Изменения комплекса рибосомных генов человека в процессе естественного и репликативного старения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Малиновская, Елена Михайловна

• Малиновская, Елена Михайловна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Малиновская, Елена Михайловна

СПИСОК ЧАСТО ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Молекулярные механизмы старения.

1.1 Роль соматических мутаций.

1.2 Митохондриальная теория старения и роль окислительного стресса.

1.3 Накопление измененных белков.

1.4. Нарушения метаболизма Сахаров.

1.5 Метилирование ДНК и старение.

1.6 Репарация ДНК и старение.

1.7 Утрата теломер и старение.

1.8 Апоптоз и продолжительность жизни.

2. Изменение основных характеристик рибосомных генов млекопитающих при старении.

2.1 Структурно-функциональная организация рибосомных генов.

2.2 Основные характеристики комплекса рибосомных генов и их варьирование в различных возрастных группах млекопитающих.

2.2.1 Число копий рибосомных повторов в геноме человека.

2.2.2 Изменение числа копий рДНК при старении.

2.3 Активные копии рибосомных генов в геноме человека.

2.3.1 Селективная окраска ядрышкообразующих районов метафазных хромосом.

2.3.2 Изменение активности рибосомных генов при старении.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Анализируемая выборка.

2. Выделение ДНК из периферической крови, клеточной массы и среды культивирования фибробластов.

3. Определение концентрации ДНК.

4. Определение содержания повторяющихся последовательностей генома человека в я ДНК и в вкДНК.

5. Определение относительного количества активных РГ (АкРГ).

6. Исследование репликативного старения и действия хромата калия на культивируемые фибробласты.

7. Количественная оценка гена 18S рРНК методом real-time ПЦР.

9. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Свойства комплекса РГ людей среднего и старшего возраста.

1.1 Число копий РГ в геноме.

1.2 Анализ содержания трех контрольных повторяющихся последовательностей генома человека в группе СВ и ГС.

1.2.1 Теломерный повтор.

1.2.2 Гистоновые гены.

1.2.3 Сателлит 3 (lql2).

1.3 Относительные количества активных копий РГ.

1.4 Изменение количества метилированных копий РГ при старении.

2. Влияние свойств комплекса РГ на репликативное старение.

2.1 Основные характеристики штаммов фибробластов кожи человека.

2.1.1 Свойства комплекса РГ.

2.1.2 Маркеры репликативного старения.

2.1.3 Сопоставление свойств комплекса РГ и маркеров старения.

3. Изменения свойств комплекса РГ при репликативном старении.

3.1 Изменение содержания контрольных повторов (ТП и СатШ).

3.2 Изменение содержания РП и уровня метилирования РП.

3.3 Повреждение ДНК рибосомных генов при репликативном старении.

4. Влияние свойств комплекса РГ на функционирование культивируемых фибробластов кожи в условиях окислительного стресса, вызываемого хроматом калия.

4.1 «Ранний» ответ фибробластов на действие «малых» доз К2СЮ4.

4.1.1 Изменение количества клеточной РНК.

4.1.2 Изменение активности ядрышка.

4.1.3 Изменения уровня апоптоза.

4.2 «Поздний» ответ фибробластов на действие хромата калия.

5. Влияние количества АкРГ в геноме на нуклеазную активность клеток.

5.1 Уровень нуклеазной активности в штаммах фибробластов при стандартных условиях культивирования.

5.2 Изменения НА клеток при действии малых доз хромата калия.

5.3 Изменение НА в процессе апоптоза клеток («поздний» ответ на действие К2СЮ4).

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изменения комплекса рибосомных генов человека в процессе естественного и репликативного старения»

Актуальность темы. Рибосомные гены (РГ), кодирующие рибосомные РНК (28S, 18S, 5.8S рРНК), имеют принципиальное значение для функционирования эукариотической клетки. Для обеспечения синтеза большого количества молекул рРНК, необходимых для функционирования клеток организма, в геноме человека содержится от 250 до 700 копий РГ [Bross К. et al., 1972, Вейко Н.Н. и соавтр., 1996, 2003]. В соматической клетке человека транскрибируется только 30-50% копий РГ от общего количества [Вейко Н.Н., 2001], которые называют активными копиями РГ (АкРГ). Помимо этого, к варьирующим признакам генома можно отнести количество метилированных копий РГ. В литературе уже давно дискутируется вопрос о возможной связи характеристик комплекса РГ генома млекопитающих и старения. Однако опубликованные данные противоречивы. В нескольких работах сообщалось об уменьшение числа копий РГ при старении тканей миокарда [Strehler B.L. et al., 1979а; Johnson L.K. et al., 1975] и мозга человека [Strehler B.L. et al., 1979b], тканей мозга, селезенки и печени крыс [Gaubatz J.W. et al., 1976]. В ряде работ было обнаружено, что при старении клеток сердца, селезенки, печени и мозга мышей [Ono Т. et al., 1985; Peterson C.R. et al., 1984], а также при репликативном старении фибробластов кожи крыс [Halle J.P.et al., 1997] и человека [Peterson C.R. et al., 1984] не происходит существенного изменения числа копий РГ в геноме. Столь же противоречивые данные получены при исследовании изменения метилирования РГ при старении. Сообщалось об увеличении метилирования при старении культивируемых фибробластов кожи человека [Machwe A. et al., 2000], печени и сперматозоидов крысы [Oakes С.С. et al., 2003] и тканей имбредных линий мышей [Вейко Н.Н. и соавтр., 2007]. По данным других авторов, при старении млекопитающих уровень метилирования РГ не изменяется или снижается [de Carvalho C.V.et al., 2000]. Практически нет работ, которые оценивали бы изменения количества активных копий РГ при старении, а также оценивали взаимосвязь между уровнем окислительного стресса, который рассматривают в качестве основной причины старения, и свойствами комплекса РГ.

Цель и задачи исследования. Цель исследования заключалась (1) в оценке возможного влияния свойств комплекса РГ человека на продолжительность жизни и (2) в анализе изменения свойств комплекса РГ при старении организма (естественное старение) и культивируемых клеток человека (репликативное .старение). Были сформулированы следующие экспериментальные задачи:

1) сравнить свойства комплекса РГ (число копий, количество АкРГ и уровень метилирования) в выборке людей 80 лет и старше и в выборке лиц молодого и среднего возраста;

2) исследовать изменение свойств комплекса РГ при репликативном старении 5 штаммов фибробластов кожи доноров различного возраста, геномы которых значительно различаются по свойствам комплекса РГ;

3) исследовать взаимосвязь свойств комплекса РГ и маркеров старения для 5 штаммов фибробластов кожи человека;

4) изучить влияние свойств комплекса РГ культивируемых фибробластов на устойчивость клеток к апоптозу, индуцируемому окислительным стрессом.

Научная новизна. Впервые показано, что количество АкРГ у людей, достигших 80-летнего возраста, варьирует в пределах достаточно узкой «адаптивной» нормы. Впервые найдено объяснение противоречивым результатам относительно снижения числа копий и изменения уровня метилирования РГ при старении: обнаружено, что при старении происходит потеря высокометилированных кластеров неактивных РГ, если таковые присутствовали в геноме. Впервые показано, что свойства комплекса РГ не влияют на нормальное репликативное старение культивируемых фибробластов, но влияют на устойчивость клеток к апоптозу, который индуцируется дополнительным окислительным стрессом. Впервые обнаружено, что клетки с большим количеством АкРГ характеризуются значительно более высоким уровнем эндонуклеазной активности.

Научно-практическая значимость работы. Данные о распределении количества АкРГ в геномах старых людей могут помочь при составлении прогнозов длительности жизни и риска развития патологии, индуцируемой окислительным стрессом, у различных групп населения. Данные о влиянии количества АкРГ в геноме клетки на изменения уровня апоптоза при действии повреждающих факторов внешней среды могут оказаться полезными при разработке схем клеточной терапии. Описана схема анализа ряда маркеров, которые позволяют прогнозировать различия в длительности пролиферативного периода и в уровне спонтанного апоптоза нескольких культур клеток уже на ранних пассажах, что также может иметь значение для клеточных технологий .

Положения, выносимые на защиту.

1) В выборке людей старческого возраста по сравнению с людьми среднего возраста значительно сужены интервалы варьирования общего числа копий РГ в геноме и количества активных копий РГ. Комплекс РГ старых людей практически не содержит высокометилированных кластеров «молчащих» рибосомных копий.

2) При репликативном старении культивируемых фибробластов кожи человека геном теряет высокометилированные кластеры копий РГ. При репликативном старении происходит значительное повреждение первичной структуры рДНК, что проявляется в значительном занижении данных real-time ПЦР.

3) Скорость репликативного старения фибробластов кожи и маркеры старения (содержание теломерного повтора и уровень спонтанного апоптоза) не зависят от свойств комплекса РГ и от возраста доноров кожи.

4) При действии хромата калия, индуцирующего дополнительный окислительный стресс, относительные изменения в уровне апоптоза клеток отрицательно коррелируют с количеством активных копий РГ в геноме.

5) Уровень эндонуклеазной активности в лизатах (и степень фрагментации внеклеточной ДНК) при нормальном культивировании и в условиях индуцированного окислительного стресса положительно коррелируют с количеством активных копий РГ в геноме клеток.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Генетика», Малиновская, Елена Михайловна

выводы

1. В выборке людей старческого возраста по сравнению с людьми среднего возраста значительно сужены интервалы варьирования общего числа копий РГ в геноме и количества активных копий РГ.

2. У людей старческого возраста снижено содержание в геноме высокометилированных кластеров молчащих рибосомных генов. При репликативном старении геном человека теряет высокометилированные кластеры неактивных копий РГ.

3. При репликативном старении культивируемых фибробластов кожи человека происходит значительное повреждение первичной структуры рДНК, что проявляется в значительном занижении показателей real-time ПЦР.

4. Скорость репликативного старения фибробластов кожи и маркеры старения не зависят от геномной дозы РГ и от возраста доноров кожи.

5. При действии хромата калия, индуцирующего дополнительный окислительный стресс, относительные изменения в уровне апоптоза клеток отрицательно коррелируют с количеством активных копий РГ в геноме клетки: минимальные изменения в уровне апоптоза демонстрируют штаммы с большим количеством РГ.

6. Уровень эндонуклеазной активности фибробластов (и степень фрагментации внеклеточной ДНК) при нормальном культивировании и в условиях окислительного стресса положительно коррелирует с количеством активных копий РГ в геноме штамма.

6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время в основе большинства теорий старения • лежит предположение об определяющей роли окислительного стресса, который вызывается как эндогенными причинами (функционирование митохондрий), так и экзогенными (действие окружающей среды и образа жизни). Свободные радикалы повреждают клеточные структуры, вызывая нарушения в функционировании и гибель клеток органов и тканей (см. Обзор литературы). Устойчивость организма (клетки) к действию свободных радикалов и, следовательно, скорость старения, ассоциированные со старением заболевания и продолжительность жизни - это производная функционирования большого числа генов, среди которых весьма трудно выделить определяющие процесс старения. Исключение составляют редкие случаи прогерии, обусловленные мутациями в конкретных генах. Свойства комплекса рибосомных генов индивида (клетки) - это фон на котором развивается клеточный ответ на окислительный стресс. Для эффективного ответа на стресс клетке необходимо достаточное количество рибосом, которые обеспечат синтез нужного количества белков, участвующих в процессах детоксикации, репарации и апоптоза поврежденных клеток. Именно поэтому рибосомные гены давно привлекают внимание исследователей процесса старения. В нашей работе мы интересовались двумя вопросами: (1) влияют ли свойства комплекса РГ индивида (число копий, количество АкРГ и уровень метилирования) на продолжительность жизни и (2) изменяются ли свойства комплекса РГ при старении. Для решения этих вопросов мы сравнили свойства комплекса РГ у людей старше 80 лет и людей среднего возраста и исследовали репликативное старение и ответ на окислительный стресс культивируемых фибробластов кожи доноров с охарактеризованными свойствами комплекса РГ.

Количество активных копий РГ в геноме - определяющая характеристика РГ, напрямую связанная с количеством клеточной рРНК (рис. 2-2). Мы обнаружили, что для группы СВ по сравнению с ГС наблюдается сужение распределения по количеству АкРГ (рис. 4-1, см. также п. 1): в геномах

СВ практически не встречаются как низкие значения АкРГ (ниже 16,3 усл.ед.), так и высокие (выше 22,1 усл.ед.).

Количество АкРГ, усл.ед.

Рис. 6-1. Сравнение распределений по количеству АкРГ для выборки СВ (белое поле), группы среднего возраста (светло-серый цвет), группы больных ревматоидным артритом ([Шубаева Н.О., 2003], темно-серый цвет) и больных шизофренией ([Вейко Н.Н,, Еголина Н.А. и соавтр., 2003J, черный цвет).

Данные многолетних наблюдений сотрудников лаборатории Общей цитогенетики ГУ МГНЦ РАМН, а также данные литературных источников [Conconi А., 1992] говорят о том, что относительное количество АкРГ (количество копий РГ в потенциально-активной фракции РГ [Conconi А., 1992]) в геноме клеток - врожденная характеристика организма, не изменяющаяся с возрастом. Таким образом, сужение распределения по количеству АкРГ в группе СВ говорит о том, что до 80 лет не дожили индивиды с минимальными и с максимальными количествами АкРГ в геноме (рис. 4-1). Мы предположили, что индивиды с малым количеством АкРГ (менее 16,5 усл.ед.) не доживают до старческого возраста, в том числе и потому, что их клетки обладают сниженной устойчивостью к окислительному стрессу. Относительно небольшие повреждения клеток сопровождаются индукцией апоптоза, что приводит к более раннему старению органов и тканей. Это предположение полностью подтвердилось при исследовании действия генотоксического окислительного стресса, вызываемого малыми дозами хромата калия, на 5 линий фибробластов

94 кожи доноров с различным количеством АкРГ в геноме. Относительные изменения в уровне показателей апоптоза (активность каспазы 3 и количество вкДНК) при действии на клетки с низкими количествами АкРГ были в несколько раз больше, чем в клетках с большими количествами АкРГ. Аналогичные данные были получены ранее для фибробластов кожи больных ревматоидным артритом (РА) [Шубаева Н.О., 2003]. В этой связи интересно отметить, что у большей части больных РА, который является социально значимым заболеванием, сокращающим продолжительность жизни на 10-15 лет, ранее наблюдали более низкие, чем у возрастной нормы, количества АкРГ в геноме (см. рис. 6-1, распределение обозначено красным цветом, цитируется по работе [Шубаева Н.О., 2003]). Больные РА составляют подгруппу людей с низкими количествами АкРГ среди людей среднего и молодого возраста, которые, при прочих равных условиях, имеют вероятность не дожить до 80 лет. Очевидно, что вредные факторы окружающей среды и стиль жизни (экология, курение, алкоголь и т.д.), которые индуцируют дополнительный окислительный стресс в клетках организма, также должны значительно сильнее воздействовать на продолжительность жизни индивидов с очень низким количеством АкРГ в геноме.

Индивиды с очень большим количеством АкРГ в геномах (более 22 усл.ед.) также не представлены в выборке СВ. Мы объясняем это двумя основными причинами. Как показали данные модельного исследования действия хромата калия на культивируемые фибробласты, клетки с большим количеством АкРГ повышенно устойчивы к апоптозу, индуцируемому генотоксическим агентом. Благодаря более высокой активности белкового синтеза (большего количества рРНК, а значит и рибосом) клетки с поврежденной ДНК могут выжить и не подвергнуться апоптозу. Но при этом возрастет вероятность мутаций в ДНК, что может привести к возникновению опухоли или других заболеваний, сокращающих продолжительность жизни.

Вторая возможная причина отсутствия среди лиц СВ индивидов с большим количеством АкРГ - это наличие в популяции генетической патологии, для которой характерно увеличение количества АкРГ и не высокая продолжительность жизни. Из литературы известно пока только одно заболевание (исключая синдром Дауна с трисомией по 21 хромосоме), при котором было обнаружено для части больных значительное увеличение количества АкРГ в геноме — это шизофрения [Вейко Н.Н., Еголина Н.А. и соавтр., 2003] (рис. 4-1). Высказано предположение, что увеличение активности РГ связано с наличием врожденной генетической патологии, для компенсации которой необходим интенсивный синтез белка и, следовательно, большое количество АкРГ в геноме. Нельзя исключить, что есть и другие врожденные хронические заболевания, при которых активность РГ увеличена.

Общее число копий РГ зависит от количества АкРГ в геноме и от количества метилированных . КМРГ. Результаты, полученные при использовании двух моделей старения, позволяют сделать вывод, что при старении геном, с большой вероятностью, теряет высокометилированные КМРГ. Эти данные могут отчасти объяснить противоречивость полученных ранее разными авторами результатов об изменении количества и метилирования РГ при репликативном старении клеток и старении тканей животных. В зависимости от наличия или отсутствия КМРГ в геноме исследуемых клеток можно обнаружить или не обнаружить статистически значимое снижение содержания РГ в геноме. По литературным данным от 1 до 3-х КМРГ различных размеров содержатся в геномах приблизительно 50% людей [Ляпунова Н.А. и соавтр., 2001]. КМРГ не транскрибируются, являясь своеобразным «балластом» генома. Потеря этих последовательностей при старении не должна сказываться на количестве синтезируемой РНК-полимеразой 1 рРНК. Гораздо важнее обнаруженный нами факт, что в состарившихся культивируемых клетках, имеет место повреждение цепи рДНК в значительном числе копий рДНК. По-видимому, в условиях стареющего организма в различных тканях также происходит накопление копий рДНК, которые не могут при транскрипции дать полноразмерную копию рРНК. Эти нарушения могут приводить как к блокированию клеточного цикла, так и к низкой устойчивости к стрессу.

Рис. 6-2. Сравнение распределений по числу копий РГ для выборки СВ (белое поле), группы среднего возраста (светло серый цвет), группы больных ревматоидным артритом ([Вейко Н.Н., Шубаева Н.О. и соавтр., 2006], темно-серый цвет) и больных шизофренией ([Вейко Н.Н., Бголина Н.А. и соавтр., 2003), черный цвет).

Наши данные показали, что распределение по числу копий РГ в геноме для людей старше 80 лет значительно сужено по сравнению с выборкой здоровых людей среднего возраста (см. рис. 6-2). По-видимому, значительное уменьшение доли высокопийных по рДНК геномов в группе СВ происходит вследствие трех причин: (I) потеря в течение жизни КМРГ, которые встречаются только в геномах с большим числом копий [Вейко Н.Н., 2001], (2) снижение числа людей с большим количеством АкРГ, которым соответствуют большое число копий РГ и (3) наличие в популяции генетической патологии, для которой характерно увеличение общего числа копий РГ и не высокая продолжительность жизни. Увеличение общего числа копий РГ, также как и количества АкРГ, ранее наблюдали для геномов больных шизофренией (см. рис, 6-2). Небольшое уменьшение доли низкокопийных по рДНК геномов в выборке СВ связано, по-видимому, с уменьшением в выборке СВ людей с низкими количествами АкРГ, геномы которых содержат мало КМРГ.

Метилирование рДНК в геномах людей СВ значительно снижено по сравнению с метилированием в ГС. Снижение уровня метилирования происходит прежде всего за счет потери КМРГ, о чем свидетельствуют низкие значения показателя К/А, который отражает количество КМРГ в геноме. Низкий уровень метилирования рДНК наблюдали ранее в группе больных РА, однако в этом случае не происходило потери КМРГ и низкий уровень метилирования объясняли неэффективной работой метилтрансфераз [Шубаева Н.О., 2003 ].

Исследование репликативного старения показало, что длительность пролиферативного периода культур с количеством АкРГ в геномах от 16,7 до 21,5 усл.ед. не зависит от свойств комплекса РГ и диктуется определенным состоянием клетки к началу культивирования вне организма. Это состояние может быть охарактеризовано не зависящими от свойств комплекса РГ, но коррелирующими между собой параметрами - содержанием теломерного повтора в геноме, показателями спонтанного апоптоза клеток (активность каспазы 3 и количество вкДНК). Штаммы с максимальными содержаниями ТП в геноме имеют минимальные показатели уровня апоптоза на раннем пассаже и переживают максимальное число пассажей. Однако интенсивность ответа клеток ранних пассажей на экзогенное повреждающее воздействие напрямую зависит от количества АкРГ: чем больше АкРГ в геноме, тем меньше относительное увеличение активности каспазы 3 и количества вкДНК в культуре.

При изучении репликативного старения и ответа клеток на окислительный стресс обнаружен новый факт, имеющий принципиальное значение для развития дальнейших исследований роли рибосомных генов в процессах старения. Оказалось, что от количества АкРГ в геноме фибробластов напрямую зависит эндонуклеазная активность клеток, которую мы тестировали в клеточных лизатах. Положительную корреляцию между НА и количеством АкРГ в геноме мы обнаружили в интактной субконфлуентной культуре клеток, при действии на клетки малых доз хромата калия (4 и 6 мкМ, 4 час) и при индукции апоптоза клеток сменой среды после действия больших доз хромата (4 и 6 мкМ, 24 часа). Ранее положительную зависимость НА сыворотки от количества АкРГ в геноме лимфоцитов наблюдали в выборке больных РА [Шубаева Н.О., 2003]. Повышенную НА в клетках с большим количеством АкРГ нельзя объяснить увеличением общего уровня синтеза белка в клетках с более активным синтезом рРНК. При действии малых доз хромата калия в одном из штаммов с большим количеством АкРГ наблюдалось снижение количества клеточной РНК, но уровень НА оставался относительно высоким. Для клеток с большим количеством АкРГ и соответственно более высоким уровнем НА, мы наблюдали, как правило, значительно более сильную фрагментацию внеклеточной ДНК.

Возможно следующее объяснение обнаруженного факта. В последние годы было показано, что транскрибируемая область РП (ТОрДНК) содержит много мотивов связывания с рецепторами TLR9. Лигандами для этих рецепторов являются неметилированные CpG-богатые фрагменты ДНК. Показано также, что фрагменты ТОрДНК накапливаются в составе вкДНК крови здоровых людей и, особенно, при хронической патологии, сопровождающейся усилением процессов гибели клеток. Функция этих фрагментов в составе вкДНК остается пока не ясной, но имеются данные опытов in vitro, что при действии на клетки иммунной системы модельных фрагментов CpG-ДНК значительно возрастает продукция провоспалительных цитокинов, активируется фактор транскрипции NF-каппа В и возрастает концентрация активных форм кислорода и азота, т.е. наблюдается окислительный стресс. Рецепторы TLR9 экспрессируются многими клетками организма, в том числе стволовыми, кардиомиоцитами, эндотелиальными и т.д. Было показано, что содержание ТОрДНК в крови увеличивается с возрастом, особенно большие количества этих фрагментов детектировали в сыворотке пожилых людей с ишемической болезнью сердца и гипертензией [Вейко Н.Н., Булычева Н.В. и соавтр., 2008]. Высокие концентрации ТОрДНК в крови могут наносить вред организму, изменяя функционирование многих типов клеток путем взаимодействия с TLR9. В силу высокого GC-состава ТОрДНК значительно труднее гидролизуется эндонуклеазами крови до низкомолекулярных фрагментов, чем другие фрагменты вкДНК [Вейко Н.Н., Спитковский Д.М., 2000]. Количество неметилированных копий ТОрДНК в геноме (лигандов для TLR9) пропорционально количеству АкРГ. Таким образом, чем больше количество АкРГ в геноме клеток, тем больше фрагментов ТОрДНК - лигандов TLR9 будет находится в составе вкДНК и тем выше должна быть нуклеазная активность клеток, чтобы элиминировать опасный избыток этих фрагментов. Повышенная НА клеток с большим количеством АкРГ в геноме - это возможная компенсаторная реакция клетки на более высокие концентрации фрагментов ТОрДНК в внеклеточной среде, которые могут нанести вред, индуцируя дополнительный окислительный стресс. Очевидно, для окончательного вывода о роли высоких значений НА в функционировании клеток с большим количеством АкРГ требуются дальнейшие исследования.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Малиновская, Елена Михайловна, 2009 год

1. Анисимов, В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. /

2. B.Н. Анисимов С.Петербург: Наука. - 2003.

3. Вейко, Н.Н. Структурно-функциональная организация рибосомных повторов человека: Автореферат дисс. докт. биол. наук / Н.Н. Вейко — ГУ МГНЦ РАМН, Москва 2001.

4. Вейко, Н.Н. Рибосомные гены человека в транскрибируемой области содержат прочно связанные с ДНК белки. / Н.Н. Вейко, Н.А. Ляпунова, А.И. Богуш, Д.М. Спитковский // Молекулярная биология. 1998. - Т.32. - С.629-634.

5. Вейко, Н.Н. Определение количества рибосомных генов в индивидуальных геномах человека./ Н.Н. Вейко, Н.А. Ляпунова, А.И. Богуш, Т.Г. Цветкова, Э.В. Громова // Молекулярная биология. — 1996. -Т.30. -С.1076-1084.

6. С.М. Терехов, Н.О. Шубаева, Т.Д. Смирнова, С.М. Иванова, Н.А. Еголина, Т.Г. Цветкова, Д.М. Спитковский, Н.А. Ляпунова // Молекулярная биология. 2005. - Т.39. - С.264-275.

7. Костюк, С.В. Фрагменты рибосомных генов в составе внеклеточной ДНК факторы стресс — сигнализации: Афтореферат дисс. канд. мед. наук / С.В. Костюк - ГУ МГНЦ РАМН, Москва. - 2007.

8. Квочко, А.Н. Синтез белка в почках мериносовых овец в послеродовом онтогенезе. / А.Н. Квочко // Цитология. 2001. - Т.43, №12. - С.1174-1178.

9. Дерффель, К. Статистика в аналитической химии. / К. Дерффель // Москва: Изд-во «Мир». 1994.

10. Ляпунова, Н.А. Ядрышкообразующие районы (ЯОР) хромосом человека: опыт количественного цитологического и молекулярного анализа. / Н.А. Ляпунова, Н.А. Еголина и др. // Биол. мембраны. 2001. - Т. 18. - С. 189199.

11. Оловников, A.M. Редусомная гипотеза старения и контроля биологического времени в индивидуальном развитии. / А.М.Оловников // Биохимия. 2003. - Т.68. - С.7-41.

12. Шубаева, Н.О. Молекулярно-генетические характеристики рибосомных генов и интенсивность процессов гибели клеток у больныхревматоидным артритом: Афтореферат дисс. канд. мед. наук / Н.О. Шубаева-ГУ МГНЦРАМН, Москва.-2003.

13. Adams, R.L. DNA methylation in eukaryotes. / R.L. Adams, R.H. Burdon // CRC Crit Rev Biochem. 1982. - V.13, №4. - P.349-384.

14. Akerman, J. Alexis Carrel: Nobel Prize for physiology and medicine, 1912. / J. Akerman // Transplant Proc. 1987. - V. 19, №4. - P.9-11

15. Ames, B.N. Endogenous DNA damage as related to cancer and aging. / B.N. Ames // Mutat Res. 1989. - V.214, № 1. - P.41-46.

16. Attardi, G. Structure and synthesis of ribosomal RNA / G. Attardi, F. Amaldi // Annu. Rev. Biochem. 1970. - V.39. - P.l83-226.

17. Barja, G. Endogenous oxidative stress: relationship to aging, longevity and caloric restriction. / G. Barja // Ageing Res Rev. 2002. - V.l, №3. - P.397-411.

18. Bedard, K. The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology. / K. Bedard, K.H. Krause // Physiol Rev. -2007. V.87, №1. -P.245-313.

19. Begega, A. Age-related changes of the nucleolar organizer regions without neuron loss in medial mamillary bodies (hypothalamus) in old rats. / A. Begega, M. Cuesta, S. Rubio, L.J. Santin, J.L. Arias // Mech. Ageing Dev. -1999.-V.108,№3.-P.l 13-125.

20. Beneke, S. Poly(ADP-ribosyl)ation in mammalian ageing. / S. Beneke, A. BUrkle // Nucleic Acids Res. 2007. - V.35, №22. - P.7456-7465.

21. Berletch, J.B. A method to study the expression of DNA methyltransferases in aging systems in vitro. / J.B. Berletch, S.M. Phipps, S.L. Walthall, L.G. Andrews, Т.О. Tollefsbol // Methods Mol Biol. 2007a. - V.371. - P.81-87.

22. Berletch, J.B. A method to detect DNA methyltransferase I gene transcription in vitro in aging systems. / J.B. Berletch, L.G. Andrews, Т.О. Tollefsbol // Methods Mol Biol. 2007b. - V.371. - P.73-80.

23. Birnstiel, M.L. Kinetic complexity of RNA molecules. / M.L. Birnstiel, B.H. Sells, I.F. Purdom // Mol. Biol. 1972. - V.63, №1. -P.21-39.

24. Blasco, M.A. Telomeres and human disease: ageing, cancer and beyond. / M.A. Blasco // Nat Rev Genet. 2005. - V.6, №8. - P.611-622.

25. Boerrigter, M.E. DNA repair and Alzheimer's disease. / M.E. Boerrigter, J.Y. Wei, J. Vijg // J Gerontol. 1992. - V.47, №6. -P.177-184.

26. Boiteux, S. Properties and biological functions of the NTH and FPG proteins of Escherichia coli: two DNA glycosylases that repair oxidative damage in DNA. / S. Boiteux // J Photochem Photobiol B. 1993. - V.19, №2. - P.87-96.

27. Bonnefoy, M. Antioxidants to slow aging, facts and perspectives. / M. Bonnefoy, J. Drai, T. Kostka // Presse Med. 2002. - V.31, №25. - P.1174-1184.

28. Borsatto, B. Reduction of the activity of ribosomal genes with age in Down's syndrome. / B. Borsatto, M. Smith // Gerontology. 1996. - V.42, №3. -P.147-154.

29. Brash, D.E. DNA damage and repair in vivo. / D.E. Brash, R.W. Hart // J Environ Pathol Toxicol. 1978. -V.2, №1. -P.79-114.

30. Bross, K. On the number of ribosomal RNA genes in man. / K. Bross, W. Krone//Human Genet 1972. - V.l 4. - P. 137-141.

31. Bross, K. Ribosomal cistron and acrocentric chromosomes in man. / K. Bross, W. Krone // Human Genet. 1973. - V.18. - P.71-75.

32. Burkle, A. Physiology and pathophysiology of poly(ADP-ribosyl)ation. / A. Burkle // Bioessays. 2001. - V.23, №9. - P.795-806.

33. Butler, M.G. Effects of age, sex and multiple endocrine neoplasia type-II on silver stained nucleolar organizer regions. / M.G. Butler, J.R. Lane // Mech. Ageing Dev. 1989. - V.47, №1. - P. 17-24.

34. Buys, H.M. Abundance of protein bound sulfhydril- and disulfide group at chromosomal nucleolus organizer regions. / H.M. Buys, J. Osinga // Chromosoma. 1980. - V.77. - P. 1-11.

35. Campisi, J. From cells to organisms: can we learn about aging from cells in culture? / J. Campisi // Exp Gerontol. 2001. - V.36, № 4-6. - P.607-618.

36. Campisi, J. Senescent cells, tumor suppression, and organismal aging: good citizens, bad neighbors. / J. Campisi // Cell. 2005. -V. 120, №4. - P.513-522.

37. Carrard, G. Impairment of proteasome structure and function in aging. / G. Carrard, A.L. Bulteau, I. Petropoulos, B. Friguet // Int J Biochem Cell Biol. — 2002. V.34, № 11. - P.461 -474.

38. Ceriello, A. Oxidative stress and glycemic regulation. / A. Ceriello // Metabolism. 2000. - V.49, №2. - P.27-29.

39. Cote, B.D. Quantitation of in situ hybridization of ribosomal ribonucleic acids to human diploid cells. / B.D. Cote, O.C. Uhlenbeck, D.M. Steffensen // Chromosoma. 1980. - V.80. - P.349-357.

40. Cristofalo, V.J. Relationship between donor age and the replicative lifespan of human cells in culture: A revaluation. / V.J. Cristofalo, R.G. Allen, R.J. Pignolo, B.G. Martin, J.C. Beck // PNAS USA. 1998. - V.95. - P.10614-10619.

41. Cutler, R.G. Oxidative stress and aging: catalase is a longevity determinant enzyme. / R.G. Cutler // Rejuvenation Res. 2005. - V.8, №3. - P.138-140.

42. Dante, R. Methylation of the 5r flankihg sequences of the ribosomal DNA human cell lines and in a human-hamster hybrid cell line. / R. Dante, M.E. Percy, A. Baldini et al. // Cell Biochem. 1992. - V.50. - P.357-362.

43. Denton, Т.Е. The relationship between aging and ribosomal gene activity in humans as evidenced by silver staining, f Т.Е. Denton, S.L. Liem, K.M. Cheng, J.V. Barrett // Mech. Ageing Dev. 1981. - V. 15, № 1. - P. 1 -7.

44. Dittes, H. Biochemical and cytogenetic studies on the nucleolus organizing regions (NOR) of man. II. A family with the 15/21 translocation. / H. Dittes, W. Krone, K. Bross, M. Schmid, W. Vogel // Human Genet. 1975. - V.26, №1. -P.47-59.

45. Duan, J. Irreversible cellular senescence induced by prolonged exposure to H2O2 involves DNA-damage-and-repair genes and telomere shortening. / J. Duan, J. Duan, Z. Zhang, T. Tong // Int J Biochem Cell Biol. 2005. - V.37. -P.1407-1420.

46. Evans, H.J. Location of the genes coding for 18S and 28S ribosomal RNA in the human genome. / H.J. Evans, R.A. Buckland, M.L. Pardue // Chromosoma.- 1974.-V.48.-P. 405-426.

47. Facchini, F.S. Hyperinsulinemia: the missing link among oxidative stress and age-related diseases? / F.S. Facchini, N.W. Hua, G.M. Reaven, R.A. Stoohs // Free Radic Biol Med. 2000. - V.29, № 12. - P.1302-1306.

48. Fakan, S. Structural support for RNA synthesis in the cell nucleus. / S. Fakan // Methods Achiev. Exp. Pathol. 1986. - V.l2. - P. 105-140.

49. Fusco, D. Effects of antioxidant supplementation on the aging process. / D. Fusco, G. Colloca, M.R. Lo Monaco, M. Cesari // Clin Interv Aging. 2007. -V.2, № 3. - P.377-387.

50. Fuster, J.J. Telomere biology and cardiovascular disease. / J.J. Fuster, V. Andres // Circ Res. 2006. - V.99. - P. 1167-1180.

51. Gahan, P.B. Circulating nucleic acids in plasma and serum. Recent developments. / P.B. Gahan, R. Swaminathan // Ann N Y Acad Sci. 2008. -V.l 137. — P.1-6.

52. Garcia Moreno, L.M. NOR activity in hippocampal areas during the postnatal development and ageing. / L.M. Garcia Moreno, J.M. Cimadevilla, H. Gonzalez Pardo, M.C. Zahonero, J.L. Arias // Mech. Ageing Dev. 1997. -V.9, №2. -P. 173-181.

53. Gaubatz, J. Hybridization of ribosomal RNA labeled to high specific radioactivity with dimethyl sulfate. / J. Gaubatz, R.G. Cutler // Biochemistry. — 1975. V.14. - P.760-765.

54. Gaubatz, J. Ribosomal RNA gene dosage as a function of tissue and age for mouse and human. / J. Gaubatz, N. Prashad, R.G. Cutler // Biochim Biophys Acta. 1976. - V.418, №3. - P.358-375.

55. Gerson, S.L. DNA repair in stem cell maintenance and conversion to cancer stem cells. / S.L. Gerson, J. Reese, J. Kenyon // Ernst Schering Found Symp Proc. 2006. - V.5. - P.231-244.

56. Goessens, G. The nucleolus-organizing regions (NORs): recent data and hypotheses. / G. Goessens, A. Lepoint // Biol. Cell. 1979. - V.35. - P.211-220.

57. Goessens, G. Relations between fibrillar centres and nucleolus-associated chromatin in Ehrlich tumour cells. / G. Goessens // Cell Biol. Int. Rep. 1979.- V.3, №4. P.337-43.

58. Goessens, G. Nucleolar structure. / G. Goessens // Int. Rev. Cytol. 1984. -V.87. -P.107-158.

59. Goodpasture, C. Visualization of nucleolar organizer regions in mammalian chromosomes using silver staining. / C. Goodpasture, S.E. Bloom // Chromosoma. 1975. - V.53. -P.37-50.

60. Green, D.R. A matter of life and death. / D.R. Green, G.I. Evan // Cancer Cell.- 2002. V.l, №1. — P.19-30.

61. Halle, J.P. Copy number, epigenetic state and expression of the rRNA genes in young and senescent rat embryo fibroblasts. / J.P. Halle, S. Muller, A. Simm, G. Adam // Eur J Cell Biol. -1997. V.74, №3. - P.281-288.

62. Harley, C.B. Telomere loss: mitotic clock or genetic time bomb? / C.B. Harley //MutatRes. 1991. - V.256, № 2-6. -P.271-282.

63. Harman, D. Free radical theory of aging: history. / D. Harman // EXS. 1992. -V.62.-P.1-10.

64. Hayflick, L. The limited in vitro lifetime of human diploid cell srtains. / L. Hayflick // Exp Cell Res. 1965. - V. 37. - P.614-636.

65. Houben, J.M. Telomere length assessment: biomarker of chronic oxidative stress? / J.M. Houben, H.J. Moonen, F.J. van Schooten, G.J. Hageman // Free Radic Biol Med. 2008. - V.44, №3. - P.23 5-246.

66. Howell, W.M. Chromosome core structure revealed by silver staining. / W.M. Howell, T.C. Hsu // Chromosoma. 1979. - V.73, №1. -P.61-66.

67. Hozak, P. Three-dimensional reconstructions of nucleolus-organizing regions in PHA-stimulated human lymphocytes. / P. Hozak, J.T. Novak, K. Smetana // Biol. Cell. 1989. - V.66, №3. -P.225-33.

68. Hozak, P. Site of transcription of ribosomal RNA and intranucleolar structure in HeLa cells. / P. Hozak, P.R. Cook, C. Schofer, W. Mosgoller, F. Wachtler // J. Cell Sci. 1994. - V. 107, №2. - P.639-648.

69. Huard, S. Targeting human telomerase in cancer therapy. / S. Huard, C. Autexier // Curr Med Chem Anticancer Agents. 2002. - V.2, № 5. - P.577-587.

70. Johnson, L.K. Cardiac hypertrophy, aging and changes in cardiac ribosomal RNA gene dosage in man. / L.K. Johnson, R.W. Johnson, B.L. Strehler // Mol Cell Cardiol. 1975. - V.7, №2. - P.125-133.

71. Kirsch-Volders, M. Telomere and centromere association tendencies in the human male metaphase complement. / M. Kirsch-Volders, L. Hens, C. Susanne // Human Genet. 1980. - V.54. - P.69-77.

72. Kirkwood, T.B. Understanding the odd science of aging. / T.B. Kirkwood // Cell. 2005. -V. 120, № 4. - P.437-447.

73. Krause, K.H. Aging: a revisited theory based on free radicals generated by NOX family NADPH oxidases. / K.H. Krause // Exp Gerontol. 2007. - V.42, № 4. - P.256-262.

74. Kuo, B.A. Human ribosomal RNA variants from a single individual and their expression in different tissues. / B.A. Kuo, I.L. Gonzalez, D.A. Gillespie, J.E. Sylvester // Nucleic. Acids Research. 1996. - V.24, №23. - P.4817-4824.

75. Lee, H.C. Oxidative stress, mitochondrial DNA mutation, and apoptosis in aging. / H.C. Lee, Y.H. Wei // Exp Biol Med (Maywood). 2007. - V.232, № 5. - P.592-606.

76. Lezhava, T.A. The activity of nucleolar organizer regions of human chromosomes in extreme old age. / T.A. Lezhava // Gerontology. 1984. — V.30, №2. - P.94-99.

77. Long, E.O. Repeated genes in eukaryotes. / E.O. Long, I.B. Dawid // Ann. Rev. Biochem. 1980. - V.49. - P.727-764.

78. Machwe, A. I. Accelerated methylation of ribosomal RNA genesduring the cellular senescence of Werner syndrome fibroblasts. / A. Machwe, D.K. Orren, V.A. Bohr // Faseb. 2000. - V.14. - P. 1715-1724.

79. McKay, J.A. Folate and DNA methylation during in utero development and aging. / J.A. McKay, E.A. Williams, J.C. Mathers // Biochem Soc Trans. -2004. V.32, №6. - P. 1006-1007.

80. Medvedev, Z.A. Possible role of repeated nucleotide sequences in DNA in the evolution of life spans of differentiated cells. / Z.A. Medvedev // Nature. — 1972. V.237, № 5356. - P.453-454.

81. Meissner, C.Z. Mutations of mitochondrial DNA cause or consequence of the ageing process? / C.Z. Meissner // Gerontol Geriatr. - 2007. - V.40, № 5. -P.325-333.

82. Mikelsaar, A.V. Populational polymorphisms in silver staining of nucleolus organizer regions (NORs) in human acrocentric chromosomes. / A.Y. Mikelsaar, T. IIus // Human Genet. 1979. - V.51. - P.281-285.

83. Miller, D.A. Suppression of human nucleolus organizer activity in mouse-human somatic hybrid cells / D.A. Miller, V.G. Dev, R. Tantravahi, O.J. Miller // Exp. Cell Res. 1976. - V. 101. - P.235-243.

84. Miller, D.A. Regulation of rDNA genes expression in a human 14p+ marker chromosome. / D.A. Miller, W.R. Breg, D. Warburton, Y.G. Dev, O.J. Miller // Human Genet. 1978. - V.43. - P.289-297.

85. Monti, D. Apoptosis—programmed cell death: a role in the aging process? / D. Monti, L. Troiano, F. Tropea, E. Grassilli et al. // Am J Clin Nutr. 1992. -V.55, №6. - P.1208-1214.

86. Morley, A. Somatic mutation and aging. / A. Morley // Ann N Y Acad Sci. -1998. V.20, №854. - P.20-22.

87. Mosgoeller, W. Ribosomal gene transcription is organized in foci within nucleolar components. / W. Mosgoeller, C. Schofer, J. Wesierska-Gadek, M.

88. Steiner, M. Muller, F. Wachtler // Histochem. Cell Biol. 1998. - V.109, №2.t- P.l 11-118.

89. Muiras, M.L. Lack of association between human longevity and genetic polymorphisms in drug-metabolizing enzymes at the NAT2, GSTM1 and

90. CYP2D6 loci. / M.L. Muiras, P. Verasdonck, F. Cottet, F. Schachter // Hum Genet. 1998. - V. 102, №5. - P.526-532.

91. Mullaart, E. DNA damage metabolism and aging. / E. Mullaart, P.H. Lohman, F. Berends, J. Vijg // Mutat Res. 1990. - V.237, №5-6. - P. 189-210.

92. Nass, N. Advanced glycation end products, diabetes and ageing. / N. Nass, B. Bartling et al. // Z Gerontol Geriatr. 2007. - V40, № 5. - P.349-356.

93. Nystrom, T. Conditional senescence in bacteria: death of the immortals. / T. Nystrom // Mol Microbiol. 2003. - V.48, №1. - P. 17-23.

94. Oakes, C.C. Aging results in hypermethylation of ribosomal DNA in sperm and liver of male rats. / C.C. Oakes, D.J. Smiraglia, C. Plass, J.M. Trasler, B. Robaire // Proc Natl Acad Sci USA. 2003. - V.100, №4. P. 17751780.

95. Ohmura, H. Telomere, cellular senescence and transformation. / H. Ohmura, M. Oshimura //Nippon Rinsho. 1993. - V.51, № 7. - P. 1899-1906.

96. Olert, J. Cytological and histochemical studies on the selective silver staining of nucleolus organizer regions (NOR). / J. Olert, G. Sawaitzki, H. Klin, J. Gebauer // Histochem. 1979. -V.60. -P.91-99.

97. Ono, T. Absence of gross change in primary DNA sequence during aging process of mice. / T. Ono, S. Okada, T. Kawakami, T. Honjo, M. Getz // Mech Ageing Dev. 1985. - V.32. - P. 227-234.

98. Payao, S.L. Ribosomal RNA in Alzheimer's disease and aging. / S.L. Payao, M.A. Smith, L.M. Winter, P.H. Bertolucci // Mech. Ageing Dev. -1998. V.105, №3. - P.265-272.

99. Rea, I.M. Paraoxonase polymorphisms PON1 192 and 55 and longevity in Italian centenarians and Irish nonagenarians. A pooled analysis. / I.M. Rea, P.P. McKeown, D. McMaster, I.S. Young et al. // Exp Gerontol. 2004. -V.39, №4. - P.629-635.

100. Pedrazzini, E. Age related decrease of NOR activity in bone marrow metaphase chromosomes from healthy individuals. / E. Pedrazzini, N. Mamaev, I. Slavutsky // Mol. Pathol. 1998. - V.51, №1. - P.39-42.

101. Peterson, C.R. Constancy of ribosomal RNA genes during aging of mouse heart cells and during serial passage of WI-38 cells. / C.R. Peterson, J.R. Cryar, J.W. Gaubatz // Arch Gerontol Geriatr. 1984. - V.3, №2. -P.l 15-125.

102. Petriv, O.I. Lack of peroxisomal catalase causes a progeric phenotype in Caenorhabditis elegans. / O.I. Petriv, R.A. Rachubinski // J Biol Chem. 2004. - V.279, №19. - P. 19996-20001.

103. Richardson, B. Impact of aging on DNA methylation. / B. Richardson // Ageing Res Rev. 2003. - V.2, №3. - P.245-261.

104. Serman, A. DNA methylation as a regulatory mechanism for gene expression in mammals. / A. Serman, M. Vlahovic, L. Serman, F. Bulic-Jakus // Coll Antropol. 2006. - V.30, №3. - P.665-671.

105. Shay, J.W. Use of telomerase to create bioengineered tissues. / J.W. Shay, W.E. Wright // Ann N Y Acad Sci. 2005. - V.l057. - P.479-491.

106. Shay, J.W. Hallmarks of telomeres in ageing research. / J.W. Shay, W.E. Wright // J Pathol. 2007. - V.211, № 2. - P.l 14-123.

107. Shi, H. CpG islands: their potential as biomarkers for cancer. / H. Shi, M.X. Wang, C.W. Caldwell // Expert Rev Mol Diagn. 2007. - V.7, № 5. -P.519-531.

108. Skulachev, V.P. Mitochondrial physiology and pathology; concepts of programmed death of organelles, cells and organisms. / V.P. Skulachev // Mol Aspects Med. 1999. - V.20, № 3. - P. 139-184.

109. Soti, С. Molecular chaperones and the aging process. / C. Soti, P. Csermely // Biogerontology. 2000. - V.l, №3. - P.225-233.

110. Soti, C. Aging and molecular chaperones. / C. Soti, P. Csermely // Exp Gerontol. -2003. -V.38, №10. P. 1037-1040.

111. Soti, C. Apoptosis, necrosis and cellular senescence: chaperone occupancy as a potential switch. / C. Soti, A.S. Sreedhar, P. Csermely // Aging Cell. 2003. - V.2, № 1. - P.39-45.

112. Squier, T.C. Oxidative stress and protein aggregation during biological aging. / T.C. Squier // Exp Gerontol. 2001. - V.36, №9. - P. 1539-1550.

113. Staniszewska, M. Biochemical properties and clinical significance of protein glycation products. / M. Staniszewska, A. Gamian // Postepy Hig Med Dosw. 2003. - V.57, № 2. - P.123-147.

114. Stevnsner, T. Repair of ribosomal RNA genes in hamster cells after UV irradiation, or treatment with cisplatin or alkylating agents. / T. Stevnsner, A. May, L.N. Petersen et al. // Carcinogenesis. 1993. - V. 14. - P. 1591-1596.

115. Strehler, B.L. Roles and mechanisms of rDNA changes during aging. / B.L. Strehler // Birth Defects Orig. Artie. Ser. 1978. - V.14, № 1. - P.449-462.

116. Strehler, B.L. Loss of hybridizable ribosomal DNA from human postmitotic tissues during aging: I. Age-dependent loss in human myocardium. / B.L. Strehler, M.P. Chang, L.K. Johnson // Mech Ageing Dev. 1979a. -V.l 1, №5-6. - P.371-378.

117. Thiry, M. Ultrastructural study of the relationships between the various nucleolar components in Ehrlich tumour and HEp-2 cell nucleoli after acetylation. / M. Thiry, G. Goessens // Exp. Cell Res. 1986. - V.164, №1. -P.232-242.

118. Thomas, S. A longitudinal study of human age-related ribosomal RNA gene activity as detected by silver-stained NORs. / S. Thomas, A.B. Mukherjee // Mech. Ageing Dev. 1996. - V.92, № 2-3. - P. 101 -109.

119. Thorpe, S.R. Role of the Maillard reaction in diabetes mellitus and diseases of aging. / S.R. Thorpe, J.W. Baynes // Drugs Aging. 1996. - V.9, № 2. -P.69-77.

120. Tritschler, H.J. Mitochondrial DNA alterations as a source of human disorders. / H.J. Tritschler, R. Medori // Neurology. 1993. - V.43, № 2. -P.280-288.

121. Tong, T.J. Mechanisms of aging and its theories. / T.J. Tong, Z.Y. Zhang // Sheng Li Ke Xue Jin Zhan. 2007. - V.38, № 1. - P. 14-18.

122. Van Dyke, D.L. Chromosome polymorphism and twin zygosity. / D.L. Van Dyke, C.G. Palmer, W.E. Nance, P.L. Yu // Human Genet. 1977. -V.29.-P.431-437.

123. Vaniushin, B.F. DNA methylation and epigenetics. / B.F. Vaniushin // Genetika. 2006. - V.42, № 9. - P. 1186-1199.

124. Varley, J.M. Patterns of silver staining of human chromosomes. / J.M. Varley // Chromosoma. 1977. - V.61. -P.207-214.

125. Vijg, J. Somatic mutations and aging: a re-evaluation. / J. Vijg // Mutat Res. -2000. V.447, № 1. - P. 117-135.

126. Wachtler, F. Nucleolar changes in human phytohaemagglutinin-stimulated lymphocytes. / F. Wachtler, A. Ellinger, H.G. Schwarzacher // Cell Tissue Res. 1980. - V.213, №2. - P.351-60.

127. Wallace, D.C. Mitochondrial diseases in man and mouse. / D.C. Wallace // Science. 1999. V.283, № 5407. - P. 1482-1488.

128. Warner, H.R. Involvement of DNA repair in cancer and aging. / H.R. Warner, A.R. Price // J Gerontol. 1989. - V.44, № 6. - P.45-54.

129. Warner, H.R. Aging and regulation of apoptosis. / H.R. Warner // Curr Top Cell Regul. 1997. -V.35. - P. 107-121.

130. Wei, Y.H. Oxidative stress and mitochondrial DNA mutations in human aging. / Y.H. Wei // Proc Soc Exp Biol Med. 1998. - V.217, №1. - P.53-63.

131. Yankiwski, V. Nuclear structure in normal and Bloom syndrome cells. / V. Yankiwski, R.A. Marciniak, L. Guarente, N.F. Neff// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - V.97. - P.5214-5219.

132. Yoder, F.E. Cytogenetic and linkage studies of a familial 15pplus variant. / F.E. Yoder, W.B. Bias et al. // Human Genet. 1974. - V.26. -P.535-548.

133. Young, B.D. A new estimate of human ribosomal gene member. / B.D. Young, A. Hell, G.D. Birnie // Biochim. Biophys. Acta. 1976. - V.454. -P.535-548.

134. Zafiropoulos, A. Preferential loss of 5S and 28S rDNA genes in human adipose tissue during ageing / A. Zafiropoulos, E. Tsentelierou, M. Linardakis, A. Kafatos, D.A. Spandidos // Biochem. Cell Biol. 2005. - V.37, №.2. -P.409-415.