Источники супероксидного анион-радикала в тромбоцитах и тканях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.02, кандидат наук Джатдоева Айшат Абдрахмановна

• Джатдоева Айшат Абдрахмановна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Джатдоева Айшат Абдрахмановна

Введение

1 Обзор литературы

1.1 Тромбоциты и свободные радикалы

1.1.1 Физиология и морфология тромбоцитов

1.1.1 Участие в свертывании крови

1.2 Источники АФК в тромбоцитах

1.2.1 Система НАД(Ф)Н-оксидазы

1.2.2 Циклооксигеназа и липоксигеназа как источники САР в тромбоцитах

1.2.3 Система ксантиноксидазы

1.2.4 Митохондрии

1.2.5 Функциональная роль АФК в тромбоцитах

1.2.6 Антиоксидантная защита

1.2.7 Окисидативный стресс тромбоцитов в патологии

1.3 Хемилюминесценция клеток и тканей

1.3.1 Метод активированной хемилюминесценции для оценки

радикал-продуцирующей способности тканей

1.4 Роль НАДН и НАД(Ф)Н в клетке

2 Материалы и методы

2.1 Реагенты

2.2 Аппаратура

2.3 Методики

2.3.1 Приготовление изолированных тромбоцитов

2.3.2 Приготовление изолированных митохондрий из печени крыс

2.3.3 Приготовление образцов тканей из органов животных

2.3.4 Хемилюминесценция изолированных тромбоцитов, митохондрий и раковых клеток

2.3.5 Хемилюминесценция культуры раковых клеток

2.3.6 Хемилюминесценция тканей

2.3.7 Методика ИК-спектроскопического определения липидов и их гидропероксидов

2.3.8 Определения гидропероксидов липидов хемилюминесцентным

методом

2.3.9 Методика определения суммарного содержания гидропероксидов липидов методом хемилюминесценции

2.3.10 Методика определения проникновения ХЛ-зондов методом конфокальной микроскопии

2.3.11 Методика регистрации агрегации тромбоцитов

3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Применение метода активированной хемилюминесценции для оценки радикал-продуцирующей способности митохондрий и тромбоцитов в

присутствии доноров электронов — восстановленных пиридиннуклеотидов

3.1.1 Природа АФК продуцируемых изолированными тромбоцитами

3.1.2 Хемилюминесценция изолированных митохондрий и тромбоцитов в присутствии НАДН и НАД(Ф)Н

3.1.3 Влияние люцигенина и НАДН на агрегацию тромбоцитов

3.1.4 Вклад НАД(Ф)Н-оксидазы в образование САР в тромбоцитах

3.1.5 Образования свободных радикалов в реакциях окисления арахидоновой кислоты

3.1.6 Митохондрии как источник САР в тромбоцитах

3.1.7 Вклад ксантиноксидазы в образование САР изолированными тромбоцитами

3.1.8 Действие ингибиторов и антиоксидантов на люцигениновую хемилюминесценцию тромбоцитов

3.1.9 Проникновение зондов в тромбоциты

3.2 Люцигениновая ХЛ раковых клеток в присутствии НАДН и НАД(Ф)Н

3.3 Липиды тромбоцитарных мембран как мишени оксидативного стресса

3.3.1 Разработка методик определения гидропероксидов липидов как маркеров повреждения мембран

3.3.2 Образование липидных гидропероксидов в тромбоцитарных мембранах под действием АФК

3.4 Изучение продукции тканями супероксидного анион-радикала в присутствии субстратов окислительных цепей

3.4.1 Оптимизация условий ХЛ анализа тканей

3.4.2 Хемилюминесценция образцов ткани в присутствии люцигенина и аэрации

3.4.3 Люцигенин-зависимая ХЛ ткани в присутствии НАДН

3.4.4 Люцигениновая ХЛ тканей в присутствии НАДН и НАД(Ф)Н

3.4.5 Пример применения методики оценки радикал-продуцирующей способности тканей при некоторых гинекологических заболеваниях

Выводы

Список литературы

Список сокращений АДФ - аденозиндифосфат АФК - активные формы кислорода АФА - активные формы азота ДФИ - дифенилениодоний ДНФ - 2, 4-динитрофенол ДЦ - дыхательная цепь ДК - дыхательный комплекс ЛОГ - липоксигеназа Люц - люцигенин Люм - люминол

ЛюмХЛ, ЛюцХЛ -люминол-, люцигенин-, -зависимая хемилюминесценция

НАДН - восстановленный никотинамидадениндинуклеотид

НАД(Ф)Н - восстановленный никотинамидадениндинуклеотидфосфат

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СОД - супероксиддисмутаза

СР - свободные радикалы

УФ - ультрафиолет, -овый

ФБ - фосфатный буферный раствор

ФЛ - флуоресценция, -ый

ФМА - форбол-12-миристат-13-ацетат

ХЛ -хемилюминесценция, хемилюминесценция, -ый

ЦОГ - циклооксигеназа

ЭДТА - этилендиаминтетраацетат

ЭПР - электронный парамагнитный резонанс

ЬЛ - линолевая кислота

ЬООН - гидропероксид линолевой кислоты

Введение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Источники супероксидного анион-радикала в тромбоцитах и тканях»

Актуальность работы

Активные формы кислорода (АФК) играют важную роль как при нормальном функционировании клеток и тканей, так и при их патологии. АФК выполняют множество функций в организме: участвуют в реакциях окислительного фосфорилирования и биосинтеза простагландинов и нуклеиновых кислот, в процессах митоза, а также являются участниками разрушения фагоцитированных клеток бактерий. Однако их роль в биологических системах чрезвычайно динамична, при нарушении баланса свободных радикалов и антиоксидантов возникает окисидативный стресс, который лежит в основе развития многих заболеваний, в связи с чем наблюдение за свободно-радикальными процессами непосредственно в клетках и тканях приобретает очень важное значение.

Тромбоциты — это клетки, которые содержат практически все возможные источники АФК, такие как цитоплазматическая НАД(Ф)Н-оксидаза, митохондрии, ферменты, катализирующие превращение арахидоновой кислоты, ксантиноксидаза [1]. Известно, что АФК учувствуют в процессах активации и даже запрограммированной гибели тромбоцитов, поэтому изучение основных источников АФК в тромбоцитах является важной задачей в медико-биологической науке и медицинской практике.

Продукция АФК является свойством, присущим всем тканям. Используя это свойство можно, предположительно, оценивать жизнеспособность тканей, что является важной задачей при пересадке органов. Известно, что оксидативный стресс является важным патогенетическим звеном многих заболеваний, поэтому непосредственная оценка уровня продукции свободных радикалов в тканях также имеет значение для клинической практики. Основным методом для этой цели является хемилюминесценция (ХЛ), однако на сегодняшний день разработано недостаточно ХЛ-методик анализа тканей, и в механизмах продукции свободных радикалов тканями остается много невыясненного.

Супероксид анион радикал (САР) является предшественником всех АФК, поэтому его определение является важной задачей. Для обнаружения САР успешно используется метод хемилюминесценции в присутствии зондов, в частности, люцигенина. Люцигениновую ХЛ использовали для обнаружения радикалов -00 продуцируемых основными источниками АФК в клетке: при окислении гипоксантина и ксантина ксантиноксидазой [2], при окислении НАД(Ф)Н-оксидазой клеток фагоцитов [3] и клеток эндотелия фибробластов [4]. Люцигенин использовали для изучения образования САР митохондриями в интактных клетках [5]. В связи с этим, возникает необходимость в разработке чувствительных, информативных, простых методов для изучения продукции радикалов в тромбоцитах и тканях человека, пригодных для дальнейшего использования в клинической практике, а также изучения при помощи этих методов механизмов генерации свободных радикалов в тромбоцитах и тканях.

Цель работы: выяснить, какие внутриклеточные структуры или ферментные системы являются источниками генерации супероксидного анион-радикала в тромбоцитах и тканях.

Задачи исследования:

1. Определить природу радикалов, продуцируемых тромбоцитами, используя метод хемилюминесценции с применением селективных зондов.

2. Уточнить условия применения люцигенина для оценки образования САР тромбоцитами.

3. Определить вклад НАД(Ф)Н-оксидазы в образование САР тромбоцитами.

4. Выяснить вклад ферментов, катализирующих превращение арахидоновой кислоты, в образование САР тромбоцитами, используя метод хемилюминесценции.

5. Усовершенствовать методику определения САР в тканях лабораторных крыс и с ее помощью выявить источники образования САР в этих объектах.

6. Оценить возможность использования метода ХЛ в присутствии НАДН для контроля жизнеспособности образцов тканей человека.

Научная новизна работы

Впервые показано, что изолированные тромбоциты продуцируют только САР, так как обладают хемилюминесценцией только в присутствии люцигенина, но не кумарина и люминола. Для обнаружения САР в систему необходимо вносить восстановитель люцигенина, например, пиридиннуклеотид НАДН или НАД(Ф)Н.

Впервые показано, что вклад НАД(Ф)Н-оксидазы в образование САР изолированными тромбоцитами незначителен и образование САР происходит внутри тромбоцитов.

Впервые показано, что добавление 0,2 мМ люцигенина и 0,1 мМ НАДН к тромбоцитам не вызывает их агрегацию. Добавление НАДН также не влияет на содержание в мембранах липидных гидропероксидов, оцененное методом ХЛ в присутствии изолюминола и микропероксидазы.

Показано, что добавление арахидоновой кислоты к тромбоцитам приводит к многократному увеличению образования САР. Показано, что ацетилсалициловая кислота, неселективный ингибитор ЦОГ, концентрационно снижает интенсивность люцигениновой хемилюминесценции изолированных тромбоцитов в присутствии НАДН и не оказывает влияния на хемилюминесценцию митохондрий в тех же условиях. Значительная часть САР в тромбоцитах образуется в результате работы ферментов, участвующих в превращении арахидоновой кислоты.

Усовершенствована методика регистрации ХЛ при инкубации образцов тканей в условиях постоянной аэрации, температуры, рН и содержания СО2 в газовой смеси (37оС, рН 7,4 и 4-5 % СО2). Показано, что при инкубации ткани печени крыс в аэробных условиях наблюдается хемилюминесценция, обусловленная продукцией супероксид-анион радикала митохондриями, но не системой НАД(Ф)Н-оксидазы и не реакциями с участием ЦОГ и ЛОГ.

Впервые показана возможность применения метода люцигениновой ХЛ для оценки радикал-продуцирующей способности тканей яичника женщин.

Практическое значимость работы

Новые сведения об источниках свободных радикалов в тромбоцитах могут быть использованы для обучения студентов в курсе биофизики и физиологии крови. Предложен метод оценки радикал-продуцирующей способности изолированных тромбоцитов и тканей, основанный на измерении хемилюминесценции в присутствии люцигенина и НАДН. Данный метод в дальнейшем может успешно быть использован для контроля жизнеспособности тромбоцитов и тканей в трансфузиологии и трансплантологии.

Разработаны две хемилюминесцентные методики определения липидных гидропероксидов в биологических объектах и методика определения липидных гидропероксидов методом ИК-спектроскопии, которые применимы для медицинских целей, а также для контроля качества пищевых продуктов.

Положения, выносимые на защиту

1. В изолированных тромбоцитах продуцируется только супероксид-анион радикалы (САР), а не радикалы гидропероксидов липидов и не другие активные формы кислорода. Для обнаружения САР в изолированных тромбоцитах с помощью люцигениновой хемилюминесценции необходимо добавление к системе НАДН или НАД(Ф)Н.

2. Добавление не более 0,2 мМ люцигенина и 0,1 мМ НАДН к тромбоцитам не вызывает их агрегацию. Добавление НАДН также не влияет на содержание в мембранах липидных гидропероксидов, оцененное методом ХЛ в присутствии изолюминола и микропероксидазы.

3. НАД(Ф)Н-оксидаза не вносит существенного вклада в образование САР изолированными тромбоцитами, и САР в тромбоцитах образуется внутри клетки.

4. Основной вклад в образование САР изолированными тромбоцитами в присутствии люцигенина и НАДН вносят ферменты, участвующие в превращении арахидоновой кислоты.

5. Для получения воспроизводимых данных при измерении ЛюцХЛ образцов тканей в условиях аэрации необходимо поддерживать рН на уровне 7,4, а содержание СО2 в аэрирующей газовой смеси на уровне 4-5 %.

6. Метод люцигениновой ХЛ в присутствии НАДН может быть применен для оценки радикал-продуцирующей способности тканей яичника женщин.

Апробация работы

Результаты работы были представлены в виде устных сообщений и тезисов конференций: конференция «Ломоносов» (Москва, 2015; 2016), второй съезд аналитиков России (Москва, 2013 г.), Качество лабораторных исследований — условие безопасности пациентов (Москва, 2016), 16th International Nutrition & Diagnostics Conference (Прага, Чехия, 2016).

Апробация работы была проведена на совместном заседании коллектива сотрудников кафедры медицинской биофизики Факультета фундаментальной медицины ФГБОУ ВО МГУ имени М.В.Ломоносова и общей и медицинской биофизики Медико-биологического факультета ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.Пирогова (2017 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ из них 4 из статей в рецензируемых отечественных журналах.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 178 источник. Работа выполнена на 127 страницах машинописного текста. Иллюстрированный материал представлен 69 рисунками и 7 таблицами.

1 Обзор литературы

1.1 Тромбоциты и свободные радикалы

Активные формы кислорода (АФК) образуются во многих клетках в результате последовательного одноэлектронного присоединения 4 электронов к 1 молекуле кислорода. Конечный продукт этих реакций — вода, но в процессе этих реакций образуются химически активные формы кислорода, которые взаимодействуют с большим количеством органических молекул отнимая от них электрон и инициируя цепные реакции окисления. Свободные радикалы играют важную роль процессах жизнеобеспечения клеток, участвуя в реакциях окислительного фосфорилирования, биосинтеза простагландинов и нуклеиновых кислот, в регуляции липидного обмена, в процессах митоза, а также метаболизма катехоламинов. Например, клетки белой крови с участием АФК разрушают фагоцитированные клетки бактерий. Однако их роль в биологических системах чрезвычайно динамична, так как СР относятся к категории высоко-реактогенных молекул, избыточное образование которых может привести к дезорганизации клеточных структур и нарушению функциональной активности клеток.

Радикалы в организме человека делятся на природные и чужеродные (Таблица 1). Источником чужеродных радикалов могут быть ксенобиотики, а также вода, кислород и другие соединения эндогенного происхождения, подвергшиеся воздействию ионизирующего излучения, ультрафиолетового облучения, интенсивного светового воздействия лазера.

Таблица 1. Классификация радикалов, образующихся в клетках человека и животных

Природные Первичные Вторичные Третичные

Семихиноны Супероксид Нитроксид Гидроксил Радикалы липидов Радикалы антиоксидантов

Радиация Радикалы воды и

Чужеродные биомолекул

Ультрафиолет, облучение лазерное Радикалы хромофоров молекул-

Ксенобиотики Радикалы токсических

веществ

Несмотря на большое число исследований, остается много вопросов об источниках свободных радикалов в конкретных клетках и тканях их участии в патогенезе различных заболеваний.

1.1.1 Физиология и морфология тромбоцитов

Тромбоциты, или кровяные пластинки — мелкие дисковидные постклеточные структуры диаметром 2-4 мкм (Рис. 1). Они образуются при фрагментации цитоплазмы мегакариоцитов костного мозга и затем циркулируют в крови в концентрации 200-400 тыс/мкл в течение 5-10 дней, после чего подвергаются фагоцитозу. В случаях повреждений, тромбоциты способны прикрепляется к поврежденным тканям и друг другу, образуя тромбоцитарную «пробку». Тромбоциты не содержат ядра, но осуществляют все основные биохимические процессы (окислительное фосфорилирование, синтез и обмен белков и липидов). Тромбоциты играют важную роль в гемостазе и остановке кровотечения при повреждениях, а также в патологическом тромбообразовании.

Рис. 1. Электронная микрофотография не активированных тромбоцитов [6].

Тромбоциты имеют трёхслойную плазматическую мембрану и цитоплазму, в которой различают гиаломер и глануромер. Гиаломер тромбоцитов представляет собой тонкогранулярную субстанцию, плотность которой зависит от возраста и функционального состояния тромбоцитов.

Под грануломером тромбоцитов понимают совокупность гранул, расположенных в цитоплазме. Глануромер содержит плотные гранулы, альфа-

гранулы, митохондрии, гликоген, эндоплазматический ретикулум, комплекс Гольджи (Рис. 2) и другие. Кроме того, биологически активные вещества, связанные со свертыванием крови содержатся в гранулах: альфа-гранулах (фибриноген, фибронектин, тромбоспондин, фактор Виллебранда и другие) и плотных гранулах (АДФ, АТФ, кальций, магний, пирофосфат, гистамин, серотонин).

Рис. 2. Структура тромбоцита. Слева на схеме можно различить основные элементы структуры тромбоцита, справа показана трехмерная реконструкция структуры тромбоцита по данным электронной томографии [7].

Плазмалемма тромбоцитов покрыта очень толстым слоем гликокаликса. На ней обнаружены рецепторы, опосредующие адгезию и агрегацию: Ib, IIb, IIIa, рецепторы к АДФ, адреналину, тромбину, фактору Ха, фактору агрегации тромбоцитов, коллагену (Рис. 3).

Рис. 3. Тромбоциты имеют множество рецепторов к АДФ, адреналину, тромбину, фактору Ха, фактору агрегации тромбоцитов, коллагену. Взято с изменениями

[8].

Гиаломер тромбоцитов включает в себя: открытую систему канальцев, функция которой состоит в поглощении веществ и экзоцитозе содержимого тромбоцитарных гранул; плотные трубочки (производное комплекса Гольджи мегакариоцитов), которые накапливают и выделяют кальций; цитоскелет. В его состав входят микротрубочки, которые формируют краевое кольцо - каркас тромбоцита; и микрофиламенты, образующие подмемранный аппарат, ответственный за движение и агрегацию тромбоцитов [9].

1.1.1 Участие в свертывании крови

Участие тромбоцитов в свертывании крови осуществляется в несколько стадий: активация, адгезия, агрегация, ретракция тромба.

1.1.1.1 Активация

Исходные, неактивированные тромбоциты имеют дисковую форму и

достаточно малый размер, поэтому они легко проходят через капилляры. В

процессе активации происходит в большинстве случаев необратимое изменение

14

формы клеток: тромбоциты распластываются по поверхности и теряют дисковидную форму [10] (Рис. 4). Тромбоциты округляются и выбрасывают тонкие отростки. Краевое кольцо сжимается, сдвигая гранулы в центр. Актин полимеризуется, образуя второе кольцо [11].

Рис. 4. Тромбоциты. Электронная микрофотография не активированных тромбоцитов, сохраняющих дисковидную форму (слева), и активированных АДФ тромбоцитов в агрегате (справа) [6].

Метаболическая реакция тромбоцитов представляет собой активацию ферментов (мембранных фосфолипаз, циклооксигеназы, тромбоксансинтазы), которые осуществляют синтез арахидоновой кислоты из фосфолипидов мембраны. Из арахидоновой кислоты в тромбоцитах синтезируются эйкозаноиды (в основном, тромбоксан А2), которые вызывают спазм сосуда и способствуют агрегации. С другой стороны, в эндотелии из нее синтезируются простациклин, который, напротив, угнетает активацию тромбоцитов и расширяют сосуды. Дальнейший ход реакции определяется балансом между тромбоксаном А2 и простациклином. Кроме того, из плотных трубочек и гранул тромбоцитов выделяется кальций.

Экспонирование прокоагулянтной мембраны является важным этапом активации тромбоцитов. Мембрана неактивированных тромбоцитов не поддерживает реакции" свертывания. Отрицательно заряженные фосфолипиды, такие как фосфатидилсерин и другие фосфолипиды внутренней мембраны тромбоцитов отрицательно заряжены. На внешнем слое мембраны фосфатидилхолин связывает факторы свертывания хуже. Существуют факторы свертывания, которые связываться хорошо даже с неактивированными тромбоцитами. Однако, это не приводит к образованию активных ферментативных комплексов. Активация тромбоцита влечет за собой активацию фермента скрамблаза, который, в свою очередь, быстро перебрасывает отрицательно

заряженные фосфолипиды из одного слоя в другой. Этот пререброс является специфичными двухсторонним и в результате него выравнивается концентрация фосфатидилсерина в обоих слоях и устанавливается термодинамическое равновесие [12].

Кроме того, при активации тромбоцитов имеет место экспрессия и/ или стимуляция многих трансмембранных белков внешнего слоя, и они приобретают способность специфически связывать факторы свертывания, ускоряя реакции с их участием.

Точная природа мест связывания для всех факторов свертывания пока не установлена, но можно предположить, что они представляют собой сложные комплексы фосфолипидов. С точки зрения адгезии и агрегации, все активированные тромбоциты, по-видимому, равноправны. Однако по экспрессии фосфатидилсерина тромбоциты делятся на две субпопуляции, различающиеся по этому показателю на несколько порядков [13].

Так что в свертывании участвует лишь несколько процентов активированных тромбоцитов, остальные по своим прокоагулянтным качествам не отличаются от неактивированных. Механизмы формирования такой гетерогенности пока неясны. Предположительно, именно с тромбоцитами этой субпопуляции может связываться фактор VПa, чтобы активировать фактор X. Физиологическое значение этого явления также не изучено [14].

В ходе активации происходит секреция альфа-гранул. Значимость этой секреции для большинства белков не вполне понятна, за исключением фактор фон Виллебранда (фактор V), который содержится в альфа-гранулах в относительно большом количестве (около 20% от плазменного пула), и при агрегации тромбоцитов его концентрация может сильно возрастать [15].

Фактор V в тромбоцитах уже находится в частично активированнои форме, которая может сразу ускорять скорость работы фактора Xa, без дополнительной активации тромбином [16].

Есть клинические данные, что люди с дефицитом плазменного фактора V, но с нормальным тромбоцитарным фактором V не имеют склонности к кровоточивости. Напротив, люди могут проявлять тенденцию к геморрагии, имея

нормальный плазменный уровень фактора V, если их тромбоцитарныи фактор V дефектен. [17].

1.1.1.2 Адгезия

Тромбоциты прилипают к стенке сосуда в области повреждения в результате взаимодействия с коллагеном (из базальной мембраны эндотелия, волокон подэндотелиального слоя) посредством фибринектина, ламинина и фактора фон Виллебранда (тромбоцитарного, эндотелиального).

В ответ на повреждение сосудистой стенки, обнажающее субэндотелиальный матрикс — коллаген и фактор фон Виллебранда — или активирующее эндотелиоциты, что приводит к экспрессии Р-селектина и высокомолекулярного фактора фон Виллебранда, циркулирующие тромбоциты в кровотоке взаимодействуют с сосудистой стенкой через поверхностные рецепторы GPVI и GPIb-IX-V. Они образуют на тромбоцитах адгезионно-сигнальный комплекс. [18, 19].

Гликопротеин (GP) VI является членом семейства иммунорецепторов. [20, 21]. Его главный физиологический лиганд — коллаген. Дополнительные лиганды: ламинин, токсины змеиного яда, родственный коллагену пептид (CRP). [20, 22-27]. Рецептор GPVI, который связывает коллаген, и GPIb (главная лиганд-связывающая субъединица рецептора GPIb-IX-V), который связывает фактор фон Виллебранда, инициируют тромбоцитарную сигнализацию, секрецию агонистов (таких как АДФ) и активацию интегрина альфа11Ь-бета3, который связывает фибриноген и фактор фон Виллебранда и опосредует агрегацию тромбоцитов [22, 24, 26-28].

Один из механизмов, которым регулируются GPVI и GPIb- IX-V, включает в себя протеолиз внешнего домена металлопротеиназой, индуцируемый связыванием лиганда и сигнализацией. При другом пути кальмодулиновые ингибиторы, которые диссоциируют кальмодулин из цитоплазматических мест связывания на GPVI, GPIb и GPV, вызывают локальное мембранное сбрасывание (shedding) внешнего домена без тромбоцитарной активации. В результате этого высвобождаются растворимые фрагменты внешнего домена и остаются мембрано-связанные субъединицы [29-31]. Сбрасывающий фермент (sheddase) ADAM10 отрезает проксимальную по отношению к мембране последовательность GPVI и

запускает высвобождение растворимого внеклеточного фрагмента (55 кДа) и образование тромбоцито-связанного остатка [32]. Есть данные, что GPVI может также быть интернализирован без протеолиза [33]. Уменьшение количества GPVI, также, как и других адгезионных рецепторов, после адгезии предположительно необходимо для контроля взаимодействий между тромбоцитами и субэндотелиальным матриксом, которые наблюдаются в ходе распределения и накопления тромбоцитов в месте роста тромба. Тем самым ограничивается тромбоцитарный сигнальный ответ, имеющий место при активации и секреции, и/или происходит дестабилизация тромба с отщеплением его фрагментов либо предотвращением его распространения.

1.1.1.3 Агрегация

В ходе агрегации на мембране тромбоцитов из белков IIb и IIIa собирается комплекс GP IIb/IIIa — рецептор фибриногена. Фибриноген стимулирует агрегацию посредством образования мостиков между тромбоцитами. Кофакторами агрегации являются тромбин, адреналин, фактор активации тромбоцитов (ФАТ), коллаген, АДФ.

1.1.1.4 Ретракция тромба

Ретракция тромба обусловлена цитоскелетом тромбоцитов: комплекс актин-миозин с помощью энергии АТФ передает усилия на нити фибрина и тем самым уменьшает объем тромба до 50%.

1.2 Источники АФК в тромбоцитах

Несмотря на то, что Маркус еще в 1977 году показал, способность тромбоцитов продуцировать активные формы кислорода (АФК) относительно их источника существуют разные мнения [34, 35]. Тромбоциты продуцируют АФК, в том числе супероксид-анион радикал, гидроксильный радикал и пероксид водорода, причем как будучи нестимулированными, так и после стимуляции агонистами, такими как АДФ, коллаген и тромбин [1, 35-37]. Эндогенный синтез АФК указывает на их аутокринную или паракринную роль в активации тромбоцитов, аналогично той, которая описана для экзогенных АФК [38].

Теоретически, в качестве источников свободных радикалов в тромбоцитах могут выступать [39-43]:

• Система НАД(Ф)Н-оксидазы на мембранах

• Система окисления арахидоновой кислоты (ЦОГ и ЛОГ)

• Микросомальные монооксигеназы эндоплазматического ретикулума

• Цитоплазматическая ксантиноксидаза

• Респираторная цепь митохондрий

Показано, что добавление низких (мкмоль/л) концентраций перекиси водорода в присутствие плазмы угнетают функционирование тромбоцитов. Хотя высокие концентрации пероксида водорода (ммоль/л) стимулируют агрегацию, физиологическое значение концентраций выше 1 ммоль/л спорно [39].

1.2.1 Система НАД(Ф)Н-оксидазы

Тромбоциты содержат НАД(Ф)Н-оксидазу — многие из ее субъединиц были обнаружены в тромбоцитах на белковом уровне (Nox2 или gp91phox, p22phox, p67phox, p47phox, и Rac) [40, 41].

НАД(Ф)Н-оксидаза - мультикомпонентный фермент, который состоит из двух мембрано-связанных субъединиц: главной каталитической субъединицы gp91phox и регуляторной p22phox, а также цитозольных регуляторных частей p47phox, p67phox, p40phox и малой ГТФ-азы Rac [44] (Рис. 5). Этот фермент, относящийся к семейству оксидоредуктаз, существует в виде 7 изоформ. АФК в НАД(Ф)Н-оксидазе вырабатывает белок NOX, что отличает данный фермент от других оксидаз. НАД(Ф)Н-оксидазы объединяют в семейство NOX: NOX1, NOX2 (также субъединица бета или мембранный гликопротеин gp91 phox, где phox -«phagocyte oxidase») [45]. Каталитические субъединицы в NOX1, NOX2, NOX3 и NOX4 образуют макромолекулярный комплекс белком-активатором p22phox (также субъединица альфа). В изоформах NOX5, Duox1 и Duox2 данный белок отсутствует, зато имеется Ca2+-связывающий активационный домен. Duox 1 и 2 содержат дополнительный пероксидазный домен, гомологичный другим пероксидазам, катализирующим дисмутацию супероксиданиона до перекиси [46]. Изоферменты NOX различаются по своей внутриклеточной локализации,

характеру экспрессии, структуре, механизму активации, каталитическому механизму образования АФК и функциям.

Рис. 5. Действие растворимых индукторов и механизм сборки НАДФ-Н оксидазы фагоцитов. цАМФ - циклический аденозинмонофосфат; ПкС - протеин-киназа С; ФлА2 - фосфолипаза А2; АК - арахидоновая кислота, ГТФ -гуанозинтрифосфат, ГДФ - гуанозиндифосфат. Цветные овалы обозначают субъединицы НАД(Ф)Н оксидазного комплекса. Мембранные белки р21 и gp91 составляют цитохром Ь558. По [2] с изменениями и дополнениями.

НАД(Ф)Н-оксидаза катализирует реакцию восстановления молекулярного кислорода до супероксиданион-радикала [47, 48]. САР, который высвобождается в ходе работы НАД(Ф)Н-оксидазы, служит предшественником других активных форм кислорода (перекиси водорода и гидроксильного радикала) и негативным регулятором N0 [49].

Транслокация цитоплазматических субъединиц и сборка активной НАД(Ф)Н-оксидазы регулируется путем фосфорилирования р47р^х, что может быть опосредовано протеинкиназой С (Рис. 5). Субъединица р47р^х взаимодействует с мембраносвязанным продуктом Р13-киназы Р1(3,4)Р и р22р^х посредством ^концевых р^х-гомологичного домена и Scr-гомологичного домена-3 ^Ю) - доменов; а также с р67р^х, которая, в свою очередь, взаимодействует с Rac1.

Активированный комплекс превращает НАД(Ф)Н в НАДФ+ и генерирует САР [50]. НАД(Ф)Н-оксидаза активируется в ответ на различные стимулы. Предполагают, что изоформа N0X4 является единственной спонтанно активируемой среди семейства НАД(Ф)Н-оксидаз. Эта изоформа наиболее активно экспрессируется в почках, а также присутствует в эндотелии, гладких миоцитах, остеокластах, гемопоэтических клетках, фибробластах, нейронах, кератиноцитах и

клетках меланомы. Локализуется на мембранах эндоплазматического ретикулума, а также, по некоторых данным, обнаружена в ядре. Одним из ее отличительных свойств является преимущественная продукция Н2О2 [44, 51].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Джатдоева Айшат Абдрахмановна, 2017 год

Список литературы

1. Wachowicz, B. Generation of reactive oxygen species in blood platelets / B. Wachowicz, B. Olas, H.M. Zbikowska // Platelets. - 2002. -V. 13. № 3. - P. 175182.

2. Storch, J. Detergent-amplified chemiluminescence of lucigenin for determination of superoxide anion production by NADPH oxidase and xanthine oxidase / J. Storch, E. Ferber // Anal Biochem. - 1988. -V. 169. № 2. - P. 262-267.

3. Wilson, M.E. Induction of chemiluminescence in human polymorphonuclear leukocytes by the calcium ionophore A23187 / M.E. Wilson, M.A. Trash, K. van Dyke // FEBS letters. - 1978. -V. 94. № 2. - P. 387-390.

4. Irani, K. Mitogenic signaling mediated by oxidants in Ras-transformed fibroblasts / K. Irani, Y. Xia, J.L. Zweier // Science. - 1997. -V. 275. № 5306. - P. 1649-1652.

5. Rembish, S.J. Further evidence that lucigenin-derived chemiluminescence monitors mitochondrial superoxide generation in rat alveolar macrophages / S.J. Rembish, M.A. Trush // Free Radic Biol Med. - 1994. -V. 17. № 2. - P. 117-126.

6. Panteleev, M.A. Platelets and hemostasis / M.A. Panteleev, A.N. Sveshnikova // Oncohematology. -. -V. 9. № 2. - P. 65-73.

7. Пантелеев, М.А. Тромбоциты и гемостаз / М.А. Пантелеев, А.Н. Свешникова // Онкогематология. - 2014. -Т. 9. № 2. - С. 65-73.

8. Leitinger B. Discoidin domain receptor functions in physiological and pathological conditions / B. Leitinger // International review of cell and molecular biology. - 2014. -V. 310. № - P. 39-87.

9. Blair, P. Platelet alpha-granules: basic biology and clinical correlates / P. Blair, R. Flaumenhaft // Blood Rev. - 2009. -V. 23. № 4. - P. 177-189.

10. Abaeva, A.A. Procoagulant platelets form an alpha-granule protein-covered "cap" on their surface that promotes their attachment to aggregates / A.A. Abaeva, M. Canault, Y.N. Kotova // J Biol Chem. - 2013. -V. 288. № 41. - P. 29621-29632.

11. van Nispen H. The platelet interior revisited: electron tomography reveals tubular alpha-granule subtypes / H. van Nispen tot Pannerden, F. de Haas, W. Geerts // Blood. - 2010. -V. 116. № 7. - P. 1147-1156.

12. Sahu, S.K. Phospholipid scramblases: an overview / S.K. Sahu, S.N. Gummadi, N. Manoj // Archives of biochemistry and biophysics. - 2007. -V. 462. № 1. - P. 103-114.

13. Dale G.L. Coated-platelets: an emerging component of the procoagulant response / G.L. Dale // Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. - 2005. -V. 3. № 10. -P. 2185-2192.

14. Panteleev, M.A. Two subpopulations of thrombin-activated platelets differ in their binding of the components of the intrinsic factor X-activating complex / M.A. Panteleev, N.M. Ananyeva, N.J. Greco // Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. - 2005. -V. 3. № 11. - P. 2545-2553.

15. Chesney, C.M. Colman Subcellular localization and secretion of factor V from human platelets / C.M. Chesney, D. Pifer, R.W. Colman // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 1981. -V. 78. № 8. - P. 5180-5184.

16. Monkovic, D.D. Functional characterization of human platelet-released factor V and its activation by factor Xa and thrombin / D.D. Monkovic, P.B. Tracy // J Biol Chem. - 1990. -V. 265. № 28. - P. 17132-17140.

17. Colman R.W. Hemostasis and thrombosis ba- sic principles and clinical practice: Lippincott / R.W. Colman. -Philadelphia. 1993. - P. 213.

18. Andrews, R.K. Academic Press / R.K. Andrews, M.C. Berndt, J.A. Lopez.-San Diego. - 2006.

19. Arthur, J.F. Glycoprotein VI is associated with GPIb-IX-V on the membrane of resting and activated platelets / J.F. Arthur, E.E. Gardiner, M. Matzaris // Thromb Haemost. - 2005. -V. 93. № 4. - P. 716-723.

20. Nieswandt, B. Platelet-collagen interaction: is GPVI the central receptor? / B. Nieswandt, S.P. Watson // Blood. - 2003. -V. 102. № 2. - P. 449-461.

21. Watson, S.P. GPVI and integrin alphaIIb beta3 signaling in platelets / S.P. Watson, J.M. Auger, O.J. McCarty // Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. - 2005. -V. 3. № 8. - P. 1752-1762.

22. Bhatt, D.L. Scientific and therapeutic advances in antiplatelet therapy / D.L. Bhatt, E.J. Topol // Nature reviews Drug discovery. - 2003. -V. 2. № 1. - P. 15-28.

23. Clemetson, J.M. The platelet collagen receptor glycoprotein VI is a member of the immunoglobulin superfamily closely related to FcalphaR and the natural killer receptors / J.M. Clemetson, J. Polgar, E. Magnenat // J Biol Chem. - 1999. -V. 274. № 41. - P. 29019-29024.

24. Hollopeter, G. Identification of the platelet ADP receptor targeted by antithrombotic drugs / G. Hollopeter, H.M. Jantzen, D. Vincent // Nature. - 2001. -V. 409. № 6817. - P. 202-207.

25. Jandrot-Perrus, M. Lagrue Cloning, characterization, and functional studies of human and mouse glycoprotein VI: a platelet-specific collagen receptor from the immunoglobulin superfamily / M. Jandrot-Perrus, S. Busfield, A.H. Lagrue // Blood. - 2000. -V. 96. № 5. - P. 1798-1807.

26. Lenain, N. Inhibition of localized thrombosis in P2Y1-deficient mice and rodents treated with MRS2179, a P2Y1 receptor antagonist / N. Lenain, M. Freund, C. Leon // Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. - 2003. -V. 1. № 6. - P. 11441149.

27. Nurden, A.T. Advantages of fast-acting ADP receptor blockade in ischemic heart disease / A.T. Nurden, P. Nurden // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2003. -V. 23. № 2. - P. 158-159.

28. Arthur, J.F. Calmodulin interacts with the platelet ADP receptor P2Y1 / J.F. Arthur, Y. Shen, F.T. Mu // The Biochemical journal. - 2006. -V. 398. № 3. - P. 339-343.

29. Bergmeier, W. GPVI down-regulation in murine platelets through metalloproteinase-dependent shedding / W. Bergmeier, T. Rabie, A. Strehl // Thromb Haemost. - 2004. -V. 91. № 5. - P. 951-958.

30. Gardiner, E.E. Regulation of platelet membrane levels of glycoprotein VI by a platelet-derived metalloproteinase / E.E. Gardiner, J.F. Arthur, M.L. Kahn // Blood. - 2004. -V. 104. № 12. - P. 3611-3617.

31. Rabie, T. Evidence for a role of ADAM17 (TACE) in the regulation of platelet glycoprotein V / T. Rabie, A. Strehl, A. Ludwig // J Biol Chem. - 2005. -V. 280. № 15. - P. 14462-14468.

32. Gardiner, E.E. Controlled shedding of platelet glycoprotein (GP)VI and GPIb-IX-V by ADAM family metalloproteinases / E.E. Gardiner, D. Karunakaran, Y. Shen // Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. - 2007. -V. 5. № 7. - P. 1530-1537.

33. Rabie, T. Diverging signaling events control the pathway of GPVI down-regulation in vivo / T. Rabie, D. Varga-Szabo, M. Bender // Blood. - 2007. -V. 110. № 2. - P. 529-535.

34. Pratico, D. Iron-dependent human platelet activation and hydroxyl radical formation: involvement of protein kinase C / D. Pratico, M. Pasin, O.P. Barry // Circulation. - 1999. -V. 99. № 24. - P. 3118-3124.

35. Caccese, D. Superoxide anion and hydroxyl radical release by collagen-induced platelet aggregation--role of arachidonic acid metabolism / D. Caccese, D. Pratico, A. Ghiselli // Thrombosis and haemostasis. - 2000. -V. 83. № 3. - P. 485-490.

36. Finazzi-Agro, A. Hydrogen peroxide release from human blood platelets / A. Finazzi-Agro, A. Menichelli, M. Persiani // Biochimica et biophysica acta. - 1982. -V. 718. № 1. - P. 21-25.

37. Loscalzo, J.N-Acetylcysteine potentiates inhibition of platelet aggregation by nitroglycerin / J. Loscalzo // The Journal of clinical investigation. - 1985. -V. 76. № 2. - P. 703-708.

38. Krotz, F. Reactive oxygen species: players in the platelet game / F. Krotz, H.Y. Sohn, U. Pohl // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2004. -V. 24. № 11. - P. 19881996.

39. Iuliano, L. Oxygen free radicals and platelet activation / L. Iuliano, A.R. Colavita, R. Leo // Free Radic Biol Med. - 1997. -V. 22. № 6. - P. 999-1006.

40. Krotz, F. NAD(P)H oxidase-dependent platelet superoxide anion release increases platelet recruitment / F. Krotz, H.Y. Sohn, T. Gloe // Blood. - 2002. -V. 100. № 3. - P. 917-924.

41. McVeigh, G.E. Platelet nitric oxide and superoxide release during the development of nitrate tolerance: effect of supplemental ascorbate / G.E. McVeigh, P. Hamilton, M. Wilson // Circulation. - 2002. -V. 106. № 2. - P. 208213.

42. Pignatelli, P. Carnitine inhibits arachidonic acid turnover, platelet function, and oxidative stress / P. Pignatelli, L. Lenti, V. Sanguigni // American journal of physiology Heart and circulatory physiology. - 2003. -V. 284. № 1. - P. H41-48.

43. Zielinski, T. The generation of superoxide anion in blood platelets in response to different forms of Proteus mirabilis lipopolysaccharide: effects of staurosporin, wortmannin, and indomethacin / T. Zielinski, B. Wachowicz, J. Saluk-Juszczak // Thrombosis research. - 2001. -V. 103. № 2. - P. 149-155.

44. Bedard, K. The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology / K. Bedard, K.H. Krause // Physiol Rev. - 2007. -V. 87. № 1. - P. 245-313.

45. McCann, S.K. NADPH Oxidase as a Therapeutic Target for Neuroprotection against Ischaemic Stroke: Future Perspectives / S.K. McCann, C.L. Roulston // Brain sciences. - 2013. -V. 3. № 2. - P. 561-598.

46. Segal, A.W. The function of the NADPH oxidase of phagocytes and its relationship to other NOXs in plants, invertebrates, and mammals / A.W. Segal // Int J Biochem Cell Biol. - 2008. -V. 40. № 4. - P. 604-618.

47. Babior, B.M. The particulate superoxide-forming system from human neutrophils. Properties of the system and further evidence supporting its participation in the respiratory burst / B.M. Babior, J.T. Curnutte, B.J. McMurrich // The Journal of clinical investigation. - 1976. -V. 58. № 4. - P. 989-996.

48. Iverson, D. Comparison of NADH and NADPH oxidase activities in granules isolated from human polymorphonuclear leukocytes with a fluorometric assay / D. Iverson, L.R. DeChatelet, J.K. Spitznagel // The Journal of clinical investigation. - 1977. -V. 59. № 2. - P. 282-290.

49. Takeya, R. Regulation of novel superoxide-producing NAD(P)H oxidases / R. Takeya, H. Sumimoto // Antioxidants & redox signaling. - 2006. -V. 8. № 9-10. -P. 1523-1532.

50. Wishart, M.J. Phoxy lipids: revealing PX domains as phosphoinositide binding modules / M.J. Wishart, G.S. Taylor, J.E. Dixon // Cell. - 2001. -V. 105. № 7. - P. 817-820.

51. Serrander, L. NOX4 activity is determined by mRNA levels and reveals a unique pattern of ROS generation / L. Serrander, L. Cartier, K. Bedard // Biochem J. -2007. -V. 406. № 1. - P. 105-114.

52. Lassegue, B. Vascular NAD(P)H oxidases: specific features, expression, and regulation / B. Lassegue, R.E. Clempus // American journal of physiology Regulatory, integrative and comparative physiology. - 2003. -V. 285. № 2. - P. R277-297.

53. Begonja, A.J. Platelet NAD(P)H-oxidase-generated ROS production regulates alphaIIbbeta3-integrin activation independent of the NO/cGMP pathway / A.J. Begonja, S. Gambaryan, J. Geiger // Blood. - 2005. -V. 106. № 8. - P. 2757-2760.

54. Chlopicki, S. Functional role of NADPH oxidase in activation of platelets / S. Chlopicki, R. Olszanecki, M. Janiszewski // Antioxidants & redox signaling. -2004. -V. 6. № 4. - P. 691-698.

55. Zalavary, S. Platelets enhance Fc(gamma) receptor-mediated phagocytosis and respiratory burst in neutrophils: the role of purinergic modulation and actin polymerization / S. Zalavary, M. Grenegard, O. Stendahl // Journal of leukocyte biology. - 1996. -V. 60. № 1. - P. 58-68.

56. Andrews, R.K. The glycoprotein Ib-IX-V complex: Academic Press / R.K. Andrews, A.D. Michelson -San Diego, 2006.

57. Xiao, Y. Characterization of free radicals formed from COX-catalyzed DGLA peroxidation / Y. Xiao, Y. Gu, P. Purwaha // Free Radic Biol Med. - 2011. -V. 50. № 9. - P. 1163-1170.

58. Yu, Q. Characterization of novel radicals from COX-catalyzed arachidonic acid peroxidation / Q. Yu, P. Purwaha, K. Ni // Free Radic Biol Med. - 2009. -V. 47. № 5. - P. 568-576.

59. Gu, Y. The first characterization of free radicals formed from cellular COX-catalyzed peroxidation / Y. Gu, Y. Xu, B. Law // Free Radic Biol Med. - 2013. -V. 57. № - P. 49-60.

60. FitzGerald, G.A. COX-2 and beyond: Approaches to prostaglandin inhibition in human disease / G.A. FitzGerald // Nature reviews Drug discovery. - 2003. -V. 2. № 11. - P. 879-890.

61. Niwa, K. Cyclooxygenase-1 participates in selected vasodilator responses of the cerebral circulation / K. Niwa, C. Haensel, M.E. Ross // Circulation research. -2001. -V. 88. № 6. - P. 600-608.

62. Jahn, B. Oxygen radical generation in human platelets: dependence on 12-lipoxygenase activity and on the glutathione cycle / B. Jahn, G.M. Hansch // International archives of allergy and applied immunology. - 1990. -V. 93. № 1. -P. 73-79.

63. Singh, D. Evidence for the generation of hydroxyl radical during arachidonic acid metabolism by human platelets / D. Singh, J.E. Greenwald, J. Bianchine // American journal of hematology. - 1981. -V. 11. № 3. - P. 233-240.

64. Jahn, B. Oxygen radical generation in human platelets: dependence on 12-lipoxygenase activity and on the glutathione cycle / B. Jahn, G.M. Hansch // International archives of allergy and applied immunology. - 1990. -V. 93. № 1. -P. 73-79.

65. Marcus, A.J. Superoxide production and reducing activity in human platelets / A.J. Marcus, S.T. Silk, L.B. Safier // The Journal of clinical investigation. - 1977. -V. 59. № 1. - P. 149-158.

66. Caccese, D. Superoxide anion and hydroxyl radical release by collagen-induced platelet aggregation--role of arachidonic acid metabolism / D. Caccese, D. Pratico, A. Ghiselli // Thromb Haemost. - 2000. -V. 83. № 3. - P. 485-490.

67. George, J. Role of urate, xanthine oxidase and the effects of allopurinol in vascular oxidative stress / J. George, A.D. Struthers // Vasc Health Risk Manag. - 2009. -V. 5. № 1. - P. 265-272.

68. Parks, D.A. Xanthine oxidase: biochemistry, distribution and physiology / D.A. Parks, D.N. Granger // Acta physiologica Scandinavica Supplementum. - 1986. -V. 548. № - P. 87-99.

69. Wajner, M. Distribution of xanthine dehydrogenase and oxidase activities in human and rabbit tissues / M. Wajner, R.A. Harkness // Biochimica et biophysica acta. - 1989. -V. 991. № 1. - P. 79-84.

70. Meneshian, A. The physiology of endothelial xanthine oxidase: from urate catabolism to reperfusion injury to inflammatory signal transduction / A. Meneshian, G.B. Bulkley // Microcirculation. - 2002. -V. 9. № 3. - P. 161-175.

71. Labat-Robert, J. Longevity and aging. Role of free radicals and xanthine oxidase. A review / J. Labat-Robert, L. Robert // Pathol Biol: Paris. - 2014. -V. 62. № 2. -P. 61-66.

72. Levine, P.H. Superoxide, xanthine oxidase and platelet reactions: further studies on mechanisms by which oxidants influence platelets / P.H. Levine, D.G. Sladdin, N.I. Krinsky // Thromb Haemost. - 1981. -V. 45. № 3. - P. 290-293.

73. Bredesen, D.E. Neural apoptosis / D.E. Bredesen // Annals of neurology. - 1995. -V. 38. № 6. - P. 839-851.

74. Kowaltowski, A.J. Mitochondria and reactive oxygen species / A.J. Kowaltowski, N.C. de Souza-Pinto, R.F. Castilho // Free Radic Biol Med. - 2009. -V. 47. № 4. -P. 333-343.

75. Boveris, A.Mitochondrial production of superoxide radical and hydrogen peroxide / A. Boveris // Advances in experimental medicine and biology. - 1977. -V. 78. № - P. 67-82.

76. Pitkanen, S. Mitochondrial complex I deficiency leads to increased production of superoxide radicals and induction of superoxide dismutase / S. Pitkanen, B.H. Robinson // The Journal of clinical investigation. - 1996. -V. 98. № 2. - P. 345351.

77. Trumpower, B.L. The protonmotive Q cycle. Energy transduction by coupling of proton translocation to electron transfer by the cytochrome bc1 complex / B.L. Trumpower // The Journal of biological chemistry. - 1990. -V. 265. № 20. - P. 11409-11412.

78. Kozjak-Pavlovic, V. The MICOS complex of human mitochondria / V. Kozjak-Pavlovic // Cell and tissue research. - 2017. -V. 367. № 1. - P. 83-93.

79. Kotelba-Witkowska, B. Storage of human platelets: effects on metabolically active ATP and on the release reaction / B. Kotelba-Witkowska, H. Holmsen, E.H. Murer // British journal of haematology. - 1972. -V. 22. № 4. - P. 429-435.

80. Choo, H.J. Mitochondrial calcium and reactive oxygen species regulate agonist-initiated platelet phosphatidylserine exposure / H.J. Choo, T.B. Saafir, L. Mkumba // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2012. -V. 32. № 12. - P. 2946-2955.

81. Obydennyy, S.I. Dynamics of calcium spiking, mitochondrial collapse and phosphatidylserine exposure in platelet subpopulations during activation / S.I.

Obydennyy, A.N. Sveshnikova, F.I. Ataullakhanov // Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. - 2016. -V. 14. № 9. - P. 1867-1881.

82. Thushara, R.M. Sesamol induces apoptosis in human platelets via reactive oxygen species-mediated mitochondrial damage / R.M. Thushara, M. Hemshekhar, K. Sunitha // Biochimie. - 2013. -V. 95. № 11. - P. 2060-2068.

83. Lopez, J.J. Thrombin induces apoptotic events through the generation of reactive oxygen species in human platelets / J.J. Lopez, G.M. Salido, E. Gomez-Arteta // Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. - 2007. -V. 5. № 6. - P. 1283-1291.

84. Bertino, A.M. Apoptotic markers are increased in platelets stored at 37 degrees C / A.M. Bertino, X.Q. Qi, J. Li // Transfusion. - 2003. -V. 43. № 7. - P. 857-866.

85. Wolf, B.B. Calpain functions in a caspase-independent manner to promote apoptosis-like events during platelet activation / B.B. Wolf, J.C. Goldstein, H.R. Stennicke // Blood. - 1999. -V. 94. № 5. - P. 1683-1692.

86. Rosado, J.A. Early caspase-3 activation independent of apoptosis is required for cellular function / J.A. Rosado, J.J. Lopez, E. Gomez-Arteta // Journal of cellular physiology. - 2006. -V. 209. № 1. - P. 142-152.

87. Peire, M.A. Oxygen-free radicals and nitric oxide are involved in the thrombus growth produced by iontophoresis of ADP / M.A. Peire, P. Puig-Parellada // Pharmacological research. - 1998. -V. 38. № 5. - P. 353-356.

88. Freedman, J.E. Glutathione peroxidase potentiates the inhibition of platelet function by S-nitrosothiols / J.E. Freedman, B. Frei, G.N. Welch // The Journal of clinical investigation. - 1995. -V. 96. № 1. - P. 394-400.

89. Loscalzo, J.Nitric oxide insufficiency, platelet activation, and arterial thrombosis / J. Loscalzo // Circulation research. - 2001. -V. 88. № 8. - P. 756-762.

90. Winterbourn, C.C. The reaction of superoxide with reduced glutathione / C.C. Winterbourn, D. Metodiewa // Archives of biochemistry and biophysics. - 1994. -V. 314. № 2. - P. 284-290.

91. Essex, D.W. Redox control of platelet aggregation / D.W. Essex, M. Li // Biochemistry. - 2003. -V. 42. № 1. - P. 129-136.

92. van Gorp, R.M. Effect of membrane-permeable sulfhydryl reagents and depletion of glutathione on calcium mobilisation in human platelets / R.M. van Gorp, M.C.

van Dam-Mieras, G. Hornstra // Biochemical pharmacology. - 1997. -V. 53. № 10.

- P. 1533-1542.

93. Essex, D.W. Platelet surface glutathione reductase-like activity / D.W. Essex, M. Li, R.D. Feinman // Blood. - 2004. -V. 104. № 5. - P. 1383-1385.

94. Lahav, J. Sustained integrin ligation involves extracellular free sulfhydryls and enzymatically catalyzed disulfide exchange / J. Lahav, K. Jurk, O. Hess // Blood.

- 2002. -V. 100. № 7. - P. 2472-2478.

95. O'Neill, S. The platelet integrin alpha Ilbbeta 3 has an endogenous thiol isomerase activity / S. O'Neill, A. Robinson, A. Deering // J Biol Chem. - 2000. -V. 275. № 47. - P. 36984-36990.

96. Walsh, G.M. Redox modulation of integrin [correction of integin] alpha IIb beta 3 involves a novel allosteric regulation of its thiol isomerase activity / G.M. Walsh, D. Sheehan, A. Kinsella // Biochemistry. - 2004. -V. 43. № 2. - P. 473-480.

97. de Graaf, J.C. Nitric oxide functions as an inhibitor of platelet adhesion under flow conditions / J.C. de Graaf, J.D. Banga, S. Moncada // Circulation. - 1992. -V. 85. № 6. - P. 2284-2290.

98. Michelson, A.D. Circulating monocyte-platelet aggregates are a more sensitive marker of in vivo platelet activation than platelet surface P-selectin: studies in baboons, human coronary intervention, and human acute myocardial infarction / A.D. Michelson, M.R. Barnard, L.A. Krueger // Circulation. - 2001. -V. 104. № 13. - P. 1533-1537.

99. Cooke, J.P. Flow stimulates endothelial cells to release a nitrovasodilator that is potentiated by reduced thiol / J.P. Cooke, J. Stamler, N. Andon // The American journal of physiology. - 1990. -V. 259. № 3 Pt 2. - P. H804-812.

100. Shultz, P.J. Endogenously synthesized nitric oxide prevents endotoxin-induced glomerular thrombosis / P.J. Shultz, L. Raij // The Journal of clinical investigation.

- 1992. -V. 90. № 5. - P. 1718-1725.

101. Radomski, M.W. Regulation of vascular homeostasis by nitric oxide / M.W. Radomski, S. Moncada // Thromb Haemost. - 1993. -V. 70. № 1. - P. 36-41.

102. Mehta, J.L. Identification of constitutive and inducible forms of nitric oxide synthase in human platelets / J.L. Mehta, L.Y. Chen, B.C. Kone // The Journal of laboratory and clinical medicine. - 1995. -V. 125. № 3. - P. 370-377.

103. Chen, L.Y. Variable effects of L-arginine analogs on L-arginine-nitric oxide pathway in human neutrophils and platelets may relate to different nitric oxide synthase isoforms / L.Y. Chen, J.L. Mehta // The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. - 1996. -V. 276. № 1. - P. 253-257.

104. Freedman, J.E. Nitric oxide released from activated platelets inhibits platelet recruitment / J.E. Freedman, J. Loscalzo, M.R. Barnard // The Journal of clinical investigation. - 1997. -V. 100. № 2. - P. 350-356.

105. Freedman, J.E. Deficient platelet-derived nitric oxide and enhanced hemostasis in mice lacking the NOSIII gene / J.E. Freedman, R. Sauter, E.M. Battinelli // Circulation research. - 1999. -V. 84. № 12. - P. 1416-1421.

106. Iafrati, M.D. Tanriverdi Compensatory mechanisms influence hemostasis in setting of eNOS deficiency / M.D. Iafrati, O. Vitseva, K. Tanriverdi // American journal of physiology Heart and circulatory physiology. - 2005. -V. 288. № 4. -P.1627-1632.

107. Rubbo, H. Nitric oxide and peroxynitrite in lipid peroxidation / H. Rubbo // Medicina. - 1998. -V. 58. № 4. - P. 361-366.

108. . Meng, Y.Y Potentiation of endogenous nitric oxide with superoxide dismutase inhibits platelet-mediated thrombosis in injured and stenotic arteries / Y.Y. Meng, J. Trachtenburg, U.S. Ryan // Journal of the American College of Cardiology. -1995. -V. 25. № 1. - P. 269-275.

109. Olas, B. Comparative studies of the antioxidant effects of a naturally occurring resveratrol analogue -- trans-3,3',5,5'-tetrahydroxy-4'-methoxystilbene and resveratrol -- against oxidation and nitration of biomolecules in blood platelets / B. Olas, B. Wachowicz, P. Nowak // Cell biology and toxicology. - 2008. -V. 24. № 4. - P. 331-340.

110. Schubert, P. Proteomics meets blood banking: identification of protein targets for the improvement of platelet quality / P. Schubert, D.V. Devine // Journal of proteomics. - 2010. -V. 73. № 3. - P. 436-444.

111. Kedzierska, M. The nitrative and oxidative stress in blood platelets isolated from breast cancer patients: the protectory action of aronia melanocarpa extract / M. Kedzierska, B. Olas, B. Wachowicz // Platelets. - 2010. -V. 21. № 7. - P. 541-548.

112. Nowak, P. Oxidative stress in haemostasis / P. Nowak, B. Olas, B. Wachowicz // Postepy biochemii. - 2010. -V. 56. № 3. - P. 239-247.

113. Arthur, J.F. Platelet receptor redox regulation / J.F. Arthur, E.E. Gardiner, D. Kenny // Platelets. - 2008. -V. 19. № 1. - P. 1-8.

114. Keaney, J.F. Vitamin E and vascular homeostasis: implications for atherosclerosis / J.F. Keaney, Jr., D.I. Simon, J.E. Freedman // FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. -1999. -V. 13. № 9. - P. 965-975.

115. Steiner, M.Effect of alpha-tocopherol administration on platelet function in man / M. Steiner // Thromb Haemost. - 1983. -V. 49. № 2. - P. 73-77.

116. Steiner, M. Vitamin E. An inhibitor of the platelet release reaction / M. Steiner, J. Anastasi // The Journal of clinical investigation. - 1976. -V. 57. № 3. - P. 732-737.

117. Wilkinson, I.B. Oral vitamin C reduces arterial stiffness and platelet aggregation in humans / I.B. Wilkinson, I.L. Megson, H. MacCallum // Journal of cardiovascular pharmacology. - 1999. -V. 34. № 5. - P. 690-693.

118. Olas, B. Resveratrol and vitamin C as antioxidants in blood platelets / B. Olas, B. Wachowicz // Thrombosis research. - 2002. -V. 106. № 2. - P. 143-148.

119. Abudu, N.J Vitamins in human arteriosclerosis with emphasis on vitamin C and vitamin E / N. Abudu, J.J. Miller, M. Attaelmannan // Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry. - 2004. -V. 339. № 1-2. - P. 11-25.

120. Blache, D.Involvement of hydrogen and lipid peroxides in acute tobacco smoking-induced platelet hyperactivity / D. Blache // The American journal of physiology. - 1995. -V. 268. № 2. - P. 679-685.

121. Takajo, Y. Augmented oxidative stress of platelets in chronic smokers. Mechanisms of impaired platelet-derived nitric oxide bioactivity and augmented platelet aggregability / Y. Takajo, H. Ikeda, N. Haramaki // Journal of the American College of Cardiology. - 2001. -V. 38. № 5. - P. 1320-1327.

122. Calzada, C. Decrease in platelet reduced glutathione increases lipoxygenase activity and decreases vitamin E / C. Calzada, E. Vericel, M. Lagarde // Lipids. -1991. -V. 26. № 9. - P. 696-699.

123. Minuz, P. Determinants of platelet activation in human essential hypertension / P. Minuz, P. Patrignani, S. Gaino // Hypertension. - 2004. -V. 43. № 1. - P. 64-70.

124. Davi, G. In vivo formation of 8-iso-prostaglandin f2alpha and platelet activation in diabetes mellitus: effects of improved metabolic control and vitamin E supplementation / G. Davi, G. Ciabattoni, A. Consoli // Circulation. - 1999. -V.

99. № 2. - P. 224-229.

125. Schaeffer, G. Alterations in platelet Ca2+ signalling in diabetic patients is due to increased formation of superoxide anions and reduced nitric oxide production / G. Schaeffer, T.C. Wascher, G.M. Kostner // Diabetologia. - 1999. -V. 42. № 2. - P. 167-176.

126. Buczynski, A. Changes in antioxidant enzymes activities, aggregability and malonyldialdehyde concentration in blood platelets from patients with coronary heart disease / A. Buczynski, B. Wachowicz, K. Kedziora-Kornatowska // Atherosclerosis. - 1993. -V. 100. № 2. - P. 223-228.

127. Kaur, G. Lipid peroxidation in human blood platelets during unstable angina and myocardial infarction / G. Kaur, N.R. Pandey, M. Chandra // Bollettino chimico farmaceutico. - 2000. -V. 139. № 6. - P. 267-269.

128. Pandey, N.R. Enzymatic oxidant and antioxidants of human blood platelets in unstable angina and myocardial infarction / N.R. Pandey, G. Kaur, M. Chandra // International journal of cardiology. - 2000. -V. 76. № 1. - P. 33-38.

129. Chirkov, Y.Y. Nitrate resistance in platelets from patients with stable angina pectoris / Y.Y. Chirkov, A.S. Holmes, L.P. Chirkova // Circulation. - 1999. -V.

100. № 2. - P. 129-134.

130. Muscat, J.E. Enhanced protein glutathiolation and oxidative stress in cigarette smokers / J.E. Muscat, W. Kleinman, S. Colosimo // Free Radic Biol Med. - 2004. -V. 36. № 4. - P. 464-470.

131. Haramaki, N. Long-term smoking causes nitroglycerin resistance in platelets by depletion of intraplatelet glutathione / N. Haramaki, H. Ikeda, Y. Takajo // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2001. -V. 21. № 11. - P. 1852-1856.

132. Lopez, J.J. Cinnamtannin B-1 as an antioxidant and platelet aggregation inhibitor / J.J. Lopez, I. Jardin, G.M. Salido // Life sciences. - 2008. -V. 82. № 19-20. - P. 977-982.

133. Bouaziz, A. Cinnamtannin B-1 from bay wood reduces abnormal intracellular Ca2+ homeostasis and platelet hyperaggregability in type 2 diabetes mellitus

patients / A. Bouaziz, S. Salido, P.J. Linares-Palomino // Archives of biochemistry and biophysics. - 2007. -V. 457. № 2. - P. 235-242.

134. Haouari, M. El Platelet signalling abnormalities in patients with type 2 diabetes mellitus: a review / M. El Haouari, J.A. Rosado // Blood cells, molecules & diseases. - 2008. -V. 41. № 1. - P. 119-123.

135. Assinger, A. Hypochlorite-oxidized LDL induces intraplatelet ROS formation and surface exposure of CD40L--a prominent role of CD36 / A. Assinger, F. Koller, W. Schmid // Atherosclerosis. - 2010. -V. 213. № 1. - P. 129-134.

136. Shantsila, E. Circulating microparticles in cardiovascular disease: implications for atherogenesis and atherothrombosis / E. Shantsila, P.W. Kamphuisen, G.Y. Lip // Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. - 2010. -V. 8. № 11. - P. 2358-2368.

137. Гурвич, А.Г. Митогенетическое излучение / А.Г. Гурвич, Л.Д. Гурвич. -СССР: Наркомздрава, 1945.

138. Тарусов, Б.Н. Изучение сверхслабой спонтанной люминесценции животных клеток / Б.Н. Тарусов, А.И. Поливода, А.И. Журавлев // Биофизика. - 1961. -Т. 6 - P. 490.

139. Allen, R.C. Phagocytic activation of a luminol-dependent chemiluminescence in rabbit alveolar and peritoneal macrophages / R.C. Allen, L.D. Loose // Biochem Biophys Res Commun. - 1976. -V. 69. № 1. - P. 245-252.

140. Vladimirov, Y.A. Intrinsic chemiluminescence of living tissues. In: Free radicals in the environment, medicine and toxicology / Y.A Vladimirov, H Nohl, H Esterbauer, C Rice-Evans. London: Richelieu Press, 1994. 345-373.

141. Vladimirov, Y.A. Intrinsic (low-level) chemiluminescence. In: Free radicals A practical approach / Y.A. Vladimirov NAaK Punchard, F.J. Oxford, - New York, Tokyo: Oxford University Press, 1996: 65-82.

142. Владимиров, Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции / Ю.А. Владимиров // СОЖ. - 1999. -Т. 6. - С. 25-32.

143. Владимиров, Ю.А. Сверхслабое свечение субклеточных структур: Сверхслабые свечения в биологии / Ю.А. Владимиров, Веселовский В.А. -Москва: Московского университета, 1969. -С. 13-14.

144. Владимиров, Ю.А. Сверхслабое свечение митохондрий и его связь с ферментативным окислением липидов / Ю.А. Владимиров, О.Ф. Львова, З.П. Черемисина // Биохимия. - 1966. -Т. 31(3). - С. 507-514.

145. Владимиров, Ю.А. Кинетическая хемилюминесценция как метод изучения реакций свободных радикалов / Ю.А. Владимиров, Е.В. Проскурнина, Д.Ю. Измайлов // Биофизика. - 2011. - T.56. № 6. - C.1081-1090.

146. Матвеева, Н.С. Активированная хемилюминесценция как метод изучения свободнорадикальных реакций в клетках и тканях: Научный Симпозиум с международным участием Проблемы медицинской биофизики 14-15 сентября 2012г / Н.С. Матвеева, Е.В. Проскурнина, Ю.А. Владимиров -Москва: ООО "МАКС Пресс"; 2012: -С. 99-100.

147. Sasaki, T. Development of real-time bioradiographic system for functional and metabolic imaging in living brain tissue / T. Sasaki, A. Iwamoto, H. Tsuboi // Brain Res. - 2006. -V. 1077. № 1. - P. 161-169.

148. Полимова, А.М. Активированная хемилюминесценция как метод оценки радикалобразующей способности ткани мозга / А.М. Полимова, Г.Р. Хакимова, Г.К. Владимиров // Технологии Живых Систем. - 2012. -Т.9. №10. - С. 3-12.

149. Babior, B.M. Oxygen-dependent microbial killing by phagocytes (first of two parts) / B.M. Babior // The New England journal of medicine. - 1978. -V. 298. № 12. - P. 659-668.

150. Iyer, G.Y. NADPH and NADH oxidation by guinea pig polymorphonuclear leucocytes / G.Y. Iyer, J.H. Questel // Canadian journal of biochemistry and physiology. - 1963. -V. 41. - P. 427-434.

151. Sbarra, A.J. The biochemical basis of phagocytosis. I. Metabolic changes during the ingestion of particles by polymorphonuclear leukocytes / A.J. Sbarra, M.L. Karnovsky // J Biol Chem. - 1959. -V. 234. № 6. - P. 1355-1362.

152. Nakamura, M. Simultaneous demonstration of phagocytosis-connected oxygen consumption and corresponding NAD(P)H oxidase activity: direct evidence for NADPH as the predominant electron donor to oxygen in phagocytizing human neutrophils / M. Nakamura, C.R. Baxter, B.S. Masters // Biochem Biophys Res Commun. - 1981. -V. 98. № 3. - P. 743-751.

153. Patriarca, P. Enzymatic basis of metabolic stimulation in leucocytes during phagocytosis: the role of activated NADPH oxidase / P. Patriarca, R. Cramer, S. Moncalvo // Archives of biochemistry and biophysics. - 1971. -V. 145. № 1. - P. 255-262.

154. Sheppard, F.R. Structural organization of the neutrophil NADPH oxidase: phosphorylation and translocation during priming and activation / F.R. Sheppard, M.R. Kelher, E.E. Moore // Journal of leukocyte biology. - 2005. -V. 78. № 5. - P. 1025-1042.

155. Babior, B.M. NADPH oxidase: an update / B.M. Babior // Blood. - 1999. -V. 93. № 5. - P. 1464-1476.

156. Robertson, A.K. The use of diphenylene iodonium, an inhibitor of NADPH oxidase, to investigate the antimicrobial action of human monocyte derived macrophages / A.K. Robertson, A.R. Cross, O.T. Jones // Journal of immunological methods. - 1990. -V. 133. № 2. - P. 175-179.

157. Koshkin, V. Superoxide production by cytochrome b559. Mechanism of cytosol-independent activation / V. Koshkin, E. Pick // FEBS letters. - 1994. -V. 338. № 3. - P. 285-289.

158. Babior, B.M. The respiratory burst oxidase / B.M. Babior // Advances in enzymology and related areas of molecular biology. - 1992. -V. 65. - P. 49-95.

159. Kobayashi, T. Evaluation of the process for superoxide production by NADPH oxidase in human neutrophils: evidence for cytoplasmic origin of superoxide / T. Kobayashi, S. Tsunawaki, H. Seguchi // Redox report : communications in free radical research. - 2001. -V. 6. № 1. - P. 27-36.

160. Storrie, B. Isolation of subcellular organelles / B. Storrie, E.A. Madden // Methods Enzymol. - 1990. -V. 182. - P. 203-225.

161. Ibusuki, D. Preparation of pure lipid hydroperoxides / D. Ibusuki, K. Nakagawa, A. Asai // Journal of lipid research. - 2008. -V. 49. № 12. - P. 2668-2677.

162. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция / Ю.А. Владимиров, Е.В. Проскурнина // Успехи Биологической Химии. -2009. -Т. 49. - С. 341-388.

163. Gentilli, S. Idiopathic ileo-colonic varices in a young patient / S. Gentilli, M. Aronici, L. Portigliotti // Updates in surgery. - 2012. -V. 64. № 3. - P. 235-238.

164. Tsai, W.C. The mechanical properties of the heel pad in unilateral plantar heel pain syndrome / W.C. Tsai, C.L. Wang, T.C. Hsu // Foot & ankle international. - 1999. -V. 20. № 10. - P. 663-668.

165. Elmali, N. Effects of resveratrol in inflammatory arthritis / N. Elmali, O. Baysal, A. Harma // Inflammation. - 2007. -V. 30. № 1-2. - P. 1-6.

166. Szewczuk, L.M. Mechanism-based inactivation of COX-1 by red wine m-hydroquinones: a structure-activity relationship study / L.M. Szewczuk, T.M. Penning // Journal of natural products. - 2004. -V. 67. № 11. - P. 1777-1782.

167. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. - Москва: Наука, 1972.

168. Kagan, V.E. Cytochrome c/cardiolipin relations in mitochondria: a kiss of death / V.E. Kagan, H.A. Bayir, N.A. Belikova // Free Radic Biol Med. - 2009. - V. 46. № 11. - P.1439-1453.

169. . Kagan, V.E Cytochrome c acts as a cardiolipin oxygenase required for release of proapoptotic factors / V.E. Kagan, V.A. Tyurin, J. Jiang // Nature Chem Biol. -2005. - V. 1. - P. 223-232.

170. Tyurina, Y.Y. A mitochondrial pathway for biosynthesis of lipid mediators / Y.Y. Tyurina, S.M. Poloyac, V.A. Tyurin // Nat Chem. - 2014. -V. 6. № 6. - P. 542-552.

171. Суслова, Т.Б. Хемилюминесценция, сопряженная с образованием липидных перекисей в биологических мембранах. I. Свечение митохондрий при добавлении Fe(2+). / Т.Б. Суслова, В.И. Оленев, Ю.А. Владимиров // Биофизика. - 1969. -Т. 14. -С. 510-516.

172. Васильева, О.В. Действие антиоксидантов на кинетику цепного окисления липидов в липосомах / О.В. Васильева, О.Б. Любицкий, Г.И. Клебанов // Биолмембраны. - 1998. -Т. 15. № 2. - С. 177-183.

173. Шерстнев, М.П. Активированная нильским синим железоинициированная хемилюминесценция желточных липопротеидов / М.П. Шерстнев, Т.К. Азимбаев, Ю.А. Владимиров // Биофизика. - 1995. -Т. 40. № 3. - С. 531-535.

174. Измайлов, Д.Ю. Математическое моделирование кинетики цепного окислекния липидов и хемилюминесценции в присутствии Fe2+. Основная модель. / Д.Ю. Измайлов, Ю.А. Владимиров // Биологические мембраны. -2002. -Т. 19. № 6. - С. 507-515.

175. Погосян, Г.А. Кинетика перекисного окисления липидовб индуцироваггого ионами Fe2+ в суспензии митохондриальных и ядерных мембран / Г.А. Погосян, Е.С. Дремина, В.С. Шаров // Биофизика. - 1996. -Т. 41. № 2. - С. 342-347.

176. Sharov, V.S. Activation of Fe2+-induced chemiluminescence in human blood low density lipoproteins by the fluorescent dye C-525 / V.S. Sharov, E.S. Dremina, A. Vladimirov Iu // Biofizika. - 1995. -V. 40. № 2. - P. 428-433.

177. Yamamoto, Y. Assay of phospholipid hydroperoxides by chemiluminescence-based high-performance liquid chromatography / Y. Yamamoto, Y. Kambayashi, T. Ueda // Methods Mol Biol. - 1998. -V. 108. № - P. 63-70.

178. Berliner, J.A. The role of oxidized lipoproteins in atherogenesis / J.A. Berliner, J.W. Heinecke // Free Radic Biol Med. - 1996. -V. 20. № 5. - P. 707-727.