Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Фадеев, Федор Алексеевич
- Специальность ВАК РФ03.00.06
- Количество страниц 132
Оглавление диссертации кандидат биологических наук Фадеев, Федор Алексеевич
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Клеточные'рецепторы энтеровирусов человека.
1.1.1. Рецепторная специфичность полиовирусов.
1.1.2. Рецепторная специфичность вирусов Коксаки А.
1.1.3. Рецепторная специфичность вирусов Коксаки В.
1.1.4. Рецепторная специфичность вирусов ECHO.
1.1.5. Рецепторная специфичность энтеровируса 70.
1.2. Роль клеточных рецепторов в проникновении энтеровирусов в клетку.
1.2.1. Механизм интернетизации энтеровирусов.
1.2.2. Особенности прохоэ/сдения стадии интернетизации аффинными к DAF энтер о вирусами.
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Вирусология», 03.00.06 шифр ВАК
Структурно-функциональный анализ генетических полиморфизмов вируса ECHO11, связанных с изменчивостью рецепторной специфичности2014 год, кандидат наук Резайкин, Алексей Васильевич
Ультраструктурная и цитохимическая характеристика макрофагов, инфицированных РНК-содержащими вирусами2009 год, доктор биологических наук Плехова, Наталья Геннадьевна
Оптимизация условий культивирования вируса чумы мелких жвачных для получения диагностических и вакцинных препаратов2008 год, кандидат ветеринарных наук Капускин, Егор Вадимович
Структурно-функциональный анализ мембранных белков вирусов в генетически трансформированных клетках1996 год, доктор биологических наук Тугизов, Шароф Мавлонович
Иммуномодулирующее действие противовирусного препарата фоспренил в норме и при экспериментальной гриппозной инфекции2004 год, кандидат биологических наук Григорьева, Екатерина Анатольевна
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изменчивость рецепторной специфичности вируса ECHO11»
Актуальность проблемы. Энтеровирусы являются возбудителями широкого спектра инфекционных заболеваний от ОРЗ до полиомиелита и энцефалита [1, 3]. Одним из ключевых параметров, ограничивающих круг хозяев вируса и определяющих его тканевой и органный тропизм, является рецепторная специфичность [19, 63, 96, 127]. Исследование особенностей взаимодействия с клеточными рецепторами имеет фундаментальное значение для понимания молекулярных основ тропизма этих вирусов к определённым видам клеток, а также для объяснения особенностей патогенеза и клинического течения энтеровирусных инфекций.
Консерватизм структуры клеточных рецепторов, выполняющих определенные физиологические функции, обусловливает стабильность формы вирусного антирецептора, поэтому этап специфической адсорбции энтеровирусов может рассматриваться как одна из наиболее эффективных точек приложения для разработки противовирусных препаратов. Блокирование репродукции энтеровирусов до проникновения в клетку позволило бы получить менее токсичные противовирусные препараты по сравнению с препаратами, действующими внутриклеточно [78, 79, 131]. Кроме того, формирование лекарственной устойчивости вирусов к таким препаратам должно быть затруднено по причине нежизнеспособности мутантов. Таким образом, проблема специфичности рецепторного взаимодействия энтеровирусов может быть рассмотрена в двух аспектах: в аспекте разнообразия используемых энтеровирусами клеточных рецепторов и в аспекте внутритиповой изменчивости энтеровирусов, позволяющей им использовать альтернативные клеточные рецепторы.
Многие представители рода Enterovirus (большинство вирусов ECHO и некоторые вирусы Коксаки А) в качестве основного клеточного рецептора используют белок DAF (фактор ускорения диссоциации, CD55), присутствующий на мембране ядросодержащих клеток, а также на эритроцитах и тромбоцитах. Взаимодействие энтеровирусов с эритроцитарным рецептором DAF in vitro вызывает феномен гемагглютинации [29, 71, 102, 112]. В то же время, известно, что некоторые штаммы этих вирусов могут использовать независимый от DAF путь проникновения в клетки с помощью альтернативных рецепторов [36, 37, 49, 58, 92].
Ранее было установлено, что в популяциях гемагглютинирующих (ГА) клонов вируса ECHO 11 (признак daf +) обнаруживаются негемагглютинирующие мутанты, утратившие сродство к рецептору DAF (признак daf~). Доля daf мутантов в вирусной популяции имела близкие величины в двух последовательных пассажах daf + клонов, что свидетельствовало о равновесной структуре популяции в отношении данного признака. На культуре фибробластов эмбриона человека (ФЭЧ) была экспериментально доказана нейтральность мутации, приводящей к утрате сродства к DAF. Средняя частота daf~ мутантов в составе daf+ клона (3-10-5) соответствовала вероятности возникновения нуклеотидной замены в определенной позиции у РНК-геномных вирусов (10"4 - 10"5), что позволяло высказать предположение о точковом характере мутации, приводящей к изменению рецепторной специфичности вируса ECHO 11 [70]. Было показано, что на перевиваемой культуре клеток JI-41 наблюдалось резкое ограничение инфекционной активности daf + клонов вируса ЕСН011, полученных на культуре ФЭЧ. В пассажах на клетках JI-41 было выявлено постепенное снижение ГА активности вируса, сопровождавшееся выравниванием его инфекционной активности на обеих клеточных культурах (ФЭЧ и JI-41) [12]. В то же время, оставались неизвестными локализация мутации, обусловливающей изменение рецепторной специфичности вирусов ECHO, а также причины утраты вирусом ГА активности при адаптации к клеткам JI-41.
Цель исследования. На модели вируса ECHO 11 выяснить механизм селекции энтеровирусов по признаку рецепторной специфичности при репродукции в клеточных культурах и установить молекулярно-генетические основы феномена изменчивости данного признака.
Задачи работы:
1. Картировать мутации, обусловливающие утрату вирусом ECHO 11 аффинности к рецептору DAF.
2. Оценить характер изменения рецепторной специфичности вируса ECHO 11 при адаптации с перевиваемой культуры RD (клетки рабдомиосаркомы человека) к культурам JT-41 (клетки крови больного острым моноцитарным лейкозом) и НЕр-2 (клетки карциномы гортани человека).
3. Выяснить механизм селекции мутантов с измененной рецепторной специфичностью при репродукции вируса ECHO 11 на клеточных культурах JI-41 и НЕр-2.
4. Сравнить репродуктивную активность daf+ вариантов и daf~ мутантов в бластных клетках, выделенных из крови больного острым миелоидным лейкозом (OMJI).
5. Изучить особенности репродукции вируса ECHO 11 на перевиваемой культуре клеток почки африканской зеленой мартышки BGM.
Положения, выносимые на защиту:
1) Рецепторная специфичность вируса ECHOl 1 является вариабельным признаком: существуют мутантные неаффинные к DAF формы данного вируса, использующие для адсорбции на клеточной мембране альтернативные рецепторы.
2) Утрата вирусом ECHO 11 сродства к рецептору DAF обусловлена единичными аминокислотными заменами в участке белка VP2, образующем антирецептор.
3) Адаптация вируса ECHO 11 к клеточным культурам JI-41 и НЕр-2 сопровождается селекцией по признаку рецепторной специфичности и накоплением в популяции мутантов, не имеющих сродства к DAF.
4) Селекция daf ~ мутантов на клетках JI-41 и НЕр-2 обусловлена меньшей продолжительностью периода их интернализации по сравнению с исходным daf+ вирусом.
Научная новизна работы. Обнаружены ранее не описанные мутации, приводящие к утрате вирусом ECHO 11 способности связываться с рецептором DAF.
Впервые установлено, что позитивная селекция daf ' мутантов при адаптации daf+ клонов вируса ECHOl 1 к клеточным культурам J1-41 и НЕр-2 обусловлена низкой скоростью интернализации частиц с daf+ фенотипом.
Показано, что рестрикция репродуктивной активности daf + варианта вируса ECHOl 1 на клетках обезьяны BGM не связана с этапом адсорбции.
Впервые описаны селективные свойства бластных клеток, выделенных из крови больного OMJI, в отношении daf + и daf ~ вариантов вируса ЕСНОП.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследования дополняют современные представления об изменчивости рецепторной специфичности энтеровирусов как об адаптационном механизме, расширяющем диапазон чувствительных клеток, а также о роли данного феномена в патогенезе энтеровирусных инфекций. Результаты оценки чувствительности клеточных культур к вариантам вируса ЕСНОП могут быть использованы для оптимизации методики выделения аффинных к DAF энтеровирусов из клинического материала.
Внедрение результатов исследования и апробация работы. Материалы исследований внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Росздрава.
Основные результаты работы представлены и обсуждены на I конференции иммунологов Урала (г. Екатеринбург, 2001); 57-й, 58-й, 59, 60-й, 61-й, 62-й и 63-й межвузовских научно-практических конференциях молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» (г. Екатеринбург, 2002, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007, 2008 гг.); IV межрегиональной научно-практической конференции с международным участием ОГМА (г. Омск, 2003 г.); Межрегиональной научной конференции (г. Томск, 2003 г.); конференции УрО РАН «Вирусы и иммунитет» (г. Екатеринбург, 2003 г.); III конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (г. Москва, 2004 г.), региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы вирусных инфекций в современный период» (г. Екатеринбург, 2007 г.).
По теме исследования опубликованы 18 научные работы, из них 3 в рецензируемых журналах.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, главы литературного обзора, 3 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 13 отечественных и 154 зарубежных источника, и приложений. Диссертация имеет объем 132 страницы, иллюстрирована 17 таблицами и 14 рисунками.
Похожие диссертационные работы по специальности «Вирусология», 03.00.06 шифр ВАК
Разработка и совершенствование биотехнологических приемов приготовления рабического антигена для производства гетерологичного антирабического иммуноглобулина2013 год, кандидат биологических наук Матвеева, Жанна Владимировна
Изучение формирования сывороточных антител к нейраминидазе пандемического, потенциально пандемического и сезонных вирусов гриппа А в эксперименте и клинических наблюдениях2011 год, кандидат биологических наук Смолоногина, Татьяна Анатольевна
Инфекционная анемия: разработка диагностических тест-систем РДП и ИФА на основе антигена культурального вируса2001 год, кандидат биологических наук Люлькова, Лариса Сергеевна
Получение суспензионной перевиваемой линии клеток тестикул поросенка и оптимизация условий ее культивирования2009 год, кандидат биологических наук Жданова, Наталья Александровна
Роль унифицированной системы вирусологического мониторинга в эпидемиологическом надзоре за полиомиелитом и энтеровирусными инфекциями в крупном промышленном регионе2013 год, кандидат наук Снитковская, Татьяна Эдуардовна
Заключение диссертации по теме «Вирусология», Фадеев, Федор Алексеевич
ВЫВОДЫ
1) Рецепторная специфичность вируса ECHOl 1 является вариабельным признаком: помимо основного рецептора DAF для адсорбции на клеточной мембране вирус может использовать альтернативные рецепторы. Утрата вирусом ECHO 11 сродства к DAF обусловлена точковой мутацией по ограниченному числу сайтов в участке белка VP2, образующем антирецептор.
2) Адаптация daf + вируса ECHOll, выделенного на клетках RD, к культурам JI-41 и НЕр-2 сопровождается изменением рецепторной специфичности вирусной популяции. Происходит позитивная селекция daf~ мутантов с расширенным диапазоном клеток-хозяев.
3) Ограничение репродуктивной активности исходного daf+ вируса по сравнению с daf ~ hr + мутантами на клетках JI-41 и НЕр-2 не связано с уровнем его адсорбции на клеточной мембране, а обусловлено большей продолжительностью периода интернализации на этих культурах.
4) Рестрикция инфекционной активности daf + варианта вируса ECHOll, наблюдаемая на клеточной культуре BGM, не связана с этапом адсорбции. Адаптированный к клеткам BGM вирус сохраняет аффинность к человеческому рецептору DAF.
5) Властные клетки, выделенные из крови больного OMJI, поддерживают репродукцию daf+ варианта вируса ECHOll, в то время как daf hr + мутант не проявляет репродуктивную активность на данной культуре.
1.3. Заключение
На основании проведенного обзора литературы можно сделать следующее заключение:
1) В настоящее время известно более 10-ти клеточных рецепторов, используемых различными энтеровирусами. Показано, что в некоторых случаях для инфицирования клетки, необходимо взаимодействие вириона одновременно с двумя (или более) мембранными молекулами разных типов. При этом один из рецепторов фиксирует вирион на поверхности клетки, а другой участвует в запуске процесса интернализации комплекса вируса с рецептором. Однако современные сведения о рецепторной специфичности энтеровирусов недостаточно полно отражают спектр используемых ими клеточных рецепторов.
2) Основным клеточным рецептором для многих энтеровирусов (в том числе ECHOll) является белок DAF (CD55). Способность некоторых представителей рода к агглютинации эритроцитов обусловлена их сродством к этому рецептору. Наличие DAF на мембране клетки является необходимым, но недостаточным условием для ее инфицирования daf + вирусом. Проникновение вируса в цитозоль возможно только при взаимодействии с корецепторами (CD59; р2-микроглобулин и, вероятно, другими).
3) После связывания с рецептором на клеточной мембране вирион превращается в А-частицу, образующую трансмембранную пору, через которую вирусная РНК проникает в цитозоль (пустой капсид остается снаружи). Индуктором процесса трансформации вируса в А-частицу является взаимодействие рецептора с поверхностью каньона, окружающего вершину каждого пентамера капсида. Рецептор DAF связывается с капсидом южнее каньона, в то время как функцию взаимодействия с каньоном берет на себя корецептор. Аффинные и неаффинные к DAF энтеровирусы используют принципиально разные механизмы проникновения в клетку: необходимым условием для запуска интернализации daf + вируса является эндоцитоз комплекса вирус-рецептор в «липидных плотах» или кавеолах, тогда как daf вирусы используют альтернативный путь интернализации без участия кавеолина.
4) Существование феномена изменчивости рецепторной специфичности энтеровирусов можно считать доказанным. Многие вирусы Коксаки, ECHO и EV70 для инфицирования клетки могут использовать более одного клеточного рецептора. Разнообразие рецепторной специфичности для одного и того же серотипа обеспечивается за счет спонтанных мутаций в структурной части генома. Таким образом, популяции как природных, так и лабораторных штаммов указанных вирусов являются гетерогенными по признаку рецепторной специфичности. В то же время, молекулярно-генетические основы феномена изменчивости рецепторной специфичности, а также причины и механизм селекции вируса по данному признаку остаются неизученными.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Вирусы
Прототипный штамм Gregory вируса ECHO 11 получен из Института полиомиелита и вирусных энцефалитов (г. Москва). Штамм 7611 вируса ECHOl 1 является клиническим изолятом от больного серозным менингитом.
Вирусные клоны ранее были выделены из исходных штаммов методом бляшек под агаровым покрытием (3-4-х кратное клонирование «из бляшки-в бляшку»). Гемагглютинирующие (daf ) клоны 5.9.11.5 (штамм 7611) и G3123 (штамм Gregory) получены на первичной клеточной культуре ФЭЧ, daf " клон 111 (штамм 7611) - на перевиваемой культуре клеток рабдомиосаркомы человека RD. Негемагглготинирующие {daf "") клоны выделены на культуре ФЭЧ по схеме, представленной на рисунке 2: из клона 5.9.11.5 - 101 и 103, из клона G3123 - G28 и G70 [70]. Полученные вирусные клоны размножали в тех же культурах клеток, в которых они были выделены.
5.9.11.5 Л
7611
ФЭЧ)
ФЭЧ) (ФЭЧ) (ФЭЧ) (ФЭЧ)
101
ФЭЧ) 103
ФЭЧ)
KD)
RD)
111
ДОУ)
Gregory
ФЭЧ)
ФЭЧ) (ФЭЧ)
G3123
ФЭЧ)
0G28 s (ФЭЧ)
G70
ФЭЧ)
Рисунок 2. Схема получения daf" и daf клонов из штаммов Gregory и 7611 вируса ECHOl 1. В скобках указана клеточная культура, на которой был получен штамм/клон.
2.2. Первичная культура фибробластов эмбриона человека
Первичную культуру фибробластов эмбриона человека получали модифицированным методом холодной трипсинизации. Эмбрионы, извлеченные в результате искусственных абортов в сроке беременности 8-12 недель, помещали в раствор Хенкса с антибиотиками: пенициллином (500 ЕД/мл), гентамицином (100 мкг/мл) и нистатином (400 ЕД/мл). Кожно-мышечные ткани отмывали от сгустков крови и помещали на 30 мин. в чашку Петри с раствором Хенкса, содержащим антибиотики в высокой концентрации: пенициллин - 5000 ЕД/мл, гентамицин - 500 мкг/мл, нистатин - 2000 ЕД/мл. Отпрепарированный материал измельчали ножницами до получения гомогенной массы, заливали 0,25% раствором трипсина в соотношении объемов материала и раствора 1:5 и оставляли на 18 часов при 4°С. После окончания инкубации материал отмывали раствором Хенкса и суспендировали его энергичным встряхиванием в среде Игла. Полученную клеточную суспензию центрифугировали в течение 30-40 сек. при 3000 об./мин. для осаждения слизи (при этом клетки оставались во взвеси), после чего разводили ее средой Игла до концентрации 300-400 тыс. клеток/мл и добавляли сыворотку крупного рогатого скота (10% от объема среды), а также антибиотики: пенициллин - 100 ЕД/мл, гентамицин - 20 мкг/мл и нистатин — 40 ЕД/мл.
Фибробласты выращивали в монослое в культуральных флаконах.
2.3. Перевиваемые клеточные культуры
Перевиваемые клеточные культуры RD (клетки рабдомиосаркомы человека), JI-41 КД/84 (дериват линии J-96, полученной из клеток крови больного острым моноцитарным лейкозом), НЕр-2 (клетки карциномы гортани человека) и BGM (клетки почки африканской зеленой мартышки) получены из вирусологической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области».
Клетки выращивали в монослое в пластиковых культуральных флаконах (Corning-Costar) при 37°С. Для культивирования клеток RD использовали смесь питательных сред Игла (MEM с двойным набором аминокислот и витаминов) и RPMI-1640 с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки (производство HyClone) или 10% коровьей сыворотки. Клеточный монослой снимали с пластика раствором Версена.
Клетки Л-41 и НЕр-2 выращивали на смеси сред Игла (MEM) и 199 с добавлением 5% эмбриональной телячьей или 10% коровьей сыворотки; клетки BGM - на модифицированной по Дульбекко минимальной среде Игла (DMEM), содержащей 10% сыворотки теленка. Клетки Л-41, НЕр-2 и BGM снимали с пластика смесью растворов Версена и трипсина в соотношении 1:1.
В среды роста для перевиваемых клеточных культур добавляли антибиотики в той же концентрации, что и для первичной культуры ФЭЧ.
При пересевах суспензию клеток разводили питательной средой в 3-4 раза (культура RD) или в 5-6 раз (остальные клеточные культуры) по сравнению с исходным объемом среды.
В качестве среды поддержания во всех случаях использовали основную среду Игла с антибиотиками, но без добавления сыворотки.
2.4. Адаптация вируса к новой клеточной культуре методом неразведенных пассажей
Клеточный монослой в культуральном флаконе заражали 200 мкл вируссодержащей жидкости и инкубировали его при 37°С до полной дегенерации клеток. Последующие пассажи проводили по той же схеме инокуляцией материала предыдущего пассажа в новый флакон с клеточным монослоем. Изучение свойств адаптированного вируса осуществляли после 10-12 последовательных пассажей.
2.5. Культивирование вируса ECHOll в бластных клетках, выделенных из крови больного острым миелоидным лейкозом
Для культивирования вируса использовали бластные клетки, выделенные из крови больного OMJI без созревания (Ml) после лейкафереза. Примесь эритроцитов из лейкоконцентрата удаляли центрифугированием в растворе фиколл-урографина (р= 1,077 г/мл) при 1500 о б./мин. в течение 15 мин. (соотношение объемов раствора и клеток 4:1). Клетки, оставшиеся над слоем фиколл-урографина, собирали пипеткой, двукратно отмывали раствором Эрла и ресуспендировали в смеси сред Игла и RPMI-1640 с добавлением 10% коровьей сыворотки, доводя до концентрации 150 тыс. клеток/мл среды. Полученную клеточную суспензию разливали в культуральные флаконы по 4 мл и- инфицировали ее 100 мкл фотосенсибилизированного вируса (множественность заражения - около 100 БОЕ/клетку). Флаконы с клетками инкубировали при 37°С в течение 120 часов, после чего засвечивали их лампой накаливания в течение 20 мин. для инактивации остатков фотосенсибилизированного вируса. Инфекционную активность полученного вирусного урожая определяли на той же клеточной культуре, к которой был адаптирован использованный для заражения бластных клеток вирус.
Для контроля полноты фотоинактивации вируса 100 мкл исходного препарата, использованного для заражения клеток, разводили во флаконе с 4 мл среды Игла. Содержимое флакона подвергали воздействию света и определяли его остаточную инфекционную активность.
Выживаемость клеток в питательной среде оценивали с использованием трипанового синего, смешивая равные объемы клеточной суспензии и 0,1 % раствора красителя. После инкубации смеси при комнатной температуре в течение 10 мин. подсчитывали процент окрашенных клеток в камере Горяева. Непосредственно после очистки лейкоцитарной массы от эритроцитов доля погибших клеток составляла около 5%; при инкубации при
37°С в незараженном вирусом контроле выживаемость клеток через 72 часа составила 80%, а через 120 часов - 50%.
2.6. Постановка реакции бляшкообразования и клонирование вируса
Для постановки реакции бляшкообразования (РБО) использовали плотный клеточный монослой в пластиковом культуральном флаконе (площадь 25см ). После удаления среды роста клетки заражали соответствующим разведением вируссодержащей жидкости в объеме 200 мкл и инкубировали их при 20°С в течение 40мин. По завершении инкубации из флакона удаляли инокулят; клеточный монослой двукратно отмывали раствором Эрла и наносили на него питательное агаровое покрытие в объеме 10 мл.
Для приготовления питательного агарового покрытия использовали модифицированную пропись [54]. На 100 мл покрытия непосредственно перед использованием готовили два раствора следующего состава: Раствор А:
Бидистиллированная вода - 28,5 мл
10-кратный концентрат раствора Эрла без фенолового красного- 10 мл (использование смеси этого ингредиента с 10-кратным концентратом среды 199 в объемном соотношении 2:1 позволяло продлить время, в течение которого клетки сохраняли жизнеспособность под агаровым покрытием) Сыворотка эмбриональная телячья - 5 мл Раствор ЗМ хлорида магния - 1 мл Раствор 3% глутамина- 1 мл Раствор 0,1% нейтрального красного- 1,5 мл Раствор 7,5% гидрокарбоната натрия - 1,2 мл Раствор бензилпенициллина 100000 ЕД/мл - 100 мкл Раствор гентамицина сульфата 40 мг/мл - 50 мкл Спиртовый раствор нистатина 200000 ЕД/мл — 25 мкл
Раствор Б:
Бидистиллированная вода - 50 мл
Агар Difco - 0,9 г
Раствор Б нагревали до 100°С на водяной бане в течение часа и добавляли к нему 40 мг протамина сульфата, растворенного в небольшом объеме горячей воды. Охладив раствор Б до 42°С, его смешивали с раствором А, при температуре смеси 38°С ее наносили на клеточный монослой. После застывания агара культуральные флаконы переворачивали вверх монослоем и инкубировали в темноте при 37°С. Подсчет количества бляшек проводили через 72 часа.
Для выделения вирусных клонов использовали бляшки, отстоящие от соседних не менее чем на 20 мм. Небольшую пробу агара из центра бляшки отбирали пастеровской пипеткой с изогнутым концом, после чего взятый образец растворяли в 1 мл среды Игла.
2.7. Получение фотосенсибилизированного вируса
Репродукция вируса в среде поддержания с добавлением нейтрального красного сопровождается включением в капсид молекул красителя. Под воздействием видимой части спектра света в сенсибилизированных вирусных частицах происходит разрушение РНК, вследствие чего они утрачивают инфекционность. После проникновения нуклеиновой кислоты в цитозоль клетки происходит отделение от нее красителя, в результате чего вирус становится нечувствительным к свету. Таким образом, утрата фотосенсибилизированным вирусом (ФСВ) светочувствительности свидетельствует о том, что вирусная РНК находится внутри клетки и, соответственно, является сигналом окончания интернализации [76].
Для получения ФСВ клеточный монослой заражали исходным вирусным материалом в объеме 200 мкл (титр 105 БОЕ/мл). После 30-минутной адсорбции при 20°С клетки отмывали от несвязавшегося вируса, добавляли среду поддержания, содержащую 0,001% нейтрального красного
ICN Pharmaceuticals, Inc.), и инкубировали при 37°C в темноте до полной дегенерации монослоя. Для проведения экспериментов использовали вирус после двух пассажей на среде с нейтральным красным. Полученный ФСВ хранили во флаконе с непрозрачными стенками, все манипуляции с ним проводили при очень слабом освещении.
Светочувствительность ФСВ оценивали методом конечных разведений, используя его десятикратные разведения для заражения флаконов с клеточным монослоем. После инкубации при 20°С в течение 30 мин. монослой отмывали раствором Эрла от неадсорбировавшегося вируса; флаконы подвергали засветке (контрольные оставляли в темноте) и переносили их в термостат (37°С) на 72 часа. Для фотоинактивации вируса использовали лампу накаливания мощностью 100 Вт, время засветки составляло 20 мин., расстояние между лампой и флаконами - около 50 см. Светочувствительность вируса оценивали, сравнивая показатели его ТЦД5о в контрольных «незасвеченных» и подвергшихся воздействию света флаконах. Титр ФСВ после «засветки» уменьшался на 3 порядка. Приблизительно такого же уровня фотоинактивации (в 300-400 раз) удалось ранее добиться Huang et al. [76] в работе с использованием фотосенсибилизированного полиовируса. Таким образом, ФСВ, не инактивировавшийся светом, давал погрешность менее 1% и потому не оказывал заметного влияния на результаты описанных в диссертации экспериментов.
2.8. Оценка гемагглютинирующей активности вируса
Гемагглютинирующую активность вируса определяли микрометодом [7, 9, 13] с использованием последовательных двукратных разведений вируссодержащей жидкости в 50 мкл раствора Эрла, содержащего 0,05% человеческого сывороточного альбумина. К разведениям вируса добавляли по 50 мкл 1% взвеси эритроцитов человека. Планшеты инкубировали при 4°С в течение часа, после чего учитывали результат реакции. ГА активность вируса выражали в гемагглютинирующих единицах (ГАЕ).
2.9. Оценка инфекционной активности вируса
Инфекционную активность вируса оценивали методом конечных разведений, определяя величину 50% тканевой цитопатогенной дозы (ТЦД50) в 1 мл вируссодержащей жидкости, а также в РБО (в этом случае концентрацию вируса выражали в количестве бляшкообразующих единиц, содержащихся в 1мл вируссодержащей жидкости, БОЕ/мл).
Последовательные десятикратные разведения исследуемой вируссодержащей жидкости готовили в лунках пластмассового планшета, содержащих по 0,9 мл среды Игла. В первую лунку вносили 100 мкл титруемого материала и, сменив наконечник дозатора, тщательно перемешивали ее содержимое, после чего 100 мкл десятикратно разведенной вируссодержащей жидкости переносили в следующую лунку. Процедуру повторяли до получения необходимого разведения вируса.
При титровании методом конечных разведений в культуральные флаконы с клеточным монослоем вносили по 100 мкл предварительно приготовленных разведений вируса от 10"1 до 10"9 (не менее 4 флаконов для каждого разведения). Флаконы с инфицированными клетками помещали в термостат и инкубировали при 37°С. Результат реакции учитывали на 5 день по деструкции монослоя. ТЦД5о вируса в исходном препарате вычисляли по методу Рида-Менча [9].
Инфекционную активность в РБО определяли по формуле: 10г 1=Х
V ' где I - инфекционная активность вируса в исходном препарате (БОЕ/мл); X - среднее количество бляшек в флаконах; V — объем инокулята (мл), использованного для заражения клеток; i — показатель степени разведения исходного препарата.
Для вычисления инфекционной активности одного вирусного препарата РБО проводили минимум в четырех флаконах с клеточным монослоем, при этом общее число подсчитанных бляшек составляло не менее 80.
2.10. Оценка уровня адсорбции вируса ЕСНОП на клеточной мембране
Клеточный монослой снимали с пластика культурального флакона раствором Версена (без добавления трипсина). Клетки (около 8млн.) осаждали центрифугированием, однократно отмывали раствором Эрла и суспендировали в 0,5 мл исследуемой вируссодержащей жидкости. Полученную взвесь инкубировали при 4°С в течение часа, периодически ее встряхивая, затем клетки осаждали центрифугированием и определяли остаточную • инфекционную активность надосадочной жидкости. Сопоставление инфекционной активности вируса до и после инкубации с клетками позволяло оценить уровень его адсорбции на исследуемой клеточной культуре.
2.11. Оценка скорости интернализации вируса
Оценку скорости интернализации адсорбированного на поверхности клеток вируса осуществляли с использованием фотосенсибилизированных клонов в модифицированном варианте РБО. В культуральные флаконы с клеточным монослоем вносили ФСВ в соответствующем разведении и выдерживали их при 20°С в течение 40 мин. После отмывания клеток от несвязавшегося вируса раствором Эрла флаконы разделяли на партии (не менее трех флаконов в каждой) и помещали их в термостат (температура 37°С). Флаконы, используемые для оценки. полноты фотоинактивации вируса, оставляли при 20°С. Через определенные интервалы времени (20 мин., 45 мин., 60 мин. и 90 мин.) очередную партию флаконов извлекали из термостата и оставляли в темноте при 20°С. После извлечения из термостата последней партии все флаконы одновременно засвечивали лампой накаливания в течение 20 мин. Вирусные частицы, проникшие в клетку за время инкубации при 37°С, утрачивали светочувствительность вследствие отделения в цитозоле красителя от РНК, в то время как не завершившие интернализацию частицы инактивировались светом. После нанесения на клетки агарового покрытия флаконы вновь переносили в термостат и выдерживали в течение 72 часов до формирования бляшек. Контрольные флаконы, используемые для подсчета количества бляшек, формирующихся на незасвеченном монослое, не подвергали воздействию света. Сравнение количества бляшек, образовавшихся в «засвеченных» культуральных флаконах, и в контрольных, не подвергшихся воздействию света, позволяло оценить долю вирусных частиц, проникающих в клетку за время инкубации при 37°С до момента фотоинактивации вируса.
2.12. Определение доли вирусных частиц, утрачивающих инфекционность после адсорбции на клетках
В пластиковый культуральный флакон с клеточным монослоем (площадь монослоя 25 см", около 2,5 млн. клеток) вносили 1 мл вируссодержащей жидкости. Адсорбцию вируса на клетках проводили при 20°С в течение 40 мин., после чего клеточный монослой трехкратно отмывали раствором Эрла.
Флаконы с адсорбированным на клетках вирусом переносили в термостат и выдерживали при 37°С в течение 60 мин.; контрольные флаконы продолжали инкубировать при прежней температуре 20°С. После завершения инкубации клетки соскабливали с пластика и ресуспендировали в 0,9 мл среды Игла, для увеличения степени дисперсности клеточную взвесь многократно перемешивали, набирая ее в пипетку и выпуская обратно. К полученной суспензии добавляли 100 мкл 0,25% раствора дезоксихолата натрия и инкубировали ее при 20°С в течение 30 мин. при постоянном энергичном перемешивании для предотвращения образования клеточных конгломератов. По окончании инкубации клеточный детрит удаляли центрифугированием. Сравнение инфекционной активности элюата в контроле (20°С) и после инкубации при 37°С позволяло определить долю вирусных частиц, не подвергающихся интернализации после адсорбции на мембране клеток.
2.13. Секвенирование генома вируса ECHOll
Выделение вирусной РНК проводили методом сорбции на силикагеле с помощью комплекта реагентов "РИБО-сорб" (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва). Для проведения обратной транскрипции использовали набор "PEBEPTA-L-100" того же производителя.
Структурную часть генома (около 3 тыс. оснований, кодирующих белки вирусного капсида VP1 - VP4) амплифицировали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в виде шести перекрывающихся сегментов. Праймерные последовательности были подобраны с использованием полных нуклеотидных последовательностей генома вируса ECHOll из GenBank (AY167103, AY167104, AY167105, AY167106, AJ276224, AJ577589, AJ577590, AJ577594, Х80059, DQ092796) с учетом высококонсервативных участков (табл. 2).
Для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) готовили реакционную смесь, включающую следующие компоненты: 2 ед. ДНК-полимеразы ("ДиаТак", ЦНИИ эпидемиологии, Москва), 0,2 шМ смеси dNTP, по 15 рМ каждого из двух праймеров, реакционный буфер (67 шМ Трис-НС1, рН 8,3, 2,5 шМ MgCb). ПЦР проводили в следующем режиме: 1-й цикл -95°С - 3 минуты; 42 цикла - 95°С - 10 секунд, 48°С - 10 секунд, 72°С - 40 секунд; заключительный цикл - 72°С - 5 минут.
Анализ продуктов амплификации осуществляли методом электрофореза в 2% агарозном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием (0,5 мг/мл) и детекцией в ультрафиолетовом трансиллюминаторе.
Секвенирование ДНК проводили на автоматическом генетическом анализаторе ABI Prism 310 (Applied Biosystems, США) с использованием реакционной смеси ABI Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit v.3.0 (Applied Biosystems, США) по прямой (праймеры IS, 2S, 3S, 4S, 5S, 6S) и обратной (праймеры 1A, 2A, ЗА, 4A, 5A, 6A) последовательностям.
Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Фадеев, Федор Алексеевич, 2008 год
1. Архангельская, Э.И. Этиология серозного менингита (по материалам г. Омска) Текст. / Э.И. Архангельская, Т.Г. Змейкова, С.Ф. Скубенко // Вирусные инфекции: Респ. сб. научн. трудов — Свердловск: СНИИВИ, 1991- С.48-50.
2. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях Текст. / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев Л.: Медгиз, 1962.-180 с.
3. Ворошилова, М.К. Энтеровирусные инфекции человека Текст. / М.К. Ворошилова-М.: Медицина, 1979.-360 с.
4. Выгодский, М.Я. Справочник по элементарной математике Текст. / М.Я. Выгодский-М.: Наука, 1979.-335 с.
5. Гендон, Ю.З. Генетика вирусов человека и животных Текст. / Ю.З. Гендон.- М.: Наука, 1967,- 356 с.
6. Гланц С.А. Медико-биологическая статистика Текст. / С.А. Гланц, -М.: Практика, 1999. - 459 с.
7. Егоров, А.А. К методике выявления гемагглютинирующей активности энтеровирусов Текст. / А.А Егоров, Н.В. Амбарцумова // Микробиол. ж.- 1989.- Т.51, №4.- С. 95-97.
8. Злобин В.И. Изучение и оценка генетических признаков штаммов вируса полиомиелита, выделенных в период применения живой полиомиелитной вакцины Текст.: автореферат дисс. . канд. мед. наук.: 03.00.06 /В.И. Злобин Свердловск, 1976.-26 с.
9. Карышева, А.Ф. Руководство по практической вирусологии Текст. / А.Ф. Карышева, В.Н. Сюрин-Кишинев: Штиинца, 1980.-212 с.
10. Лакин, Г.Ф. Биометрия: учеб. пособие для биол. спец. вузов Текст. / Г.Ф. Лакин-М.: Высш. шк., 1990.-352 с.
11. Лашкевич, В.А. О статистической оценке результатов титрования инфекционности некоторых вирусов методом бляшек Текст. / В.А.
12. Лашкевич, Г.Х. Кодкинд, А.А. Мискин // Вопр. Виру со л,- 1980 №5 — С. 563-566.
13. Новоселов, А.В. Генетический анализ гемагглютинирующих свойств энтеровирусов (на модели вируса ECHO 11) Текст.: автореферат дисс. . канд. мед. наук: 03.00.06 / А.В. Новоселов-М., 1994.-23 с.
14. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования Текст. / под ред. М.О. Биргера М.: Медицина, 1982.— 464 с.
15. A monoclonal antibody specific for the cellular receptor for the group В coxsackieviruses Text. / K.H. Hsu, K. Lonberg-Holm, B. Alstein, R.L. Crowell //J. Virol.- 1988.-Vol.62 (5).-P. 1647-1652.
16. A novel cell entry pathway for DAF-using human enterovirus is dependent on lipid rafts Text. / A.D. Stuart, H.E. Eustace, T.A. McKee, T.D.K. Brown //J. Virol.- 2002.-Vol. 76 (18).-P. 9307-9332.
17. Alexander, D.A. Sialic acid functions in enterovirus 70 binding and infection Text. / D.A. Alexander, K. Dimock .// J. Virol.- 2002.- Vol.76 (22).-P.l 1265-11272.
18. Baranowski, E. Evolution of cell recognition by viruses Text. / E. Baranowski, C.M. Ruiz-Jarabo, E. Domingo // Science 2001 - Vol.292.-P. 1102-1105.
19. Binding to decay-accelerating factor is not required for infection of human leukocyte cell lines by enterovirus 70 Text. / A. Haddad, M.R. Nokhbeh, D.A. Alexander, S J. Dawe, C. Grise, N. Gulzar, K. Dimock // J. Virol -2004.-Vol.78 (6).-P.2674-2681.
20. Bubeck, D. Cryo-electron microscopy reconstruction of a poliovirus-receptor-membrane complex Text. / D. Bubeck, D.J. Filman, J.M. Hogle // Nat. Struct. Mol. Biol.- 2005.- Vol.12 (7).-P.615-618.
21. Canyon rim residues, including antigenic determinants, modulate serotype-specific binding of polioviruses to mutants of the poliovirus receptor Text. / J. Harber, G. Bernhardt, H.H. Lu, J.Y. Sqro, E. Wimmer. // Virology.-1995.- Vol.214 (2).-P.559-570.
22. Cardiovirulent coxsackieviruses and the decay-accelerating factor (CD55) receptor Text. / T.A. Martino, M. Petric, M. Brown, K. Aitken, C. Gauntt, C.D. Richardson, L.H. Chow, P.P. Liu // Virology.- 1998.- Vol.244.- P. 302-314.
23. Carson, S.D. Coxsackievirus and adenovirus receptor (CAR) binds immunoglobulins Text. / S.D. Carson, N.M. Chapman // Biochemistry — 2001.-Vol.40.-P. 14324-14329.
24. Cell recognition and entry by rhino- and enteroviruses Text. / M.G. Rossmann, J. Bella, P.R. Kolatkar, Y. He, E. Wimmer, R.J. Kuhn, T.S. Baker // Virology.- 2000.- Vol.269.- P. 239-247.
25. Characterization of a 100-kilodalton binding protein for the six serotypes of coxsackie В viruses Text. / U.R. de Verdugo, H.-S. Selinka, M. Huber, B. Kramer, J. Kellermann, P.H. Hofshneider, R. Kandolf// J. Virol.- 1995 -Vol. 69 (11).-P. 6751-6757.
26. Characterization of the echovirus 7 receptor: domains of CD55 critical for virus binding Text. / N.A. Clarkson, R. Kaufman, D.M. Lublin, T. Ward, P.A. Pipkin, P.D. Minor, D.J. Evans, J.W. Almond // J. Virol.- 1995,- Vol. 69 (9).-P. 5497-5501.
27. Chothia, C. The molecular structure of cell adhesion molecules Text. / C. Chothia, E.Y. Jones // Annu. Rev. Biochem.- Vol.66.- P. 823-862.
28. Cohen, C.J. The coxsackievirus and adenovirus receptor is a transmembrane component of the tight junction Text. / C.J. Cohen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2001.-Vol.98.-P. 15191-15196.
29. Colston, E.M. Poliovirus variants selected on mutant receptor-expressing cells identify capsid residues that expand receptor recognition Text. / E.M. Colston, V.R. Racaniello // J. Virol.- 1995.- Vol.69 (8).- P.4823-4829.
30. Colston, E.M. Soluble receptor-resistant poliovirus mutants identify surface and internal capsid residues that control interaction with the cell receptor Text. / E. Colston, V.R. Racaniello // EMBO J.- 1994.- Vol.13.- P. 58555862.
31. Comparative analysis of virus-host interactions of hemagglutinating and non-hemagglutinating strains of Coxsackievirus B3 Text. / A. Pasch, J.-H.Kiipper, A. Wolde, R. Kandolf, H.-C. Selinka // J.Gen.Virol.- 1999.-Vol.80 P.3153-3158.
32. Complexes of poliovirus serotypes with their common cellular receptor, CD 155 Text. / Y. He, S. Mueller, P.R. Chipman, C.M. Bator, X. Peng, V.D. Bowman, S. Mukhopadhyay, E. Wimmer // J. Virol.- 2003.- Vol.77 (8).- P. 4827-4835.
33. Coxsackie В viruses that use human DAF as a receptor infect pig cells via pig CAR and do not use pig DAF Text. / O.B. Spiller, I.G. Goodfellow, D.J. Evans, SJ. Hinchliffe, B.P. Morgan // J. Gen. Virol.- 2002.- Vol.83.-P. 45-52.
34. Coxsackievirus A21 binds to decay-accelerating factor but requires intercellular adhesion molecule 1 for cell entry Text. / D.R. Shafren, D.J. Dorahy, R.A. Ingham, G.F. Burns, R.D. Barry // J. Virol.- 1997.- Vol.71 (6).-P.473 6-4743.
35. Coxsackievirus B3 adapted to growth in RD cells binds to decay-accelerating factor (CD55) Text. / J.M. Bergelson, J.G. Mohanty, R.L. Crowell, N.F. St. John, D.M. Lublin, R.W. Finberg // J. Virol. 1995.-Vol.69 (3).-P. 1903-1906.
36. Coxsackieviruses Bl, B3 and B5 use decay-accelerating factor as a receptor for cell attachment Text. / D.R. Shafren, R.C. Bates, M.V. Agrez, R.L. Herd, G.F. Burns, R.D. Barry // J. Virol.- 1995.- Vol. 69 (6).- P. 38733877.
37. Crowell, R.L. Specific alterations of coxsackievirus B3 eluted from HeLa cells Text. / R.L. Crowell, L. Philipson // J. Virol.- 1971.- Vol.8.- P. 509515.
38. Curry, S. The poliovirus 135S particle is infectious Text. / S. Curry, M. Chow, J.M. Hogle //J. Virol.- 1996.-Vol.70 (10).-P. 7125-7131.
39. Decay-accelerating factor CD55 is identified as the receptor for echovirus 7 using CELICS, a rapid immuno-focal cloning method Text. / T. Ward, P.A. Pipkin, N.A. Clarkson, D.M. Stone, P.D. Minor, J.W. Almond // EMBO J.-1994.-Vol.13.-P. 5070-5074.
40. Distinct cellular receptor interactions in poliovirus and rhinoviruses Text. / L. Xing, K. Tjarnlund, B. Lindqvist, G.G. Kaplan, D. Feigelstock, R.H. Cheng, J.M. Casanovas // EMBOJ.- 2000.-Vol.19 (6).-P. 1207-1216.
41. Domingo, E. Quasispecies and the implications for virus persistence and escape Text. / E. Domingo // Clin. Diagn. Virol.- 1998.- Vol.10.- P. 97101.
42. Domingo, E. RNA virus mutations and fitness for survival Text. / E. Domingo, J.J. Holland // Annu. Rev. Microbiol.- 1997,- Vol.51.- P. 151178.
43. Dove, A.W. Cold-adapted poliovirus mutants bypass a postentry replication block Text. / A.W. Dove, V.R. Racaniello // J. Virol.- 1997.- Vol.71 (6).-P. 4728-4735.
44. Dulbecco R. Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses Text. / R. Dulbecco, M. Vogt // J. Exp. Med.- 1954.- V.99.- P. 167182.
45. Dulbecco R. A study of the basic aspects of neutralization of two animal viruses, Western equine encephalitis virus and poliomyelitis virus Text. / R. Dulbecco, M. Vogt, A.G.R. Strickland // Virology.- 1956.- V.2.- P. 162205.
46. Echovirus 1 interaction with the human very late antigen-2 (integrin a2Pi) I domain Text. / S.L. King, T. Kamata, J.A. Cunningham, J. Emsley, R.C. Liddington, Y. Takada, J.M. Bergelson // J. Biol. Chem.- 1997.- Vol.272 (45).- P.28518-28522.
47. Echovirus infection of rhabdomyosarcoma cells is inhibited by antiserum to the complement control protein CD59 Text. / I.G. Goodfellow, R.M. Powell, T. Ward, O.B. Spiller, J.W. Almond, D.J. Evans // J. Gen.Virol.-2000.- Vol.81.- P.1393-1401.
48. Echoviruses bind heparan sulfate at the cell surface Text. / I.G. Goodfellow, A.B. Sioofy, R.M. Powell, D.J. Evans // J. Virol.- 2001.-Vol.75(10).-P.4918-4921.
49. Enhanced cellular receptor usage by a bioselected variant of coxsackievirus A21 Text. / E.S. Johansson, L. Xing, R.H. Cheng, D.R. Shafren // J. Virol.-2004.- Vol.78 (22).-P. 12603-12612.
50. Enterovirus receptor and virus replication in human leukocytes Text. / T. Vuorinen, R. Vainionpaa, J. Heino, T. Hyypia // J. Gen. Virol 1999 - Vol. 80.-P. 921-927.
51. Entry of poliovirus type 1 and mouse Elberfeld (ME) virus into HEp-2 cells: receptor-mediated endocytosis and endosomal or lysosomal uncoating Text. / H. Zeinhhardt, K. Wetz, P. Willingmann, K.O. Habermehl // J. Gen. Virol.-Vol.66.-P. 483-492.
52. Evans, D.J. Cell receptors for picornaviruses as determinants of cell tropism and pathogenesis Text. / D.J. Evans, J.W. Almond // Trends in microbiology.- 1998.-Vol.6 (5).-P. 198-202.
53. Evolution of fitness in experimental populations of vesicular stomatitis virus Text. / S.F. Elena, F. Gonzalez-Candelas, I.S. Novella, E.A. Duarte, D.K. Clarke, E. Domingo, J.J. Holland, A. Moya // Genetics 1996.- Vol.142 (3).-P. 673-679.
54. Fatty acid-depleted albumin induces the formation of echovirus A particles Text. / T. Ward, R.M. Powell, Y. Chaudhry, J. Meredith, J.W. Almond, W. Kraus, B. Nelsen-Salz, H.J. Eggers, D.J. Evans // J. Virol 2000.- Vol.74 (7).-P. 3410-3412.
55. Freistadt, M.S. Mutational analysis of the cellular receptor for poliovirus Text. / M.S. Freistadt, V.R. Racaniello // J. Virol.- 1991.- V.65 (7). P. 3873-3876.
56. Fricks, C.E. Cell-induced conformational change in poliovirus: externalization of the amino terminus of VP1 is responsible for liposome binding Text. / C.E. Fricks, J.M. Hogle // J. Virol.- 1990.- Vol. 64 (5).- P. 1934-1945.
57. Frisk, G. Persistence of coxsackievirus B4 infection in rhabdomyosarcoma cells for 30 months Text. / G. Frisk, M.A. Lindberg, H. Oiderholm // Arch. Virol.- 1999.-Vol. 144.-P. 2239-2245.
58. Genetic analysis of echovirus 11 variability in adsorption to human erythrocytes Text. / A.G. Sergeev, Novoselov A.V., Bubenschikov A.V., Kondrashova Z.N. //Arch. Virol.- 1994.- Vol.134 (2).-P.129-139.
59. Goldfield, M. Hemagglutinins associated with certain human enteric viruses Text. / M. Goldfield, S. Srihongse, J.P. Fox // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.-1957.- Vol.96.- P. 788-791.
60. Heparan sulfate and coxsackievirus-adenovirus receptor: each one mediates coxsackievirus B3 PD infection Text. / A.E. Zautner, U. Korner, A. Henke, C. Badorff, M. Schmidtke // J. Virol.- 2003.-Vol.77 (18).-P. 10071-10077.
61. Hogle, J.M. Poliovirus cell entry: common structural themes in viral cell entry pathways Text. / J.M. Hogle // Annu. Rev. Microbiol- 2002-Vol.56 P.677-702.
62. Hogle, J.M. Three-dimensional structure of poliovirus at 2.9 A resolution Text. / J.M. Hogle, M. Chow, D.J. Filman // Science.- 1985.- Vol.229.- P. 1358-1365.
63. Huang, Y. Is the 135S poliovirus particle an intermediate during cell entry? Text. / Y. Huang, J.M. Hogle, M. Chow // J. Virol.- 2000.- Vol. 74 (18).-P. 8757-8761.
64. Identification of the integrin VLA-2 as a receptor for echovirus 1 Text. / J.M. Bergelson, M.P. Shepley, M.C. Chan, M.E. Hemler, R.W. Finberg // Science.- 1992.-Vol.275.-P. 1718-1720.
65. In vitro activity of pirodavir (R 77975), a substituted phenoxy-pyridazinamine with broad-spectrum antipicornaviral activity Text. / K.
66. Andries, В. Dewindt, J. Snoeks, R. Willebrords, K.V. Eemeren, R. Stokbroekx, P.A.J. Janssen // Antimicrobial agents and chemotherapy — 1992.-Vol.36 (1).-P. 100-107.
67. In vitro and in vivo activities of WIN 54954, a new broad-spectrum antipicornavirus drug Text. / M.G. Woods, G.D. Diana, M.C. Rogge, M.J. Otto, F.J. Dutko, M.A. McKinlay // Antimicrobial agents and chemotherapy.- 1989.-Vol.33 (12).-P.2069-2074.
68. Inhibition of coxsackie В infection by soluble forms of its receptors: binding affinities, altered particle formation, and competition with cellular receptors Text. / I.G. Goodfellow, D.J. Evans, A.M. Blom, D. Kerrigan, J.S. Miners,
69. B.P. Morgan, O.B. Spiller // J. Virol.-2005.-Vol.79 (18).-P.12016-12024.
70. Integrin avp6 is an RGD-dependent receptor for coxsackievirus A9 Text. /
71. C.H. Williams, T. Kajander, T. Hyypia, T. Jackson, D. Sheppard, G. Stanway // J. Virol.- 2004.- Vol.78 (13).- P.6967-6973.
72. Interaction of coxsackievirus A21 with its cellular receptor, ICAM-1 Text. / C. Xiao, C.M. Bator, V.D. Bowman, E. Rieder, Y. He, B. Hebert, J. Bella, T.S. Baker, E. Wimmer, R.J. Kuhn, M.G. Rossman // J. Virol 2001 -Vol.75 (5).-P. 2444-2451.
73. Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformation alteration in the virion Text. / M. Arita, S. Koike, J. Aoki, H. Horie, A. Nomoto // J. Virol.- 1998.- Vol.72 (5).- P. 3578-3586.
74. Interaction of the poliovirus receptor with poliovirus Text. / Y. He, V.D. Bowman, St. Mueller, C.M. Bator, J. Bella, X. Peng, T.S. Baker, E. Wimmer, RJ. Kuhn, M.G. Rossmann // Proc. Natl. Acad. Sci. USA-2000.-Vol.97 (l).-P. 79-84.
75. Involvement of p2-microglobulin and integrin avp3 molecules in the coxsackievirus A9 infectious cycle Text. / M. Triantafilou, K. Triantafilou, K.M. Wilson, Y. Takada, N. Fernandez, G. Stanway // J. Gen. Virol.-1999.- Vol.80.- P.2591-2600.
76. Isolation and molecular characterization of a poliovirus type 1 mutant that replicates in the spinal cord of mice Text. / Q. Jia, S. Ohka, K. Iwasaki, K. Tohyama, A. Nomoto // J. Virol.- 1999.- Vol.73 (7).- P.6041-6047.
77. Johnson, K.M. Separation of hemagglutinating and non-hemagglutinating variants of coxsackie A-21 virus Text. / K.M. Johnson, D.J. Lang // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1962.-Vol.110.-P.653-657.
78. Kinetic analysis of the effect of poliovirus receptor on viral uncoating: the receptor as a catalyst Text. / S.K. Tsang, B.M. McDermott, V.R. Racaniello, J.M. Hogle // J. Virol.-2001.-Vol.75 (11).-P. 4984-4989.
79. Kumar, S. MEGA3: Integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment Text. / S. Kumar, К Tamura, M. Nei // Briefings in Bioinformatics. 2004. - Vol. 79. - P. 1707-1713.
80. La Monica, N. Mapping of sequences required for mouse neurovirulence of poliovirus type 2 Lansing Text. / N. la Monica, C. Meriam, V.R. Racaniello //J. Virol.- 1986.-Vol.57 (2).- P.515-525.
81. Lentz, T.L. Viral tropism and target cell receptors Text. / T.L. Lentz // Molecular mimicry in health and disease: Proc. 2nd Nord Insulin Symposium.-Amsterdam, 1988-P. 185-195.
82. Liao, S. Allele-specific adaptation of poliovirus VP1 B-C loop variants to mutant cell receptors Text. / S. Liao, V.R. Racaniello // J. Virol 1997-Vol.71.- P. 9770-9777.
83. Lonberg-Holm, K. Physical and metabolic requirements for early interaction of poliovirus and human rhinovirus with HeLa cells Text. / K. Lonberg-Holm, N.M. Whiteley // J. Virol.- 1976.- Vol.19 (3).- P. 857-870.
84. Lublin, D.M. Decay-accelerating factor biochemistry, molecular biology, and function Text. / D.M. Lublin, J.P. Atkinson // Annu. Rev. Immunol.-1989.-Vol.7.-P. 35-58.
85. Mapping CD55 function. The structure of two pathogen-binding domains at 1.7 A Text. / P. Williams, Y. Chaudhry, I.G. Goodfellow, J. Billington, R. Powell, O.B. Spiller, D.J. Evans, S. Lea // J. Biol. Chem.- 2003.- Vol.278-P. 10691-10696.
86. Mapping of the RD phenotype of the Nancy strain of coxsackievirus B3 Text. / A.M. Lindberg, R.L. Crowell, R. Zell, R. Kandolf, U. Pettersson // Virus Res.- 1992.- V.24.-P. 187-196.
87. Molecular evolution of the human enteroviruses: correlation of serotype with VP1 sequence and application to picornavirus classification Text. / M.S. Oberste, K. Maher, D.L. Kilpatrick, M.A. Pallansch // J. Virol.- 1999-Vol.73 (3).-P.1941-1948.
88. Molecular tectonic model of vims structural transitions: the putative cell entry states of poliovirus Text. / D.M. Belnap, D.J. Filman, B.L. Trus, N. Cheng, F.P. Booy, J.F. Conway, St. Curry, C.N. Hiremath // J. Virol-2000.- Vol.74 (3).-P.1342-1354.
89. Molecular typing of enteroviruses: current status and future requirements Text. / P. Muir, U. Kammerer, K.Korn, M.N. Mulders, Т. Poyry, B. Weissbrich, R. Kandolf, G.M. Cleator, A.M. van Loon // Clin. Microbiol. Rev.- 1998.-Vol.11 (l).-P. 202-227.
90. Mouse adaptation determinants of poliovirus type 1 enhance viral uncoating Text. / T. Couderc, F. Delpeyroux, H. le Blay, F. Horaud, B. Blondel // J. Virol.- 1996.- Vol.70 (1).-P.305-312.
91. Mouse cells expressing human intercellular adhesion molecule-1 are susceptible to infection by coxsackievirus A21 Text. / D.R. Shafren, D.J. Dorahy, S.J. Greive, G.F. Burns, R.D. Barry // J. Virol.- 1997.- Vol.71 (1).-P.785-789.
92. Nelsen-Salz, B. Integrin ауРз (vitronectin receptor) is a candidate receptor for the virulent echovirus 9 strain Barty Text. / B. Nelsen-Salz, H.J. Eggers, H. Zimmermann//J. Gen. Virol.- 1999.- Vol.80.-P.2311-2313.
93. Newcombe, N.G. Cellular receptor interactions of C-cluster human group A coxsackieviruses Text. / N.G. Newcombe, P. Andersson, E.S Johansson // J. Gen. Virol.- 2003.- Vol.84.- P.3041-3050.
94. Newcombe, N.G. Enterovirus capsid interactions with decay-accelerating factor mediate lytic infection Text. / N.G. Newcombe, E.S. Johansson, G. Au//J. Virol.- 2004.- Vol.78 (3).-P. 1431-1439.
95. Nichols, B.J. Endocytosis without clathrin coats Text. / B.J. Nichols, J. Lippincott-Schwartz // Trends in Cell Biol.- 2001.- Vol.11.- P. 406-412.
96. Nicholson-Weller, A. Structure and function of decay-accelerating factor CD55 Text. / A. Nicholson-Weller, C.E. Wang // J. Lab. Clin. Med.-1994.-Vol. 123.-P. 485-491.
97. Pathogenesis of coxsackievirus A9 in mice: role of the viral arginine-glycine-aspartic acid motif Text. / H. Harvala, H. Kalimo, G. Stanway, T. Hyypia // J. Gen. Virol.- 2003.- Vol.84.- P.2375-2379.
98. Perez, L. Entry of poliovirus into cells does not require a low-pH step Text. / L. Perez, L. Carrsaco // J. Virol.- 1993.- Vol. 67 (8).- P. 4543-4548.
99. Pulli, T. Cell-surface interactions of echovirus 22 Text. / T. Pulli, E. Koivunen, T. Hyypia // J. Biol. Chem.- 1997.- Vol.272 (34).- P.21176-21180.
100. Racaniello, V.R. Early events in poliovirus infection: virus-receptor interactions Text. / V.R. Racaniello //Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996-Vol.93.-P. 11378-11381.
101. Razani, B. Caveolins and caveolae: molecular and functional relationships Text. / B. Razani, M.P. Lisanti // Experimental Cell Research.- 2001 -Vol.271.-P. 36-44.
102. Reagan, K.J. Altered receptor specifity of Coxsackievirus B3 after growth in rhabdomyosarcoma cells Text. / K.J. Reagan, B. Goldberg, R.L. Crowell // J. Virol.- 1984.- V.49 (3).-P.635-640.
103. Ren, R. Human poliovirus gene expression and poliovirus tissue tropism in transgenic mice Text. / R. Ren, V.R. Racaniello // J. Virol 1992-Vol.66 (l).-P. 296-304.
104. Role for ^-microglobulin in echovirus infection of rhabdomyosarcoma cells Text. / T. Ward, R.M. Powell, P.A. Pipkin, D.J. Evans. P.D. Minor, J.W. Almond // J. Virol.- 1998.- Vol.72 (7).- P.5360-5365.
105. Rossmann, M.G. Conservation of the putative receptor attachment site in' picornaviruses Text. / M.G. Rossmann, A.C. Palmenberg // Virology — 1988.-Vol.164.-P. 373-382.
106. Rossmann, M.G. Picornavirus-receptor interactions Text. / M.G. Rossmann, Y. He, R.J. Kuhn // Trends in Microbiol.- 2002.- Vol.10 (7).- P. 324-331.
107. Rossmann, M.G. The canyon hypothesis Text. / M.G. Rossmann // J. Biol. Chem.- 1989.-Vol.264 (25).-P. 14587-14590.
108. Rossmann, M.G. Viral cell recognition and entry Text. / M.G. Rossmann // Protein Sci.- 1994.-Vol.3 .-P. 1712-1725.
109. Sabin A.B. Present position of immunization against poliomyelitis with live virus vaccines Text. / A.B. Sabin // British Med. J.- 1959.- V. 5123.- P. 663-680.
110. Schneider, W.L. Genetic diversity in RNA virus quasispecies is controlled by host-virus interactions Text. / W.L. Schneider, M.J. Roossinck // J. Virol.-2001.-Vol. 75 (14).-P. 6566-6571.
111. Schneider-Schaulies J. Cellular receptors for viruses: links to tropism and pathogenesis Text. / J. Schneider-Schaulies // J. Gen. Virol- 2000.-Vol.81- P.1413-1429.
112. Secrotory pathway function, but not cytoskeletal integrity, is required in poliovirus infection Text. / J. Doedens, L.A. Maynell, M.W. Klymlowsky, K. Kirkegaard//Arch. Virol. Suppl.- 1994.-Vol.9.-P. 159-172.
113. Serum albumin inhibits echovirus uncoating Text. / T. Ward, R.M. Powell, D.J. Evans, J.W. Almond // J. Gen Virol.- 1999.- Vol. 80.- P. 283-290.
114. Shafren, D.R. Viral cell entry induced by cross-linked decay-accelerating factor Text. / D.R. Shafren // J. Virol.- 1998.- Vol.72 (11).- P.9407-9412.
115. Shin, J.-S. Caveolae as portals of entry for microbes Text. / J.-S. Shin, S.N. Abraham // Microbes and infection.- 2001.- Vol.3.- P. 755-761.
116. Short consensus repeat domain 1 of decay-accelerating factor is required for enterovirus 70 binding Text. / T.M. Karnauchow, S. Dawe, D.M. Lublin, K. Dimock//J. Virol.- 1998.-Vol.72 (11).-P.9380-9383.
117. Sialidase-sensitive erythrocyte receptor for enterovirus type 70 Text. / E.T. Utagava, K. Miyamura, A. Mukoyama, R. Kono // J. Gen. Virol 1982-Vol.63.-P. 141-148.
118. Steinhauer, D.A. Rapid evolution of RNA viruses Text. / D.A. Steinhauer, J.J. Holland // Annu. Rev. Microbiol.- 1987.- Vol. 41.- P. 409-433.
119. Structural and functional insights into the interaction of echo viruses and decay-accelerating factor Text. / D.M. Pettigrew, D.T. Williams, D. Kerrigan, D.J. Evans, S.M. Lea, D. Bhella // J. Biol. Chem. 2006. -Vol.281 (8).-P. 5169-5177.
120. Structural studies of two rhinovirus serotypes complexed with fragments of their cellular receptor Text. / P.R. Kolatkar, J. Bella, N.H. Olson, C.M. Bator, T.S. Baker,. M.G. Rossmann // EMBO J.- 1999.- Vol.18.- P. 62496259.
121. Susceptibility of human bone marrow cells and hematopoietic cell lines to coxsackievirus B3 infection Text. / T. Vuorinen, R. Vainionpaa, F. Vanharanta, T. Hyypia// J. Virol.- 1996.- Vol.70 (12).-P. 9018-9023.
122. The coxsackievirus A9 RGD motif is not essential for virus viability Text. / P.J. Hughes, C. Horsnell, T. Hyypia, G. Stanway // J. Virol.- 1995.- Vol.69 (12).-P. 8035-8040.
123. The evolution of RNA viruses: a population genetics view Text. / A. Moya, S.F. Elena, A. Bracho, R. Miralles, E. Barrio // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -2000.-Vol. 97 (13).- P.6967-6973.
124. The HeLa cell receptor for enterovirus 70 is decay-accelerating factor (CD55) Text. / T.M. Karnauchow, D.L. Tolson, B.A. Harrison, E. Altman, D.M. Lublin, K. Dimock // J. Virol.- 1996.- Vol.70 (8).- P.5143-5152.
125. The human poliovirus receptor related 2 protein is a new hematopoietic/endothelial homophilic adhesion molecule Text. / M. Lopez, M. Aoubala, F. Jordier, D. Isnardon, S. Gomez, P. Dubreuil // Blood-1998.-Vol.92 (12).- P.4602-4611.
126. The murine CAR homolog is a receptor for coxsackie В viruses and adenoviruses Text. / J.M. Bergelson, A. Krithivas, L. Celi, G. Droguett, M.S. Horwitz, T. Wickham, R.L. Crowell, R.W. Finberg // 1998.- J. Virol.-Vol.72(l).-P. 415-419.
127. The poliovirus receptor CD155 mediates cell-to-matrix contacts by specifically binding to vitronectin Text. / R. Lange, X. Peng, E. Wimmer, M. Lipp, G. Bernhardt//Virology.- 2001.-Vol. 218.-P. 218-227.
128. Tomko, R.P. HCAR and mCAR: the human and mouse cellular receptors for subgroup С adenoviruses and group В coxsackieviruses Text. / R.P. Tomko, R. Xu, L. Philipson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1997.- Vol.94.-P.3352-3356.
129. Tosteson, M.T. Characterization of the ion channels formed by poliovirus in planar lipid membranes Text. / M.T. Tosteson, M. Chow // J. Virol— 1997.-Vol.71 (l).-P. 507-511.
130. Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells Text. / C. Mendelsohn, B. Johnson, K.A. Lionetti, P. Nobis, E. Wimmer, V.R. Racaniello //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1986.-Vol.83.-P.7845-7849.
131. Transgenic mice carrying the human poliovirus receptor: new animal model for study of poliovirus neurovirulence Text. / H. Horie, S. Koike, T. Kurata, Y. Sato-Yoshida, I. Ise, Y. Ota, S. Abe, K. Hioki // J. Virol.- 1994.- V.68 (2).-P. 681-688.
132. Uptake of poliovirus into the endosomal system of HeLa cells Text. / P. Kronenberger, D. Schober, E. Prchla, O. Ofori-Anyinam, R. Vrijsen, B. Rombaut, D. Blaas, R. Fuchs, A. Boeye // Arch. Virol 1998.-Vol. 143-P. 1417-1424.
133. Van der Goot, F.G. Raft membrane domains: from a liquid-ordered membrane phase to a site of pathogen attack Text. / F.G. Van der Goot, T. Harder // Seminars in immunology-2001 Vol.13 - P. 89-97.
134. Wang, X. Coxsackievirus and adenovirus receptor cytoplasmatic and transmembrane domains are not essential for coxsackievirus and adenovirus infection Text. / X. Wang, J.M. Bergelson // J. Virol.- 1999.- Vol.73 (3).-P.2559-2562.
135. Xing, L. Structural analysis of human rhino virus complexed with ICAM-1 reveals the dynamics of receptor-mediated virus uncoating Text. / L. Xing, J.M. Casasnovas, R.H. Cheng // J. Virol.- 2003.- Vol.77 (11).- P. 61016107.
136. Yoshii, T. Replication of enterovirus 70 in non-primate cell cultures Text. / T. Yoshii, K. Natori, R. Kono // J. Gen. Virol.- 1977.- Vol.36 (3).- P.377-384.
137. Zhang, S. Persistent echovirus infection of mouse cells expressing the viral receptor VLA-2 Text. / S. Zhang, V.R.Racaniello // Virology.- 1997.-Vol.235.-P. 293-301.штамм Gregory)
138. Белок Последовательность нуклеотидов
139. VP4 ATGGGAGCGC AAGTATCAAC ACAAAAGACC GGTGCGCATG AAACCGGCTT GAACGCCAGT GGTAGTTCTA ТААТССАСТА САССААСАТА AACTACTATA AAGATGCAGC ATCCAACTCG GCAAATAGGC AAGAATTTTC ACAAGACCCT GGTAAGTTCA CCGAACCAGT GAAGGATATC ATGGTGAAGT CACTACCTGC1. АСТТААС
140. GTTTGAGGCT СТСААССТСА TTGCAA
141. CTCACTATAG GTTGGTGCAG CAGGACGAGT ACACAAGCGC
142. TGGCAATGTC ACATGCTGGT ATCAGACTGG AATAGTCGTC
143. CCGGCGGGCA CTCCGACATC GTGCTCCATC ATGTGTTTTG
144. TATCGGCATG CAATGATTTC TCTGTGAGAT TACTAAAGGA
145. CACGCCATTT ATAGAACAAA CTGCAATACT GCAA
146. VP1 GGTGATGTGG TAGAAGCTGT AGAGAACGCC GTTGCACGTG
147. TGGCAGATAC AATTGGTAGT GGGCCGTCAA ATTCGCAAGC
148. AGTGCCTGCT TTAACAGCAG TTGAGACAGG GCACACATCT
149. CAGGTGACAC CCAGTGATAC CATGCAAACC AGGCATGTCA
150. AGAACTACCA TTCCAGATCT GAGTCCAGCA TTGAAAACTT
151. CCTCAGCAGA TCTGCCTGCG TTTATATGGG AGGATACTGC
152. АСААССААСА CTGACCAGAC ААААТТАТТТ GCCTCATGGA
153. CTATTAGTGC ACGACGCATG GTTCAAATGA GACGCAAGCT
154. AGAGATCTTC ACTTACGTCC GTTTTGATGT GGAGGTGACT
155. TTTGTGATTA CCAGCAAGCA GGACCAGGGC AACCGATTGG
156. GCCAAGACAT GCCACCCCTG ACTCACCAGA TCATGTATAT
157. CCCACCAGGG GGGCCCATTC CAAAGTCTGT CACTGACTAT
158. GCATGGCAAA ССТССАССАА CCCCAGCATT TTCTGGACTG
159. AGGGGAACGC GCCACCCAGA ATGTCTATCC CATTCATTAG
160. CATTGGTAAC GCCTACAGTA ATTTTTACGA CGGGTGGTCT
161. CACTTCTCGC AAAACGGGGT GTATGGCTAC ААСАСАСТСА
162. ACCACATGGG ТСАААТТТАТ GTTAGACACG TGAATGGATC
163. АТСАССАСТС CCTATGACTA GCACTGTTAG AATGTACCTC
164. AAGCCGAAGC ATGTTAAAGC ATGGGTCCCG CGGCCTCCTA
165. GGCTATGCCA ATACGAAAAT GCATCCACGG TGAACTTTAC
166. АСССАСАААС GTCACCGACA AGCGAACCAG САТСААСТАС
167. ATTCCTGAGA CGGTCAAACC AGACCTATCA ААСТАС
168. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU443626.
169. Аминокислотная последовательность структурных белков клона G3123штамм Gregory)1. Белок
170. Аминокислотная последовательность1. VP4 MGAQVSTQKT ANRQEFSQDP1. GAHETGLNAS GKFTEPVKDI1. GSSIIHYTNI MVKSLPALN1. NYYKDAASNS
171. VP2 SPSAEECGYS YLKDNEATAE KFPDALKDMG CLLVVCVPEA NGTNTVQTIV VMPYINNVPM ITVTVAPMCA
172. DRVRSITLGN DQPTHPDVAT LFGQNMYYHY EMGCSQVDGT TNAGMGVGVG DNMFRHHNFT EYNGLRLSTS
173. STITTQESAN CRFYTLESVT LGRAGYTLHV VNEHGLSEGE NLTIYPHQWI LMIIPFVPLD LQ
174. VVVGYGRWPE WERDSPGWWW QCNASKFHQG TAKKFSSTST NLRTNNCATI YSSDSSTYVP
175. VP3 GLPVMNTPGS QNLMEIAEVD QVFGFQVQPG CGSAMATGKF QSSCVLCVPW PAGTPTSCSI
176. NQFLTSDDFQ SVVPVNNVEG LDSVFKHTLL LLAYAPPGAN ISQTHYRLVQ MCFVSACNDF
177. SPSAMPQFDV KLDTMEVYRI GEILNYYAHW APKNRKDAML QDEYTSAGNV SVRLLKDTPF
178. TPELNIPGEV PVQSGNHQSD SGSIKLTFVF GTHIIWDVGL TCWYQTGIVV IEQTAILQ
179. УР1 GDVVEAVENA QVTPSDTMQT TTNTDQTKLF FVITSKQDQG AWQTSTNPSI HFSQNGVYGY KPKHVKAWVP IPETVKPDLS
180. VARVADTIGS RHVKNYHSRS ASWTISARRM NRLGQDMPPL FWTEGNAPPR NTLNHMGQIY RPPRLCQYEN NY
181. GPSNSQAVPA ESSIENFLSR VQMRRKLEIF THQIMYIPPG MSIPFISIGN VRHVNGSSPL ASTVNFTPTN
182. AVETGHTS SACVYMGGYC TYVRFDVEVT GPIPKSVTDY AYSNFYDGWS PMTSTVRMYL VTDKRTSINYштамм Gregory)
183. Белок Последовательность нуклеотидов
184. VP4 ATGGGAGCGC AAGTATCAAC ACAAAAGAC С GGTGCGCATG
185. AAACCGGCTT GAACGCCAGT GGTAGTTCTA TAATCCACTA
186. САССААСАТА ААСТАСТАТА AAGATGCAGC ATCCAACTCG
187. GCAAATAGGC AAGAATTTTC ACAAGACCCT GGTAAGTTCA
188. CCGAACCAGT GAAGGATATC ATGGTGAAGT CACTACCTGC1. АСТТААС
189. VP2 TCGCCGTCTG CTGAAGAGTG TGGGTACAGT GACAGAGTGC
190. GATCCATAAC ACTAGGTAAC TCTACCATCA CAACACAAGA
191. AAGTGCAAAT GTAGTAGTGG GGTATGGTCG ATGGCCTGAG
192. TACCTGAAAG ACAATGAGGC CACTGCTGAA GATCAACCAA
193. CCCACCCTGA TGTAGCAACA TGTAGGTTTT ACACCCTGGA
194. ATCGGTCACG TGGGAAAGAG ATTCACCCGG GTGGTGGTGG
195. AAATTCCCGG ACGCCCTAAA AGATATGGGG CTCTTCGGCC
196. AAAACATGTA СТАССACTAT CTAGGAAGAG CCGGTTACAC
197. ATTGCATGTA CAATGTAATG CATCTAAATT CCATCAGGGA
198. TGCTTGCTAG TGGTCTGTGT ACCGGAAGCA GAGATGGGAT
199. GCAGCCAAGT GGATGGTACT GTAAATGAGC ATGGATTGAG
200. TGAGGGGGAG ACCGCTAAGA AATTCTCTTC TACCAGCACA
201. AATGGGACCA ACATGGTACA GACGATTGTG ACAAATGCCG
202. GTATGGGAGT GGGAGTGGGC AATCTCACTA TATACCCACA
203. TCAGTGGATA AATTTGCGCA CCAATAACTG CGCCACCATC
204. GTCATGCCAT ACATAAACAA CGTACCGATG GACAACATGT
205. TCAGACACCA CAATTTCACA CTAATGATTA TTCCCTTTGT
206. ACCATTAGAC TATTCTTCAG ATTCATCCAC GTACGTGCCC
207. ATAACAGTGA CAGTCGCTCC AATGTGTGCT GAGTATAATG
208. GTTTGAGGCT CTCAACCTCA TTGCAA
209. VP3 GGATTACCTG TCATGAATAC ACCGGGTAGC AACCAGTTTC
210. TGACATCGGA CGACTTCCAG TCACCATCTG CCATGCCACA
211. ATTTGATGTC ACCCCAGAGT TAAATATACC AGGGGAGGTA
212. СААААССТСА TGGAAATTGC TGAAGTCGAC TCGGTGGTGC
213. CAGTCAACAA CGTGGAAGGG AAACTCGACA CAATGGAGGT
214. CTACCGGATT CCAGTGCAGA GTGGTAATCA CCAAAGTGAC
215. CAAGTCTTCG GTTTTCAAGT GCAACCTGGG CTAGATAGCG
216. ТТТТСАААСА CACGCTACTG GGGGAGATTT TGAACTACTA
217. TGCACACTGG TCTGGTAGTA TAAAACTAAC ATTTGTTTTC
218. TGTGGTTCCG CTATGGCTAC GGGTAAATTC CTACTAGCCT
219. ACGCCCCGCC CGGAGCGAAC GCTCCTAAGA ATAGGAAAGA
220. TGCAATGCTG GGCACACACA TTATCTGGGA TGTTGGACTG
221. CAGTCATCGT GTGTCTTATG TGTGCCTTGG ATTAGTCAAA
222. CTCACTATAG GTTGGTGCAG CAGGACGAGT ACACAAGCGC
223. TGGCAATGTC ACATGCTGGT ATCAGACTGG AATAGTCGTC
224. CCGGCGGGCA CTCCGACATC GTGCTCCATC ATGTGTTTTG
225. TATCGGCATG CAATGATTTC TCTGTGAGAT TACTAAAGGA
226. CACGCCATTT ATAGAACAAA CTGCAATACT GCAA
227. VP1 GGTGATGTGG TAGAAGCTGT AGAGAACGCC GTTGCACGTG
228. TGGCAGATAC AATTGGTAGT GGGCCGTCAA ATTCGCAAGC
229. AGTGCCTGCT TTAACAGCAG TTGAGACAGG GCACACATCT
230. CAGGTGACAC CCAGTGATAC CATGCAAACC AGGCATGTCA
231. AGAACTACCA TTCCAGATCT GAGTCCAGCA TTGAAAACTT
232. CCTCAGCAGA TCTGCCTGCG TTTATATGGG AGGATACTGC
233. АСААССААСА CTGACCAGAC ААААТТАТТТ GCCTCATGGA
234. CTATTAGTGC ACGACGCATG GTTCAAATGA GACGCAAGCT
235. AGAGATCTTC ACTTACGTCC GTTTTGATGT GGAGGTGACT
236. TTTGTGATTA CCAGCAAGCA GGACCAGGGC AACCGATTGG
237. GCCAAGACAT GCCACCCCTG ACTCACCAGA TCATGTATAT
238. CCCACCAGGG GGGCCCATTC CAAAGTCTGT CACTGACTAT
239. GCATGGCAAA ССТССАССАА CCCCAGCATT TTCTGGACTG
240. AGGGGAACGC GCCACCCAGA ATGTCTATCC CATTCATTAG
241. CATTGGTAAC GCCTACAGTA ATTTTTACGA CGGGTGGTCT
242. CACTTCTCGC AAAACGGGGT GTATGGCTAC ААСАСАСТСА
243. ACCACATGGG ТСАААТТТАТ GTTAGACACG TGAATGGATC
244. АТСАССАСТС CCTATGACTA GCACTGTTAG AATGTACCTC
245. AAGCCGAAGC ATGTTAAAGC ATGGGTCCCG CGGCCTCCTA
246. GGCTATGCCA ATACGAAAAT GCATCCACGG TGAACTTTAC
247. АСССАСАААС GTCACCGACA AGCGAACCAG САТСААСТАС
248. ATTCCTGAGA CGGTCAAACC AGACCTATCA ААСТАС
249. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU443625.
250. Аминокислотная последовательность структурных белков клона G28 (штамм1. Gregory)
251. Белок Аминокислотная последовательность
252. VP4 MGAQVSTQKT GAHETGLNAS GSSIIHYTNI NYYKDAASNS
253. ANRQEFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN
254. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVGYGRWPE
255. YLKDNEATAE DQPTHPDVAT CRFYTLESVT WERDSPGWWW
256. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTLHV QCNASKFHQG
257. CLLVVCVPEA EMGCSQVDGT VNEHGLSEGE TAKKFSSTST
258. NGTNMVQTIV TNAGMGVGVG NLTIYPHQWI NLRTNNCATI
259. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1.VTVAPMCA EYNGLRLSTS LQ
260. VP3 GLPVMNTPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV
261. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMEVYRI PVQSGNHQSD
262. QVFGFQVQPG LDSVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF
263. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKNRKDAML GTHIIWDVGL
264. QSSCVLCVPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV
265. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTAILQ
266. VP1 GDVVEAVENA VARVADTIGS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS
267. QVTPSDTMQT RHVKNYHSRS ESSIENFLSR SACVYMGGYC
268. TTNTDQTKLF ASWTISARRM VQMRRKLEIF TYVRFDVEVT
269. FVITSKQDQG NRLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY
270. AWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS
271. HFSQNGVYGY NTLNHMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYL
272. KPKHVKAWVP RPPRLCQYEN ASTVNFTPTN VTDKRTSINY1.ETVKPDLS NY штамм Gregory)
273. Белок Последовательность нуклеотидов
274. VP 4 ATGGGAGCGC AAGTATCAAC ACAAAAGACC GGTGCGCATG
275. AAACCGGCTT GAACGCCAGT GGTAGTTCTA ТААТССАСТА
276. САССААСАТА AACTACTATA AAGATGCAGC ATCCAACTCG
277. GCAAATAGGC AAGAATTTTC ACAAGACCCT GGTAAGTTCA
278. CCGAACCAGT GAAGGATATC ATGGTGAAGT CACTACCTGC1. АСТТААС
279. VP2 TCGCCGTCTG CTGAAGAGTG TGGGTACAGT GACAGAGTGC
280. GATCCATAAC ACTAGGTAAC ТСТАССАТСА CAACACAAGA
281. AAGTGCAAAT GTAGTAGTGG GGTATGGTCG ATGGCCTGAG
282. TACCTGAAAG ACAATGAGGC CACTGCTGAA GATCAACCAA
283. CCCACCCTGA TGTAGCAACA TGTAGGTTTT ACACCCTGGA
284. ATCGGTCACG TGGGAAAGAG ATTCACCCGG GTGGTGGTGG
285. AAATTCCCGG ACGCCCTAAA AGATATGGGG CTCTTCGGCC
286. AAAACATGTA СТАССАСТАТ CTAGGAAGAG CCGGTTACAC
287. ATTGCATGTA CAATGTAATG САТСТАААТТ CCATCAGGGA
288. TGCTTGCTAG TGGTCTGTGT ACCGGAAGCA GAGATGGGAT
289. GCGGCCAAGT GGATGGTACT GTAAATGAGC ATGGATTGAG
290. TGAGGGGGAG ACCGCTAAGA ААТТСТСТТС TACCAGCACA
291. AATGGGACCA ACACGGTACA GACGATTGTG ACAAATGCCG
292. GTATGGGAGT GGGAGTGGGC ААТСТСАСТА ТАТАСССАСА
293. TCAGTGGATA AATTTGCGCA CCAATAACTG CGCCACCATC
294. GTCATGCCAT АСАТАААСАА CGTACCGATG GACAACATGT
295. ТСAGАСАССА СААТТТСАСА CTAATGATTA TTCCCTTTGT
296. ACCATTAGAC TATTCTTCAG ATТCATССАС GTACGTGCCC
297. ATAACAGTGA CAGTCGCTCC AATGTGTGCT GAGTATAATG
298. GTTTGAGGCT СТСААССТСА TTGCAA
299. VP3 GGATTACCTG TCATGAATAC ACCGGGTAGC AACCAGTTTC
300. TGACATCGGA CGACTTCCAG TCACCATCTG CCATGCCACA
301. ATTTGATGTC ACCCCAGAGT ТАААТАТАСС AGGGGAGGTA
302. СААААССТСА TGGAAATTGC TGAAGTCGAC TCGGTGGTGC
303. CAGTCAACAA CGTGGAAGGG AAACTCGACA CAATGGAGGT
304. CTACCGGATT CCAGTGCAGA GTGGTAATCA CCAAAGTGAC
305. CAAGTCTTCG GTTTTCAAGT GCAACCTGGG CTAGATAGCG
306. ТТТТСАААСА CACGCTACTG GGGGAGATTT TGAACTACTA
307. TGCACACTGG TCTGGTAGTA ТААААСТААС ATTTGTTTTC
308. TGTGGTTCCG CTATGGCTAC GGGTAAATTC CTACTAGCCT
309. ACGCCCCGCC CGGAGCGAAC GCTCCTAAGA ATAGGAAAGA
310. TGCAATGCTG GGCACACACA TTATCTGGGA TGTTGGACTG
311. CAGTCATCGT GTGTCTTATG TGTGCCTTGG ATTAGTCAAA
312. CTCACTATAG GTTGGTGCAG CAGGACGAGT ACACAAGCGC
313. TGGCAATGTC ACATGCTGGT ATCAGACTGG AATAGTCGTC
314. CCGGCGGGCA CTCCGACATC GTGCTCCATC ATGTGTTTTG
315. TATCGGCATG CAATGATTTC TCTGTGAGAT TACTAAAGGA
316. CACGCCATTT ATAGAACAAA CTGCAATACT GCAA
317. VP1 GGTGATGTGG TAGAAGCTGT AGAGAACGCC GTTGCACGTG
318. TGGCAGATAC AATTGGTAGT GGGCCGTCAA ATTCGCAAGC
319. AGTGCCTGCT TTAACAGCAG TTGAGACAGG GCACACATCT
320. CAGGTGACAC CCAGTGATAC CATGCAAACC AGGCATGTCA
321. AGAACTACCA TTCCAGATCT GAGTCCAGCA TTGAAAACTT
322. CCTCAGCAGA TCTGCCTGCG TTTATATGGG AGGATACTGC
323. АСААССААСА CTGACCAGAC ААААТТАТТТ GCCTCATGGA
324. CTATTAGTGC ACGACGCATG GTTCAAATGA GACGCAAGCT
325. AGAGATCTTC ACTTACGTCC GTTTTGATGT GGAGGTGACT
326. TTTGTGATTA CCAGCAAGCA GGACCAGGGC AACCGATTGG
327. GCCAAGACAT GCCACCCCTG ACTCACCAGA TCATGTATAT
328. CCCACCAGGG GGGCCCATTC CAAAGTCTGT CACTGACTAT
329. GCATGGCAAA ССТССАССАА CCCCAGCATT TTCTGGACTG
330. AGGGGAACGC GCCACCCAGA ATGTCTATCC CATТCATTAG
331. CATTGGTAAC GCCTACAGTA ATTTTTACGA CGGGTGGTCT
332. CACTTCTCGC AAAACGGGGT GTATGGCTAC ААСАСАС ТСA
333. ACCACATGGG ТСАААТТТАТ GTTAGACACG TGAATGGATC
334. АТСАССАСТС CCTATGACTA GCACTGTTAG AATGTACCTC
335. AAGCCGAAGC ATGTTAAAGC ATGGGTCCCG CGGCCTCCTA
336. GGCTATGCCA ATACGAAAAT GCATCCACGG TGAACTTTAC
337. АС С САСАААС GTCACCGACA AGCGAACCAG CATCAACTAC
338. ATTCCTGAGA CGGTCAAACC AGACCTATCA AACTAC
339. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU443623.
340. Аминокислотная последовательность структурных белков клона G3123штамм Gregory)
341. Белок Аминокислотная последовательность
342. VP4 MGAQVSTQKT GAHETGLNAS GSSIIHYTNI NYYKDAASNS
343. ANRQEFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN
344. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVGYGRWPE
345. YLKDNEATAE DQPTHPDVAT CRFYTLESVT WERDSPGWWW
346. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTLHV QCNASKFHQG
347. CLLVVCVPEA EMGCGQVDGT VNEHGLSEGE TAKKFSSTST
348. NGTNTVQTIV TNAGMGVGVG NLTIYPHQWI NLRTNNCATI
349. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1.VTVAPMCA EYNGLRLSTS LQ
350. VP3 GLPVMNTPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV
351. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMEVYRI PVQSGNHQSD
352. QVFGFQVQPG LDSVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF
353. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKNRKDAML GTHIIWDVGL
354. QSSCVLCVPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV
355. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTAILQ
356. VP1 GDVVEAVENA VARVADTIGS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS
357. QVTPSDTMQT RHVKNYHSRS ESSIENFLSR SACVYMGGYC
358. TTNTDQTKLF ASWTISARRM VQMRRKLEIF TYVRFDVEVT
359. FVITSKQDQG NRLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY
360. AWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS
361. HFSQNGVYGY NTLNHMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYL
362. KPKHVKAWVP RPPRLCQYEN ASTVNFTPTN VTDKRTSINY1.ETVKPDLS NY штамм 7611)
363. Белок Последовательность нуклеотидов
364. VP4 ATGGGAGCTC AAGTGTCGAC ACAAAAGACT GGAGCGCATG AGACCGGTTT GAGTGCCAGC GGGAACTCAA ТТАТАСАТТА САССААСАТС AACTACTATA AGGATGCCGC GTCAAACTCA GCAAACAGGC AAGACTTCTC CCAAGATCCC GGGAAGTTCA CAGAACCGGT GAAAGATATA ATGGTGAAAT CACTACCTGC1. ТСТАААС
365. GCTTGAGATT GGCGACTTCG TTGCAA
366. CGCACTATAG AGGAAATGTC CCAGCAGGCA TTTCAGCATG TACACCATTT
367. ACTAGTGCAA ACTTGTTGGT CTCCAACATC CAATGACTTC ATAGAGCAAA
368. CAAGATGAGT ATCAGACAGG GTGCTCCATC TCGGTGCGCT CTGCCCTCCT
369. ACACCAGTGC GATTGTGGTT ATGTGTTTTG TGCTAAAAGA GCAA
370. VP1 GGTGATGTGG TGGCAGACAC TGTGCCTGCT CAAGTAACCC ACAACTACCA TCTTTGTAGG ACAACCAATA CCATCAACGC CGAGATGTTC TTTGTGATTA GCCAAGATAT ACCACCAGGG ACGTGGCAAA AGGGAAATGC TATTGGCAAT CATTTCTCTC ATCGTATGGG CTCACCACTA AAGCCAAAGC GGTTGTGCCA ACCCACCAAC ATACCAGAGA
371. TGGAGGCAGT CATTAGCAGT CTGACCGCTG CCAGTGACAT CTCTAGATCA TCGGCATGCG CCGATGCCTC ACGGCGTATG ACGTACGTTA CCAGTAAACA GCCACCACTG GGCCCTATAC CATCCACCAA ACCACCCAGG GCCTACAGTA AAAATGGTGT CCAAATTTAC CCTATGACAA ACGTGAAAGT GTACGTGAAT ATCACTGAGA CAGTCAAACC
372. CGAAAATGCC GGGCCATCAA TGGAGACGGG СATACAGACС GAATCCAGTA TCTACATGGG CAAGTTGTTT GTACAAATGA GGTTTGACGT AGATCAAGGG ACACACCAAA CGAAGTCAGT CCCGAGTATC ATGTCCATCC ATTTCTATGA GTACGGTTAC GTCAGGCACG GCACAGTTAG GTGGGTCCCA GCATCAACTG AGAGAACAAG TGATGTTTCA
373. GTTGCACGCG ATTCACAAGC ACACACGTCT AGGCACGTGC TTGAGAACTT AGAATACCAC GCGTCATGGA GGCGCAAACT GGAAGTGACA ACCAAACTGG TTATGTATAT AACGGACTAC TTTTGGACTG CTTTCATTAG CGGCTGGTCA AATACGCTCA TGAACGGATC GATGTACTTC CGCCCGCCTA TCAACTTCAA CATTAACTAC AC AT AC
374. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU167520.
375. Аминокислотная последовательность структурных белков клона 5.9.11.5штамм 7611)
376. Белок Аминокислотная последовательность
377. VP 4 MGAQVSTQKT GAHETGLSAS GNSIIHYTNI NYYKDAASNS
378. ANRQDFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN
379. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVAYGRWPE
380. YLKDDEATAE DQPTQPDVAT CRFYTLESVT WEKDSPGWWW
381. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTIHV QCNASKFHQG
382. CLMVVCVPEA EMGCSQIDGT VNEHSLSEGE TAKKFAATST
383. NGTNTVQSIV TNAGMGVGVG NLTIFPHQWI NLRTNNCATI
384. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1. VTVTVAPMCA EYNGLRLATS LQ
385. VP3 GLPVMITPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV
386. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMDIYRI PVQSGNHQST
387. QVFGFQVQPG LDNVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF
388. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKSRKDAML GTHIIWDVGL
389. QSSCVLCIPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV
390. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTALLQ
391. VP1 GDVVEAVENA VARVADTISS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS
392. QVTPSDIIQT RHVHNYHSRS ESSIENFLCR SACVYMGEYH
393. TTNTDASKLF ASWTINARRM VQMRRKLEMF TYVRFDVEVT
394. FVITSKQDQG TKLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY
395. TWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS
396. HFSQNGVYGY NTLNRMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYF
397. KPKHVKVWVP RPPRLCQYVN ASTVNFKPTN ITEKRTSINY1.ETVKPDVS TY штамм 7611)
398. Белок Последовательность нуклеотидов
399. VP 4 ATGGGAGCTC AAGTGTCGAC ACAAAAGACT GGAGCGCATG
400. AGACCGGTTT GAGTGCCAGC GGGAACTCAA TTATACATTA
401. САССААСАТС ААСТАСТАТА AGGATGCCGC GTCAAACTCA
402. GCAAACAGGC AAGACTTCTC CCAAGATCCC GGGAAGTTCA
403. CAGAACCGGT GAAAGATATA ATGGTGAAAT CACTACCTGC1. ТСТАААС
404. VP2 TCACCATCTG CCGAGGAGTG CGGTTATAGC GACAGAGTGC
405. GTTCCATCAC ACTTGGTAAT ТССАССАТАА CAACCCAGGA
406. GAGCGCCAAC GTGGTGGTGG CATATGGCAG ATGGCCCGAG
407. TACTTGAAGG ACGATGAGGC CACCGCCGAG GACCAACCAA
408. CCCAGCCGGA TGTAGCTACA TGTAGGTTCT ACACATTGGA
409. GTCAGTCACA TGGGAGAAAG ACTCACCAGG ATGGTGGTGG
410. AAGTTTCCAG ACGCTCTGAA GGACATGGGC TTATTTGGGC
411. AGAATATGTA СТАТСАСТАС CTAGGTAGGG CTGGATACAC
412. TATACACGTG CAGTGCAACG CCTCCAAATT CCACCAGGGC
413. TGCCTGATGG TTGTCTGCGT GCCAGAGGCG GAAATGGGCT
414. GTAGTCAGAT TGATGGTACA GTAAATGAGC ACAATCTGAG
415. TGAAGGAGAG ACTGCTAAGA AATTTGCAGC CACTTCCACT
416. AACGGAACAA ATACAGTCCA ATCAATCGTG ACGAATGCAG
417. GCATGGGAGT GGGTGTGGGC AACTTAACCA TTTTCCCACA
418. TCAATGGATT AACTTGCGAA CAAACAATTG TGCCACTATA
419. GTGATGCCAT АСАТСААСАА TGTGCCTATG GACAACATGT
420. ТTAGАСАССА СААТТТТАСА CTGATGATCA TACCCTTTGT
421. GCCATTGGAT TACTCGTCAG ATTCATCTAC ATATGTACCA
422. GTTACAGTCA CGGTGGCCCC GATGTGCGCA GAATACAATG
423. GCTTGAGATT GGCGACTTCG TTGCAA
424. УРЗ GGTTTGCCTG TAATGATCAC CCCAGGAAGT AACCAGTTCT
425. TGACCTCAGA CGATTTTCAA TCACCATCAG CCATGCCACA
426. GTTTGATGTA АСАССAGAGТ TGAACATACC TGGTGAAGTG
427. CAGAACCTCA TGGAGATTGC AGAGGTCGAC TCCGTGGTTC
428. CAGTAAACAA TGTGGAAGGG AAGCTGGACA CGATGGATAT
429. CTATCGAATT CCTGTACAGA GTGGCAACCA CCAGAGTACA
430. CAAGTGTTTG GCTTCCAGGT GCAGCCAGGG TTGGACAATG
431. TGTTCAAGCA CACATTATTG GGGGAAATAC TGAACTACTA
432. TGCACACTGG TCAGGGAGCA TCAAACTCAC GTTCGTCTTC
433. TGCGGTTCAG CCATGGCCAC CGGGAAGTTC CTACTTGCGT
434. ATGCACCACC AGGGGCGAAT GCCCCGAAGA GCAGGAAGGA
435. TGCAATGCTG GGCACGCACA TCATCTGGGA TGTGGGGTTG
436. CAGTCATCAT GCGTCTTGTG TATACCTTGG ATTAGTCAGA
437. CGCACTATAG ACTAGTGCAA CAAGATGAGT ACACCAGTGC
438. AGGAAATGTC ACTTGTTGGT ATCAGACAGG GATTGTGGTT
439. CCAGCAGGCA СТССААСАТС GTGCTCCATC ATGTGTTTTG
440. TTTCAGCATG CAATGACTTC TCGGTGCGCT TGCTAAAAGA
441. ТАСАССАТТТ ATAGAGCAAA CTGCCCTCCT GCAA
442. VP1 GGTGATGTGG TGGAGGCAGT CGAAAATGCC GTTGCACGCG
443. TGGCAGACAC CATTAGCAGT GGGCCATCAA ATTCACAAGC
444. TGTGCCTGCT CTGACCGCTG TGGAGACGGG ACACACGTCT
445. CAAGTAACCC CCAGTGACAT CATACAGACC AGGCACGTGC
446. АСААСТАССА CTCTAGATCA GAATCCAGTA TTGAGAACTT
447. TCTTTGTAGG TCGGCATGCG TCTACATGGG AGAATACCAC
448. АСААССААТА CCGATGCCTC CAAGTTGTTT GCGTCATGGA
449. CCATCAACGC ACGGCGTATG GTACAAATGA GGCGCAAACT
450. CGAGATGTTC ACGTACGTTA GGTTTGACGT GGAAGTGACA
451. TTTGTGATTA CCAGTAAACA AGATCAAGGG ACCAAACTGG
452. GCCAAGATAT GCCACCACTG ACACACCAAA TTATGTATAT
453. ACCACCAGGG GGCCCTATAC CGAAGTCAGT AACGGACTAC
454. ACGTGGCAAA САТССАССАА CCCGAGTATC TTTTGGACTG
455. AGGGAAATGC ACCACCCAGG ATGTCCATCC CTTTCATTAG
456. TATTGGCAAT GCCTACAGTA ATTTCTATGA CGGCTGGTCA
457. САТТТСТСТС AAAATGGTGT GTACGGTTAC AATACGCTCA
458. ATCGTATGGG ССАААТТТАС GTCAGGCACG TGAACGGATC
459. СТСАССАСТА CCTATGACAA GCACAGTTAG GATGTACTTC
460. AAGCCAAAGC ACGTGAAAGT GTGGGTCCCA CGCCCGCCTA
461. GGTTGTGCCA GTACGTGAAT GCATCAACTG TCAACTTCAA
462. АСССАССААС ATCACTGAGA AGAGAACAAG CATTAACTAC
463. ATACCAGAGA CAGTCAAACC TGATGTTTCA ACATAC
464. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU167521.
465. Аминокислотная последовательность структурных белков клона 101 (штамм7611)
466. Белок Аминокислотная последовательность
467. VP4 MGAQVSTQKT GAHETGLSAS GNSIIHYTNI NYYKDAASNS
468. ANRQDFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN
469. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVAYGRWPE
470. YLKDDEATAE DQPTQPDVAT CRFYTLESVT WEKDSPGWWW
471. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTIHV QCNASKFHQG
472. CLMVVCVPEA EMGCSQIDGT VNEHNLSEGE TAKKFAATST
473. NGTNTVQSIV TNAGMGVGVG NLTIFPHQWI NLRTNNCATI
474. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1. VTVTVAPMCA EYNGLRLATS LQ
475. VP3 GLPVMITPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV
476. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMDIYRI PVQSGNHQST
477. QVFGFQVQPG LDNVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF
478. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKSRKDAML GTHIIWDVGL
479. QSSCVLCIPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV
480. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTALLQ
481. VP1 GDVVEAVENA VARVADTISS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS
482. QVTPSDIIQT RHVHNYHSRS ESSIENFLCR SACVYMGEYH
483. TTNTDASKLF ASWTINARRM VQMRRKLEMF TYVRFDVEVT '
484. FVITSKQDQG TKLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY
485. TWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS
486. HFSQNGVYGY NTLNRMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYF
487. KPKHVKVWVP RPPRLCQYVN ASTVNFKPTN ITEKRTSINY1.ETVKPDVS TY штамм 7611)
488. Белок Последовательность нуклеотидов
489. VP4 ATGGGAGCTC AAGTGTCGAC ACAAAAGACT GGAGCGCATG
490. AGACCGGTTT GAGTGCCAGC GGGAACTCAA TTATACATTA
491. САССААСAT С AACTACTATA AGGATGCCGC GTCAAACTCA
492. GCAAACAGGC AAGACTTCTC CCAAGATCCC GGGAAGTTCA
493. CAGAACCGGT GAAAGATATA ATGGTGAAAT CACTACCTGC1. ТСТАААС
494. VP2 TCACCATCTG CCGAGGAGTG CGGTTATAGC GACAGAGTGC
495. GTTCCATCAC ACTTGGTAAT ТССАССАТАА CAACCCAGGA
496. GAGCGCCAAC GTGGTGGTGG CATATGGCAG ATGGCCCGAG
497. TACTTGAAGG ACGATGAGGC CACCGCCGAG GACCAACCAA
498. CCCAGCCGGA TGTAGCTACA TGTAGGTTCT ACACATTGGA
499. GTCAGTCACA TGGGAGAAAG ACTCACCAGG ATGGTGGTGG
500. AAGTTTCCAG ACGCTCTGAA GGACATGGGC TTATTTGGGC
501. AGAATATGTA СТАТСАСТАС CTAGGTAGGG CTGGATACAC
502. TATACACGTG CAGTGCAACG ССТССАААТТ CCACCAGGGC
503. TGCCTGATGG TTGTCTGCGT -GCCAGAGGCG GAAATGGGCT
504. GTAGTCAGAT TGATGGTACA GTAAATGAGC ACAGTCTGAG
505. TGAAGGAGAG ACTGCTAAGA AATTTGCAGC CACTTCCACT
506. AACGAAACAA ATACAGTCCA ATCAATCGTG ACGAATGCAG
507. GCATGGGAGT GGGTGTGGGC AACTTAACCA TTTTCCCACA
508. TCAATGGATT AACTTGCGAA CAAACAATTG TGCCACTATA
509. GTGATGCCAT АСАТСААСАА TGTGCCTATG GACAACATGT
510. TTAGACACCA СААТТТТАСА СTGATGATСA TACCCTTTGT
511. GCCATTGGAT TACTCGTCAG ATTCATCTAC ATATGTACCA
512. GTTACAGTCA CGGTGGCCCC GATGTGCGCA GAATACAATG
513. GCTTGAGATT GGCGACTTCG TTGCAA ■
514. VP3 GGTTTGCCTG TAATGATCAC CCCAGGAAGT AACCAGTTCT
515. TGACCTCAGA CGATTTTCAA TCACCATCAG CCATGCCACA
516. GTTTGATGTA ACACCAGAGT TGAACATACC TGGTGAAGTG
517. CAGAACCTCA TGGAGATTGC AGAGGTCGAC TCCGTGGTTC
518. CAGTAAACAA TGTGGAAGGG AAGCTGGACA CGATGGATAT
519. CTATCGAATT CCTGTACAGA GTGGCAACCA CCAGAGTACA
520. CAAGTGTTTG GCTTCCAGGT GCAGCCAGGG TTGGACAATG
521. TGTTCAAGCA CACATTATTG GGGGAAATAC TGAACTACTA
522. TGCACACTGG TCAGGGAGCA TCAAACTCAC GTTCGTCTTC
523. TGCGGTTCAG CCATGGCCAC CGGGAAGTTC CTACTTGCGT
524. ATGCACCACC AGGGGCGAAT GCCCCGAAGA GCAGGAAGGA
525. TGCAATGCTG GGCACGCACA TCATCTGGGA TGTGGGGTTG
526. CAGTCATCAT GCGTCTTGTG TATACCTTGG ATTAGTCAGA
527. CGCACTATAG ACTAGTGCAA CAAGATGAGT ACACCAGTGC
528. AGGAAATGTC ACTTGTTGGT ATCAGACAGG GATTGTGGTT
529. CCAGCAGGCA СТССААСАТС GTGCTCCATC ATGTGTTTTG
530. TTTCAGCATG CAATGACTTC TCGGTGCGCT TGCTAAAAGA
531. ТАСАССАТТТ ATAGAGCAAA CTGCCCTCCT GCAA
532. VP1 GGTGATGTGG TGGAGGCAGT CGAAAATGCC GTTGCACGCG
533. TGGCAGACAC CATTAGCAGT GGGCCATCAA ATTCACAAGC
534. TGTGCCTGCT CTGACCGCTG TGGAGACGGG ACACACGTCT
535. CAAGTAACCC CCAGTGACAT CATACAGACC AGGCACGTGC
536. АСААСТАССА CTCTAGATCA GAATCCAGTA TTGAGAACTT
537. TCTTTGTAGG TCGGCATGCG TCTACATGGG AGAATACCAC
538. АСААССААТА CCGATGCCTC CAAGTTGTTT GCGTCATGGA
539. CCATCAACGC ACGGCGTATG GTACAAATGA GGCGCAAACT
540. CGAGATGTTC ACGTACGTTA GGTTTGACGT GGAAGTGACA ■
541. TTTGTGATTA CCAGTAAACA AGATCAAGGG ACCAAACTGG
542. GCCAAGATAT GCCACCACTG АС АС АС С AAA TTATGTATAT
543. ACCACCAGGG GGCCCTATAC CGAAGTCAGT AACGGACTAC
544. ACGTGGCAAA САТССАССАА CCCGAGTATC TTTTGGACTG
545. AGGGAAATGC ACCACCCAGG ATGTCCATCC CTTTCATTAG
546. TATTGGCAAT GCCTACAGTA ATTTCTATGA CGGCTGGTCA
547. САТТТСТСТС AAAATGGTGT GTACGGTTAC AATACGCTCA
548. ATCGTATGGG ССАААТТТАС GTCAGGCACG TGAACGGATC
549. СТСАССАСТА ССТАТGACAA GCACAGTTAG GATGTACTTC
550. AAGCCAAAGC ACGTGAAAGT GTGGGTCCCA CGCCCGCCTA
551. GGTTGTGCCA GTACGTGAAT GCATCAACTG ТСААСТТСАА
552. АСССАССААС ATCACTGAGA AGAGAACAAG САТТААСТАС
553. ATACCAGAGA CAGTCAAACC TGATGTTTCG АСАТАС
554. Примечание: данная последовательность была депонирована в GenBank под регистрационным номером EU167522.7611)
555. Белок Аминокислотная последовательность
556. VP4 MGAQVSTQKT GAHETGLSAS GNSIIHYTNI NYYKDAASNS
557. ANRQDFSQDP GKFTEPVKDI MVKSLPALN
558. VP2 SPSAEECGYS DRVRSITLGN STITTQESAN VVVAYGRWPE
559. YLKDDEATAE DQPTQPDVAT CRFYTLESVT WEKDSPGWWW
560. KFPDALKDMG LFGQNMYYHY LGRAGYTIHV QCNASKFHQG
561. CLMVVCVPEA EMGCSQIDGT VNEHSLSEGE TAKKFAATST
562. NETNTVQSIV TNAGMGVGVG NLTIFPHQWI NLRTNNCATI
563. VMPYINNVPM DNMFRHHNFT LMIIPFVPLD YSSDSSTYVP1. VTVTVAPMCA EYNGLRLATS LQ
564. УРЗ GLPVMITPGS NQFLTSDDFQ SPSAMPQFDV TPELNIPGEV
565. QNLMEIAEVD SVVPVNNVEG KLDTMDIYRI PVQSGNHQST
566. QVFGFQVQPG LDNVFKHTLL GEILNYYAHW SGSIKLTFVF
567. CGSAMATGKF LLAYAPPGAN APKSRKDAML GTHIIWDVGL
568. QSSCVLCIPW ISQTHYRLVQ QDEYTSAGNV TCWYQTGIVV
569. PAGTPTSCSI MCFVSACNDF SVRLLKDTPF IEQTALLQ
570. VP1 GDVVEAVENA VARVADTISS GPSNSQAVPA LTAVETGHTS
571. QVTPSDIIQT RHVHNYHSRS ESSIENFLCR SACVYMGEYH
572. TTNTDASKLF ASWTINARRM VQMRRKLEMF TYVRFDVEVT
573. FVITSKQDQG TKLGQDMPPL THQIMYIPPG GPIPKSVTDY
574. TWQTSTNPSI FWTEGNAPPR MSIPFISIGN AYSNFYDGWS
575. HFSQNGVYGY NTLNRMGQIY VRHVNGSSPL PMTSTVRMYF
576. KPKHVKVWVP RPPRLCQYVN ASTVNFKPTN ITEKRTSINY1.ETVKPDVS TY
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.