Исследование ранних стадий слияния биологических и искусственных мембран, индуцированного белком вируса гриппа гемагглютинином тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Самсонов, Андрей Владимирович

• Самсонов, Андрей Владимирович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Самсонов, Андрей Владимирович

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

I. Введение

П.Слияние биологических мембран

III. Экспериментальные модельные системы для изучения механизмов слияния мембран

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

I. Клеточные линии

II. Подготовка клеток к эксперименту

III. Выделение, очистка и окраска вируса гриппа А штамма Japan/305/57

IV. БЛМ

V. Флуоресцентная видеомикроскопия

VI. Метод ёмкостного контроля за стадиями слияния БЛМ

VII. Измерение электрической проводимости поры слияния

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Исследование перераспределения гидрофобных зондов на ранних стадиях слияния 2-х плоских БЛМ

II. Слияние ГА-экспрессирующих клеток с эритроцитами и БЛМ

III. Влияние липидного состава мембраны-мишени на картину слияния НАЬ2 клеток с БЛМ

IV. Предпробойные флуктуации проводимости БЛМ, индуцированные электрическим полем, качественно схожи с проводимостью поры слияния

V. Заключение

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование ранних стадий слияния биологических и искусственных мембран, индуцированного белком вируса гриппа гемагглютинином»

Введение

Проблема слияния биологических мембран всегда привлекала к себе внимание, что обусловлено универсальностью явления: слияние лежит в основе целого ряда физиологических процессов, таких как экзоцитоз, секреция, образование вторичных лизосом, проникновение в клетку оболочечных вирусов. Известно, что все живые организмы (исключая вирусы) состоят из клеток, содержимое которых отделено от окружающей среды мембраной. Основой любой биологической мембраны является липидный бислой - бимолекулярная пленка, состоящая из двух монослоев амфифильных молекул, гидрофобные "хвосты" которых находятся внутри бислоя, а полярные гидрофильные части контактируют с окружающим раствором. Экспозиция гидрофобной области бислоя в полярную среду энергетически невыгодна, следствием чего является замкнутость бислой-ной поверхности, отсутствие краев. Гидрофобная область бислоя является препятствием для проникновения через мембрану гидрофильных молекул, что и лежит в основе главной физиологической функции биомембран -барьерной [1, 2]. Цитоплазматическая мембрана отделяет внутренний объем клетки от внешней среды, а внутренние мембраны разделяют его на множество компартментов, что позволяет создавать наиболее выгодные условия для биохимических реакций (оптимальный рН, необходимый набор ферментов и реагирующих веществ). Однако непременным условием жизнедеятельности любого организма является как внутриклеточный обмен веществом и энергией, так и обмен с внешней средой. Частично эту функцию в клетке выполняют мембранные белки, осуществляющие селективный транспорт через мембрану небольших гидрофильных молекул (неорганических ионов, Сахаров, аминокислот и т.д. ), но для транспорта крупных молекул и для их массовой доставки (секреция, экзоцитоз) в клетке работает иной механизм: целенаправленная транспортировка веществ в замкнутых мембранных везикулах и слияние их с внутренними компартментами клетки или с цитоплазматической мембраной [3, 4]. В основе этого процесса лежит способность биологических мембран сли-

ваться друг с другом. Этот процесс в клетке контролируется специальными белками, задача которых осуществить прочную адсорбцию везикулы в сайте слияния и объединить ее внутренний объем с объемом компартмен-та-мишени [5, 6, 7, 8].

На модельной системе 2-х бислойных липидных мембран (БЛМ) удалось показать, что процесс слияния двух искусственных мембран проходит через следующие последовательные стадии: 1) плоскопараллельный контакт, когда контактирующие мембраны (КМ) находятся на равновесном расстоянии друг от друга, 2) монослойное слияние (МС) - образование одного общего бислоя в области контакта двух мембран и формирование триламинарной структуры (ТС), 3) полное слияние (ПС) - объединение водных объемов и мембран.

В случае слияния биологических мембран, индуцированного специальными белками слияния (БС), не удалось прямыми экспериментальными методами зафиксировать возникновение ТС, предшествующее ПС. Примером является инфицирование клетки оболочечным вирионом, когда проникновение вирусного генома в клетку происходит в результате ПС мембран клетки и вируса и опосредовано вирусными БС, встроенными в липидную оболочку вируса. До сих пор не известно, какую роль при этом играют БС. Возможно, они лишь сближают липидные матриксы, и дальше процесс идет спонтанно, или же являются важными компонентами поры слияния и влияют на ее эволюцию? Так как весь цикл развития вируса происходит внутри клетки, лечение вирусных заболеваний лекарственными препаратами малоэффективно. Очевидно, что для предотвращения заражения вирусом наиболее действенной мерой было бы не дать вирусу слиться с клеткой. Для успешного решения этой задачи необходимо выяснить все стадии этого процесса. Знание механизмов слияния поможет также решить задачу прямой доставки внутрь клетки лекарств и генов в липосомах и ретровирусных векторах [9, 10, 11, 12, 13]. Вирусные БС индуцируют ПС мембран, однако детальный механизм этого явления остается неясным. Известно, что искусственные бислои, например БЛМ, могут сливаться спонтанно, если добиться достаточно плотного их кон-

такта (увеличив ионную силу раствора или добавив ионы Са2+ или ]У^2+ между КМ в случае заряженных мембран) [14]. Исходя из этого логично было бы предположить, что роль БС состоит лишь в сближении липидных матриксов КМ, далее же процесс протекает спонтанно. Однако из экспериментов по слиянию двух БЛМ известно, что ТС, возникающая между КМ, стабильна и ПС можно достигнуть лишь специально разрушив ее (например электрическим пробоем или механически) [15]. Таким образом можно предположить, что БС принимают активное участие в образовании поры слияния. Они, по-видимому, являются компонентами поры слияния, а липиды принимают в этом процессе пассивное участие, например, встраиваясь в стенки поры по мере ее расширения. В различных модельных системах была продемонстрирована чувствительность процесса слияния к изменению липидного состава мембран [16, 17, 18]. Присутствие в мембранах липидов, имеющих форму конуса, обращенного острием внутрь бислоя (например лизоформы липидов), ингибировало слияние, липиды же конической формы с малой площадью на полярную головку (острие конуса снаружи бислоя) промотировали слияние. Для слияния БЛМ была предложена теория сталков (локальных перемычек между контактными монослоями), объясняющая механизмы структурных перестроек липидных бислоев в процессе слияния [19, 20].

Доказательством применимости теории "сталков" к слиянию биологических мембран было бы обнаружение аналогичной последовательности стадий слияния и чувствительности их к липидному составу. Слияние, индуцированное белком вируса гриппа гемагглютинином (ГА) является наиболее изученным белок-индуцированным процессом и часто рассматривается в литературе как модель слияния клеточных мембран. Основной целью данной работы было исследование влияния липидного состава мембраны-мишени на различные стадии слияния, опосредованного БС и проверка применимости к этому процессу теории сталков. Была принята основная рабочая гипотеза, объясняющая как БС индуцируют структурные перестройки липидного матрикса: 1) БС в результате кон-формационных перестроек внедряют в мембрану-мишень гидрофобные

участки (пептиды слияния) и стягивают мембраны, 2) взаимодействие пептидов слияния с мембраной-мишенью индуцирует в ней образование локальных липидных структур типа сталков, 3) липиды конической формы с малой площадью сечения полярной головки увеличивают вероятность образования сталков, 4) в результате расширения сталков возникает локальная ТС, 5) пора слияния образуется в локальной ТС.

Литературный обзор

I. Введение

За последние годы опубликовано множество научных работ, посвященных проблеме слияния биологических и искусственных мембран. Интерес к этому явлению не случаен, объясняется он прежде всего универсальностью этого процесса в природе. Слияние биологических мембран регулируется специальными белками, но на модельных системах, например липосомах и БЛМ, показано, что сливаются и чисто липидные мембраны [21, 22, 23, 24]. Было исследовано большое количество веществ небелковой природы, которые индуцируют слияние как биологических, так и искусственных мембран. Не вызывает сомнений тот факт, что в основе этого процесса лежат фундаментальные свойства именно липидной компоненты биологической мембраны. Одна из гипотез, принятых для объяснения роли белков при слиянии биологических мембран предполагает, что БС являются лишь катализаторами процесса, сближают липидные компоненты мембран и далее процесс протекает спонтанно [25, 26]. Молекулярные перестройки липидного бислоя приводящие к слиянию контактирующих мембран были исследованы на различных модельных системах. В этом обзоре мы рассмотрим работы, в которых исследовалось слияние мембран, индуцированное различными БС, а также исследования слияния чисто липидных искусственных мембран. Проведен так же сравнительный анализ данных по чувствительности этого процесса к липидному составу мембран, подтверждающий схожесть молекулярных перестроек при слиянии

искусственных и биологических мембран. Один из разделов посвящен теории сталков, объясняющей молекулярные механизмы этого процесса. В основу этой теории легло представление об эффективной форме липидных молекул и спонтанной кривизне бислоя как сумме спонтанных кривизн молекул, его составляющих.

II. Слияние биологических мембран

11.1. Слияние внутриклеточных транспортных везикул

Внутренний объем любой эукариотической клетки разделен мембранами на многочисленные замкнутые компартменты: клеточное ядро, митохондрии, лизосомы, аппарат Гольджи и т.д. Эти мембранные структуры имеют свое собственное содержимое, отличное по составу, свойствам и функциям от гиалоплазмы. Мембраны, окружающие эти отсеки, выполняют барьерную функцию, позволяя создать в этих компартментах оптимальные условия для определенных биохимических реакций (набор ферментов, рН, концентрация реагентов). Известно, что синтез и посттрансляционная модификация (гликозилирование, ацилирование) таких сложных биологических молекул как белки происходит поэтапно, в разных компартментах клетки. Так синтез и начальное гликозилирование идет в гранулярном эндоплазматическом ретикулуме, а дальнейший рост полисахар идных цепей происходит в цистернах аппарата Гольджи [27]. Каким же образом продукты реакции попадают из одного отсека в другой? Исследования показали, что перемещение их происходит путем отщепления липидной транспортной везикулы от одного компартмента и слияния ее с компартментом-мишенью [28, 29]. Транспортировка везикул осуществляется с помощью трабекулярной сети гиалоплазмы [3, 30]. В клетке эти события происходят непрерывно и в большом количестве, слияние при этом строго специфично: все везикулы попадают строго по адресу, сливаются именно с нужным отсеком. Эта эффективность и безошибочность достигается благодаря своеобразной "машине слияния", действующей в клетке. Эта машина состоит из кооперативно работающих специальных белков.

Рис. 1.Гипотетическая схема сборки "машины слияния" при слиянии внутриклеточных

транспортных везикул.

Модель предполагает активацию SNARE-белков цитозоль-ными факторами SNAP и NSF (процесс АТФ-Зависим) (1) . Активность комплекса сохраняется путем связывания LMA1-белка (2) . Образование слиятельно-активного комплекса t-SNARE/v-SNARE происходит после связывания с ним белка Ypt7p (3) [32] .

Часть из них интегральные и ассоциированы с мембраной транспортной везикулы (v-SNARE) и мембраной-мишенью (t-SNARE), другие водорастворимые (NSF, LMA1, Ypt7p) [31-34]. Процесс энергозависим, в сборке комплекса участвуют белки связывающие и гидролизующие АТФ (SNAP). Анализ аминокислотной последовательности и структуры белков, участвующих во внутриклеточном слиянии, и сравнение их между различными организмами показало их консервативность, что позволило выдвинуть предположение об универсальности "машины слияния" во всех эукариоти-ческих клетках (гипотеза "SNARE"). На Рис. 1 приводится гипотетическая схема сборки комплекса и инициации им слияния мембран.

Наиболее изучен в настоящее время только один из типов внутриклеточного слияния - это экзоцитоз, слияние секреторных гранул с внешней цитоплазматической мембраной клетки. С использованием современ-

ных биофизических методов, таких как метод измерения клеточного адмиттанса (метод Неера-Марти), было показано, что при экзоцитозе происходит именно полное слияние гранулы, при этом идет обмен как между водным содержимым гранулы, так и липидный обмен между мембраной везикулы и цитоплазматической мембраной. Слияние гранулы фиксировалось как увеличение площади клеточной мембраны. Так в работе [35] использовались тучные клетки, имеющие одни из самых больших секреторных гранул, размер которых достигал 0.8 мкм [36], а гранул тучных клеток beige mouse - 5 мкм [37]. Первым событием после индукции экзоцитоза (триггером является Са2+ или негидролизуемый аналог ГТФ-yS), было образование водной поры, соединяющей отсек гранулы и внешнюю среду, проводимость которой оценочно достигала 200 пС [38], причем наблюдались флуктуации проводимости вплоть до полного закрытия поры, так называемый "фликкер" [25]. Далее происходило быстрое расширение поры и выброс содержимого гранулы (катехоламинов, гепарина и т.п.) наружу. Для прямого измерения выхода секретируемого вещества используется амперометрический метод, основанный на измерении тока, вызываемого окислением или восстановлением секреторного гормона на поверхности угольного электрода [39]. С помощью этого метода было показано, что выход серотонина из гранул beige mouse происходит уже на этапе фликкера проводимости поры [40]. Таким образом, поры, которые могут полностью закрыться, являются все же достаточно большими, чтобы обеспечить выход гормона. Процесс был полностью обратимым, после выброса секрета гранула отщеплялась внутрь клетки, причем зачастую наблюдалось уменьшение площади клетки после одиночного цикла экзоци-тоз/эндоцитоз, что было интерпретировано как захват части клеточной мембраны отщепившейся везикулой [41]. Электронная микроскопия по методу замораживания - травления позволила увидеть начальные этапы этого процесса при экзоцитозе трихоцист в клетках Paramecium [42]. На ранних этапах, сразу после приложения триггера в сайтах слияния были

обнаружены локальные конические изгибы мембран навстречу друг другу, причем локальный контакт происходит в центре "розетки слияния" -радиально-симметричного комплекса внутримембранных частиц (ВМЧ) (см. рис. 2 [43] ).

Рис. 2 . Розетка слияния (110) , образованная из ВМЧ, в цитоплазматической мембране Рагащесл.шп перед экзоцито-зом. Пора слияния (Р) соединяет внутренний объем экэоци-тозной гранулы (трихоциста) с внешней средой [43].

Следующим этапом было открытие малой экзоцитозной поры диаметром 200-300 А в центре "розетки слияния" (стадия ПС), причем стенки этой поры по данным электронной микроскопии липидные [44, 45].

Таким образом, в этом случае не было выявлено образования локальной липидной диафрагмы (ТС), соединяющей КМ. Несмотря на то, что слияние катализируют именно белки, многочисленными эксперимен-

тами была доказана чувствительность этого процесса к изменению липид-ного состава как мембраны гранулы, так и мембраны-мишени. Так инкубация яйцеклеток морского ежа в среде, содержащей липид лизофосфати-дилхолин (ЛФХ) ингибировала слияние кортикальных гранул с цитоплаз-матичсской мембраной клетки, если экзогенный ЛФХ добавлялся до триггера слияния [46]. Ингибирование было обратимо, т.е. после отмывки ЛФХ слияние происходило, причем без добавления триггера. Аналогичное действие ЛФХ оказывал и на слияние транспортных везикул аппарата Гольджи [47]. Объяснение этого факта прямым действием ЛФХ на БС не проходит, так как добавление экзогенных липидов другого вида, содержащих цис-поли ненасыщенные жирные кислоты (например арахи до новую), напротив, промотируег процесс [48]. Таким образом, оказалось возможным предположить, что липидная компонента биологических мембран является активным, хотя и не единственным участником процесса слияния. 11.2. Слияние оболочечных вирусов с клеточной мембраной.

Слияние мембран, как было сказано выше, является непременным звеном многих процессов жизнедеятельности клеток. Однако оно происходит и при патологических процессах, в частности, оно лежит в основе процесса проникновения в клетку таких внутриклеточных паразитов как вирусы. Сейчас известно, что целый класс вирусов животных и человека -обол очечные вирусы, внедряют свой нукдеокапсид в цитоплазму клетки-хозяина посредством слияния своей мембраны с мембраной клетки {см. рис. 3),

Интерес к проблеме проникновения вирусного генома этого типа вирусов в клетку возник давно, и он не случаен. Наиболее опасные болезни вызываются вирусами, принадлежащими именно к этому типу: вирус иммунодефицита человека {ВИЧ), вирус гриппа, вирус Эбола и т.д. Строение вирусной частицы изучено довольно подробно с помощью электронной микроскопии и биохимических методов. Нуклеокапсид вируса заключен в бислойпую липидную мембрану, несущую вирусные белки (на электронных микрофотографиях видны как "шипы", торчащие из оболоч-

ки вируса, см. рис. 5), катализирующие слияние мембраны вируса и мембраны клетки-мишени [49, 50].

Рис - 3. Слияние вируса Сендай с цитоплазматической мембраной эритроцита человека (П-пора слияния, соединяющая внутренние объемы вириона и эритроцита) [55].

Строение вириона, таким образом, напоминает строение транс-потрных везикул клетки, В оболочке вируса, в зависимости от его типа, обычно имеется несколько видов белков, каждый из них представлен в нескольких сотнях копий и выполняет определенную функцию. Наиболее изучен в настоящее время белок слияния вируса гриппа гемагглютинин (ГА). Он был кристаллизован, и по данным рентгеноструктурного анализа сейчас получена его третичная структура, причем как в нейтральной, так и в слиятельно-активной конформации [51, 52] (см. рис.4). Триггером изменения конформации для ГА является изменение рН среды, что видимо обусловлено местом слияния вируса гриппа (мембрана поздней эндосомы в которой низкий рН) [55]. Белок при изменении рН претерпевает столь значительные перестройки, что меняются его антигенные свойства [53] и некоторые его участки становятся доступными для действия протеиназ

[54]. Для других вирусов (ВИЧ, вирус Сендай) таким триггером является связывание БС с его рецептором на внешней мембране клетки.

т200 А

Рис.4. Структура белка слияния вируса гриппа гемагглютанина (показан мономер, состоящий из двух субъединиц: рецептор-связывающей ГА1 и ГА2 - несущей пептид слияния и катализирующей слияние). Показано изменение в третичной структуре ГА2 субпьединицы при снижении рН среды с 7 до 5 - участок В становится а-спиралью, в результате чего пептид слияния (23 аминокислотных остатка Ы-конца ГА2 субъединицы) перемещается из околомембранной части эктодомена ГА на расстояние порядка 100 А по направлению к мембране-мишени.

Несмотря па различное строение БС у разных классов оболочечных вирусов, их ел иятедь но - активная кш формация имеет одно универсальное свойство: белок экспонирует ранее замаскированный гидрофобный участок, так называемый пептид слияния [56]. Далее пептид слияния связывается с мембраной-мишеныо и, возможно, с вирусной мембраной

путем гидрофобных взаимодействий, так как ему энергетически невыгоден контакт с полярной средой. На этом этапе БС заякорен в обе мембраны гидрофобными участками [57].

Рис. 5. Электронная микрофотография отпочковывающихся (А) и свободных (Б) вирионов гриппа, стрелкой показаны белковые "шипы" оболочки вируса [49, 50].

Длина шипов вирусов обычно порядка 10-15 нм, равновесное расстояние между КМ при физиологических условиях, согласно данным электронной микроскопии, того же порядка [58, 59]. Согласно теории, это расстояние определяется соотношением ван-дер-ваальсовых сил притяжения и сил электростатического отталкивания заряженных мембран [60, 61]. Эксперименты по слиянию искусственных БЛМ показали, что слияние КМ происходит спонтанно, если расстояние между ними меньше 1,5 нм. Для БЛМ такой плотный контакт можно получить увеличив ионную силу электролита или добавив в отсек с контактирующими мембранами ионы Са2+) [14, 15]. Эти факты позволили выдвинуть гипотезу сближения,

согласно которой БС индуцируют слияние, создавая локальный плотный контакт липидных матриксов, после чего процесс идет спонтанно. Энергия, необходимая для этого процесса запасена, в БС и освобождается при изменении его конформации. Согласно этой гипотезе, БС во время изменения конформации наклоняется к плоскости мембраны [62] (см.рис.6).

Рис . 6. Модель взаимодействия БС с мембраной-мишенью. 1) тример ГА, его мономеры состоят из двух субгьединиц, связанных дисульфидной связью: ГА1 - рецептор-связывающий домен (сфера); ГА2 - стержневой домен, состоящий из трансмембранного домена (ТД) , цитоплазматиче-ского домена (ЦД) и пептида слияния (ФП). 2) слиятельно-активная конформация тримера ГА - пептиды слияния вынесены к мембране-мишени, мономеры ГА частично диссоциируют (ослабляется взаимодействие ГА1 субъединиц с ГА2. 3) гипотетическая сборка "розетки слияния" из нескольких тримеров ГА, наклон белков. Справа, липидная пора слияния .

Прямые эксперименты по измерению угла наклона БС (гемагглютинин вируса гриппа) во время изменения конформации методом поляризованной инфракрасной спектроскопии были проведены в работе [63]. Было показано, что снижение рН до 5 индуцирует наклон БС на 20-40° от нормали, причем эти изменения обратимы в отсутствии мембраны-мишени после возврата рН к норме (7,4). Если же изменение конформации происходило в присутствии мембраны-мишени (липосомы), оно было необрати-

мо. Одним словом, эта гипотеза отводит липидным мембранам главную роль, БС же, являясь "катализаторами", участвуют в слиянии косвенно. Если гипотеза верна, все промежуточные структуры при слиянии должны быть липидными, и кинетика процесса чувствительна к липидному составу. Действительно, существуют многочисленные экспериментальные данные о влиянии липидов на процесс слияния. Так, роль липидной мембраны вируса до недавнего времени казалась второстепенной, так как она заимствуется вирусом у клетки-хозяина в результате "почкования" -кооперативного процесса, приводящего к объединению матриксного белка, трансмембранных белков и нуклеокапсида. Однако последние исследования показали, что липидный состав вирусных оболочек значительно отличается от липидного состава мембраны клетки-хозяина, от которой отщепилась вирусная частица. Это было показано для разных типов вирусов: вируса леса Семлики [64], вируса Синдбис [65], вируса везикулярного стоматита [66]. Так, например, в работе [67] был проанализирован липидный состав мембраны вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и цитоплазматической мембраны клеток, в которых созревал вирус. Было показано снижение уровня ФХ и ФИ на 50 % и 80 % соответственно, увеличение содержания холестерина (Хл) в 2,5 раза, фосфатидилсерина (ФС) на 50-140 % и фосфатидной кислоты (ФК) на 100 % относительно уровня клеточной мембраны. Оказалось, что высокий процент Хл в мембране вириона критичен для инфекционности вируса. Например, экстракция около 50 % Хл из мембран ВВС снижает его ифекционность более чем на 85 % [68, 69], для ВИЧ снижение уровня Хл в оболочке на 5060 % редуцирует его инфекционность на 50 % [70]. Роль Хл в процессе слияния, индуцируемого белками, не совсем ясна. По данным ЭПР-спектроскопии наличие Хл повышает параметр упорядоченности мембраны вириона [71,72]. Процесс слияния вируса с мембраной-мишенью можно так же заингибировать добавлением в среду экзогенных липидов типа ЛФХ [16], либо ускорить добавлением липидов, содержащих ненасыщенные жирные кислоты (олеиновая кислота, арахидоновая кислота) [73].

Однако липидная гипотеза не объясняет ряд экспериментальных фактов. Как уже говорилось выше, она преполагает, что все промежуточные структуры до открытия поры слияния, да и сама пора, чисто липидные структуры. То есть даже на самых ранних этапах между сливающимися мембранами появляется липидная непрерывность и возможен обмен липидными молекулами путем диффузии. В экспериментах по слиянию эритроцитов с ГА-экспрессирующими клетками, где синхронно фиксировали проводимость поры слияния и диффузию флуоресцентной липидной метки между сливающимися мембранами было показано, что пора на ранних стадиях не пропускает липидные молекулы [74]. Проводимость начальной поры изменяется ступенчато, обычно между двумя значениями, соответствующими полностью открытому и полностью закрытому состояниям, от 0 до 300 пСм, и напоминает скорее работу одиночного канала щелевых контактов [75]. Липидный обмен через пору начинается во время стадии необратимого расширения поры слияния [74, 76] после увеличения ее проводимости до 500 пСм и более. Для объяснения этих фактов в работах [77, 78, 79] была выдвинута гипотеза ранней белковой поры слияния. За основу модели строения этой поры авторы взяли модель белкового канала щелевых контактов, так как эти каналы соединяют цитоплазматические объемы двух соседних клеток. Они состоят из шести субъединиц коннектина, образующих цилиндрический агрегат - коннексон, в центре которого располагается канал. Одному коннексону на плазматической мембране клетки точно противостоит коннексон на плазматической мембране соседней клетки, так что каналы двух коннексонов образуют единое целое (рис. 7). Коннексоны играют роль прямых межклеточных каналов, по которым ионы и низкомолекулярные вещества могут диффундировать из клетки в клетку [80, 81]. При этом не было обнаружено диффузии липидов через зону щелевых контактов.

Рис.7. Щелевые контакты. Две мембраны (1) , принадлежащие соседним контак-тирующм клеткам, содержат гексагональные образования из шести субъединиц (2) , причем каждая субъединица связана с соответствующей субъединицей противоположной мембраны. В центре структуры проходит канал, обеспечивающий связь между контактирующими клетками

[81] .

Модель ранней поры слияния предполагает также образование комплекса слияния ("розетки слияния") из нескольких отдельных белков (рис. 8). Действительно, существует ряд экспериментальных работ, в которых проводилась оценка количества субъединиц в "розетке слияния". Оценка проводилась по зависимости кинетики процесса от поверхностной плотности БС и показала, что в образовании комплекса слияния могут участвовать от 3 до 6 тримеров ГА [82, 83]. Таким образом, согласно этой модели на начальном этапе своей эволюции пора слияния является чисто белковой структурой, далее же в результате ее радиального расширения липидные молекулы встраиваются в стенки поры, она становится липидной и через нее начинается липидный обмен (рис.8).

А

Б

1

... ... М.мвр,

¡ана-

¿^Х^ ■ мишень А Пептид слияния

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Самсонов, Андрей Владимирович, 1999 год

Список литературы

1. Griffith, О.Н., Dehlinger, P.J., Van, S.P. J. Membr. Biol. 15,159-192, (1974).

2. Subczynski, W.K., Wisniewska, A., Yin, J-J., Hyde, J.S., Kusumi, A. Biochem. 33,7670-7681,(1994).

3. Rothman, J.E. Nature 372, 55-63, (1994).

4. Sollner, Т., Bennet, M.K., Whiteheart, S., Seheller, R.H., & Rothman, J.E. Cell 75, 409-418,(1993).

5. Sollner, Т., Nature 362, 318-324, (1993).

6. Hardwick, K., Pelhman, H.R.B., J. Cell Biol. 119, 513-521, (1992).

7. Wichmann, H., Hegst, L., Gallwitz, D., Cell 71, 1131-1142,(1992).

8. Aalto, M.K., Ronne, H., Keranen, S., EMBO J. 12, 4095-4104, (1993).

9. Verma, I.M., Scient. Amer. 263(5), 26-34, (1990).

10. Friedmann, Т., Sceince 244(4910), 1275-1281, (1989).

11. Verma, I.M., Luis, D.S., P.N.A.S. 85, 3150-3153, (1988).

12. Торчилин В.П., Смирнов В.Н., Чазов Е.И., Вопр. мед. химии т.1, с. 3-14,(1982).

13. Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками. М.: Наука (1986).

14. Либерман Е.А., Ненашев В.А. Биофизика, 13, 193-196 (1968)

15. Меликян Г.Б., Взаимодействие и слияние бислойных липидных мембран. Дисс. на соискание уч. ст. канд. биол. наук, (1983).

16. Yeagle, P.L., Smith, F.T., Young, J.E., Flanagan, T.D., Biochem. 33, 1820-1827,(1994).

17. Chemomordik, L.V., Frolov, V.A., Leikina, E., Bronk, P., Zimmerberg, J., J. of Cell Biol. 140(6), 1369-1382,(1998).

18. Chemomordik, L.V., Vogel, S.S., Sokoloff, A., Onaran, H.O., Leikina, E., Zimmerberg, J., FEBS Lett. 318, 71-76, (1993).

19. Markin V.S., Kozlov M.M., Borovjagin V.L., Gen. Physiol. Biophys, 5, 361377, (1984)

20. Лейкин С.Л., Козлов M.M., Черномордик Л.В., Маркин B.C., Чизмаджев Ю.А., Биол. Мембраны, 3, 1159-1171, (1986).

21. Berestovsky, G.N., Gyulkhandanyan, M.Z., Studia Biophys., Berlin, band 56, 19-20,(1976).

22. Ellens, H., Bentz, J., Szoka, F.C., Biochem. 24(13), 3100-3106, (1985).

23. Parente, R.A., Lentz, B.R., Biochem. 25, 6678-6688, (1986).

24. Lentz, B.R., Chem. and Phys. of Lipids 73, 91-106, (1994).

25. Lindau, M. & Aimers, W. Curr. Opin.. Cell Biol. 7, 509-517 (1995).

26. Lollike, K., Borregaard, N., Lindau, M., J. of Cell Biol. 129, 99-104, (1995).

27. Ченцов Ю.С., Общая цитология , изд. МГУ, (1984).

28. Palade, G.E., Science 189, 347-358, (1975).

29. Jamieson, J.D., Palade, G.E., J. Cell Biol. 34, 598-615, (1967).

30. Sudhof, T.C., Nature 375,645-653, (1995).

31. Haas, A., Wickner, W., EMBO J. 15, 3296-3305, (1996).

32. Nichols, B.J., Undermann, C., Pelham, H.R.B., Wickner, W.T., Haas, A., Nature, 387, 199-202, (1997).

33. Steel, G.J., Tagaya, M„ Woodman, P.G., EMBO J. 15, 745-752, (1996).

34. Dascher, C„ Matteson, J., Balch, W.E., J. Biol. Chem. 269, 29363-29366, (1994).

35. Alvarez de Toledo G., Fernandez-Chanson R., Fernandez J.M., Nature, 363, 554558, (1993).

36. Fernandez J.M., Neher E., Comperts B.T., Nature, 312, 453-455, (1984).

37. Zimmerberg J., Curran M., Cohen F.S., Brodwick M., PNAS USA, 84, 1585-1589,(1987).

38. Spruce A.E., Breckenridge L.J., Lee A.K., Aimers W. Neuron, 4, 643-654, (1990).

39. Whightmann R.M., Jankowski J.A., Kennedy R.T., Kawagoe K.T., Schroeder T.J., Leszczyszyn D.J., Near J.A., Diliberto E.J., Viveros O.H., PNAS USA, 88, 10754-10758,(1991).

40. Alvarez de Toledo G., Fernandez-Chanson R., Fernandez J.M., Nature, 363, 554-558, (1993).

41. Monck J.R., Alvarez de Toledo G., Fernandez J.M., PNAS USA, 87, 7804-7808, (1990).

42. Plattner, H., Matt, H., Kersken, H., Haacke, B., Stiirzl, R., «Exp. Cell Res.», 151,6-13,(1984).

43. Olbricht, K., Plattner, H., Matt, H., «Exp. Cell Res.», 151, 14-20, (1984).

44. Chandler D.E., Heuser J.E., J. Cell Biol., 86, 666-674, (1980).

45. Ornberg R.L., Reese T.S., J. cell Biol., 90, 40-54, (1981).

46. Vogel S.S., Leikina E.A., Chernomordik L.V., J. Biol. Chem., 268, 25764-25768,

(1993).

47. Glick B.S., Rothman J.E., Nature, 326, 309-312, (1987).

48. Creutz C.E., J. Cell Biol., 91, 247-256, (1981).

49. Dales, S., Bacteriol. Rev., 37, 103-135, (1973).

50. Laver, W.G., Adv. Virus Research. 18, 57-104, (1973).

51. Wilson I.A., Skehel J.J., Wiley D.C., Nature, 289, 366-373, (1981).

52. Bullough, P.A., Hughson, F.M., Skehel, J.J., Wiley, D.C., Nature, 371, 37-43,

(1994).

53. White, J.M., Wilson, I.A., J. of Cell Biol. 105(6), 2887-2896, (1987).

54. Doms, R.W., Helenius, A., White, J., J. Biol. Chem. 260, 2973-2981, (1985).

55. Viral Fusion Mechanisms, Ed. Bentz J., CRC Press (1993).

56. White J.M. Science, 258, 917-924, (1992)

57. Harter С., Bachi Т., Semenza G., Brunner J., Biochemistry, 27, 1856-1864, (1988).

58. Robertson, J.D., Progr. Biophys. Chem, 10, 343-418, (1960).

59. Brightman, M.W., Reese, T.S., J. Cell Biol., 40, 648-677, (1969)

60. Кройт Г.Р. Наука о коллоидах. Т. 1. М., ИЛ, (1955).

61. Elul, R., J. Physiol., 189, 351-365, (1967).

62. Stegmann Т., Helenius A., In Viral Fusion Mechanisms [16], 89-111.

63. Tatulian S., Hinterdorfer P., Baber G., Tamm L.K., EMBO J., 14, 5514-5523,

(1995).

64. Renkonin, O., Kaarainen, L., Simmons, К., Gahmbert, С., Virology, 46, 318-326,(1971).

65. Klenk, H.-D., Choppin, P.W., Virology, 38, 255-268, (1969).

66. McSharry, J.J., Wagner, R.R., J. Virol., 7, 59-70, (1971).

67. Aloia, R.C., Tian, H„ Jensen, F.C., P.N.A.S. USA, 90, 5181-5185, (1993).

68. Moore, N.F., Patzer, E.F., Shaw, J., Thompson, Т.Е., Wagner, R.R., J. Virol., 27, 320-329, (1978).

69. Pal, R., Barenholz, Y., Wagner, R.R., Biochemistry, 20, 530-539, (1981).

70. Sarin, P.S., Gallo, R.C., Sheer, D.I., Crews, F., Lippa, A.S., N. Engl. J. Med., 313, 1289-1290,(1985).

71. Aloia, R.C., Jensen, F.C., Curtain, C.C., Mobley, P.W., Gordon, L.C., P.N.A.S. USA, 85, 900-904, (1988).

72. Slosberg, B.N., Montelaro, R.C., Biochim. Biophys. Acta, 689, 393-402, (1982).

73. Vogel S.S., LeikinaEA., Chernomordik L.V., J. Biol. Chem., 268, 25764-25768, (1993).

74. Tse F. W., Iwata A., Almers W., J. Cell Biol., 121, 543-552, (1993).

75. Bukauskas F.F., Weingart R., Biophys. J., 67, 613-625, (1994).

76. Zimmerberg J., Blumenthal R., Curran M., Sarkar D., Morris S. J. Cell Biol., 127, 1885-1894,(1994).

77. Almers, W., Annu. Rev. Physiol., 52, 607-624, (1990).

78. Almers, W., Tse, F.W., Neuron, 4, 813-818, (1990).

79. Pfenninger, К., Akert, К., Moor, Н., Sandri, С., J. Neurocytol., 1, 129-149, (1972).

80. Bretscher, M.S., Seien. American, 253, 100-108, (1985).

81. Sleigh, M.A., Jennings, D.H., New York, Cambridge University Press, (1974).

82. Danieli Т., Pelletier S.L„ Henis Y.I., White J.M., J. Cell Biol., 133, 559-569,

(1996).

83. Stegmann Т., Bartoldus I., Zumbrum J., Biochemistry, 34,1825-1832, (1995).

84. Kim, S., Martin, G., Biochim. et biophys. acta, 646,1-9, (1981).

85. Kasahara, M., Hinkle, P.C., J. Biol. Chem., 252, 7384-7390, (1977).

86. Murphy, T.J., Shamoo, A.E., Biophys. J., 21, 27-28, (1978).

87. Weinstein, J.N., Yoshikami, S., Henkart, P., Science, 195,489-492, (1977).

88. Wilschut, J., Papahadjopoulos, D., Nature (London), 281, 690-692, (1979).

89. Bentz, J., Diizgunes, N., Nir, S., Biochem., 22, 3320-3330, (1983).

90. Duzgunes, N.. Wilschut, J., Fraley, R., BBA, 642(1), 182-195, (1981).

91. Hui, S.W., Stewart, T.P., Boni, L.T., Science, 212, 921-927, (1981).

92. Либерман E.A., Ненашев B.A., Биофизика, т. 17, № 2, 231-238, (1972).

93. White, S.H., Biophys. J., v. 23, № 3, 337-347, (1978).

94. Simon, S.A., Lis, L.I., MacDonald, R.C., Kauffmann, I.M., Biophys. J., v. 19, № 1,83-90,(1977).

95. Козлов M.M., Лейкин С.Л., Черномордик Л.В., Маркин B.C., Чизмаджев Ю.А., Биол. Мембраны, 4, 53-66, (1987).

96. Langmuir, I., Shaefer, V., J. Am. Chem. Soc., 60, 1351-1360, (1938).

97. Helm, C.A., Israelachvili, J.N., McGuiggan, P.M., Biochem., 31, 1794-1805, (1992).

98. Le Neveu, D.M., Rand, R.P., Parsegian, V.A., Nature, 259,601-602, (1976).

99. Cowley, A.C., Fuller, N.L., Rand, R.P., Parsegian, V.A., Biochem., v. 17, № 15,3163-3168,(1978).

100. Le Neveu D.M., Rand, R.P., Parsegian, V.A., Gingell, D., Biophys. J., 18, 209230, (1977).

101. Chapman, D., Williams, R.M., Ladbrooke, B.D., Chem. Phys. Lipids, 1, 445-446, (1967).

102. Salsburg, N.J., Darke, A., Chapman, D., Chem. Phys. Lipids, 8, 142-143, (1972).

103. Gottlieb, A.M., Inglefield, P.T., Lange, Y., Biochim. Biophys. Acta, 307, 444-445, (1973).

104. Finch, E.D., Schneider, A.S., Biochim. Biophys. Acta, 406, 146-147, (1975).

105. Israelachvili, J.N., Mitchell, D.J., Ninham, B.W., Biochim. Biophys. Acta, 470(2), 185-201,(1977).

106. Маркин B.C. Биофизика, 25, 941-943, (1980).

107. Markin, V.S., Biophys. J., 36, 1-3, (1981).

108. Madden, T.D., Cullis, P.R, Biochim. et biophys. acta, 684, 149-153, (1982).

109. Borovjagin, V.L., Vergara, J.A., Mclntosch, T.J., J. Membrane Biol., 69, 199-201,(1982).

110. Hui, S.W., Stewart, T.P., Nature, 290, 427-429, (1981).

111. Hui, S.W., Stewart, T.P., Boni, L.T., Chem. Phys. Lipids, 33, 113-126, (1983).

112. Rand, R.P., Reese, T.S., Miller, R.G., Nature, 293, 237-238, (1981).

113. Lowy, R.J., Sarkar, D.P., Whitnall, M.H., Blumenthal, R., Exper. Cell Research, 216,411-421, (1995).

114. Вирусология. Методы, пер. с англ., под ред. Б.Мейхи, Москва, «Мир», 161-200,(1988).

115. Lowy, R.J., Sarkar, D.P., Chen, Y., Blumenthal, R., P.N.A.S. USA, v. 87, 1850-1854,(1990).

116. Stegmann, Т., N. Shlomo, Wilschut, J., Biochem., 28, 1698- 1704, (1989).

117. Ellens, H., J. Bentz, D. Mason, F. Zhang, J. M. White, Biochem., 29, 96979707, (1990).

118. Haywood, A.M., J. Gen. Virol., 29, 63-68, (1975).

119. Nir, S., Stegmann, Т., Wilschut, J., Biochem., 25, 257-266, (1986).

120. Molecular Mechanisms of membrane fusion, Plenum Press, New York and London, 451-465, (1988).

121. Brunner, J., Zugliani, C., Mischler, R., Biochem., 30, 2432-2438, (1991).

122. Brunner, J., Trends Biochem. Sei. 6,44-46, (1981).

123. Razinkov, V.l., Hernandez-Jimenez, E.I., Mikhalyov, I.I., Cohen, F.S., Molotkovsky, J.G., BBA, 1329, 149-158, (1997).

124. Kanaseki, Т., Kawasaki, K., Murata, M., Ikeuchi, Y., Ohnishi, S., J. of Cell Biol., 137(5), 1041-1056, (1997).

125. Sato, S.B., Kawasaki, K„ Ohnishi, S.I., P.N.A.S., USA, 80, 3153-3157, (1983).

126. Lentz, B.R., Chem. and Physics of Lipids, 73, 91-106, (1994).

127. Murata, M., Sugahara, Y., Takahasgi, S., Ohnishi, S., J. Biochem., 102, № 4, (1987).

128. Pereira, F. В., F. M. Goni, A. Muga, J. L. Nieva, Biophys. J., vol. 73, Oct., pp. 1977-1986,(1997).

129. Longo, M. L., A. J. Waring, D. A. Hammer, Biophys. J., vol. 73, Sept., pp. 1430-1439, (1997).

130. Jiricek, R., G. Schwarz, Т. Stegmann, Bioch. et Biophys. Acta, 1330, 17-28, (1997).

131. Young, J. E., G. P. H. Young, Z. A. Cohn, J. Lenard, Virology, 128, 186-194, (1983).

132. Niles, W.D., Cohen, F.S., J. Gen. Physiol., 97, 1101-1119, (1991).

133. Ершов Ф.И., Вопр. вирусологии, 1, 3-7, (1965).

134. Shelokov, A., Vogel, J.E, Chi, L., Proc. Soc. Exptl. Biol. Med., 97, 802-809, (1958).

135. Kemble G.W., Henis Y.I., White J.M., J. Cell Biol., 122, 1253-1265, (1993).

136. Kemble, G. W., Danieli, T. & White, J. M Cell 76, 383-91 (1994).

137. Neher E., Marty A., PNAS USA, 79, 6712-6716, (1982).

138. Melikyan, G. В., W. D. Niles, M. E. Peeples, F. S. Cohen, J. Gen. Physiol., 102, 1131-1149,(1993).

139. Nüssler, F., Clague, M.J., Herrmann, A., Biophys. J., 73, 2280-2291, (1997).

140. Melikyan, G.B., White, J.M., Cohen, F.S., J. of Cell Biol., 131, 679-691, (1995).

141. Nestorowicz, A„ Laver, G., Jackson, D.C., J. Gen. Virol., 66, 1687-1695, (1985).

142. Doms, R.W., Helenius, A., J. Virol., 60, 833-839, (1986).

143. Schroth-Diez, В., Ponimaskin, E., Reverey, H., Schmidt, M.F.G., Herrmann, A., J. of Virol., v. 72, № 1, 133-141, (1998).

144. Melikyan, G.B., Jin, H„ Lamb, R.A., Cohen, F.S., Virol, 235, 118-128, (1997).

145. Huang, R.T.C., Rott, R., Klenk, H.D., Virology, 110, 243-247, (1981).

146. Suzuki, Y., Y. Nagao, H. Kato, M. Matsumoto, K. Nerome, K. Nakajima, E. Nobusawa, J. of Biol. Chem., 261, 17057-17061, (1986).

147. Marchesi, V.T., Tillack, T.W., Scott, R.E., Glycoproteins of Blood Cells and Plasma, eds. Jamieson and Greenwalt, Lippincott, Philadelphia, 94-105, (1971).

148. Vasta, G.R., Ilodi, G.H., Cohen, E., Brahmi, Z., Dev. Сотр. Immunol., 6(4), 625-634, (1982).

149. Ellens, H., Doxsey, S., Glenn, J.S., White, J.M., Methods Cell Biol., 31, 155-178,(1989).

150. LePecq, J.-B., Paoletti, C., J. Mol. Biol., 27, 87-106, (1967).

151. Mueller P., Rudin D.U., Tien H.T., Wescott W.C. Nature, 194, 979-980 (1962)

152. Melikyan, G.B., Niles, W.D., Ratinov, V.A., Karhanek, M., Zimmerberg, J., Cohen, F.S., J. Gen. Physiol., 106, 803-819, (1995).

153. Wonderlin, W.F., Finkel, A., French, R.J., Biophys. J., 58, 289-297, (1990).

154. Lindau, M. Quart. Rev. Biophys. 24,75-101 (1991).

155. Hamil, O.P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, В., Sigworth, F.J., Pfltigers Arch., 391, 85-100, (1981).

156. Lanzrein M., Kasermann R., Weingart R., Kempf C., Virology, 196, 541-547 (1994).

157. Plonsky I., Zimmerberg J., J. Cell Biol., 135,1831-1839, (1996).

158. Ketterer, В., Neumcke, В., Lauger, P., J. Membr. Biol., v. 5, № 3, 225-232, (1971).

159. Oberhauser, A.F., Fernandez, J.M., Biophys. J., v. 69, 451-459, (1995).

160. Turin, L., Behe, P., Plonsky, I., Dunina-Barkovskaya, A., P.N.A.S., USA, 88, 9365-9369, (1991).

161. Andersen, O.S., Feldberg, S., Nakadomari, H., Levy, S., McLaughlin, S., Biophys. J., 21, 35-69, (1978).

162. Clague, M.J., Schoch, C., Blumenthal, R., Biochem., 29, 1303-1308, (1990).

163. Kaplan, D., Zimmerberg, J., Puri, A., Sarkar, D.P., Blumenthal, R., Exp. Cell Res., 195, 137-144,(1991).

164. Morris, S.J., Sarkar, D.P., White, J.M., Blumenthal, R., J. Biol. Chem., 264, 3972-3978, (1989).

165. Меликян Г.Б., Чизмаджев Ю.А., Черномордик JT.B., Тез. докл. Ill Советско-Швейцарского симпозиума "Биологические мембраны: структуры и функции", Ташкент, с. 101, (1983).

166. Меликян Г.Б., Черномордик Л.В., Абидор И.Г., Чайлахян Л.М., Чизмаджев Ю.А., Докл. АН СССР, 269, 1221-12256 (1982).

167. Zimmermann U., ВВА, 694, 227-277, (1982).

168. Чизмаджев Ю.А., Черномордик J1.B., Пастушенко В.Ф., Абидор И.Г., Ионные каналы и их модели, 161-266, М. ВИНИТИ (1982).

169. Лейкин Л.С., Глазер Р.В., Черномордик Л.В., Биол. мембраны, 3, 944-951,(1986).

170. Chernomordik L.V., Kozlov М.М., Melikyan G.B., Abidor I.G., Markin V.S., Chizmadzhev Yu.A., BBA, 812, 643-655, (1985).

171. Пастушенко В.Ф., Черномордик Л.В., Чизмаджев Ю.А., Биол. мембраны, 2, 813-819.

172. Черномордик Л.В., Сухарев С.И., Абидор И.Г., Чизмаджев Ю.А., Биол. Мембраны, 1, 229-244, (1984).

173. Сухарев С.И., Попов С.В., Черномордик Л.В., Абидор И.Г., Биол. Мембраны, 2, 77-86, (1985).

174. Melikyan, G.B., Abidor, I.G., Chernomordik, L.V., Chailakhyan, L.M., Biochim. et biophys. acta, v. 730, № 2, 395-398, (1983).

175. Neher, E., Biochim. Biophys. Acta, v. 373, № 3, 327-336, (1974).

176. Melikyan, G.B., Deriy, B.N., Ok, D.C., Cohen, F.S., Biophys. J., 71, 2680-2691,(1996).

177. Chernomordik, L.V., Kozlov, M.M., Zimmerberg, J., J. Membr. Biol., 146, 1-14,(1995).

178. Козлов M.M., Лейкин С.Л., Черномордик Л.В., Маркин B.C., Чизмаджев Ю.А., Биол. Мембраны, 4, 53-66, (1987).

179. Herrmann, А., М. J. Clague, R. Blumenthal, Membr. Biochem., 10, 3-15, (1993).

180. Ellens, H., J. Bentz, D. Mason, F. Zhang, J. M. White, Biochem., 29, 9697-9707,(1990).

181. Burger, K. N. J., S. A. Wharton, R. A. Demel, A. J. Verkleij, Biochem., 30, 11173-11180,(1991).

182. Hsu, M. C„ A. Schied, P. W. Choppin, J. of Biol. Chem., 256, 3557-3563, (1981).

183. Frolov, V.A., A. B. Bychenko, A. Ya. Dunina-Barkovskaya, Yu. A. Chizmadzhev, J. Zimmerberg, Membr. and Cell Biol., 9(3), 289-298, (1995).

184. Schwarz, R. Т., M. F. G. Schmidt, U. Anwer, H. D. Klenk. 1977. J. Virol. 23:217-226.

185. Nakamura, K., R. W. Compans. 1980. Virology 107:208-221.

186. Santer, U. V., R. DeSantis, K. J. Hard, J. A. van Kuik, J. F. G. Vliegenthart, B. Won, M. C. Glick, EJB, (1988).

187. Shibata, S., F. Yamamoto-Goshima, К. Maeno, T. Hanaichi, Y. Fujita, K. Nakajima, M. Imai, T. Komatsu, S. Sugiura, J. of Virol., v. 67, No. 6, 3264-3273, (1993).

188. Griffin, J. A., S. Basak, R. W. Compans, Virol. 125, 324-334, (1983).

189. Gottschalk, A., G. Belyavin, F. Biddle, Glycoproteins as influenza hemagglutinin inhibitors and as cellular virus receptors. In: Gottschlk A. ed. Glycoproteins:

their composition, structure and function. New York: Elsevier Science Publishing. 1972:1082-1096,(1972).

190. Ryan-Poirier, K., Kawaoka, Y., J. Virol., 65, 389-395, (1991).

191. Golgstein, I. D., С. E. Hayes, Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. 35, 127-340, (1978).

192. Биохимическое исследование мембран, под ред. Э. Мэдди, изд. «Мир», Москва, 269-277, (1979).

193. Muresan, V., V. Iwanij, Z. D. Smith, J. D. Jamieson, J. Histochem. Cytochem., 30(9), 938-946, (1982).

194. Krah, D. L„ P. W. Choppin, Virol., 69, 717-722, (1988).

195. Benne, С. A., C. A. Kraaijeveld, J.A.G. van Strijp, E. Brouwer, M. Harmsen, J. Verhoef, L. M. G. van Golde, J. F. van Iwaarden, The J. of Infect. Dis., 171, 335-341,(1995).

196. Malhotra, R., J. S. Haurum, S. Thiel, R. B. Sim, Biochem. J., 304, 455-461, (1994).

197. Suzuki, Т., M. Tsukimoto, M. Kobayashi, A. Yamada, Y. Kawaoka, R. G. Webster, Y. Suzuki, J. of Gen. Virol., 75,1769-1774, (1994).

198. Reading, P. С., C. A. Hartley, R. A. B. Ezekowitz, E. M. Anders, B.B.R.C., 217(3), 1128-1136, (1995).

199. Gottschalk, A., G. Belyavin, F. Biddle, Glycoproteins as influenza hemagglutinin inhibitors and as cellular virus receptors. In: Gottschlk A. ed. Glycoproteins: their composition, structure and function. New York: Elsevier Science Publishing. 1972, 1082-1096,(1972).

200. Anders, E. M., C. A. Hartley, D. C. Jackson, P.N.A.S. USA, 87, 4485-4489, (1990).

201. Hartley, C. A., D. C. Jackson, E. M. Anders, J. of Virol., 66, 4358-4363, (1992).

202. Anders, E. M., C. A. Hartley, P. C. Reading, R. A. B. Ezekowitz, J. of Gen. Virol., 75, 615-622,(1994).

203. Korte, Т., A. Herrmann, Eur. Biophys. J., 23, 105-113, (1994).

204. Mueller, P. Ann. NY Acad. Sci. 264:247-264, (1975).

205. Сивухин Д.В., Общий курс физики. Оптика. "Наука", с.365-367, (1980).

206. Pinto, L.H., Holsinger, L.J., Lamb, R.A., Cell, 69, 517-528, (1992).

207. Wang, С., Lamb, R.A., Pinto, L.H., Virology, 205, 133-140, (1994).

208. Hay, A.J., Semin Virol., 3, 21-30, (1992).

209. Duff, K.C., Ashley, R.H., Virology, 190, 485-489, (1992).

210. Wang, C., Takeuchi, K., Pinto, L.H., Lamb, R.A., J. Virol., 67, 55855594, (1993).

211. Wang, C„ Lamb, R.A., Pinto, L.H., Biophys. J., 69, 1363-1371, (1995).

212. Tosteson, M.T., Pinto, L.H., Holsinger, L.G., Lamb, R.A., J. Membr. Biol., 142, 117-126,(1994).

213. Shimbo, К., Brassard, D.L., Lamb, R.A., Pinto, L.H., Biophys. J., 70, 1335-1346,(1996).

214. Lamb, R.A., Holsinger, L.J., Pinto, L.H., In Receptor-Mediated Virus Entry into Cells, ed. E. Wimmer, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, 303-321,(1994).

215. Takeuchi, K., Lamb, R.A., J. Virol., 68, 911-919, (1994).

216. Cleverley, D.Z.; Lenard, J.; Geller, H.M., Exp. Cell Res., Jun 15;233(2):288-96, (1997).

217. Регистрация одиночных каналов, под ред. Б. Сакмана, Э. Неера, М., 1987.

218. Wunder, U.R., Colombini, М., J. Membr. Biol., 123, 83-91, (1991).