследовании 50 сывороток больных легнонеллезом. подтвержденных в 1:95Д±]3.5. При эксперименгалмюм изучении специфичности с различными сериями сывороток против 12 гетерологичных микроорганизмов установлено, что днагностикум взаимодействовал в РАО в титре 1.40 с сыворотками против двух Серова род лсптоспир • L. hebdomadij. L. can kola, в титре 1:20-е сывороткой против L pyroxenes и сывороткой против возбудителя лихорадки Q.

При изучении специфичности с сыворотками крови 520 здоровых лиц установлено, что диагносгикум взаимодействовал в РАО в титре 1:40 с частотой 4.8%. я в титре 1 ;80 - с частотой 0,6%, При исследовании сывороток 99 больных острыми заболеваниями органов дыхания установленной бактериальной тлюлогин диагностику« взаимодействовал в РАО с титром I ;40 н с частотой 2,0%. Среди больных взрослых и детей, ссропознтнвпых в отношении хлвмиднй-ной и миколдазмснной инфекциях, чистота положительных результатов в РАО с титрами 1М составила в среднем 4,3%, в с титрами 1:60 - 0,3%.

Таким образом, исследования по определенны чувствительности и специфичности диагиостикума легнонеллезгаго серофуцпы ] антигенного полимер лого позволили установить, что чувстмггеныюсть дногиостикума составила 100%, специфичность - 99,1%. а диагностический ззпр - 1:80.

При проведении сравнительных исследований диагиостикума дегионел-лезиого серотруипы 1 антигенного нолииерного с РНИФ и ИФА, производства ннстзпутв им. Н.Ф. Гамалеи, на 509 сыворотках крови от 429 больных острыми пневмониями. установлено, что он оказался не только сопоставим с РНИФ. но и превысил era по частоте выпадения нарастания титров специфических антител в динамике инфекционного процесса, Метод ИФА с набором реактивов производства института им Н.Ф. Гамалеи давал высокий процеш дожноположй-тельных результатов. Представленные донные свидетельствуют о том, что РАО может быть использован как самостоятельный метол серологической диагностик:! легнонеллеза.

Проведенные экспериментальные исследования о наличии общих белковых 01пигенов у L рпеаяорЛИа семи серофупд н результаты исследования дногиостикума с экспериментальными сыворотками против семи ссрогрупп позволили установить возможность перекрестного взаимодействия диагностикуыв легнонеллезнога ссрогрутгпы 1 антигенного полимерного с сыворотками против других ссрогрупп 2-7. Это позволяет полагать, что полученный нами диагно-сти кум будет определять в сыворотках крови больных антитела к L ptifima-phíta других ссрогрупп, во всяком случае, серофупп 2-7.

По результатам Государственных испытаний в П1СК км. Л А. Тарасовича (протокол №7 от 19Л2.2002 г.) дишзюегнкум легиокеллезный серофупгш 1 антигенный полимерный сухой для РАО рекомендован к внедрению в практику здравоохранения страны. В настоящее время указанный диагностику» широко используется практическими медицинскими учреждениями строим для диагностики легиоиеллеза.

Для конструирования иымуногиобуИКЧОВОГО полимерного диигноетнкума и получения контрольных сывороток для проверки активности антигонкого диагност кума иамн были использованы различные схемы иммунизации.

Для получения сывороток, обогащенных антителами к белковым антигенам, для иммунизации была использована бактериальная масса L pneumophila ссрогруппы I, прогретая при Sût в течение 30 минут Наиболее предпочтительной оказалась схема с предварительным введением кроликам иммуномоду-лятора такгквина. Получены сыворотки с концентрацией белка в диапазоне 6,0 - 7,0 мг/мл, которые зарегистрированы в качестве СОП - стандартного образна предприятия при проведении Государственных испытаний в ГИСК им. ЛА. Тарасевичз и методика их получения отражена в нормативной документации на лнагноетнкум легионеллезиый ссрогруппы 1 антигенный полимерны й сухой. Эта сыворотки также использованы при изучении антигенной структуры ¿ pneumophila

Дал получения сывороток, обогащенных антителами к Л ПС. били использованы бактериальные массы L pneumophila серогрупп 1 - 7, подвергнутые обработке при 100й С в течение 2 часов. Эти сыворотки использованы для конструирования легнонеллезного иммуноглобулине веГо полимерного диагностику -ма, который предназначен для выявления антигеио а биологических жидкостях организма человека (моча), где предполагается наличие не целой бактериальной клетки, а ее фрагментов, деградированные под воздействием факторов внутренней среды организма и. в первую очередь, ЛПС. Наиболее аффектавтюй также оказались сыворотка, полученная с предварительным введением такта-вина, в которой титры в РА и РАО были одинаковы и составляли 1:640 -1:2560,

На основе указанных сывороток получен днагноетикум легионеллезный иымуноглобулнновый полимерный сухой, чувствительность которого составила 5*10* - 10* м.кУмл L pneumophila серогруппы I и от 2 до 50 мкг/мл легноиеяяезного растворимого антигена ЕЮ бедку, При изучении специфичности ди-агностикум давал отрицательные результаты с 23 изученными штаммами И видов гетерологичиых микроорганизмов с концентрацией бактериальной взвеси от 10* до 101 м.кЛи. что подтверждает его высокую специфичность. Диаг-ностикум не выявлял растворимые антигены /„ ффр/НурЬмОт, I ротагше. I и'/гое. С ргкитопк! и С. ВиглсШ в концентра пнях свыше 50 ыхг/ыд, Кроме того, диагностику™ не выявлял !■ ртгяторкИа есрогрупп 2 - 7 п концентрациях 10* - 10' м.кЛиз, что подтверждают высокую специфичность иммуноглобулН-нового полимерного диагноетнкума для рпеюпорЬМа серогруппы I. Представленные дойные свидетельствуют о возможности использования днагностн-кума для серологической идентификации £ рпеитвр/п/а серогруппы 1.

Результаты полевых испытаний диагноетнкума легионешюзиого иммуног-лобулниового полимерного в сравнении с НФА, производства института им Н.Ф. Гамалеи, на 74 пробах мочи от больных с острыми заболеваниями органов дыхания и 107 пробах воды из объектов окружающей среды выявили совпадающие результаты, что с в ндетел ьству ет о возможности использования иммуноглобулинов»! о препарата для серологической диагностики заболевания у людей, а также для серологического выявления легноиедлезного антигена в водных объектах окружающей среды,

Разработанный диагностику« летионслаезный ыгрогруппы I нммуногло-булиновый полимерный сухой предназначен для выявления лсгнонеллеэного антигена в моче у Больных с целью серологической диагностики заболевания, а также для серологической идентификации I рпгиторНИа серофуппы 1. Днаг-ностикум прошел коииссзгоиные испытания в Рост НИИ ЧИ, на него написана нормативная документация (инструкция по изготовлению и контролю), которая утверждена Ученым Советом института (протокол от 14,06-2006 г )

Дпя конструирования набора мнитлютиннруюшнх диапюстнкумов для се-ролотзтческой идентификации /. рпеыторкНа семи серогрупп нами была разработана технология получения стафилококкового реагента с высокой иммуног-лобулинсаязывающей активностью На основании экспериментальных мсследеланий подобрана рецептура агара Хоггингера с повышенным содержанием амишюго nota (не менее 1,5 г/л) и оптимальные сроки культивирований S доне штамм »Covi-an 1» с целью получения стафилококковое реагента- Используя сыворотки, обогащенные антителами к ЛПС - антигенам L pneumophila серо групп 1 - 7, получен набор легиоиеллезных ceporpyrai ! - 7 коогглю-тпирущп диагноста кумов Чувствительность легаоишезнш коагглюти-ннруюищх лиагностнкумоп с гомологичными культурами составила 5х 10* - \0 hjuW

При изучении специфичности набора легионелдемых коагглютинирую-щнх лиагностикумов с 23 штаммами 14 видов гетерологичных мнкроорганиз-мов, коллекцией референтных штаммов L pneumophila рапичных серо групп и 36 штаммами L pneumophila различных ceporpynri, ШВЙКНПК m объектов окружающей среды с концентрацией бактериальной взвеси 10* м.кУыл, в сравнении с коммерческой тест-системой Leginnella latex test производства фирмы Oxoïd, Hampshire, England, установлена строгач спсщ|фнчнйеть каждого коагг-лютиинрующего диагмосгикумя соответствующей серо группе L pneumophila и отсутствие перекрестных реакций с другими серогруппами и полное совпадение результатов с коммерческой тест-системой Legtonella latex test,

Набор лспюнеллезиых коягглютникрующих дивгностнкуыов предназначен дтя скрининга колоний и серологической идентификации L pneumophila серо групп 1 - 7 при проведении бактериологических исследований на легяо-неллеэ. Чувств1Гтель»ость набора днагноегнкумов составила 10 ы.к./ыл, a высокая специфичность подтверждена экспериментальными («следованиями

Набор коогтлютнпирующих диагностику мое L pneumophila серогруПП I -7 пропил комиссионные испытания в РостННПЧИ, на него нагшеана нормативная документация (инструкция по изготовлению н контролю), которая утверждена Ученым Советом инстзпуто (протокол ЛИ от 14,06,2006 г.),

Экспериментальные и клинические испытания разработанных нами дегио-нсляезиых антигенного и иммуноглобулинового диагностикумов, а также анализ критериев диагностики лсгиоисппея, предложенных ВОЗ и ведущими научными центрами, Европы, СШЛ к Великобритании, позволили нам сформули-ропать алгоритм диагностики болезни легионеров

В отличие от существующих в £врочс.СЛ1А и Великобритании кртстерисв, ночи предлагается алгоритм, включающий два зтапп 11л первом этапе, на основании клинико-сюнйемиологнческих и рентгенологических данных осуществляют отбор пациентов, подлежащих лабораторному исследованию на лепгонел-лез. В связи отсутствием специфических клинических черт заболевания, важнейшим мероприятием является тщательный сбор зпндемиологического анамнеза, результаты которого, л первую очередь, определяют показания к лабораторному исследованию

На втором этапе предлагается алгоритм лабораторного обследования, оценки получаемых результатов и выработки рекомендаций для дальнейших исследовании пациентов с наличием клинической картины заболевания с наличием пневмонии (клинико-рентгеиологнчсскн) или ее отсутствии,

Нами впервые предложена дифференциация исследуемого материала в зависимости от сроков заболевания, В первые семь дней от начала заболевания исследуют мокроту, а при ее отсутствии к возможности проведения бронхоскопии - бронхиальных смывов, в также мочи Мокроту исследуют бактериологически и в реакции прямой иммуиофлюоресценнии, а мочу п ИФА и в РАО с иммуногдобулнновым днатностнкумом. В сроки после седьмого дни заболевания исследуют мочу в ИФА и в РАО с иммуногдобулнновым диагтюстнкумом и кровь в РНИФ и РАО с 01гтигенным днапюстнкумом В зависимости от результатов исследования предлагаются варианты щелочения и рекомендации для регистрации заболевания или по дальнейшему исследованию

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Карбышев, Гериард Львович, 2006 год

1. Белая Ю-А., Гвйлоиская H.H., Быстром С.М., Ферапонтов Г. К. Определение холерного энтеро токсина с тюмошыо реакции коагтлютн нации tt Вестник A Mtl. -1984. № 10. - С, 69-73,

2. Белля Ю.А., Шеконян Ci"., Дроздов С,Г, и др. Диагностика рогпинруспоЯ инфекции с помощью реакции коагтлютн нации ft Вопр. вирусологии. -im-Л 2,-С. 233-236.

3. Беленький С.И. Соиремениые аспекты миологической расшифровки острых пневмоний U Сборник научных трудов 1-ш Моек мед. ин-та км. И.М,Сече1юва- • М., 1984. ■ С. 57-61.

4. Белый Ю.Ф, Верш» Ю.В., Тартаковский И,С и др. Характеристика ци-толюнкя Legionella pneumophila If Ж>рн. микробиол,. зпндемиол. N КМ» мутюбиол -l938 -Nr2.-C.4-7

5. Белый Ю.Ф., Тартаковский КС., Гульннк С,В, и др. Цнтолитичсская активность Legionella pneumophila ti Ж>рн. микробиол , зпидемнол. н имму-нобнол. 1989. 2. - С. 14-16.

6. Белый Ю.Ф., Тартаковский И,С, Нсустроева В.В. и др, Изучение условий культивирования Legionella pneumophila, влияющих на продукцию цито-токеннв И Жури микробиол., элидемиол. и иммуиобиол. 1986, - 4 ■ С, 34-37.

7. Бериет Ф Клеточная иммунологии M : Мир» 1971, - 542 с,

8. Бойд У. Основы иммунологии. М.г Мир. 1969. - 647 с.

9. Васильева В.И., Прозоровский C.B., Русакова Е В. и др. Иммуиосзруктура населения некоторых районов СССР к Legionella pneumophila I/ Журн. микробиол,,эга1Демиол, и иммуиобиол. 19Í6, - № 7, - С, 75-79.

10. Васильева В.II, Прозоровский С.В , Русакова Е В. и др. Этиология острых пневмоний в организованных коллективах И Жури, микробиол,, зпидемнол. и иммуиобиол. -1987. Nu 4. - С- 44-47.

11. Гальпева Г.В., Темежникова НД, Стержонтова Л,В. Экспресс-диагностика легионеллеза // Энилемиол . микробиол, и иммуиол. бактер. и внрусн, миф.: Тез. докл. Ростов-н/Д, 1989. - С. 114-116.

12. Гревннип ГС , Ионтова U.M. Артюхов А.И. и др. Новый метод экспресс-днагностикн острой стрептококковой инфекции Н Жури, микробиол , эпидемией, и иммуиобиол. ■ 1990. № 12. - С 22-26.

13. Грижсбовскнй Г.М., Ледовская А .П., Зарсвина Л.И. Лопаткин О.Н. К вопросу об использовании реакции коагглюгннацни для дналюстнкн холеры. //Особо опвс, ииф, ira Кавказе; Тез, дохл, Ставрополь, 1987. - С. 158160.

14. Гурлева Г.Г., Хаяяпнна Е.Г., Смо.чикова ЛЖ Коагглютинирующнс днаг-носгикумы для серологической идентификации Yertinía етегосЫМса /1

15. Лвб. дело, 1989. - Не 10. - С 66-68

16. Дюскалиева Г У Разработка и оценка ->ффсктнвиос1и легиоиеллезных эритрошпарных днагкосгикумоь C/XVII с«зд Bcecoi об-ы эпидемнол., микробиол. и парозитол. М„ 1989,-T. II - С. 11Í-112,

17. Ерохни Е-П., Тартаковекий КС, Радченко О-В. ti др. Метод пассивной агглютинации полимерных дисперсий для диагностики легионеллеза // Жури. микробиол., зпидемиол. и иммунобиол 1988. - № 11. - С. 41-43.

18. Клиника, лечение н диагностика легионеллеза. Метод, рекоы, МИН зпнд. и микр. им. Гамалеи. Подгот, Покровским В.И, ■ М„ 198?, -31 с.

19. Костр Юкона И.Н., Точнлкниа М.Х., Знатно И.Ю. Реакция контлютнна-иин и ее применение с целио экспресс-диагностики меннигохоккового менингита и Жури, микробиол. зпидемиол и иммунобиол 1981 . - Jfe. 3. -С 62-46.

20. Лабораторная диагностика лепиииыше»; Метод, реком. НИН шил. и микр. им. Гамалея. Подгот. ГОокроаским В.И- М., 1987. -28 с,

21. Махрова ИЛ., Комбфом Ю С,, Яровая Л,М. и др. Реакция коагглютнна-ции для выделения дифтерийного токсина К Жури, микробиол . эпидемией. и иммунобиол. 1989. ~ Jfe 3, - С. 68-71.

22. Мамедов ЗЛ, ИйНШШШе чумного когитдютинируюшего диапюстн-кума в изучении штаммов чумы, выделенных в Центрально-Кавказском очаге чумы Н Акту ал. вопр. особо-опасных инфекций: Матер, региональной иауч -практ, конф, Нальчик, 2000, - С. 39-40,

23. Небожина Л В. Петросов В В., Конюхов В.Ф. и др. Применение различных иммуносералогнчсскнх мегодов дня диагностики легионеллеза /! Иммуио-бнол. препараты нового поколения il методы их контроля М., 1988,-С. 98-102.

24. Орлова Г-М-, Алимов Л.Б., Снвкова О.В. н др Набор еухкх коагглютини-рузощкх ли л п гости кум о в для обнаружения и илентификаиин возбудителей опасных заболеваний H Жури, микробиол , эпндемнол. и иммунобиол. -1992 171-172,

25. Паши» ЛЮ. Пономарев Н.Г, Джапаридзе М.Н. Чумной ннлоспецнфич-ный коагглютинирующий днагностикум И Состояние, пробл и перспективы рштаи диалюст. бахт. инф, Оболенск, 1990. - С. 86.

26. Петров Р-Е), Иммунология. М.: Медицина. 1983. - 368 е.

27. Петров Р. В., Хаитов Р.М, Маиько В.М., Михайлова А. А. Контроль и регуляция иммунного ответа. Л.: Медицина. 1981. - 311 с.

28. Пожалотана Л.В. Лнхшккая С.И. О возможности применения реакции хооггактотаиии для индикации антигенов Мигеля Зоние в молоке н молочных продуктах И Новое в практике лаб неследований инф. заболеваний.- Горький, 1987. С 75-78.

29. Покровский В.И, Прозоровский СВ., Тлртаковенй НС., и др. Вспышка летноиеллезной инфекции в Армавире // Жури, мнкробнод. зпидеыиол. и иымунобиол. 1988 - Jfe 10. - С. 24-27.

30. Покровский В,И , Островский Н-Н. Легиоиеллез // Р> к-во но клин , диагн. и лечению опое. инф. болеззкй. -М., 1994, С. 22-23.

31. Прозоровский C.B., Покровский В.И,, Тартаковский И.С. Болезнь легионеров (легионеллез). М.: Медицина, 1984, ■ 207 с.

32. Прозоровский СВ., Покровский В.И, Тартаковский НС. н др. Выявление случаев лепюнеллеза (болезнь легионеров) среди больных острыми пневмониям» П Сое. медицина. -1982. & 3. - С. 96-98.

33. Прозоровский C.B., Русакова Е.В., Рычнев А.Е, к др. Значение Lcgioneila ptteiunophila в респираторной патологии человека И Жури, микробиод., зинлемиол. и нммуиобиол.-1987,- J6 4. С. 34-37.

34. Радченко О.В., Павлова ИЛ,, Тартаковский И.С , Шахонина К.Л. Использование иммуиоферментного анализа для определения легнонеллезного антигена // Новое в практике лаб. исследований инф- заболеваний- Горький, 1987.-С. 39-44.

35. Ройт А- Основы иммунологии М.: Мир, 1991, - 327 с,

36. Сакварелндзе Л-А„ Иерсесо» В,А,. Мгелалзе Ю,Г. и лр, Случаи заболевания дегионеллезом в Тбилиси Н Журн. микробиол. эпидемиол. и иммуиобиол. 1990. - Si I,-С. 42-44.

37. Саяпина Л.В. Адамова Г В , Аннеимова Т.Н. и др. Оценка качества диагностику ма МПНКПШО ceporpymiH I антигенного полимерною по результатам I Ъсудирствснных испытаний // 1Тробл особо опас. инф. Саратов 2001. - Вып. I (87). - С. 61 -63.

38. Сивковл OB, Павлович H B., Аднмов Л.Б. и др. 1применение реакции ко-агглютинации дла серологической ндснтификонни бескллсульных вариантов туляремиЙного микроб« И Акту ал. пробл. профилакт. туляремии: Тез, докл. Всесоюз, конф. М., 1991, -С. 169-170.

39. Сиицин С-В. Бархатова О-А, Дробышевска* э.И. и др, Исследование бножшесш смйсти нстоимвиишх антител к цитолизину Legionella pneumophila И Жури, микробнол,, злидсчиол. и иммунобиол. 1990. - Jir1. П.-С-72-75.

40. Спииин С В , Бархатова ОН, Дробышсвскоя Э.И. и лр, Моноклоиалытые антитела х цитолизину Legioneila pneumophila Ii Жури, микробнол. энн-демиол. и иммунобиол, I9S9. - Л 10, - С. 83-87,

41. Спнцын С.В. Дробышевская Э,И, Бархатова О.И. и Др Стимуляция иммунного ответа к цитолизину Legionella pneumophila с помощью моно-клонмьных антиндиотипических антител И Имчунология 1991. -Л 1. -С. 26-28.

42. Тартакогекий И.С., Литвин В Ю-, Проюровский С В Экологические аспекты легнонеллсза И Жури чнкробиол . mi идем иол н нмыушбнол, -1988.-Л*® 8. -С. 122-125.

43. ТартаковскнЙ И.С. Радченко О.В., Русакова Е В. и др. Выявление антител х Legionella pneumophila шшуиофермеитннм методом в сыворотке крови больных пневмонией It Микробиология. • 1988 Jfe 11. - С. 79-81.

44. Тартаковеккй И.С. Темежиикова НД, Карпова Т. И. Легиеиеллеа: проблемы и перспективы лабораторной диагностики N Проблемы особо шгас. ннф,- Саратов, 2005. Выл 90, - С. 17-23.

45. Тсмсжннкова Н.Д., Белова MB. Канатов Ю.В. Легионеллезные пригреют тарные диагиостикумы // Гомеоетаэ и ннф, процесс; Тез. докл. К Мсж-дуиарод. конф. Саратов, 1996- - Ч, II, - С, 334,

46. Хазвнеон С Л- Коаляютннирующис шигсллезные решен ты разработка технологии получения, использование для ееротииироваиия и индикации ишгелл: Автореф. дис. Кй11Д. бнол, наук. М, 1983. - 24 с.

47. Чубовя Н.В., Абеиова У-А. Экспресс-метод индикации ротавирусиого антигена // (Спин. лаб. диагностика. 1992 - № Е1-12. - С.64 - 66.

48. Эпидемиология, профилактика легионеллеза и борьба с ним: меморандум совещания ВОЗ И Бюллетень ВОЗ. 1990, - 'Г, 68, - С, 7-17.

49. Adetekc A-, Pnieklcr J., Benson К. el al, Legionclla-like ameba! pathogens -phylogenetic status and possible role in respiratory discase U Emerg. Infecí. Di», -1996. Vol. 2, - P 225-230.

50. Baine W.B. Cytolytic and phospholipase C activity in Legionella species ti J. Gen- Microbiol. ■ 1985, • Vol 13L P. 1383-1391.

51. Bangsborg 1 \f, Shaad G, Ptarinun F, HoJby N. Cross-reactive Legionella antigens and the anybody response during infection it APMIS- 1991. - Vol. 99. • P 854-865.

52. Bangsborg J-M-, Shand G,H„ Hansen K„ Wright JJ, Performance of fow different indirect enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) to detect specific IgG, IgA, and IgM in legionnaires disease/-1 APMIS. 1994. - Vol. 102, №7. -P 501-508.

53. Barfca N , Tomosi JI . Stadisbaedci S. ELI&A using whole Legionella pneumophila cells as antigen. Comparison between monovalent and polyvalent antigen for the serodiagnosis of human legioncllosis U J, Immunol. Mcthocb -1986.-Vol.93,Ht I.-P.77-81.

54. Barthe t\, Joly J.R, Ramsay D. cl al. Common epitope on the tipopolysaceha-ridc of Legionella pneumophila recognized by a monoclonal antibody !l J. Clin. Microbiol 19S8. - Vol. 26, to 5, - P, 1016-1023,

55. Bazovska S Differentiation of serologically related «regroups of Legionella pneumophila H ZcntralbL Bakteriol, Mlkrobiol. Hyg, A- 1988. Vol. 267. № 3,-P. 457-461.

56. Ba/ovska S., Spalekova M L.egionello3is in Slovakia It Bralia. tec. Listy. -1994,-Vol. 95. Jfc 11- P. 515-517,

57. Beer S„ Boldur I , Kazak R. ct al. Scrum antibodies to Legionella agent in bronchial asthma // Arch. Dis. Child. 1985. - Vol. 60.№ 3. - P. 225-230.

58. Ben Vaafcov M, La/arovieh Z. Beer S. ct al. Prevalence of Chlamydia pneu-mxmioe antibodies in patients with acute respirnloty infections in Israel H J, Clin. Pathol. -1994 Vol. 47, Л3, - P. 232-235.

59. Benaccraff В., Ojeda Л., Manner P H. Studies on artificial antigen. II. The antigenicity in guinea pigs of arsaniltc acid conjugates of copolymer* of D or L amino acid Hi. E*p, Med. 1963, - Vol. II», - P. 945-951

60. Benson R.F, Fields B.S. Classification of the a*005 Legionella II Scmin. Rcs-ptr. Infect- 1998. - Vol. 13. - P. 90-99.

61. Berdal B.P., Faulty C.E., Feeley J C Detection of Legionella pneumophila antigen in urine by enzint-linked immimospesiflc assay H J. Clin. Microbiol- -979. Vol. 9, № 9. - P. 575-57«.

62. Berger K.H., tsberg R.R. Two distinct defects in intracellular growth complemented by a single genetic locus in Legionella pneumophila tt Mol, Microbiol -1993.-Vol.7.-P. 7-19,

63. Berger K.H., Menriam J J., Isberg R R. Altered intracellular targeting properties associated with mutations in the Legionella pneumophila dotA gene ft Mol. Microbiol, 1994. - Vol, 14.- P. 809-822.

64. Birtlcs RJ. Harrison T.G., Samuel D-, Taylor A.G. Evalution of urinary antigen EL1SA for diagnosing Legionella pneumophila serogroup 1 infection И J. Clin. Pathol. 1990. - Vol 43, Si 8 - P <$5-690.

65. Blonder S J., Horwrtz M.A, Vaccination with the major secretory protein of Legionella pneumophila induced cell mediate and protective immunity in a guinea pig model of Legionnaires' disease// i. Exp. Med. 1989- - Vol. 169. - p. 691

66. Bosshardl S- C., Benson R. F-, Fields B. S. Flagella are a positive predictor for virulence in LegionellaHMicrob. Pathog. 1997- - Vol. 23. - P. 107-112,

67. Boswell T-C. Serological cross reaction between Legionella and Campilobacter in the rapid mictwiggtatmatton lesi //J. Clin. Patho*. -1996. Vol. 49, № 7- ■ P. 584-586.

68. Brand B.C. Sadosfcy A.B., Simmon HA. The Legionella pneumophila ¡cm locus: a set of genes required for intracellular multiplication in human macrophages // Mol- Microbiol- -1994. Vol. 14. - P. 797-808.

69. Brenner D.J., Streigerwall A.G-. MeDade Classification of the Legionnaif« disease bacterium: Legionella pneumophila, genus novum, specie» new«, of the family Legiomtllaceae, familia nova U Ann, Int. Med. 1979, -Vol. 90, - P. 656-658.

70. Brindlc RJ.r Bryant T.N., Draper P.W. Taxonomtc investigation of Legionella pneumophila using monoclonal antibodies II J. Clin. Microbiol. 1989 - Vol 27. - P 536-539

71. Brindfe RJ, Nosocomial Legionnaires' disease in diagnosis and typing t! J. Hosp. Inject. -1988, JfelL-P. 196-200

72. Brindlc RJ. Stannett P.J., Toten J.Q. Legionellapneutnophilcr, monoclonal antibody typing of clinical and environmental isolates// Epidemiol. Infect. 1987. -Vol. 99, ^2.-P. 235-239.

73. Butler СЛ., Hoffoian P.S. Characterization of a major 31 -kilodalton pepti-doglycan-btHHid protein of Legionella pneumophila // J. Bacterio. 1990. -Vol, 171 -P. 2401-2407.

74. Butter C.A. Street E D , Hatch T P . Hoffman P.S. Dnnil fide-bonded outer membrane proteins in the genus Legionella // Infect tmmun. 1985. - Vol, 48. -P. 14-18.

75. Byrne В., Swim son MS. Expression of Legionella pneumophila virulence traits in response to growth conditions II Infect Immun 1998 - Vol. 66. • P. 30293034.

76. Carrillo de Albornoz M.M., Perez de Heredia J.H., Sochcz Alvares J , Tiberio Lopez G. Epidemiology of community attired pneumonia in the health arta of Navarra// Med. Clin. Bare. 1991, - Vol. 97, Jfc 2. ■ P. 50-52.

77. Chen S, Hicks L., Yuen M. et al. Serological cross-reaction between Legionella tpp. and Capnocytophaga ochracea by using latex agglutination lest H J. Clin. Microbiol, 1994. - VoJ. 32, № 12. - P. 3054-3055,

78. Cianciotlo N.P., O'Canmetl W, Daseh G-H., Mallavia L P. Detection of Mip-like sequences and Mip-related protein* within the family Rlekeitxiacwe II Cutr. Microbiol 1995. - Vol. 30. - P 149-153.

79. Cianciotto N.P., Eiscnstein B.I, Mody C.H. Engleberg N.C. A mutation in the imp gene results in an attenuation of Legionella pneumophila virulence 1/ J. Infect. Dis. 1990. - Vol, 162. - P. 121-126.

80. Cianciotlo N.P., Fields B.S- Legionella pneumophila mip gene potentiates intracellular infection of protozoa and human macrophages It Proc Natl, Acad Sci, 1992. - Vol 89- - P- 5188-5191,

81. Ciiillo JJ3., Tompkins L.S-, Falkow S. Growth of Legionella pneumophila in Acanlhamoeba caslellanii enhances invasion U Infect. Immun. 1994. - Vol. 62.-P. 3254-3261.

82. Cirillo S., Bctmudez L., El-Etr S. et aL Legionella pneumophila entry gene rtxA is involved in virulence// Infect Immun. 2001. - Vol. 69. - P. 508-517.

83. Costa J., Tiago l da Costa M, Vcrissimo A Presence and persistence of Legionella /pp. in groundwater // Appl. Environ. Microbiol, 2005- - Vol, 71. - P 663-671.

84. De Ory F., Echevarria J.M-, Pclaz C. et al. Detection of specific IgM antibody in the investigation of an outbreak of pneumonia due lo Legionella pneumo-phita serogroup I// Cltn. Microbiol. Infect. ■ 2000. Vol. 6, № 2. - P. 64-69.

85. Dc-Crcswnzo G,, Federico G Research on lg Cr and lg M anti Legionella jnteitntophila group 1 in 101 subjects with pneumonitis II Quad. Sclav«. Diagn. -1985. Vol. 21, № 4. - P. 419-423.

86. Delia F , Tort J., Morera M.A. et at. Value of bacterial antigens detection in the diagnostic yield of transthoracic needle aspinwion in severe community acquired pneumonia //Thorax. -1993, ■ VoJ. 18, № 12, P. 1237-1229,

87. Den Boer J, W„ Yaermwt P.F., Schellefcens J. et al. A large outbreak of Legionnaires' disease at a flower show, the Netherlands, 1999 H Emerg, Infect. Dis. -2001-Vol.8,№ I.-P. S-16.

88. IS, Dirven K, I even M., Peeters M. F. et al Comparison of three Legionella urinary antigen assays during an outbreak of legionellosis in Belgium UI Med. Microbiol. 2005.-Vol. 54, - P, 1213-1216.

89. Dole®» A-, Aurell l-l., ReyTolle M. et al. Cluneal and environmental distributions of Legionella itraina in France are different II J, Clin. Microbiol, 2004. -Vol. 42. - P. 458-460.

90. Dubois M., Gilles A., Hamilton IK- ct al. Cotarimetrie method for determination of sugars and related substances U Anal. Chem, 1956. - Vol. 28. № 3. - P. 350-356.

91. Hi, Clin. Mkrobwl. 1989. - Vol. 27, ¿fr IL - P 2455-2458127, Ehret W Methods and problems of Legionella diagnosis // Immun, Infect. -1989.-Vol. 17, Jfe 1. - P. 4-12.

92. Ehrci W.t Ruelcdcschel G. Membrane proteins of Legionellaeeae I Memhrane proteins of different strains and serogroups of Legionella pneumophila II Zen-trafbl. Bakieriol, Mikrobiol. Hyg. A. -1985. Vol. 259. - P. 433-445.

93. Eisenstein B.I,, Engleberg N.C. Applied molecular genetics; new tools for themicrobiologist Olid clinician fit. Infect- Dis- J9S6 ■ Vol- 153. • P 416-429,

94. Elliot J A. Johnson W. Immunological and biochemical relationship among flagella isolttled from Legionellapneumophila semigroups I, 2 and 3 H Infect Immun -1981. Vol- 33. - P, 602-610.

95. England AC., McKjnney R.M, Skalty P, Gorman G.W, A fifth serogroup of Legionella pneumophila//Am. lot, Med, • 1980. ■ Vol 93 . P. 58-59.

96. Englefccrg RC., Carter C„ Weber DJL ci al DNA sequence of mtp, a Legionella pneumophila gene associated with macrophage inactivity H Infect Immun. -1989. Vol- 57, - P. 1263-1270.

97. Englebeig N.C., Pearlmoii £., №xon l>„ EisCMtefa B l Antibodies isolated by using cloned surface antigens recognize antigenicalty related components of Legionella pneumophila and other Legionella species II J. Immunol. 1986. -Vol. I36.-P. I4J5-I417,

98. Fields B. S. Legionellas and Legionnaires disease // Manual of environmental microbiology- Washington, D.C., 1997 - Vol-1. - P. 666-675.

99. SM Fields B- S, Procedure* for the recovery of Legionella from the Mtvironmenl,vol 2, U S. Depoitmenl of Health and Human Services, Atlanta. Gn,

100. HI. Fields В S-The molecular ecology of Legionella И Trends Microbiol. 1996. -Vot, 4, - P. 286-290,

101. Fields B.S„ Benson R.F., Betoer R.E. Legirmdla and legionnaires disease: 25 years of mvesligaiion it Clin. Microbiol. Rev. 2002. - Vol. 15. - P. 506-526.

102. Fischer G, Bang Ft. Ludwig B. ct at. Mlp protein of Legionella pneumophila exhibits peptidyl-prolyl ci^rans isomcrase (PPI-ase) activity II Mol. Microbiol. -1992. -Vot. 6.-P. 1375-1183.

103. Flesher A.R-, Ito S„ Manshcim BJ., Kaspcr D.L. The cell envelope of Legionnaires" diseoie bacterium: ttuwpholo&ic and biochemical cbaracleristics // Ann Int. Med. t979. - Vol. 90, ■ P. 628-630.

104. Flesher A.R. Jennings 11J . Ludowski C., Kaspcr D.L. Isolation of a scrogroup 1 • specific antigen inm Legionella pneumophila IIУ Infect. Dis. 1982, - Vol. 145,№2,-P. 224-233.

105. Fliemtans C.B., Cherry W.B. Orrison L. et al. Ecological distribution of gionella pneumophila II Appl, Environ. Microbiol, 1981 ■ Vol 41 - P. 9-16.

106. Formica N. Vales M. Beers M. ei at. The impact of diagnosis by Legionella urinary antigen test on the epidemiology and outcomes of legionnaires' disease li Epidemiol. Infect 2001 - Vol, 27, 2. ■ P, 275-280.

107. Fotos P.O. Westfall H.N„ Snyder I S. ct al. Prevalence of Legionella specific IgG and IgM antibody in a dental clinic population II J. Dental- Res. ■1985 -Vol64,> 12.-P. 1382-1385.

108. Fox K.F. Brown A. Properties of the genus Ttrtlockie. Difierennaijon of Tailoekia (Legionella) moceochernii and mtcdadei from each other and from other Legionella /I Can, J, Microbiol 1993. - Vol. 39. - P. 486-491

109. Foy H.M- Legionnaires disease in the prepaid medical care group in Seattle < 1963-1975) II Lancet. -1979. Vol. I - P, 767-770.

110. Franzin L-, ScrammuKEa F. Prevalence of Legionella pneumophila serogroup 1 antibodies in blood donor// Eur. J- Epidemiol. • 1995- Vol- I lt№ 4. - P 475478,

111. Fraser D.W., Tsai T.R., Orenstctn W. « al. Legionnaires disease; description of an epidemic of pneumonia H N. Engl. J. Med, 1977. - Vol, 297, • P. 11891197,

112. Gabay 3-Е., Blake M, Nilcs W.D.r Korwitz M.A. Purification of Ij*gi(mrlia pneumophila major outer membrane protein and demonstration that и b а роли Hi. ftaclerioi, ■ 1985- Vol, 162, - P, 85-91.

113. Gao L Y., Abu Kwaik Y Apoptosis in macrophages and alveolar epithelial cells during early stages of infection by Legionella pneumophila and its role in cytopathogenieity H Infect Immun. -1999. VoL67. - P. 862-870.

114. Goo L.Y., Ab« Kwaik Y, The mechunism of kilting and exiting the protozoan host Acamltamoeba ¡yolyphago by Legionella ptieumophila H Environ. Microbiol. 2000. - Vol, 2.-P. 79-90.

115. Gao L.Y , Harb, O.S. Abu Kwaik Y. Utilization of similar mechanisms by Legionella pneumophila to parasi«« two evolutionarily distant host cells, mammalian macrophages and protozoa U Infect. Immun. ■ 1997 Vol, 65, - P 4738-4746.

116. Gareia-Fulgueir» A-, Navarro C„ Fenoíl D. et al- Legionnaires disease ow-break in Murcia, Spain // Emerg, lnf«t. Dis, 2003. - Vol. 9, - P, 915-921.

117. Garduño R.A., Faulkner G., Trevors M.A- et al. Immunolocaliiation of Hsp60 in Legionella pneumophila Hi. BacterioL 1998. - Vol. 180. - P. 505-513.

118. Garduño R A , Garduno E., Hoffman P.S. Surface-associated Hsp60 chaperöflin of Legionella pneumophila mediates invasion in a Hetji cell model // Infect Immun, 1998. ■ Vol- 66. - P. 4602-4610.

119. Gamty G.M., Brown A , Vickeis R,M. Tailockia and h'luoribacler: two newgenera of organisms resembling Legionella pneumophila ¡1 In1 J. Syst. Bactc-rioL-1980.-VoL 30, ■ P 609*614.

120. Gordon AJi, I^Arcy Hart P., Young. M.R. Ammonia inhibits phagosome-ysosonw fusion in macrophages// Nature.- 1980. Vol. 286.- P. 79-80.

121. Gosling L.H., Cabrian K , Siurge J.C., finldsiesn L.C. Identification of a specie*-specific antigen in Legfondfapneumophila by a monoclonal antibody // J. din. Microbiol. 1984. - Vol, 20. - P. (031-1035.

122. Gump D.W., Keegan M. Pulmonary infections due to Legionella in immunocompromised paliems // Sem in. Rcspir. Infect. 1986. - Vol.1, Jfe 3- - P- 151159.

123. Hagele S., Hacker J,, Brand B.C Legionella pneumophila kills human phagocytes but ikX protozoan best cells by inducing apoptotic cell deaih // FEMS Microbiol. Lett. 1998. - Vol. 169. - P Sl-58.

124. Hammer BJC. Swanjon MS, Co-ordination of Legionella pneumophila virulence with amy into stationary phase by ppGpp // Mol. Microbiol. 1999. -VoJ. 33.-P. 721-731

125. Hancock R.Ë.W., Mikado H. Outer membranes of gram-negative bacteria- XIX. Isolalion From Pseudomonas aeruginosa PAOI und use in reconstitution and definition of the permeability barrier//I- Bacterio!. ■ 1978, Vol. 136. - P. 381390.

126. Harnldsson A., Rechnitzer C. Friis-Moller A., Dricm H. Prevalence of IgM anybodies to nine Legionella species in Icelandic children // Sctmd, J. Infect Dis, -1090 Vol. 22>№t,- P. 115-119.

127. Harrison T.C., Doumon E. Taylor Л-С. Evaluation of seraittvicy of two serological tests for diagnosing pneumonia caused by Legionella pneumophila ж-togroop I //J, Clin, Pathol -1987, Vol, 10, Mr I. - P. 77-82,

128. Hebert ОЛ- Hippurale hydrolysis by Legionella pneumophila. // J, Clin. Microbiol 1981. - Vol-13- - P 240-242

129. Helbig J.H., Lück P.C. Kntrd Y. A. el nl. Molecular characterization of a viru-letKC-Bssociatcd epitope on tlie lipo polysaccharide of Legionella pneumophila scrogroup I II Epidemiol, Infect. 1995. - Vol. 115, - P. 71-78,

130. Helbig J II, Ludwig В., Lílck P C et al Monoclonal antibodies to Legionella Mip proteins recognize genus- and species-specific epitopes II Clin Diagn Lab, Immunol 1995, - Vol. 2. - P, 160-165,

131. Helbig J Л, Lflck P.C., Jacobs E., Witt M. Localization of Legionella pneumophila Mip protein inside phagosomes of Aeamhamoeba cajtelanii 11 Legionella;5th Intern. Conf. on Legionella. Washington: «ASM Press». 2002. - P 49-51,

132. Helbig J H. Ladt P.C., Pilz C. Witxleb W Common epitope on urinary antigen derived from different Legionella pneumophila serogroup 1 strains recognized by a monoclonal antibody // Int. i, Med. Microbiol. -1990. Vol. 273, Kt 4. - P, 473-480.

133. Helbig J.H„ Lftcfc P.C., PÍU C., Wiulcto W. Determination of Legionella antigens using monoclonal antibodies It Z, Gesamte. Hyg. 1991. - Vol. 37. - P 87-89.

134. Helbig Ш. Lftck P.C., Witzteb W. Diagnosis of Legi,mella рптамрШа by detection of antigenuria using an enzymimmunoossay with 6 antibody specificities H 2, Oesarme, Hyg. -19*9. Vol. 35. Jfc 10. - P. 591-593.

135. Heltbcrg t , Jepscn O B , Larsen S.O., Lind K. Scrocpidemiologocal study of Legionella infection in Denmark. A 28-mo«lh retrospective survey U Dan-Med. Bull- -1988. Vol. 35, № 1, - P 95-98.

136. Heuner K-, Steinen M., Dietrich С. et ¿I- Function and expression of Legionella pneumophila surface factors H Legionella; 5th Intern, Conf. on Legionella. -Washington: «ASM Press«, 2002. p. 43-48,

137. Heuner К , Bender-Beek L, Brand B.C. et al. Cloning and genetic eliaractcrlza-tion of the flagellum subunii gene (flnA ) of Legionella /meumophila serogroup I tt Infect. Immun, 1995, - Vol. 63, - P. 2499-2507.

138. Heuner K, Hacker J,, Brand B.C. The alternative sigma factor sigma2S of Legionella pnetjmofihila restores nagellotion and motility to an Escherichia coli fliA mutant //1. Bacterio!. 1997, - Vol. 179. - P. 17-23,

139. Htggtttt C-F. The ABC of channel regulation H Cell. (995. - Vol, 81 - P. 693696,

140. Hindahl M.S., Jglewsfci B.H. Isolation and characterization of the Legionella pneumophila outer membrane ft I- Bacterial. -1984. Vol, 159, № L - P. 107113,

141. Hindahl M-S,, Iglewski B.H, Outer membrane prolem from Legionella pneumophila scrogroups and other Uglonella species И Enfect. Immun 1986.1. Vol. 51, Jfe L-P 94-101

142. Hitchcock PJ.r Brov.n T.M. Morphologocal heterogeneity among Salmonella lipopolysaccharide chemoiypes in wlvcr-siamcd Polyacrylamid gib It I. Bactc-fiol. -1983. Vol. 154. - P. 269-277.

143. Hoffman P.S,, Butler CA., Quinn F.D. Cloningnnd tcin pe raiure-de pen dent expression m Escherichia «fi oí a Lcgiuneffn pneumophila gene coding fw a genus-common 60-ktlodaUon antigen It Infect. Immun. ■ 1989. Vol. 57r - P 1731-1739.

144. Hoffman P S„ Ripley M. Weeratnn R Cloning and nucleoide sequence of a gene (oflipS) encoding the major outer membrane proietn of Legionella pneumophila NJ. Bacterio!. 1992. Vol. 174. - P. 914-920.

145. Holliday M.G. Latex agglutination test for Legionella antibodies /I Lancet -1986.-Vol. 16.№2.-P. 465-466.

146. Jemigan D.B., Hofmaim J., Cetron M.S. et al. Outbreak of Legionnaires" disease among cruise stop passengers exposed to a contaminated whirlpool spa I/ Lancd. -1996. Vol. 24. - P. 494-499,

147. Jibtki K., Nakaimura S , Ooi S. el al. Detection of urinary' Legionella antigen by radioimmunoassay. I. Method and basic studies H Kansenshogaku, ¿osshi -19*5.-Vol. 59. t-S,

148. Johnson W. Elliott JA., Helms C-M, Refiner E.D A high molecular weight in the Legionnaires disease bacterium: isolation and partial characterisation II Ann. Int. Med. 1979, - Vol. 90. - P 638-641.

149. Johnson W.T Pesanti E. Elliott J.A, Scrospeeiftdfy and opsonic activity of an-tisem to Ugioneiia pneumophila ft Infect, fromun 1979. - Vol. 26- - P. 698704.

150. Joly J.R ► McKmncy R,M,, Tobin J. et al. Devclopmenl of в standardized sub-grouping scheme for Legionella pneumophila serogroup 1 using monoclonal antibodies //J. Clin. Microdot. -1986 Vol, 23. - P- 768-771.

151. Joseph C.A., Wesson J.M. Harrison T.G.t Bartlett C.L.R. Nosocomial Legionnaires' disease in England and Ш*. 1980-1992II Epidemiol Infect -1992. -Vol. 112. P. 329-345.

152. Junge-Mathys E, Mathys W. Legionellosis—an example of environmentally caused infections it tmenstv 1994. - Vol, 2. • P. 29-33,

153. Katx S.M., Hammel J.M. The effect of drying, heal, and p| . on the survival of LegionellapneumophilaH Ann. Clin. Lob, Sei, 198? - VoL 17, - P. 150-156.

154. Keen M.G., Hoffman P,S. Characterization of a Legionella pneumophila extracellular protease exhibiting hemolytic and cytotoxic activities It Infect tm-mun. -1989. • Vol. 57, P 732-738,

155. Knirel Y A. Moll H., Zahringcr U Structural study of a highly Q-aceiylawd core of Legionella pneumophila setogroup 1 lipo polysaccharide // Carbohydf-Res -1996. Vol, 293. - P.223-234.

156. KniTel Y-A-, Rieteebel E.T., Mar« R., Zahringer U. The slracturc of the O-specifpc chain of Legionella pneumophila scrogroup I lipopolysaccharvde // Eur, I Bioch. -1994, Vol 221 - p. 239-245.

157. Ко К.S , Hong S.K-t Ьее 11 К . et al. Molecular evolution of Iii« doiA gene in Legtonella pneumophila II i. Bacterid. 2003. - Vo4-185,-P. 6269-62TJ,

158. Köhler R.B, Antigen detection for the rapid diagnosis of Mieopiasma and Legionella pneumophila II Diagn. Microbiol. Infect- Dis. 1986. - Vol 4. - P 47S-S9S.

159. Köhler R.B,, Zimmermann Sli , Wilson E. ct a I Rapid radioimmunoassay diagnosis of Legionnaires disease, detection and partial characterization of urinary' antigen// Ann. Int. Med. -1981. « Vol. 94. P. 601-605.

160. Koide M. Higa F., Arakaki N , Saito A isolation of Legionella longbeachac and Legionella ipp from Japanese potting soll» // Legtonella: 5th Intern. Conf. on Legionella. Washington: «ASM Press». 2002. - P. 356-359.

161. KooiïtrB О., Herfurth L„ Lüne berg E. et al. Epitope mapping of die O-chain polysaccharide of Lesione!¡a pneumophila serogroup I tipopofysaecharidc by saturation-tnmsfer-di FTereiwx NMR spectroscopy H Eur. J. Bîochem. 2002. -Vol- 269 - P 5*73-582.

162. Kronwal I G A rapid slide-agglutination method for typing pncumococci by means of specific antibody absorbed to protein A containing staphylococci H J, Med. Microbiol. 1973. - Vol.6. - P.I358-1361.

163. KuritAy J.N. Sporadic Legionelíosij in (be United States, 1970 to 1982 // Legionella: Proc. of the 2nd Intern. Svmpos. Washington, D.C., 1988. - P.243-245.

164. Kusnetsov J„ Tiittanen M , Méntula S„ Jousintiea-Somer Ii Hot water systems with low concentrations of l^egtortelloe may be n risk on cruise ships H Legionella 5th Intern. Conf on Legionella. ■ Washington: «ASM Presa», 2002, -P. 349-352.

165. Lebrun L., Tram C-, d Azambuja S., Pillol J. Immunofluorescence characterization of Legionella, narrow specificity of polyclonal imnnnvosera to various se-rogroups and species ¡i Acta Microbiol. Hung, 1986. - Vol. 33, № I. - P. 4349.

166. Legionella 2003; An update and statement by the association of water technologies. USA, 2003. - 33 p.

167. Legionnaires' disease associated with a whirlpool spa display U MMWR. -1997. Vol. 46 - P, 83-86

168. Legionnaires discase in Europe, 1996 // Weekly Epidemiol. Ret ■ 1997. VoL 72. - P. 253-257,

169. Legmimaires" disease in Europe, 1997 fl Weekly Epidemiol, Rec 1998. - Vol 73- - P. 257-261.

170. Legionnaires' disease in Europe, 1998 H Weekly Epidemiol. Rec 1999. - Vol.74. P 273-280.

171. Legionnaires' disease in Europe. 1999// Weekly Epidemiol. Rec, 2000- - Vol,75, P. 347-352.

172. Leland D.S„ KMiler R.B. Evaluation of the L-CLONE Legionella pneumophila serogroup 1 urine antigen latex lest 1/ 3. Clin. Microbiol 1991 - Vol. 29, ife 10. -P. 2220-2223.

173. Lena M .W ., Brown A, Legionella pneumophila has two 60-kilodalion heat-shock proteins It Cuir. Microbiol. 1995. - Vol. 31. - P. 332-335.

174. Letna M.W., Brown A., Butter C-A,, Hoffman P S Hcat-slh>ck response in Legionella pneumophila it Can. J. Microbiol, 1988. - Vol. 34. - P. 1148-1153.

175. Letlinga K.D. Vcriwn A-, Wealing G. et al. Legionnaires' disease al a Dinch flower show; prognostic factors and impact of therapy // Emerg. Infect. Dis. -2002,-VoL 8,^12.

176. Lilcs M.R., Edelstcin P.H., Cianeiouo N.P. The prepilin peptidase is required for protein secretion by and the vnulcnce of (lie intracellular pathogen Legionella pneumophila /1 Mol Microbiol -1999. Vol. 31. - P, 959-970.

177. Lit« M R , Viswanalhan V. K, CiancioHO KP. Identification and temperature regulation o( Legionella pneumophila genes involved in type IV pi lus biogenesis and type II protein secretion // Infect, mntun, 1998 - Vol. 66. - P. 17761782.

178. Lowiy O H , Rosebrough N.G, Farr A.L. Bandal RJ. Protein measurement with the Folin phenol «agent // J. Btol, Chem. ■ 1931. Vol 193, № I . - P 265-275.

179. Luck P.C,, Helbig J.H., Pilz C„ Wtlzleb W Detection at Legionellas in clinical samples using FlTC-marked antibodies H Z. Gesamte. Hyg, 1989. - Vol. 35. -P. 601-604.

180. Ludwig B., Rahfcld J , Schmidt B et al. Characterization of Mip proteins of1.gionella pneumophila >1 PEWS Microbiol. Lett. 1994. - Vol. US. - P, 2330.

181. Ludwig B-. Schrctid R-, Manx R, Hacker I. Cloning, gcnctic analysis, and nucleotide sequence of a determinant coding for a 19-kilidahon peptidoglycan-associoted protein (Ppl) of Legionella pneumophila H InfecL Immun 1991. -Vol.59-P25li.252l.

182. Lflneberg E.P Zahringer U-, Knirel Y.A. et at. Phase-variable expression of Iipopolysncc hantJc contributes (o the virulence of Legionella pneumophila 11 J. Exp. Med, -1998. Vol. 188 - P, 49-60,

183. LOneberg E , Zctzmann N . Albcr D, el al. Cloning and functional characterization of a 30 Vb gene locus required for lipopolysucchoride biosynthesis in Legionella pneumophila it bit J. Med. Microbiol. 2000, - Vol. 290. - P. 37-49.

184. Maiwnld M,, Helbig J.H., l.uck P.C Laboratory methods for the diagnosis of Isgkmetia infections II J. Microbiol Methods -199». Vol. 33. • P. 59-79.

185. Marra A-, Blander SJ„ Borwitz M.A. Shuman H,A- Identification of a Legionella pneumophila locus required for intracellular multiplication in human macrophages// Proc. Natl, Acad. Sci. -1992. Vol. 89. - P. 9607-9611.

186. Manic TJ , George J , Macdonald S. Haasc D. Are health care workers ■< risk for infection during an outbreak of nosocomial Legionnaire»' diseases? // Am. J. Infect. Control. 1986. - Vol. 14. /fe 5. - P. 209-213.

187. Marston BJ-, Lipman I1B, Breimon R.F. Surveillance for Legionnaires* disease, Risk factors for morbidity and mortality II Arch, Intern Med. 1994, -VoL 154. - P. 2417-2422.

188. Mayberry W.R. Dthydroxy and monohydroxy fatty acid in Legionella pneumophila II J. Bacterid, 1981. - Vol. 147. - P. 373-381.

189. Maztcn N.A, De Oodoy C-V. Legionellosis associaied with pneumopathies tn San Paulo. Study of the etiologic conllTmation and serology // Rev. Inst Med. Trop, San Paulo, -1993. Vol- 35, Jft |. - P 1-tO.

190. McDade J.E. Legionnaires' disease 25 years Inter: lessons learned II Legionella: 5th Intern. Conf. on Legionella ■ Washington; «ASM Press», 2002. P. -10.

191. McDade J.E , Shepard C.C, Eraser D. W. et al Legionnaires disease, isolation of a bacterium and demonstration of its role in other respiratory disease // N, Engl, J. Med, 1977.- Vol- 297. - P. 1197-1203,

192. Mclniyre M„ Kuitz J.B., Seiko« J-B- Prevalence of antibody to 15 antigens of Leglonellaeeae in patients with community acquired pneumonia II Epidemiol Infect. -1990, Vol, 104, № 1. - P. 39-45.

193. Merriam JJ„ Mathur R, Maxfield-Boumil R„ Isberg R. Analysis of the Legionella pneumophila flit gene: intracellular growth of defined mutant defective for flageUum biosynthesis II Infect. Immun. 1997. - Vol. 65. - P. 24972501.

194. Miyazaka T„ Nakashima M , Kono 5. et al Enzime-linkcd immunosorbent assay (ELISA) for Legionellapneumophila using outer membrane protein II Kan-senshogaku Zasshi. -1986. Vol. 60. to 5. - P, 443-452.

195. Mo Y.Y., Cianciotto N.P. Mai avia L.P. Molecular cloning of a Coxidla burnetii gene encoding a macrophage infectivity potentiaior (Mip) analogue II Microbiology 1995. - Vol. Ml. - P, 2SÖJ-2S71,

196. Mo«anaio-Pun2engnibcr J.C., Hicks L., Meyer W, Gitberl G.L, Australian isolates of Ixgtonella longbeachae are not a clonal population H J. Clin. Microbiol. -1999. Vol- 37. - P. 3249-3254.

197. Moore N. Gentile D- Evaluation of a rapid immunchromatogniphic assay for detection of Legionella pneumophila in urine U Legionella: 5th Intern. Conf, on Legionella. Washington «ASM Piess»,2002. - P. 211-213.

198. Morimolo T, Enzime-linked immunosorbent assay (ELISA) for Legionella pneumophila using 60 kD protein antigen H Kansenshogaku Zasshi. ■ 1990. -Vol-64,to It,-P. 1454-1461.

199. Morimoto T. Serum antibodies to Legionella pneumophila by indirect immwofluörescem antibody te« in 269 hemodialysis paticnLs and 153 healthy subjects ft Rinsho, Byori, -1991, • Vol, 39.3ft I. P. 71-75.

200. Moro A„ Ruiz-t'abello F., Femandez-Cano A. et of Secretion by Trypanosoma cnai of a peptidyl-prolyl cis-trans isomcrase involved in cell infection It EMBQ J. 1995. - Vol. 14. - P. 2483-2490.

201. Moss C,W„ Weaker RE., Dees S.B,, Cheny W.B. Cellular fatty acid composition of isolates from Legionnaires' disease It I. Clin. Microbiol. 1977- - Vol. 6. - P. 140-143.

202. Murga R., Foretcr T,S- Brown E- et al, The role of biofilms in the survival of ¡¿rgionetta fmeumophila in a model potable water system It Microbiology -2001. VoL 147. - P. 3121-3126.

203. Nadarajah M., Singam S, lalil HA. Sero-survey foe LegirmeHa pneumophila antibodies • Singapore experience It Ann. Acad. Med- Singapore, -1987- Vol, 16, As 4,-P. 583-585.

204. Nagai H., Roy C R. The DotA protein from Legionella pneumophila is secreted by a novel process thai requires ihe Doblcm transporter II EMBO i. 2001. -Vol. 20. - P. 5962-5970.

205. Neumeister B.„ Faiglc M., Sommer M. et al. Low endoioxic potential of Legionella pneumophila lipopolysaccharide due to failure of interaction with ihe monocyte lipopolysaccharide receptor CD! 4 If Infect. Immun. 1998. - Vol. 66.-P 4ISM157.

206. Neumeister B„ Susa M., Nowak B, et al. Enzim immunoassay for detection of antibodies against isolated flagella Legionella pneumophila /1 Eur. J. Clin, Microbiol, Infect. Dis-- 1995. Vol, 14, Hi9, - P. 764-767.

207. Newhall WJ., Jones R.B, Disulfide-linked oligomers of the major outer membrane protein ofchtamydiae Hi. Bacteriol. 1983, - Vol. 154 - P, 998-1001,

208. Nguyen T., Matsiota-Bemard P, Nauctel C. Evaluation of an ELISA technique for the scrodiagnosis of Legionnarircs disease H Pathol. Biol, Paris. 1995- -Vol. 43, A 5. -P. 407-410,

209. Otten S., Iyer S., Johnson W., Montgomery R. Serospecific antigens of £«-ghnellapneumophila 111- Bacteriol. -1986. • Vol. 167. P. 893-904.

210. Outbreak of Legioimnires" disease among automotive plant workers Ohio, 24)01 If MMWR. - 2001. - Vol. 50. - № 18

211. P&sctial M.F. Ronveaux O., De Schrijver K. Von Loock F. Lcgioneltotis outbreak at a commercial fair in Kapellcn, Belgium. 1999; a case-control study // Legionella; 5th Intern Conf. on Legionella. Washington: «ASM Press», 2002. -P. 342-345.

212. Pay C.P. Pltkavtis B. B, Carton* G.M-, Warner I.M. Purification, partial characterization and sen)reactivity of a genuswide 60-kitodahon Legionella protein antigen 1/1. Clin. Microbiol. 1988. - Vol. 26. - P, 67-71.

213. Payne N. R , Horwiiz M. A. Phagocytosis of Legionella pneumophila is mediated by human monocyte complement receptors H J. Exp. Med. 1987. • Vol. 166.-P. 1377-1389,

214. Pearlman EL, Engleberg N.C , Eisenstein L Identification of protein antigens of Legionella pneumophila serogroup I II Infect Immun. 1985. - Vol. 47. - P. 74-79.

215. Percira Comes J-C-, Mazieri NA, De Godoy C.V, Roeha A. Legionella pneumophila associated with acute respiratory insufficiency- 1-st isolation in Brazil 11 Rev. Inst Med Trap. San Paulo. 1989. - VoL 31, № 6 - P 368-376,

216. Petitjean F-, Guillet J.G-, Vray B, et al. Partial characterization of a Legionella pneumophila serogroup I immunodominant antigenic determinant recognized by a monoclonal antibody )t Comp Immun. Microbiol. InfccL Dis. 1987. -Vol, 10, - P. 9-23.

217. Phakkey A„ Lfcndqvist KJ,, Omland T„ Berdal B P. I^gktnella antibodies in human and animal populations in Kenya H APMtS, 1990, - Vol- 98, Jfc 1. - P43.49.

218. Plikaylis B.B. Cartone G.M. Pay C P„ Wilkinson H.W. Purified 60-kilodalton ¡Legionella protein antigen with LesioMcrtci-speciftc a^d noflspetiik epitopes II J. ctin. Microbiol. 1987. - Vol, 25- - P, 2080-2084.

219. Ploufle J.F., File T-M. Brermon R.F. el al. Recvaluation of die difinition of Legionnaires disease; use of the urinary antigen assay. Community based pneumonia incidence study group it Clin. Infect Dis. 1995. - Vol. 20, Jft 5. - P. 1286-1291.

220. Pringle? N„ Brydov P„ Uldum S.A. Occurrence of Legionella in Danish hot water systems // Legionella: 5th Intern. Conf- on Legionella. Washington: «ASM Press», 2002- - P. 298-301.

221. Pruckfer J. M., Benson R. F„ Moyenuddin M et at. Association of flagcllum expression and intracellular growth of Leguinella pneumophila It Infect- Im-muji 1995, - Vol. 63. - P. 4928-4932.

222. Rahman M., Sack D A ., Wadood A. el al Rapid identification of Vibrio chot-eroe serotype 01 from primary isolation plates by coaggl illation lest // J. Med. Microbiol. -1989. -Vol, 28.Hi I. P.39-41.

223. Ramirez J A., Sutnmersgill J.T. Rapid tests Tor the diagnosis of Legionella infections 111. Med Assoc. -1994, Vol. 92, Mi 2- - P. 62-65.

224. Ratcliff R-M., Donnelian S.C., Lanser 1A. et al Interspecies sequence differences in the Mip protein from the genus Leglottella: implications for function and evolutionary relaledness it Mol. Biol. -1997. Vol. 25. - P-1149-1158

225. RatcliffR.M., Lanser J.A., Manning P.A., Keuzenrocdcr M.W, Scquence-based classification scheme for the genus Legionella targeting ihe mip gene // J. Clin. MictoWol. I99S. - Vol, 36. - P, 1560-1567.

226. Ratshikhopha M l: , Klugman K P-, Koomhof H J. .An evaluation of two indirect fluorescent antibody tests for the diagnosis of Legionnaires diseases in South Africa // S. Afr. Med. J. 1990. - Vol. 77, № 8. - P. 392-395.

227. Reinthatcr F., Masehet F„ Sturaner D. Ugwnella pneumophila: seroepidenii-ologic studies of demist ond dental personnel in Austria It Zemralbl Baktcriol

228. Mikrobtot. Hyg. В. 1987. - Vol. 185, № 1-2.• P. 164-170.302, Ren thai er F.F., Mischer F„ Summer D. Serological examinations for antibodies against Legionella species in dental personnel it J. Den Res. 1988- - Vol. 67, № 6. - P. 942-943.

229. Rigby E.W„ l'louffe JF, Hacfcman В-Л. et al. Stability of Legionella urinary antigens over time// Diag. Microbiol. Infect. Dis. -1997. Vol, 28, № I. - P l-3.

230. Rodgers F.G., Greaves P W, Macrae A,D. Flagella and fimbriae on Legionella organtuna//Lancet- -1979, P, 753-754.

231. Rogers J. Dowsett A.B., Keevil C,W. A paint incorporating silver to controlmixed bio films containing Legbnefía pneumophila ИJ. Ind. Microbiol. 1995 -Vol. 15-P. 377-383.

232. Rogers J., Keevil C.W. mmunogold and fluorescein immunoleieling of Legionella pneumophila within an aquatic biofilm visualized by using episcopic differential interference contrast microscopy II Appl Environ. Microbiol. -1992 Vol, 58 - P. 2326-2330.

233. Rolf M. A study of Legionnaires' disease in Zambia II Ann. Trap Med Parasi-toL -1986. Vol. 80. St 3. - P. 325-328,

234. Romano FRibera G-, D' Errico M M. ct at, Level of onti-Legionella antibodies in a heallhy Neapolitan popululion II Ann. Ig, 1989. - Vol. 1, Ж 3-4. - P. 629636.

235. Roscnfeld M.E , Edclstcin P.H. Retrospective evolution of the DuPont radioimmunoassay kit for detection of Legionella pneumophila serogroup I anti-genuria in human fl I. Clin. Microbiol. 198«. - Vol- 26, № 9. P, 1775-1778,

236. Rosser O., F.delstein PH-, CiamcioUo N.P- Role of the II protein secretion pathway in pathogenesis of Legionella pneumophila II Legionella: 5th Intern. Conf. on Legionella. Washington: «ASM Press», 2002. - P. 13-17.

237. Rowbotham TJ. Current views on the relationships between amoebae, Ic-gioncllae and man It tsr. J. Med. Set. -1986. Vol. 22. - P. 678-689.

238. Rowbotham TJ. Legmnella-ltke amocbal pathogens tt Legionella: current status and emerging perspectives. Washington, D.C , 1993, - P, 137-140.

239. J2J. Roy C.R., Isbcrg R.R- Topology of Legionella pneumophila DotA: an inner membrane protein required for replication in macrophages // Infect, Immun. -1997.-Vol.65.-P. 571-578.

240. Ruf B, Scbunnann D., Borboch I et iL The incidence of Legionella pneumophila: a 1-ycar prospective study in a large community hospital // Lung. ■ 1989. -Vol. 167,№ I.-P. 11-22.

241. Ruf B , Schurmann D, Pohle H.D. Fatal Legionella pneumonia: retrospective cxamation of lung tissue direct and indirect fluorescent antibody methods II Zentralbl, Bakteriol. Mikrobtol, Hyg. A. 1987. - Vol. 266. - P. 443-448.

242. Salmcy Nr N , Summcrsgil J.T, Ramires J A. Miller R-D. Inhibition of oxidative burst and chcmotaxis in human phagocytes by Legionella {.mnimonia. jrmc mctaHoproteasetfJ, Med. Microbiol 2001 - Vol. 50. - P 517-525.

243. Sampson I, A. Prevalence of antibody to Legionella pneumophila in aborigine* and non aborigines in Western Australia // Med- J. Aus 1988. • Vol- 148. Jfc L-P. 16-19.

244. Sampson J-S„ O'Connor S.P. HoJloway B,p, et al. Nucleotide sequence of htpB, the Legionella pneumophila gene encoding 58-kilodallon (kDa) common antigen, formerly designated the 60-kDa common antigen It Infect. Immun. -1990. Vol. 58. - P. 3154-3157.

245. Sampson J.S., Plikaytis B.B. Aloisio C. et al. Immunologic characterization and specificity of three monoclonal antibodies against the 58-kilodation prole m of Ugiofu-llopneumophila 1/). Clin. Microbiol. 1991, - Vol 29 - P 836-841.

246. Sandkvist M. Type II Secretion and Pathogenesis U Infect lmmun. 2001. -Vol 69. - P 3523-3535.

247. Schramck S J., Kaznr J » Bm»vsJia S. Lipid A in Legionella pneumophila II

248. ZemL Bukt Parasit, Infekt, Hyg. 1982. - Vol. 252- - P. 401-404.

249. Schuimann D, Ruf B. Fehrenbach FJ. et al, Falal Legionnaircs pneumonia: frequeney of legäoncllosis in auuipsied patients with pneumonia from 1969 to 1985 HL Pathol -198® Vol. 155. - P.35-39,

250. Segal G-, Pweell M, Shuman H.A. Host ccll killing and baüerial conjugation Tequire overtnpping sets of genes with in a 22-kb region of die ¡.egtomila pneumophilagenome//Proe. Mall. Acad- Sei. 1998. - Vol. 95. - P. 16690 674,

251. Segal G. Shuman RA, GerteUc analysis of Unioneila pneumophila imracellu-lar ntulljplkation in human and protozoon ho»! // l.egioneJln: Sth Intern. Conf. on Lcgionella. Washington: «ASM Press», 2002. - P. 90-96.

252. Sprtsin S.V., Drobishevskaya B.J, Barkhatova O.I. et al. Induction of the immune response to Legionella pneumophila cytolysin by monoclonal antiidiotype antibodies HI- Immunol. -1991 Vol. 147. - P. 2QQb2005.

253. Stainmentz Í., Rheinheimer C., Bitter-Suermann D. Rapid identification of Lo gionelto by colony dlot assay based on a genus-specific monoclonal antibody I/ I. Clin. Microbiol. • 1992, Vol. 30, Hi 4. - P, 1016-1018.

254. Steele T. W Légionnaires' disease in South Australia. 1979-1988 It Med. J. Aust. 1989. - Vol. 151, - P, 322-328.

255. Steele T W, Moore C,V, Songster N. Distribution of Legionella Itmgheachae serogroup t and other Legionella in potting soils tn Australia tl Apfrf. Environ. Microbiol. 1990. - Vol. 156. - P. 29S4-298S.

256. Steinen M„ Lngelharg H-. Flugel M et ul- The Lfy protein protects Legionella pneumophila from light but does not directly influence its intracellular survival in HartmaitnclEa vermiformis Л1 Appl- Environ. Microbiol, 1995. - Vol, 61. - P 2428-2430.

257. Steinmetz L, Rheinheimer C., Bitter-Suermann D, Genus-spccific epitope on the 60-kilodaltoti antigen Legionella heat shock protein tccogmzed by mooo-ctonaJ antibody It J. Clin, Microbiol, -1991, Vol, 29. - P. 346-354.

258. Steinmetz L, Rheinheimer C , Bittcr-Suemvann D. Rapid identification of Le-gtonellae by a colony blot assay based on a genus-specific monoclonal antibody //1. Clin. Microbiol- -1992, Vol. 30. - P. 1016-10 \ 8

259. Stone BJ., Abu Kwatk V. Expression of multiple pili by Legionella pneumophila. identification and characterization of ï type IV piiiri gene and its role in adherence to mammalian and protozoan cells // Infect. Immun. 1998 - Vol, 66 -P 176*-1775.

260. Stone В J,, Abu К walk Y. Naiural competence for DNA transformation by Legionefla pneumophila and Ha association Willi expression of type IV pili // J. Bacteriol 1999. - Vol, 181 - P, - 1395-1402.

261. Susa M., Hacker J., Man* R De novo synthesis of Legionella pneumophila antigens during intracellular growth in phagocytic cells// Infect, Immun ■ 1996. -Vol 64.-1679-16*4.

262. Sw'anson M.S., Bachman M A The Legionella pneumophila life cycle; connections between growth phase, virulence expression, and replication vacuole biogenesis 1/ Legionella 5th Intern. Conf. on Legionella. Washington: «ASM iWt,2Q02.-P- 74-81.

263. Svranson M.S., Hammer B.K, Legionella pneumophila pathogenesis: a fateful journey from amoebae to macrophages U Annu. Rev. Microbiol. 2000. - Vol. 54, - P. 567-613.

264. S/cto L.r Sliuman M A The Legionella pneumophila major secretory protein, a protease, is not requires for intracellular grows or eel I killing U Infect. Immun, -1990, Vol. 58. - P. 2585-2592,

265. Taflg P-W. Toma S., Rajkumar W,D. Pctcction of urinary antigen of Legionella pneumophila scrogroup 12 by broad spectrum cnzim-linked immu-noMMbcnt assay II J. Clin. Mkrotooi -1989, Vo4.27, № 4, - P. 783-784,

266. Tat lock H. A Ricketlsia-like organism recovered from guinea pigs // Proc, Soc. Exp. Biol. Med. 1944. - Vol. 57. - P. 95-99.

267. Tcmperanza A.M , Di-Capuo A-, Ckttotttf S. et al. Mote experience on the mtcroagglutination test in the diagnosis of the Legionella pneumophila infection U Microbiologies 1986. - Vol - 9. № I . - P 71-79,

268. Thomason B,M , Chntdhf P.W., Hellis DG. Flagell* on Legionnaires diseasebacteria: an interim repon 11 Ann. Int. Med. 1979- • Vol. 91- - P. 22-1-226.

269. Van Alpen L , Riemens T., Poolrnm J. Zanen H C. Characteristics of major outer membrane proteins of Haemophilus influenzae H J. Bacterio!. 1983. -Vol. ISS. - P. 878-885.

270. Vertstreate D,R., Creasy M-T„ Caveney N,T. et al. Outer membrane proteins of Brucella abortus, isolation and channcterbjition. //Infect. Immun, -1982. Vol. 35- - P. 979-989,

271. Vogel i, P , Andrews H. L , Wong S К , Isberg R. R- Conjugntive transfer by the virulence system o( I^gumella pneumophila 11 Science, 1998. - Vol. 279. -P. 873-876.

272. Wan C.Q. Use of ELISA til detecting antibodies agamst Legionella ptieumO' phila serogroup I in 195 healthy persons in Tianjin /I Chung Hua Ltu. Hsing Ping. Hsueh. Tsa. Chih. 198$. - Vol. 6. Ns 3. - P. 139-140,

273. Wang Б.Е., Manson B„ Corey M. et al. False positively of Legionella serology in patients with cystic fibrosis // Pediatr. Infect Dis. J. 1987. - VoL 6, № 3, ■ P. 256-259.

274. Wang N, Frequency of seroreactors to Legionella among the patients with pulmonary infections H Chung. Hua. Liu. Hsing. Ping. Hsueh. Tsa Chih. 1991. -VoL 14,^ 2.-P 126-127,

275. Wcgmuller E., Wei dm aTHl I*., Hess T. Reubi F,C. Rapidly progressive glomerulonephritis accompanying l.egionnnires disease II Archiv. m. Med. ■ 1985. -Vol- I46.J&9.-P. 1711-1713.

276. Weiser J.N. Lindbci® A.A., Manning E.J ct al. Identification of fl chromosomal loo» for expression of lipopolysaccharide epitopes in Haemophilus influenza II Inrcct. Immun. 1989. - Vol. 57. - P. 3045-3052.

277. West fall H.N., Goldwoser R.A., Weiss E-, Hussong D, Prevnlcnce of antibodies >o Legionella species in a series of patterns in Israel II 1st. i. Med. Sci. -1986. -Vol. 22. №2.-P. 131-138.

278. Wmtermeyer E., Flogel M., Ol M ct ttl- Sequence determination and mutational analysis of the lly lokus of Legionella pneumophila // Infect Immun -1994, Vol. 61 - P 1109-HI7.

279. Wjntermeyef E , Ludwig B, Stcinert M. ct al. Influence of site specifically altered Mip proteins on intracellular survival of Legionella pneumophila in eu-karyotic cells tl Infect Immun. -1995. Vol. 63. - P. 4576-4583.

280. Wong Kil, Fee ley J,c. Lipopolysaccharide of Legionella its adjuvant for intrinsic and extrinsic antigens If Proc, Soc, Exp. Biol. Med. 19S4. - Vol. 177, -P, 475-481.

281. Wong K.H-, Moss C.W., Hochstein D.H. et al. «Endoioxicity» of the Legionnaires' disease bacterium U Ann. Int. Med. 1979. - Vol. 90- - P- 624-627.

282. Xu L , Wang P. Chen S Detection of antibodies against Legionella ftneumo* phita from pleural effusion a case report of Legionnaires pneumonia withpleural eíTusion // Cliung. Hua Liu. Itiiíig l'ing. Hsueh. Isa CWh ■ 1994, -Vol. 15, Nt 3, ■ PI71-I73.

283. Yobuudii EMorí M„ Sallo A, m ít. An oulbreak of Pontiac fever due to Legión?! ta pnetmopltib «rogroup 7, ||, Epidemiotogkal aspeeCs H Kanscn-shogaku ZascchL 1995. - Vol. 69, № 6- - P. 654-665.

284. Yaraashiro Y., Higa F. líoide M rt al. Serodiagnosis of Legioncila pncumo-phita • data of our luboratory in the rccenl 3 yenrs // lúuiscnshogaku Zasechi. -1994. Vol. 68, № 10. -P. 1256-1263.

285. Yang Q.L., Gotschhch E.C Variation of gonoeoetal I ipoohgosaeehaíide scruc-une is due lo altcraiions in poly-G traets in lg( genes encoding glycosyl Inrns-ferases tt i. Exp. Mcd -1996. Vol. 183, - P. 323-327.

286. Ynhinuut F., Zalman US-, Nikatdo H. Purification aibd propcíties of Pseudomonas vertiginosa porin U J. Biol, Chem, -1983. Vol, 258. - P, 2308-2314.

287. Zhao J.W, Application of the mieroogglutination test of the legionellosis in an epidemiological study ■■■' Chung Hub. Liu. Hsing. Ping, Hsueh Tsa. Chit). -198«.- Vol 7.IM.-P. 209-211.

288. Zink S.D., Podcrsen L., Cianciotlo N.P., Abu Kwaife V The Dot>1cm type IV secretion system of Legionella pneumophila is essential for the induction of apoptosis in human macrophages U Infect. Immun. 2002, - Vol. 70. - P. 16571663.

289. Zügel U-. Kaufmann S.H. Role of heai shock proteins in protection from and pathogenesis of infectious diseases /Г Ctin. Microbiol. Rev. ■ 1999. Vol. 12. -P, 19-39.

290. Zutmtn T., Gal-Мог O., Segal G. Characterization of a Legionella pneumophila relA insertion mutant and roles of RclA and RpoS in virulence gene expression H J. Bacterial. -2002. VoUW. - P. 67-75,