Исследование по созданию биологически активного гидролизата на основе культур молочнокислых бактерий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат фармацевтических наук Гаранян, Гаянэ Сергеевна

• Гаранян, Гаянэ Сергеевна
• кандидат фармацевтических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Гаранян, Гаянэ Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. СВЕДЕНИЯ О ПРИМЕНЕНИИ МИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТОВ В МЕДИЦИНЕ И ФАРМАЦИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Биологическая роль молочнокислых бактерий.

1.2. Лекарственные препараты микробного происхождения.

1.2.1 Пептидные иммуномодуляторы.

1.2.2 Препараты микробного происхождения.

1.3. Способы получения микробных гидролизатов.

1.4.Методы анализа основных биологических активных веществ микробных гидролизатов.

1.4.1. Методы анализа белков.

1.4.2. Методы анализа пептидов.

1.4.3. Методы анализа аминокислот.

Выводы по обзору и задачи собственных исследований.

ГЛАВА 2. РАРАБОТКА УСЛОВИЙ ГИДРОЛИЗА МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ, ВХОДЯЩИХ В СОСТАВ ПОЛИВИДОВОЙ ЗАКВАСКИ БК-УГЛИЧ №4.

2.1 Оптимизация процесса гидролиза.

2.2 Определение микробиологической чистоты гидролизата молочнокислых бактерий и выбор оптимального консерванта.

Выводы по главе 2.

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ГИДРОЛИЗАТА ПОЛИВИДОВОЙ ЗАКВАСКИ БК-УГЛИЧ №4.

3.1 Микроэлементный состав гидролизата

3.2 Аминокислотный состав гидролизата.

3.3 Количественное определение нингидринактивных компонентов в гидролизате

3.4 Углеводный состав гидролизата.

3.5 Хроматография пептидных компонентов бактериального гидролизата.

3.6 Изучение жирнокислотного состава гидролизата.

3.7Содержание антиоксидантов в гидролизате.

Выводы по главе 3.

ГЛАВА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ГИДРОЛИЗАТА ПОЛИВИДОВОЙ ЗАКВАСКИ БК-УГЛИЧ №4.

4.1 Описание.

4.2 Подлинность.

4.3 Удельное вращение.

4.4 Прозрачность раствора.

4.5 Цветность раствора.

4.6 Потенциометрическое определение (рН).

4.7 Микробиологическая чистота.

4.8 Количественное определение.

4.9 Определение срока годности биологически активного гидролизата.

Выводы по главе 4.

ГЛАВА 5. АНТИОКСИДАНТНАЯ И ИММУТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ ГИДРОЛИЗАТА ПОЛИВИДОВОЙ ЗАКВАСКИ БК-УГЛИЧ №4.

5.1 Антиоксидантная активность гидролизата молочнокислых бактерий.

5.2 Влияние бактериального гидролизата на экспрессию in vitro рецепторов лимфоцитов здоровых доноров.

Выводы по главе 5.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование по созданию биологически активного гидролизата на основе культур молочнокислых бактерий»

Механизм профилактического действия микробных препаратов является многогранным и обусловлен не только высоким содержанием жизнеспособных клеток, но и синтезом внеклеточных метаболитов. Экзометаболиты молочнокислых бактерий подавляют рост патогенной микрофлоры, обладают радиопротекторными, противоопухолевыми и иммунокоррегирующимими свойствами. Важно также отметить, что молочнокислые культуры обладают устойчивостью или малой чувствительностью к антибиотикам, что указывает на их способность функционировать в ЖКТ человека при приёме данных препаратов. Это свидетельствует о перспективности изучения прокариот, как источников биологически активных субстанций, для создания на их основе пробиотических продуктов нового поколения.

Биологически активные соединения бактериальных клеток, а именно белки, пептиды, незаменимые аминокислоты, органические кислоты, и др. могут быть получены гидролитическими методами и часто использоваться как для парентерального питания, так и в медицинских целях.

Как известно, большинство аминокислот в белках животного и растительного происхождения представлены в Ь-форме. Поэтому все аминокислоты, образующиеся при гидролизе природных белков в условиях, исключающих рацемизацию, способны включаться в биохимические процессы животного организма.

Эубиотические препараты, для получения которых используют молочнокислые бактерии, находят широкое применение в медицине.

Практика показывает, что использование этих бактерий в нативном состоянии часто малоэффективно из-за их инактивации под действием ферментов желудочного сока. Очевидно, и это показывает практика, что более целесообразно использование гидролизатов молочнокислых бактерий, 4 поскольку они легче усваиваются и легче вовлекаются в биохимические процессы.

Иммуностимулирующие действие молочнокислых бактерий, в первую очередь, связано с присутствием в их клеточной стенке пептидогликанов и тейхоевых кислот. Особую ценность представляют собой пептидогликаны, содержание которых варьирует от 10% у грамотрицательных до 70% у грамположительных бактерий.

Известно, что продукты расщепления протеогликанов - гликопептиды, характеризуются иммуномодулирующим действием, что и является обоснованием для их применения в медицинской практике. Эти соединения являются макромолекулами сложного состава.

Ряд лекарственных препаратов, используемых в качестве иммуномодуляторов, представляют собой лизаты различных микроорганизмов. Например, «ИРС-19», представляет собой лизаты молочнокислых бактерий; «Имудон» - содержит лизаты микроорганизмов, составляющих основную микрофлору полости рта; «Бронхо-мунал» -лиофилизированный лизат бактерий симбионтов слизистой оболочки дыхательных путей.

В нашей стране аналогов данным препаратам не существует. Это связано с отсутствием эффективных способов получения гидролизатов бактерий, а также валидированных методик их анализа.

В настоящее время имеются публикации, посвященные разработке способов получения, методик анализа основных биологически активных веществ гидролизатов молочнокислых бактерий, стандартизация и первичная фармакологическая оценка лекарственного препарата на основе гидролизата бактерий Lactobacillus acidophilus.

Известно, что для закваски при производстве сыров и молочнокислых продуктов, чаще всего используются не индивидуальные штаммы, а их смеси. Например, при производстве мягких и рассольных сыров с низкой температурой второго нагревания используется поливидовая закваска БК5

Углич-№4, представляющая собой концентрат включающий ЬасШсоссш ЬасЙБ зиЬэр. 1асйз, ЬасШсоссиэ Ьасйэ БиЬзр. сгешопэ, ЬасШсоссиэ Ьасйэ эиЬзр. <11асей1ас11з, ЬеисопоБШс 1ас^з. Необходимо отметить, что указанная закваска выпускается отечественной микробиологической промышленностью и широко доступна.

В связи с этим актуальным является проведение исследований по разработке способов получения биологически активной субстанции на основе гидролизатов молочнокислых бактерий, а также изучение их качественного и количественного состава, стабильности и биологической активности.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является получение биологически активного гидролизата на основе поливидовой закваски БК-Углич №4 и исследование его химического состава, а также антиоксидантных и иммунотропных свойств.

Для реализации поставленной цели предполагается решение следующих задач:

- экспериментально изучить оптимальные условия гидролиза закваски БК-Углич-№4 ферментативным способом;

- исследовать качественный и количественный состав компонентов гидролизата;

- исследовать антиоксидантную активность

- осуществить исследования, с целью выявления влияния гидролизата на показатели иммунитета.

Научная новизна. Впервые для получения биологически активного гидролизата предлагается использовать мезофильную закваску БК-Углич-№4, представляющая собой сумму тест культур.

Разработана методика ферментативного получения биологически активного гидролизата путем ферментативного гидролиза поливидовой закваски БК-Углич-№4, заключающегося в том, что субстрат предварительно кипятят в растворе хлороводородной кислоты в течение 30 б минут после чего охлаждают, добавляют фермент, инкубируют 6 часов и ценрифугируют и получают целевой продукт.

С целью характеристики состава полученного гидролизата изучено качественное и количественное содержание свободных аминокислот, моносахаридов, а также макро- и микроэлементов, а также высших жирных кислот.

Установлена антиоксидантная активность гидролизата, что обусловлено комплексом БАВ.

Выявлено стимулирующее влияние гидролизата поливидовой закваски БК-Углич-№4 на некоторые показатели иммунитета.

Практическая значимость работы. Разработан способ получения гидролизата, определены его антиоксидантные свойства, а также проведены предварительные исследования на наличие иммунотропной активности.

В результате химического и биохимического исследования доказана возможность и перспективность использования гидролизата мезофильной закваски БК-Углич-№4 в качестве биологически активного компонента для кисломолочных продуктов.

Положения, выдвигаемые на защиту:

- экспериментальные данные по разработке условий получения биологически активного гидролизата на основе поливидовой закваски БК-Углич-№4;

- качественный и количественный состав биологически активных компонентов гидролизата;

- результаты исследования антиоксидантной активности

- материалы по предварительному изучению влияния гидролизата на иммунную систему.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научноисследовательской работы (НИР) ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава, а также в соответствии с планом о выполнении НИР между Федеральным 7 агентством по здравоохранению и социальному развитию и ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (номер государственной регистрации 01200805781).

Внедрение в практику. По материалам диссертации составлено информационное письмо «Обоснование применения биологически активных гидролизатов на основе культур молочнокислых бактерий в качестве иммуномодулирующей субстанции», которое передано в ЗАО Тбилисский МСЗ для дальнейших совместных исследований

Апробация и публикации результатов исследований.

Основные положения диссертационной работы изложены на 64-й и 65-й научных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск 2009-2010 гг.), 1-ая межрегиональная конференция «Актуальные проблемы фармации» (Владикавказ 2010г.)

По теме диссертации опубликовано 7 работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 119 страницах текста компьютерного набора и состоит из обзора литературы и 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 150 источников, в том числе 36 иностранных; содержит 40 таблиц, 10 рисунков и приложения.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», Гаранян, Гаянэ Сергеевна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработана методика ферментативного гидролиза поливидовой закваски БК-Углич-№4, позволяющая получать гидролизат, обладающий иммуномодулирующей активностью.

2. Изучен химический состав полученного биологически активного гидролизата и установлено, что:

- в нём присутствуют 9 высших жирных кислот, в том числе олеиновая, линолевая, линоленовая, гондоиновая, эйкозодиеновая.

- микроэлементный состав гидролизата представлен Пэлементами, среди которых преобладают калий, натрий, фосфор;

- содержание компонентов, реагирующих с нингидрином, составляет 7,41%, антиоксидантов - 3,45 % в пересчете на глутаминовую кислоту и углеводов - 2,03% в пересчете на галактозу;

- в исследуемом гидролизате обнаружено 26 компонентов пептидной природы.

3. Определены показатели качества гидролизата и установлено, что в условиях естественного хранения данная субстанция стабильна в течение месяца. В качестве консервирующего компонента рекомендуется использовать нипагин в концентрации 0,5 г/л.

4. Осуществлена валидация методик количественного определения компонентов, чувствительных к нингидрину и галактозы. Результаты исследований свидетельствуют, что использованные в работе методики обеспечивают необходимую правильность и воспроизводимость результатов, что позволяет их использовать в количественном анализе исследуемых компонентов гидролизата.

5. Определена антиоксидантная активность гидролизата, которая по-видимому, в первую очередь, обусловлена такими аминокислотами, как метионин, тирозин фенилаланин, пролин глутаминовая кислота.

6. Установлено, что бактериальный гидролизат стимулирует экспрессию рецепторов (СО 3+, СБ 4+, СЭ 16+ и особенно СЭ 25+ ) при 3-дневном культивировании более, чем на 80%. Под действием бактериального гидролизата фагоцитарная активность лейкоцитов стимулируются. Этот эффект хорошо иллюстрируется по данным индекса бактерицидности, который увеличивается более, чем в 2,5 раза. Фагоцитарное число, фагоцитарный индекс и процент бактерицидности повышается более, чем в 1,2-1,3 раз по сравнению с контролем.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Гаранян, Гаянэ Сергеевна, 2011 год

1. Аналитическая хроматография / К.И. Сакодынский и др..-М.:ХимияД993. 464 с.

2. Белокрылов, Г.А. Количественная характеристика действия на иммунный ответ некоторых аминокислот/ Г.А. Белокрылов, И.В. Молчанова//Иммунология. 1988. - №3. - С.61-64.

3. Белокрылов, Г.А. Пептиды и аминокислоты в регуляции иммунного ответа/ Г.А. Белокрылов, Е.И. Сорочинская // Всес. съезд иммунологов (1; 1989; Сочи): тез.докл.- Сочи, 1989.- С.274.

4. Биомедсервис. Имуномудуляторы Электронный ресурс.-Электрон, дан. (4 файла).-М.,2001.-Режим доступа: www.biomedservice■Ш■ — Загл. с экрана.

5. Биоценоз кишечника и сердечно-сосудистый континуум/ Г.А. Артюнов и др. // Сердечная недостаточность. 2004. - Т.5, №5. - С. 224-229.

6. Бок, Р. Методы разложения в аналитической химии: пер. с англ./ Р. Бок.-Л.: Химия, 1984. 210с.

7. Бондаренко, В. М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н. М.Грачева, Т. В. Мацулевич М.Медицина, 2003.-С. 224

8. Бондаренко, В. М. Пребиотическое и противоинфекционное действие лактулозосодержащих препаратов/ В.М. Бондаренко // Фарматека. -2004.-№11.-С. 1-5.

9. Бондаренко, В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков / В.М. Бондаренко, Э.И. Рубакова, В.А. Лаврова // Журн. микробиологии -1998.-№5.-С. 107-112.

10. Брусиловский, Л.П. Инструментальные методы и экспресс-анализаторы для контроля состава и качества молока и молочных продуктов. / Л.П. Брусиловский М.: Молоч. пром-сть, 1997.-48с

11. Василенко, Ю. К. Курс биологической химии: для студ.фармац.вузов / Ю. К. Василенко. -М.: Высш. шк.,1978. 381с.

12. Влияние нового синтетического дипептида бестим на рецепторный аппарат интактных нейтрофильных гранулоцитов в условиях in vitro/ И.В. Нестерова и др.. //Клин. лаб. диагностика-1998.-№9.-С.8.

13. Воробьев, A.A. Предпосылки и перспективы применения пробиотиков в комплексной терапии онкологических больных/ A.A. Воробьев, М.Л, Гершанович, Л.Н. Петров // Вопросы онкологии. — 2004. № 3. — С. 361-365.

14. Выбор оптимальных условий получения гидролизатов молочнокислых бактерий термокислотным способом/ М.В. Гаврилин и др.. // Хим.-фармац. журн.-2007-Т.41, №2 , С.54-56.

15. Гаврилин, М.В. Валидация аналитических методик: метод, указания/ М.В. Гаврилин, С.П. Сенченко.- Пятигорск: ГОУ ВПО Пятигорская ГФА Росздрава, 2009. 40 с.

16. Глушанова, Н.А Биологические свойства лактобацил / H.A. Глушанова// Бюл. сиб. медицины. 2003. -№4. С.50-58.

17. Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов: учеб. пособие/ К.К. Горбатова М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1984.-344с.

18. ГОСТ 30418-96. Масла растительные. Метод определения жирнокислотного состава.-Введ.1998.-01.01. Минск.: Изд-во стандартов, 1996.- 7с.

19. ГОСТ Р. ИСО 5725-1-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения. Введ. 23.04. 02 -М.: Изд-во стандартов, 2002. -32 с.

20. ГОСТ Р. ИСО 5725-4-42003 .Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений. — Введ . 23.04. 02 М.: Изд-во стандартов, 2002. -32 с.

21. Государственная фармакопея Российской Федерации. 12-е изд. - М.: Научный центр экспертизы средств мед. применения, 2008 - Ч.1.— 704с.

22. Дарбре, А. Практическая химия белка: пер. с англ./ А. Дарбре.- М.: Мир, 1989.-623с.

23. Девени, Т. Аминокислоты, пептиды, белки: пер с анг./ Т. Девени,Я. Гергей -М.Мир, 1976.-386с.

24. Идентификация органических соединений / Р. Шрайнер и др.. -М. Мир, 1983.-704с

25. Изучение состава и фармакологической активности гидролизатов молочнокислых бактерий/ В.А. Самойлов и др.. // Хим.-фармац. журн.-2005-Т.39, №3-С.51-53.

26. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии /под ред. Г.Г. Онищенко и др.. М.: ГОУ ВУНМЦ Минздрава РФ, 2002.-608с.

27. Иммуномодулирующее действие препаратов эубиотиков /А.Ю. Лопатина и др. // Вест. Рамн.-1987.-№3.-С. 30-34.

28. Иммуномодулирующие эффекты ликопида при экспериментальном ИДС нейтрофильных гранулоцитов / И.В. Нестерова и др.. // Междунар. журн. по иммунореабилитации.-1998.- № 8.- С.11.

29. Иммуностимулирующее действие мурамилдипептида, глюкозаминилмурамилдипептида и их синтетических производных в системе in vitro / A.JI. Рахмилевич и др.. // Антибиотики, химиотерапия 1989.- №34.- С.586-588

30. Исследование аминокислотного состава сфагнума бурого/ H.A. Буркина и др. // Химия раст. сырья-2000.- №1.-С.81-83.

31. Исследование микроэлементного состава объектов растительного происхождения/ Д.А. Муравьева и др. // Достижения современной фармацевтической науки и образования практическому здравоохранению: материалы юбил. научн.-практич. конф. — Пермь, 1997.-С.224.

32. Исследование пристеночной микрофлоры желучно-кишечного тракта у человека в норме и при патологии / А.А.Воробьев и др.. // Вестн. РАМН. 2004. - № 2. - С.43-47

33. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов человека с помощью панели моноклональных антител / А.В.Филатов и др. // Гематология и трансфузиология.- 1990.-Т.35, №4.-С.16-19.

34. Казначеева, К.С. Механизмы развития цитокининдуцированного апоптоза / К.С. Казначеева // Гематология и транфузиология. 1999. -Т.44, №1. - С.40-43.

35. Калюжин, О.В. Производные мурамилпептида в эксперименте и клинике/ О.В. Калюжин //Журн. Микробиологии-1998. №1. -С. 104108

36. Кнорре Д. Г. Биологическая химия. / Кнорре Д. Г., Мызина С. Д. — М.: Высш. шк., 2000. — 479 с.

37. Колесникова, H.B. Физиологическая роль нейтрофльных гранулоцитов в поддержании иммунного гомеостаза/ Н.В. Колесникова, И.В.Нестерова // Объединен, иммунологическ. форум. ( 2004, Екатеринбург):тез.докл.- Екатеринбург, 2004-С.9.

38. Комплексное трехуровневое исследование системы нейтрофильных гранулоцитов с возможной диагностикой иммунодефицитных состояний при различной патологии: метод, рекомендации / И.В.Нестерова и др.. -М., 1996.-25с.

39. Короткова, Е.И. Новый вольтамперометрический способ определения активности антиоксидантов / Е.И. Короткова, Ю.А. Корбаинов, O.A. Аврамчик // Биоантиоксидант: тез. докл. VI междунар. конф. 16-19 апр. 2002 г. -М., 2002. С. 298-299.

40. Кротов, Г.И. Профилирование белков рецепторного комплекса молекулы/Г.И. Кротов, A.B. Филатов //Биохимия.-2007.-Т. 72,-№ 11-С. 1495-1505.

41. Кузнецова А.Б. Разработка технологии бактериального концентрата на основе симбиоза бифидобактерий и сливочного стрептококка: автореф. дис. .канд. техн. наук: 05.18.04 / Кузнецова Анна Борисовна.- Улан-Удэ, 2007.-20 с.

42. Кулагина М.Г. Иммунопрофилактика и иммунокоррекция Ликопидом инфекционно-воспалительных осложнений у новорожденных с респираторным дистресс-синдромом: автореф. дис.канд мед. наук: 14.00.09 / Кулагина Мария Григорьевна. Краснодар, 2004.-22с.

43. Лазарева, Д.Е., Стимуляторы иммунитета./ Д.Е Лазарева, Е.К. Алёхин // -М., 1985.-272с.

44. Лактофлора и колонизационная резистентность /Ленцнер A.A. и др.// Антибиотики и мед. биотехнология. 1987. -Т.32,№3. - С. 173 -179

45. Лебедев, А.Т. Масс-спектрометрия в органической химии: учеб. пособие./А.Т Лебедев.-М.: БИНОМ. Лаб. знаний.,2003.-493с.

46. Луцан, Н.И. Иммуномодулирующее действие мурамилдипептидов на продукцию ИЛ-1 макрофагами/ Н.И. Луцан // Съезд, иммунологов России(1; 1992; Новосибирск):тез.докл. Новосибирск, 1992. - С.280.

47. Максимюк, Н.Н О преимуществах ферментативного способа получения белковых гидролизатов / H.H. Максимюк , Марьяновская Ю.В.// Фундаментальные исследования.-2009. -№1.-С.34-35.

48. Меньшиков, В. В. Лабораторные методы исследования в клинике: справ. /В.В. Меньшиков. -М. Медицина., 1987-286с.

49. Методы исследования молока и молочных продуктов / под. ред. Г.Н. Крусь, A.M. Шалыгиной, З.В. Волокитиной -М.:Колос, 2002.-368 с.

50. Микроэкологические нарушения при клинической патологии и их коррекция бифидосодержащими пробиотиками/ Воробьев А. А.,и др.. // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. — 2004.-№4. -С. 13-17.

51. Митропанова М.Н., Клинико-иммунологическая эффективность ликопида в комплексном лечении у детей с аллергическими и неаллергическими заболеваниями полости рта : автореф. дис. .канд. мед. наук: 14.00.09 / Митропанова М.Н. Краснодар, 2006.-22с.

52. Модуляция клеток иммунной системы лактобактериями / В.В. Зорина и др.. // Журн. Микробиологии 2004.-№6. -С.57-60

53. Мосолов, В.В. Протеолитические ферменты / В.В. Мосолов М.: Наука, 1971. - 404с.

54. Мустафа Мохд, О.Х. Дефекты микробицидной функции нейтрофилов новорожденных с диабетической фетопатией и их коррекция ликопидом: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.09 / Мустафа Мохд, О.Х. Краснодар, 2006.- 20с.

55. Несмеянов, В. А. Глюкозаминилмурамилпептиды: на пути к пониманиюмолекулярного механизма биологической активности / В.А. Несмеянов //108

56. Международный журн. по иммунореабилитации 1998. -№10.- С. 19-29.

57. Нестерова, И.В. Миелопид -нейроиммунорегулятор функции / НГ И. В. Нестерова, М.А. Светличная, Н.В. Колесникова // Современные проблемы клинической и экспериментальной психоней-роиммунологии: тез. докл. симпоз. с междунар. участием.- Томск, 1992.- С.69.

58. Никулин, Л.А. Особенности фагоцитарной и микробицидной функций нейтрофилов с задержкой внутриутробного развития/ Л.А. Никулин, Н.В. Колесникова, О.В. Первишко // Успехи современного естествознания. 2004.- №2.- С.144-146.

59. Облепиховое масло :фармакоп. ст. предприятия . / ЗАО «Алтайвитамины» М., 2002.-11с.

60. Овчинников, Ю.А. Биоорганическая химия. / Ю.А. Овчинников.- М.: Просвещение, 1987.-815с.

61. Определение антиоксидантной активности экстрактов растительного сырья методом катодной вольтамперометрии / Е.И. Короткова и др. // Хим. фармац. журн. - 2003. - Т.37, №9. - С. 55-56.

62. Остерман, Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование : практич.пособие / Остерман Л.А.- М.: Наука, 1981. 288 с.

63. Остерман, Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот:учеб. пособие /Л. А. Остерман. М.: Московского центра непрерывного математ. образования , 2002.- 248 с.

64. Пат. 2238554 Российская Федерация, МКИ 001 N33/15 N27/26. Способ определения суммарной антиоксидантной активности биологически активных веществ / В.П. Пахомов и др. (РФ). — № 2003123072/15; заявл. 25.07. 03; опубл. 20.10.04, Бюл. № 15. 3 с.

65. Пепсин, микробиальный ренин и закваски для сыра. Электронный ресурс. Электрон. дан.(2 файла).- М.,2009- Режим доступа: http://meito-sangyo.ru/index.html. Загл. с экрана.

66. Пептидные препараты / С. В. Ковалёва и др.. // Вопросы биологич. мед. и фармац. химии. -2003. -№3. -С.5-12.

67. Первишко, О.В. Нарушения врожденной иммунной системы у маловесных новорожденных детей и возможности их коррекции ликопидом : автореф. дис. . канд. мед. наук : 14.00.09/ Олеся Валерьевна. Первишко.- Краснодар,2006.-23с.

68. Петухов, В. А. Нарушение функций печени и дисбиоз при липидном дистресс-синдроме Савельева и их коррекция пробиотиком Хилак-форте / В.А. Петухов// Рус. Мед. журн. 2002. - Т. 10, № 4. - С. 77-89.

69. Пинегин, Б. В. Полиоксидоний — новое поколение иммуномодуляторов с известной структурой и механизмом действия / Б. В. Пинегин // Аллергия, астма и клинич. иммунология.-2000.- №1.-С. 27-28.

70. Пинегин, Б.В. Определение естественных антител к N-ацетил-глюкозаминил-N- ацетилмурамилдипептиду в сыворотке крови здоровых людей / Б.В. Пинегин, A.B. Кулаков Е.В. Макаров// Иммунология. 1995. - №1. - С.42-45.

71. Покровский, В.И. Медицинская микробиология: учеб. пособие / В.И.Покровский, O.K. Поздеев,- М.: Гэотар, 1999. 1183 с.

72. Полиоксидоний — иммуномодулятор последнего поколения: итоги трехлетнего клинич. применения / Р.В. Петров и др.. // Аллергия, астма и клинич. иммунология.-1999. № 3.- С. 3-6.

73. Полюдек-Фабини, Р. Органический анализ:пер с нем. /.Р. Полюдек-Фабини, Т. Бейрих.- Л.:Химия, 1981. -624с.

74. Полянская, A.C. Аминокислоты и Белки: метод, разработка по лаб. раб. / Полянская, A.C., Шевелева А.О.- М.: Высш. шк., 1976.- 37с.

75. Применение глюкозаминилмурамилдипептида для профилактики и лечения послеоперационных инфекционных осложнений, а также гнойно-септических процессов у хирургических больных/ T.JI. Щельцина и др.. // Иммунология. 1993. - №2. - С.47-53.

76. Профилактика и лечение воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей препаратом ИРС-19/ Л.А. Лучихин и др..// Вестн. Оториноларингологии.-2000.-№1 .-С. 71-73.

77. Различие действия пептидов и составляющих их аминокислот на иммунный ответ и фагоцитоз мышей / Белокрылов Г.А. и др.. // Иммунология. 1991. - №5. - С.46-48.

78. Рево, А.Я. Малый практикум по органической химии: учеб. пособие для студ. / А. Я. Рево, В. В. Зеленкова. М. : Высш. шк., 1980. - 175 с.

79. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных заболеваний/ А.П. Шепелев и др. // Вопр. мед. химии. 2000. —Т.46, №2-С.7-13

80. Сенченко, С.П. Разработка методов анализа и оптимизация состава лекарственного препарата на основе гидролизата молочнокислых бактерий: дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / Сенченко Сергей Петрович.- Пятигорск, 2006.-165с.

81. Сетдикова, Н.Х. Влияние нового иммуностимулятора гликопина насостояние здоровья и некоторые показатели иммунной системы здоровых добровольцев/ Н.Х Сетдикова // Иммунология. 1995. - №2. -С.49-54.

82. Синтез и идентификация органических соединений. / Гинзбург О.Ф и др.. -М.: Высш. шк., 1989.-318с.

83. Смирнов, B.C. Иммунодефицитные состояния / B.C. Смирнов, И.С. Фрейдлин. СПб: Фолиант, 2000. - 568с.

84. Снижение продукции IgE рекомбинантными пептидами из основных белков аллергенов/ Е.В. Свирщевская и др.. //Иммунология.-2006. -№2. -С.91

85. Совместное развитие бифидобактерий и молочнокислых микроорганизмов в молоке/ Т. М. Эрволдер и др. . //Биологические и химические исследования в сыроделии. Углич, 1986. -С.87-91

86. Состояние системы нейтрофильных гранулоцитов при экспериментальной иммунизации аллергеном амброзии / И. В. Нестерова и др.. // Гематология и трансфузиология. -1998.-Т.43, №2.-С.19-22.

87. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии / О.Б. Рудаков и др.. Воронеж: Водолей, 2004. - 528 с.

88. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов / Б.Н. Степаненко. М.: Высш. шк., 1978. - 256 с

89. Степаненко, П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: учеб. /П.П. Степаненко.-М: Лира,2002.-415 с.

90. Степаненко, Р.Н Иммуностимулятор миелопид, как средство форсификации вакцинных препаратов / Р.Н. Степаненко // Международный журн. по иммунореабилитации.- 1998.-№8.- С.208

91. Стыскин, Е. JI. Практически Высокоэффективная жидкостная хроматография: учеб. пособие / E.JI.Стыскин, Л.Б.Ициксон, Е.В.Брауде -М.: Химия, 1986.-288с.

92. Телишевская, Л .Я. Белковые гидролизаты. Получение, состав, применение / Л.Я Телишевская М.: Аграрная наука, 2000. - 295с.

93. Тельг, Г. Элементный ультрамикроанализ: пер. с англ./ Г. Тельг. -М.:Высш. шк., 1973.-256 с.

94. Теплова, С.Н. Характер нарушения фагоцитарного звена иммунитета при ожоговых болезнях/ С.Н. Теплова, К.В. Никушкина, Л.И. Крюкова // Сб. тр. 1 научн. конф. Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов. — СПб., 1997. С.331

95. Терра Медика нова Определение белка в сыворотке крови. Электронный ресурс. Электрон, дан. ( 1 файл).-СПб., 2005,-Режим доступа: http://www.terramedica.spb.ru/ld32005/kozlov.htm. — Загл. с экрана.

96. Тюкавкина, H.A. Биоорганическая химия: учеб. для вузов / H.A. Тюкавкина, Ю.И. Бауков.-2-e изд., перераб. и доп. М.:Медицина, 1991.-526с.

97. Хаитов, Р. М. Вторичные иммунодефициты: клиника, диагностика, лечение / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология.-1999.- № 1.- С. 14-17.

98. Хаитов, Р. М. Основные принципы иммуномодулирующей терапии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Аллергия, астма и клинич. иммунология.-2000.-№ 1.- С. 9-16.

99. Хаитов, Р. М. Отечественные иммунотропные лекарственные средства последнего поколения и стратегия их применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, Т.М. Андронова// Леч. Врач.-1998.-№ 4.- С. 46-51.

100. Хаитов, Р. М. Современные представления о защите организма от инфекции / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. -2000.-№ 1. -С. 61-64.

101. Хаитов, Р. М. Экологическая иммунология.: учеб. для студ. мед. вузов/ P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин Х.М. Истамов-М.: Изд. ВНИРО, 1995.-202с.

102. Хаитов, P.M. Главная мишень иммуномодулирующего действия ГМДП (ликопида)/Хаитов P.M. //Иммунология.- 1994.-№2.- С.47-50.

103. Хаитов, P.M. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Клинич. медицина. -1996. Т.74, №8.-с. 7-12.

104. Хаитов, P.M. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение/ P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2003. - № 4. -С. 196-203.

105. Хаитов, P.M. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 2000. -№5 С. 4-7.

106. Характеристика микроорганизмов, колонизирующих кишечник человека / Б.А. Ефимов и др..//Журн. Микробиологии 2002.-№5. -С.98-104.

107. Черешнева, М.В. Иммунокоррекция герпетических заболеваний глаз/ М.В. Черешнева, Л.Б. Долгушина, Д.Г. Диалова // Междунар. журн. по иммунореабилитации. 1998. - №8. - С.51.

108. Штаркман, И. Н. Антиоксидантные свойства аминокислот и образование долгоживущих радикалов белка под действиемрентгеновского излучения : дис. . канд. биолог, наук: 03.00.02 / Штаркман Илья Николаевич. Пущино, 2008. - 107 с.

109. Экспериментальное изучение иммунотропной активности фармакологических препаратов/ P.M. Хаитов и др.. // Ведомости фармакологического комитета.-1999.-№ 1.-С. 31-36.

110. Энгельгардт, X. Руководство по капиллярному электрофорезу: пер. с нем. / X. Энгельгардт X.- М.: Науч. совет РАН по хроматографии, 1996. -112с.

111. Якубке, Х.-Д. Аминокислоты, пептиды, белки. : пер с нем./. Х.-Д. Якубке, X. Ешкайт-М.:Мир, 1985.-386с.

112. Яшин, А.Я. Прибор для определения антиоксидантной активности растительных лекарственных экстрактов и напитков / А.Я. Яшин, Я.И. Яшин // Журн. междунар. информационная система по резонансным технологиям 2004. - №34 - С. 10-14

113. Ahrens, J. Efficacy of the immunostimulant Broncho-Vaxom / J. Ahrens, M. Wiedenbach // Schweiz Med Wochenschr.- 1984.-Vol.l 14, № 25.-P.932-934.

114. Andronova, T. The structure and immunological fanction of glucosaminylmuramyl peptides./ T . Andronova //Sov. Medical Reviews. D. Immunology. Harwood Academic Publishers.- 1991. -Vol. 4. -P. 1-63.

115. Bacterial colonization of distal airways in healthy subjects and chronic lung disease: a bronchoscopic study. / H. Cabello et al. //Eur Respir J.-1997.-Vol.10. -P.l 137-44

116. Bradford, M. M. A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye/ M.M. Bradford//Binding. Anal. Biochem.-1976.-Vol.72.-P.248-254.

117. Determination of total protein by spectrophotometiy: advantages and disadvantages of proposed methods./D. Zaia et al. // Química Nova.-1998.-Yol.21.-P. 787-793.

118. Effects of an immunostimulating agent on acute exacerbations and hospitalizations in patients with chronic obstructive pulmonary disease. / J. P. Collet et al. //Am J Respir Crit Care Med. 1997. - Vol.156, № 6. -P.-1719-1724.

119. Efficacy of a polyvalent bacterial lysate in children with recurrent respiratory tract infections. // S.B. Ruah et al.. // Adv Ther.-2001.- Vol.18, № 4.-P.151-162.

120. Efficacy of oral immunotherapy on respiratory infections in hemodialysis patients: a double-blind, placebo-controlled study. / C. Tielemans et al.. // Clin Nephrol. -1999. -Vol. 51, № 3.- P.153-160.

121. Elevaterd circulating levels of inflammatory cytokines and bacterial endotoxin an adults with congenital heart disease/ R. Sharma et al. // Am. J. Cardiol.-2003.-Vol. 15, №92.-P. 188-193.

122. Ellouz, E. Minimal structural requirements for adjuvants activity of bacterial peptidoglycan derivates. / E. Ellouz // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1974.-Vol.59. P.1317-1325.

123. Finkel, T. Oxidands, oxidativ stress and the biology of ageing. / T. Finkel, N.J. Holbrook // Nature. 2000. - Vol. 408, № 6809. - P .239-247 .

124. Halliwell, B. Antioxidant defence mechanisms: from the beginning to the end (of the beginning) / B. Halliwell // Free Radic. Res. 1999. - Vol. 31, №4.-P. 261-272.

125. Immunostimulation with OM-85 in children with recurrent infections of the upper respiratory tract: a double-blind, placebo-controlled multicenter study. / U.B. Schaad et al. // Chest. -2002. -Vol.122, № 6. -P.2042-2049.

126. Inohara, N. Host recognition of bacterial muramyl dipeptide mediated through NOD2: Implications for Crohn's disease. / N. Inohara // J. Biol. Chem.-2003.-Vol. 278 -P. 5509-5512.

127. Khaidukov, S.V. N-acetylglucosamine-containing muramyl peptides directly affect macrophages. / S.V. Khaidukov, R.I Komaleva, V.A. Nesmeyanov// Int. J. Immuiopharmacol. -1995 .-Vol. 17. -P. 903-911.

128. Laemmli, U. K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage / U. K. Laemmli //Nature.-1970-Vol. 227.-P.680 — 685.

129. Lederer, E. Natural and synthetic immunomodulators derived from the mycobacterial cell wall / E. Lederer // Advances in Immunomod.- Roma; Milan:Pythagora Press, 1988. P.9-36

130. Liposomal muramyl tripeptide up-regulates interleukin-1 -alpha, interleukin-l-beta, tumor necrosis factor-alpha, interleukin-6 and interleukin-8 gene expression in human monocytes. / Asano T. et al. // Pharmac. Ezp. Ther.-1994.-Vol. 268.- P.1032-1039.

131. Mari, D. Cronic heart failure and the immune system / D. Mari, F. Di Berardino, M. Cugno // Clin. Rev. Allergy Immunol. 2002. - Vol. 23, №3. - P. 325-340.

132. Ogura, Y. Nod2, a Nodl/Apaf-1 family member that is restricted to monocytes and activates NF-kB. J./ Y. Ogura // Biol. Chem.-2001.-Vol.276-P. 4812-4818.

133. Oral immunization with bacterial extracts for protection against acute bronchitis in elderly institutionalized patients with chronic bronchitis./ B. Orcel et al. // Eur Respir J. -2006.-Vol.7, №3. -P.446-52.

134. Oral purified bacterial extracts inchronic bronchitis and COPD: Systematic Review. / C. Steurer-Stey et al. // Chest. -2004.- Vol. 126.-P. 1645-1655

135. Peptidoglycan molecular requirements allowing detection by Nodi and Nod2./ S.E. Girardin et al. // J. Biol. Chem.-2003.-Vol.278.-P. 4170241708.

136. Pneumococcal infection and immunologic response to pneumococcal vaccine in chronic obstructive pulmonary disease. / A.L. Davis et al.. // Chest. -1987.-Vol. 92.-P.204-212.

137. Sabroe, I. Toll-like receptors in health and disease: complex questions remain. /1. Sabroe //J. Immunol. -2003-Vol.l71.-P.1630-1635.

138. Sharma, R. Immune and neurohormonal pathways in chronic heart tailure/ R. Sharma, S. Anker // Congest. Heart Fail. 2002. - Vol. 8, № 1. - P. 2328.

139. Shimizu, T., Combined effects of synthetic lipid A analogs or bacterial lypopolysaccharide with glucosaminylmuramyl dipeptide on antitumor activity against meth A fibrosarcoma inmice./ T. Shimizu //1.munopharmac. 1992.-Vol.14.- P. 1415-1420.

140. Stimulation of nonspecific immunity to reduce the risk of recurrent infections in children attending day-care centers. / J. P. Collet et al.. // Pediatr Infect Dis J. 1993.- Vol.12, № 8.-P.648-52.

141. Synergistic epithelial responses to endotoxin and a naturally occurring muramyl peptide./ T.A. Flak et al.. // Infec. Immun.-2000.-Vol.68, № 3. -P. 1235-1242.

142. Use of a polyvalent bacterial lysate in patients with recurrent respiratory tract infections: results of a prospective, placebo-controlled, randomized, double-blind study. /M. Rutishauser et al.. // Adv Ther.-1998.-Vol.-15, № 6.-P.330-341

143. Vasselon , T. Toll receptors: a central element in innate immune responses./ T. Vasselon, P. A. Detmers// Infect. Immun. -2002.-Vol.70, № 3.- P. 10331041.

144. Vermeulen M. W., Processing of Bacillus subtilis peptidoglycan by mouse macrophage cell line./ M. W. Vermeulen, G.R. Gray // Infect. ImmunoL.-1984.- Vol.46.-P. 476-478.

145. Wright, S. Toll, a new piece in the puzzle of innate immunity / S. Wright //J. Exp. Med.-1999.-Vol. 189, № 4 .-P. 605-609.