Оптимизация условий культивирования вируса чумы мелких жвачных для получения диагностических и вакцинных препаратов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Капускин, Егор Вадимович

• Капускин, Егор Вадимович
• кандидат ветеринарных наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Капускин, Егор Вадимович

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Распространенность чумы мелких жвачных.

1.2. Характеристика возбудителя чумы мелких жвачных.

1.2.1. Таксономическое положение вируса.

1.2.2. Морфология вируса.

1.2.3. Белковый состав вириона.

1.2.4. Транскрипция и репликация вируса.

1.2.5. Культивирование вируса.

1.2.7. Устойчивость вируса.

1.3. Эпизоотические особенности болезни.

1.4 Эпизоотическая ситуация по ЧМЖ в мире.

1.5. Патогенез.

1.6. Локализация вируса.

1.7. Клинические признаки.

1.8 Патолого-анатомические изменения.

1.9. Гистологические изменения.

1.10. Диагностика болезни.

1.11. Иммунитет и специфическая профилактика.

1.12. Меры борьбы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация условий культивирования вируса чумы мелких жвачных для получения диагностических и вакцинных препаратов»

Инфекционные болезни, среди которых одно из ведущих мест занимают болезни вирусной этиологии, наносят животноводству значительный экономический ущерб, слагающийся из снижения продуктивности, вынужденного убоя, гибели больных животных, а также затрат на проведение охранно-карантинных, ветеринарно-санитарных и других мероприятий [89, 119, 172, 226].

Благодаря развитию отечественной ветеринарной науки и усилию практической ветеринарной службы на территории нашей страны ликвидирован ряд опасных инфекционных болезней сельскохозяйственных животных (чума крупного рогатого скота, контагиозная плевропневмония крупного рогатого скота и др.), а также снизился уровень заболеваемости при многих других инфекциях.

Считается, что в настоящее время существует всеобщий глобальный риск заноса возбудителя в любую точку мира. Современный этап мировой эволюции характеризуется выходом многих ранее локальных болезней за пределы эпизоотических очагов, за границы стран и даже континентов [4, 75].

Болезни, которые на данном историческом отрезке времени не встречаются в стране, но регистрируются в других странах мира, принято называть экзотическими, такой является и чума мелких жвачных (ЧМЖ) [35] .

Первоначально ЧМЖ регистрировалась в странах Западной Африки, в последующем ее стали отмечать в Центральной и Восточной Африке, а с 1980 года и на Аравийском полуострове. Сейчас это заболевание имеет широкое распространение на африканском континенте и в Азии.

Расширению ареала распространения этой инфекции могут способствовать не только социально-экономические, но и природные факторы.

ЧМЖ в РФ не регистрируется. Но вследствие широких экономических, культурных и других связей со странами, неблагополучными по этому заболеванию, существует реальная угроза заноса ее на территорию нашей страны[1, 4, 23, 26, 34, 35, 36, 40, 48, 57, 58, 61, 62, 77, 119, 127, 136, 140].

В связи с вышеизложенными обстоятельствами, все это делает целесообразным изучение этой важной экзотической болезни, представляющей угрозу для животноводства РФ, с целью иметь возможность, при необходимости, наработать соответствующие диагностические и вакцинные препараты.

Цель и задачи исследований

Целью исследований являлось усовершенствование технологических параметров культивирования вируса чумы мелких жвачных для получения диагностических и вакцинных препаратов.

В задачи исследований входило: провести анализ эпизоотической ситуации по ЧМЖ в мире в 19962007 гг.; оценить риск заноса этой инфекции на территорию РФ; изучить чувствительность различных клеточных культур к вирусу чумы мелких жвачных; подобрать оптимальные условия культивирования вируса чумы мелких жвачных, обеспечивающие высокое накопление вируссодержащего материала; разработать технологию изготовления живой вирусвакцины против чумы мелких жвачных культуральной сухой; провести испытания опытных серий вакцины против чумы мелких жвачных; использовать оптимальные условия культивирования вируса при изготовлении специфических антигенов и гипериммунных сывороток.

Научная новизна

Изучена эпизоотическая ситуация по ЧМЖ в мире за период 19962007гг. и проведен качественный анализ риска заноса данного заболевания на территорию РФ.

Изучены иммунобиологические свойства оригинального вируса чумы мелких жвачных штамма «ВНИИЗЖ».

Исследована чувствительность различных клеточных культур к вирусу ЧМЖ, в результате чего подобрана оптимальная система культивирования.

Усовершенствована технология культивирования вируса ЧМЖ, обеспечивающая высокое накопление вируссодержащего материала для изготовления диагностических препаратов и вирусвакцины против чумы мелких жвачных.

Получены экспериментальные серии вирусвакцины против чумы мелких жвачных и проведены испытания их иммунобиологических свойств.

Практическая ценность работы

На основании проведенных экспериментальных исследований разработана технология культивирования вируса ЧМЖ штамма «ВНИИЗЖ» для производства вакцин против ЧМЖ и изготовления диагностических препаратов. Получен производственный вакцинный штамм «ВНИИЗЖ» вируса чумы мелких жвачных, который депонирован в коллекции микроорганизмов ФГУ «Всероссийского государственного центра качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (5 марта 2007 г.).

По материалам работы подготовлена, одобрена ученым советом и утверждена директором ФГУ «ВНИИЗЖ» «Методика культивирования и титрования вируса чумы мелких жвачных в перевиваемой культуре клеток СЬ-91» (2007 г.).

Экспериментальные материалы по оптимизации культивирования вируса чумы мелких жвачных штамма «ВНИИЗЖ» вошли в утвержденные директором ФГУ «ВНИИЗЖ»:

- Инструкцию по применению вирусвакцины против чумы мелких жвачных культуральной сухой;

- СТО 00495527-0095-2008 на изготовление вирусвакцины против чумы мелких жвачных культуральной сухой. и

Основные положения, выносимые на защиту:

- условия культивирования вакцинного вируса ЧМЖ штамма «ВНИИЗЖ»;

- характеристика антигенных свойств вируса чумы мелких жвачных штамма «ВНИИЗЖ»;

- технология изготовления вирусвакцины против чумы мелких жвачных культуральной сухой;

- результаты лабораторных испытаний иммунобиологических свойств вирусвакцины;

- технология изготовления специфических антигенов и гипериммунных сывороток.

Апробация работы

Результаты исследований по теме диссертации были опубликованы и доложены на: «Международной научной конференции по проблемам животноводства, ветеринарии и кормопроизводства», 16-18 мая 2007 г., Бишкек, КиргНИИЖВиП; на Международной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых - в ветеринарную практику» 16-18 апреля 2008 г., г. Владимир, и на заседаниях ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2005-2007 гг.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, из них две статьи в изданиях, по перечню ВАК.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 155 страницах, иллюстрирована 26 таблицами и 18 рисунками. Список используемой литературы включает 227 источников, из которых 164 иностранных.

Личный вклад

Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы диссертации проводились совместно с к.б.н. A.B. Щербаковым раздел — «Идентификация вируса ЧМЖ штамма

ВНИИЗЖ» (изучение идентичности вируса ЧМЖ штамма «ВНИИЗЖ» методом полимеразной цепной реакции); с д.б.н. А.П. Пономаревым раздел -«Идентификация вируса ЧМЖ штамма «ВНИИЗЖ» (электронно-микроскопическое исследование); с к.в.н. Марковым Г.В. и к.в.н. Онищенко P.M. раздел - «Устойчивость вируса ЧМЖ штамма «ВНИИЗЖ» при лиофилизации».

Диссертационная работа выполнена в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» в 2005-2008 гг.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Капускин, Егор Вадимович

5. ВЫВОДЫ

1. Анализ эпизоотической ситуации по чуме мелких жвачных в странах мира за период 1996-2007 гг. показал, что это заболевание овец и коз имеет широкое распространение, особенно в Западной и Центральной Африке, Аравийском полуострове и Азии, а в последние годы выявлена тенденция приближения нозоареала к границе РФ. Качественный анализ риска заноса заболевания в РФ свидетельствует о высокой вероятности возникновения чумы мелких жвачных в России.

2. Установлено, что наибольшей вирусрепродуцирующей способностью к вирусу чумы мелких жвачных штамма «ВНИИЗЖ» обладали перевиваемые культуры клеток Ch-91, Vero и MDBK.

3. Показано, что максимальное накопление вируса чумы мелких жвачных в титрах 6,5-6,75 lg ТЦД5о/см происходит в культуре клеток Ch-91, при множественности заражения 0,1 ТЦД50/кл, с применением поддерживающей среды Игла и с 2% инактивированной фетальной сыворотки, стационарном способе культивирования и сборе вирусного материала при 80% поражения монослоя.

4. Установлено, что лучшими защитными свойствами при лиофилизации вируса чумы мелких жвачных штамма «ВНИИЗЖ» обладает среда, содержащая в конечной концентрации 3% ГЛА, 3% сахарозы, 0,6% желатозы, которая обеспечивает возможность использования вирусвакцины в течение двух лет при температуре хранения 4 °С.

5. Установлено, что изготовленные вирусвакцины против чумы мелких жвачных из штамма «ВНИИЗЖ» безвредные и ареактогенные для овец и коз, не контагиозные при контакте вакцинированных и интактных животных, не реверсибельные при пассировании на овцах и козах.

6. Показано, что вирусвакцина против чумы мелких жвачных обладает ярко выраженными антигенными свойствами и индуцирует выработку вируснейтрализующих антител в титре 6,0-7,0 log2, что соответствует международным требованиям. Установлено, что оптимальная иммунизирующая доза для овец и коз составляет 100 ТЦД5о/см3.

7. Установлено, что оптимальным способом получения специфических антигенов вируса чумы мелких жвачных является осаждение вируса ПЭГ-6000 в конечной концентрации 4% с дальнейшей очисткой ПЭИ, в 5 результате титр вируса повышается на 1,50 ^ ТЦД50/см . При гипериммунизации животных данным антигеном специфические сыворотки крови имеют титр 10,48±0,17 в РН.

8. Воспроизводимость разработанной технологии культивирования вируса чумы мелких жвачных штамма «ВНИИЗЖ», обеспечивает наработку высокоактивного вирусного материала для изготовления диагностических и вакцинных препаратов, подтверждена комиссионными испытаниями с участием сотрудников ФГУ «ВГНКИ».

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных экспериментальных исследований разработана технология культивирования вируса ЧМЖ штамма «ВНИИЗЖ» для производства вакцин против ЧМЖ и изготовления диагностических препаратов. Получен производственный вакцинный штамм «ВНИИЗЖ» вируса чумы мелких жвачных, который депонирован в коллекции микроорганизмов ФГУ «Всероссийского государственного центра качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (5 марта 2007 г.).

По материалам работы подготовлена, одобрена ученым советом и утверждена директором ФГУ «ВНИИЗЖ» «Методика культивирования и титрования вируса чумы мелких жвачных в перевиваемой культуре клеток СЬ-91» (2007 г.).

Экспериментальные материалы по оптимизации культивирования вируса чумы мелких жвачных штамма «ВНИИЗЖ» вошли в утвержденные директором ФГУ «ВНИИЗЖ»:

- Инструкцию по применению вирусвакцины против чумы мелких жвачных культуральной сухой;

- СТО 00495527-0095-2008 на изготовление вирусвакцины против чумы мелких жвачных культуральной сухой.

1.13. Заключение

Из приведенных литературных данных видно, что в настоящее время ЧМЖ является самостоятельным заболеванием мелкого рогатого скота, а возбудитель отнесен к семейству Paromyxoviridae, роду Morbillivirus.

Наибольшее географическое распространение ЧМЖ получила в Западной и Центральной Африке, Аравийском полуострове, в странах Ближнего Востока и Азии.

Расширение ареала ЧМЖ к востоку и распространение ее в Турции, Афганистане, Иране, Индии, Пакистане, Казахстане, Таджикистане, Монголии и Китае создает определенную угрозу заноса данной инфекции и в нашу страну, что может принести к значительному экономическому ущербу овцеводства и козоводства. В России до сих пор пока нет промышленной технологии изготовления надежного вакцинного препарата против ЧМЖ, которая обеспечивала бы получение вакцины с выраженными антигенными свойствами, не утрачиваемыми в процессе хранения и применения.

Разработка технологии изготовления вирусвакцины против чумы мелких жвачных является актуальной проблемой на сегодняшний день. Такой вакцинный препарат должен в случае необходимости надежно защитить овцеводческие и козоводческие хозяйства при возможном заносе ЧМЖ из неблагополучных по данному заболеванию стран.

Одним из основных технологических вопросов при изготовлении вирусвакцины и диагностических препаратов является оптимизация условий культивирования вируса, позволяющая получать вируссодержащий материал с высоким накоплением специфического антигена, что являлось темой диссертации.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы

2.1.1. Вирус. В работе был использован вирус чумы мелких жвачных, полученный из музея ФГУ «ВНИИЗЖ».

2.1.2. Животные. В работе использовали овец и коз 12-24-месячного возраста, не привитых против ЧМЖ, для изучения антигенной активности вакцины, проверки препаратов на безвредность, реактогенность, реверсибельность и возможность контактной передачи вируса.

2.1.3. Культуры клеток. Для культивирования, титрования и получения высокоактивного вирусного материала с целью изготовления вакцинных препаратов, а также для постановки РН использовали перевиваемую культуру клеток гонад козы (Ch-91). Культура клеток Ch-91 была получена Г.А. Худяковым, В.Н. Герасимовым и Е.Е. Федоровой в 1992 году во «ВНИИЗЖ». В 1996 г. культура клеток была запатентована (Пат. РФ №2061753) и занесена в реестр Европейской коллекции культур тканей и клеток.

На различных этапах работы были использованы следующие культуры клеток: первично трипсинизированные - почки ягненка (ПЯ), тестикулы ягненка (ТЯ), почки козленка (ПК), тестикулы козленка (ТК), а также перевиваемые - почки эмбриона КРС (MDBK), почки теленка (RBt), почки сайги (ПС), почки овцы (ПО), почки эмбриона свиньи (СПЭВ), почки свиньи (IB-RS-2), почки новорожденного сирийского хомячка - шведская линия (ВНК-21/13), почки африканской зеленой мартышки (Vero).

Культуры клеток в виде монослоя или суспензии клеток получали из отдела культивирования клеток ФГУ «ВНИИЗЖ».

2.1.4. Реактивы и растворы. При культивировании клеток и наработке вируссодержащих материалов использовали поддерживающие среды, приготовленные по стандартным прописям: Игла, ПСС, ПСП, раствор. Хенкса, ДМЭМ и 199.

Питательные среды в готовом виде получали из лаборатории биотехнологии ФГУ «ВНИИЗЖ».

Для культивирования культур клеток в ростовую среду вносили 10% сыворотки КРС, пенициллина 100000 ед., стрептомицина 0,1 г, 10 мл 60%-го раствора Ь-глутамина на 1 дм3, рН среды - 7,2-7,4.

Для культивирования вируса ЧМЖ в питательную среду вносили 2% прогретой при 56°С в течение 30 мин фетальной сыворотки; пенициллин 100000 ЕД; стрептомицин 0,1 г и Ь-глутамина 10 мл 6%-го раствора на 1 дм3 среды, 7,5%) раствором натрия двууглекислого доводили рН до 7,4-7,6.

Определение стерильности промежуточных вирусных материалов и изготовленных вакцинных препаратов проверяли высевом на бактериальные среды: тиогликолевую (ТГС), мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА).

При изготовлении лиофилизированных вакцинных препаратов в качестве защитной среды использовали 50% раствор сахарозы, 20% раствор гидролизата лактальбумина, 20% раствор желатозы и гликоколовый буфер.

Для концентрирования и очистки вируса ЧМЖ использовали 50% раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000 (ПЭГ), 50% раствор полиэтиленимина (ПЭИ), 10% раствор гидроокиси алюминия (ГОА).

На разных этапах исследований использовали фосфатно-буферный раствор, 0,25% раствор трипсина, диспергирующую смесь, состоящую из трипсина и версена в соотношении 9:1.

Для изготовлений питательных сред и вспомогательных растворов использовали реактивы квалификации «чда» или «хч» и деионизированную дистиллированную воду.

2.2. Методы исследований

2.2.1. Культивирование культур клеток.

Разморозка и выращивание культур клеток в 1,5 литровых матрасах.

Две ампулы музейного запаса производственной линии клеток извлекали из хранилища с жидким азотом и размораживали при температуре 37°С±1°С в течение 1-2 мин при встряхивании. В боксе ампулы протирали тампоном, смоченным в спирте. Суспензию клеток из каждой ампулы с помощью пипетки переносили в отдельный матрас вместимостью 1,5 дм3 с 200 см3 ростовой среды.

Сосуды с суспензией клеток помещали в термостат и инкубировали при температуре 37°С±1°С в течение 2-3 суток до получения полного монослоя.

За сутки перед пересевом питательную среду в матрасах заменяли на свежую.

Качество культуры клеток контролировали путём визуального просмотра матрасов и микрокопирования монослоя.

Кондиционный монослой должен быть плотным, полным, без дегенеративных изменений, клетки в монослое должны быть веретенообразными, выпуклыми и прозрачными без наличия вакуолизации.

Из каждого матраса с матровой расплодкой брали пробы для определения бактериального и грибного загрязнения.

Бактериальное и грибное загрязнение характеризуется следующими показателями:

- при визуальном контроле - помутнением питательной среды, изменением цвета среды к жёлтому или фиолетовому, наличием колоний грибов в среде или на стенках сосудов;

- при микроскопировании - наличием колоний бактерий светло-коричневого цвета, нитей мицелия грибов, изменением морфологии клеток и помутненем монослоя;

При наличии хотя бы одного из перечисленных признаков культуру клеток выбраковывали.

Поддержание перевиваемых культур клеток. Для поддержания перевиваемых кулыур клеток использовали пассирование в стандартных условиях.

Для пересева выбирали матрасы с культурой клеток в виде сформировавшегося плотного равномерного монослоя с четко выраженными границами между клетками, без наличия скопления вакуолизированных и округлых клеток: клетки в монослое были прозрачными, выпуклыми, полигональной формы, без зернистости.

За сутки перед пересевом в матрасе с культурой клеток меняли ростовую среду.

Из отобранных для пересева культуральных сосудов сливали среду, монослой клеток промывали подогретым до 37°С, диспергирующим раствором в количестве, обеспечивающем полное покрытие монослоя клеток. Через 5-10 мин. раствор сливали, матрасы помещали в термостат, сосуды с круговым слоем - в роллерный аппарат. Через 5-7 мин. монослой набухал и при резком встряхивании полностью разрушался. В сосуды с клетками добавляли небольшое количество среды ПСП или Игла и энергично встряхивали для получения однородной клеточной суспензии.

Подсчёт клеток в суспензии проводили по общепринятой методике. Пробы помещали в камеру Горяева, где подсчитывали процент погибших клеток и одновременно определяли концентрацию клеток в суспензии. К 1 мл концентрата клеток добавляли 9 мл 0,5% ГЛА, из полученных 10 мл брали 1 мл и смешивали с 1 мл 0,1%-го раствора трипанового синего. После 1-3 мин. окрашивания каплю суспензии микропипеткой вносили в счётную камеру. Погибшие клетки легко окрашивались в синий цвет. Клетки подсчитывали под малым увеличением светового микроскопа МБИ-3 в обеих камерах во всех больших квадратах.

Для точности результатов подсчёт проводили в двух пробах. Количество клеток в 1 мл суспензии определяли по формуле:

0x1000x20 , х - число клеток в 1 см3 суспензии,

С) - среднее число клеток в счётной камере по результатам подсчёта в двух пробах,

1000 - число кубических миллиметров в 1 см3,

20 - коэффициент разведения исходной клеточной суспензии,

0,9 - объём счётной камеры Горяева в 0,1 см3.

Процент жизнеспособных клеток подсчитывают по формуле: кп = 2^x100,где а кл. - процент жизнеспособных клеток, а - общее число клеток, в - число погибших клеток,

100 - коэффициент.

Разведение клеточного концентрата проводили так, чтобы конечная

3 5 3 концентрация его была приблизительно 1x10 -2x10 кл/см. Если концентрация больше или меньше указанной, то возрастает ошибка подсчёта. Также учитывали, что камера Горяева даёт 15% ошибки счёта.

Затем концентрацию клеток доводили питательной средой с 5% сыворотки крупного рогатого скота до 130 тыс. в 1 см ; рН среды - от 7,2 до 7,4.

В работе использовали суспензию, содержащую не менее 90% живых клеток и прошедшую контроль на стерильность. Суспензию клеток, не отвечающую одному из этих показателей, выбраковывали.

Полученную клеточную суспензию рассевали в культуральные сосуды. Культуральные сосуды помещали в термостат и инкубировали в течение 2-3 суток до получения полного плотного монослоя.

2.2.2. Культивирование вируса. Процесс культивирования вируса ЧМЖ включает следующие этапы:

- отбор матрасов с клеточной культурой;

- инфицирование клеточной культуры вирусом ЧМЖ;

- культивирование вируса ЧМЖ в клеточной культуре;

- микроскопия инфицированной культуры;

- замораживание инфицированных клеток в культуральных сосудах при температуре минус 20°С±1°С;

- оттаивание вируссодержащего материала; отбор проб для контроля на стерильность и биологическую активность.

Из матрасов с плотным монослоем сливали ростовую среду, монослой клеток дважды отмывали раствором Хенкса с добавлением антибиотика (100 Ед/см3 канамицина) и вносили 10 см3 вирусной суспензии с необходимой множественностью инфицирования.

Матрасы с инфицированной культурой помещали в термостат для контакта вируса с клетками на 1 час при температуре 37°С±0,5°С. Затем в матрасы вносили 200 см3 поддерживающей среды с 2% инактивированной фетальной сывороткой и с величиной рН 7,2-7,4. Вирус культивировали до поражения 70-90% поверхности монослоя. Для контроля культуры и поддерживающей среды оставляли незараженными 2 матраса: один - со сменой ростовой среды на поддерживающую, другой - без смены среды. Матрасы с инфицированной культурой просматривали под микроскопом каждые сутки. Матрасы, в которых отмечают четкие цитопатические изменения с поражением 70-90% клеточного монослоя, отбирали, визуально просматривая на контаминацию бактериальной микрофлорой, грибами, и замораживали при температуре минус 20°С±1°С.

После замораживания вируссодержащую суспензию в матрасах оттаивали при комнатной температуре, тщательно отбивая инфицированные клетки льдинками с поверхности стекла сосудов. Оттаявшую суспензию сливали в 3-, 5- или 10-литровые бутыли. Из каждой бутыли брали по две пробы: одну - для высева на стерильность, другую - для титрования вируса. При активности ЧМЖ не ниже 5,0 lg ТЦЦ5(/см стерильный вируссодержащий материал использовали в дальнейшей работе.

2.2.3. Подбор чувствительных культур клеток для культивирования вируса ЧМЖ. Подбор чувствительных культур клеток для вируса ЧМЖ осуществляли путем серийных пассажей вирусов в первично трипсинизированных - ПЯ, ТЯ, ПК, ТК и перевиваемых - MDBK, RBt, СПЭВ, IB-RS-2, ВНК-21, Vero, Ch-91 клеточных культурах. Для опытов использовали культуры с полностью сформированным монослоем, выращенным в 50 см стеклянных матрасах. Культуру клеток инфицировали вирусом с определенной множественностью заражения и оставляли на контакт в термостате при 37°С в течение часа, затем добавляли поддерживающую среду. В процессе культивирования вирусов для каждой культуры клеток использовали соответствующую питательную среду. При поражении 60% монослоя культуру замораживали. В случае отсутствия ЦПД время культивирования составляло 9-10 суток, т.е. проводили «слепой пассаж».

В качестве контроля оставляли по одному матрасу каждой незараженной культуры клеток.

После каждого пассажа культуры клеток промораживали при минус 20°С и после оттаивания из них отбирали пробы для титрования. Для следующего пассажа в качестве матрового материала использовали пробы с наибольшим титром вируса.

2.2.4. Определение биологической активности вирусов.

Биологическую активность определяли титрованием на соответствующих культурах клеток.

Титрование вируса ЧМЖ проводили в 2- дневной клеточной культуре Ch-91, прошедшей 3-5 пассажей после размораживания клеток. Культуру клеток выращивали в пенициллиновых флаконах в питательной среде с 10 % сыворотки л

КРС рН 7,2-7,-4 при посевной концентрации 130-150 тыс.кл./см до получения ровного монослоя. Для определения биологической активности вируса ЧМЖ выросшую культуру просматривали под микроскопом. Отбирали флаконы с ровным сформированным монослоем без признаков дегенерации клеток. Клетки должны быть блестящими с четко выраженными границами. Отобранные флаконы маркировали и расставляли в коробки, указывая номер пробы и кратность разведения. Для контроля культуры и поддерживающей среды оставляли незараженными 8 флаконов: четыре - со сменой ростовой среды на поддерживающую, остальные - без смены среды.

Вирус, предназначенный для титрования, разводили в поддерживающей среде с 2 % инактивированной фетальной сыворотки рН 7,2 - 7,4, делая десятикратный шаг от 10"' до 10"7. Разведения получали следующим образом: в 7 пробирок наливали по 4,5 см3 поддерживающей среды. В первую л пробирку вносили 0,5 см разведенной до исходного объема вакцины. Чистой пипеткой смешивали содержимое первой пробирки и 0,5 см3 переносили во вторую пробирку. Последующие разведения готовили таким же образом. Суспензией каждого разведения вируса, начиная с наибольшего, заражали по о

4 флаконов с культурой клеток, внося по 1 см . В качестве контроля брали 4 флакона с культурой клеток, в которые вносили поддерживающую среду без вируса. Зараженные и контрольные культуры клеток во флаконах инкубировали в стационарном положении при 37°С±1°С, смену среды проводили через каждые 2-3 суток. Просмотр титрования начинали с 3 суток после инфицирования. Окончательный учет проводили на 14 сутки по наличию цитопатических изменений в зараженных флаконах, при отсутствии таковых в контрольных флаконах с культурой клеток. Титром вируса считывали наивысшее его разведение, вызывающее четкое ЦПД в 50% культуры клеток С11-91.

Титр вируса рассчитывали по методу Кербера в модификации Ашмарина. ТЦД50 находят по следующей формуле: ТЦД50 = ДОде* (ЕЫ - 0,5), где

ТЦД5о/см - титр вируса в объеме 1,0 см ;

Бп - минимальное испытуемое разведение; а - логарифм кратности разведения, равный 1;

1л - отношение числа зараженных культур клеток, давших ЦПД к общему числу зараженных культур клеток;

Е1л - сумма значения 1л, найденная во всех испытуемых разведениях.

2.2.5. Определение уровня вируснейтрализующих антител к вирусу

ЧМЖ. Исследуемые сыворотки прогревали в водяной бане при температуре 56°С в течение 30 минут. Для постановки РН готовили двукратные разведения испытуемых сывороток от 1:2 до 1:512 на растворе Хенкса рН 7,27,4 с добавлением антибиотиков. Затем готовили необходимый объем вирусного материала, содержащий 1000 ЩД^о/см3 вируса чумы мелких жвачных и вносили по 0,5 см3 в каждый пенициллиновый флакон с равным объемом разведенной сыворотки. Пенициллиновые флаконы со смесью вируса и сыворотки встряхивали и помещали в термостат при 37,0 ± 0,5°С на 1 час. Затем эту смесь вируса с сывороткой вносили в объеме 0,2 см3 во флаконы с культурой клеток после удаления ростовой среды и выдерживали при 37,0±0,5°С в течение 1 часа. На каждое разведение сыворотки использовали 4 флакона с культурой клеток. Потом в каждый пенициллиновый флакон вносили по 0,8 см3 поддерживающей среды Игла с добавлением 2% фетальной сыворотки и антибиотиков. Пенициллиновые флаконы с культурой клеток инкубировали при 37,0±0,5°С 14 суток со сменой среды через каждые 2-3 суток.

Одновременно ставили контроли с заведомо положительной и отрицательной сыворотками, контроль вируса и интактной культуры клеток. Учет реакции нейтрализации проводили после появления 3 цитопатического действия вируса (100 ТЦД50/см ) в контроле, где оно отмечалось на 10-12 сутки.

2.2.6. Изготовление живой лиофилизированной вакцины. Для изготовления вакцины использовали вируссодержащий материал с биологической активностью вируса ЧМЖ не ниже 5,50 lg ТЦД50/см3.

В клеточную суспензию, содержащую вирус ЧМЖ, добавляли защитную среду для лиофилизации из расчета: 20% раствор ГЛА до конечной концентрации 3%, 20% раствор желатозы до конечной концентрации 0,6% и 50% раствор сахарозы до конечной концентрации 3%.

Лиофилизацию вирусвакцин проводили на базе лаборатории болезней птиц совместно с к.в.н. Марковым Г.В. и к.в.н. Онищенко P.M. в сублимационной установке S.M.J. «Usifroid» (Франция). После окончания сушки камеру установки заполняли сухим стерильным воздухом и герметизировали флаконы по ОСТу 64-7-85-79 или другим, в зависимости от используемых флаконов при расфасовке вирусвакцины. Флаконы проверяли визуально в проходящем свете на отсутствие трещин и на наличие вакуума при помощи аппарата Д'Арсонваль согласно ГОСТу 28083-89. Массовую долю влажности в высушенном материале определяли согласно ГОСТу 24061-89.

2.2.7. Определение стерильности, безвредности и антигенной активности вирусвакцины.

Определение стерильности. Определение стерильности вирусного материала и изготовленных вакцинных препаратов проводили согласно ГОСТу 28085-89. Метод заключался в определении отсутствия роста бактериальной и грибной микрофлоры в посевах образцов вакцины, вируссодержащей суспензии или антигена на питательных средах.

Определение контаминации микрофлорой проводили путем высева на пробирки с МПА, МПБ и ТГС. Пробирки выдерживали в термостате при температуре 37°С в течение 10 суток с ежедневным просмотром сред. О стерильности судили по отсутствию роста микроорганизмов на средах.

Определение безвредности вакцины. Испытание вакцинных препаратов на безвредность проводили на двух овцах или двух козах. Вакцина считалась безвредной, если все животные после введения стократной иммунизирующей дозы (5,0 см ) овцам или козам в течение срока наблюдения (14 суток) оставались, живы без видимых отклонений от физиологической нормы.

Определение антигенной активности вакцин. Антигенную активность вакцинных препаратов определяли на трех овцах или трех козах и оценивали по уровню прироста антител в сыворотке крови через 21 день после иммунизации. Антитела к вирусу ЧМЖ определяли в реакции нейтрализации.

2.2.8. Проведение качественного анализа риска заноса возбудителя ЧМЖ на территорию РФ. Методологически существует несколько вариантов оценки риска: качественный, полуколичественный и количественный анализ (табл. 1). Безусловно, первый из них является наиболее простым методом, позволяющим получить информацию быстро и в общедоступной форме. Однако полученные в результате качественного анализа данные не могут трактоваться однозначно, что сводит на нет достоинства этого метода. Количественный метод более информативен, но требует наличия широкого спектра точных данных, достаточно длителен, а осознание его результатов без специальной подготовки затруднительно.

Очевидно, что эти методы не только дополняют друг друга, но зачастую и реализуются одновременно в процессе решения одной задачи. Тем не менее в типичном случае мы можем: качественно - оценить риск заноса заболевания на ранее благополучную территорию; количественно - оценить возможное распространение и ущерб от заболевания; полуколичественно - оценить общий риск в данной ситуации.

Качественный анализ риска заноса ЧМЖ на территорию РФ был проведен по данным литературы и информации МЭБ [14, 22, 39, 60].

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Капускин, Егор Вадимович, 2008 год

1. Анджапаридзе, О.Г. Миксовирусы: науч. обзор. (Современное состояние, проблемы) / О.Г. Анджапаридзе и др.. М.:1975. - 126 с.

2. Ашмарин, И.П., Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, A.A. Воробьев. Л.: Наука, 1962. - 180 с.

3. Букринская, А.Г. Молекулярная биология парамиксовирусов / А.Г. Букринская, В.М. Зайдес. М: Медицина, 1973.- 320 с.

4. Вавилова, Н.В. Применение рекомбинантного белка в непрямом варианте ИФА для выявления антител к вирусу чумы мелких жвачных / Н.В. Вавилова, A.B. Щербаков // Ветеринарная патология. 2006. -№4(19). - С.76-78.

5. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А .Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. -М.: ВНИТИБП, 1998. 928 с.

6. Горелов, C.B. Оптимизация условий концентрирования и очистки вакцинного штамма К37.70 вируса чумы крупного рогатого скота из суспензии и выделение его структурных белков для получения моноклональных антител / C.B. Горелов, A.A. Гусев, В.Л. Зайцев //

7. Вирусные и микробные болезни животных: сб. науч. тр. Владимир, 1995.-С. 222-226.

8. Гринин, A.C. Очистка, концентрирование и фракционирование вирусов животных / A.C. Гринин, И.Н. Титов М.: Колос, 1971. - 240 с.

9. Гудков, A.B. Вирусология: в 3 т. / A.B. Гудков; пер. с англ.; под ред. Б. Филдса. М: Мир, 1989. - Т.2. - 492 с.

10. Динамика накопления вируса ЧМЖЖ в органах и тканях больных и павших животных/ Л.Б. Кутумбетов, Л.В. Половиника, А.Г. Демченко и др. // Ветеринарная вирусология: тез. докл. науч.-теорет.конф. -Гвардейский, 1989. Т.1. - С.41-43.

11. Дудников, С.А. Анализ риска в ветеринарии: принципы и методология / С.А. Дудников, Е.В. Гусева. Владимир, 2001. - 32 с.

12. Изучение культуральных свойств вакцинного штамма 45G37/35-K вируса чумы мелких жвачных животных / И.П. Михалкин, Т.Ф. Горшкова, Л.И. Анисимова, и др. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. — Щелково, 2005. С. 163-166.

13. Изучение чувствительности различных клеточных культур к вирусу чумы мелких жвачных животных / В.И. Диев, Л.Н. Соколов, Р.В. Мамкова, и др. // Вирусные болезни с.-х. животных. Владимир, 1995. -С. 94. 1

14. Инфекционная патология животных: в 2-х т. / А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Е.А. Непоклонов, Е.С. Воронин М.: Академкнига, 2006.- Т.1. - С. 263-278.

15. Караулов, А.К. Принципы проведения анализа риска импортно-экспортных операций с товарами биологического происхождения / А.К.

16. Караулов, В.М. Гуленкин // Актуальные проблемы инфекционной патологии ж-ных: матер. Междунар. науч. конф. Владимир, 2003. -С. 66-70.

17. Кекух, И.Г. Моделирование периодичности эпизоотии чумы мелких жвачных животных/ И.Г. Кекух, А.Г. Демченко //' Ветеринарная вирусология: тез. докл. науч.-теорет. конф. Гвардейский, 1984. - С.185.

18. Кирней, Д.Ф. Моноклональные антитела / Д.Ф. Кирней // Иммунология /под ред. У. Поло. Т.З. - М.,1989. - С. 248-274.

19. Курченко, Г.А. Чума мелких жвачных животных (обзор) / Г.А. Курченко // Тез. докл. науч. практ. конф. Гвардейский, -1981. - С. 2- 13.

20. Курченко, Г.А. Чума мелких жвачных животных/ Г.А. Курченко //Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: тез.докл. науч. конф. Покров, 1985.- С. 63-67.

21. Кутумбетов, Л.Б. Вирусовыделение у больных ЧМЖЖ овец, коз и сайгаков/ Л.Б. Кутумбетов, А.Г. Демченко, И.Г. Кекух //Ветеринарная вирусология: тез. докл. науч.-теорет. конф. Гвардейский, 1989. — Т 1. -С.34-40.

22. Кутумбетов, Л.Б. Восприимчивость сайгаков к вирусу чумы мелких жвачных животных / Л.Б. Кутумбетов // Вопросы эпизоотологии, частной вирусологии и микробиологии, химиотерапии: тез. докл. науч. -теорет. конф. Покров, 1988. - Т. 4. - С. 155.

23. Кутумбетов, Л.Б. Сравнительное изучение чувствительности перевиваемых культур клеток к вирусу ЧМЖЖ / Л.Б. Кутумбетов, И.Г. Кекух //Ветеринарная вирусология: тез. науч.-теорет. конф.-Гвардейский, 1934. С. 156.

24. Кутумбетов, Л.Б. Чума мелких жвачных животных у мериносовых овец, местных (казахских) и камерунских коз/ Л.Б. Кутумбетов // Вопросы эпизоотологии, частной вирусологии и микробиологии, химиотерапии:тез. докд. научн. конф. Покров, 1988. - ТА. - С. 150.

25. Луговцев, В.Ю. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных: учеб. пособие для студентов высших учебных заведений / под ред. В.Ю Луговцева, Д.А. Васильева. Ульяновск, 2002. - 265с.

26. Матвеева, В.М. Применение ИФА для диагностики ЧМЖ у овец, коз и сайгаков / В.М. Матвеева, Л.Н. Пасечников //Ветеринарная вирусология: тез. докл. науч.-теорет. конф. Гвардейский, 1989. - Т.1. - С. 201-207.

27. Михалкин И.П. / Чума мелких жвачных / И.П. Михалкин //Сибирская язва и другие опасные инфекционные болезни животных. Покров, 2005.-С.159-163.

28. Митин, Н.И. Чума мелких жвачных / Н.И. Митин // Карантинные малоизученные болезни животных, под ред. И.А.Бакулова. М.: Колос, 1983.-С. 106-108.

29. Опыты по очистке и концентрированию вируса ящура / П. Текерлеков, Г. Попов, JI. Василева, С. Николова // Вет. мед. науки. 1985. - № 10. -С. 1-6.

30. Особенности появления и распространения блютанга в Европейских странах в 2006-2007 годах и риск его возникновения на территории Российской Федерации / В.М. Захаров, В.М. Гуленкин, А.К. Караулов и др.. Владимир, 2007. - 43 с.

31. Особо опасные болезни животных / Бакулов И.А., Котляров В.М., A.C. Доминенко и др.. Покров; Новосибирск, 2002. - 184 с.

32. Очистка и концентрирование вируса гидроперикардита кур / В.А. Лобанов, Г.М. Фалина, В.В. Борисов, В.В. Дрыгин //Проблемы инфекционной патологии с.-х. животных. Владимир, 1997. - С. 147.

33. Пинаев, Г.П. Методы культивирования клеток / Г.П. Пинаев.- Л.: Наука, 1988.-С. 319.

34. Получение культуральных антигенов для РСК и РДП при чуме мелких жвачных животных / А.Ф. Алехин, Ф.П. Курченко, Л.Н. Пасечников и др. //Ветеринарная вирусология: тез. докл. науч.-теорет. конф.-Гвардейский, 1984. С. 103.

35. Русанов, P.C. Изучение выживаемости ЧМЖ на различных тест-объектах / P.C. Русанов, Б. Н. Карпов, Г.А. Гуленок // Тез. докл. науч.-теорет. конф. по вет. вирусологии.- Гвардейский, 1983.- С. 290-292.

36. Русанов, P.C. Устойчивость вируса ЧМЖ к различным температурным воздействиям и ультрафиолетовому облучению / P.C. Русанов, Б. Н. Карпов, Г.А. Гуленок // Тез. докл. науч. конф. по вет. вирусологии. -Гвардейский, 1983. С. 293-295.

37. Сергеев, В.А. Вирусные вакцины / В. А. Сергеев. Киев: Урожай, 1993. -370 с.

38. Серологический мониторинг чумы мелких жвачных животных / Г.Ю. Бабаев, Ш.Н. Джултев, Р.Я. Каримов, М.Ж. Ормнбаеш // Актуальные проблемы, перспективы развития сельского хозяйства: материалы науч. конф. Душанбе, 2006. - С. 195-197.

39. Спиера, P.E. Биотехнология клеток животных / P.E. Спиера, Дж. Гриффите. -М.: Агропромиздат, 1989. С. 171-224.

40. Степанов, A.B. Использование полимеразной цепной реакции для выявления вируса чумы мелких жвачных / A.B. Степанов, Я.С. Цыбанов, И.Ф. Вишняков // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. Щёлково, 2000. - С. 232-233.

41. Степанов, A.B. Получение специфической сыворотки к вирусу ЧМЖ на кроликах / A.B. Степанов // Актуальные проблемы патологиисельскохозяйственных животных: материалы Междунар. науч.- практ. конф. Минск, 2000. - С. 202-203.

42. Сюрин, В.Н. Ветеринарная вирусология: учеб. пособие для вузов / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина. -М.: Колос, 1984. 376 с.

43. Фершин, Р. Культура животных клеток / Р. Фершин.- М.: Мир, 1989. -332 с.

44. Чума мелких жвачных: распространение, диагностика и профилактика / Ю.Ф. Калантаенко, И.П. Михалкин, В.М. Балышев и др. // Ветеринарный консультант. 2006. - №17(132). - С. 7-10.

45. Чума мелких жвачных — распространение, диагностика и профилактика / Ю.Ф. Калантаенко, И.П. Михалкин, В.М. Балышев и др. // Ветеринарная патология. 2007. - №2(21). - С. 38-43.

46. Эпизоотическая ситуация по ЧМЖ в странах СНГ / A.A. Коломыцев, Д.В. Колбасов, A.B. Книзе, С.Ж. Цыбанов // Ветеринарный консультант. -2006.-№17(132).-С. И.

47. A bivalent vaccine against goat pox and Peste des Petits ruminants induces protective immune response in goats / Madhusudan Hosamani, Sanjay Kumar Singh, Bimalendu Mondala et al. // Vaccine. 2006. Vol.24. - P. 6058-6064.

48. Abegunda, A. A. Excretion of the virus of peste des petits ruminants by goats / A.A. Abegunda, F.D. Adu // Bull. Anim. Hlth. Prod, in Africa. 1977. -Vol. 25, №3.-P. 307-311.

49. Abu Elzein, E. M. E. Isolation of peste des petits ruminants from goats in Saudi Arabia / Abu Elzein, M.M. Hassanien, A.I. Al-Afaleq et al. // Vet. Rec.-1990. Vol. 127. - P. 309-310.

50. Adu, F.D. Goat hyperimmune serum for the diagnosis of peste des petits ruminants / F.D. Adu, T. Joannis // Vet. Rec. 1985 - Vol. 117, №18. - P. 472.

51. Ali, B.E.H. The isolation of peste des petits ruminants virus (PPRV) from the Sudan/B.E.H. Ali, W.P. Taylor //Res. Vet. Sci.-1984. Vol. 36. - P. 1-4.

52. Allawy, T.A. Serological studies on peste des petits ruminants (PPR) in Upper Egypt / T.A. Allawy // Proc. Second Sci. Congr. Egyptian Soci. for Cattle Diseases, 5-7 Dec. 1993.- Assiut, 1993. -Vol. 2. P. 278-289.

53. Analysis and gene assignment of mRNAs of a Paramyxovirus, Simian virus 5 / RG. Paterson, T.J. Harris, R.A. Lamb et al. // Virology.-1984.-Vol. 138. P. 310-323.

54. Anderson, E.G. Morbillivirus infections in wildlife (in relation to their population biology and disease control in domestic animals) / E.G. Anderson // Vet. Microbiol.- 1995,- 44,- P. 319-332.

55. Anderson, J. Observations on the pathogenicity for sheep and goats and the transmissibility of the strain of virus isolated during the rinderpest outbreak in Sri Lanka in 1987 /J. Anderson et al. //Vet. Microbiol. 1990. - Vol. 21. -P. 309-318.

56. Anderson, J. The use of monoclonal antibodies in competition ELISA for detection of antibodies to RP and PPR viruses /J. Anderson, J. Mckay, RN. Butcher // Seromonitoring of RP Throughout Africa: Phase One, Austria, IAEA, 1991.-P. 43-53.

57. Appian, S.N. Peste des petits ruminants (PPR) a review / S.N. Appian // Bull Anim. Hlth Prod, in Africa. -1982. -Vol. 30, №3. -P. 179-184.

58. Ata, F.A. Duration of maternal immunity to peste des petits ruminants / F.A Ata //Vet. Rec.-1989. Vol. 124, № 22.- P. 590-591.

59. Ata, F.A. Oman Pest of small ruminants (peste des petits ruminants) / F.A. Ata , H.S. Al-Sumry // World Animal Review. 1988. - Vol. 65. - P. 53-55.

60. Attenuation d'une souche de virus de peste des petits ruminants: candidat pour un vaccin homologue vivan / A. Diallo, W.P. Taylor, P.C. Lefevre et al. // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1989. - Vol. 42. -P. 311-319.

61. Baron, M.D. Sequencing and analysis of the nucleocapsid (N) and polymerase (L) genes and the terminal extragenic domains of the vaccine strain of rinderpest virus / M.D. Baron, T. Barrett // J. Gen. Virol.-1995. Vol. 76, №3. p. 593-602.

62. Baron, M.D. The sequence of the N and L genes of rinderpest vims and the 5' and 3' extra-genic sequences the completion of the genome sequence of the vims /M.D. Baron , T. Barrett // Vet. Microbiol. 1995. - Vol. 44. -P. 175-186.

63. Barrett, T. Comparison of messenger RNAs induced in cell infected with each member Morbillivirus group / T. Barrett, B. Underwood // Virology. 1985. -Vol. 145. - P. 195-199.

64. Barrett, T. Molecular cloning of the nucleoprotein gene of canine distemper vims / T. Barrett, D.W.J. Mahy// J. Gen. Virol. 1984. - Vol. 65. - P. 549-557.

65. Barrett, T. The molecular biology of the morbillivirus (measles) group / T. Barrett // Symposium "Molecular pathology", 53-rd: Proceeding. London, 1987.-P. 25- 37.

66. Barski, G. Production dans des cultures in vitro de deux souches cellulaires en assotiation, de cellules de caractere "hybrid" / G. Barski, S. Soriel, F. Comefert// C R. Acad. Sci. 1960. - Vol. 251. - P. 1825-1827.

67. Berhe, G. Development of a dual recombinant vaccine to protect small ruminants against peste-des-petits-ruminants vims and capripoxvirus infections / G. Berhe et al. // J. Virol. 2003. - Vol.77, №2. - P. 1571-1577

68. Bonniwell, M.A. The use of tissue culture rinderpest vaccine (TCRV) to protect sheep and goats against peste des petits ruminants in the Ashanti region of Ghana / M.A. Bonniwell // Bull Off. Int. Epiz. -1985. Vol. 92. -P. 1233-1238.

69. Bourdin, P. Note sur la structure du virus de la peste des petits ruminants / P. Bourdin, A. Laurent // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop.-1967. -Vol. 20, №3. -P. 383-386.

70. Bourdin, P. Emploi d'un vaccin antibovipestique produit sur cultures cellulaires dans la prophilacie de la peste des petits ruminants an Dahomey /

71. P. Bourdin, M. Rioche, A. Laurent // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1970. -Vol. 23, № 3. - P. 295-300.

72. Bourdin, P. La peste des petits ruminants (PPR) et la prophylaxie au Senegal et en Afrique de l'ouest / P. Bourdin // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. -1973.-Vol. 36, №4.-P. 71-74.

73. Braide, V.B. Peste des petits ruminants / V.B. Braide // Rev. Mond. Zootecn.-1981.-Vol.39.-P. 25-28.

74. Brown, C.C. An immunohistochemical studi of the pneumonia caused by peste des petits ruminants virus /C.C. Brown, J.C. Mariner, H.J. Olander // Vet. Pathol. 1991. - Vol. 28. - P. 166-170.

75. Bundza, A. Experimental peste des petits ruminants (Goat Plague) in goats and sheep /A. Bundza // Can. J. Vet. Res.-1988. Vol. 52, №1. - P. 46-52.

76. Collins, P.L. Coding assignments of the faive smaller mRNAs of Newcastle disease virus / P.L. Collins et al. // J. Virol.-1982. Vol. 43. - P. 1024-1031.

77. Comparative analysis of the attachment protein gene (H) of dolphin morbillivirus / M. Blixenkrone-Moller, G. Bolt, T.D. Jensen et al. // Vet. Res. 1996. - Vol. 40 - P. 47-56.

78. Comparative efficacy of various chemical stabilizers on the thermostability of a live-attenuated peste des petits ruminants (PPR) vaccine / J. Sarkar, B.P. Sreenivasa, R.P. Singh et al. // Vaccine. 2003. - Vol. 21. - P. 4728-4735.

79. Curasson, G. Traite de pathologie exotique veterinaire et comparée / G. Curasson // Vigot Freres.Paris. 1936. - Vol. 1. - P. 28-302.

80. Dardiri, A.H. Peste des petits ruminants / A.H. Dardiri // Reference Manual. Foreign Animal Disease Courses. 1978. - P. 92-102.

81. Dardiri, A.H. Response of American goats and cattle to peste des petits ruminants virus / A.H. Dardiri, C.J. De Boer, F.M. Hamdy // Proce. 19th-Ann. Meet. Am. Associ. of Vet. Laboratory Diagnosticians.- Florida, 1977. -P. 337-344.

82. Development of a genetically marked recombinant rinderpest vaccine expressing green fluorescent protein / E.P. Walsh, M.D. Baron, J. Anderson et al. // J. Gen. Virol. 2000. - Vol. 81: - P. 709-718.

83. Development of a monoclonal antibody based competitive-ELISA for detection and titration of antibodies to peste des petits ruminants (PPR) virus / R.P. Singh, B.P. Sreenivasa, P. Dhar et al. // Vet. Microbiol. 2004. - Vol. 98. - P. 3-15.

84. Diallo, A. Control of peste des petits ruminants: classical and new generation vaccines / A. Diallo // Dev. Biol. Standardiz. 2003. - Vol.114. - P. 113-119.

85. Differentiation of rinderpest and peste des petits ruminants viruses using specific cDNA clones / A. Diallo, T. Barrett, M. Barbron, et al. // J. Virol. Methods. 1989. - Vol. 23, №2. - p. 127-136'.

86. Dowling, P.C. Molecular cloning of the 3-proximal third of Sendai virus genome / P.C. Dowling et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1983. -Vol. 80, №17.-P. 5213-5216.

87. Durojaiye, A.O. Application of precipitinogen inhibition test in the detection of antibody to peste des petits ruminants / A.O. Durojaiye // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1987. - Vol. '40. - P. 17-20.

88. Durojaiye, A.O. Brief notes on history, epizootology and the economic importance of PPR in Nigeria / A.O. Durojaiye // Proc. International Workshop, Lita. Ibadan, Nigeria, Sept. 24-26, 1980. / ed. D.H. Hill. Addis Ababa, 1983.-P. 24-27.

89. Durojaiye, A.O. Detection of the antigen of peste des petits ruminants virus in tissues by indirect immunofluorescence technique / A.O. Durojaiye // Nig. Vet. J. 1984. - Vol. 13. - P. 77-80.

90. Durojaiye, A.O. Precipitating antibody in sera of goats naturally infected with peste des petits ruminants / A.O. Durojaiye // Trop. Anim. Health Prod. -1982. -Vol. 14, №. 2. P. 98-100.

91. Durojaiye, A.O., The ultrastructure of peste des petits ruminants virus / A.O. Durojaiye, W.P. Taylor, C. Smale // Zentralbl. Veterinarmed. 1985. - Vol. 32, №6. - P. 460-465.

92. Etiology of the stomatitis pneumoenteritis complex in Nigerian dwarf goats / F.M. Hamdy, AH. Dardiri, O. Nduaka et al. // Canad. J. Comparative Med. -1976.-Vol. 40.-P. 276-284.

93. Ezeibe, M.C.O. Standardisation of the haemagglutination test for peste des petits ruminants (PPR) / M.C.O. Ezeibe, L.O. Wosu, I.G. Erumaka // Small Ruminant Research. 2004. - Vol. 51. - P. 269-272.

94. Evaluation of the virulence of some strains of peste-des-petits-ruminants virus (PPRV) in experimentally infected West African dwarf goats / E. Couacy-Hymann, C. Bodjo, T. Danho et al. // Vet. J.- 2007. Vol. 173, №1. - P. 178183.

95. Forsyth, M.A. Evaluation of polymerase chain reaction for the detection and characterisation of rinderpest and peste des petits ruminants viruses for epidemiological studies / M.A. Forsyth, T. Barrett // Virus Res. 1995. - Vol. 39, №2-3.-P. 151- 163.

96. Full genome sequence of peste des petits ruminants virus, a member of the Morbillivirus genus / Dalan Bailey, Ashley Banyard, Pradyot Dasha et al. // Virus Res. 2005. - Vol. 11. - P. 119-124.

97. Furley, C.W. An outbreak of peste des petits raminants in a zoological collection / C.W. Furley, W.P. Taylor, T.U. Obi // Vet. Rec. -1987. Vol. 121.-P. 443-447.

98. Galinski, M.S. Molecular cloning and sequence analysis of the Human Parainfluenza 3 virus mRNAs encoding the P and C proteins /M.S. Galinski et al. // Virology. 1986. - Vol. 155. - P. 46-60.

99. Gama 1, E.M.H. Comparative studies on rinderpest and peste des petits ruminants viruses / E.M.H. Gamal: the dissertation on a rank masterveterinary of sciences. 1998. - 148 p.

100. Gargadennec, L. La peste des petits ruminants / L. Gargadennec, A. Lalanne // Bull. Serv. Zoo. A.O.F. 1942. - Vol. 5. - P. 16.

101. Gassen, U. Establishment of a rescue system for canine distemper virus / U. Gassen et al. // J. Virol. 2000. - Vol. 74, №22. - P. 10737-10744.

102. Gates, C.M. Eastern Region / C.M. Gates // Nig. Ann. Rep. Vet.-1952. Vol. 29. - P. 1950-1951.

103. Gilbert, E.P. Adaptation du virus de la peste des petits ruminants aux cultures cellulaires. Note preliminaire / E.P. Gilbert, J. Monnier // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1962. - Vol. 15, №. 4. - P. 321-335.

104. Gilbert, E.P. Classification of peste des petits ruminants virus as the fourth member of the genus morbillivirus / E.P. Gilbert // Intervirology. -1979. -№1. P. 268-274.

105. Gooding, J.V. Antibody production by hybridomas / J.V. Gooding // Immun. Meth. -1980. -Vol. 39, №4. -P. 285-308.

106. Hamdy, F.M. Response of white-tailed deer to infection with peste des petits ruminants virus / F.M. Hamdy, A.H. Dardiri // J. Wildl. Dis. 1976. - Vol. 12. -P. 516-522.

107. Haemagglutination as a confirmatory test for Peste des petits ruminants diagnosis / S. Manoharana, R. Jayakumarb, R. Govindarajanc, A. Koteeswarana// Small Ruminant Research. 2005. - Vol. 59. - P. 75-78.

108. Henderson, W.W. Government printer/ W.W. Henderson // Ann. Rep. of the Vet. Dep. Northern Provincesio. Nigeria, 1930. - P. 63.

109. Hosamani, M. A bivalent vaccine against goat pox and Peste des Petits ruminants induces protective immune response in goats / M. Hosamani et al. // Vaccine. 2006.- Vol. 24, № 35-36,- P.6058- 6064.

110. Immunological relationship between rinderpest and peste des petits ruminants viruses/ F.M. Hamdy, A. H. Dardi, S. S. Brese, C. J. Deb Oer // Proc. 79-th Ann. Meet. U.S. Anim. Heath Assoc. Portland, 1975. - P. 168-179.

111. In vitro synthesis of structural and nonstructural proteins of Sendai and SV5 viruses / P.R. Etkind, R.K. Cross, R.A. Lamb et al. // Virology. -1980. -Vol. 100. P. 22-33.

112. Isitor, G.N. A histopathological and ultrastructural study of lesions of peste des petits ruminants in Sokoto red goats / G.N. Isitor et al. // Trop. Vet. 1985. - Vol. 2, №3. - P. 151-158.

113. Ismail, I.M. Evidence of identification of peste des petits raminants from goats in Egypt / I.M. Ismail, J. House J. // Arch. Exp. Veterinarmed. 1990. -Vol. 44, №3,-P. 471-474.

114. Isoun, T.T. A stomatitis and pneumoenteritis complex of sheep in Nigeria / T.T. Isoun, E.D. Mann // Bull. Epiz. Dis. Afr. 1972. - Vol. 20. - P. 167-174.

115. Jehson, R.H. A virus associated with pseudo rinderpest in Nigeria dwarf goats / R.H. Jehson, J.S.D. Ritche // Bull. Epiz. Dis. Afr. 1968. - Vol.16. - P. 411417.

116. Jones, L. Protection of goats against pests des petites ruminants with a vaccinia virus double recombinant expressing the F and H genes of rinderpest virus / L. Jones et al. // Vaccine. 1993. - Vol. 11, № 9. - P. 961-964.

117. Jones, K. Identification of Sendai virus mRNAs species. / K. Jones, C Pridgen, D.W. Kingsbury// J. Virology. -1978. Vol. 28, №. 1. - P. 411-414.

118. Juneau, M.L. Famille des Paramyxoviridae/ M.L. Juneau // Cari. J. Med. Technol. 1991. - Vol. 53. - P. 169-173.

119. La peste des petits ruminants en Afrique occidentale française: ses rapports avec la peste bovine / P. Momet, Y. Gilbert, J. Orue et al. // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1956. - Vol. 9. - P. 313-356.

120. Laurent, A. Aspects biologiques de la multiplication du virus de la peste des petits ruminants ou PPR sur les cultures cellulaires / A. Laurent // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1968. - Vol. 21, № 3. - P. 297-308.

121. Lefevre, P.C. La peste des petits ruminants (Synthese bibliographique) / P.C. Lefevre // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1982. - Vol.94. - P. 48.

122. Lefevre P.C. Peste des petits ruminants / P.C. Lefevre, A. Diallo // Rev. Sei. Tech. Off. Epiz. 1990. - Vol. 9, № 4. -P. 951-965.

123. Lefevre, P.C. Serological evidence of peste des petits mminants in Iordan. / P.C. Lefevre et al. //Vet. Ree. 1991. - Vol. 128. - P. 110.

124. Libeau, G. Rapid differential diagnosis of rinderpest of peste des petits ruminants using an immunocapture ELISA / G. Libeau // Vet. Ree. 1994. -Vol. 134. - P. 300-304.

125. Liebermann, H. Die Pest der kleinen Wiederkäuer (Ubersichtsreferat) / H. Liebermann//Mh. Vet. Med. 1987. -Bd. 42. - S. 269-272.

126. Luk, B. RNA encoding the P-protein gene of human Parainfluenza virus 3 is bicistronic/B. Luk et al. // Virology. 1986. - Vol. 153. - P. 318-325.

127. Mahy, B.W. Characterization of a seal morbillivirus / B.W. Mahy et al. // Nature. 1988. - Vol. 336. - P. 115-116.

128. Majiyagbe, K. E. Diagnosis of PPR infection using the immunoelectro-Osmophoresis (IEOP) technique / K. E. Majiyagbe, D. R. Nawathe, A. Abegunde // Proc. first Inte. Workshop on Peste des Petits Rumminants. — Ibadan, Nigeria, 1980 P. 40-45.

129. Majiyagbe, K. E. Rapid diagnosis of peste des petits ruminants (PPR) infection: application of immunoelectroosmophoresis (IEOP) technique / K. E. Majiyagbe, D. R. Nawathe, A. Abegunde // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1984. - Vol. 37, №1. - P. 11-15.

130. Measles virus P gene codes far two proteins / W.J. Bellini, G. Englund, S. Rozenblatt et al. // J. Virol. 1985. - Vol. 53. - P. 908-919.

131. Masanori, T. A comparative electron microscopic study on the morfogénesis of canine dustemper and rinderpest viruses / T. Masanori et al. // Jap. J. Vet. Sei. 1971.-Vol. 33.-P. 1-10.

132. Matthews, R.E.F. Paramyxoviridae / R.E.F. Matthews // Intervirology. 1982. -Vol. 17. - P. 84-105.

133. McCulloeh, J. Eastern Region Nigeria / J. McCulloeh // Ann. Rep. Vet. Dept.- 1951. Vol. 27. - P. 1949-1950.

134. Mode of entry of morbillivirases / T.F. Wild, D. Naniche, C Rabourdin-Combe et al. // Vet. Microbiol. 1995. - Vol. 44. - P. 267-270.

135. Monoclonal antibody-based competitive ELIS A for simultaneous detection of rinderpest virus and peste des petits ruminants virus antibodies / Kang-Seuk Choi, Jin-Ju Naha, Cheong-Up Choi et al. // Vet. Microbiol. 2003. -Vol. 96. - P. 1-16.

136. Morbillivirus disease of animals and man /M.J.G. Appel, E. P. J.Gibbs, S. J.Martin et al. // Vertebrate Animal and Relatedd Vviruses part B-RNA Viruses. 1981. - Vol. 4. - P. 235-297.

137. Mornet, P. La "Peste des petits ruminants" en afrique occidentale ses la peste bovine / P. Mornet, Y. Gilbert, J. Orue // Rev. Elev. Med. Pays. Trop.-1956. -Vol. 9, №4. -P. 313-342.

138. Mouaz, M.A. Studies on peste des petits ruminants (PPR) in Egyptian sheep / M.A. Mouaz et al. // Vet. Med. J. Giza. 1995. - Vol. 43, №4. - P. 367-374.

139. Mullis, K.B. Methods in Enzymology / K.B. Mullis, F.A. Fallona F.A.- London: Acad. Press, 1989. Vol. 155. - P. 335-350.

140. Murthy, F.A. Virus taxonomy. Classification and nomenclature of viruses. Sixth report of the International Committee on Taxonomy of Viruses / F.A. Murthy et al. // Arch. Virol. 1995. - Vol. 115. - P. 10

141. Nawathe, D.R. Experimental infection of domestic pigs with the virus of peste des petits ruminants / D.R. Nawathe , W.P. Taylor // Trop. Anim. Hlth. Prod.-1979. -Vol. 11. P. 120-122.

142. Nduka, O. Observations on pneumonia-enteritis complex in dwarf goats in Eastern Nigeria: Preliminary report / O. Nduka, E.C. Ihemeldandu // Bull Epiz. Dis. in Africa. 1973. - Vol. 21. - P. 87-98.

143. Nduka, O. The control of pneumonia-enteritis complex in dwarf goats of Eastern states of Nigeria by the use of chloroform-inactivated tissue / O. Nduka, E.C. Ihemelandu // Bull. Anim. Hlth. Prod. Afr. 1975. - №23. -P. 341.

144. Nucleotide sequence of the bovine Parainfluenza 3 virus genome: its 3' end and the genes of NP, P, C and M proteins / Y. Sakai, S. Suzu, T. Shioda et al. // Nucl. Acids. Res. 1987. - Vol. 15. - P. 2927-2944.

145. Obi, T.U. A DOT-enzyme immunoassay for visual detection of peste des petits ruminants virus / T.U. Obi // J. Clinical Microbiol. -1989. -Vol. 27. -P. 2096-2099.

146. Obi, T.U. Haematological changes in natural and experimental peste des petits ruminants virus infection in goats / T.U. Obi, O.O. Oduye // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1985. -Vol. 38, №1.-P. 11-15.

147. Obi, T.U. Peste des Petits ruminants (PPR) in goats in Nigeria: clinical, microbiological and pathological features / T.U. Obi, M.O. Ojo, O.A. Durojaiye et al. // Zentralbl. Vet. Med. R. B.- 1983.-Vol. 30.-P. 751-761.

148. Obi, T.U. The detection of peste des petits ruminants (PPR) virus antigen by agar-gel precipitation test and counter immunoelectrophoresis / T.U. Obi et al. //J. Hygiene (Cambridge). 1984. - Vol. 93. - P. 579-586.

149. Osterhaus, A.D.M.E. Identification of virus causing recent seal deaths / A.D.M.E. Osterhaus, E J. Vedder //Nature. 1988,- Vol. 335. - P. 20.

150. Osterhaus, A.D.M.E. Studies on virus infections of wild aquatic mammals / A.D.M.E. Osterhaus // The Prize for Research in Animal Health. Basel, 1992.-P. 9-27.

151. Pandey, K.D. Differential diagnosis of rinderpest and peste des petits mminants (PPR) using biotinylated cDNA probes / K.D. Pandey et al. // Vet.

152. Rec. -1992. -Vol. 131.-P. 199-200.

153. Paramyxoviridae / D.W. Kingsbury, M.A. Breet, P.W. Choppin et al. // Intervirology. 1978. - Vol. 10. - P. 137-152.

154. Pathogenicity of attenuatet peste des petits ruminants virus in sheep and goats/ F.D. Adu, T. Joannis, E. Nwosuh et al. // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. -1990. Vol. 43, №1. - P. 23-26.

155. Pathogenicity of peste des petits ruminants virus isolated from Egyptian goats in Egypt / I.M. Ismail, F. Mohamed, N.M. Aly et al. // Arch. Exp. Vet. Med. 1992. -Vol. 44, №5. - P. 789-792.

156. Pathology of rinderpest / F.D. Maurer, T.C. Jones, B. Easterday et al. // Proc. 22 nd Ann Meeting. Am. Vet. Med. Ass. Minneapolis, 1956. - P. 201211.

157. Peste des petits ruminants (PPR) outbreak in Tajikistan / O. Kwiatek, C. Minet, C. Grillet et al. // J. Comp. Path. 2007. - Vol. 136. - P. 111-119.

158. Picavet, D.P. Maladie de Nairobi du mouton et de la chevre / D.P. Picavet // Rev. Med. Vet. 1991. - Vol. 142, №7. - P. 545-551.

159. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a termostable DNA polymerase / R.K. Saiki, S. Scharf, F. Faloona et al. // Science. 1988. -Vol. 239.-P. 487-491.

160. Rapid and sensitive detection of peste des petits ruminants virus by a polymerase chain reaction assay / E. Couacy-Hymann, F. Roger, C. Hurard et al. // J. Virol. Methods. 2002. - Vol. 100. - P. 17-25.

161. Recent developments in the diagnosis of rinderpest and peste des petits ruminants /A. Diallo, G. Libeau, E. Couacy-Hymann, M. Barbron //Vet. Microbiol. 1995. - Vol. 44. - P. 307-317.

162. Rescue of a chimeric rinderpest virus with the nucleocapsid protein derived from peste-des-petits-ruminants virus: use as a marker vaccine/ S. Parida, M. Mahapatra, S. Kumar et al. // J Gen. Virol. 2007. - Vol.88. - P. 2019-2027.

163. Recombinant rinderpest vaccines expressing membrane-Anchored proteins as genetic markers: evidence of exclusion of marker protein from the virus / E.P. Walsh, M.D. Baron, L.F. Rennie, P. et al. // Virology.-2000.-Vol. 74, №21.-P. 10165-10175.

164. Rima, B.K. Characterization of clones for the sixth (L) gene and a transcriptional map of morbillivirases / B.K. Rima // J. Gen. Virol. -1986. -Vol. 67. P. 1971-1978.

165. Rima, B.K. The evolution of morbillivirases: a comparison of nucleocapsid gene sequences including a porpoise morbillivirus / B.K. Rima // Vet. Microbiol. -1995. Vol. 44. - P. 127-134.

166. Rossiter, P.B. Microneutralization systems for use with different strains of peste des petits ruminants virus and rinderpest virus / P.B. Rossiter, D. M. Jesssett, W. P. Taylor // Trop. Animal. Health. Prod. 1985. - Vol. 17. -P. 75-81.

167. Rowland, A.C. A comparative study of peste des petits ruminants and Kata in West African dwarf goats / A.C. Rowland, G. R. Scott, S. Ramachandran, D. H. Hill // Trop. Anim. Health. Prod. 1971. - Vol. 3. - P. 241-245.

168. Rowland, A.C. The histological relationship between peste des petits ruminants and "kata" in West Africa / A.C. Rowland, P. Bourdin // Rev. Elev. Med. Vet. Pays. Trop.- I970.-Vol. 23.-P. 301.

169. Rowland, A.C. The pathology of an erosive stomatitis and enteritis in West African dwarf goats / A.C. Rowland, G.R Scott, D.H. Hill // J. Pathol. 1969. -Vol. 98. - P. 83-87.

170. Saiki, R.K. Enzymatic amplification of B-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia / R.K. Saiki // Science. 1985. - Vol. 230. - P. 1350-1354.

171. Sanchez, A. Studies on human Parainfluenza virus 3: characterization of the structural proteins and in vitro synthesized proteins coded by mRNAs isolated from infected cells / A. Sanchez, A.K. Banerjee // Virology. -1985 Vol. 143. - P. 45-54.

172. Sato, H. Molecular cloning and nucleotide sequence of P, M and F genes of Newcastle disease virus avirulent strain D26 / H. Sato // Virus. Res. 1987. -Vol. 7.-P. 241-255.

173. Scott, G.R. Rinderpest and peste des petits ruminants / G.R. Scott // Virus Diseases of Food Animals. 1981. - Vol. 2. - P. 401-432.

174. Sharma, R.M., Scarification Versus subcutaneous method of vaccination against rinderpest in goats and sheep / R.M. Sharma, T. Ram // Indian J. Vet. Sci. 1955. - Vol.25, №2. - P.129-142.

175. Shinkar, R. G. Cytopathic effect of peste des petits ruminants virus in vera cells /R. G. Shinkar et al. // Indian J. Anim. Sci.-1992. Vol. 62,№12. -P. 1135-1136.

176. Short communication Performance of RT-PCR-ELISA for the detection of peste des petits ruminants virus / C. Senthil Kumara, G. Dhinakar Raj, A. Thangavelu, M.S. Shaila // Small Ruminant Research. 2007. - Vol. 72. -P. 200-208.

177. Spriggs, M.K. Sequence analysis of the P and C protein genes of human Parainfluenza virus type 3: patterns of amino acid sequence homology among Paramyxovirus proteins / M.X. Spriggs, P.L. Collins // J. Gen. Virol. 1986. -Vol. 67.-P. 2705-2719.

178. Stem, C. An economic analisis of the previntion of peste des petits ruminants in Nigerian goats / C. Stem // Prev. Vet. Med.-1993. -Vol. 16. -P. 141-150.

179. Sumption, K.J. Detection of peste des petits ruminants virus antigen in conjunctival smears of goats by indirect immunofluorescence / K. J. Sumption et al. // Vet. Rec. 1998. - Vol. 142, №16. - P. 421-424.

180. Taylor, W.P. Protection of goats against peste des petits ruminants with attenuated rinderpest virus / W.P. Taylor// Res. Vet. Sci. 1979. - Vol. 27. -P. 321-324.

181. Taylor, W.P. Serological studies with the virus of peste des petits ruminants in Nigeria / W.P. Taylor // Res. Vet. Sci.-1979. Vol. 26. - P. 236-242.

182. Taylor, W.P. The distribution and epidemiology of peste des petits ruminants / W.P. Taylor//Prev. Vet. Med.-1984. -Vol. 2. -P. 157-166.

183. Taylor, W.P. The epidemiology of peste des petits ruminants in Sultanate of Oman / W.P. Taylor // Vet. Microbiol. 1990. - Vol. 22. - P. 341-352.

184. Taylor, W.P. The isolation of peste des petits ruminant virus from Nigerian sheep and goats / W.P. Taylor, A. Abegunde // Res. Vet. Sci.-1979. -Vol. 26, № 1. -P. 94-96.

185. The isolation of adenoviruses from goats affected with peste des petits ruminants in Nigeria / E.P. Gilbert, W.P. Taylor, M.J.P. Lawman et ah. //Res. Vet. Sci. 1977. - Vol. 23, №3. - P. 331-335.

186. The matrix protein gene sequence analysis reveals close relationship between peste des petits ruminants vims (PPRV) and dolphin morbillivirus / A. Haffar, G.Libeau, A. Moussa et al. // Virus Res.-1999. -Vol. 64, №1.-P. 69-75.

187. The use of the rmostable Vero cell-adapted rinderpest vaccine as a heterologous vaccine against peste des petits ruminants / J.C. Mariner, J.A. House, C.A. Mebus et al. // Res. Vet. Sci. 1993. - Vol. 54, №2. -P. 212-216.

188. Toplu, N. Characteristic and non-characteristic pathological findings in peste des petits ruminants (PPR) of sheep in the ege district of Turkey / N. Toplu // J. Comp. Path. 2004. - Vol. 131.-P. 135-141.

189. Ugochukwu, E.J. Aerobic bacteria from nasal discharge of goats suffering from clinical PPR: isolation and identification / E.J. Ugochukwu, C.O. Agwu //Microbios. 1991. - Vol.65, №1. - P. 81-85.

190. Use of the polimerase chain reaction in differentiating rinderpest field virus and vaccine virus in the same animals / T. Barrett, C.Amarel-D, R.P. Kitching, A. Gusev //Rev. Sci. Tech. Off Int. Epiz. 1993, №12. -P. 865-872.

191. Virus Taxonomy: 8th Reports of the International Committee on Taxonomy of Viruses / C.M. Fauquet, M.A. Mayo, J. Maniloff et al. NY: Acad 2005. - 1162 p.

192. Wamwayi, H.M. Peste des petits ruminants antibodies in East Africa. / H.M. Wamwayi // Vet. Rec. -1995 -Vol. 136. -P. 199-200.

193. Whitney, J.C. The pathology of an aesive stomatitis and enteritis of goats in Southern Nigeria. / J.C. Whitney, G.R. Scott, D.H. Hill // Bull. Epiz. Dis. Africa 1967.-Vol. 15, №1. - P. 31-41.

194. Wosu, L.O. Agglutination of red blood cells by peste des petits ruminants (PPR) virus /L.O. Wosu //Nig. Vet. J. 1985. - Vol. 14, №1. - P. 56-58.

195. Wosu, L.O. Current status of peste des petits ruminants (PPR) disease in small ruminants a review article / L.O. Wosu // Studies Res. Vet. Med. - 1994. -Vol. 2. - P. 83-90.

196. Wosu, L.O. Etiologic studies on the association of goat pox with PPR disease in Nigeria. / L.O. Wosu // Arch. Roum. Path. Exp. Microb.-1989. Vol. 48, №1. - P. 79- 83.

197. Wosu, L.O. HA test for diagnosis of PPR disease in goats with samples from live animals /L.O. Wosu // J. Small Animal. Res. -1991. Vol.5. - P. 169-172.

198. Yoshikawa, Y. Characterization of messenger RNAs of Measles virus. / Y. Yoshikawa // J. Gen. Virol. 1986,-Vol. 67. - P. 2807-2813.

199. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. Part 2. SECTION 2.1. Chapter 2.1.5. Электронный ресурс. / OIE.-// www. oie.int/eng/normes/mmanual/A0028htpn

200. Recognizing peste des petits ruminanys, a field manual. Электронный ресурс. //www.fao.org/DQCREP/003/X1703E/Xl703E00.htm