Изучение биодоступности и влияния органических форм селена и цинка на состояние слизистой оболочки тонкой кишки растущих крыс тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Пенева, Вера Витальевна

• Пенева, Вера Витальевна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Пенева, Вера Витальевна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Краткая характеристика биологического действия цинка и селена

1.1.1. Селен

1.1.2. Цинк

1.2. Биотехнологические пищевые источники органических форм селена

и цинка

1.2.1. Дрожжи - продуценты органических форм пищевого селена

1 о

1.2.2. Комплексы цинка с пептидами и аминокислотами ферментативных гидролизатов пищевых белков

1.3. Влияние цинка и селена на состояние защитного барьера желудочно-кишечного тракта

1.3.1. Влияние неорганических соединений цинка

1.3.2. Влияние неорганических соединений селена

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Химические реактивы и оборудование

2.2. Лабораторные животные

2.3. Ферментолизат мяса мидий

2.4. Гидролизат пищевых дрожжей

2.5. Физико-химические методы исследований. Элементный анализ

2.5.1.Определение содержания цинка методом атомно-абсорбционной

спектрофотометрии

2.5.2. Микрофлуориметрический метод определения селена

2.6. Биохимические методы исследования in vitro

2.6.1 .Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови

2.6.2.Определение активности глутатионпероксидазы

2.6.3.Определение антиоксидантной активности сыворотки крови

2.6.4. Определение восстановленных тиолов в печени лабораторных животных (крыс)

2.6.5. Иммуноферметные методы

2.6.5.1. Определение концентрации в сыворотке крови специфических IgG антител (суммы фракций IgGl и IgG4) к OB А с помощью непрямого твердофазного иммуноферментного теста (стандартного ELISA)

2.6.5.2. Определение всасывания OB А в сыворотке крови лабораторных животных (крыс)

2.7. Морфометрические методы

2.8. Экспериментальные методы исследования in vivo

2.8.1. Оценка в опытах на лабораторных животных (крысах) всасывания органической и неорганической форм селена, их влияния на ростовые показатели и селеновй статус

2.8.2. Определение влияния неорганической и органической формы селена на всасывание куриного ОВА в желудочно-кишечном тракте растущих крыс

2.8.3. Морфологическое исследование влияния селена на состояние слизистой оболочки кишки крыс

2.8.4. Экспериментальная оценка влияния ферментолизата селенсодержащих дрожжей (водорастворимой фракции) на степень сенсибилизации и протекание реакции анафилаксии у лабораторных 51 животных (крыс)

2.8.5. Оценка в опытах на лабораторных животных (крысах) влияния обеспеченности цинком на ростовые показатели и активность щелочной фосфатазы

2.8.6. Экспериментальная оценка влияния органической формы цинка на всасывание куриного ОВА в желудочно-кишечном тракте растущих 53 крыс

2.9. Статистическая обработка результатов исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Влияние неорганической и органической формы селена на некоторые физиолого-биохимические показатели и селеновую обеспеченность растущих крыс

3.2. Влияние неорганической и органической формы селена на всасывание макромолекулярного зонда - куриного ОВА в желудочно-кишечном тракте растущих крыс

3.3. Морфологическая характеристика состояния слизистой оболочки тонкой кишки растущих крыс в условиях различной обеспеченности селеном

3.4. Влияние органической формы селена на тяжесть проявлений анафилактического шока и гуморальный иммунный ответ у крыс

3.5. Влияние обеспеченности крыс органической формой цинка на их ростовые показатели и цинковый статус

3.6. Влияние органической формы цинка на всасывание куриного ОВА в желудочно-кишечном тракте растущих крыс

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5. ВЫВОДЫ

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

GSH - восстановленные тиолы

IFN-gamma - гамма-интерферон

IgG- иммуноглобулины класса G

MLCK - легкие цепи киназы миозина

PBS - фосфатно-солевой буфер

TNBS - тринитробензолсульфоновая кислота

TNF - фактор некроза опухоли

Zn-ФГБКМ - комплекс цинка с ферментативным гидролизатом белка коровьего молока

Zn-ФММ - комплекс цинка с ферментативным гидролизатом мяса мидий

АИ - анафилактический индекс

АОА - антиоксидантная активность

БАД - биологически активная добавка к пище

ГПО - глутатионпероксидаза

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат окисленный

НАДФН - никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстаовленный

ОВА - овальбумин

ОВР - общевиварный рацион

ПДК - предельно допустимая концентрация

ПЭГ-4000 - полиэтиленгликоль

ТХУ - трихлоруксусная кислота

ФГБКМ - ферментативный гидролизат белка коровьего молока ФГПБ - ферментативный гидролизат пищевых белков ФММ - ферментативный гидролизат мяса мидий

ФСГТД - ферментативный гидролизат селенсодержащих пищевых дрожжей

ЩФ - щелочная фосфатаза

ЭМ - эссенциальные микроэлементы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение биодоступности и влияния органических форм селена и цинка на состояние слизистой оболочки тонкой кишки растущих крыс»

ВВЕДЕНИЕ

Важнейшим в теоретическом и практическом отношении является положение концепции оптимального (здорового) питания о необходимости адекватного снабжения организма макро- и микронутриентами, в том числе ЭМ [69]. Глобальная проблема недостаточной микронутриентной обеспеченности населения различных регионов определяет необходимость научного обоснования, разработки и комплексной медико-биологической оценки безопасности и эффективности использования в питании новых пищевых источников ЭМ, в первую очередь, получаемых с помощью инновационных биотехнологических подходов. С общебиологических позиций, учитывающих эволюционный фактор, очевидна целесообразность использования в питании человека органических форм микроэлементов [43]. Пищевые источники этих микроэлементов, жизненно необходимых организму человека, должны отвечать требованиям безопасного использования в питании и высокой эффективности для восполнения микроэлементной недостаточности. Это положение относится в частности к цинку и селену - ЭМ, обладающим выраженным антиоксидантным и иммуномодулирующим действием [14,18,120,156,195]. Селен используется в составе БАД, специализированных пищевых продуктах диетического (лечебного и профилактического) питания и продуктах для питания детей раннего возраста [165]. Сфера применения органических и неорганических форм цинка в оздоровительном питании еще шире: этот микроэлемент может быть использован при обогащении продуктов массового потребления [36,58]. Специалистами разработано и осуществлено биотехнологическое получение новых пищевых органических форм селена и цинка, проведена в эксперименте оценка их острой токсичности [10,30,45]. Однако, крайне недостаточно исследовано влияние этих новых пищевых источников селена и цинка на состояние барьера ЖКТ, обеспечивающего защиту внутренней среды организма от потенциально возможного избыточного проникновения чужеродных антигенов, токсинов микрофлоры, вирусов и

микроорганизмов [16,41,42]. Барьерная функция, как известно, реализуется за счет совокупного действия составляющих её компонентов: пищеварительно-транспортного конвейера ЖКТ (желудочно-кишечной моторики, секреции пищеварительных соков, полостного и пристеночного пищеварения), активности ассоциированной с кишечником лимфоидной ткани и, самым существенным образом, эпителиального слоя слизистых оболочек [50]. Повышенное поступление белковых макромолекул во внутреннюю среду организма свидетельствует о нарушенной целостности барьера ЖКТ, в первую очередь, эпителия тонкой кишки как зоны преимущественного всасывания нутриентов.

Исходя из вышеизложенного, целью диссертационной работы явилась экспериментальная оценка биодоступности органических форм селена и цинка и их влияния на состояние слизистой оболочки тонкой кишки лабораторных животных (крыс).

Научная новизна

Впервые установлено, что проницаемость барьера ЖКТ лабораторных животных (растущих крыс) относительно модельного антигена - овальбумина не нарушается (не возрастает) при десятикратном превышении в корме адекватного содержания селена в органической форме - ферментолизате селенсодержащих пищевых дрожжей.

С использованием морфологических методов исследования показано, что как адекватное, так и десятикратно повышенное поступление с рационом селена в органической форме (ферментолизат селенсодержащих пищевых дрожжей) препятствует развитию неблагоприятных изменений в слизистой оболочке тонкой кишки, отмечаемых у крыс, потреблявших селендефицитный рацион.

Показано, что обогащение общевиварного рациона крыс ферментолизатом селенсодержащих пищевых дрожжей (дополнительно 5 мкг

селена на крысу в сутки) не приводит к усилению тяжести реакции системной анафилаксии и степени сенсибилизации.

Впервые установлено, что потребление крысами цинка в форме комплекса с ферментолизатом мяса мидий снижает у этих животных проницаемость защитного барьера ЖКТ, характеризуемую всасыванием модельного антигена - овальбумина.

Практическая значимость работы

Установленная экспериментально в опытах in vivo высокая биодоступность и безопасность органических форм селена и цинка определяют перспективность их дальнейшей клинической апробации для использования в широком спектре продуктов оздоровительного действия, в том числе БАД к пище и специализированных пищевых продуктов, предназначенных для восполнения микроэлементной недостаточности. Экспериментально доказанное для ферментолизата селенсодержащих пищевых дрожжей отсутствие неблагоприятного воздействия на состояние защитного барьера ЖКТ, а также сенсибилизацию и тяжесть анафилактических проявлений у лабораторных животных является дополнительным обоснованием безопасности его использования в составе БАД к пище и специализированных пищевых продуктов. Предложена комплексная экспериментальная оценка эффективности и безопасности использования в питании органических форм пищевых источников селена, включающая не только характеристику биодоступности, восполнения микроэлементной недостаточности, но и влияния на состояние защитного барьера ЖКТ и на анафилактическую чувствительность, которая может быть использована для аналогичной комплексной оценки новых пищевых источников других эссенциальных микроэлементов.

Апробация работы

Основные положения и результаты работы были представлены и обсуждены на X Всероссийском Конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье», Москва, 1-3 декабря 2008 г., на III съезде общероссийского союза общественных объединений «Российское общество медицинской элементологии», Москва, 11-13 мая 2012 г.

Внедрение результатов в практику

Материалы данной диссертации использованы в специализированном курсе лекций «Биохимия эссенциальных микроэлементов» ФГБУ «НИИ питания» РАМН.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 4 статьи в рецензируемых научных журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки РФ, и 1 публикация в сборнике Материалов X Всероссийского Конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье», Москва, 1-3 декабря 2008 г.

Объём и структура диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов. Указатель литературы содержит 71 российский и 124 зарубежных источника. Объем работы составляет 121 страницу машинописного текста, содержит 5 рисунков, 2 фотографии, 1 схему и 17 таблиц.

Работа выполнена в соответствии с планом НИР ФГБУ «НИИ питания» РАМН по темам №069 «Экспериментально-клиническая оценка биодоступности новых источников органических соединений некоторых эссенциальных микроэлементов (цинк, селен, йод, медь, марганец)» и №080 «Разработка системы лабораторных тестов для выявления дифференциальной диагностики пищевой аллергии».

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Пенева, Вера Витальевна

5. ВЫВОДЫ

1. Всасывание в кровь и депонирование селена в печени у животных, потреблявших его органическую форму (ферментолизат селеносодержащих пищевых дрожжей), было достоверно выше (169,7±4,5 нг/мл сыворотки крови и 662,8±17,7 нг/г печени, соответственно), чем у животных, получавших такое же количество селена в форме неорганического соединения (150,1±5,3 нг/мл сыворотки крови и 561,6±13,7 нг/г печени, соответственно).

2. Десятикратное превышение оптимальной дозы селена в органической форме не оказывало неблагоприятного воздействия на барьерную функцию ЖКТ растущих крыс: отсутствовали достоверные различия всасывания биомаркера макромолекулярной проницаемости овальбумина у крыс, получавших в течение 28 суток корм с адекватным и десятикратно повышенным содержанием ферментолизата селеносодержащих пищевых дрожжей (18,0±5,3 нг/мл и 15,7±2,5 нг/мл, соответственно).

3. У крыс, получавших на протяжении 28 суток полусинтетический корм с десятикратно превышенным содержанием селена, морфометрические показатели, характеризующие состояние слизистой оболочки тонкой кишки (высота клеток эпителия на ворсинках, количество клеток на продольном срезе ворсинок), были увеличены по сравнению с таковыми у крыс, получавших в течение этого же времени селенодефицитный рацион.

4. Обогащение общевиварного рациона ферментолизатом селеносодержащих дрожжей не повышало у взрослых крыс степени сенсибилизации к модельному анафилактогену и тяжести проявлений у этих животных системной анафилаксии.

5. Потребление растущими крысами в течение 21 суток цинка в органической форме (комплекс цинк-ферментолизат белка мяса мидий) в составе полусинтетического рациона свидетельствовало о высокой биодоступности этого микроэлемента. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови и прирост массы тела относительно исходной у этих животных (2247±139 нм/с/л и 85,5±5,9%, соответственно) были значительно и достоверно выше, чем у животных, потреблявших цинкдефицитный корм (944±139 нм/с/л и 24,3±2,8%, соответственно).

6. У растущих крыс, получавших в течение 21 суток в составе полусинтетического рациона комплекс цинка с ферментолизатом мяса мидий, всасывание в кровь модельного антигена - овальбумина достоверно ниже (26,0±13,3 нг/мл), чем у животных, получавших в течение этого же времени полусинтетический цинкдефицитный рацион (43,2±11,0 нг/мл).

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Экспериментальная оценка возможного эффективного и одновременно безопасного использования в питании новых и в подавляющем большинстве получаемых биотехнологическим путем пищевых источников микронутриентов не может быть ограничена, на наш взгляд, только проведением традиционных токсикологических испытаний. Эффективная защита внутренней среды организма невозможна при нарушении барьерной функции ЖКТ, препятствующей проникновению антигенов энтеральной среды, токсинов микрофлоры, бактериальных и вирусных патогенов [16,41,42]. Ключевую роль при этом играет эпителиальный барьер слизистой оболочки тонкой кишки, однако проницаемость кишечного барьера может быть значительно увеличена при различных патологических состояниях. Эссенциальность, антиоксидантные и иммуномодулирующие свойства таких микроэлементов как цинк и селен дают веские основания предполагать, что недостаточная обеспеченность этими микроэлементами будет негативно сказываться на состоянии кишечного барьера. Однако, как известно, повышенное поступление цинка и особенно селена может быть токсичным. Нельзя также априори исключать возможных аллергизирующих эффектов органических форм этих «иммуномодуляторов». В нашей работе осуществлена попытка экспериментально оценить возможное влияние органической формы селена (водорастворимой фракции ФСПД) и цинка (комплекса цинка с ферментолизатом белка мяса мидии) на состояние «эпителиальной составляющей» кишечного барьера.

Результаты сравнительных исследований безопасности различных источников селена свидетельствуют, что соединения неорганического селена обладают значительно более низким порогом токсичности по сравнению с его органическими формами [10,45]. В частности показано, что доза, вызывающая гибель половины подопытных мышей (среднелетальная доза, иЭ50) в случае с селенитом натрия составила 3,2 мг/кг, а в случае с Ь-селенцистеином была равна 35,9 мг селена/кг массы тела [122]. Селенометионин и селеноцистеин наряду с метаболизацией до селеноводорода утилизируются по иному пути, включаясь в состав тканевых белков, что существенно повышает значение предельно допустимой концентрации селена и, соответственно, уменьшает риск неблагоприятного воздействия на организм в случае передозировки селена в органической форме по сравнению с его неорганическими соединениями [147]. Таким образом, использование неорганических соединений селена (селенитов и селенатов) представляется нам оправданным в лекарственных формах при наличии риска развития клинических проявлений дефицита этого микроэлемента и необходимости быстрого купирования состояния дефицита. По сравнению с неорганическими солями или окислами органические соединения селена обладают меньшим неблагоприятным побочным действием при возможных передозировках. В соответствии с данными Европейского комитета по безопасности пищевых продуктов (ЕР8А), пероральное введение крысам в течение 28 дней обогащенных селеном дрожжей и селенита натрия в дозе 1000 мкг на 1 кг массы тела приводит к значительному снижению массы тела животных и потере аппетита. При этом оба соединения индуцируют появление острого воспалительного процесса и гепатотоксичности, включая вакуолизацию и некроз гепатоцитов, повышение способности клеток к апоптозу. Тем не менее, снижение массы тела и проявление гепатотоксичности были менее выражены в группе животных, получавших обогащенные селеном дрожжи [167]. Результаты ряда других работ также указывают на перспективность использования органических источников селена в питании и их преимущества перед неорганическими солями данного эссенциального микроэлемента - большая ретенция, минимальная токсичность, эффективность всасывания сравнимая с эффективностью всасывания селената и превосходящая селенит [52,71,89,94].

На первом этапе нашего исследования было достоверно показано, что в случае содержания одинакового количества селена в корме для органической формы наблюдается увеличение его всасывания, содержания в печени (как удельного, так и на всю печень) и в сыворотке крови по сравнению с неорганической формой. Достоверным было и увеличение относительной массы печени и селезенки у животных, получавших селендефицитный корм или добавку селенита натрия, по сравнению с крысами, оптимально обеспеченными органической формой селена (0,22 мг/кг). При равном содержании селена в рационе печень и селезенка были достоверно увеличены у крыс, потреблявших селенит натрия по сравнению с животными, потреблявшими ФСПД. Сочетанное увеличение печени и селезенки наблюдается при многих заболеваниях и может также быть симптомом острого отравления селеном [6,56,145,189]. Проведённый нами эксперимент подтвердил имеющиеся данные о большей биодоступности и безопасности органической формы селена.

Оценка возможности безопасного использования в питании органических форм селена, представленных в нашем исследовании ферментолизатом селенсодержащих пекарских дрожжей, была задачей следующего этапа нашей работы. В качестве количественного показателя, характеризующего состояние защитного барьера препятствующего попаданию из полости ЖКТ во внутреннюю среду организма чужеродных антигенов, была выбрана величина всасывания в кровь модельного макромолекулярного зонда - ОВА. Серия экспериментальных исследований, направленных на выявление возможного влияния различных алиментарных факторов на проницаемость кишечного барьера лабораторных животных (крыс) для таких макромолекулярных зондов как ОВА и ПЭГ-4000 было проведена в девяностых годах прошлого века сотрудниками института питания РАМН [41]. Внутрижелудочное введение восстановленного глутатиона и селенсодержащей спирулины сенсибилизированным крысам в течение четырех суток до их разрешения ОВА достоверно снижало проницаемость кишечного барьера для ПЭГ-4000 [139]. Возможности использования для коррекции нарушений кишечной проницаемости для макромолекул селена - эссенциального микроэлемента, обладающего выраженным антиоксидантным и иммуномодулирующим действием, были подтверждены в работах [16,51,173]. Причем, использование в рационе неорганической соли (селенита натрия) приводило к аномально высокому всасыванию куриного ОВА, что является показателем нарушенной целостности барьера ЖКТ для белковых макромолекул.

Ввиду наличия тесной связи биохимического механизма действия селена пищи со статусом восстановленного глутатиона было проанализировано его влияние на макромолекулярную проницаемость кишки при пероральном приеме [176]. У крыс, получавших глутатион вместе с селенсодержащей спирулиной, отмечалось достоверное снижение проницаемости в сравнении с животными, получавшими только восстановленный глутатион.

Собственный эксперимент также продемонстрировал аномально высокую проницаемость барьера ЖКТ для куриного ОВА в группе животных, получавших в качестве пищевого источника селена его неорганическую соль. Использование органической формы селена в этой же дозировке не приводило к аномально высоким значениям всасывания куриного ОВА ни у одного из животных. Факт существенно большей безопасности в плане влияния на барьерную функцию ЖКТ при использовании в питании органической формы селена подтверждается результатами, полученными нами при оценке всасывания куриного ОВА у крыс, получавших заведомо завышенную дозу селена в органической форме. В условиях опыта десятикратное увеличение концентрации селена в рационе (при использовании органической формы селена) приводило к его депонированию печенью, не вызывая при этом нарушения проницаемости барьера ЖКТ для макромолекул ОВА.

Эффективность функционирования барьера ЖКТ, как нами уже отмечалось, во многом определяется состоянием эпителиального слоя слизистой оболочки тонкой кишки. В работе [146] представлены результаты количественного определения делящихся клеток в слизистой оболочке тощей кишки овец в различной степени обеспеченных органическим и неорганическим селеном. Общее количество делящихся клеток в слизистой оболочке тощей кишки было выше в селенобеспеченных группах животных (3.0 ррш Бе, 15.0 ррш Бе) по сравнению с контролем (0.1 ррш 8е). Концентрация ДНК в слизистой оболочке тощей кишки была выше в группе животных, получающих селен из селенобогащенной пшеницы (3.0 ррш 8е) по сравнению с животными, получающими селенит натрия (3.0 ррш 8е). Таким образом, по сравнению с потреблением безселеновой диеты, диета содержащая селен, как в органической, так и в неорганической формах, повышала количество клеток в слизистой оболочке тощей кишки благодаря увеличению пролиферации клеток крипт.

Согласно результатам нашего исследования, само по себе использование полусинтетического рациона вызывало негативные изменения морфологических параметров слизистой оболочки тонкой кишки по сравнению с общевиварным стандартным рационом. Как и следовало ожидать, наиболее неблагоприятно влиял на количественные показатели слизистой оболочки тонкой кишки селендефицитный полусинтетический рацион. Наблюдаемые тенденции к уменьшению высоты ворсинок и глубины крипт, высоты эпителиального слоя на ворсинках и в криптах, количества бокаловидных клеток, изменения в состоянии ядер в эпителиальном слое крипт - указывают на определенные нарушения в формировании эпителиального слоя с признаками атрофии некоторых структур. Доказательства влияния на эпителий тонкой кишки крыс обеспеченности селеном (в виде его органической формы - ФСПД) получены при сравнительном гистологическом исследовании с использованием морфометрических методов. Адекватное и десятикратное повышение содержания ФСПД в полусинтетическом корме существенно снижало неблагоприятные изменения в слизистой оболочке тонкой кишки, каковые имели место у животных, потреблявших селендефицитный полусинтетический рацион.

Перспективы использования органических форм селена в составе диетических продуктов лечебного и профилактического назначения, в том числе для детей первого года жизни, заставляют с особой тщательностью оценивать возможное проявление ими аллергизирующих свойств. В опытах in vivo на лабораторных животных некорректно оценивать собственную аллергенность пищевого продукта или его ингредиента применительно к человеку. Для характеристики возможного влияния ФСПД как потенциального аллергизирующего фактора нами была использована модель системной анафилаксии на крысах, позволяющая оценить, во-первых, устойчивость животного к анафилактическому шоку (моделирующему аллергическую реакцию) и, во-вторых, оценить иммуномодулирующее действие ФСПД относительно гуморального иммунного ответа на сенсибилизирующее воздействие, вызываемое введением модельного анафилактогена - ОВА. В ряде работ было высказано предположение о возможности нормализации кишечной проницаемости при анафилактическом шоке за счет приема восстановленного глутатиона и селенсодержащей спирулины. Так, [166] внутрижелудочное введение восстановленного глутатиона и селенсодержащей спирулины сенсибилизированным крысам в течение четырех суток до их разрешения ОВА достоверно снижало проницаемость кишечного барьера для ПЭГ-4000, что подтверждало антианафилактическое действие биодоступного селена в составе микроводоросли спирулины в комплексе с восстановленным глутатионом [42].

Интересно отметить, что в результате сенсибилизации и развития анафилактического шока у крыс имеют место значительные изменения в гомеостазе селена [17]. Наиболее значительным представляется факт многократного (более чем в 3 раза) возрастания экскреции селена с мочей в результате анафилактического шока. Можно предположить, что в условиях окислительного стресса, вызванного развитием анафилактической реакции, антиоксидантная система организма работает с большим напряжением, что выражается в значительном ускорении процессов катаболизма селенсодержащих белков и обуславливает необходимость регулирования гомеостаза селена в организме путём дополнительного потребления этого микроэлемента с пищей.

Результаты, полученные в нашем исследовании свидетельствуют о том, что введение в рацион крыс ФСПД во всяком случае, не приводит к усилению у них тяжести реакции системной анафилаксии и степени сенсибилизации. Результаты исследований [16] также показали, что несодержащий клеточных стенок ферментолизат в отличие от цельных обеспложенных селенсодержащих дрожжей не обладает аллергизирующим действием и оказывает нормализующее действие на нарушенную проницаемость кишечного барьера.

Имеющиеся в литературе данные свидетельствуют о высокой биодоступности органических форм цинка, положительном влиянии на прирост массы тела и цинковый статус растущих крыс. В проведенных ранее исследованиях специалистами института питания была показана эффективность использования в кормлении животных (крыс), исходно недостаточно обеспеченных цинком, нового пищевого источника органической формы цинка - комплекса этого микроэлемента с ферментативным гидролизатом белка коровьего молока (2п-ФГБКМ) [49]. Сравнительное исследование, представленное в работе [3] позволило установить, что прирост массы тела животных и содержание цинка в бедренной кости были достоверно выше у крыс, получавших органическую форму цинка (2п-ФГБКМ) по сравнению с аналогичными показателями для животных, получавших неорганическую форму этого микроэлемента (сульфат цинка).

Этим данным соответствуют результаты нашего исследования. Прирост массы животных, получавших дефицитный по цинку рацион, существенным образом отставал от прироста массы животных, находящихся на ОВР или полусинтетическом рационе с цинксодержащим ферментолизатом мяса мидий. Активность ЩФ сыворотки крови крыс, получавших цинкдефицитный корм (944±139 нм/с/л), была высоко достоверно ниже (р<0,001) соответствующего показателя для крыс, корм которых был обогащен органической формой цинка (2247±139 нм/с/л). Этот результат статистически высокодостоверен, свидетельствует о значительно более высоком цинковом статусе животных, получавших цинк в составе комплекса с ферментолизатом белка мидий и хорошо согласуется, в частности, с данными о резком снижении активности ЩФ у крыс, получавших дефицитные по цинку рационы, которое сопровождалось истощением тканевого пула этого микроэлемента, определяемого с помощью стабильных изотопов [31]. Это дает основания утверждать о более эффективной утилизации этой органической формы цинка по сравнению с неорганической.

Приоритетные данные были получены на этапе исследования возможного влияния на состояние защитного барьера ЖКТ пищевого биотехнологического источника цинка - его комплекса с ферментативным гидролизатом мяса мидий. Мясо мидий является весьма ценным пищевым сырьем в первую очередь вследствие высокого содержания в нем белка. Эффективность использования в оздоровительном питании мидийных кислотных гидролизатов получила как экспериментальное, так и клиническое подтверждение в ряде исследований, проводимых в нашей стране уже на протяжении более пятидесяти лет [55]. Тем не менее, недостаточно удовлетворительные органолептические показатели, а также резкое снижение пищевой и биологической ценности гидролизата вследствие полного или частичного разрушения некоторых незаменимых аминокислот, в первую очередь триптофана, в процессе жесткого кислотного гидролиза, проводимого при высокой температуре, определили актуальность разработки новых подходов получения гидролизатов мяса мидий. Метод ферментативного гидролиза мяса мидий, позволил получить пептидный продукт со значительно более высокой пищевой биологической ценностью и удовлетворительными органолептическим свойствами по сравнению с кислотными мидийными гидролизатами [33]. Ферментолизат мяса мидий был использован в нашей работе в качестве пептидной матрицы для получения органической формы цинка. Введение Zn-ФММ в рацион крыс линии Вистар статистически достоверно снижало всасывание ОВА у этих животных по сравнению с крысами, получавшими на протяжении такого же времени цинкдефицитный рацион. Таким образом, была показана перспективность использования Zn-ФММ в питании для возможной профилактики нарушений барьерной функции ЖКТ и ее диетической коррекции в условиях микроэлементной недостаточности.

Так же, как и для органических соединений селена, для комплексной оценки влияния органических, получаемых биотехнологическим путем новых пищевых форм цинка, представляется интересным исследование морфометрического состояния слизистой оболочки тонкой кишки. Так, согласно [143] in vitro такая органическая форма цинка как цинк-карнозин стимулировала миграцию и пролиферацию эпителиальных клеток в образцах толстого кишечника человека и крыс, уменьшала повреждения желудка и тонкой кишки, восстанавливая 50% укороченных ворсинок.

В работе [7] оценено влияние обеспеченности рациона цинком (с использованием органической и неорганической формы цинка) на состояние слизистой оболочки дистального отдела тонкой кишки крыс. Пищевым источником четырехнедельного кормления крыс первой группы служило неорганическое соединение цинка - его сульфат. Крысы второй группы получали в течение четырех недель цинкдефицитный корм (содержание цинка 1,3 мг/кг корма), а крысы третьей группы две недели получали цинкдефицитный корм, а последующие две недели корм, содержащий Zn-ФГБКМ. У животных, получавших в течение четырех недель цинкдефицитный полусинтетический корм, в структуре слизистой оболочки дистального отдела тонкой кишки обнаружены глубокие изменения по сравнению с крысами, содержавшимися в течение такого же времени на корме, достаточно обеспеченном неорганической формой цинка (13,3 мг/кг корма). У животных, получавших цинкдефицитиый корм в течение всего эксперимента, достоверно увеличена глубина крипт и достоверно уменьшена высота клеток эпителиального слоя на ворсинках. У 7 из 10 крыс этой группы в криптальной зоне, наряду с обычными, обнаруживались и узкие крипты, выстланные слоем более низких клеток эпителия. В собственной пластинке слизистой оболочки клетки были распределены неравномерно. Заметные различия имеют место в эпителиальной зоне вершин ворсинок и крипт. Так, для крыс, получавших цинкдефицитиый корм, отмечены гораздо большая частота отслойки эпителия от собственной пластины, образование микрополипозных выростов в виде складок эпителиального слоя, появление участков низких клеток с пикнозом ядер. Существенно снижалось число клеток крипт, входящих в митотическое деление.

Введение в полусинтетический корм добавки органического цинка в форме комплекса 2п-ФГБКМ крысам, получавших до этого в течение 2-х недель цинкдефицитиый корм, положительно влияло на состояние слизистой оболочки тонкой кишки. Глубина крипт восстанавливалась до значений, не отличающихся достоверно от обеспеченных сульфатом цинка животных первой группы, и достоверно отличающихся от животных, находившихся в течение всего эксперимента на цинкдефицитном рационе. У животных этой группы улучшалась также структура эпителиального слоя на вершинах ворсинок и крипт: клетки эпителия по высоте восстанавливались до уровня, который был определен у крыс, обеспеченных в течении четырех недель сульфатом цинка. У крыс, получавших восстанавливающий корм, как и у крыс цинкдефицитной группы, в слое эпителия вершин ворсинок имелись очаги десквамации клеток. Количество таких животных составляло 70% и 40% соответственно в группах, потреблявших цинкдефицитиый и восстанавливающий корм. При этом в группе животных, потреблявших цинкдефицитиый полусинтетический рацион наблюдалась более тяжелая картина, со случаями нарушения непрерывности эпителиального слоя в зонах десквамации. При оценке возможностей восстанавливающего» кормления для нормализации защитного кишечного барьера важно отметить, что у крыс его получавших, также как и у животных, нормально обеспеченных цинком в течение всех 28 дней, не было отмечено очагов нарушения непрерывности эпителиального пласта в тонкой кишке.

Состояние ядерного аппарата клеток, число клеток в криптах, вступающих в митоз, позволяет в определенной мере судить об интенсивности протекания репаративных процессов в слизистой оболочке тонкой кишки, что в значительной мере определяет её барьерную функцию в отношении антигенов энтеральной среды. У животных, получавших цинкдефицитный корм, в клетках эпителия выявлялись ядра с просветленной кариоплазмой, во многих из них четко выделялись компактные ядрышки, обнаруживались также ядра с интенсивно окрашенными крупными глыбками хроматина. Подобные нарушения в структуре ядер являются одним из признаков дистрофических изменений клеток и могут указывать на нарушения в нуклеиновом обмене клеток [57].

Таким образом, дополнительное введение цинка в форме комплекса Хп-ФГБКМ в полусинтетический корм, способствовало восстановлению глубины криптальных отделов, высоты эпителиального слоя в слизистой оболочке дистального отдела тонкой кишки крыс, получавших ранее цинкдефицитный корм, до показателей, характерных для крыс, потреблявших достаточно обеспеченный цинком корм.

Описанные литературные данные, а также полученные собственные результаты являются дополнительным подтверждением безопасного и эффективного использования в питании органических форм селена и цинка для восполнения недостаточной микроэлементной обеспеченности. В проведенном исследовании с использованием физиолого-биохимических, морфологических, а также методов экспериментальной аллергологии охарактеризовано влияние пищевых источников органической формы селена (ФСПД) и цинка (2п-ФММ) на барьерную функцию ЖКТ лабораторных животных (крыс). Очевидна актуальность использования биотехнологического подхода для получения новых пищевых источников указанных ЭМ в органической форме.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Пенева, Вера Витальевна, 2013 год

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авцын А.П., Жаворонков A.A., Риш М.А., Строчкова Л.С. Микроэлементозы человека. М.: Медицина, 1991.- 496 с.

2. Багрянцева О.В., Мазо В.К., Хотимченко С.А., Шатров Г.Н. Использование селена при обогащении пищевых продуктов// Вопросы питания.- 2012.-Т.81.- №1.- с.4-12.

3. Баяржаргал М. Получение и экспериментальная оценка новых пищевых источников органических форм цинка. Диссер. кандидата биологических наук. М., 2007.- 109 с.

4. Безбородкина H.H., Оковитый C.B., Кудрявцева М.В., Кирик О.В., Зарубина И.В., Кудрявцев Б.Н. Морфометрия митохондриального аппарата гепатоцитов нормальной и цирротически измененной печени крыс// Цитология.- 2008.-Т.50.- №3.

5. Борисова М.В. Обеспеченность селеном больных раком желудка и возможности её диагностической коррекции, Автореф.дисс.канд.мед.наук, Рязань, 2005.- 24 с.

6. Вапиров В.В., Шубина М.Э., Вапирова Н.В., Беличенко В.И., Шубин И.В.Селен. Некоторые аспекты химии, экологии и участия в развитии патологии (Обзор).- Петрозаводск: ПетрГУ, 2000. - 68 с.

7. Гаджиева З.М., Бажаргал М., Зорин С.Н., Гмошинский И.В., Мазо В.К. Морфологическая характеристика состояния слизистой оболочки кишки крыс в условиях дефицита цинка и восстановительного питания// Микроэлементы в медицине.- 2007.- Т.8.- вып.4.- с.13-18.

8. Гмошинский И.В. Проницаемость кишечного барьера для макромолекул при некоторых патологических состояниях и воздействии различных алиментарных факторов (экспериментально-клиническое исследование). Автореф.дисс.доктора биологических наук.- М.- 1997.- 36 с.

9. Гмошинский И.В. Проницаемость кишечного барьера для макромолекул при некоторых патологических состояниях и воздействии различных

алиментарных факторов (экспериментально-клиническое исследование). Автореф.дисс.доктора биологических наук.-М.-1997.-36 с.

10. Гмошинский И.В., Зорин С.Н., Баяржаргал М., Сафронова А.М., Мартынова Е.А., Шилина Н.М., Гмошинская М.В., Мазо В.К. Получение, оценка качества и безопасности новых пищевых источников эссенциальных микроэлементов// Микроэлементы в медицине.- 2007.- Т.8.- №1.- с. 21-23.

11. Гмошинский И.В., Зорин С.Н., Мамонова Л.Г., Данилина JI.JI., Мазо В.К.. Сравнительная оценка антигенных свойств автолизата селенсодержащих пекарских дрожжей и его водорастворимой фракции// Вопросы питания.-2007.-Т.76.- № 2. - с. 16-20.

12. Гмошинский И.В., Кравченко Л.В., Гладких O.JL, Мазо В.К. Исследование биодоступности in vivo селена в составе биомассы селеносодержащей спирулины и селеносодержащего фикоцианина// Материалы XIV Международной конференции и дискуссионного научного клуба «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» Ялта-Гурзуф, 31 мая- 9 июня 2006 г. -с. 134-135.

13. Гмошинский И.В., Кржечковская В.В., Пятницкий H.H. Определение антител класса IgG у экспериментальных животных, сенсибилизированных перорально пищевым белком (к характеристике модели пищевой анафилаксии)// Вопросы питания. - 1994. - Т. 1-2. - С. 3-33.

14. Гмошинский И.В., Мазо В.К., Тутельян В. А., Хотимченко С. А. Микроэлемент селен: роль в процессах жизнедеятельности// Экология моря.-2000.-№54.-с.5-17.

15. Голубкина H.A. Флуориметрический метод определения селена// Журнал аналитической химии.- 1995.-Т.50.-С.492-497.

16. Голубкина H.A., Гмошинский И.В., Зорин С.Н.,Данилина JI.JI., Чистяков A.B., Мазо В.К. Влияние биологически активной добавки автолизата обогащенных селеном пекарских дрожжей на состояние кишечного барьера у крыс при анафилаксии// Вопросы питания.-1998.- №3.- с. 18-22.

17. Голубкина H.A., Мазо В.К., Гмошинский И.В., Зорин С.Н., Тамбиев А.Х., Кирикова H.H. Гомеостаз селена при экспериментальной анафилаксии у крыс на фоне приёма восстановленного глутатиона и селенобогащенной спирулины// Вопросы медицинской химии.- 2000.- 46(1).-с.22-27.

18. Громова O.A., Кудрин A.B. Нейрохимия макро- и микроэлементов. Новые подходы к фармакотерапии. М.: Алев-В, 2001.-300 с.

19. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени// Киев.: «Здоров'я», 1989.- 168 с.

20. Губский Ю.И. Регуляция перекисного окисления липидов в биологических мембранах// Биохимия животных и человека.- 1978.- Вып.2.-с.72-84.

21. Егорова Е.А. Получение новых пищевых источников селена// Материалы VIII Всероссийского конгресса "Оптимальное питание- здоровье нации", М., 26-28 октября 2005 г.- с.90

22. Егорова Е.А., Гмошинский И.В., Зорин С.Н., Мазо В.К. Изучение всасывания и депонирования селена в составе биомассы селеносодержащих лактобацилл и селенита натрия у лабораторных животных// Вопросы детской диетологии.-2006.-Т.4, № 2.- С. 14-16

23. Егорова Е.А., Гмошинский И.В., Зорин С.Н., Мазо В.К. Изучение иммуномоделирующих свойств селенсодержащего фикоцианина// Вопросы питания.- 2006.- №2.- с. 19-21.

24. Егорова Е.А., Гмошинский И.В., Зорин С.Н., Мазо В.К.Изучение биодоступности различных пищевых форм микроэлемента селена в эксперименте// Вопросы питания.-2006.- №3.-с.45-49

25. Ермаков В.В. Ковальский В.В. Биологическое значение селена. М., 1974.

26. Жаворонков A.A., Михалева JIM., Авцын А.П. Микроэлементозы. Новый класс болезней человека, животных и растений. Проблемы биогеохимии и геохимической экологии.- М.-«Наука», 1999.- с. 183-199.

27. Журавлев А.И. Биоантиокислители в животном организме// Тр. МОИП. Биоантиокислители. - М.: Наука, 1975. -Т.52.- с.15-29.

28. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. «Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты», М.: Наука— Интерпериодика 2001.- с.343.

29. Золотов П.А., Тутельян В.А., Княжев В.А. Способ получения хлебопекарных дрожжей. Патент РФ №2103352, 1998.

30. Зорин С.Н., Баяржаргал М. Получение ферментативных гидролизатов пищевых белков с использованием некоторых коммерческих ферментных препаратов и различных схем проведения гидролиза// Биомедицинская химия.-2009.-T.55.-c. 173-180.

31. Зорин С.Н., Баяржаргал М., Гмошинский ИВ, Мазо В.К. Комплексная оценка органических форм эссенциальных микроэлементов цинка, меди, марганца и хрома в опытах in vitro и in vivo// Вопросы питания.- 2007.-Т.76.-№5.- с.74-79

32. Зорин С.Н., И.В.Гмошинский, Е.А.Бурдза, В.К.Мазо. Новые пищевые источники эссенциальных микроэлементов. Сообщение 7. Получение автолизатов селенсодержащих пищевых дрожжей и их физико-химическая характеристика// Вопросы детской диетологии.-2006.- Т.4.- № 6.- с. 18-21.

33. Зорин С.Н., Матяш А.И., Нгуен Хай Иен, Новикова М.В., Мазо В.К. Одностадийный ферментативный гидролиз мяса мидий// Вопросы детской диетологии.-2008.-Т.6.-№3.-с.36-38.

34. Ивахненко В.И., Мальцев Г.Ю., Васильев A.B., Гмошинский И.В. Активность антиоксидантных ферментов при недостаточном содержании в рационе белка и избытке Cu, Zn, Мп и Se// Вопросы питания.- 2007.- Т.76.- №5.-с.11-16.

35. Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии.- М.: Медицина, 1977.240 с.

36. Коденцова В.М., Вржесинская O.A. К обоснованию уровня обогащения витаминами и минеральными веществами пищевых продуктов массового потребления// Вопросы питания.- 2011.- № 5.- с.64.

37. Круглик В.И. Теоретическое обоснование и практическая реализация технологий гидролизатов молочных белков и специализированных продуктов с их использованием: Автореф. дис.докт. техн. наук. - М., 2008.- 42 с.

38. Логинов Г.П. Влияние хелатов металлов с аминокислотами и гидролизатами белков на продуктивные функции и обменные процессы организма животных. Автореф.дисс.д-ра биол.наук.-Казань.-2005.-40 с.

39. Мазо В.К. Глутатион как компонент антиоксидантной системы желудочно-кишечного тракта// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 1998.- Т.8.- №1.- с. 47-53.

40. Мазо В.К., Гмошинский И.В., Егорова Е.А., Ширина Л.И. Новые пищевые источники эссенциальных микроэлементов// Клиническая диетология. - 2004. - Т.1. - №3. - с. 3-14.

41. Мазо В.К., Гмошинский И.В., Соколова А.Г., Зорин С.Н., Данилина Л.Л., Литвинова A.B., Радченко С.Н. Влияние биологически активных добавок к пище, содержащих автолизат пекарских дрожжей и спирулину, на проницаемость кишечника в эксперименте// Вопросы питания.- 1999.- №1.-с.17-19.

42. Мазо В.К., Гмошинский И.В., Тамбиев А.Х., Кирикова H.H., Голубкина H.A. Влияние биологически активной добавки к пище, содержащий биодоступный селен, на протекание реакции системной анафилаксии у крыс// Биотехнология.- 1997.- №9-10.- с.45-48.

43. Мазо В.К., Гмошинский И.В., Ширина Л.И. Новые пищевые источники эссенциальных микроэлементов-антиоксидантов. М.: Миклош, 2009.- 208 с.

44. Мазо В.К., Егорова Е.А., Гмошинский И.В., Мартынова Е.А.// Третий Московский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития». Материалы конгресса.- М.- 2005.- 4.2.-е. 112.

45. Мазо В.К., Зорин С.Н., Баяржаргал М., Гмошинский И.В., Бурдза Е.А. Новые пищевые источники эссенциальных микроэлементов. Сообщение 6. Получение и физико-химическая характеристика новых пищевых источников цинка, меди, марганца, хрома и селена// Вопросы детской диетологии.- 2005.-Т.З, №5.-с. 19-21.

46. Мазо В.К., Зорин С.Н., Гмошинский И.В. Новые пищевые источники эссенциальных микроэлементов. Сообщение 3: Влияние комплексов эссенциальных микроэлементов с ферментативными гидролизатами сывороточных белков коровьего молока на степень сенсибилизации и протекание реакции анафилаксии у лабораторных животных// Вопросы детской диетологии. - 2004. - Т.2. - № 4 - с. 12-14.

47. Мазо В.К., Зорин С.Н., Гмошинский И.В., Зилова И.С., Шатров Г.Н. Новые источники эссенциальных микроэлементов. Сообщение 2: Комплексы меди, хрома и марганца с ферментативными гидролизатами сывороточных белков коровьего молока// Вопросы детской диетологии.-2004.-Т.2.-№3.-с.9-11.

48. Мазо В.К., Зорин С.Н., Гмошинский И.В., Зилова И.С., Шатров Г.Н. Новые пищевые источники эссенциальных микроэлементов. Комплекс цинка с ферментативным гидролизатом сывороточных белков коровьего молока// Вопросы детской диетологии.- 2003.- Т.1.- №6.- с.6-9.

49. Мазо В.К., Зорин С.Н., Гмошинский И.В. и др. Новые пищевые источники эссенциальных микроэлементов. Сообщение 2: Комплексы меди, хрома и марганца с ферментативными гидролизатами сывороточных белков коровьего молока// Вопросы детской диетологии.-2004.- №2.- С. 9-11.

50. Мазо В.К., Морозов И.А., Ширина Л.И. Всасывание белковых макромолекул в желудочно-кишечном тракте взрослых млекопитающих// Успехи физиологических наук.- 1989.- Т.20.- №3.- с.65-85.

51. Мазо В.К., Соколова А.Г., Гмошинский И.В., Зорин С.Н., Данилина Л.Л., Литвинова A.B., Радченко С.Н. Влияние биологически активных добавок к пище, содержащих автолизат пекарских дрожжей и спирулину, на

проницаемость кишечника в эксперименте// Вопросы питания.-1999.-№ 1.-е. 1719.

52. Мальцев Г.Ю., Тышко Н.В. Методы определения содержания глутатиона и активности глутатион пероксидазы в эритроцитах// Гигиена и санитария.-2002.- №2.-с.69-71.

53. Морозов И.А., Хвыля С.И., Лысиков Ю.А. Электронно-микроскопическое изучение проницаемости энтероцитов тонкой кишки для коллоидного лантана в опытах in vitro и in vivo// Физиол.журн.им.И.М.Сеченова.-1982.-Т.68.- №9.-с.1261-1268.

54. Мурашев А.Н., Коршунов В.А., Хохлова О.Н. и др. Количественная характеристика модели системной анафилаксии у крыс линии Спрейт-Доули// Росс.физиол.журн.им.И.М.Сеченова.- 2000.-Т.86.- №2.-с.190-195.

55. Нгуен Хай Иен, Новикова М.В., Зорин С.Н. Молекулярно-массовое распределение фракций ферментативных гидролизатов из дрейссены и мидий// РЫБПРОМ, 2009.- №1.- с.43-46.

56. Ноздрачев А.Д., Поляков Е.Л. Анатомия крысы.- СПб.- 2000.

57. О роли антимикробных пептидов в механизме врожденного иммунитета кишечника человека// Клинические перспективы гастроэнтерологии и гепатологии.-М., 2004.- №3.- с.2-9.

58. Оттавей П.Б. Обогащение пищевых продуктов и биологичеечки активные добавки. Профессия: Санкт-Петербург, 2010.-310 с.

59. Парфенов А.И., Екисенина Н.И., Мазо В.К., Гмошинский И.В., Сафонова С.А. Барьерная функция желудочно-кишечного тракта// Терапевтический архив. -2000.- Т.72.-№2.- с. 64-66.

60. Попова В.В. Влияние селена и цинка на рост Spirulina platensis и оптимизация внутриклеточного накопления этих микроэлементов. Автореф.дисс.канд.биол.наук.-М.-2004.-с. 18.

61. Попова В.В., Ковшова Ю.И., Цоглин Л.Н., Пронина H.A.// Биотехнология народному хозяйству: Тез.Докл.I Межд.симп.-М.-2000.-с.41.

62. Решетник Л.А., Парфенова Е.О. Селен и здоровье человека// Российский педиатрический журнал.- 2000.- №2.- с.41-43.

63. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. Под ред. И.М.Скурихина и В.А.Тутельяна. - М.: Брандес-медицина, 1998.-с.183-185.

64. Слонская Т.К. Комбинированное действие неорганических соединений -моделей лекарственных средств на эукариотическую клетку. Автореф. дисс. канд.фарм.наук. М.-1996.-С.57-80.

65. Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты. - М.: Аграрная наука. - 2000. -295 с.

66. Тутельян В.А. и др. Селен в организме человека.- М.: Изд-во РАМН, 2002.- 224 с.

67. Тутельян В.А., Мазо В.К., Ширина Л.И. Значение селена в полноценном питании человека// Патология беременности.- 2002.-Т.4.-№2.

68. Тутельян В.А., Спиричев В.Б., Суханов Б.П., Кудашева В.Л. Микронутриенты в питании здорового и больного человека. - М.: Колос, 2002.424 с.

69. Тутельян В.А., Суханов Б.П., Васильев A.B., Керимова М.Г., Спиричев В.Б., Шатнюк Л.Н. Реализация концепции государственной политики здорового питания населения России на региональном уровне: формирование региональной политики и региональных программ. Методические аспекты разработки и реализации программ. Часть. 2. Особенности региональных программ по улучшению макро- и микронутриентной обеспеченности населения// Вопросы питания - 2005 - Т.74.- №2 - с.3-6.

70. Уголев A.M., Иезуитова H.H., Тимофеева Н.М. Энзиматический барьер тонкой кишки// Физиол.журнал им.И.М.Сеченова.-1992.-Т.78.- №8.-с.1-20.

71. Шилина Н.М., Коновалова Л.С., Котеров А.Н., Мурашко Л.Е., Иванова О.Л., Конь И.Я. Динамика уровня малонового диальдегида, трансферрина и антиоксидантной активности сыворотки крови у женщин с

нормальной беременностью, осложненной токсикозом: влияние эйконола// Вопросы медицинской химии.-1999.-T.45.-c. 398-406.

72. Abdel-Monem М.М., Anderson M.D.Copper complexes of alfa-amino acids that contain terminal amino groups, and their use as nutritional supplements. 1990.-US Patent № 4948594.

73. Alexander J. Selenium// Novartis Found Symp. 2007;282:143-9; discussion 149-53,212-218.

74. Allen C.M., Hockin L.J., Paine A.J. The control of glutathione and cytochrome P-450 concentrations of primary cultures of rat hepatocytes// Biochem. Pharmacol.-1981.- Vol.30.- N19.- P.2739-2742.

75. Amasheh M, Andres S, Amasheh S, Fromm M, Schulzke JD. Barrier effects of nutritional factors// Ann N Y Acad Sci. 2009; 1165.- P.267-273.

76. Anderson M.D., Andel-Monem M.M. Amino acid metal complexes using hydrolysed protein as the amino acid source and methods re same. 1997. -U.S. Pat. No 5,698,724, Appl. No 640322.

77. Arthur J.R., Nicol F., Gill B.A., Beech S.G., Becket G.G. Selenium, type I.iodothyrine5'-deiodinase activity and thyroid hormone metabolism in the rat. Trace elements in Man and animals - TEMA-8.Eds M.Anke, D.Meissner. C.F.Mills.Dresden, 1993.-P.613-618.

78. Arthur JR, McKenzie R & Beckett GJ. Selenium in the immune system. J Nutr.-2003.- 133, 1457S-1459S.

79. Ashmead H. et al., 1989. U.S.Patent 4 863898.

80. Badmaev V., Majeed M.,Passwater R.A. Selenium: a quest for better understanding// Altern.Ther. Health Med.-1996.-Vol.2.- N4.-PP.59-62, 65-67.

81. Baker R.D., Baker S.S., LaRosa K.,e.a. Selenium regulation of glutathione peroxidase in human hepatoma cell line НерЗВ// Arch. Biochem.Biophys.-1993.-Vol.304.- N1.-P.53-57.

82. Belo I., Pinheiro R., Mota M. Fed-batch cultivation of Saccharomyces cerevisiae in a hyperbaric bioreactor// Biotechnol. Prog. - 2003.- Vol.19. - №2. - P. 665-671.

83. Bitiren M, Karakilcik AZ, Zerin M, Ozardali I, Selek S, Nazligiil Y, Ozgonul A, Musa D, Uzunkoy A. Protective effects of selenium and vitamin E combination on experimental colitis in blood plasma and colon of rats// Biol Trace Elem Res.-2010.-136(1).- P.8.

84. Bjornstedt M., Kumar S., Bjorkhem L., e.a. Selenium and the thioredoxin and glutaredoxin systems// Biomed.Environ.Sci.-1997.-Vol. 10.- N2-3.-P.271-279.

85. Blanchard R.K., Moore J.B., Green C.L. Cousins R.J. Modulation of intestinal gene expression by dietary zinc status: effectiveness of cDNA arrays for expression profiling of a single nutrient deficiency// Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-2001.-Vol.98.-p.13507-13513.

86. Boda M, Nemeth I. Selenium levels in erythrocytes of children with celiac disease// Orv.Hetil.-1989.-Vol. 130, N39.-P.2087-2090.

87. Brigelius-Flohe R., Friedrichs B., Maurer S., Streicher R.Determinants of PHGPx expression in a cultured endothelial cell line// Biomed. Environ. Sci..- 1997.-Vol.10, N2-3.-P.163-167.

88. Brigelius-Flohe R., Lotzer K., Maurer S.,e.a. Utilization of selenium from different chemical entities for selenoprotein biosynthesis by mammalian cell lines// Biofactors.-V. 1995.-Vol.5.- N3.-P. 125-131.

89. Bugel S.H., Sandstrom B., Larsen E.H. Absorption and retention of selenium from shrimps in man// J. Trace Elem. Med. Biol.- 2001.-Vol. 14.- N 4.- P. 198-204.

90. Burk RF, Hill KE, Motley AK. Selenoprotein metabolism and function: evidence for more than one function for selenoprotein P// J Nutr.- 2003.- p.133.

91. Calomme M. et al. Seleno-Lactobacillus an organic selenium source// Biological Trace Element Research.- 1995.- vol.47.- p. 379-383.

92. Cario E, Jung S, Harder JD, et al. Effects of exogenous zinc supplementation on intestinal epithelial repair in vitro// European Journal of Clinical Investigation.-2000;30(5).- P.419^128.

93. Casanova M., Hesk H.d'A. Further stadies of the metabolic incorporation and covalent binding of inhaled [3H] and [14C] formaldegide in fischer - 344 rats effects of glutation// Toxicol. Appl. Pharmacol. - 1987.-Vol. 89.- №1. -p.105-121.

94. Cases J, Wysocka IA, Caporiccio B, Jouy N, Besançon P, Szpunar J, Rouanet JM. Assessment of selenium bioavailability from high-selenium spirulina subfractions in selenium-deficient rats// J Agric Food Chem.- 2002.-№50(13).-p.3867-3873.

95. Chu F.F., Esworthy R.S., Doroshow J.H. Role of Se-dependent glutathione peroxidases in gastrointestinal inflammation and cancer// Free Radie. Biol. Med. -2004.-Vol.36.- N12.-p.l481-1495.

96. Cogne G., Lehmann B., Dussap C.G., Gros J.B. Uptake of macrominerals and trace elements by the cyanobacterium Spirulina platensis (Arthrospira platensis PCC 8005) under photoautotrophic conditions: culture medium optimization// Biotechnol.Bioeng. 2003. Vol.81.- N5.- p.588-593.

97. Coleman JE. Review. Zinc proteins: enzymes, storage proteins, transcription factors, and replication proteins// Annu Rev Biochem. 1992.-61. p.897-946.

98. Costa J.A., Colla L.M., Duarte F.P. Spirulina platensis growth in open raceway ponds using fresh water supplemented with xarbon, nitrogen and metal ions// Z.Naturforsch, 2003.- Vol.58.- N1-2.- p.76-80.

99. Costa J.A.V., Colla L.M., Duarte F.F.P. Improving Spirulina platensis biomass yield using a feed-batch process// Bioresour.Technol., 2004.Vol.92.- N3.- p.237-241.

100. Cousins RJ, Leinart AS. Tissue-specific regulation of zinc metabolism and metallothionein genes by interleukin 1// The FASEB Journal. 1988.-2(13).-p.2884-2890.

101. Daniel R Clayburgh, Le Shen, Jerrold R Turner. A porous defense: the leaky epithelial barrier in intestinal disease// Laboratory Investigation.- 2004.- Vol.84.-p.282-291.

102. Davis S.R., Cousins R.J. Metallothionein expression in animals: a physiological perspective on function// J.Nutr.-2000.-Vol.l30, №5.-p. 1085-1088.

103. de Amorim CS, Collares EF, Rossi MA, Zucoloto S, de Souza NM. Morphological study of the small intestine in rats with experimental zinc deficiency// Arq Gastroenterol. 1984.- 20(4).-p.l70-174.

104. de Souza AP, Sieberg R, Li H, Cahill HR, Zhao D, Araujo-Jorge TC, Tanowitz HB, Jelicks LA. The role of selenium in intestinal motility and morphology in a murine model of Typanosoma cruzi infection// Parasitol Res.-2010.-106.-p. 12931298.

105. DeWitt RC, Kudsk KA. The gut's role in metabolism, mucosal barrier function, and gut immunology// Infectious Disease Clinics of North America.- 1999- Vol. 13, Issue 2.

106. Dietary Reference intakes for Vitamin A, Vitamin K, Arsenic, Boron, Chromium, Copper, Iodine, Iron, Manganese, Molibdenum, Nikel, Silicon, Vanadium and Zinc. Food and Nutrition Board (FNB), Institute of Medicine (IOM). -The National Academies Press. - Washington Dc. - 2002. - 773 p.

107. Dietary Reference intakes: Applications Dietary Assesment. Institute of Medicine (IOM). - The National Academies Press. - Washington Dc. - 2001. -289p.

108. Dietary Reference Values for Food Energy and Nutrient for the United Kingdom. Report of the Panel and Dietary Reference Values of the Committee on Medical Aspects of Food Policy. HMSO, London, 1991.

109. Dubois F., Belleville F. Selenium: physiologic role and value in human pathology// Pathol.Biol. Paris.-1988.- Vol.36, N 8.-p.l017-1025.

110. Elmes ME, Jones JG. Ultrastructural changes in the small intestine of zinc deficient rats// J Pathol. 1980.-130(l).-p.37-43.

111. Elmes ME, Jones JG. Ultrastructural studies on Paneth cell apoptosis in zinc deficient rats// Cell Tissue Res. 1980.- 208(1).- p.57-63.

112. Ferencik M & Ebringer L. Modulatory effects of selenium and zinc on the immune system// Folia Microbiol.- 2003.- 48.- p.417-426.

113. Finamore A, Massimi M, Conti Devirgiliis L, Mengheri E. Zinc deficiency induces membrane barrier damage and increases neutrophil transmigration in Caco-2 cells// J Nutr. 2008.-138(9).- P.1664-1670.

114. Foster L.H. , Sumar S. Selenium in health and disease: a review// Crit.Rev. Food. Sci.Nutr.-1997.- Vol.37.- N3.- p.218-228.

115. Fraker P.J., King L.E. Reprogramming of the immune system during zinc deficiency// Ann Rev Nutr.- 2004.- 24.- p.277-298.

116. Frenhani P.B., Burini R.C. Mechanism of action and control in the digestion of proteins and peptides in humans// Arq.Gastroenterol.- 1999.-Vol.36, №3.-p.l39-147.

117. Frenhani P.B., Burini R.C. Mechanisms of absorption of amino acids and oligopeptides. Control and implications in human diet therapy// Arq.Gastroenterol.-1999.-Vol.36, №4.-p.227-237.

118. Giorgos Bamias, MD; Mark R. Nyce, MD; Sarah A. De La Rue, PhD; and Fabio Cominelli, MD, PhD New Concepts in the Pathophysiology of Inflammatory Bowel Disease// Annals of Internal Medicine.- 2005.- Vol. 143.- №12.- p. 895-904.

119. Groneberg D.A., Doring F., Eynott P.R., et.al. Intestinal peptide transport: ex vivo uptake studies and localization of peptide carrier PEPT1// Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.-2001.- Vol.281, №3.-p.G697-G704.

120. Hambidge M. Human zinc deficiency// J.Nutr.-2000.-Vol.l30.-p.l344S-1349S

121. Hansen M., Sandstrom B., Lonnerdal B. The effect of casein phosphopeptides on zinc and calcium absorption from high phytate infant diets assessed in rat pups and Caco-2 cells// Pediatr. Res. - 1996. - Vol. 40. - N4. - p.547-552.

122. Hasegawa T, Mihara M, Nakamuro K, Sayato Y. Distribution and chemical form of selenium in mice after administration of selenocystine// Biol Pharm Bull.-1994.-17(9).-p.1215-1219.

123. Hegarty J.E., Fairclough P.D., Moriarty K.J., et.al. Effects of concentration on in vivo absorption of a peptide containing protein hydrolysate// Gut.- 1982.- Vol.23, №4.-p.304-309.

124. Hill K.E., Burk R.F., Lane J.M. Effect of selenium depletion and repletion on plasma glutathione and on glutathione dependent enzymes in the rat// J.Nutr.- 1987.-Vol.117.- N1.- p.99-104.

125. Hill K.E., Chittum H.S., Lyons P.R.,e.a. Effect of selenium on selenoprotein P expression in cultured liver cells// Biochim.Biophys.Acta.-1996.-Vol.1313.-Nl.-p.29-34.

126. Hoekstra W. G. Biochemical Function of selenium and its relation to vitamin E// Fed. Proc.-1975.- №34.- p. 2083-2089.

127. Hollander D, Vadheim CM, Brettholz E, Petersen GM, Delahunty T, Rotter JI. Increased intestinal permeability in patients with Crohn's disease and their relatives: a possible etiologic factor// Annals of Internal Medicine.- 1986.-105(6).- p.883-885.

128. Hossain Z, Hirata T. Molecular mechanism of intestinal permeability: interaction at tight junctions// Mol Biosyst.- 2008.- №4(12).-p.l 181-1185.

129. Howarth GS, Francis GL, Cool JC, Xu X, Byard RW, Read LC. Milk growth factors enriched from cheese whey ameliorate intestinal damage by methotrexate when administered orally to rats// J Nutr 1996.-126.- p.2519-2530.

130. lbs K.H., Rink L. Zinc-altered immune function// J Nutr 2003.-133.-p.l452S-1456S.

131. Jaattela M, Mouritzen H, Elling F, Bastholm L. A20 zinc finger protein inhibits TNF and IL-1 signaling// The Journal of Immunology.- 1996.-156(3).- p. 1166-1173.

132. Keiner M.J., Montoya M.A. Structural organization of the human selenium-dependent phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase gene (GPX4): chromosomal localization to 19pl3.3// Biochem. Biophys.Res. Commun.-1998.-Vol.249.- N1.- p.53-55.

133. Keohane P.P., Grimble G.K., Brown B., et al. Influence of protein composition and hydrolysis method on intestinal absorption of protein in man// Gut.- 1985.-Vol.26.- №9.- p.907-913.

134. Kim CH, Kim JH, Lee J, Ahn YS. Zinc-induced NF-kB inhibition can be modulated by changes in the intracellular metallothionein level// Toxicology and Applied Pharmacology. 2003.-190(2).- p. 189-196.

135. Kimura H, Arai S. Oligopeptide mixtures produced from soy protein by enzymatic modification and their nutritional qualities evaluated by feeding tests with normal and malnourished rats// J.Nutr.Sci.Vitaminol.- 1988.- Vol.34.- p.375-386.

136. Klotz LO, Kroencke KD, Buchczyk DP & Sies H. Role of copper, zinc, selenium, and telluriumin the cellular defense against oxidative and nitrosative stress// J Nutr.- 2003.- 133,- 1448S-1451S.

137. Knights R.J. Processing and evaluation of the antigenicity of protein hydrolysates. In: Nutrition for special needs in infancy. Ed. by Lifshitz F. - NY etc.: Marcel Dekker, 1985. - p. 105-115.

138. Lahl W.J., Braun S.D. Enzymatic production of protein hydrolysates for food uses// Food Technol. - 1994. - №10. - p.77-85.

139. Laurent Picot, Rozenn Ravallec, Martine Fouchereau-Peron, et olJ Impact of ultrafiltration and nanofiltration of an industrial fish protein hydrolysate on its bioactive properties// Journal of the Science of Food and Agriculture.- 2010.- Vol. 90.- Issue 11.-p. 1819-1826.

140. Lei X.G., Dann H.M., Ross D.A., e.a. Dietary Selenium Supplementation Is Required to Support Full Expression of Three Selenium-Dependent// J.Nutr.- 1998.-Vol.128, N1.- p.130-135.

141. Linda H. Chen/ Effect of Vitamin E and Selenium on Tissue Antioxidant Status of Rats// J. Nutr.- 1973.-103 (4).- p.503-508.

142. Maggini S, Wintergerst ES, Beveridge S, Hornig DH. Selected vitamins and trace elements support immune function by strengthening epithelial barriers and cellular and humoral immune responses// Br J Nutr.- 2007 .-98 Suppl 1.-S29-35.

143. Mahmood A, FitzGerald AJ, Marchbank T, Ntatsaki E, Murray D, Ghosh S, Playford RJ. Zinc carnosine, a health food supplement that stabilises small bowel integrity and stimulates gut repair processes// Gut.- 2007.-56(2).-p.168-175.

144. McKenzie RC, Rafferty TS, Beckett GJ. Selenium: an essential element for immune function// Immunol Today. 1998.-19(8).- p.342-345.

145. Moody D.E, Reddy J.K. Morphometric analysis of the ultrastructural changes in rat liver induced by the peroxisome proliferators SaH 42-348// J Cell Biol.- 1976.-71(3).- p.768-80.

146. Neville TL, Ward MA, Reed JJ. et al. Effects of level and source of dietary selenium on maternal and fetal body weight, visceral organ mass, cellularity estimates, and jejunal vascularity in pregnant ewe lambs// J Anim Sci. -2008.-Vol.86, N4.- p.890-901.

147. Opinion of the Scientific Panel on Additives and Products or Substances used in Animal Feed on the safety and efficacy of the product Selenium enriched yeast (Saccharomyces cerevisiae NCYC R397) as a feed additive for all species in accordance with Regulation (EC) No 1831/2003 //EFSA J. -2006.-Vol.430.-p.l-23.

148. Pappas AC, Zoidis E, Surai PF, Zervas G. Selenoproteins and maternal nutrition.// Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol.- 2008.-151(4).-p.361-372.

149. Patrick L. Selenium biochemistry and cancer: a review of the literature// Altern Med Rev.- 2004.-9(3).-p.239-258.

150. Peres J.M., Bouhallab S., Petit C., Bureau F., Maubois J.L., Arhan P., Bougie D. Improvement of zinc intestinal absorption and reduction of zinc/iron interaction using metal bound to the caseinophosphopeptide 1-25 of beta-casein// Reprod.Nutr.Dev.-1998.-Vol.38.-№4.-p.465-472.

151. Porter SN, Howarth GS, Butler RN. An orally administered growth factor extract derived from bovine whey suppresses breath ethane in colitic rats// Scand J Gastroenterol .-1998.-33.- p.967-974.

152. Powell S.R. The antioxidant properties of zinc// J.Nutr.-2000.-Vol.l30.-p.l447S-1454S.

153. Prasad A.S. Laboratory diagnosis of zinc deficiency// J.Am.Coll.Nutr.-1985.-Vol.4.-N6.-p.591-598.

154. Prasad A.S. Effects of zinc deficiency on immune functions// J Trace Elem Exp Med.- 2000.- 13.-p. 1-30.

155. Prasad AS, Bao B, Beck FWJ, Kucuk O, Sarkar FH. Antioxidant effect of zinc in humans// Free Radical Biology and Medicine.- 2004.-37(8).- p. 1182-1190.

156. Prasad AS. Clinical, immunological, anti-inflammatory and antioxidant roles of zinc// Experimental Gerontology.- 2008.-43(5).- p.370-377.

157. Rabbani P.I., Prasad A.S., Tsai R., Harland B.F., Fox M.R. Dietary model for production of experimental zinc deficiency in man// Am.J.Clin.Nutr.-1987.-Vol.45.-N6.-p.1514-1525.

158. Recommended Daily Amounts of Vitamin and Minerals in Europe - Nutrition Abstracts and Reviews, Series A.-1990.- Vol.60.- №10.

159. Reinhardt M.C. Macromolecular absorption of food antigens in health and disease// Ann.Allergy.- 1984.- Vol.53.- N6.- Pt.2.- p.597-600.

160. Rhodes R.S., Karnovsky M.J. Loss of macromolecular barrier function associated with surgical trauma of the intestine// Lab.Invest.-1971.-Vol.25.- p.220-232.

161. Roberts P.R., Burney J.D., Black K.W., Zaloga G.P. Effect of chain length on absorption of biologically active peptides from the gastrointestinal tract// Digestion.-1999.-Vol.60.- №4.- p.332-337.

162. Rodriguez P, Darmon N, Chappuis P, Candalh C, Blaton MA, Bouchaud C, Heyman M. Intestinal paracellular permeability during malnutrition in guinea pigs: effect of high dietary zinc// Gut.- 1996.-39(3).- p.416-422.

163. Rohweder J, Runkel N, Fromm M, Schulzke JD, Buhr HJ. Zinc acts as a protective agent on the mucosal barrier in experimental TNBS colitis// Langenbecks Arch Chir Suppl Kongressbd.- 1998.-115(Suppl I).- p.223-227.

164. Ryan-Harshman M, Aldoori W. The relevance of selenium to immunity, cancer, and infectious/inflammatory diseases// Can J Diet Pract Res.- 2005.-66(2).-p.98-102.

165. Schrauzer G.N. Nutritional Selenium Supplement: Product Types, Quality and Safety// J. Am. Coll. Nutr.- 2001.-Vol.20.- №1.- p. 1-4.

166. Seaduto R.C. Glutathione: metabolism and physiological functions.- Boca Raton et al: CRC Press.-1990.- p.228-235.

167. Selenium enriched yeast as source for selenium added for nutrition purposes in foods or particular nutritional uses and foods (including food supplements) for the general population. Scientific Opinion of the Pannel on Food Additives, Flavourings, Processing Aids and Materials in Contact with Food//EFSA J.-2008.-Vol.766.-p.l-42.

168. Serfass R.E., Reddy M.B. Breast milk fractions solubilize Fe(III) and enhance iron flux across Caco-2 cells// J.Nutr.- 2003.- Vol.133.- №2.- p.449-455.

169. Shedlofsky S.I., Bonkowsky H.L., Sinclair P.R. et.al. Iron loading of cultured hepatocytes: Effect of iron on 5-aminolaevulinate synthase is independent of lipid peroxidation// Biochem.J.- 1983.- Vol.212.- N2.- p.321-330.

170. Sies H., Sharov V.S., Klotz L.O., Briviba K. Glutathione peroxidase protects against peroxynitrite-mediated oxidations. A new function for selenoproteins as peroxynitrite reductase// J.Biol.Chem.- 1997.- Vol.272.- N44.- p.27812-27817.

171. Silk D.B., Clark M.L. Jejunal absorption of an amino acid mixture simulating casein and an enzymic hydrolysate of casein prepared for oral administration to normal adults// Brit.J.Nutr.- 1975.- Vol.33.- №1.- p.95-100.

172. Stokes C.R., Miller B.G., Bourne F.J. Animal models of food sensitivity// Food allergy and intolerance. - London e.a. - 1987. - p.286-300.

173. Stuart C.A., Twistelton R., Nicholas M.K., Hide D.W. Passage of cow's milk proteins in breast milk// Clin.Allergy.- 1984.-Vol.14.- N6.-p.533-535.

174. Sturniolo GC, Di Leo V, Ferronato A, D'Odorico A, D'Inca R. Zinc supplementation tightens "Leaky Gut" in Crohn's disease// Inflammatory Bowel Diseases.- 2001.-7(2).- p.94-98.

175. Sturniolo GC, Fries W, Mazzon E, Di Leo V, Barollo M, D'Inca R. Effect of zinc supplementation on intestinal permeability in experimental colitis// Journal of Laboratory and Clinical Medicine.- 2002.-139(5).- p.311-315.

176. Sunde R.A. Molecular biology of selenoproteins// Annu.Rev.Nutr.-1990.-Vol.10.-p.451-474.

177. Swain J.H., Tabatabai L.B., Reddy M.B. Histidine content of low- molecular-weight beef proteins influences nonheme iron bioavailability in Caco-2-cells// J.Nutr.- 2002.-Vol.132.- №2.-p.245-251.

178. Tirosh O, Levy E, Reifen R. High selenium diet protects against TNBS-induced acute inflammation, mitochondrial dysfunction, and secondary necrosis in rat colon//Nutrition.- 2007.-23(11-12).- p.878-886.

179. Tran CD, Howarth GS, Coyle P, Philcox JC, Rofe AM, Butler RN. Dietary supplementation with zinc and a growth factor extract derived from bovine cheese whey improves methotrexate-damaged rat intestine// Am J Clin Nutr.- 2003.-77(5).-p.1296-1303.

180. Tran CD, Sundar S, Howarth GS. Dietary zinc supplementation and methotrexate-induced small intestinal mucositis in metallothionein-knockout and wild-type mice// Cancer Biol Ther. 2009.- 8(17).- p. 1662-1667.

181. Troskot B, Simicevic VN, Dodig M, Rotkvic I, Ivankovic D, Duvnjak M. The protective effect of zinc sulphate pretreatment against duodenal ulcers in the rat// Biometals. -1997.-10(4).-p.325-329.

182. Turner JR. Molecular basis of epithelial barrier regulation: from basic mechanisms to clinical application// The American Journal of Pathology.- 2006.-Vol.169.- №6.- p.1901-1909.

183. Vallee BL, Auld DS. Zinc metallochemistry in biochemistry. Review// Center for Biochemical and Biophysical Sciences and Medicine, Harvard Medical School, Boston, MA 02115, USA.- 1995.-№73.-p.259-277.

184. Vallee BL, Falchuk KH. Review. The biochemical basis of zinc physiology// Physiol Rev.- 1993.-73(l).-p.79-118.

185. Vanden Berghe D.A. Trace element - rich additive, method for preparing same, preparation in which the additive is included and use thereof. US Patent №6.479.050, 2002.

186. Vegarud G.E., Langsrud T., Svenning C. Mineral -binding milk proteins and peptides; occurrens, biochemical and technological characteristics// Br.J. Nutr.-2000.-Vol.84, Suppl.l.- p.S91-S98.

187. Virgili F., Canali R., Figus E. et al. Intestinal damage induced by zinc deficiency is associated with enhanced CuZn superoxide dismutase activity in rats: effect of dexamethasone or thyroxine treatment// Free Radic.Biol.Med.-1999.-Vol.26.-№9-10.-p.l 194-1201.

188. Waeytens A, De Vos M, Laukens D. Evidence for a potential role of metallothioneins in inflammatory bowel diseases// Mediators Inflamm.- 2009.- p.9.

189. Weibel E.R., Staubli W., Gnagi H.R., Hess F.A. Correlated morphometric and biochemical studies on the liver cell// J Cell Biol.- 1969.-42(1).- p.68-91.

190. Windisch W. Development of zinc deficiency in 65Zn labeled, fully grown rats as a model for adult individuals// J.Trace Elem.Med.Biol.-2003.-Vol. 17.-N2.-p.91-96.

191. Wintergerst ES, Maggini S & Hornig DH Immuneenhancing role of vitamin C and zinc and effect on clinical conditions.//Ann Nutr Met.-2006.- Vol.50.- p.85-94.

192. Yanardag R, Ozsoy-Sacan O, Ozdil S, Bolkent S. Combined effects of vitamin C, vitamin E, and sodium selenate supplementation on absolute ethanol-induced injury in various organs of rats// Int J Toxicol.- 2007.-26(6).- p.513-523.

193. Yu S.Y., Ao P., Wang L.M. Biochemical and cellular aspects of the anticancer activity of selenium// Biol. Trace. Elem. Res.- 1988.- Vol.15.- p.243-255.

194. Zhong W, McClain CJ, Cave M, Kang YJ, Zhou Z. The role of zinc deficiency in alcohol-induced intestinal barrier dysfunction// Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.-2010.- 298.- p.G625-633.

195. Zhou S., Piao J., Xu J., Yang X. Research on some enzyme activities in the assessment of zinc nutritional status of growing rats// Wei Sheng Yan Jiu.-1999.-Vol.28.-N5.-p.283-285.