Изучение селекции опухолевых клеток метастатических сарком мягких тканей и остеогенных сарком для прогноза течения заболевания и эффективности терапии. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Ефремова Наталья Александровна

• Ефремова Наталья Александровна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Ефремова Наталья Александровна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О КЛОНАЛЬНОЙ ЭВОЛЮЦИИ САРКОМ И ЕЕ РОЛЬ В ФОРМИРОВАНИИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К РАЗЛИЧНЫМ ВИДАМ ЛЕЧЕНИЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Модели эволюции опухолевых клеток

1.2. Индуцированная клональная опухолевая селекция

1.3. Стволовые клетки опухоли и их значение для опухолевой селекции

1.4. Раково-тестикулярные антигены/гены и их роль в опухолевой прогрессии

1.5. Основные сведения о биологии сарком мягких тканей и остеогенных сарком

1.5.1. Особенности клональной эволюции сарком мягких тканей

1.5.2. Особенности клональной эволюции остеогенных сарком

1.6. Современные представления о терапии сарком в контексте

существующей теории клональной эволюции

1.7. Заключение

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Культивирование опухолевых клеток

2.2.2. Изучение морфологии культивируемых клеток сарком

2.2.3. Криоконсервация и размораживание опухолевых клеток

2.2.4. НЬА-типирование опухолевых клеток сарком мягких тканей

и остеогенных сарком

2.2.5. Трехмерное моделирование

2.2.6. Клонирование опухолевых клеток сарком мягких тканей

и остеогенных сарком

2.2.7. Определение параметров пролиферативной активности опухолевых клеток

2.2.8. Изучение миграции и инвазии опухолевых клеток

2.2.9. Идентификация маркеров стволовых клеток опухоли

2.2.9.1. Определение CD133

2.2.9.2. Определение активности альдегиддегидрогеназы

2.2.10. Молекулярно-генетический анализ экспрессии

раково-тестикулярных генов

2.2.11. Определение химиочувствительности культивируемых клеток сарком мягких тканей и

остеогенных сарком

2.2.11.1. МТТ-тест

2.2.11.2. Детекция химиорезистентности культивируемых опухолевых клеток

с помощью клеточного анализатора хСеШ§епсе

2.2.12. Приготовление аутологичной дендритноклеточной вакцины «СаТеУас»

для иммунотерапии

2.2.13. Оценка иммунологических показателей периферической крови пациентов

2.2.14. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Получение и культивирование клеток метастатических

сарком мягких тканей и остеогенных сарком

3.1.1. Изучение морфологии культур сарком мягких тканей и остеогенных сарком (фазово-контрастная микроскопия)

3.1.2. Изучение морфологии культур сарком мягких тканей и остеогенных сарком (конфокальная микроскопия)

3.1.3. Характеристика культивируемых клеток сарком мягких тканей и остеогенных сарком. Результаты ИЬА-типирования

3.1.4. Сравнительный анализ пролиферативной активности культур сарком мягких тканей и остеогенных сарком на разных пассажах в процессе длительного культивирования

3.1.5. Изучение миграции и инвазии культивируемых клеток сарком мягких тканей и остеогенных сарком

3.1.6. Изучение свойств культивируемых клеток сарком мягких тканей и остеогенных сарком в трехмерных структурах

3.2. Клонирование культивируемых клеток сарком мягких тканей и остеогенных сарком

3.2.1. Сравнительный анализ пролиферативной активности

«родительских» культур сарком и их клонов

3.2.2. Изучение миграционной и инвазивной активности клоногенных и неклоногенных опухолевых культур сарком мягких тканей и остеогенных сарком

3.2.3. Анализ маркеров стволовых клеток опухоли в культурах сарком мягких тканей и остеогенных сарком

3.2.4. Изучение экспрессии раково-тестикулярных генов в клеточных линиях сарком

3.2.4.1. Частота встречаемости и уровень транскрипционной активности раково-тестикулярных генов в исходных клеточных линиях сарком мягких тканей и остеогенных сарком

3.2.4.2. Изменение экспрессии раково-тестикулярных генов в клеточных линиях сарком

в процессе длительного культивирования и при клонировании

3.2.5. Анализ химиорезистентности культур сарком и их клонов

3.3. Анализ взаимосвязи между клоногенностью клеточных культур и клиническими характеристиками пациентов

3.4. Оценка эффективности иммунотерапии аутологичной дендритноклеточной

вакциной «CaTeVac» у больных с саркомами, в зависимости от клоногенных характеристик клеточных линий, полученных из опухолевого материала пациентов

3.5. Анализ субпопуляций иммунокомпетентных клеток периферической крови

у больных с саркомами, получавших иммунотерапию аутологичной

дендритноклеточной вакциной «CaTeVac» в зависимости

от клоногенных характеристик в группах 1 и

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Создание коллекции клеточных культур сарком мягких тканей

и остеогенных сарком

4.2. Обсуждение результатов клонирования опухолевых линий

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗРАБОТКИ ДАННОЙ ТЕМЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение селекции опухолевых клеток метастатических сарком мягких тканей и остеогенных сарком для прогноза течения заболевания и эффективности терапии.»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы

Саркомы - крайне гетерогенная группа редких, но агрессивных злокачественных новообразований мягких тканей и костей мезенхимального происхождения. Они составляют всего 1% от всех злокачественных опухолей человека, но характеризуются высокой смертностью и эффективность стандартной терапии сарком по-прежнему остается ограниченной [1]. Частота сарком в мире составляет в среднем 7,1 случая на 100 тысяч человек в год [2]. В России этот показатель в 2020 году составлял около 3,15 на 100 тысяч населения (суммарно по локализациям: кости и мягкие ткани) [3]. Хотя современные терапевтические стратегии с использованием таргетных и иммунологических препаратов значительно улучшили выживаемость пациентов с саркомами, прогноз для больных с метастатическим характером заболевания по-прежнему остается неблагоприятным. Понимание процессов, происходящих в опухоли при метастатическом характере заболевания, имеет особенно важное значение для этой категории пациентов и может оказать значительное влияние на исход терапии.

Эволюционные процессы в опухоли представляют собой динамическую клональную экспансию с последующим отбором, что приводит к формированию гетерогенной популяции опухолевых клеток. Разнообразие клонов представляет субстрат для генетической, эпигенетической и фенотипической изменчивости, которая в свою очередь является основным препятствием для эффективного лечения. Помимо клональной эволюции, в основе которой лежит цепь случайных событий и естественный отбор, в случае метастатического процесса могут наблюдаться явления клональной селекции, вызванной терапевтическим воздействием. Под влиянием лечения происходит целенаправленный отбор наиболее резистентных опухолевых клонов, даже в том случае, если бы в отсутствии воздействия эти клоны оставались минорными и не получили возможности для доминирования.

В процессе опухолевой прогрессии малигнизированные клетки приобретают способность к неограниченному делению, не поддающемуся контролю со стороны иммунной системы организма человека. Эти изменения ассоциированы со значительными генетическими модификациями, которые представляют собой множественные геномные, хромосомные и точечные мутации, возникающие с течением времени. В результате злокачественные опухоли обычно представлены гетерогенным пулом клеток, которые отличаются по морфологии, фенотипу, экспрессии генов, метаболизму, иммуногенности, пролиферации и метастатическому потенциалу. Именно внутриопухолевая гетерогенность считается основной причиной множественной лекарственной устойчивости и неэффективности терапии, в том числе иммунотерапии. Понимание механизма формирования изменений на уровне опухолевой

клональности при прогрессировании заболевания может способствовать повышению эффективности противоопухолевой терапии.

Степень разработанности темы

Изучение эволюции метастатических опухолей у человека затруднено, поскольку, руководствуясь гуманными принципами, невозможно непрерывно получать биоптаты прогрессирующей опухоли, и необходима разработка модельных систем, в том числе из клеточных линий метастатического происхождения. Несомненно, это имеет некоторые ограничения: двухмерное культивирование не вполне моделирует сложные межклеточные взаимоотношения многомерной опухолевой структуры, не учитывается влияние опухолевого микроокружения, воздействие иммунной системы, коммерческие клеточные линии за огромное число делений после их создания приобретают новые кариотипические изменения. Тем не менее клеточные линии по-прежнему остаются ценным материалом для изучения эволюции злокачественных новообразований, в том числе в доклинических исследованиях при разработке новых лекарственных форм. Культуры злокачественных клеток, прошедшие не более 10 пассажей от момента получения, представляют достойную альтернативу, поскольку не теряют молекулярные характеристики опухоли. Их можно использовать и для создания 3D моделей -многоклеточных опухолевых сфероидов, особенно если сокультивировать со стромальными и иммунными клетками для воспроизведения микроокружения опухоли. Актуальным становится знание, что для сарком при всей их гетерогенности получено сравнительно малое количество хорошо охарактеризованных коммерческих клеточных линий, что существенно тормозит развитие новых подходов к терапии этого заболевания.

Внутриопухолевая гетерогенность приводит не только к различиям в динамике роста, экспрессии генов, фенотипических маркеров, но и устойчивости к стандартным методам лечения [4]. Некоторые фенотипические маркеры, такие как высокоиммуногенные раково-тестикулярные антигены/гены (РТА/РТГ) в настоящее время рассматриваются как диагностические, а также в качестве терапевтических мишеней при целом ряде злокачественных новообразований, в том числе при саркомах. При этом удалось выявить корреляцию между высоким уровнем экспрессии некоторых иммуногенных РТА/РГТ и неблагоприятным прогнозом заболевания [5]. В то же время, вследствие значительной гетерогенности сарком и выявленного широкого спектра РТА/РТГ, на сегодняшний день существует недостаточно данных по частоте и значимости их экспрессии при этой форме злокачественного новообразования и участии в противоопухолевом иммунном ответе [6].

В процессе прогрессирования происходит ускользание опухоли из-под иммунологического надзора. Наиболее частая причина этого - потеря экспрессии молекул

главного комплекса гистосовместимости. Кроме того, различные гаплотипы НЬА коррелируют как с риском заболевания, так и с его прогнозом. Поскольку гены, кодирующие молекулы НЬА, отличаются значительным полиморфизмом, разнообразие НЬА, возможно, определяет различную способность иммунного распознавания, что впоследствии создает различную восприимчивость как к неопластической прогрессии, так и к проводимой иммунотерапии. Так Е. Rosenbaum с соавт. (2020) показали связь между гаплотипом НЬА-А*02 и низкой выживаемостью пациентов с синовиальной саркомой [7], а Р. Соггеа1е с соавт. (2020) при немелкоклеточном раке легких на фоне иммунотерапии показали худший исход лечения в группе больных негативных по НЬА-А*02 [8]. Таким образом НЬА-типирование пациентов может предоставить материал для дальнейших исследований, направленных на поиск прогностических и предиктивных маркеров иммунотерапии.

Универсальные маркеры стволовых клеток опухоли (СКО), такие как CD133 и ALDH1, демонстрируют повышенную активность в различных типах неоплазий и возможно связаны с их метастатическим потенциалом, лекарственной устойчивостью, а также неблагоприятным прогнозом для пациентов [9; 10]. При этом для сарком в отношении этих маркеров в подобных исследованиях получены противоречивые результаты [11].

Традиционно, способность к ответу на иммунотерапевтическое воздействие базируется на сочетании оценки параметров лимфоидной инфильтрации опухоли и экспрессии маркеров модуляторов иммунологического синапса. Эти показатели продемонстрировали значимость при саркомах мягких тканей (СМТ) и остеогенных саркомах (ОС) в ряде исследований последних лет [12-14]. Тем не менее оптимальный маркер эффективности иммунотерапии для сарком по-прежнему не определен, поскольку частота ответа на иммунотерапевтические композиции в исследованиях оказалась значительно ниже, чем определенная экспрессия PD-1/PD-L1 и уровень лимфоцитарной инфильтрации [15]. Кроме того, для количественного определения этих биомаркеров требуются образцы опухоли, которые не всегда доступны. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у пациентов может выявить потенциальные биомаркеры, способствующие точному прогнозу, мониторингу ответа на терапию и усовершенствованному подходу к лечению [16]. Идентификация биомаркеров периферической крови, которые коррелируют с ответом на иммунотерапию, обеспечит простой малоинвазивный способ отбора пациентов или может использоваться для мониторинга лечения. Поэтому настоящее исследование представляет несомненный интерес как трансляционное и направленное на поиск альтернативных иммунологических маркеров для разработки эффективного противоопухолевого лечения и прогноза течения метастатических форм сарком.

Цель исследования

Поиск новых биомаркеров прогноза течения заболевания и эффективности терапии у больных метастатическими саркомами мягких тканей и остеогенными саркомами на основе изучения особенностей селекции опухолевых клеток ex vivo.

Задачи исследования

1. Получить и охарактеризовать клеточные линии метастатических сарком мягких тканей и остеогенных сарком.

2. Изучить особенности селекции культивируемых клеток сарком мягких тканей и остеогенных сарком методом клонирования исходных клеточных линий.

3. Исследовать изменение пролиферативных, инвазивных, иммуногенных свойств клеток сарком мягких тканей и остеогенных сарком в процессе селекции.

4. Оценить влияние параметров клеточной селекции в модельной системе на прогноз течения сарком мягких тканей и остеогенных сарком и клиническую эффективность иммунотерапии.

5. Оценить иммунологические показатели периферической крови больных саркомами мягких тканей и остеогенными саркомами с учетом клоногенных характеристик опухоли.

Научная новизна исследования

1. Впервые получены и охарактеризованы 56 клеточных линий метастатических СМТ и ОС 16 гистологических подтипов и 83 дочерних клона для клеточного моделирования процессов, происходящих в опухолях с высокой внутриопухолевой гетерогенностью. Получено 3 патента («Клеточная линия остеогенной саркомы человека 793 OsSar RVV» - патент на изобретение № 2722867 от 04.06.2020; «Клеточная линия эмбриональной рабдомиосаркомы человека 862 RMSar KDD» - патент на изобретение № 2737248 от 26.11.2020; «Клеточная линия синовиальной саркомы человека 716 SS MNV» - патент на изобретение № 2740800 от 21.01.2021).

2. Установлена новая характеристика опухолевой клеточной линии СМТ и ОС -клоногенность, которая оказывает влияние на прогноз заболевания и эффективность иммунотерапии вакциной «CaTeVac».

3. Показана высокая частота встречаемости у больных СМТ и ОС по сравнению с популяцией высокоиммуногенного гаплотипа HLA-A*02 и А*32.

4. Обнаружена связь клоногенности культивируемых клеток СМТ и ОС с увеличением пролиферативной активности, усилением химиорезистентности, увеличением популяции ALDH1+клеток.

5. Выявлена экспрессия генов высокоиммуногенных РТА PASD1 и SLLP1, ранее неизвестная в миксофибросаркомах и остеогенных саркомах. Установлена связь между экспрессией раково-тестикулярных генов и клоногенностью культивируемых клеток СМТ и ОС: клетки клоногенных опухолей отличались выраженной транскрипционной активностью генов GAGE1 и SLLP1 (p<0,05).

6. Определена связь клоногенности и иммунологических параметров периферической крови (цитотоксических Т-лимфоцитов, активированных цитотоксических Т-лимфоцитов, активированных Т-лимфоцитов хелперов, NK-клеток) у пациентов СМТ и ОС.

Теоретическая и практическая значимость работы

1. Создана коллекция охарактеризованных 56 клеточных линий СМТ и ОС и 83 дочерних клонов, пригодных для моделирования процессов, происходящих в опухолях с высокой внутриопухолевой гетерогенностью. Клоногенные клеточные линии могут быть использованы как модели резистентности для разработки новых способов лечения сарком.

2. Получение клеточных культур сарком из операционных образцов пациентов и оценка их клоногенности могут быть использованы для выявления неблагоприятных факторов прогноза заболевания.

3. Клоногенность, определенная in vitro, характеризует клетки опухоли, обладающей высокой пролиферативной и миграционной способностью, экспрессией раково-тестикулярных генов GAGE1 и SLLP1, высокой активностью фермента ALDH1 что может оказывать влияние на клинические характеристики СМТ и ОС, в том числе эффективность иммунотерапии вакциной «CaTeVac».

4. Изменения иммунологических показателей периферической крови (низкое содержание Т-лимфоцитов, активированных цитотоксических Т-лимфоцитов, активированных Т-лимфоцитов хелперов и высокое содержание NK-клеток) у пациентов, опухолевые клетки которых клоногенны in vitro, могут объяснять низкую эффективность иммунотерапии «CaTeVac» у данной категории больных.

5. Выявленная высокая транскрипционная активность генов высокоиммуногенных РТА в метастатических саркомах позволяет рассматривать их в качестве перспективных кандидатов для проведения иммунотерапии, направленной на эти антигены, и может служить теоретическим обоснованием применения «CaTeVac» у пациентов СМТ и ОС.

6. Полученные данные о свойствах клеток СМТ и ОС in vitro способствуют расширению знаний о биологии сарком, что позволяет использовать эти новые знания для создания новых иммунотерапевтических подходов в лечении онкологических заболеваний.

Методология и методы исследования

В исследовании было скринировано 95 интраоперационных образцов опухолевого материала пациентов с диагнозом СМТ или ОС, получавших лечение в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России с мая 2013 по май 2020 года.

Из 56 образцов, с гистологически подтвержденным метастатическим характером опухолевого процесса, были получены клеточные культуры, пригодные для дальнейших исследований. В результате клонирования методом предельных разведений было отобрано случайным образом 83 клона.

Изучали морфологию культивируемых клеток, получая изображения методом фазово-контрастной микроскопии в автоматическом клеточном анализаторе Cell-IQ (Chip-Man Technologies Ltd, Финляндия) и методом конфокальной микроскопии с использованием флуоресцентных зондов, окрашивающих ядра, митохондрии, лизосомы и актиновый цитоскелет в конфокальном лазерном микроскопе Olympus FV3000 (Olympus Corporation, Япония).

Анализировали пролиферативную активность культур малигнизированных клеток и их клонов на разных этапах в процессе длительного культивирования, миграционные и инвазивные свойства опухолевых клеточных культур с использованием автоматического клеточного анализатора xCelligence (ACEA Bioscience Inc., США).

Проводили HLA-типирование опухолевых культур и образцов биологического материала пациентов с определением генов HLA I класса методом полимеразной цепной реакции с праймерами, специфичными к конкретным аллелям (ПЦР-SSP).

Идентифицировали маркеры стволовых клеток в опухолевых образцах методом проточной цитометрии (BD FACS Canto™ II (BD Bioscience, США)).

Анализировали транскрипционную активность генов РТА методом ПЦР (в НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «НМИЦ онкологии имени Н.Н. Блохина» Минздрава России на ПЦР-амплификаторе Light Cycler 96 (Roshe, Швейцария)).

Оценивали химиочувствительность опухолевых клеток и их клонов с помощью колориметрического теста для оценки метаболической активности клеток (МТТ-теста) и/или автоматического клеточного анализатора xCelligence (ACEA Bioscience Inc., США).

Определяли субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток в образцах периферической крови пациентов методом проточной цитофлуориметрии (BD FACS Canto™ II (BD Bioscience, США)).

Осуществляли хранение, обработку, статистический анализ данных и визуализацию результатов с использованием Microsoft Excel 2019 (Microsoft Corporation, США), Statistica 8.0 (StatSoft Inc., США) и R v.3.6.2. Применяли основные статистические показатели: среднее значение, медиана, минимум, максимум. В случае количественных признаков применяли

коэффициент ранговой корреляции Спирмена, для сравнения выборок использовали и-критерий Манна-Уитни и W-критерия Уилкоксона

Выживаемость анализировали методом Каплана-Мейера. Во всех случаях значения р<0,05 считали статистически значимыми.

Положения, выносимые на защиту

1. Получены и охарактеризованы 56 клеточных линий метастатических сарком мягких тканей и остеогенных сарком 16 гистологических подтипов и 83 дочерних клона для клеточного моделирования процессов, происходящих в опухолях с высокой внутриопухолевой гетерогенностью.

2. Выявлены 2 типа клеточных культур СМТ и ОС: клоногенные (39,3%; 22/56) и неклоногенные (60,7%; 34/56), которые имеют статистически значимые различия в миграционной способности, относительном содержании ALDH1+клеток, транскрипционной активности раково-тестикулярных генов.

3. В процессе длительного культивирования (>15 пассажей) и клонирования наблюдается увеличение пролиферативной активности и химиорезистентности клеток СМТ и ОС.

4. Клоногенность культур клеток СМТ и ОС может рассматриваться в качестве прогностического фактора, определяющего течение заболевания, и предиктивного маркера эффективности иммунотерапии.

5. У пациентов, из образцов опухоли которых были получены клоногенные клеточные линии, в периферической крови снижено количество цитотоксических Т-лимфоцитов, активированных цитотоксических Т-лимфоцитов, активированных Т-лимфоцитов хелперов и повышено содержание КК-клеток, что свидетельствует об изменении поляризации иммунного ответа в процессе опухолевой селекции.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность результатов работы подтверждается репрезентативностью выборки (в исследовании скринировано 95 образцов опухоли пациентов, включено 56 клеточных линий и 83 клона), использованием современных методов исследований, обработкой полученных данных с применением методов статистического анализа, которые можно корректно применять для множественных попарных сравнений, а также дисперсионного анализа при множественной проверке гипотез.

Основные положения диссертации представлены на V Петербургском онкологическом форуме «Белые ночи - 2019» (Санкт-Петербург, 20.06-23.06.2019 г.); Втором международном

форуме онкологии и радиологии (Москва, 23.09-27.09.2019 г.); V Всероссийской конференции по молекулярной онкологии (Москва, 16.12-18.12.2019 г.); VI Петербургском онкологическом форуме «Белые ночи - 2020» (Санкт-Петербург, 25.06-28.06.2020 г.); 12-й Международной мультиконференции «Биоинформатика регуляции и структуры генома/Системная биология» (Новосибирск, 06.06-10.06.2020 г.); Международной научной конференции «Инновационные исследования в биологии и медицине» (Сочи, 25.11-27.11.2020 г.); VII Петербургском онкологическом форуме «Белые ночи - 2021» (Санкт-Петербург, 21.06-27.06.2021 г.).

Внедрение результатов исследования

Работа проведена в соответствии с планом основных научно-исследовательских направлений отдела онкоиммунологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России. Результаты работы были внедрены в научно-практическую деятельность подразделения (акт внедрения результатов от 30.11.2021 г.).

Личный вклад автора

Автор принимала участие в скрининге пациентов, обследовании и лечении больных, получении клеточных культур и клеточных линий СМТ и ОС из образцов опухолевого материала пациентов ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России. Выполняла пассирование клеточных культур, клонирование, оценку их пролиферативной, инвазивной и миграционной активности, постановку и анализ МТТ-теста, отбор образцов для проведения генетических исследований, проточной цитометрии. Самостоятельно произвела сбор данных, принимала участие в создании и заполнении базы данных, провела статистическую обработку результатов исследований, проанализировала полученные результаты, на основании чего были сформулированы заключение и выводы по материалам исследования. Все полученные результаты самостоятельно подготовлены для публикаций и представления на различных научно-практических мероприятиях.

Соответствие диссертации паспорту научных специальностей

Научные положения настоящей диссертационной работы соответствует паспорту научной специальности «3.1.6. - онкология, лучевая терапия» («медицинские науки») по пункту 2 (исследования на молекулярном, клеточном и органном уровнях этиологии и патогенеза злокачественных опухолей, основанные современных достижениях ряда естественных наук (генетики, молекулярной биологии, морфологии, иммунологии, биохимии, биофизики и др.) и паспорту специальности «3.2.7. - аллергология и иммунология» («медицинские науки») по пункту 3 (изучение молекулярных и клеточных основ

противобактериальной, противовирусной, противопаразитарной иммунной защиты).

противоопухолевой,

противогрибковой,

Публикации

По результатам диссертационного исследования опубликовано 19 печатных работ соискателя. Всего 6 статей, из которых 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для соискателей ученой степени кандидата медицинских наук, и 2 статьи в международных журналах, индексируемых в Scopus и WoS, и 13 тезисов. Получено три патента на изобретение РФ и одно свидетельство о регистрации базы данных. Подготовлено одно учебное пособие для обучающихся в системе высшего и дополнительного профессионального образования.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста, включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследования, обсуждение, выводы, практические рекомендации, список литературы, который содержит 1 66 источников, из них 16 отечественных и 150 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 38 рисунками.

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О КЛОНАЛЬНОЙ ЭВОЛЮЦИИ САРКОМ И ЕЕ РОЛЬ В ФОРМИРОВАНИИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К РАЗЛИЧНЫМ ВИДАМ ЛЕЧЕНИЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Модели эволюции опухолевых клеток

Туморогенез является следствием генетической и эпигенетической диверсификации, за которой следует клональный отбор и последующая экспансия. Этот процесс, формируемый опухолевым микроокружением, приводит к внутриопухолевой гетерогенности по экспрессии генов, фенотипических маркеров, динамике роста и резистентности к лечению. Первые наблюдения клеточной гетерогенности опухолей были сделаны R. Virchow (1858) с использованием светового микроскопа [17]. Впоследствии рассматривались различные теории, объясняющие процессы, предшествующие образованию опухоли, ее метастазированию и многочисленные модели клонального механизма опухолевой прогрессии.

Самая первая модель эволюции опухоли предложена P.C. Nowell (1976), который обобщил результат предшественников в теории клональной эволюции [18]. Согласно данной теории, все опухоли представляют собой потомство единичной клетки, которая в процессе последовательных генетических мутаций приобрела характерный набор признаков опухолевой принадлежности. При дальнейшем прогрессировании заболевания ключевая роль отводится процессам накопления генетических изменений в исходном клоне опухолевых клеток, что приводит к доминированию наиболее агрессивных субклонов. Генетическая нестабильность опухолевых клеток служит причиной их высокой фенотипической и биологической индивидуальности, приобретения лекарственной устойчивости и возникновения генетических мутаций в одном из субклонов, который приобретает, таким образом, конкурентное преимущество. Изменения, происходящие в опухолевых клетках под влиянием внешних воздействий, таких как химио- и лучевая терапия, определены не эволюционными процессами, в которые заложен случайный, непредсказуемый характер, а селекцией отдельных субклонов.

Таким образом, внутриопухолевая гетерогенность, обусловленная генетическими различиями между отдельными клетками в опухоли, обеспечивает субстрат для клональной селекции и дальнейшего неограниченного роста, в том числе под воздействием разнообразных экзогенных и эндогенных воздействий (микроокружения, иммунной системы, изменения pH, питательных веществ и др.).

А. Kreso и J.E Dick (2014) разработали концепцию, согласно которой среди опухолевых клеток только ограниченная популяция так называемых «стволовых клеток опухоли» (СКО) обладает способностью поддерживать самообновление и генерировать функциональную гетерогенность подобно нормальным стволовым клеткам в организме человека. СКО

представляют собой немногочисленные покоящиеся клетки с неограниченным потенциалом деления и способностью дифференцироваться в морфологически разнообразное потомство [19]. В процессе клеточного деления при возникновении хромосомных перестроек, делеций, транслокаций и точечных мутаций стволовые клетки приобретают новые свойства, которые позволяют им инициировать канцерогенез. Дальнейшее клональное разнообразие формирует все новые продолжающиеся генетические изменения. Согласно этой гипотезе именно СКО отвечают за основные аспекты биологии злокачественных новообразований, такие как онкогенез, метастазирование и лекарственная устойчивость [20]. Позднее было показано, что гипотезы A. Kreso и P.C. Nowell - не взаимоисключающие, а дополняющие друг друга, поскольку СКО также могут представлять собой единицу отбора в процессе туморогенеза и опухолевой прогрессии [21].

В настоящее время в результате проведения глубокого секвенирования образцов первичных опухолей, таких как рак молочной железы [22], предстательной железы [23], меланома кожи [24], колоректальный рак [25], рак поджелудочной железы [26], рак мочевого пузыря [27], получены доказательства справедливости моноклональной теории происхождения злокачественных опухолей. В этой связи особенно интересными представляется изучение процессов, происходящих в индуцированных злокачественных опухолях, развившихся в результате агрессивного воздействия канцерогенов на соматические клетки. В этом случае логичным было бы предположить поликлональный характер последующей опухолевой прогрессии. Несмотря на это, J. Zang с соавт. (2014), на основании результатов секвенирования 48 опухолевых образцов, полученных от 11 пациентов с аденокарциномой легкого злоупотреблявших курением, показали, что все клоны имеют общее происхождение [28].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ефремова Наталья Александровна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Sarcoma treatment in the era of molecular medicine / T.G. Grunewald, M. Alonso, S. Avnet [et al.] // EMBO Molecular Medicine. - 2020. - Vol. 12, No 11. - P. e11131. - DOI: 10.15252 / emmm.201911131.

2. Sarcomas in the United States: Recent trends and a call for improved staging / M.M. Gage, N. Nagarajan, J.M. Ruck [et al.] // Oncotarget. - 2019. - Vol. 10, No 25. - P. 2462-2474. - DOI: 10.18632/oncotarget.26809.

3. Злокачественные новообразования в России в 2020 году (заболеваемость и смертность) / под ред. Каприна А. Д., Старинского В.В., Шахзадовой А.О. - М.: МНИОИ им. П.А. Герцена -филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2021. - 252 с.

4. Heterogeneity and cancer / K.H. Allison, G.W. Sledge // Oncology. - 2014. - Vol. 28, No 9. -P. 772-778.

5. Cancer-testis antigens PRAME and NY-ESO-1 correlate with tumour grade and poor prognosis in myxoid liposarcoma / K. Iura, K. Kohashi, Y. Hotokebuchi [et al.] // The journal of Pathology. Clinical Research. - 2015. - Vol. 1, No 3. - P. 144-159. - DOI: 10.1002/cjp2.16.

6. Cancer-testis antigen expression in synovial sarcoma: NY-ESO-1, PRAME, MAGEA4, and MAGEA1 / K. Iura, A. Maekawa, K. Kohashi [et al.] // Human Pathology. - 2017. - Vol. 61. -P. 130-139. - DOI: 10.1016/j.humpath.2016.12.006.

7. HLA Genotyping in synovial sarcoma: identifying HLA-A*02 and its association with clinical outcome / E. Rosenbaum, K. Seier, C. Bandlamudi [et al.] // Clinical Cancer Research. - 2020. -Vol. 26, No 20. - P. 5448. - DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-20-0832.

8. Distinctive germline expression of class I human leukocyte antigen (HLA) alleles and DRB1 heterozygosis predict the outcome of patients with non-small cell lung cancer receiving PD-1/PD-L1 immune checkpoint blockade / P. Correale, R.E. Saladino, D. Giannarelli [et al.] // Journal for Immunotherapy of Cancer. - 2020. - Vol. 8, No 1. - P. e000733. - DOI: 10.1136/jitc-2020-000733.

9. Cancer stem cell marker glycosylation: nature, function and significance / B.W. Mallard, J. Tiralongo // Glycoconjugate Journal. - 2017. - Vol. 34. - P. 441-452. - DOI: 10.1007/s10719-017-9780-9.

10. Prognostic value of aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH1) in invasive breast carcinomas / H. Demir, O. Dulgar, B.T. Gulle, H. Turna, S. Ilvan // Bosnian Journal of Basic Medical Sciences. - 2018. - Vol. 18, No 4. - P. 313-319. - DOI: 10.17305/bjbms.2018.3094.

11. Effect of chemotherapy on cancer stem cells and tumor-associated macrophages in a prospective study of preoperative chemotherapy in soft tissue sarcoma / K.M. Skubitz, J.D. Wilson, E.Y. Cheng [et al.] // J Transl Med. - 2019. - Vol. 17, No 1. - P. 130. - DOI: 10.1186/s12967-019-1883-6.

12. Intratumoral immune-biomarkers and mismatch repair status in leiyomyosarcoma - potential predictive markers for adjuvant treatment: a pilot study / J.E. Cohen, F. Eleyan, A. Zick [et al.] // Oncotarget. - 2018. - Vol. 9, No 56. - P. 30847-30854. - DOI: 10.18632/oncotarget.25747.

13. Evaluation of tumor-infiltrating lymphocytes in osteosarcomas of the jaws: a multicenter study / P.M. Alves, J.A.A. de Arruda, D.A.C. Arantes [et al.] // Virchows Archiv. - 2019. - Vol. 474, No 2. -P. 201-207. - DOI: 10.1007/s00428-018-2499-6.

14. The adequacy of tissue microarrays in the assessment of inter- and intra-tumoural heterogeneity of infiltrating lymphocyte burden in leiomyosarcoma / A.T.J. Lee, W. Chew, C.P. Wilding [et al.] // Scientific Reports. - 2019. - Vol. 9, No 1. - P. 14602. - DOI: 10.1038/s41598-019-50888-5.

15. Immune checkpoint inhibitors in treatment of soft-tissue sarcoma: A systematic review and metaanalysis / M. Saerens, N. Brusselaers, S. Rottey [et al.] // European Journal of Cancer. - 2021. - Vol. 152. - P. 165-182. - DOI: 10.1016/j.ejca.2021.04.034.

16. Systemic blood immune cell populations as biomarkers for the outcome of immune checkpoint inhibitor therapies / C. Hernandez, H. Arasanz, L. Chocarro [et al.] // International Journal of Molecular Sciences. - 2020. - Vol. 21, No 7. - P. 2411. - DOI: 10.3390/ijms21072411.

17. Advances for studying clonal evolution in cancer / L. Ding, B.J. Raphael, F. Chen, M.C.Wendl // Cancer Letters. - 2013. - Vol. 340, No 2. - P. 212-219. - DOI: 10.1016/j.canlet.2012.12.028.

18. The clonal evolution of tumor cell populations / P.C. Nowell // Science. - 1976. - Vol. 194, No 4260. - P. 23-28. - DOI: 10.1126/science.959840.

19. Evolution of the cancer stem cell model / A. Kreso, J.E. Dick // Cell Stem Cell. - 2014. - Vol. 14, No 3. - P. 275-291. - DOI: 10.1016/j.stem.2014.02.006.

20. Molecular heterogeneity in breast cancer: State of the science and implications for patient care / R.E. Ellsworth, H.L. Blackburn, C.D. Shriver [et al.] // Seminars in Cell and Developmental Biology. - 2017. - Vol. 64. - P. 65-72. - DOI: 10.1016/j.semcdb.2016.08.025.

21. Cancer stem cells: A product of clonal evolution? / G.V. Niekerk, L.M. Davids, S.M. Hattingh, A.M. Engelbrecht // Int J Cancer. - 2017. - Vol. 140. - No 5. - P. 993-999. - DOI: 10.1002/ijc.30448.

22. Subclonal diversification of primary breast cancer revealed by multiregion sequencing / L.R. Yates, M. Gerstung, S. Knappskog [et al.] // Nature Medicine. - 2015. - Vol. 21, No 7. - P. 751759. - DOI: 10.1038/nm.3886.

23. Spatial genomic heterogeneity within localized, multifocal prostate cancer / P.C. Boutros, M. Fraser, N.J. Harding [et al.] // Nature Genetics. - 2015. - Vol. 47, No 7. - P. 736-745. - DOI: 10.1038/ng.3315.

24. Multiregion whole-exome sequencing uncovers the genetic evolution and mutational heterogeneity of early-stage metastatic melanoma / K. Harbst, M. Lauss, H. Cirenajwis [et al.] // Cancer Research. -2016. - Vol. 76, No 16. - P. 4765-4774. - DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-15-3476.

25. Many private mutations originate from the first few divisions of a human colorectal adenoma / H. Kang, MP. Salomon, A. Sottoriva [et al.] // The Journal of Pathology. - 2015. - Vol. 237, No 3. -P. 355-362. - DOI: 10.1002/path.4581.

26. Distant metastasis occurs late during the genetic evolution of pancreatic cancer / S. Yachida, S. Jones, I. Bozic [et al.] // Nature. - 2010. - Vol. 467, No 7319. - P. 1114-1117. - DOI: 10.1038/nature09515.

27. Single-cell sequencing analysis characterizes common and cell-lineage-specific mutations in a muscle-invasive bladder cancer / Y. Li, X. Xu, L. Song [et al.] // GigaScience. - 2012. - Vol. 1, No 1. - P. 12. - DOI: 10.1186/2047-217X-1-12.

28. Intratumor Heterogeneity in Localized Lung Adenocarcinomas Delineated by Multi-region Sequencing HHS Public Access / J. Zhang, J. Fujimoto, J. Zhang [et al.] // Science. - 2014. - Vol. 346, No 6206. - P. 256-259. - DOI: 10.1126/science.1256930.

29. Signatures of mutational processes in human cancer / L.B. Alexandrov, S. Nik-Zainal, D C. Wedge [et al.] // Nature. - 2013. - Vol. 500, No 7463. - P. 415-421.

30. Tumor evolution: linear, branching, neutral or punctuated? / A. Davis, R. Gao, N. Navin // Biochimica et Biophysica Acta. Reviews on Cancer. - 2017. - Vol. 1867, No 2. - P. 151-161. - DOI: 10.1016/j.bbcan.2017.01.003.

31. Divergent modes of clonal spread and intraperitoneal mixing in high-grade serous ovarian cancer / A. McPherson, A. Roth, E. Laks [et al.] // Nature Genetics. - 2016. - Vol. 48, No 7. - P. 758-767. -DOI: 10.1038/ng.3573.

32. Genomic architecture and evolution of clear cell renal cell carcinomas defined by multiregion sequencing / M. Gerlinger, S. Horswell, J. Larkin [et al.] // Nature Genetics. - 2014. - Vol. 46, No 3. - P. 225-233. - DOI: 10.1038/ng.2891.

33. The clonal evolution of osteosarcomas TT - Die klonale Evolution des Osteosarkoms / D. Baumhoer // Der Pathologe. - 2016. - Vol. 37, Suppl. 2. - P. 163-168. - DOI: 10.1007/s00292-016-0200-x.

34. Different patterns of clonal evolution among different sarcoma subtypes followed for up to 25 years / J. Hofvander, B. Viklund, A. Isaksson [et al.] // Nature Communications. - 2018. - Vol. 9, No 1. - P. 3662. - DOI: 10.1038/s41467-018-06098-0.

35. The clonal and mutational evolution spectrum of primary triple negative breast cancers / S.P. Shah, A. Roth, R. Goya [et al.] // Nature. - 2012. - Vol. 486, No 7403. - P. 395-399. - DOI: 10.1038/nature 10933.

36. Genomic profiling of dedifferentiated liposarcoma compared to matched well-differentiated liposarcoma reveals higher genomic complexity and a common origin / H.C. Beird, C.C. Wu, D.R. Ingram [et al.] // Cold Spring Harbor Molecular Case Studies. - 2018. - Vol. 4, No 2. -P. а002386. - DOI: 10.1101/mcs.a002386.

37. Identification of neutral tumor evolution across cancer types / M.J. Williams, W. Benjamin, C P. Barnes [et al.] // Nature genetics. - 2016. - Vol. 48, No 3. - P. 238-244. - DOI: 10.1038/ng.3489.

38. Genomics and the immune landscape of osteosarcoma / C.C. Wu, J.A. Livingston // Advances in Experimental Medicine and Biology. - 2020. - Vol. 1258. - P. 21-36. - DOI: 10.1007/978-3-030-43085-6_2.

39. Clonal evolution in breast cancer revealed by single nucleus genome sequencing / Y. Wang, J. Waters, ML. Leung [et al.] // Nature. - 2014. - Vol. 512, No 7513. - P. 155-160. - DOI: 10.1038/nature13600.

40. A temporal shift of the evolutionary principle shaping intratumor heterogeneity in colorectal cancer / T. Saito, A. Niida, R. Uchi [et al.] // Nature communications. - 2018. - Vol. 9, No 1. -P. 2884. - DOI: 10.1038/s41467-018-05226-0.

41. Intratumor heterogeneity defines treatment-resistant HER2+ breast tumors present addresses / I.H. Rye, A. Trinh, A.B. Saetersdal [et al.] // Molecular Oncology. - 2018. - Vol. 12. - P. 18381855. - DOI: 10.1002/1878-0261.12375.

42. Exome sequencing of osteosarcoma reveals mutation signatures reminiscent of BRCA deficiency / M. Kovac, C. Blattmann, S. Ribi [et al.] // Nature Communications. - 2015. - Vol. 6. - P. 8940. -DOI: 10.1038/ncomms9940.

43. Теоретические основы селекции / Н.И. Вавилов. - М.: Наука, 1987. - 510 с.

44. Tumour Cell Heterogeneity / L. Gay, A.-M. Baker, T.A. Graham // F1000 Research. - 2016. -Vol. 5. - P. F1000 Faculty Rev-238. - DOI: 10.12688/f1000research.7210.1.

45. Chromothripsis from DNA damage in micronuclei / C.-Z. Zhang, A. Spektor, H. Cornils [et al.] // Nature. - 2015. - Vol. 522, No 7555. - P. 179-184. - DOI: 10.1038/nature14493.

46. Single-cell analyses of transcriptional heterogeneity during drug tolerance transition in cancer cells by RNA sequencing / M.-C.W. Lee, F.J. Lopez-Diaz, S.Y. Khan [и др.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2014. - Vol. 111, No 44. - P. E4726-E4735. - DOI: 10.1073/pnas.1404656111.

47. Clonal evolution models of tumor heterogeneity / L.I. Shlush, D. Hershkovitz // American Society of Clinical Oncology Educational Book. - 2015. - Vol. 35. - P. e662-e665. - DOI: 10.14694/EdBook AM.2015.35.e662.

48. Association between molecular subtypes of colorectal cancer and patient survival / A.I. Phipps, P.J. Limburg, J A. Baron [et al.] // Gastroenterology. - 2015. - Vol. 148, No 1. - P. 77-87.e2. - DOI: 10.1053/j.gastro.2014.09.038.

49. Overview on Clinical Relevance of Intra-Tumor Heterogeneity / G. Stanta, S. Bonin // Frontiers in Medicine. - 2018. - Vol. 5. - P. 85. - DOI: 10.3389/fmed.2018.00085.

50. Mutational heterogeneity in cancer and the search for new cancer-associated genes / M.S. Lawrence, P. Stojanov, P. Polak [et al.] // Nature. - 2013. - Vol. 499, No 7457. - P. 214-218. -DOI: 10.1038/nature12213.

51. Evolution and impact of subclonal mutations in chronic lymphocytic leukemia / D.A. Landau, S.L. Carter, P. Stojanov [et al.] // Cell. - 2013. - Vol. 152, No 4. - P. 714-726. - DOI: 10.1016/j.cell.2013.01.019.

52. Application of evolutionary principles to cancer therapy / P.M. Enriquez-Navas, J.W. Wojtkowiak, R.A. Gatenby // Cancer Research. - 2015. - Vol. 75, No 22. - P. 4675-4680. - DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-15-1337.

53. Cancer stem cells: an evolving concept / L. V Nguyen, R. Vanner, P. Dirks [et al.] // Nature Reviews. Cancer. - 2012. - Vol. 12, No 2. - P. 133-143. - DOI: 10.1038/nrc3184.

54. Tackling the cancer stem cells - what challenges do they pose? / D.R. Pattabiraman, R.A. Weinberg // Nature Reviews. Drug Discovery. - 2014. - Vol. 13, No 7. - P. 497-512. - DOI: 10.1038/nrd4253.

55. Cancer stem cells: the promise and the potential / J.A. Ajani, S. Song, H.S. Hochster [et al.] // Seminars in Oncology. - 2015. - Vol. 42, Suppl. 1. - P. S3-S17. - DOI: 10.1053/j.seminoncol.2015.01.001.

56. Tumorigenic cell reprogramming and cancer plasticity: interplay between signaling, microenvironment, and epigenetics / V. Poli, L. Fagnocchi, A. Zippo // Stem Cells International. -2018. - Vol. 2018. - P. 4598195. - DOI: 10.1155/2018/4598195.

57. Cancer stem cell heterogeneity: origin and new perspectives on CSC targeting / K. Eun, S.W. Ham, H. Kim // BMB Reports. - 2017. - Vol. 50, No 3. - P. 117-125. - DOI: 10.5483/bmbrep.2017.50.3.222.

58. Trabectedin and campthotecin synergistically eliminate cancer stem cells in cell-of-origin sarcoma models / L. Martinez-Cruzado, J. Tornin, A. Rodriguez [et al.] // Neoplasia. - 2017. -Vol. 19, No 6. - P. 460-470. - DOI: 10.1016/j.neo.2017.03.004.

59. Sarcoma stem cell heterogeneity / J. Hatina, M. Kripnerova, K. Houfkova [et al.] // Advances in experimental medicine and biology. - 2019. - Vol. 1123. - P. 95-118. - DOI: 10.1007/978-3-03011096-3 7.

60. Cancer Stem Cell Markers in Rhabdomyosarcoma in Children / J. Radzikowska, A.M. Czarnecka, T. Klepacka. [et al.] // Diagnostics (Basel). - 2022. - Vol. 12, No 8 - P. 1895. - DOI: 10.3390/diagnostics12081895.

61. Aldh1 expression and activity increase during tumor evolution in sarcoma cancer stem cell populations / L. Martinez-Cruzado, J. Tornin, L. Santos [et al.] // Scientific Reports. - 2016. -Vol. 6. - P. 27878. - DOI: 10.1038/srep27878.

62. ALDH as a stem cell marker in solid tumors / M.E. Toledo-Guzmán, M.I. Hernández, Á.A. Gómez-Gallegos, E. Ortiz-Sánchez // Current Stem Cell Research & Therapy. - 2018. - Vol. 14, No 5. - P. 375-388. - DOI: 10.2174/1574888X13666180810120012.

63. Retinal targets ALDH positive cancer stem cell and alters the phenotype of highly metastatic osteosarcoma cells / X. Mu, S. Patel, D. Mektepbayeva [et al.] // Sarcoma. - 2015. - Vol. 2015. -P. 784954. - DOI: 10.1155/2015/784954.

64. Aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH1) is a potential marker for cancer stem cells in embryonal rhabdomyosarcoma / K. Nakahata, S. Uehara, S. Nishikawa [et al.] // PLoS ONE. - 2015. - Vol. 10, No 4. - P. e0125454. - DOI: 10.1038/s41423-019-0306-1.

65. Liposarcoma cells with aldefluor and CD133 activity have a cancer stem cell potential / E.W. Stratford, R. Castro, A. Wennerstram [et al.] // Clinical Sarcoma Research. - 2011. - Vol. 1, No 1. - P. 8. - DOI: 10.1186/2045-3329-1-8.

66. The role of ALDH in the metastatic potential of osteosarcoma cells and potential ALDH targets / R. Belayneh, K. Weiss // Adv Exp Med Biol. - 2020. - Vol. 1258. - P. 157-166. - DOI: 10.1007/978-3-030-43085-6_10.

67. CD133: beyond a cancer stem cell biomarker / A.B. Behrooz, A. Syahir, S. Ahmad // J Drug Target. - 2019. - Vol. 27, No 3. - P. 257-269. - DOI: 10.1080/1061186X.2018.1479756.

68. Expression of CD133 protein in osteosarcoma and its relationship with the clinicopathological features and prognosis / Y. Xie, J. Huang, M. Wu [et al.] // Journal of Cancer Research and Therapeutics. - 2018. - Vol. 14, No 4. - P. 892-895. - DOI: 10.4103/jcrt.JCRT_461_17.

69. Humoral immune responses against cancer-testis antigens in human malignancies / M. Astaneh, S. Dashti, Z.T. Esfahani // Human Antibodies. - 2019. - Vol. 27, No 4. - P. 237-240. - DOI: 10.3233/HAB-190377.

70. A testicular antigen aberrantly expressed in human cancers detected by autologous antibody screening / Y.T. Chen, M.J. Scanlan, U. Sahin [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 1997. - Vol. 94, No 5. - P. 1914-1918. - DOI: 10.1073/pnas.94.5.1914.

71. CTdatabase: a knowledge-base of high-throughput and curated data on cancer-testis antigens // L.G. Almeida, N.J. Sakabe, A.R. deOliveira [et al.] // Nucleic Acids Res. - 2009. - Vol. 37. -P. D816-819. - DOI: 10.1093/nar/gkn673.

72. Cancer testis antigens in sarcoma: Expression, function and immunotherapeutic application / R. Wei, D C. Dean, P. Thanindratarn [et al.] // Cancer Letters. - 2020. - Vol. 479. - P. 54-60. - DOI: 10.1016/j.canlet.2019.10.024.

73. Х-хромосомные раково-тестикулярные гены / Мисюрин В.А. // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 2. - С. 3-10.

74. Аутосомные раково-тестикулярные гены / Мисюрин В.А. // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 2. - С. 77-82.

75. Emerging contributions of cancer/testis antigens to neoplastic behaviors / Z.A. Gibbs, A.W. Whitehurst // Trends Cancer. - 2018. - Vol. 4, No 10. - P. 701-712. - DOI: 10.1016/j.trecan.2018.08.005.

76. Cancer/testis antigens: expression, regulation, tumor invasion, and use in immunotherapy of cancers / A. Salmaninejad, M.R. Zamani, M. Pourvahedi [et al.] // Immunological Investigations. -2016. - Vol. 45, No 7. - P. 619-640. - DOI: 10.1080/08820139.2016.1197241.

77. Cancer/testis (CT) antigens, carcinogenesis and spermatogenesis / Y.-H. Cheng, E.W. Wong, C.Y. Cheng // Spermatogenesis. - 2011. - Vol. 1, No 3. - С. 209-220. - DOI: 10.4161/spmg.1.3.17990.

78. Regulation of cancer germline antigen gene expression: implications for cancer immunotherapy / S.N. Akers, K. Odunsi, A.R. Karpf // Future Oncology. - 2010. - Vol. 6, No 5. - P. 717-732. - DOI: 10.2217/fon.10.36.

79. Cancer testis antigens and genomic instability: More than immunology / A. Jay, D. Reitz, S.H. Namekawa, W.D. Heyer // DNA Repair (Amst). - 2021. - Vol. 108. - P. 103214. - DOI: 10.1016/j.dnarep.2021.103214.

80. Expression of cancer-testis genes PRAME, NY-ESO1, GAGE1, MAGE A3, MAGE A6, MAGE A12, SSX1, SLLP1, PASD1 in patients with multiple myeloma, their influence on overall survival and relapse rate / A.A. Solodovnik, H.S. Mkrtchyan, V.A. Misyurin [et al.] // Advances in Molecular Oncology. - 2018. - Vol. 5, No 2. - P. 62-70. - DOI: 10.17650/2313-805X-2018-5-2-62-70.

81. Cancer/testis antigens expression during cultivation of melanoma and soft tissue sarcoma cells / A. Danilova, V. Misyurin, A. Novik [et al.] // Clinical Sarcoma Research. - 2020. - Vol. 10, No 1. -P. 3. - DOI: 10.1186/s13569-020-0125-2.

82. Cancer-testis antigens expressed in osteosarcoma identified by gene microarray correlate with a poor patient prognosis / C. Zou, J. Shen, Q. Tang [et al.] // Cancer. - 2012. - Vol. 118, No 7. -P. 1845-1855. - DOI: 10.1002/cncr.26486.

83. Overexpressed PRAME is a potential immunotherapy target in sarcoma subtypes / J. Roszik, W.-L. Wang, J.A. Livingston [et al.] // Clinical Sarcoma Research. - 2017. - Vol. 7. - P. 11. - DOI: 10.1186/s13569-017-0077-3.

84. NY-ESO-1: a promising cancer testis antigen for sarcoma immunotherapy and diagnosis / S.M. Smith, O.H. Iwenofu // Chin Clin Oncol. - 2018. - Vol. 7, No 4. - P. 44. - DOI: 10.21037/cco.2018.08.11. PMID: 30173534.

85. Targeting cancer testis antigens in synovial sarcoma / G. Mitchell, S.M. Pollack, M.J. Wagner // Immunother Cancer. - 2021. - Vol. 9, No. 6. - P. e002072. - DOI: 10.1136/jitc-2020-002072.

86. First-in-class, first-in-human study evaluating LV305, a dendritic-cell tropic lentiviral vector, in sarcoma and other solid tumors expressing NY-ESO-1 / N. Somaiah, M.S. Block, J.W. Kim [et al.] // Clinical Cancer Research. - 2019. - Vol. 25, No 19. - P. 5808-5817. - DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-19-1025.

87. Antitumor activity associated with prolonged persistence of adoptively transferred NY-ESO-1c259T cells in synovial sarcoma / S.P. D'angelo, L. Melchiori, M.S. Merchant [et al.] // Cancer Discovery. - 2018. - Vol. 8, No 8. - P. 944-957. - DOI: 10.1158/2159-8290.CD-17-1417.

88. Molecular mechanisms underpinning sarcomas and implications for current and future therapy / V. Damerell, M.S. Pepper, S. Prince // Signal Transduct Target Ther. - 2021. - Vol. 6, No 1. -P. 246. - DOI: 10.1038/s41392-021 -00647-8.

89. Mechanisms of sarcomagenesis / I. Matushansky, R.G. Maki // Hematol Oncol Clin North. -2005. - Vol. 19, No 3. - P. 427-449. - DOI: 10.1016/j.hoc.2005.03.006.

90. The 2020 WHO Classification of Tumors of Soft Tissue: Selected Changes and New Entities / J.H. Choi, J.Y. Ro // Adv Anat Pathol. - 2021. - No 1. - P. 44-48. - DOI: 10.1097/PAP.0000000000000284.

91. Managing sarcoma: where have we come from and where are we going? / J.S. Bleloch, R.D. Ballim, S. Kimani [et al.] // Ther Adv Med Oncol. - 2017. - Vol. 9, No 10. - P. 637-659. - DOI: 10.1177/1758834017728927.

92. Cancer evolution: Darwin and beyond / R. Vendramin, K. Litchfield, C. Swanton // EMBO J. -2021. - Vol. 40, No 18. - P. e108389. - DOI: 10.15252/embj.2021108389.

93. Genetic heterogeneity in rhabdomyosarcoma revealed by SNP array analysis / C. Walther, M. Mayrhofer, J. Nilsson [et al.] // Genes Chromosomes and Cancer. - 2016. - Vol. 55, No 1. - P. 315. - DOI: 10.1002/gcc.22285.

94. Comprehensive and integrated genomic characterization of adult soft tissue sarcomas / A. Abeshouse, C. Adebamowo, S.N. Adebamowo [et al.] // Cell. - 2017. - Vol. 171, No 4. - P. 950-965.e28. - DOI: 10.1016/j.cell.2017.10.014.

95. Lineage-defined leiomyosarcoma subtypes emerge years before diagnosis and determine patient survival / N.D. Anderson, Y. Babichev, F. Fuligni [et al.] // Nat Commun. - 2021. - Vol. 12, No 1. -P. 4496. - DOI: 10.1038/s41467-021-24677-6.

96. Практические рекомендации по лечению первичных злокачественных опухолей костей (остеосаркомы, саркомы Юинга). Рекомендации восточно-европейской группы по изучению сарком / А.А. Феденко, А.Ю. Бохян, В.А. Горбунова, А.Н. Махсон, В.В. Тепляков // Злокачественные опухоли: Практические рекомендации RUSSCO #3s2. - 2021. - Т. 1. - 17 с.

97. Complementary genomic approaches highlight the PI3K/mTOR pathway as a common vulnerability in osteosarcoma / J.A. Perry, A. Kiezun, P. Tonzi [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2014. - Vol. 111, No 51. - P. E5564-5573. -DOI: 10.1073/pnas.1419260111.

98. Digital expression profiling identifies RUNX2, CDC5L, MDM2, RECQL4, and CDK4 as potential predictive biomarkers for neo-adjuvant chemotherapy response in paediatric osteosarcoma / J.W. Martin, S. Chilton-Macneill, M. Koti [et al.] // PLoS ONE. - 2014. - Vol. 9, No 5. - P. 95843. -DOI: 10.1371/journal.pone.0095843.

99. Genetic and clonal dissection of osteosarcoma progression and lung metastasis / H. Xu, X. Zhu, H. Bao [et al.] // International J of Cancer. - 2018. - Vol. 143, No 5. - P. 1134-1142. - DOI: 10.1002/ijc.31389.

100. Natural and chemotherapy-induced clonal evolution of tumors / M.K. Ibragimova, M M. Tsyganov, N.V. Litviakov // Biochemistry. - 2017. - Vol. 82, No 4. - P. 413-425. - DOI: 10.1134/S0006297917040022.

101. Clonal dynamics in osteosarcoma defined by RGB marking / S. Gambera, A. Abarrategi, F. Gonzalez-Camacho [et al.] // Nature Communications. - 2018. - Vol. 9, No 1. - P. 3994. - DOI: 10.1038/s41467-018-06401 -z.

102. Tracing Tumor Evolution in Sarcoma Reveals Clonal Origin of Advanced Metastasis / Y.J. Tang, J. Huang, H. Tsushima [et al.] // Cell Reports. - 2019. - Vol. 28, No 11. - P. 2837-2850.e5. - DOI: 10.1016/j.celrep.2019.08.029.

103. Multiregion sequencing reveals the genetic heterogeneity and evolutionary history of osteosarcoma and matched pulmonary metastases / D. Wang, X. Niu, Z. Wang [et al.] // Cancer Research. - 2019. - Vol. 79, No 1. - P. 7-20. - DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-18-1086.

104. The clonal evolution of metastatic osteosarcoma as shaped by cisplatin treatment / S.W. Brady, X. Ma, A. Bahrami [et al.] // Molecular Cancer Research. - 2019. - Vol. 17, No 4. - P. 895-906. -DOI: 10.1158/1541-7786.MCR-18-0620.

105. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications: Sixth Edition / R.I. Freshney // John Wiley and Sons. - 2011. - P. 732. - DOI: 10.1002/9780470649367.

106. Genetic Methods of HLA Typing / M. Witt // Molecular Aspects of Hematologic Malignancies. Springer-Verlag Berlin Heidelberg. - 2012. - P. 325-339. - DOI: 10.1007/978-3-642-29467-9_21

107. Three-dimensional cell culture: The missing link in drug discovery / S. Breslin, L. O'Driscoll // Drug Discovery Today. - 2013. - Vol. 18, No 5-6. - P. 240-249. - DOI: 10.1016/j.drudis.2012.10.003.

108. Spheroid culture system methods and applications for mesenchymal stem cells / N.-E. Ryu, S.-H. Lee, H. Park // Cells. - 2019. - Vol. 8, No 12. - P. 1620. - DOI: 10.3390/cells8121620.

109. Single-cell cloning of hybridoma cells by limiting dilution / E.A. Greenfield // Cold Spring Harbor Protocols. - 2019. - Vol. 2019, No 11. - P. 726-728. - DOI: 10.1101/pdb.prot103192.

110. Comparison between xCELLigence biosensor technology and conventional cell culture system for real-time monitoring human tenocytes proliferation and drugs cytotoxicity screening / C.H. Chiu, K.F. Lei, W.L. Yeh [et al.] // Journal of Orthopaedic Surgery and Research. - 2017. - Vol. 12, No 1. -P. 149. - DOI: 10.1186/s13018-017-0652-6.

111. Evaluation and isolation of cancer stem cells using ALDH activity assay / L. Mele, D. Liccardo, V. Tirino // Metods in Molecular Biology. - 2018. - Vol. 1692. - P. 43-48. - DOI: 10.1007/978-1-4939-7401-6_4.

112. BLAST: Basic Local Alignment Search Tool [Electronic resource]. - URL: https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi (дата обращения: 23.05.2020).

113. The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on / P. Chomczynski, N. Sacchi // Nature Protocols. - 2006. -Vol. 1, No 2. - P. 581-585. - DOI: 10.1038/nprot.2006.83.

114. Cloning of Human tumor stem cells: background and overview / S.E. Salmon // Progress in Clinical and Biological Research. - 1980. - Vol. 48. - P. 3-13.

115. Cancer biology / I.A. Cree // Methods in molecular biology Clifton, New York, USA: Springer Science+Business Media LLC. - 2011. - Vol. 731. - P. 518. - DOI: 10.1007/978-1-61779-080-5_1.

116. Методы подбора in vitro химиопрепаратов для индивидуальной химиотерапии злокачественных новообразований пациентов неонатология и педиатрия / А.Н. Чернов, Е.П. Баранцевич, В.Н. Калюнов [и др.] // Трансляционная медицина. - 2018. - Т. 5, № 3. -С. 45-65. - DOI: 10.18705/2311-4495-2018-5-3-45-65.

117. Оптимизация технологии и стандартизация получения противоопухолевых вакцин на основе аутологичных дендритных клеток: дисс. ... кандидата мед. наук: 14.01.12/14.03.09 / Нехаева Татьяна Леонидовна. - СПб., 2014. - 174 с.

118. Дендритные клетки, активированные раковотестикулярными антигенами (рта+), в лечении метастатических сарком мягких тканей / И.А. Балдуева, А.Б. Данилова, А.В. Новик [и др.] // Вопросы онкологии. - 2014. - Т. 60, № 6. - С. 700-706.

119. NbClust: an R package for determining the relevant number of clusters in a Data Set / M. Charrad, N. Ghazzali, V. Boiteau [et al.] // Journal of Statistical Software. - 2014. - Vol. 61, No 6. - P. 1-36. - DOI: 10.18637/jss.v061.i06.

120. The Allele Frequency Net Database - Allele, haplotype and genotype frequencies in Worldwide Populations [Electronic resource]. - URL: http://www.allelefrequencies.net/ (дата обращения: 23.05.2020).

121. Correlation of HLA-A02* genotype and HLA class I antigen down-regulation with the prognosis of epithelial ovarian cancer / E. Andersson, L. Villabona, K. Bergfeldt [et al.] // Cancer Immunology, Immunotherapy. - 2012. - Vol. 61, No 8. - P. 1243-1253. - DOI: 10.1007/s00262-012-1201-0.

122. Human leukocyte antigen class I and class II polymorphisms and serum cytokine profiles in cervical cancer / L. Bahls, R. Yamakawa, K. Zanäo [et al.] // International Journal of Molecular Sciences. - 2017. - Vol. 18, No 9. - P. 1478. - DOI: 10.3390/ijms18091478.

123. Distribution of HLA antigens in breast cancer / B. Bayraktar, E. Yilmaz, O. Bayraktar [et al.] // Bratislava Medical Journal. - 2012. - Vol. 113, No 6. - P. 372-375. - DOI: 10.4149/bll_2012_084.

124. Tissue culture studies of the proliferative capacity of cervical carcinoma and normal epithelium / G O. Gey, W.D. Coffman, M.T. Kubicek // Cancer Research. - 1952. - Vol. 12. - P. 264-265.

125. Current status of publicly available sarcoma cell lines for use in proteomic studies / X. Pan,

A. Yoshida, A. Kawai [et al.] // Expert Review of Proteomics. - 2016. - Vol. 13, No 2. - P. 227240. - DOI: 10.1586/14789450.2016.1132166.

126. Organoids in cancer research / J. Drost, H. Clevers // Nature Reviews Cancer. - 2018. - Vol. 18, No 7. - P. 407-418. - DOI: 10.1038/s41568-018-0007-6.

127. Lung cancer cell lines: Useless artifacts or invaluable tools for medical science? / A.F. Gazdar,

B. Gao, J.D. Minna // Lung Cancer. - 2010. - Vol. 68, No 3. - P. 309-318. - DOI: 10.1016/j.lungcan.2009.12.005.

128. Investigating the utility of human melanoma cell lines as tumour models / K.M. Vincent, L.M. Postovit // Oncotarget. - 2017. - Vol. 8, No 6. - P. 10498-10509. - DOI: 10.18632/oncotarget.14443.

129. Systematic Review of the Current Status of Human Sarcoma Cell Lines / E. Hattori, R. Oyama, T. Kondo // Cells. - 2019. - Vol. 8, No 2. - P. 157. - DOI: 10.3390/cells8020157.

130. Establishment and molecular characterisation of seven novel soft-tissue sarcoma cell lines / A. Salawu, M. Fernando, D. Hughes [et al.] // British Journal of Cancer. - 2016. - Vol. 115, No 9. -P. 1058-1068. - DOI: 10.1038/bjc.2016.259.

131. Updates from the 2020 World Health Organization Classification of Soft Tissue and Bone Tumours / W.J. Anderson, L A. Doyle // Histopathology. - 2021. - Vol. 78, No 5. - P. 644-657. -DOI: 10.1111/his.14265.

132. Получение и характеристика новых клеточных линий сарком мягких тканей и остеогенных сарком для трансляционных исследований / Н. А. Авдонкина, А. Б. Данилова, В.А. Мисюрин [и др.] // Гены & клетки. - 2020. - Т. 15, № 3. - С. 92-107. - DOI: 10.23868/202011014.

133. Establishment of a novel cellular model for myxofibrosarcoma heterogeneity / B. Lohberger, N. Stuendl, A. Leithner [et al.] // Scientific Reports. - 2017. - Vol. 7. - P. 44700. - DOI: 10.1038/srep44700.

134. Biological features of tissue and bone sarcomas investigated using an in vitro model of clonal selection / N.A. Avdonkina, A.B. Danilova, V.A. Misyurin [et al.] // Pathology - Research and Practice. - 2021. - Vol. 2017. - P. 153214. - DOI: 10.1016/j.prp.2020.153214.

135. A catalog of HLA type, HLA expression, and neoepitope candidates in human cancer cell lines / S. Boegel, M. Lower, T. Bukur [et al.] // OncoImmunology. - 2014. - Vol. 3, No 8. - P. е954893. -DOI: 10.4161/21624011.2014.954893.

136. Cancer-testis antigens: Unique cancer stem cell biomarkers and targets for cancer therapy / O. Gordeeva // Seminars in Cancer Biology. - 2018. - Vol. 53. - P. 75-89. - DOI: 10.1016/j.semcancer.2018.08.006.

137. Cancer testis antigens and immunotherapy: Where do we stand in the targeting of PRAME? / G. Al-Khadairi, J. Decock // Cancers. - 2019. - Vol. 11, No 7. - P. 984. - DOI: 10.3390/cancers11070984.

138. Expression and prognostic relevance of PRAME in primary osteosarcoma / P. Tan, C. Zou, B. Yong [et al.] // Biochem Biophys Res Commun. - 2012. - Vol. 419, No 4. - P. 801-808. - DOI: 10.1016/j.bbrc.2012.02.110.

139. PAS Domain Containing Repressor 1 (PASD1) promotes glioma cell proliferation through inhibiting apoptosis in vitro / R. Li, M. Guo, L. Song // Medical Science Monitor. - 2019. - Vol. 25. -P. 6955-6964. - DOI: 10.12659/MSM.916308.

140. Cancer-testis antigen SLLP1 represents a promising target for the immunotherapy of multiple myeloma / S. Yousef, J. Heise, N. Lajmi [et al.] // Journal of Translational Medicine. - 2015. -Vol. 13. - P. 197. - DOI: 10.1186/s12967-015-0562-5.

141. Expression and prognostic value of tumor stem cell markers ALDH1 and CD133 in colorectal carcinoma / F. Zhou, Y D. Mu, J. Liang [et al.] // Oncology Letters. - 2014. - Vol. 7, No 2. - P. 507512. - DOI: 10.3892/ol.2013.1723.

142. CD133 as a regulator of cancer metastasis through the cancer stem cells / G.Y. Liou // International Journal of Biochemistry and Cell Biology. - 2019. - Vol. 106. - P. 1-7. - DOI: 10.1016/j.biocel.2018.10.013.

143. Clinical implications of cancer stem cells in digestive cancers: acquisition of stemness and

prognostic impact / R. Tsunedomi, K. Yoshimura, N. Suzuki [et al.] // Surg Today. - 2020. - Vol. 50, No 12. - P. 1560-1577. - DOI: 10.1007/s00595-020-01968-x.

144. Expression of nestin, CD133 and ABCG2 in relation to the clinical outcome in pediatric sarcomas / I. Zambo, M. Hermanova, D. Zapletalova [et al.] // Cancer Biomarkers. - 2016. - Vol. 17, No 1. - P. 107-116. - DOI: 10.3233/CBM-160623.

145. CD133 positive embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population is enriched in rhabdospheres / D. Walter, S. Satheesha, P. Albrecht [et al.] // PLoS ONE. - 2011. - Vol. 6, No 5. -P. e19506. - DOI: 10.1371/journal.pone.0019506.

146. CD133 expression predicts lung metastasis and poor prognosis in osteosarcoma patients: A clinical and experimental study / A. He, W. Qi, Y. Huang [et al.] // Experimental and Therapeutic Medicine. - 2012. - Vol. 4, No 3. - P. 435-441. - DOI: 10.3892/etm.2012.603.

147. Clinical Significance of Cancer Stem Cell Markers CD133 and CXCR4 in Osteosarcomas / A. Mardani, E. Gheytanchi, S.H. Mousavie [et al.] // Asian Pac J Cancer Prev. - 2020. - Vol. 21, No 1. - P. 67-73. - DOI: 10.31557/APJCP.2020.21.1.67.

148. Evaluation of expression of cancer stem cell markers and fusion gene in synovial sarcoma: Insights into histogenesis and pathogenesis / Y. Zhou, D. Chen, Y. Qi [et al.] // Oncology Reports. -2017. - Vol. 37, No 6. - P. 3351-3360. - DOI: 10.3892/or.2017.5617.

149. Lipid-polymer nanoparticles with CD133 aptamers for targeted delivery of all-trans retinoic acid to osteosarcoma initiating cells / K. Gui, X. Zhang, F. Chen [et al.] // Biomed Pharmacother. - 2019. -Vol. 111. - P. 751-764. - DOI: 10.1016/j.biopha.2018.11.118.

150. 3D culture modelling: An emerging approach for translational cancer research in sarcomas / V. Heredia-Soto, A. Redondo, J.J.P. Kreilinger [et al.] // Current Medicinal Chemistry. - 2020. -Vol. 27, No 29. - P. 4778-4788. - DOI: 10.2174/0929867326666191212162102.

151. Sarcoma spheroids and organoids - promising tools in the era of personalized medicine /

G. Colella, F. Fazioli, M. Gallo [et al.] // International Journal of Molecular Sciences. - 2018. -Vol. 19, No 2. - P. 615. - DOI: 10.3390/ijms19020615.

152. Extracellular vesicles secreted by highly metastatic clonal variants of osteosarcoma preferentially localize to the lungs and induce metastatic behaviour in poorly metastatic clones / R. Macklin,

H. Wang, D. Loo [et al.] // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7, No 28. - P. 43570-43587. - DOI: 10.18632/oncotarget.9781.

153. PDGFR-induced autocrine SDF-1 signaling in cancer cells promotes metastasis in advanced skin carcinoma / A. Bernat-Peguera, P. Simon-Extremera, V. da Silva-Diz [et al.] // Oncogene. - 2019. -Vol. 38, No 25. - P. 5021-5037. - DOI: 10.1038/s41388-019-0773-y.

154. Establishment and characterization of 5-fluorouracil-resistant human colorectal cancer stem-like cells: tumor dynamics under selection pressure / M.G. Francipane, D. Bulanin, E. Lagasse [et al.] //

International Journal of Molecular Sciences. - 2019. - Vol. 20, No 8. - P. 1817. - DOI: 10.3390/ijms20081817.

155. ALDH activity correlates with metastatic potential in primary sarcomas of bone / N. Greco, T. Schott, X. Mu [et al.] // Journal of Cancer Therapy. - 2014. - Vol. 5, No 4. - P. 331-338. - DOI: 10.4236/jct.2014.54040.

156. ALDH1A1 in patient-derived bladder cancer spheroids activates retinoic acid signaling leading to TUBB3 overexpression and tumor progression / T. Namekawa, K. Ikeda, K. Horie-Inoue [et al.] // International J Cancer. - 2020. - Vol. 146, No 4. - P. 1099-1113. - DOI: 10.1002/ijc.32505.

157. CD133: beyond a cancer stem cell biomarker / A. Barzegar Behrooz, A. Syahir, S. Ahmad // Drug Target. - 2019. - Vol. 27, No 3. - P. 257-269. - DOI: 10.1080/1061186X.2018.1479756.

158. Cancer stem cell (a)symmetry & plasticity: tumorigenesis and therapy relevance / M. Najafi, K. Mortezaee, R. Ahadi // Life Sciences. - 2019. - Vol. 231. - P. 116520. - DOI: 10.1016/j.lfs.2019.05.076.

159. The CD133+ subpopulation of the SW982 human synovial sarcoma cell line exhibits cancer stem-like characteristics / A. Liu, B. Feng, W. Gu [et al.] // International Journal of Oncology. -2013. - Vol. 42, No 4. - P. 1399-1407. - DOI: 10.3892/ijo.2013.1826.

160. Genetic and transcriptional evolution alters cancer cell line drug response / U. Ben-David, B. Siranosian, G. Ha [et al.] // Nature. - 2018. - Vol. 560, No 7718. - P. 325-330. - DOI: 10.1038/s41586-018-0409-3.

161. Immunohistochemical evaluation of immune response in invasive ductal breast cancer of not-otherwise-specified type / S. Vgenopoulou, A.C. Lazaris, C. Markopoulos [et al.] // Breast. - 2003. -Vol. 12, No 3. - P. 172-178. - DOI: 10.1016/s0960-9776(03)00004-3.

162. Immune profiles of desmoplastic small round cell tumor and synovial sarcoma suggest different immunotherapeutic susceptibility upfront compared to relapse specimens / M.F. Wedekind, K.B. Haworth, M. Arnold [et al.] // Pediatric Blood and Cancer. - 2018. - Vol. 65, No 11. -P. e27313. - DOI: 10.1002/pbc.27313.

163. Comparative analysis of innate immune system function in metastatic breast, colorectal, and prostate cancer patients with circulating tumor cells / M.F. Santos, V.K.R. Mannam, B.S. Craft [et al.] // Experimental and Molecular Pathology. - 2014. - Vol. 96, No 3. - P. 367-374. - DOI: 10.1016/j.yexmp.2014.04.001.

164. Clinical and immunological characteristics of sarcomas patients with clonogenic tumors / N.A. Avdonkina, A.B. Danilova, T L. Nekhaeva [et al.] // Immunobiology. - 2021. - Vol. 226, No 4. -P. 152094. - DOI: 10.1016/j.imbio.2021.152094.

165. Molecular mechanisms of HLA class I-mediated immune evasion of human tumors and their role

in resistance to immunotherapies / B. Seliger // HLA. - 2016. - Vol. 88, No 5. - P. 213-220. - DOI: 10.1111/tan.12898.

166. Иммунологические аспекты метрономных режимов химиотерапии / Н.А. Ефремова, А.В. Новик, А.Ю. Зозуля [и др.] // Фарматека. - 2021. - Т. 28, № 7. - P. 81-86. - DOI: 10.18565/pharmateca.2021.7.81-86.