Исследование однородительской дисомии и микросателлитной нестабильности при ранней эмбриональной гибели человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Никитина, Татьяна Владимировна

• Никитина, Татьяна Владимировна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Никитина, Татьяна Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ОНТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ ПРИ РАННЕЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ГИБЕЛИ У ЧЕЛОВЕКА.

1.2. ФЕНОМЕН ГЕНОМНОГО ИМПРИНТИНГА.

1.2.1 .Импринтинг на уровне целого генома.-.

1.2.2. Импринтированные участки генома.

1.2.3. Эволюционное значение импринтинга.

1.3. ОДНОРОДИТЕЛЬСКАЯ ДИСОМИЯ.

1.3.1.Механизмы формирования однородительской дисомии.

1.3.2. Фенотипические последствия однородительской дисомии.

1.3.3. Импринтированные районы генома человека.

1.3.4. Клиническая значимость однородительской дисомии.

1.3.5. Перспективы исследования однородительской дисомии у человека.

1.4. МИКРОСАТЕЛЛИТНАЯ НЕСТАБИЛЬНОСТЬ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

2.1. МАТЕРИАЛ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБИОНАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ И ПОЛУЧЕНИЕ ХРОМОСОМНЫХ ПРЕПАРАТОВ.

2.3. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК.

2.4.ДНК-МАРКЕРЫ, ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РОДИТЕЛЬСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ХРОМОСОМ.

2.5. ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ (ПЦР).

2.6. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ.

2.7. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. СТРУКТУРА ХРОМОСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ

РАННЕЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ГИБЕЛИ.

3.2. ВЫБОР ПОЛИМОРФНЫХ ДНК-МАРКЕРОВ И АНАЛИЗ РОДИТЕЛЬСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ХРОМОСОМ ПРИ РАННЕЙ ГИБЕЛИ ЭМБРИОНОВ ЧЕЛОВЕКА.

3.3. АНОМАЛИИ КАРИОТИПА, НЕ ОБНАРУЖЕННЫЕ ПРИ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ.

3.4. МИКРОСАТЕЛЛИТНАЯ НЕСТАБИЛЬНОСТЬ ПРИ РАННЕЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ГИБЕЛИ.

3.5. ЛОЖНОЕ ОТЦОВСТВО.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование однородительской дисомии и микросателлитной нестабильности при ранней эмбриональной гибели человека»

Невынашивание беременности является одной из наиболее серьезных проблем в репродукции человека. Известно, что до 50-70% зигот погибают уже в доимплантационном периоде, а 15-20% клинически распознаваемых беременностей заканчиваются спонтанными абортами [Сагг, 1983]. Причинами такой высокой смертности зародышей человека могут быть нейроэндокринные нарушения и инфекционные заболевания у матери, иммунологические конфликты между матерью и плодом, неблагоприятное воздействие окружающей среды и ряд других. Однако наиболее существенная роль в нарушении раннего эмбрионального развития принадлежит генетическим факторам [Кулешов, 1979; Назаренко, 1993]. Цитогенетические аномалии обнаруживаются в среднем у 50% абортусов [Eiben, 1990, Boue et al., 1985]. Причина гибели другой половины зародышей, с нормальным кариотипом, как правило, не выявляется.

Следует отметить, что наличие нормального кариотипа у эмбриона еще не означает сбалансированности его генома вследствие явления геномного импринтинга (память родительского происхождения участка генома, от англ. imprint - отпечаток). Необходим еще и баланс хромосом материнского и отцовского происхождения, обеспечивающий нормальное развитие зародыша в результате наличия в импринтированных участках генома моноаллельной экспрессии (или материнской или отцовской) некоторых важных для развития генов. Отклонение от этой закономерности вследствие делеции этих генов или однородительской дисомии (ОРД) по данным хромосомам (ошибочного происхождения обоих гомологичных хромосом от одного родителя) в обоих случаях приводит к функциональной нуллисомии по критическому для нормального развития гену. Это событие, в свою очередь, может вести не только к рождению детей с врожденными пороками развития и некоторыми уже достаточно хорошо очерченными синдромами (например, такими как синдромы Прадера-Вилли или Энгельмана при дисбалансе кластера импринтированных генов на хромосоме 15), но и, по-видимому, может способствовать ранней эмбриональной гибели. К настоящему времени эффекты импринтинга достаточно хорошо изучены на таком модельном объекте как мышь. Интересно, что около половины этих эффектов представляют собой гибель организма на эмбриональной стадии, и ОРД по некоторым хромосомам у мышей проявляется эмбриональной летальностью [Cattanach and Jones, 1994].

К настоящему времени установлено, что ОРД по некоторым хромосомам набора у человека может быть фенотипически нейтральной, в то время как для других хромосом (особенно для хромосом 7, 11, 14 и 15) она приводит к серьезному нарушению развития и достаточно четко идентифицируемым синдромам. В то же время, из 47 возможных типов однородительского наследования целых хромосом у человека (44 типа по 22 аутосомам от каждого родителя и 3 типа по половым хромосомам), около половины вариантов ОРД еще не описаны. Наша рабочая гипотеза заключалась в том, что ОРД по некоторым хромосомам набора человека может быть причинно связана с ранней гибелью зародышей и не выявляться у живорожденных индивидов. В первую очередь, вследствие эволюционной консервативности геномов млекопитающих, это может быть справедливо для хромосом человека, несущих участки, синтенные импринтированным районам генома мыши. Учитывая вышеизложенное, не исключено, что и у части спонтанно погибших зародышей человека кариотип мог быть псевдонормальным, то есть несущим однородительскую дисомию (ОРД) по какой-либо хромосоме набора, что и явилось причиной его ранней гибели.

Исследования по поиску ОРД при эмбриональной гибели человека только начинают проводиться. В мировой литературе имеются всего три работы по этому вопросу и сделаны они либо на очень ограниченном количестве материала [Henderson, 1994; Shaffer et al., 1998], либо на тотальной выборке спонтанных абортусов, не обследованных при помощи объективных методов [Smith et al., 1998].

В настоящее время достаточно четко диагностируемыми с помощью объективных методов исследования формами патологии беременности являются анэмбриония (blighted ovum), характеризующаяся отсутствием сформированного эмбриона в полости зародышевого мешка, и неразвивающаяся беременность (missed abortion), при которой развитие зародыша прекращается, однако он остается еще некоторое время (до 2-8 недель) в полости матки. Нам представлялось целесообразным проверить гипотезу о возможной роли ОРД в пренатальной смертности у человека на кариотипически нормальных случаях анэмбрионий и неразвивающихся беременностей. При этом наибольший интерес представлял поиск ОРД по тем хромосомам набора, которые имеют участки, синтенные импринтированным районам генома мыши, и, вместе с тем, ОРД по которым не обнаруживается среди живорожденных индивидов. Провести такой анализ возможно с помощью системы полиморфных молекулярно-генетических маркеров на исследуемые хромосомы путем изучения характера их сегрегации в семьях с невынашиванием беременности. Помимо оценки возможности возникновения ОРД, такое исследование интересно также с точки зрения определения частоты возникновения мутаций у спонтанных абортусов (микросателлитной нестабильности), а также для оценки частоты ложного отцовства в исследуемой популяции.

Цель работы

Оценить возможный вклад однородительской дисомии по хромосомам, имеющим участки, синтенные импринтированным районам генома мыши, и микросателлитной нестабильности в эмбриональную гибель у человека.

Задачи исследования:

1. Провести цитогенетический скрининг спонтанных абортусов человека (анэмбрионии и неразвивающиеся беременности) и сформировать выборку погибших эмбрионов с нормальным кариотипом.

2. Исследовать полиморфизм ряда тетрануклеотидных ДНК-маркеров 7 хромосом набора в русской популяции Западно-Сибирского региона и оценить их информативность для анализа родительского происхождения хромосом.

3. С помощью системы отобранных полиморфных молекулярно-генетических маркеров провести исследование родительского происхождения хромосом 2, 9, 11, 16, 19, 20 и 21 у спонтанных абортусов с целью поиска случаев однородительской дисомии.

4. Провести сравнительное исследование результатов цито-генетического и молекулярно-генетического анализов спонтанных абортусов.

5. Провести анализ случаев несоответствия характера сегрегации аллелей полиморфных ДНК-маркеров или появления новых аллельных вариантов в исследованных семьях с выяснением возможных причин этих событий, в частности, ложного отцовства и микросателлитной нестабильности.

Научная новизна. В работе впервые охарактеризован ряд тетрануклеотидных микросателлитных ДНК-маркеров хромосом 2, 9, 11, 16, 19, 20 и 21 в русской популяции и определена их информативность для анализа родительского происхождения хромосом. Впервые на значительной выборке семей, имеющих спонтанные аборты, объективно идентифицированные с помощью клинико-инструментальных методов исследования, установлено, что однородительская дисомия по 7 хромосомам набора человека (хромосомы 2, 9, 11, 16, 19, 20 и 21), имеющим участки, синтенные импринтированным районам генома мыши, не вносит заметного вклада в гибель зародышей на эмбриональной стадии развития человека. С помощью анализа полиморфных микросателлитных ДНК-маркеров обнаружено, что стандартный цитогенетический анализ длительно культивируемых клеток спонтанных аборту сов не выявляет до 15% случаев мозаичных форм хромосомных нарушений. Показано существенное увеличение частоты мутаций в микросателлитных повторяющихся последовательностях ДНК у спонтанных абортусов по сравнению с нормальным уровнем мутационной изменчивости. Высказано предположение, что феномен микросателлитной нестабильности может быть косвенным показателем фактора отбора во внутриутробном периоде развития человека. Впервые определена частота ложного отцовства в русской популяции Западно-Сибирского региона.

Практическая значимость работы

Исследованные в настоящей работе высокополиморфные тетрануклеотидные 8ТЯ-локусы Б281242, 181304, Б1181983, Б168685, Б1682624, Б198601, Б198394, Б198559, Б208161, Б2181413 и Б2Ш435 могут быть рекомендованы для использования в молекулярно-генетических исследованиях (для анализа сцепления, картирования генов, в популяционной генетике и ДНК-диагностике наследственной патологии). Поскольку однородительская дисомия по 7 исследованным хромосомам набора человека (2, 9, 11, 16, 19, 20 и 21) не вносит существенного вклада в раннюю эмбриональную летальность у человека, то нет необходимости разработки мер ее специального учета в акушерско-гинекологической практике. Созданный банк ДНК семей с невынашиванием беременности может быть использован в дальнейших исследованиях причин эмбриональной гибели.

Обнаруженный в настоящей работе факт неполной выявляемости хромосомных аномалий у спонтанных абортусов при цитогенетическом анализе длительно культивируемых эмбриональных клеток говорит о необходимости дополнительного применения молекулярно-генетических методов при проведении таких исследований.

Обнаруженный феномен повышенного уровня мутационной изменчивости микросателлитных повторяющихся последовательностей ДНК у спонтанных абортусов позволяет предположить неслучайную ассоциацию этого явления с ранней эмбриональной гибелью. Это ориентирует на дальнейший поиск связи микросателлитной нестабильности с изменчивостью активных участков генома, которая может лежать в основе ранней гибели зародыша и спонтанного прерывания беременности.

При проведении медико-генетического консультирования и дородовой диагностике наследственной патологии необходимо учитывать достаточно высокую частоту ложного отцовства в русских популяциях.

11

Положения, выносимые на защиту:

1. Однородительская дисомия по 7 хромосомам набора человека (хромосомы 2, 9, 11, 16, 19, 20 и 21), имеющим участки, синтенные с импринтированными районами генома мыши, не вносит существенного вклада в гибель кариотипически нормальных зародышей на эмбриональной стадии развития человека.

2. Цитогенетический анализ длительно культивируемых клеток эмбрионов не выявляет до 15% хромосомных аномалий, идентификация которых становится возможной с помощью проведения дополнительного молекулярно-генетического исследования.

3. У спонтанно абортированных эмбрионов человека частота микросателлитной нестабильности существенно повышена по сравнению с нормальным уровнем, что может иметь неслучайную связь с ранней эмбриональной гибелью.

4. Частота ложного отцовства в русских популяциях ЗападноСибирского региона составляет 5,5%.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Никитина, Татьяна Владимировна

ВЫВОДЫ

1. В популяции Западно-Сибирского региона впервые охарактеризованы 11 высокополиморфных тетрануклеотидных ДНК-маркеров, локализованных в разных хромосомах человека. Выявлены не описанные ранее для европеоидной популяции аллели в ДНК-маркерах Б1682624, 0198601 и Б2181435.

2. Однородительские дисомии по хромосомам 2, 9, 11, 16, 19, 20 и 21, несущим участки, синтенные импринтированным регионам генома мыши, не вносят заметного вклада в гибель кариотипически нормальных зародышей человека в эмбриональном периоде развития.

3. Несовпадение результатов цитогенетического и молекулярно-генетического исследования хромосомной конституции спонтанных абортусов в основном вызывается хромосомным мозаицизмом в экстраэмбриональных тканях погибших зародышей. Обычный цитогенетический анализ длительных культур эмбриональных фибробластов не выявляет до 15% хромосомных аномалий у спонтанных абортусов.

4. У 14,5% погибших эмбрионов обнаруживается феномен микросателлитной нестабильности. Частота мутаций тетрануклеотидных микросателлитных ДНК-маркеров у погибших зародышей составляет О

9,8x10" на локус на гамету на поколение, что почти в 5 раз превышает спонтанный уровень мутирования данного типа 8ТЯ-локусов.

5. В популяции Западно-Сибирского региона в 5,5% семей обнаруживается ложное отцовство, что необходимо учитывать при проведении ДНК-диагностики наследственных болезней и медико-генетическом консультировании больных с наследственной патологией.

128

Считаю своим приятным долгом выразить глубокую благодарность доктору биологических наук, заведующему лабораторией цитогенетики НИИ МГ ТНЦ РАМН С.А.Назаренко как инициатору и руководителю настоящей работы. Выражаю искреннюю признательность коллегам по работе Евдокимовой В.Н., Сухановой H.H., Лебедеву И.Н., Тимошевскому В.И и всем сотрудникам лаборатории цитогенетики за поддержку, помощь в выполнении работы и обсуждении ее результатов. Огромная благодарность главному врачу Генетической клиники Л.П.Назаренко, врачам Т.Л.Новоселовой, М.О.Филипповой, М.П.Корф, а также среднему медперсоналу за помощь в сборе материала для настоящей работы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Необходимость изучения причин эмбриональной гибели у человека продиктована довольно высоким уровнем репродуктивных потерь. При этом цитогенетическое обследование в среднем у 50% погибших эмбрионов выявляет аномалии кариотипа, однако причина гибели другой половины, как правило, остается неясной.

Суть нашей рабочей гипотезы, проверке которой было посвящено данное исследование, состояла в том, что у части цитогенетически нормальных погибших зародышей человека кариотип может быть псевдонормальным, то есть нести внешне никак не детектируемую ОРД по какой-либо хромосоме набора. Вследствие явления геномного импринтинга, достаточно хорошо установленного у человека только по некоторым хромосомам набора (особенно по хромосомам 7, 11, 14 и 15), не исключена возможность того, что ОРД по другим, еще не идентифицированным до сих пор хромосомам, может быть причиной ранней эмбриональной гибели зародышей. К настоящему времени эффекты импринтинга достаточно хорошо изучены на таком модельном объекте как мышь. При этом показано, что около половины этих эффектов представляют собой гибель организма на эмбриональной стадии, и ОРД по некоторым хромосомам у мышей проявляется эмбриональной летальностью [Cattanach and Jones, 1994]. Учитывая высокую консервативность геномов млекопитающих, мы предположили, что на предмет поиска подверженных импринтингу хромосом у человека прежде всего должны быть обследованы те из них, которые имеют участки, синтенные импринтированным районам генома мыши. В качестве таких хромосом были отобраны 6 хромосом набора человека - 2, 9, 11, 16, 19, 20, а хромосома 21 была включена как обнаружившая ОРД, связанную с ранней эмбриональной гибелью [Henderson et al., 1994].

С целью проверки высказанной гипотезы нами была осуществлена следующая стратегия поиска. Сначала мы провели цитогенетический скрининг случаев спонтанного прерывания беременности, имевших место у женщин в г.Томске за период с 1990 по 1998 годы. Были введены в культуру клетки экстраэмбриональных тканей и получены хромосомные препараты от 340 спонтанных абортусов, 208 из которых продемонстрировали отсутствие каких-либо хромосомных аномалий. Из их числа для настоящего исследования было отобрано 55 эмбрионов с диагнозом анэмбриония и неразвивающаяся беременность. Это две формы патологии беременности, при которых с помощью объективных методов исследования, в частности ультразвуковой диагностики, достоверно устанавливается факт ранней эмбриональной гибели: либо отсутствие сформированного эмбриона в полости зародышевого мешка (анэмбриония), либо регистрируется прекращение развития зародыша (неразвивающаяся беременность). Из некультивируемых тканей данных эмбрионов и из периферической крови их родителей был создан банк ДНК, который послужил материалом для дальнейшего исследования - поиска возможных случаев однородительской дисомии у спонтанно погибших зародышей.

Определение родительского происхождения хромосом может быть достаточно эффективно осуществлено с помощью набора высокополиморфных молекулярно-генетических маркеров, локализованных на исследуемых хромосомах. Учитывая существование заметных межпопуляционных различий в распределении аллелей, а также то обстоятельство, что информация о ДНК-маркерах была получена нами из базы данных GDB и в ряде случаев не содержала сведений об аллельных частотах и некоторых других характеристиках выбранных маркеров, мы провели специальное изучение степени информативной ценности используемых локусов для оценки родительского происхождения хромосом. На основе созданного нами банка ДНК были отработаны условия ПЦР-амплификации ДНК-маркеров, а также получены данные об их аллельном спектре и гетерозиготности, которые послужили для дальнейшего анализа сегрегации аллелей у членов 55 семей с эмбриональной летальностью. Всего в нашем исследовании было использовано 22 БТЯ-локуса. Из них одиннадцать тетрануклеотидных ДНК-маркеров - 0281242, 181304, 01181983, Б168685, Б1682624, Б198601, 0198394, 0198559, 0208161, 02181413 и 02181435 были охарактеризованы впервые для русской популяции. Следует отметить, что нами впервые были найдены не описанные ранее аллели для трех разных ДНК-маркеров - 01682624 (155 п.о.), 0198601 (232 п.о.) и 02181435 (191 п.о.).

Опираясь на полученные данные, мы провели анализ характера сегрегации хромосом 2, 9, И, 16, 19, 20 и 21 в семьях с погибшим эмбрионом и не обнаружили случаев однородительской дисомии по целым хромосомам. Это позволило нам сделать заключение, что ОРД по хромосомам, имеющим участки, синтенные импринтированным регионам генома мыши, не вносит заметного вклада в гибель кариотипически нормальных зародышей человека на эмбриональной стадии развития.

Следует, однако, отметить, что молекулярно-генетический анализ семейного материала со спонтанно погибшими зародышами дал другую достаточно ценную информацию. В частности, при исследовании сегрегации хромосомы 19 в семье № 263 у абортуса была обнаружена потеря гетерозиготности по маркеру 0198601: у эмбриона присутствовал только один аллель, полученный от отца, при отсутствии аллеля матери. Такое событие обычно отражает делецию участка хромосомы матери, и, если такая делеция приходится на критический для нормального развития участок генома, то моносомия по данному гену или генам может привести к гибели зародыша. Кроме того, если в этом участке содержится импринтированный ген, то делеция может привести к его функциональной нуллисомии, что также может быть причиной гибели эмбриона. Интересно отметить, что потеря гетерозиготности участков, несущих гены-супрессоры опухолей, с высокой частотой наблюдается в раковых клетках. Например, при опухоли Вильмса (ген локализован в хромосоме 11) и остеосаркоме (ген локализован в хромосоме 13) теряется гомолог, полученный именно от матери, а отцовский ген вследствие импринтинга не экспрессируется. В описываемом случае мы можем лишь предполагать наличие важного в развитии гена в участке, сцепленном с локусом 0198601, так как этот маркер не имеет точной хромосомной локализации, и данный эмбрион требует дальнейшего обследования при помощи большего количества ДНК-маркеров на хромосому 19.

При проведении молекулярно-генетического анализа в семьях со спонтанными абортами в пяти случаях было выявлено несоответствие полученных данных результатам цитогенетического обследования эмбрионов. Мы обнаружили три абортуса с триплоидным клеточным клоном и по одному эмбриону с мозаичными трисомиями хромосом 16 и 19. В одном случае (1,8%) несоответствие объяснялось контаминацией длительной культуры фибробластов плода клетками материнского происхождения, в остальных случаях наиболее вероятной причиной нам представляется существование мозаицизма в экстраэмбриональных тканях абортусов. Таким образом, в настоящем исследовании было установлено, что при цитогенетическом анализе длительно культивируемых клеток спонтанных абортусов до 15% хромосомных аномалий могут оставаться невыявленными. Этот факт диктует необходимость использования для уточнения структуры хромосомных аномалий при невынашивании беременности, помимо стандартных цитогенетических, еще и молекулярно-генетические методы.

При анализе сегрегации хромосом в семьях со спонтанными абортусами мы обнаружили ряд отклонений от менделевского наследования, когда эмбрион демонстрировал наличие аллеля, не совпадающего с аллелями отца или матери. Этот эффект был выявлен у

14,5% погибших эмбрионов по 7 полиморфным ДНК-маркерам, локализованным в 6 различных хромосомах. Высокое значение вероятности отцовства (99,99%) исключило в этих семьях ложное отцовство как возможную причину такого несовпадения. Достаточно приемлемым объяснением появления новых аллелей у спонтанных абортусов может быть высокая частота возникновения у них новых мутаций или феномен нестабильности микросателлитных повторов. Это явление впервые было описано в литературе относительно недавно, в 1993 году, для такой патологии как колоректальный рак [Aaltonen et al., 1993; Thibodeau et al., 1993] и позже было подтверждено для некоторых других онкологических заболеваний [Orth et al., 1994; Stratakis et al., 1996]. В 1995 году появилась первая работа, в которой у 3 из 30 исследованных спонтанных абортусов (10%) была обнаружена нестабильность микросателлита, расположенного в 3'-конце протоонкогена H-ras, локализованного на хромосоме 11 в сегменте 11р15 [Kiaris et al., 1995]. Позднее Spandidos с соавторами [Spandidos et al., 1998] с помощью 7 микросателлитных маркеров выявили достаточно высокий уровень нестабильности микросателлитов у спонтанных абортусов (в 8 из 35 случаев - 23%).

Следует указать на то, что в норме частота мутирования тетрануклеотидных повторов при передаче от родителей здоровым детям составляет 2,1 х 10"3 на локус на гамету на поколение для аутосомных STR [Brinkmann et al., 1998; Weber, Wong, 1993] и 0,2% для STR Y-хромосомы [Heyer et al., 1997]. При этом подавляющая часть данных мутаций (около 90%) заключалась в потере или приобретении одного повтора и большинство мутационных событий происходило в мужских половых клетках (в 4-6 раз чаще по сравнению с женскими). Факт более частого мутирования микросателлитных повторов у мужчин объясняется тем обстоятельством, что между зиготой и сперматозоидом происходит в 10 раз больше клеточных делений, чем между зиготой и яйцеклеткой [Weber, Wong, 1993]. Интересно, что в обследованном нами материале в тех случаях, когда можно было установить родительское происхождение мутации микросателлитных повторов, они произошли в мужском гаметогенезе.

В настоящем исследовании феномен микросателлитной нестабильности у спонтанных абортусов обнаружен со значительно более высокой частотой по сравнению со здоровыми живорожденными детьми, и л составляет 9,8 х 10" на локус на гамету на поколение, что почти в 5 раз превышает спонтанный уровень мутирования для данного типа STR-локусов. Этот факт отражает высокий уровень нестабильности генома у спонтанно погибших зародышей человека и, по-видимому, может иметь непосредственное отношение к ранней эмбриональной гибели человека. Интересно отметить, что в нашей работе у спонтанных абортусов выявляется более разнообразный спектр мутаций тетрануклеотидных повторов, по сравнению с таковым у нормальных индивидов, приводимым в вышеуказанных работах [Weber, Wong, 1993; Brinkmann et al., 1998]. В частности, нами были зарегистрированы не только одношаговые мутации, хотя их и было большинство, но и изменение длины аллеля сразу на 2, 3 или даже 4 тетрануклеотидных звена, а также появление третьего аллеля -соматической мутации в тканях зародыша. Последний тип мутаций не описан у нормальных индивидов, но довольно часто отмечается в лимфобластоидных клеточных линиях, трансформированных in vitro с целью получения достаточного количества клеточного материала и ДНК в коллекции референсных СЕРН-семей [Weber, Wong, 1993]. Можно предполагать, что микросателлитная нестабильность у спонтанных абортусов отражает высокую частоту возникновения мутаций у некоторых эмбрионов, что может затрагивать и активные участки генома, играющие критическую роль в жизнеспособности эмбриона. Это дает основание полагать, что феномен микросателлитной нестабильности может быть косвенным показателем фактора отбора во внутриутробном периоде развития человека. Возможно, в таких семьях существуют наследственные факторы, обусловливающие невынашивание беременности. В пользу этого предположения говорит факт существования ассоциации между отягщенным акушерским анамнезом в семье и наличием микросателлитной нестабильности у абортуса. Нам представляется, что одним из таких факторов может быть гетерозиготное носительство родителями рецессивных дефектных генов системы репарации ДНК, которые у некоторых эмбрионов переходя в гомозиготное состояние, приводят к нарушению процесса репарации ДНК, нестабильности генома и гибели этих зародышей. Справедливость этого предположения может подтверждаться тем обстоятельством, что мутации de novo микросателлитных локусов у обследованных нами абортусов обнаружены в 7 ДНК-маркерах, локализованных на 6 различных хромосомах набора, что говорит об общей нестабильности генома у погибших зародышей. Поэтому специальное, более масштабное исследование явления микросателлитной нестабильности при эмбриональной гибели у человека представляется нам интересным и весьма перспективным.

Обследование 55 семей из русской популяции Западно-Сибирского региона с применением большого количества высокополиморфных ДНК-маркеров впервые позволило с высокой степенью достоверности определить частоту "ложного отцовства" в популяции, которая составила 5,5%. Эти данные необходимо учитывать при проведении ДНК-диагностики наследственных болезней и медико-генетическом консультировании больных с наследственной патологией.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Никитина, Татьяна Владимировна, 1999 год

1. Закс Л. Статистическое оценивание.- М.: Статистика, 1976.- 598 с.

2. Кулешов Н.П. Частота возникновекния и судьба хромосомных аномалий у человека: Автореф. дисс. докт. мед. наук,- М., 1979,- 45с.

3. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии: Молекулярное клонирование: Пер. с англ.- М.: Мир., 1984,- 479с.

4. Назаренко С.А. Изменчивость хромосом и развитие человека. -Томск.: Изд-во Томского ун-та, 1993,- 200 с.

5. Назаренко С.А., Никитина Т.В. Униродительская дисомия в исследовании проблемы геномного импринтинга у человека. В сб. Генетика человека и патология,- Томск. 1997- С.36-48.

6. Перепечина И.О., Гришечкин С.А. Вероятностные расчеты в ДНК-дактилоскопии: Методические рекомендации. М.: ЭКЦ МВД России, 1996,-16с.

7. Редина O.E. Геномный импринтинг как универсальный механизм функции генов в развитии. // Генетика.- 1996,- Т.32,- N 5,- С.609-613.

8. Сапиенца К. Геномный импринтинг // В мире науки,- 1990,- №12,-С. 14-20.

9. Флейс Дж. Статистическое оценивание таблиц долей и пропорций,-М.: Финансы и статистика, 1989,- 234 с.

10. Цитогенетическое исследование абортируемого материала с целью прогноза состояния здоровья матери и потомства (Методические рекомендации). Москва.- 1990,- 15с.

11. Aaltonen L.A., Peltomaki P., Leach F.S., Sistonen P., Pykkanen L., Mecklin J.-P., Jarvinen H., et al. Clues to the pathogenesis of familial colorectal cancer // Science.- 1993,- Vol.260.- P.812-816.

12. Alford R.L., Hammond H.A., Coto I., Caskey C.T. Rapid and efficient resolution of parentage by amplification of short tandem repeats // Am. J. Hum. Genet.- 1994,- Vol. 55,- N 1,- P. 190-195.

13. Barlow D.P. Imprinting: A gamete's point of view // Trends in Genetics.-1994,- Vol.10.- No 6,- P.194-199.

14. Bartsch O., Petersen M.B., Stuhlmann L., Frantzen M., Schwinger E., Antonarakis S.E., Mikkelsen M. "Compensatory" uniparental disomy of chromo some 21 in two cases //J.Med.Genet.- 1994.- Vol.31.-No 7,-P.531-534.

15. Bartolomei M.S. The search for imprinted genes // Nature Genetics. -1994,- Vol.6.- No 3.- P.220-221.

16. Bell K.A., vanDeerlin P.G., Haddad B.R., Feinberg R.F. Cytogenetic diagnosis of «normal 46,XX» karyotypes in spontaneous abortions frequently may be misleading // Fertil.Steril.- 1999,- Vol.2.- P.334-341.

17. BenderR., Surani M.A., Kothary R., Li L.-L., Furst D.O., Christ B., Fundele R. Tissue specific loss of proliferative capacity of parthenogenetic cells in fetal mouse chimeras // Roux's Arch.Dev.Biol. 1995. - Vol.204. - P.436-443.

18. Benlian P., Foubert L. et al. Complete paternal isodisomy for chromosome 8 unmasked by lipoprotein lipase deficiency // Am.J.Hum.Genet.-1996,- Vol.59.-P.431-436.

19. Berg-Loonen E.M van den., Savelkoul P., van Hooff H., van Eede P., Riesewijk A., Geraedts J. Uniparental maternal disomy 6 in a renal transplant patient// Hum. Immunol.- 1996 .- Vol.45.- N 1,- P. 46-51.

20. Bernasconi F., Karagezel A., Celep F., Keser I., Leleci G., Dutly F., Schinzel A.A. Normal phenotype with maternal isodisomy in a female with two isochromosomes: i(2p) and i(2q) // Am. J. Hum. Genet .-1996,- Vol. 59. N 5,- P. 1114-1118.

21. Bestor T.H., Chandler V.L., Feinberg A.P. Epigenetic effects in eukariotic gene expresion// Developmental Genetics.- 1994,- Vol.15.- No 6,- P.458-462.

22. Bittencourt M.C., Morris M.A.,Chabod J., Gos A., Lamy B., Fellmann F., Antonarakis S.E., Plouvier E., Herve P., Tiberghien P. Fortuitous detection of uniparental isodisomy of chromosome 6 // J. Med. Genet.-1997.- Vol.34.- N 1,- P. 77-78.

23. Blouin J.-L., Avramopulos D., Pangalos C., Antpnarakis S.E. Normal phenotype with paternal uniparental isodisomy for chromosome 21 // Am. J. Hum. Genet.- 1993,-Vol. 53. -N 5.-P. 1074-1078.

24. Boland R. Setting microsatellites free // Nature Medicine.- 1996.-Vol.2,- N 9,- P. 972-974.

25. Bottany A., Robinson W.P. et al. / Angelman syndrome due to paternal uniparental disomy of chromosome 15: A milder phenotype? // Am.J.Med. Genet.-1994,- Vol.51.-P.35-40.

26. Boue J., Boue A., Lazar P. Retrospective and prospective epidemiological studies of 1500 karyotyped spontaneous human abortions // Teratology.- 1975.-Vol.12.- P.11-26.

27. Boue J., DeLuchat C., Nicolas N., Boue A. Prenatal losses of trisomy 21 // "Trisomy 21 Int. Symp., Rapallo, Nov. 8-10, 1979",- 1979,- P.183-193.

28. Boyer J.C., Farber R.A. Mutation rate of a microsatellite sequence in normal human fibroblasts // Cancer Res 1998,- Vol.58.- N 17,- P. 3946-3949.

29. Brinkmann B., Moller A., Wiegand P. Structure of new mutations in 2 STR systems // Int. J. Legal. Med.- 1995,- Vol. 107.- N 4,- P. 201-203.

30. Brincmann B., Klintschar M., Neuhuber F., Huhne J., Berkhard R. Mutation rate in human microsatellites: influence of the structure and lenght of the tandem repeat // Am. J. Hum. Genet.- 1998.- Vol. 62. N 6,- P. 1408-1415.

31. Brajenovi-Mili B., Petrovi O., KraseviM., Risti S., Kapovi M. Chromosomal anomalies in abnormal human pregnancies // Fetal.Diagn.Ther. -1998.-Vol.13. -N3." P. 187-191.

32. Brzustowich L.M., Allito B.A., Thve R., Michaud L. Paternal isodisomy for chromosome 5 in a child with spinal muscular atrophy // Am.J.Hum.Genet.-1994,- Vol.54.- P.482-488.

33. Builting K., Saiton S., et al. Inherited microdeletions in the Angelmanand Prader-Willi syndromes define an imprinting centre on human chromome 15 // Nature Genetics.- 1994,- Vol.9.- P.397-400.

34. Carr D.H. Cytogenetics of human reproductive wastage // Issues and Rewiews in Teratolody.- 1983,- Vol.1.- P.33-72.

35. Cassidy S.B. Uniparental disomy and genomic imprinting as causes of human genetic disease/ZEnvironmental and Molecular Mutagenesis.- 1995,- V.25.-Suppl.26.- P. 13-20.

36. Cattanach B.M., Beechey C.V. Autosomal and X-chromosomal imprinting // Development.- 1990,- Suppl.- P. 63-72.

37. Cattanach B.M., Jones J. Genetic imprinting in the mouse: Implications for gene regulation // Journal of Inherited Metabolic Disease.- 1994,- Vol. 17,-No 4,- P.403-421.

38. Chacraborty R., Kimmel M., Stivers D.N., Davison L.J., Deka R. Relative mutation rates in di-, tri- and tetranucleotide microsatellite loci // Proc.Nat.Acad.Sci. USA.- 1997,- Vol. 94,- P.1041-1046.

39. Chakraborty R., Stivers D.N. Paternity exclusion by DNA markers: effects of paternal mutations // J. Forensic. Sci.- 1996,- Vol. 41.- N 4,- P.671-677.

40. Chen X., Stroun M., Magnenat J.-L., Nicod L.P., Kurt A.M., Lyantey J., Lederrey C., Ancer P. Microsatellite alterations in plasma DNA of small lung cancer patients // Nature Medicine.- 1996,- Vol.2.- N 9,- P.1033-1035.

41. Dubrova Y.E., NesterovV.N., Rrouchinsky N.G., Ostapenko V.A., Neumann R., Neil D.L., Jeffreys A.J. Human minisatellite mutation rate after the Cherobyl Accident // Nature.- 1996,- Vol.380.- P.683-686.

42. Eden S., CederH. Action at a distance // Nature.- 1995.- Vol. 375,- No 6526,- P.16-17.

43. Efstratiadis A. Parental imprinting of autosomal mammalian genes // Current Opinion in Genetics and Development. 1994 - Vol.4. - P.265-280.

44. Eggerding F.A., Schonberg S.A., Chebab F.F., Norton M.E., Cox V.A., Epstein C.J. Uniparental isodisomy for paternal 7p and maternal 7q in a child with growth retardation//Am.J.Hum. Genet.- 1994.- Vol.55.- No 2,- P.253-266.

45. Eggermann T., Wollmann H.A., Kuner R., Eggermann K., Enders H., Kaiser P, Ranke M.B. Molecular studies in 37 Silver-Russell syndrome patients: frequency and etiology of uniparental disomy// Hum. Genet.- 1997.- Vol.100.- N 3-4,-P. 415-419.

46. Engel E. A new genetic concept: uniparental disomy and its potential effect, isodisomy//Am. J.Med.Genet.- 1980,- Vol.6.- P.137-143.

47. Engel E. Uniparental disomy revisited: The first twelve years// Am.J.Med.Genet.- 1993,- Vol.46.- P.670-674.

48. Engel E. La disomie uniparental: revue des causes et consequences en clinique humaine //Annales de Genetique.- 1995,- V.38.- N 3,- PI 13-136.

49. Engel E. Uniparental disomy and genomic imprinting: an overview // Acta Genet. Med. Gemellot. -1996,- V.45.- P.19-39.

50. Engel E., DeLozier-Blanchet C.D. Uniparental disomy, isodisomy, and imprinting: probable effects in man and strategies for their detections // Am.J. Med.Genet.-1991,- Vol.40.- P.432-439.

51. Engel E. Uniparental disomy (UPD). Genomic imprinting and a case for new genetics (prenatal and clinical implications: the "Likon" concept)// Ann. Genet. -1997,- Vol. 40,- N1,- P. 24-34.

52. Evdokimova V.N., Lebedev I.N., Nikitina T.V., Sukhanova N.N. Sex ratio in abnormal pregnancies of first trimester gestation in humans. In press.

53. Extrom T.J. Parental imprinting and the IGF2 gene//Hormone Research.-1994,- Vol.42.- No 4-5,- P.176-182.

54. Fadden D.E. Mc., Kwong L.C., Yam I.Y., Langlois S. Parental origin of triploidy in human fetuses: evidence for genomic imprinting//Hum.Genet.- 1993.-Vol.92.- N 5,- P.465-469.

55. Farral M., Weeks D.E. Mutational mechanisms for generating microsatellite allele-frequencydistributions: an analysis of 4.558 markers // Am. J. Hum. Genet.- 1998,- Vol.62.- P.1260-1262.

56. Feil R., Walter J., Men N.D., Reik W. Developmental control of allelic methylation in the imprinted mouse Igf2 and HI9 genes// Development.- 1994.-Vol.120.- No 10,- P. 2933-2945.

57. Ferguson-Smith A.C. Imprinting moves to the center // Nature Genetics.-1996,- Vol.14.-P.119-121.

58. Freimer N.B., Slatkin M. Microsatellites: evolution and mutational processes // Ciba Found. Symp.- 1996,- Vol.197.- P.51-67.

59. Fundele R.H., Surani M.A. Experimental embriological analysis of genetic imprinting in mouse development//Developmental Genetics.- 1994,- Vol.15- No 6,- P.515-523.

60. Fundele R., Barton S.C. et al./ Distribution of androgenetic cells in fetal mouse chimeras //Roux's Arch.Dev.Biol. 1995,- Vol.204.- P.484-493.

61. Fundele R., Li L.-L. et al. Proliferation and differentiation of androgenetic cells in fetal mouse chimeras// Roux's Arch.Dev.Biol. 1995,- Vol.204. - P.494-501

62. Giddings S.J., King C.D., Harman K.W., Flood J.E., Carnaghi L.R. Allele-specific inactivation of insulin 1 and 2, in the mouse yolc sac, indicates imprinting//Nature Genetics.- 1993.- Vol.6.- P.310-313.

63. Gilbert S.F. Developmental biology.- Sinauer Associates, Inc., 1994-891p.

64. Goshen R., Tannos V., BenRafael Z., deGroot N., Gonik B., et al. The role of genomic imprinting in implantation // Fertility and Sterility.- 1994,- Vol.62.-No 5,- P.903-911.

65. Guillemot F., Caspary T., Tilghman S.M., Copeland N.G., Gilbaert D J., Jenkins N.A. et al. Genomic imprinting of Mash2, a mouse gene, required for trophoblast development // Nature Genetics.- 1995,- Vol.9.- P.235-241.

66. Haig D., Graham C. Genomic imprinting and the strange case of the insulin-like growth factor II receptor// Cell.-1991,- Vol. 64,- N 6,- P.1045-1046.

67. Hammond H.A., Jin L., Zhong Y., Caskey C.T., Chacraborty R. Evaluation of 13 short tandem repeat loci for use in personal identification applications // Am. J. Hum. Genet.- 1994,-Vol.55.-N 1,-P.175-189.

68. Harrison K., Eisenger K., Anyane-Yeboa K., Brown S. Maternal uniparental disomy of chromosome 2 in baby with trisomy 2 mosaicism in amniotic fluid culture // Am. J. Med. Genet.- 1995,- Vol.58.- N 2 .- P. 147-151.

69. Hassold T.J. A cytogenetic study of repeated spontaneous abortions // Am. J. Hum. Genet.- 1980,- Vol.32.- P.723-730.

70. Heale S.M., Petes T.D. The stabilization of repetitive tracts of DNA by variant repeats requires a functional DNA mismatch repair system // Cell.- 1995.-Vol. 83,-P. 539-545.

71. Healey S., Powell, F., BattertersbyM., ChenevixG., Trench, McGill J. Distinct phenotype in maternal uniparental disomy of chromosome 14// Am. J.Med. Genet.- 1994.- Vol.51.- No 2.- P.147-150.

72. Henderson D.J., Sherman L.S., Loughna S.C., Bennet P.R., Moore G.E. Early embrionic failure associated with uniparental disomy for human chromosome 21 // Hum.Molec.Genet.- 1994,-Vol.3.-No 8,-P.1373-1376.

73. Hendrich B.D. Willard H.F. Epigenetic regulation of gene expression: the effect of altered chromatin structure from yeast to mammals // Hum. Molec.Genet. -1995 Vol.4.-P.1765-1777.

74. Heyer E., Puymirat J., Dieltiers P., Bakker E., De Kniff P. Estimating Y chromosome specific microsatellite mutation frequencies using deep rooting pedigrees // Hum.Mol.Genet.- 1997,- Vol. 6,- P. 799-803.

75. Hoglund P., Holmberg C., de la Chapelle A., Kere J. Paternal isodisomy for chromosome 7 is compatible with normal growth and development in a patient with congenital chloride diarrhea// Am.J.Hum. Genet.- 1994,- Vol.55.- N 4,-P.747-753.

76. Hurst L.D., McVean G.T. Growth effects of uniparental disomies and the conflict theory of genomic imprinting // Trends Genet. 1997,- Vol. 13,- N 11,- P. 436-443.

77. Jaenisch R. DNA methylation and imprinting:why bother? // Trends in Genetics.- 1997,- Vol.13.- N 8,- P.323-329.

78. James R.S., Temple I.K., Dennis N.R.,.Crolle J.A. A search for uniparental disomy in carriers of supernumerary marker chromosomes // Eur.J.Hum.Genet.- 1995,- Vol. 3,- N 1,- P.21-26.

79. Jinno Y., Yun K. Nishiwaki K., Kubota T., Ogawa O., Reeve A.E., Niikawa N. Mosaic and polymorphic imprinting of the WT1 gene in humans // Nature genetics.- 1993,- Vol.6.- P.305-309.

80. Jinno Y., Ikeda Y., Yun K., Maw M. Establishment of functional imprinting of the HI9 gene in human developing placentae//Nature Genetics.-1995,- Vol.10.-P.318-324.

81. Johns M.B.Jr., Paulus-Thomas J.E. Purification of human genomic DNA from whole blood using sodium perchlorate in place of phenol // Anal.Biochem.-1989,- Vol.180.- N 2,- P.276-278.

82. Jorde L.B., Bamshad M.J., Watkins W.S., Zenger R., Fraley A.E., Carpenter K.D., et al. Origins and affinities of modern humans: a comparison of mitochondrial and nuclear genetic data// Am.J.Hum.Genet.- 1995,- Vol.57.- N 3,-P. 523-538.

83. Junien C. Wiedman-Beckwith syndrome, tumorigenesis arid imprinting// Acta. Genet. Med. Gemellol (Roma).- 1996,- Vol. 45,- N 1-2,- P.77-82.

84. Kalcheva I., Plass C., Sait S., Eddy R., Shows T. et al. Comparative mapping of the imprinted U2afbpL gene on mouse chromosome 11 and human chromosome 51/ Cytogenetics and Cell Genetics.- 1995,- Vol. 68,- N 1-2,- P. 19-25.

85. Kalousek D.K., Barrett I. Genomic imprinting related to prenatal diagnosis //PrenatalDiagnosis. 1994. - Vol.14.-N 13. - P.1191-1201.

86. Kaneko-Ishino T., Kuroiwa Y., Miyoshi N., Kohda T., Suzuki R., Yokoyama M. et al. Peg/MEST imprinted gene on chromosome 6 identified by cDNA subtraction hybridization // Nature Genetics.- 1995,- Vol 11.- P.52-29.

87. Kiaris H., Ergazaki M., SpandidosD.A. Instability at the H-ras minisatellite is associated with the spontaneous abortion of the embryo // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1995,- Vol. 214,- N 3,- P. 788-792.

88. Kishino T., Laland M., Wagstaff J. UBE3A/E6-AP mutations cause Angelman syndrome // Nature Genetics 1997,- Vol.15.- P.70-73.

89. Kitsberg D., Selig S. et al. Allele-specific replication timing of imprinted gene regions //Nature.- 1993,- Vol.364.- P.459-463.

90. Kobayashi S., Kohda T., Miyoshi N., Kuroiwa Y., Aisaka K., Tsutsumi O., Kaneko-Ishino T., Ishino F. Human PEG1/MEST, an imprinted gene on chromosome 111 Hum. Mol. Genet.- 1997,- Vol. 6,- N 5,- P. 781-786.

91. Kotzot D., Schmitt S., Bernasconi F., Robinson W.P. Uniparental disomy 7 in Silver-Rassel syndrome and primordial growth retardation // Hum.Molec.Genet.1995,- Vol.4.- N 4,- P. 583-587.

92. Lalande M. Parental imprinting and human disease//Annu. Rev. Genet.1996,- Vol.30.- P.173-195.

93. McLaughlin K.J., Szabo P., Haegel H., Mann J.R. Mouse embryos with paternal duplication of an imprinted chromosome 7 region die at midgestation and lack placental spongiotrophoblast // Development .-1996 .- Vol. 122,- N 1.- P. 265270.

94. Leana-Cox J., Jenkins L., Palmer C.G., Plattner R. et al. Molecular cytogenetic analisis of inv dup (15) chromosomes, using probes specific for the Prader-Willi/Agelman syndrome region: clinical implications// Am.J. Hum.Genet.1994,- Vol.54.- P.748-756.

95. Ledbetter D.H., Engel E. Uniparental disomy in humans: development of an imprinting map and its implications for prenatal diagnosis // Hum.Molec. Genet.1995,- Vol.4.-P.1757-1764.

96. Lengauer C., Kinzler K.W., Vogelstein B. DNA methylation and genetic instability in colorectal cancer cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1997,- Vol.94.-P.2545-2550.

97. Li E., Beard C., Foster A.C. et al. DNA methylation, genomic imprintihg and mammalian development // Cold Spring Harbor Symposia on quantitative biology.- 1993,- Vol.58.- P.297-307.

98. Li E., Beard C., Jaenich R. Role for DNA methylation in genomic imprintihg // Nature.- 1993,- Vol.366.- P.362-365.

99. Lindor N.M., Karnes P.S. Michels V.V., Dewald G.W., et al. Uniparental disomy in congenital disorders: A prospective study// Am.J. Med.Genet. 1995. -V.58.- N2.-P.143-157.

100. Loeb L.A. Cancer cells exhibit a mutator phenotype // Adv. Cancer Res.-1998,- Vol. 72.-P.25-56 .

101. LorberboumGalski H., Varconi S., Nechushtan A., Rachmilewitz J., et al. ABL and BCR genes are not imprinted in androgenetic and gynogenetic human tissues // Biochemical and Biophysical Research Communications.- 1994,-Vol.204.-N 2,- P.621-628.

102. Lustig O., Ariel I., Ilan J., LevLehman E., de Groot N., Hochberg A. Expression of the imprinted gene HI 9 in the human fetus // Molecular Reproduction and Development.- 1994,- Vol.38.- N 3,- P.239-247.

103. Martin R.H., Balkan W., Burns K. et al. The chromosome constitition of 1000 human spermatozoa// Hum. Genet.- 1983,- Vol.63.- P.305-309.

104. Martin R.H., Mahadevan M.M., Taylor P.J. et al. Chromosomal analysis of unfertilized human oocytes // J. Reprod. Fertil.- 1986,- Vol.78.- P. 673-678.

105. Marx J.L. A parent's sex may affect gene expression // Science.-Vol.239. P.352-353.

106. Matsuura T., Sutcliffe J.S. et al. De novo truncating mutations in E6-AP ubiquitin-protein ligase gene (UBE3A) in Angelman syndrome // Nature Genetics.-1997,-Vol.15.- P. 73-77.

107. Melo J. V., Yan X.-H., et al. Lack of imprinting of the ABL gene // Nature Genetics.- 1994,- Vol.8.- P.318-319.

108. Miny P., Koopers B., Dworniczak B., Bogdanova N., Holzgreve W., Tercanli S ., et al. Parental origin of the extra haploid chromosome set in triploidies diagnosed prenatally//Am.J.Med.Genet.- 1995,- V.57.- P.102-106.

109. Morison I.M., Reeve A.E. A catalogue of imprinted genes and parent-of-origin effects in human and animals // Hum.Mol.Genet.- 1998,- Vol.7.- N 10,-P.1599-1609.

110. Nicholls R.D. Imprinting: The embrio and adult point of view // Trends in Genetics.- 1994,- Vol.10.-N 11,-P. 389.

111. Nicholls R.D. New insight reveal complex mechanisms involved in genomic imprinting // Am.J.Hum.Genet.- 1994- Vol.54- P.733-740.

112. Nawroz H., Koch W., Ancer P., Stroun M., Sidransky D. Microsatellite alterations in serum DNA of head and neck cancer patients // Nature Medicine.-1996.-Vol.2,- N 9,- P.1035-1037.

113. Ohlsson R., Tycko B., Sapienza C. Monoallelic expression:'There can only be one' // Trends in Genetics.- 1998,- Vol.14.- N 11,- P.435-437.

114. Old J.M. Fetal DNA analysis // in book: PCR topics.- IRL-presss.1995.- P.2-19.

115. Orth K., Hung J., Gazdar A., Bowcock A., Mathis J.M., Sambrook J. Genetic instability in human ovarian cancer cell lines // Proc.Natl.Acad. Sci.USA.-1994,-Vol. 91.-P.9495-9499.

116. Pearse G.P., Spenser H.G. Population genetic models of genomic imprinting // Genetics.- 1992,- Vol.130.- P.899-907.

117. Pembrey M. Imprinting and transgenerational modulation of gene expression; human growth as a model// Acta. Genet. Med. Gemellol (Roma).1996,- Vol. 45,-N1-2,-P. 111-125.

118. Pentao L., Lewis R.A., Ledbetter D.H. et al. Maternal uniparental isodisomy of chromosome 14: Association with autosomal recessive rod monochromacy // Am. J. Hum. Genet.- 1992,- Vol.50.- P. 690-699.

119. Peters J., Beechey C.V., Ball S.T., Evans E.P. Mapping studies of the distal imprinting region of mouse chromosome 2 // Genetical Research.- 1994.-Vol.63.- N 3,- P.169-175.

120. Petersen M.B., Bartsh 0. et al. Uniparental isodisomy due to duplication of chromosome 21 occuring in somatic cells monosomic for chromosome 21 // Genomics. -1992 Vol.13. - P.269 - 274.

121. Preece M.A., Price S.M., Davies V., Clough L., Stanier P., Trembath R.C., Moore G.E. Maternal uniparental disomy 7 in Silver-Russell syndrome// J. Med. Genet.- 1997,- Vol.34.- N 1,- P. 6-9.

122. Pulkkinen L., Bullrich F, Czarnecki P., Weiss L., Uitto J. Maternal uniparental disomy of chromosome 1 with reduction to homozygosity of the

123. MB3 locus in a patient with Herlitz junctional epidermolysis bullosa// Am. J. Hum. Genet.- 1997,-Vol.61.-N 3,-P. 611-619.

124. Quan F., Janas J., Toth-Fejel S., Johnson D.B., Wolford J.K., Popovich B.W. Uniparental disomy of the entire X chromosome in a female with Duchenne muscular dystrophy// Am. J. Hum. Genet.- 1997,- Vol.60.- N 1.- P. 160-165.

125. Rush E.B., Calvano J.E., van Zee K.J., Zelenetz A.D., Borgen P.I. Microsatellite instability in breast cancer // Ann. Surg. Oncol.- 1997,- Vol. 4,- N 4,-P. 310-315.

126. Razin A., Cedar H. DNA methylations and genomic imprinting // Cell.-1994,-Vol.77.-P.473-476.

127. Razin A., Shemer R. DNA methylation in early development // Hum.Molec. Genet. 1995 - Vol.4. - P.1751-1755

128. Reed M.L., Leff S.E Maternal imprinting of human SNRPN, a gene deleted in Prader-Willi syndrome // Nature Genetics.- 1994,- V0I.6.-P. 163-167.

129. Reik W., Brown K.W., Slatter R.E., Sartori P., Elliot M„ Maher E.R. Allelic methylation of HI 9 and IGF2 in the Beckwith-Widemann syndrome // Human Molecular Genetics.- 1994,- Vol.3.- N 8,- P.1297-1303.

130. Reik W., Maher E.R. Imprinting in clasters: lessons from Beckwith-Widemann syndrome // Trends in Genet.- 1997,- Vol.13.- N 8,- p.330-334.

131. Reis A., Dittrich B. Greder V., Buiting K., Lalande M. et al. Imprinting mutations suggested by abnormal DNA methylation patterns in familial Angelman and Prader-Willi syndromes // Am.J.Hum. Genet.- 1994 Vol.54.- P.741-747.

132. Riggins G.J., Zhang F., Warren S.T. Lack of imprinting of BCR // Nature Genetics.- 1994,- Vol.6.- P.226.

133. Robinson W.P., Lalande M. Sex-specific meiotic recombination in the Prader-Willi/ Agelman syndrome imprinted region // Hum.Molec.Genet.- 1995,-Vol.4.- N 5,- P.801-806.

134. Robinson W.P., Lorda-Sanchezl. Increased parental ages and uniparental disomy 15: A paternal age effect? // Eur.J.Hum.Genet.- 1993,- Vol.1.- P.280-286.

135. Sasse G., Muller H., Chakraborty R., Ott J. Estimating the frequency of nonpaternity in Switzerland // Hum. Hered.- 1994,- Vol.44.- N 6,- P.337-343.

136. Shaffer L.G., McCaskill C., Adkins K., Hassold T.J. Systematic search for uniparental disomy in early fetal losses: the results and a review of the literature // Am.J.Med.Genet. 1998. - Vol.79. - P. 366-372.

137. Schinzel A.A., Basaran S., Bernasconi F., Karaman B., Yuksel-Apak M., Robinson W.P. Maternal uniparental disomy 22 has no impact on the phenotype // Am.J.Hum.Genet.- 1994 Vol.54 - P.21-24.

138. Shibata H., Hirotsune S., Okazaki Y. et al. Genetic mapping and systematic screening of mouse endogenously imprinted loci detected with restriction landmark genome scanning method (RLGS) // Mammalian Genome.- 1994-Vol.5.- N 12,- P.797-801.

139. Simoni G., Sirchia M. Confined placental mosaicism // Prenatal Diagnosis. 1994. - Vol.14.-N 13. -P. 1185-1189.

140. Singh P.B. Commentary: Molecular mechanisms of cellular determination: Their relation to chromatin structure and parental imprinting // Journal of Cell Science.- 1994,- Vol.107.- Part. 10.- P.2653- 2669.

141. Sirhia S.M., de Andreis C., Parany S., Grimoldi M.G.et al. Chromosome 14 maternal uniparental disomy in the euploid cell line of a fetus with mosaic 46,XX/47,XX,+14 kariotype// Human Genetics.- 1994,- Vol. 94,- N 4,- P.355-359.

142. Slater H., Shaw J.H., Dawson G., Bankier A., Forrest S.M. Maternal uniparental disomy of chromosome 13 in a phenotypically normal child // Journal of Medical Genetics.- 1994,- Vol.31.- N 8,- P.644-647.

143. Smith M., Fullwood P, Qi Y., Palmer S., Upadhyaya M., Cole T. No evidence for uniparental disomy as a common cause of Sotos syndrome.// J. Med. Genet.- 1997,- Vol.34.-N 1.-P. 10-12.

144. Smith M., Creasy M.R., Clarke A., Upadhyaya M. Sex ratio and absence of uniparental disomy in spontaneous abortions with a normal karyotype // Clin.Genet.- 1998,- Vol. 4,-P.258-261.

145. Spandidos D.A., Koumantakis E., Sifakis S., Sourvinos G. Microsatellite mutations in spontaneously aborted embryos // Fértil.Steril.- 1998.- Vol. 5 P.892-895.

146. Spence J.E., Perciaccante R.G., Greig G.M. et al. Uniparental isodisomy as a mechanism for human genetic disease // Am. J. Hum. Genet.- 1988,- Vol. 42,-P. 217-226.

147. Spenser H.G., Williams M.G.M. Failure of imprinting at Igf-2: Two models of mutation selection balance // Am.J.Hum.Genet.- 1995,- Vol. 56,-P.434-437.

148. Strain L., Warner J.P. Johnston T., Bonthron D.T., et al. A human parthenogenetic chimera//Nature Genetics.- 1995,- Vol.11.- P.164-169.

149. Sulisalo T., Mikitie O., Sistonen P., Ridanp^w M., El-Rifai W., Ruuskanen O., de la Chapelle A., Kaitila I. Uniparental disomy in cartilage-hair hypoplasia Original paper. // European Journal of Human Genetics.- 1997,- Vol. 5,- P.35-42.

150. Sunde L., Vejerslev L.O., Jensen M.P., Pedersen S., Hertz J.M., Bolund L. Genetic analysis of repeated, biparental, diploid, hydatidiform moles// Cancer Genet Cytogenet.- 1993,- Vol. 66.- N 1,- P. 16-22.

151. Surani M.A., Kothary R., Allen N., Singh P.B., Fundele R., FergusonSmith A., Barton S.C. Genome imprinting and development in the mouse // Development.- 1990,- Suppl.- P.89-98.

152. Surani M.A. Silense of the genes //Nature.- 1993,- Vol.366.- P.302-303.

153. Sutcliffe J.S., Nakao M., Christian S. et al. Deletions of a differntially methylated CpG island at the SNRPN gene define a putative imprinting control region//Nature Genet.- 1994,- Vol.8.- P.52-58.

154. Szabo P., Mann J.R. Expression and methylation of imprinted genes during in vitro differentiation of mouse parthenogenetic and androgenetic embrionic stem cell lines // Development.- 1994,- Vol.120.- N 6,- P. 1651-1661.

155. Thibodeau S.N., Bren G., Schaid D. Microsatellite instability in cancer of the proximal colon // Lancet.- 1993,- Vol. 260,- P.816-819.

156. Thomas J.H. Genomic imprinting proposed as a surveillance mechanism for chromosome loss // Proceedings of the National Academy of Scienses of the USA.- 1995,- Vol.92.- N 2,- P.480-482.

157. Tomkins D.J., Roux A.-F. Waye L., Freeman V., Cox D.V., Whwlan D.T. Maternal uniparental isodisomy of human chromosome 14 associated with a paternal t(13ql4q) and precocious puberty// Eur. J. Hum. Genet.- 1996,- Vol. 4,- P. 153-159.

158. Tremblay K.D., Saam J.R., et al. A paternal-specific methylation imprint marks the alleles of the mouse H19 gene // Nature Genetics.- 1994,- Vol.9.- P.407-413.

159. Tycko B. Genomic imprinting: Mechanism and role in human pathology // American Journal of Pathology.- 1994.- Vol.144.- N 3,- P.431-444.

160. Vaughan J., Ali Z., Bower S., Bennet P., Chard T., Moore G. Human maternal uniparental disomy for chromosome 16 and fetal development // Prenatal Diagnosis.- 1994,- Vol.14.- N 8,- P.751-756.

161. Villar A.J., Pedersen R.A. Spatially restricted imprinting of mouse chromosome 111 Molecular Reproduction and Development.- 1994.- Vol.37.- N 3,-P.247-254.

162. Villar A.J., Pedersen R.A. Parental imprinting of the Mas protooncogene in mouse // Nature Genetics.- 1994,- Vol.8.- P.373-379.

163. Voss R., Ben-Simon E., Avital et al. Isodisomy of chromosome 7 in a patient with cystic fibrosis: Could uniparental disomy be common in humans? // Am. J. Hum. Genet.- 1989,- Vol.45.- P. 373-380.

164. Vu T.H., Hoffman A.R. Promoter-specific imprinting of the human insulin-like growth factor-II gene // Nature.- 1994,- Vol.371.- P.714-717.

165. The Utah Marker Development Group. A collection of ordered tetranucleotide-repeat markers from the human genome // Am. J. Hum. Genet.-1995,-Vol.57.-P.619-628

166. Wang J.-C.C., Passarge M.B., Yen P.H., Shapiro L.J., Mohandas T.K. Uniparental heterodisomy for chromosome 14 in a phenotypically abnormal familial balanced 13/14 Robersonian translocation carrier// Am. J. Hum. Genet.- 1991.-Vol.48.- P.1069-1074.

167. Wang Z.Q., Fun M.R., Barlow D.P., Wagner E.F. Regulation of embrionic growth and lysosomal targeting by the imprinted Igf2/Mpr gene // Nature.- 1994,- Vol. 372,- N 6504,- P.464-467.

168. Webb A., Beard J., Wright C., Robson S., Wolstenholme J., Goodship J. A case of paternal uniparental disomy for chromosome 11// Prenat. Diagn.- 1995.-Vol. 15,-N8,-P. 773-777.

169. Weber J.L., Wong C. Mutation of human tandem repeats // Hum.Mol.Genet.- 1993,- Vol.2.- N 8,- P.l 123-1128.

170. Wilkinson T.A., James R.S., Crolla JA., Cockwell A.E., Campbell P.L., Temple I.K. A case of maternal uniparental disomy of chromosome 9 in association with confined placental mosaicism for trisomy 9// Prenat. Diagn.- 1996,- Vol.16.- N 4,-P. 371-374.

171. White L.M., Rogan P.K. et al. Allele-specific replication of 15qll-ql3 loci: A diagnostic test for detection of uniparental disomy // Am.J.Hum.Genet.-1996,-Vol.59.-N2,- P.423-430

172. Whiteford M.L., Narendra A., White M.P., Cooke A., Wilkinson A.G., Robertson K.J., Tolmie J.L. Paternal uniparental disomy for chromosome 6 causes transient neonatal diabetes // J. Med. Genet.-1997.- Vol. 34,- N 2,- P. 167-168.

173. Wolstenholme J. Confined placental mosaicism for trisomies 2, 3, 7, 8, 9, 16, and 22: their incidence, licely origins, and mechanisms for cell lineage compartmentalisation // Prenat. Diagn.- 1996,- Vol.16.- P.511-524.

174. Woodage T., Prasad M., Dixon J.W., Selby R.E., Romain D.R. Bloom syndrome and maternal uniparental disomy for chromosome 15 // Am.J.Hum.Genet.- 1994.- Vol.55.-N 1,-P.74-81.148

175. Wutz A., Smrzka O.W., Schweifer N., Schellander K., Vagner E.F., Barlow D.P. Imprinted expression of the Igf2r gene depends on an intronic CpG islands. // Nature.- 1997,- Vol.389.- P.745-749.