Исследование молекулярной основы фармакологических эффектов препарата релиз-активной формы антител к интерферону гамма человека (экспериментально-клиническое исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат наук Дон Елена Сергеевна

• Дон Елена Сергеевна
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Дон Елена Сергеевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Сверхвысокие разведения и феномен релиз-активности

1.2 Молекулярные механизмы антиген-антительных взаимодействий

1.3 Рынок противогриппозных препаратов

1.4. Биомаркеры как индикаторы физиологических и патологических процессов

1.4.1 Классификации биомаркеров

1.4.2 Поиск биомаркеров

1.5 Роль естественных аутоантител

1.5.1 Функции естественных аутоантител

1.5.2 Естественные аутоантитела к цитокинам

1.6. Заключение

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

2.2 Препараты и реактивы

2.3 Методы исследования

2.3.1 Методика ИФА для оценки модифицирующего эффекта препарата релиз-активных антител к интерферону гамма

2.3.2 Методика поверхностного плазмонного резонанса

2.3.3 Оценка противовирусной активности препарата релиз-активных антител к интерферону гамма в зависимости от дозы

2.3.4 Влияние релиз-активной формы антител к интерферону гамма на этапы жизненного цикла вируса гриппа в клетке и зависимость противовирусного эффекта препарата от дозы in vitro

2.3.5 Изучение фармакокинетики препарата релиз-активных антител к интерферону гамма на здоровых добровольцах

2.3.6 Оптимизация методики ИФА для определения еАт к ИФНу и изучение

динамики уровня еАт к ИФНу у пациентов с ветряной оспой

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Изучение модифицирующей активности препарата релиз-активных антител к

интерферону гамма с помощью иммунологических подходов in vitro

3.1.1. Оценка модифицирующей активности препарата релиз-активных антител к интерферону гамма методом иммуноферментного анализа

3.1.2. Оценка модифицирующей активности препарата релиз-активных антител к

интерферону гамма методом поверхностного плазмонного резонанса

3.2 Изучение дозозависимого действия препарата РАФ Ат к ИФНу

на модели экспериментальной гриппозной инфекции

3.3. Изучение эффекта препарата РАФ Ат к ИФНу на жизненный цикл вируса на клеточной модели

3.4. Изучение фармакокинетики препарата РАФ Ат к ИФНу

на здоровых добровольцах

3.5. Оптимизация ИФА для количественного определения естественных аутоантител к ИФНу человека

3.6. Определение уровня еАт к ИФНу в сыворотке крови пациентов с ветряной оспой в качестве биомаркера клинической эффективности применения РАФ Ат к

ИФНу

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Список литературы

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение А

Приложение Б

Приложение В

Приложение Г

Приложение Д

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование молекулярной основы фармакологических эффектов препарата релиз-активной формы антител к интерферону гамма человека (экспериментально-клиническое исследование)»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. За последнее время рынок препаратов биологического происхождения совершил невероятный скачок и продолжает уверенно расширяться. Так, по оценке специалистов, к 2020 году объем продажи лекарственных биопрепаратов достигнет трети мирового фармацевтического рынка1. Однако, из-за особенностей производства и гетерогенности таких препаратов, процесс изучения их характеристик (механизма действия, специфической активности, эффективности и т.д.) все еще является актуальным. Среди лекарственных средств, для которых этот вопрос является важным, можно выделить класс препаратов на основе антител в релиз-активной форме (РАФ Ат), который на сегодняшний день включает в себя больше десятка наименований.

Феномен релиз-активности (РА) был открыт при изучении технологии последовательного многократного уменьшения концентрации исходного вещества, сопровождаемой внешним физическим воздействием на каждом из этапов. Такие продукты, как оказалось, обладают общим свойством - способностью оказывать непосредственное модифицирующее влияние на исходное вещество, изменять его пространственную структуру и, вследствие этого, - его физико-химические и биологические свойства (Эпштейн О.И., 2013). Препараты, в основе действия которых лежит феномен РА, получили название релиз-активных, а их эффективность и безопасность была доказана в доклинических и клинических исследованиях (Эпштейн О.И., 2008; Авалуева Е.Б. и др., 2014; Castagne V. et al., 2008; Chu X. et al., 2008; Kheyfets I.A. et al., 2012; Tarasov S.A. et al., 2012; Bailbe D. et al., 2013; Nicoll J. et al., 2013; Rafalsky V. et al., 2016; Tarasov S.A. et al., 2016; Petrova N.V. et al., 2017; Skarnovich M.A. et al., 2017; Kardash E.V. et al., 2018; Mkrtumyan A. et al., 2018). При разработке подходов к изучению РА препаратов, как это обычно бывает в отношении новых препаратов, исследователи столкнулись с различными трудностями, в частности, при изучении механизма действия данных средств. Было показано, что в основе действия РА препаратов лежат тонкие биофизические процессы на уровне

1 http://clinical-pharmacy.ru/digest/farmacevtrinok/6308-v-2020-godu-rynok-biopreparatov-mozhet-sostavit-tret-mirovogo-farmrynka.html

конформационных трансформаций (Эпштейн О.И., 2013), но биохимические маркеры эффектов РА лекарственных средств до сих пор в процессе исследования. Поэтому возникло предположение, что модифицирующие эффекты, лежащие в основе действия РАФ Ат, могут быть оценены различными иммунологическими методами, где РАФ Ат будут служить модификаторами взаимодействия антител (Ат) со своими мишенями. В качестве метода определения был выбран иммунофермент-ный анализ (ИФА). Возможность использования такого метода согласуется со стандартными подходами к оценке биологической активности препаратов (ICH, 1999). Для оценки влияния на взаимодействие антигена со специфическим к нему антителом с использованием ИФА был выбран препарат РАФ Ат к интерферону гамма (ИФНу) (ООО «НПФ «Материа Медика Холдинг»). Хотя некоторые аспекты механизма действия данного препарата были изучены ранее (Тарасов С.А., 2012; Жавберт Е.С. и др., 2013), особенности его влияния на связывание антигена (Аг) с комплементарными антителами требуют детального изучения. Разработка новой иммуноферментной методики для исследования активности препарата РАФ Ат к ИФНу позволит открыть новые возможности в изучении фармакодинамики данного препарата. Интересным представляется исследовать связь между фармакологической активностью препарата РАФ Ат к ИФНу in vivo с результатами оценки активности, полученными с помощью разработанной методики ИФА.

Степень разработанности. Одним из подходов к созданию лекарственных препаратов, сочетающих в себе эффективность и безопасность, может быть использование феномена РА. Было продемонстрировано, что лекарственные препараты, содержащие РАФ Ат, обладают принципиально новой проантигенной направленностью действия (сонаправленного с Аг), основанной на способности РАФ Ат, полученных в ходе технологической обработки исходной субстанции Ат, изменять характер взаимодействия конкретного Аг (молекулы) с его мишенью посредством механизма конформационных изменений (Epstein O.I., 2012; Epstein O.I., 2013). Данный феномен был назван феноменом релиз-активности. Эффективность и безопасность подобных препаратов были широко изучены как на различных экспериментальных моделях, так и в ходе клинических исследований (Эпштейн О.И., 2008; Dugina J.L. et al., 2005; Kalueff A.V. et al., 2006; Epstein O.I. et al., 2007; Castagne V.

et al., 2008; Chu X. et al., 2008; Kheyfets I.A. et al., 2012; Tarasov S.A. et al., 2012; Bailbe D. et al., 2013; Chu X. et al., 2014; Tarasov S.A. et al., 2016; Petrova N.V. et al., 2017; Skarnovich M.A. et al., 2017; Kardash E.V. et al., 2018; Mkrtumyan A. et al., 2018). Одним из представителей данного класса лекарственных средств является препарат на основе РАФ Ат к ИФНу.

В современной научной литературе накоплен достаточно большой объем как теоретических, так и экспериментальных работ, посвященных тестированию сверх-разбавленных водных растворов (Рыжкина И.С., 2015; Elia V. et al., 2015). Некоторые аспекты действия препарата РАФ Ат к ИФНу были изучены ранее (Тарасов С.А., 2012; Жавберт Е.С. и др., 2013), однако непосредственное влияние препарата как на ИФНу, так и на Ат к нему (в рамках системы естественных аутоантител организма) ранее не изучалось.

На сегодняшний день ни один из методов определения еАт нельзя назвать универсальным, каждый имеет свои преимущества и недостатки, и поиск нового подхода, который позволит преодолеть имеющиеся сложности, остается важной и приоритетной задачей современной науки. В целом, разработке методик ИФА для определения естественных антител как биомаркеров посвящены работы S.J. Thorpe и соавт. (1997), R.A. Elkarim и соавт. (1998), А.Б. Полетаева (2002), К. Bentzen и соавт. (1994, 2000), A. Meager и соавт. (2003). При рассмотрении задачи активации еАт использовались работы G. Sigounas и соавт. (1994), A. Coutinho и соавт. (1995), J.A. McIntyre и соавт. (2006). Примеры использования естественных аутоантител в качестве биомаркеров при диагностике заболеваний или оценки эффективности лечения описаны в работах H. El-Fawal (2008), S.M. Miescher и F. Kâsermann (2013), H. Chen и соавт. (2014), C. DeMarshall и соавт. (2015).

Цель исследования: изучить молекулярную основу фармакологических эффектов препарата релиз-активной формы антител к ИФНу в отношении своих мишеней.

Задачи исследования:

1. Исследовать модифицирующую активность препарата релиз-активной формы антител к ИФНу в отношении своих фармакологических мишеней (ИФНу и

естественные аутоантитела к нему) с использованием методов ИФА и поверхностного плазмонного резонанса.

2. Оценить противовирусную активность препарата релиз-активной формы антител к ИФНу в зависимости от дозы, на модели гриппозной инфекции in vitro на линии клеток почек собаки Madin-Darby и in vivo у мышей.

3. Изучить эффект препарата релиз-активной формы антител к ИФНу на этапы жизненного цикла вируса гриппа in vitro.

4. Исследовать уровень естественных антител к ИФНу в сыворотке крови здоровых добровольцев и пациентов с ветряной оспой на фоне терапии препаратом релиз-активной формы антител к ИФНу.

Научная новизна. В ходе работы впервые была подтверждена принципиальная возможность определения модифицирующей активности РАФ Ат к ИФНу с помощью существующих аналитических методов и сформулирован механизм действия препарата релиз-активных антител к интерферону гамма путем влияния на взаимодействия антиген-антитело. Адекватность выбора используемых в разработанной методике молекул была подтверждена высокочувствительным методом поверхностного плазмонного резонанса. Эффективность препарата РАФ Ат к ИФНу была впервые изучена в зависимости от дозы в условиях in vitro и in vivo экспериментов. Впервые исследовано влияние препарата РАФ Ат к ИФНу на ультраструктурные особенности клеток при заражении вирусом гриппа. Впервые предпринята попытка исследования фармакокинетики препарата РАФ Ат к ИФНу у здоровых добровольцев. В ходе работы методика ИФА для определения естественных ауто-антител к ИФНу была впервые усовершенствована таким образом, что позволила определить не только свободную фракцию еАт в биологических жидкостях, но и общую (путем активации связанных в комплексы Ат с использованием окислительно-восстановительной реакции). Впервые показано, что на фоне фармакотерапии вирусной инфекции возможно изменение уровня еАт к ИФНу, и данная молекула может служить биомаркером при изучении препарата РАФ Ат к ИФНу.

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате проведенной работы впервые была показана возможность определения активности препарата РАФ Ат к ИФНу методами in vitro, и был описан механизм действия

препарата РАФ Ат к ИФНу через влияние на процесс взаимодействия антигена и антитела. Разработанная методика ИФА для оценки специфической активности препарата РАФ Ат к ИФНу была валидирована. Материалы экспериментальных исследований вошли в комплект документов, представленных в регуляторные органы зарубежных стран с целью получения разрешения на широкое медицинское применение препарата в России и ряде стран соответственно. Материалы экспериментальных исследований также использовались в ходе научных консультаций с Управлением по контролю лекарственных средств и изделий медицинского назначения (MHRA, Великобритания) и Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA, США). Кроме того, разработана усовершенствованная методика определения уровня еАт к ИФНу в сыворотке крови, позволяющая определить общую фракцию еАт. Была показана возможность использования еАт к ИФНу в качестве биомаркера препарата РАФ Ат к ИФНу и изучена возможность соотнесения уровня еАт к ИФНу и клинических эффектов препарата.

Методология и методы исследования. Диссертационное исследование состоит из экспериментального и клинического разделов.

В эксперименте для определения активности РАФ Ат к ИФНу была специально разработана новая методика ИФА, которая затем была апробирована на здоровых добровольцах. Также был использован метод поверхностного плазмонного резонанса. Для оценки уровня еАт к ИФНу под действием РАФ Ат к ИФНу была усовершенствована разработанная ранее компанией U-CyTech Bioscience методика ИФА, которая затем была апробирована в клиническом исследовании на сыворотке крови больных ветряной оспой.

Кроме этого, в эксперименте с использованием половозрелых мышей-самок линии BALB/c изучали дозозависимость действия РАФ Ат к ИФНу на модели гриппозной пневмонии с определением процента смертности, индекса протективного действия и средней продолжительности жизни животных. Проводили гистологический анализ легких животных и измерение титра вируса гриппа в органах. С помощью метода электронной микроскопии изучали ультраструктурные особенности

зараженных вирусом гриппа клеток линии MDCK (Madin Darby canine kidney) под действием РАФ Ат к ИФНу.

Положения, выносимые на защиту:

1. Модифицирующая активность РАФ Ат к ИФНу заключается во влиянии на взаимодействие антигена и антител, что лежит в основе реализации фармакологических эффектов препарата.

2. Фармакологическое действие препарата РАФ Ат к ИФНу носит дозозави-симый характер и осуществляется через влияние на систему ИФНу.

3. Естественные аутоантитела к ИФНу могут быть использованы в качестве биомаркера эффективности препаратов, содержащих РАФ Ат к ИФНу.

Степень достоверности и апробация результатов. Высокая степень достоверности полученных результатов подтверждается достаточным объемом экспериментального материала с использованием современных методов и методических подходов, соответствующих поставленным задачам. Выводы, сформулированные в диссертации, подтверждены экспериментальным материалом, анализом литературы, точностью статистической обработки полученных результатов.

Основные положения диссертационной работы докладывались, обсуждались и представлялись на XIX, XXI, XXIII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2012, 2014, 2016), конференции «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2013, 2015), IX Всероссийской конференции «Химия и медицина» с Молодежной научной школой (Уфа-Абзаково, 2013), 3-ей международной конференции и выставке по клинической и клеточной иммунологии (Балтимор, 2014), 3-м Всемирном конгрессе по разработке лекарственных препаратов и терапии (Бостон, 2015), 12-м Европейском биотехнологическом конгрессе (Аликанте, 2016), VI Международном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем в норме и при патологии (Санкт-Петербург, 2017).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 работ, из них 3 - в журналах, рекомендованных перечнем ВАК при Минобрнауки России и 2 - в журналах, включенных в перечень Web of Science.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, списка используемой литературы и приложений. Работа иллюстрирована 15 рисунками и 4 таблицами. Библиографический указатель включает 261 источник, из них 36 отечественных, 225 иностранных.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Сверхвысокие разведения и феномен релиз-активности

Начиная с 18 века «высокие разведения» разных веществ природного происхождения назначаются индивидуально с целью усилить их биологическое действие через иммунологические механизмы гиперчувствительности, что в некоторых случаях сопровождается патологическими явлениями в виде симптомов интоксикации, словно в организм вводили не «высокие разведения» исходного вещества, а его токсические дозы (Bellavite P. et al., 2005). Данное парадоксальное явление можно рассмотреть как уникально простую модель патологии, дающую возможность приблизиться к пониманию глубинных принципов функционирования биологических систем.

Начиная с 70-х годов прошлого века в отечественной и зарубежной науке накоплено достаточно большое число экспериментальных работ, показывающих, что «высокие разведения», не содержащие молекул исходного вещества, способны вызывать физиологический ответ, базирующийся на эффектах молекулярного уровня; выявлен ряд общих свойств высоких разведений (Бурлакова E.B. с соавт., 2003). С использованием таких методов как кондуктометрия (Коновалов А.И., 2013; Elia V. et al., 2008), рН-метрия (Коновалов А.И., 2013; Elia V. et al., 2008), вискозиметрия (Коновалов А.И., 2013), калориметрия (Elia V. et al., 2008), люминесцентная спектроскопия (Лобышев В.И. с соавт., 2005), спектрофотометрия в УФ- и видимой областях (Wolf U. et al., 2011; Elia V. et al., 2014; Klein S.D., Wolf U., 2016), флуоресцентная микроскопия (Elia V. et al., 2014), атомно-силовая микроскопия (Elia V. et al., 2014), инфракрасная спектроскопия (Elia V. et al., 2014), спектроскопия комбинационного рассеяния (Rao M.L. et al., 2008), релаксометрия ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (Sukul A. et al., 2000; Weingartner O. 2003; Demangeat J.L., 2009; Demangeat J.L., 2015), детекция электромагнитного сигнала (Montagnier L. et al., 2009), исследование кристаллогенезиса (Zhdanova O.B. et al., 2012), метод кристаллизации капель (Kokornaczyk M.O. et al., 2016), ЯМР-спектро-скопия (Sukul A. et al., 2000; Tiezzi E., 2003), анализ диэлектрических свойств (Maity

T. et al., 2010; Chatterjee A. et al., 2016), показано, что «высокие разведения» структурно отличаются от интактного растворителя. На основе имеющихся результатов сложилось достаточно популярное представление о «памяти» растворителя - наличии в разведениях структурной (материальной, динамической) матрицы, несущей информацию об элиминированном исходном веществе, в основе образования которой большинство авторов видит перестройку водородных связей растворителя (Дроздов С.В., Востриков А.А., 2006).

В середине 90-х годов прошлого века О.И. Эпштейном с коллегами впервые было установлено, что «высокое разведение» любого вещества, как в организме, так и вне его оказывает модифицирующее влияние на исходное вещество, что лежит в основе механизма действия «высоких разведений». Модифицирующая активность появляется в процессе приготовления «высоких разведений», и, чтобы подчеркнуть ее техногенное происхождение, был предложен термин «релиз-активность» (Эпштейн О.И., 2013). Практическое изучение данного феномена, включая его молекулярные механизмы (Nicoll J. et al., 2013; Gorbunov E.A. et al., 2015a; Gor-bunov E.A. et al., 2015b; Don E. et al., 2016), привело к созданию новой группы лекарственных препаратов на основе «высоких разведений» антител - «релиз-активных» антител.

В целом, препараты на основе антител прочно зарекомендовали себя на рынке лекарственных препаратов. На настоящее время приблизительно 60 терапевтических моноклональных антител продаются на территории США и Европы (Grilo A.L., Mantalaris A., 2018). Однако, несмотря на их широкое распространение, существует целый ряд трудностей, связанных с применением антительных препаратов из-за ограничений их перорального применения и проблем со стабильностью и токсичностью (Samaranayake H. et al., 2009; Mahmuda A. et al., 2017). Поэтому работы по созданию и модификации препаратов на основе антител или антительных производных проводятся во всем мире. Примером таких препаратов могут послужить антительные фрагменты или фьюжн-белки, полученные в результате слияния фрагментов антител с токсинами или цитокинами. Другим путем преодоления трудностей использования моноклональных антител (мАт) являются попытки обеспечить качественное проникновение антител в клетку микроинъекциями,

электропорацией и т.д. (Chames P. et al., 2009; Weiner G.J., 2015; Yanaka S. et al., 2017). Выбранный подход основан на использовании феномена релиз-активности, который состоит в модифицирующем действии, оказываемом технологически обработанными сверхвысокими разведениями различных веществ на структуру исходного вещества, что в итоге выражается в изменении базовых для того или иного вещества физико-химических или биологических свойств (Эпштейн О.И., 2012; Эпштейн О.И., 2013). Препараты, в основе действия которых лежит феномен РА, получили название релиз-активных, и их эффективность и безопасность была доказана в доклинических и клинических исследованиях (Осидак Л.В. с соавт., 2003; Веревщиков В.К. c соавт., 2006; Шишкина Л.И. и соавт., 2011; Kheyfets I.A., 2012; Tarasov S.A. et. al., 2012; Bailbe D. et al., 2013; Don E.S. et al., 2016; Rafalsky V. et al., 2016; Tarasov S.A. et al., 2016; Petrova N.V. et al., 2017; Skarnovich M.A. et al., 2017; Epstein O.I., 2018), однако при разработке подходов к изучению препаратов исследователи каждый раз сталкивались с дополнительными сложностями, одна из которых - это отсутствие на сегодняшний день методов анализа, позволяющих проводить количественное определение активного фармацевтического ингредиента таких препаратов или определение специфической активности в качестве альтернативы.

В основе действия релиз-активных препаратов лежат тонкие биофизические процессы на уровне конформационных трансформаций, и до сих пор не удалось найти однозначные биохимические маркеры эффектов релиз-активных препаратов, системное действие которых реализовано без вовлечения химического гомеостаза. Поскольку ранее было показано, что конформационные трансформации являются одним из наиболее важных триггерных механизмов действия релиз-активных разведений (Эпштейн О.И., 2012), было предположено, что они могут быть смоделированы методом иммуноферментного анализа, в котором РА антитела будут служить модификаторами классических реакций. ИФА позволяет определять в относительных единицах in vitro модифицирующую активность любого из препаратов на основе релиз-активных антител, и возможность использования такого метода согласуется с требованиями оценки биологической активности (ICH, 1999). В ходе изучения РА препаратов была показана принципиальная возможность

использования иммуноферментного анализа для оценки влияния как антительных РА форм, так и неантительных РА форм на взаимодействие антигена и антитела (Константинов Р.Р. с соавт., 2016; Похил С.Э. с соавт., 2016; Pschenitza M. et al., 2014). Одним из РА препаратов, представляющих интерес, является Анаферон детский, содержащий в качестве активного фармакологического ингредиента РА формы Ат к интерферону гамма (ИФНу). При проведении предварительных исследований РА формы антител к ИФНу методом ИФА, было обнаружено, что в присутствии РА форм Ат к ИФНу меняется константа связывания коммерческих Ат к ИФНу, что подтверждает влияние РА формы Ат к ИФНу на конформационные характеристики белков реакции (Epstein O.I., 2018).

1.2 Молекулярные механизмы антиген-антительных взаимодействий

Для того, чтобы детально описать процесс взаимодействия антигена и антитела на молекулярном уровне, необходимо обозначить наиболее важные моменты строения антител и антигенов. В последовательности как легких, так и тяжелых цепей, из которых состоит любое антитело, присутствуют как константные (С), так и вариабельные (V) участки (Sela-Culang I. et al., 2013). Наличие последних обеспечивает многообразие антител в живом организме. Однако вариабельность последовательности не распределяется равномерно по всей V-области, а сконцентрирована в определенных сегментах. Было показано, что три наиболее переменных сегмента могут быть идентифицированы в вариабельных доменах как тяжелой, так и легкой цепи. Они определяют гипервариабельные области и обозначаются HV1, HV2 и HV3. В тяжелых цепях данные участки простираются примерно с 30 до 36, от 49 до 65 и от 95 до 103 аминокислотных остатков соответственно, тогда как в легких цепях они расположены примерно на участках 28-35, 49-59 и 92-103 соответственно (Janeway C.A. Jr. et al., 2001). Все 6 гипервариабельных петель - регионы, определяющие комплементарность антитела (CDR). Области между гипервариабельными областями, которые составляют остальную часть V-домена, демонстрируют меньшую изменчивость и называются каркасными областями. В каждом домене V имеется четыре таких региона, обозначенных как FR1, FR2, FR3 и FR4 (Sela-Culang I.

et а1., 2013). Кроме локализации в определённых сегментах V домена, вариабельность локализована в отдельных регионах на поверхности молекулы: тогда как рамочные регионы в-листов обеспечивают структурную основу домена, гипервариабельные последовательности представляют собой 3 петли на внешнем ребре в-бочки (Janeway С.А. Jr. et а1., 2001; Se1a-Cu1ang I. et а1., 2013).

Биологическая функция антител заключается в связывании с патогенами и их продуктами и для облегчения их удаления из организма. Структура, распознаваемая антителом, называется антигенной детерминантой или эпитопом. Некоторые из наиболее важных патогенов имеют полисахаридные оболочки, однако во многих случаях антигены, которые провоцируют иммунный ответ, представляют собой белки. При этом структуры, распознаваемые антителом, расположены на поверхности белка и состоят из аминокислот из разных частей полипептидной цепи, которые были собраны вместе при сворачивании белка (Галактионов В.Г., 1998). Антигенные детерминанты такого типа известны как конформационные ортогональные эпитопы, потому что распознанная структура состоит из сегментов белка, которые прерываются в аминокислотной последовательности антигена, но объединены в трехмерную структуру. Напротив, эпитоп, состоящий из одного сегмента полипептидной цепи, называется сплошным или линейным эпитопом (Ро^1хот В. et a1., 2015). Хотя большинство антител, выращенных против нативных белков, распознают конформационные эпитопы, некоторые из них могут связываться с пептидными фрагментами белка. И наоборот, антитела, выращенные против пептидов белка или синтетических пептидов, соответствующих части его последовательности, могут связываться с нативным белком (Janeway С.А. Jr. et a1., 2001).

Взаимодействие между антителом и его антигеном может быть разрушено высокими концентрациями солей, экстремальными значениями рН, детергентами и т.д., поэтому такое связывание является обратимым нековалентным взаимодействием (Reverberi R., Reverberi L., 2007). Несколько типов связей участвуют в формировании подобного взаимодействия (Janeway С.А. Jr. et a1., 2001). Силы Ван-дер-Ваальса являются самыми слабыми, но они способны привлекать все виды молекул. Ионные связи требуют противоположно заряженных атомов. Водородные связи основаны на совместном «использовании» водорода электроотрицательными

атомами. Такие связи очень важны в водных растворах, потому что вода легко образует сильные водородные связи. «Гидрофобные» же связи по факту являются просто результатом исключения из молекул воды других молекул, которые не могут участвовать в хороших водородных связях. Эти молекулы называются «неполярными», поскольку их атомы не образуют электрические диполи (Reverberi R., Reverberi L., 2007). Для стабильного связывания одновременно должно присутствовать несколько слабых связей, и для этого требуется стерическая комплементар-ность между молекулами (Watson J.D. et al., 2004).

В специфическое связывание эпитопа и паратопа вовлечены немного молекул, чаще - несколько аминокислот поверхности. При этом площадь соприкосновения составляет всего 0,4-8 нм2 (Van Oss C.J., 1995). При этом сначала эпитоп и паратоп подходят на расстояние нескольких нанометров, притягиваясь длиннодей-ствующими силами (ионные и водородные). После того как силы притяжения преодолевают энергию гидратации, выталкивая воду, молекулы приближаются еще сильнее. На таком близком расстоянии главными становятся Ван-дер-Ваальсовы силы (с небольшой помощью ионных). Чем лучше поверхности подходят по форме друг другу и чем больше площадь контакта, тем сильнее связывание (Reverberi R., Reverberi L., 2007).

Реакция антиген-антительного взаимодействия широко используется в лабораторной практике. Это обратимая реакция, которую можно описать уравнением (1):

антиген + антитело ^ антиген-антительный комплекс (1)

В соответствии с законом действующих масс можно вычислить константу равновесия такой реакции (2):

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Дон Елена Сергеевна, 2019 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авалуева, Е.Б. Эффективность и безопасность применения Колофорта при синдроме раздраженного кишечника: итоги многоцентрового двойного слепого плацебо-контролируемого рандомизированного клинического исследования. / Е.Б.Авалуева, Т.В.Адашева, А.Р.Бабаева, и др. / // Гастроэнтерология. - 2014. - Т.

1. - С. 36-43.

2. Бурлакова, Е.Б. Действие сверхмалых доз биологически активных веществ и низкоинтенсивных физических факторов / Е.Б. Бурлакова, А.А. Конрадов, Е.Л. Мальцева // Хим. физика. - 2003. - Т. 22. - С. 21-40.

3. Веревщиков, В.К. Опыт применения Анаферона в комплексной терапии острых респираторных заболеваний у взрослых / В.К. Веревщиков В.М., Борзунов, Е.К. Шемякина. // Инфекционные болезни. - 2006. - Т. 4. - № 3. - С. 88-90.

4. Гаврилова, Е.С. Современные подходы к исследованию естественных ауто-антител к цитокинам различными иммунологическими методами (обзор) /Е.С. Гаврилова, С.А. Тарасов // Иммунология. - 2014. - Т. 35. - № 2. - С. 107-112.

5. Гаврилова, Е.С. Влияние анаферона детского на уровень естественных антител к интерферону гамма / Е.С. Гаврилова, С.А. Тарасов, Ю.О. Демидченко // Сборник материалов XIX Росс. Национ. Конгресс «Человек и лекарство». - М., - 2012.

- С. 253

6. Галактионов, В.Г. Иммунология. Учебник. - М.: Издательство МГУ, 1998 г.

- 480 с.

7. Дроздов, С.В. Особенности строения и энергии малых кластеров воды / С.В. Дроздов, А.А. Востриков // Письма в ЖТФ. - 2006. - Т. 26. - С. 81-86.

8. Деева, Э.Г. Грипп. На пороге пандемии. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008 г. - 208 с.

9. Жавберт, Е.С. Иммунотропные свойства анаферона и анаферона детского / Е.С. Жавберт, Ю.Л. Дугина, О.И. Эпштейн // Антибиотики и химиотерапия. - 2013.

- Т. 58. - № 5-6. - С. 17-23.

10. Зиганшина, М.М. Естественные антитела как ключевой элемент механизма, поддерживающего гомеостаз в иммунной системе / М.М. Зиганшина, Н.В. Бовин, Г.Т. Сухих // Иммунология. - 2013. - Т. 34. - № 5. - С. 277-282.

11. Каира, А.Н. Применение препарата "Анаферон" для профилактики острых респираторных заболеваний / А.Н. Каира, Т.В. Соломай, Е.А. Королькова // Санитарный врач.- 2014. - №7. - С.54-58

12. Кареткина, Г.Н. Острые респираторные инфекции: профилактика и лечение в предстоящем эпидемическом сезоне // Медицинский алфавит. - 2017. - Т. 3. - № 30. - С. 7-14.

13. Киселев, О.И. Грипп: эпидемиология, диагностика, лечение, профилактика. / О.И. Киселев, Л.М. Цыбалова, В.И. Покровский - М.: Медицинское информационное агенство, 2012 г. - 496 с.

14. Коновалов, А.И. Образование наноразмерных молекулярных ансамблей в вы-сокоразбавленных водных растворах // Вестник РАН. - 2013. - Т. 83. - С. 10761082.

15. Константинов, Р.Р. Разработка методики количественной детекции антител к гистамину методом иммуноферментного анализа / Р.Р. Константинов, Е.С. Дон, А.О. Петрова и др. // Сборник материалов XXIII Росс. Национ. Конгресс «Человек и лекарство». - М., 2016. - С. 85.

16. Лобышев, В.И. Экспериментальное исследование потенцированных водных растворов / В.И. Лобышев, М.С. Томкевич, И.Ю. Петрушанко // Биофизика. - 2005.

- Т. 50. - С. 464-469.

17. Лусс, Л.В. Современные подходы к терапии и профилактике гриппа и ОРВИ // Поликлиника. - 2011. - Т. 4-1. - С. 22-27.

18. Мягкова, М.А. Естественные антитела и их физиологические функции / М.А. Мягкова, В.С. Морозова // Иммунология, аллергология, инфектология. - 2014. - Т. 3. - С. 75-81. doi: 10.14427/Драь2014.3.75.

19. Образцова, Е.В. Интерфероновый статус у детей при острых респираторных инфекциях. Интерферонотерапия / Е.В. Образцова, Л.В. Осидак, Е.Г. Головачева, и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009. - Т. 148. - № 8.

- Прил. - С. 22-26.

20. Осидак, Л.В. Новое в профилактике и терапии гриппа и ОРВИ у детей / Л.В. Осидак, О.И. Афанасьева, Е.В. Образцова, и др. // Лечащий врач. - 2003. - № 2. -С. 75-76.

21. Павлушкина, Л.В. Биомаркеры в клинической практике / Л.В. Павлушкина, Е.А. Черневская, И.Б. Дмитриева и др. // Поликлиника. - 2013. - № 4-1. - С. 10-4.

22. Полетаев, А.Б. Иммунологический гомункулус (иммункулус) в норме и патологии // Биохимия. - 2002. - Т. 67. - № 5. - С. 721-731.

23. Попов, А.Ф. Динамика цитокинов (ШКу, ШКа, ГЬ-18, Т№а) при лечении среднетяжелого гриппа А (НШ1) PDM09 (2013-2016 гг.) осельтамивиром (Та-мифлю) и умифеновиром (Арбидол) в монотерапии и в сочетании с Кагоцелом / А.Ф. Попов, А.И. Симакова, К.А. Дмитренко и др. // Терапевтический архив. - 2017.

- Т. 89. - № 10. - С. 66-70.

24. Похил, С.Э. Разработка методики иммуноферментного анализа для определения влияния препарата анаферон детский в таблетках на связывание антиген-антитело / С.Э. Похил, Е.С. Дон., О.В. Фартушная, и др. // Сборник материалов XXIII Росс. Национ. Конгресс «Человек и лекарство». - М., 2016. - С. 257-258.

25. Рыжкина, И.С. Самоорганизация и физико-химические свойства водных растворов антител к интерферону-гамма в сверхвысоком разведении / И.С. Рыжкина, Л.И. Муртазина, Ю.В. Киселева, и др. // Доклады Академии Наук. - 2015. - Т. 462.

- № 2. - С. 185-189.

26. Сергеев, А.Н. Противовирусная активность сверхмалых доз антител к гамма-интерферону при пероральном введении: экспериментальное исследование гриппозной инфекции у мышей / А.Н. Сергеев, О.В. Пьянков, Л.Н. Шишкина, и др. // Антибиотики и химиотерапия. - 2004. - Т. 49. - № 11. - С. 7-11.

27. Сидорович, О.И. Современные подходы к лечению и профилактике ОРВИ и гриппа у детей // Медицинский совет. - 2014. - Т. 14. - С. 14-17.

28. Сологуб, Т.В. Эффективность и целесообразность использования рекомби-нантного интерферона-гамма в комплексной терапии больных гриппом А(H1N1)PDM09 / Т.В. Сологуб, А.С. Мидикари, В.Н. Агафонов, и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2017. - Т. 22. - № 2. - С. 58-63.

29. Тарасов, С.А. Разработка иммуноферментного анализа для количественного определения естественных аутоантител - потенциальной эндогенной мишени влияния сверхмалых доз антител / С.А. Тарасов, М.В. Машкина, Ю.О. Акиндинова, и др. // Материалы 2-й Московской междунар. конференции «Иммунофизиология: естественный аутоиммунитет в норме и патологии». - М., 2008. - С. 203-205.

30. Тарасов, С.А. Экспериментальная фармакология анаферона детского: спектр противовирусной активности и механизмы действия: дисс...канд. мед. наук: 14.03.06/ Тарасов Сергей Александрович. - Томск, 2012 - 126 с.

31. Шамшева, О.В. Этиопатогенетическое лечение гриппа и ОРВИ у детей: новый взгляд на старую проблему // Детские инфекции. - 2017. - Т. 16. - № 3. - С. 49-54.

32. Шерстобоев, Е.Ю. Иммунотропные эффекты потенцированных антител к ин-терферону-гамма человека / Е.Ю. Шерстобоев, Н.В. Масная, А.А. Чурин, и др. // Бюл. эксп. биол. и мед. - 2002. - Прил. 4. - С. 79-82.

33. Шишкина, Л.Н. Изучение эффективности анаферона, детского у мышей, инфицированных пандемическим вирусом гриппа А(Н1Ш/09)У / Л.Н. Шишкина, М.О. Скарнович, А.С. Кабанов, и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2011. - № 1. - С. 83-86.

34. Эпштейн, О.И. Сверхмалые дозы (история одного исследования). - М.: РАМН, 2008 г. - 336 с.

35. Эпштейн, О.И. Феномен релиз-активности и гипотеза "пространственного" гомеостаза // Успехи физиол. наук. - 2013. - T. 44. - № 3. - C. 54-76.

36. Ягудина, Р.И. Использование конечных и суррогатных точек в фармакоэкономических исследованиях / Р.И. Ягудина, В.А. Чибиляев // Фармакоэкономика. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология. -2010. - Т. 3. - № 2. - С. 12-18.

37. Alfa, M.J. Distinct domains of recombinant human IFN-gamma responsible for anti-viral effector function. / M.J. Alfa, F.T. Jay // J Immunol. - 1988. - V.141(7). -P.:2474-9.

38. Altznauer, F.. Concurrent presence of agonistic and antagonistic anti-CD95 autoantibodies in intravenous Ig preparations / F. Altznauer, S. von Gunten, P. Späth, et al. // J. Allergy Clin. Immunol. - 2003. - V. 112. - № 6. - P. 1185-1190.

39. Anderson, D.C. Biomarkers in pharmacology and drug discovery / D.C. Anderson, K. Kodukula // Biochem. Pharmacol. - 2014. - V. 87. - № 1. - P. 172-188. doi: 10.1016/j.bcp.2013.08.026.

40. Andersson, A. Early IFN-gamma production and innate immunity during Listeria monocytogenes infection in the absence of NK cells / A. Andersson, W.J. Dai, J.P. Di Santo, et al. // J. Immunol. - 1998. - V. 161. - № 10. - P. 5600-5606.

41. Grilo, A.L. The Increasingly Human and Profitable Monoclonal Antibody Market / A. L. Grilo, A. Mantalaris // Trends in Biotechnology. Available online 23 June 2018. https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2018.05.014

42. Antonova, E. Evaluation of the potential defensive strategy against Influenza A in cell line models / E. Antonova, O. Glazova, A. Gaponova, et al. // F1000Res. - 2018. -V. 7. - P. 206. [revised 2018 May 16].

43. Arvin, M. Early immune response in healthy and immunocompromised subjects with primary varicella-zoster virus infection / M. Arvin, C.M. Koropchak, B.R. Williams, et al. // J. Infect. Dis. - 1986. - V. 154. - № 3. - P. 422-429.

44. Atluri, G. Complex biomarker discovery in neuroimaging data: Finding a needle in a haystack / G. Atluri, K. Padmanabhan, G. Fang, et al. // Neuroimage Clin. - 2013. - V. 3. - P. 123-131. doi: 10.1016/j.nicl.2013.07.004.

45. Avrameas, S. Natural autoantibodies in the physiology and pathophysiology of the immune system / S. Avrameas, C. Selmi // J. Autoimmun. - 2013. - V. 41. - P. 46-49. doi: 10.1016/j.jaut.2013.01.006.

46. Baerlecken, N. Recurrent, multifocal Mycobacterium avium-intercellulare infection in a patient with interferon-gamma autoantibody / N. Baerlecken, R. Jacobs, M. Stoll, et al. // Clin. Infect. Dis. - 2009. - V. 49. - № 7. - P. e76-78.

47. Bailbé, D. The novel oral drug Subetta exerts an antidiabetic effect in the diabetic Goto-Kakizaki rat: comparison with rosiglitazone / D. Bailbé, E. Philippe, E. Gorbunov, et al. // J. Diabetes Res. - 2013. - V. 2013. - Article ID 763125. doi: 10.1155/2013/763125.

48. Balsari, A. Natural antibodies to IL-2 / A. Balsari, A. Caruso // Biotherapy. - 1997.

- V. 10. - № 1. - P. 25-28.

49. Bayry, J. Intravenous immunoglobulin induces proliferation and immunoglobulin synthesis from B cells of patients with common variable immunodeficiency: A mechanism underlying the beneficial effect of IVIg in primary immunodeficiencies / J. Bayry, E.M. Fournier, M.S. Maddur, et al. // J. Autoimmun. - 2011. - V. 36. - № 1. - P. 9-15. doi: 10.1016/j.jaut.2010.09.006.

50. Bayry, J. Mechanisms of action of intravenous immunoglobulin in autoimmune and inflammatory diseases / J. Bayry, N. Misra, V. Latry, et al. // Transfus. Clin. Biol. -2003. - V. 10. - № 3. - P. 165-169.

51. Bellavite, P. Immunology and homeopathy. 1. Historical background / P. Bellavite, A. Conforti, V. Piasere, et al. // Evid. Based Complement. Alternat. Med. - 2005. - V. 2.

- p. 441-452. doi:10.1093/ecam/neh141.

52. Bender MedSystems GmbH Product Information And Manual. Human anti-IFN-a ELISA BMS217 and BMS217TEN

53. Bendtzen, K. Autoantibodies to cytokines // Eur. J. Clin. Invest. - 1998. - V. 28. -№ 4. - P. 300-301.

54. Bendtzen, K. Naturally occurring autoantibodies to interleukin-1 alpha, interleu-kin-6, interleukin-10, and interferon-alpha / K. Bendtzen, M.B. Hansen, M. Diamant, et al. // J. Interferon Res. - 1994. - V. 14. - № 4. - P. 157-158.

55. Bendtzen, K. Detection of autoantibodies to cytokines / K. Bendtzen, M.B. Hansen, C. Ross, et al. // Mol. Biotechnol. - 2000. - V. 14. - № 3. - P. 251-261.

56. Bendtzen, K. Autoantibodies to cytokines--friends or foes? / K. Bendtzen, M. Svenson, V. Jonsson, et al. // Immunol. Today. - 1990. - V. 11. - № 5. - P. 167-169.

57. Billiau, A. Gamma-interferon: the match that lights the fire? // Immunol. Today. -1988. - V. 9. - № 2. - P. 37-40. doi: 10.1016/0167-5699(88)91256-X.

58. Biomarkers Definitions Working Group. Biomarkers and surrogate endpoints: preferred definitions and conceptual framework // Clin. Pharmacol. Ther. - 2001. - V. 69. -№ 3. - P. 89-95.

59. Bizzaro, N. The predictive significance of autoantibodies in organ-specific autoimmune diseases // Clin. Rev. Allergy Immunol. - 2008. - V. 34. - № 3. - P. 326-331.

60. Bolton, W.K. Rheumatoid factor inhibition of in vitro binding of IgG complexes in the human glomerulus / W.K. Bolton, J.H. Schrock, J.S. Davis // Arthritis Rheum. - 1982.

- V. 25. - № 3. - P. 297-303.

61. Bonfield, T.L. Autoantibodies against granulocyte macrophage colony-stimulating factor are diagnostic for pulmonary alveolar proteinosis / T.L. Bonfield, D. Russell, S. Burgess, et al. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. - 2002. - V. 27. - № 4. - P. 481-486.

62. Bruder, D. Cellular immunity and lung injury in respiratory virus infection / D. Bruder, A. Srikiatkhachorn, R.I. Enelow // Viral Immunol. - 2006. - V. 19. - № 2. - P. 147-155. doi: 10.1089/vim.2006.19.147.

63. Caligiuri, G. Autoreactive antibody repertoire is perturbed in atherosclerotic patients / G. Caligiuri, D. Stahl, S. Kaveri, et al. // Lab. Invest. - 2003. - V. 83. - № 7. - P. 939-947.

64. Capini, C.J. Autoantibodies to TNF in HIV-1 infection: prospects for anti-cytokine vaccine therapy / C.J. Capini, M.W. Richardson, H. Hendel, et al. // Biomed. Pharmaco-ther. - 2001. - V. 55. - № 1. - P. 23-31.

65. Carasevici, E. Natural Autoantibodies are Biomarkers of Immunosurveillance System // Biochem. Pharmacol. - 2013. - V. 2. - № 4. doi: 10.4172/2167-0501.1000e147.

66. Caruso, A. Natural antibodies to IFN-gamma in man and their increase during viral infection / A. Caruso, C. Bonfanti, D. Colombrita, et al. // J. Immunol. - 1990. - V. 144.

- № 2. - P. 685-690.

67. Caruso, A. Anti-interferon-gamma antibodies in sera from HIV infected patients / A. Caruso, I. Foresti, G. Gribaudo, et al. // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. - 1989. - V. 3. - № 1. - P. 8-12.

68. Caruso, A. Natural antibodies to interferon-gamma / A. Caruso, A. Turano // Bio-therapy. - 1997. - V. 10. - № 1. - P. 29-37.

69. Castagne, V. Antibodies to S100 proteins have anxiolytic-like activity at ultra-low doses in the adult rat / V. Castagne, M. Lemaire, I. Kheyfets, et al. // J. Pharm. Pharmacol.

- 2008. - V. 60. - № 3. - P. 309-316. doi: 10.1211/jpp.60.3.0005.

70. Chatterjee, A. Effect of ultrahigh diluted homeopathic medicines on the electrical properties of PVDF-HFP / A. Chatterjee, B. Kumar Paul, S. Kar, et al. // Int. J. High Dilution Res. - 2016. - V. 15. - P. 10-17.

71. Chen, H. Blood autoantibodies against tumor-associated antigens as biomarkers in early detection of colorectal cancer / H. Chen, S. Werner, S. Tao, et al. // Cancer Lett. -2014. - V. 346. - № 2. - P. 178-187. doi: 10.1016/j.canlet.2014.01.007.

72. Chen, Y. IgM antibodies to apoptosis-associated determinants recruit C1q and enhance dendritic cell phagocytosis of apoptotic cells / Y. Chen, Y.B. Park, E. Patel, et al. // J. Immunol. - 2009. - V. 182. - № 10. - P. 6031-6043.

73. Chi, C.Y. Anti-IFN-gamma autoantibodies in adults with disseminated nontuber-culous mycobacterial infections are associated with HLA-DRB1*16:02 and HLA-DQB1*05:02 and the reactivation of latent varicella-zoster virus infection / C.Y. Chi, C.C. Chu, J.P. Liu, et al. // Blood. - 2013. - V. 121. - № 8. - P. 1357-1366. doi: 10.1182/blood-2012-08-452482.

74. Chu, X. Sildenafil and a Compound Stimulating Endothelial NO Synthase Modify Sexual Incentive Motivation and Copulatory Behavior in Male Wistar and Fisher 344 Rats / X. Chu, E.S. Zhavbert, J.L. Dugina, et al. // J. Sex. Med. - 2008. - V. 5. - № 9. -P. 2085-2099. doi: 10.1111/j.1743-6109.2008.00937.x.

75. Chu, X. Effects of chronic treatment with the eNOS stimulator Impaza on penis length and sexual behaviors in rats with a high baseline of sexual activity / X. Chu, E.S. Zhavbert, J.L. Dugina, et al. // Int. J. of Impot. Res. - 2014. - V. 26. - № 1. - P. 35-40. doi: 10.1038/ijir.2013.12.

76. Corfield, A.P. The specificity of viral sialidases. The use of oligosaccharide substrates to probe enzymic characteristics and strain-specific differences / A.P. Corfield, M. Wember, R. Schauer, et al. // Eur. J. Biochem. - 1982. - V. 124. - № 3. - P. 521-525.

77. Cottey, R. Influenza virus / R. Cottey, C.A. Rowe, B.S. Bender // Curr. Protoc. Immunol. - 2001. - Chapter 19, - Unit 19.11. doi: 10.1002/0471142735.im1911s42.

78. Coutinho, A. Natural autoantibodies / A. Coutinho, M.D. Kazatchkine, S. Avra-meas // Curr. Opin. Immunol. - 1995. - V. 7. - № 6. - P. 812-818.

79. Czaja, C.A. Rituximab as successful adjunct treatment in a patient with disseminated nontuberculous mycobacterial infection due to acquired anti-interferon-gamma autoantibody / C.A. Czaja, P.A. Merkel, E.D. Chan, et al. // Clin. Infect. Dis. - 2014. -V. 58. - № 6. - P. 115-118. doi: 10.1093/cid/cit809.

80. Damoiseaux, J. Autoantibodies 2015: From diagnostic biomarkers toward prediction, prognosis and prevention / J. Damoiseaux, L.E. Andrade, M.J. Fritzler, et al. // Autoimmun. Rev. - 2015. - V. 14. - № 6. - P. 555-563.

81. Dancey, J.E. Guidelines for the development and incorporation of biomarker studies in early clinical trials of novel agents / J.E. Dancey, K.K. Dobbin, S. Groshen, et al. // Clin. Cancer Res. - 2010. - V. 16. - № 6. - P. 1745-1755. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-09-2167.

82. Demangeat, J.L. Gas nanobubbles and aqueous nanostructures: the crucial role of dynamization // Homeopathy. - 2015. - V. 104. - P. 101-115. doi:10.1016/j.homp.2015.02.001.

83. Demangeat, J.L. NMR water proton relaxation in unheated and heated ultrahigh aqueous dilutions ofhistamine: Evidence for an air-dependent supramolecular organization of water // J. Mol. Liq. - 2009. - V. 144. - P. 32-39. doi:10.1016/j.mol-liq.2008.07.013.

84. DeMarshall, C.A. Parkinson's Study Group Investigators. Potential utility of autoantibodies as blood-based biomarkers for early detection and diagnosis of Parkinson's disease / C.A. DeMarshall, M. Han, E.P. Nagele, et al. // Immunol. Lett. - 2015. - V. 168.

- № 1. - P. 80-88. doi: 10.1016/j.imlet.2015.09.010.

85. Doffinger, R. Autoantibodies to interferon- gamma in a patient with selective susceptibility to mycobacterial infection and organ-specific autoimmunity / R. Doffinger, M.R. Helbert, G. Barcenas-Morales, et al. // Clin. Infect. Dis. - 2004. - V. 38. - № 1. -P. e10-14.

86. Don, E. Use of piezoelectric immunosensors for detection of interferon-gamma interaction with specific antibodies in the presence of released-active forms of antibodies to interferon-gamma / E. Don, O. Farafonova, S. Pokhil, et al. // Sensors. - 2016. - V. 16.

- P. 96. doi: 10.3390/s16010096.

87. Don, E.S. Dose-dependent antiviral activity of released-active form of antibodies to interferon-gamma against influenza A/California/07/09(H1N1) in murine model / E.S. Don, A.G. Emelyanova, N.N. Yakovleva, et al. // J. Med. Virol. - 2017. - V. 89. - № 5.

- P. 759-766. doi:10.1002/jmv.24717.

88. Dong, G. Adamantane-resistant influenza a viruses in the world (1902-2013): frequency and distribution of M2 gene mutations / G. Dong, C. Peng, J. Luo, et al. // PLoS One. - 2015. - V. 10. - № 3. - e0119115. doi: 10.1371/journal.pone.0119115.

89. Dugina, J.L. A randomized, open-label, comparative, 6-month trial of oral ultra-low doses of antibodies to tumor necrosis factor-a and diclofenac in rheumatoid arthritis / J.L. Dugina, V.I. Petrov, A.R. Babayeva, et al. // Int. J. Tissue React. - 2005. - V. 27. -№ 1. - P. 15- 21.

90. Dumstrei, K. A systematic review of serum autoantibodies as biomarkers for pancreatic cancer detection / K. Dumstrei, H. Chen, H. Brenner // Oncotarget. - 2016. -V. 7. - № 10. - P. 11151-11164. doi: 10.18632/oncotarget.7098.

91. Ealick, S.E. Three-dimensional structure of recombinant human interferon-gamma / S.E. Ealick, W.J. Cook, S. Vijay-Kumar, et al. // Science. - 1991. - V. 252. - № 5006.

- P. 698-702.

92. Ehrenstein, M.R. The importance of natural IgM: scavenger, protector and regulator. / M.R. Ehrenstein, C.A. Notley // Nat. Rev. Immunol. - 2010. - V. 10. - № 11. - P. 778-786. doi: 10.1038/nri2849.

93. El-Fawal, H.A. Autoantibodies to neurotypic and gliotypic proteins as biomarkers of neurotoxicity: assessment of trimethyltin (TMT) / H.A. El-Fawal, J.P. O'Callaghan // Neurotoxicology. - 2008. - V. 29. - № 1. - P. 109-115. doi: 10.1016/j.neuro.2007.09.009.

94. Elia, V. Experimental evidence of stable water nanostructures in extremely dilute solutions, at standard pressure and temperature/ V. Elia, G. Ausanio, F. Gentile, et al. // Homeopathy. - 2014. - V. 103. - P. 44-50. doi:10.1016/j.homp.2013.08.004.

95. Elia, V. Physico-chemical properties of aqueous extremely diluted solutions in relation to ageing / V. Elia, L. Elia, N. Marchettini, et al. // J. Therm. Anal. Calorim. - 2008.

- V. 93. - P. 1003-1011. doi.org/10.1007/s10973-007-8843-8.

96. Elkarim, R.A. Cytokine autoantibodies in multiple sclerosis, aseptic meningitis and stroke / R.A. Elkarim, M. Mustafa, P. Kivis, et al. // Eur. J. Clin. Invest. - 1998. - V. 28.

- № 4. - P. 295-299.

97. Epstein, O.I. The Spatial Homeostasis Hypothesis // Symmetry. - 2018. - V. 10. -№ 4. - P. 103. doi: 10.3390/sym10040103.

98. Epstein, O.I. Release-activity: a long way from phenomenon to new drugs // Bull. Exp. Biol. Med. - 2012. - V. 154. - № 1. - P. 54-58.

99. Executive summary: Standards of medical care in diabetes-2010 // Diabetes Care.

- 2010. - V. 33. - Suppl. 1. - P. 4-10. doi: 10.2337/dc10-S004.

100. Favre, C. Epitope mapping of recombinant human gamma interferon using monoclonal antibodies / C. Favre, J. Wijdenes, H. Cabrillat, et al. // Mol. Immunol. - 1989. -V. 26. - № 1. - P. 17-25.

101. Förger, F. Clinical significance of anti-dsDNA antibody isotypes: IgG/IgM ratio of anti-dsDNA antibodies as a prognostic marker for lupus nephritis / F. Förger, T. Matthias, M. Oppermann, et al. // Lupus. - 2004. - V. 13. - № 1. - P. 36-44.

102. Forsström, B. Dissecting antibodies with regards to linear and conformational epitopes / B. Forsström, B.B. Axnäs, J. Rockberg, et al. // PLoS One. - 2015. - V. 10. - № 3. - P. e0121673. doi: 10.1371/journal.pone.0121673.

103. Friguet, B. Measurements of the true affinity constant in solution of antigen-antibody complexes by enzyme-linked immunosorbent assay / B. Friguet, A.F. Chaffotte, L. Djavadi-Ohaniance, et al. // J. Immunol. Methods. - 1985. - V. 77. - № 2. - P. 305-319. doi: 10.1016/0022-1759(85)90044-4.

104. Gavrilova, E. Application of drugs based on release-active antibodies as immunotherapy agents / E. Gavrilova, E. Gorbunov, A. Borshcheva, et al. // J Clin Cell Immunol.

- 2014. - V. 5. - № 5. - P. 62.

105. Gearing, A.J. H., Bird C.B. Production and assay of interleukin 2, in Lymphokines and interferons, A practical approach (Clemens M.J., Morris A.G., Gearing A.J.H., eds.).

- Oxford: IRL Press, 1987. - p 291.

106. González-Navajas, J.M. Immunomodulatory functions of type I interferons / J.M. González-Navajas, J. Lee, M. David, et al. // Nat. Rev. Immunol. - 2012. - V. 12. - № 2.

- P. 125-135. doi: 10.1038/nri3133.

107. Gorbunov, E.A. In vitro screening of major neurotransmitter systems possibly involved in the mechanism of action of antibodies to S100 protein in released-active form / E.A. Gorbunov, I.A. Ertuzun, E.V. Kachaeva, et al. // Neuropsychiatr. Dis. Treat. -2015. - V. 11. - P. 2837-3846. doi: 10.2147/NDT.S92456.

108. Gorbunov, E.A. Subetta increases phosphorylation of insulin receptor ß-subunit alone and in the presence of insulin / E.A. Gorbunov, J. Nicoll, E.V. Kachaeva, et al. // Nutr. Diabetes. - 2015. - V. 5 - P. e169. doi: 10.1038/nutd.2015.20.

109. Graudal, N.A. Autoantibodies against interleukin 1a in rheumatoid arthritis: association with long term radiographic outcome / N.A. Graudal, M. Svenson, U. Tarp, et al. // Ann. Rheum. Dis. - 2002. - V. 61. - № 7. - P. 598-602.

110. Hanitsch, L.G. Late-Onset Disseminated Mycobacterium avium intracellulare Complex Infection (MAC), Cerebral Toxoplasmosis and Salmonella Sepsis in a German Caucasian Patient with Unusual Anti-Interferon-Gamma IgG1 Autoantibodies / L.G. Hanitsch, M. Lobel, H. Muller-Redetzky, et al. // J. Clin. Immunol. - 2015. - V. 35. - № 4. P. 361-365. doi: 10.1007/s10875-015-0161-5.

111. Hansen, M.B. Sex- and age-dependency of IgG auto-antibodies against IL-1 alpha in healthy humans / M.B. Hansen, M. Svenson, K. Abell, et al // Eur. J. Clin. Invest. -1994. - V. 24. - № 3. - P. 212-218.

112. Hansen, M.B. Anti-interleukin-6 antibodies in normal human serum / M.B. Hansen, M. Svenson, M. Diamant, et al. // Scand. J. Immunol. - 1991. - V. 33. - № 6. - P. 777-781.

113. Hatterer, E. P156 Investigating the novel mechanism of action for NI-0501, a human interferon gamma monoclonal antibody /E. Hatterer, F. Richard, P. Malinge, et al. // Cytokine. - 2012. - V. 59. - № 3. - P. 570.

114. Hauge, S.H. Oseltamivir-resistant influenza viruses A (H1N1), Norway, 2007-08 / S.H. Hauge, S. Dudman, K. Borgen, et al. // Emerg. Infect. Dis. - 2009. - V. 15. - № 2.

- P. 155-162. doi: 10.3201/eid1502.081031.

115. Heinonen, T.M. Cardiovascular biomarkers and surrogate end points: key initiatives and clinical trial challenges / T.M. Heinonen, M. Aamer, C. Marshall, et al. // Expert. Rev. Cardiovasc. Ther. - 2012. - V. 10. - № 8. - P. 989-994. doi: 10.1586/erc.12.84.

116. Hentati, B. Natural autoantibodies are involved in the haemolytic anaemia of NZB mice / B. Hentati, B. Payelle-Brogard, C. Jouanne, et al. // J. Autoimmun. - 1994. - V. 7.

- № 4. - P. 425-439.

117. Hess, S. Biomarker Definition and Validation During Drug Development. / S. Hess, M.L. Ozoux, M. Gerl/ In: Drug Discovery and Evaluation: Methods in Clinical

Pharmacology, H. G. Vogel, J. Maas, A. Gebauer (eds.), - Springer-Verlag Berlin: Heidelberg, 2011-P. 223-44. DOI 10.1007/978-3-540-89891-7_B.19.

118. Hoflich, C. Naturally occurring anti-IFN-gamma autoantibody and severe infections with Mycobacterium cheloneae and Burkholderia cocovenenans / C. Hoflich, R. Sabat, S. Rosseau, et al. // Blood. - 2004. - V. 103. - № 2. - P. 673-675. doi: 10.1182/blood-2003-04-1065.

119. Huber-Lang, M. Generation of C5a in the absence of C3: a new complement activation pathway / M. Huber-Lang, J.V. Sarma, F.S. Zetoune, et al. // Nat. Med. - 2006. -V. 12. - № 6. - P. 682-687.

120. Hughes-Jones, N.C. Red cell antigens, antibodies and their interaction // Clin. Haematol. - 1975. - V. 4. - № 1. - P. 29-43.

121. Hurshman, A.R. Transthyretin aggregation under partially denaturing conditions is a downhill polymerization / A.R. Hurshman, J.T. White, E.T. Powers, et al. // Biochemistry. - 2004. - V. 43. - № 23. - P. 7365-7381.

122. Hurt, A.C. The epidemiology and spread of drug resistant human influenza viruses // Curr. Opin. Virol. - 2014. - V. 8. - P. 22-29. doi: 10.1016/j.coviro.2014.04.009.

123. Hutchinson E.C. Influenza Virus // Trends Microbiol. - 2018. pii: S0966-842X(18)30131-8. doi: 10.1016/j.tim.2018.05.013. [Epub ahead of print]

124. Iblinternational GMBH. Enzyme immunoassay for the quantitative determination of human anti-Interferon-g (anti-IFN-g) in cell culture supernatant, serum, plasma and urine (cat. N BE51051).

125. ICH E.W.G. Guideline for Industry Dose-Response Information to Support Drug Registration. In: ICH (Ed.). 1994.

126. ICH harmonised tripartite guideline specifications: test procedures and acceptance criteria for biotechnological/biological products Q6B. March 1999. http://www.ich.org.

127. Jambou, F. Circulating regulatory anti-T cell receptor antibodies in patients with myasthenia gravis / F. Jambou, W. Zhang, M. Menestrier, et al. // J. Clin. Invest. - 2003. - V. 112. - № 2. - P. 265-274.

128. Janeway, C.A. Jr. Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. / C.A. Jr Janeway, P. Travers, M. Walport, et al /5th edition. - New York: Garland Science; 2001. -752 pp.

129. Jiang, T. Role of circulating-tumor DNA analysis in non-small cell lung cancer / T. Jiang, S. Ren, C. Zhou // Lung Cancer. - 2015. - V. 90. - № 2. - P. 128-134. doi: 10.1016/j.lungcan.2015.09.013.

130. Kampmann, B. Acquired predisposition to mycobacterial disease due to autoantibodies to IFN-gamma / B. Kampmann, C. Hemingway, A. Stephens, et al. // J. Clin. Invest. - 2005. - V. 115. - № 9. - P. 2480-2488. doi: 10.1172/JCI19316.

131. Kardash, E.V. Dose-response effect of antibodies to S100 protein and cannabinoid receptor type 1 in released-active form in the light-dark test in mice / E.V. Kardash, I.A. Ertuzun, G.R. Khakimova, et al. // Dose-Response: An International Journal. - 2018. -Vol.16. - №2. -1559325818779752. doi:10.1177/1559325818779752.

132. Kaveri, S.V. Intravenous immunoglobulin: exploiting the potential of natural antibodies // Autoimmun. Rev. - 2012. - V. 11. - № 11. - P. 792-794. doi: 10.1016/j.autrev.2012.02.006.

133. Kheyfets, I.A. Study of hypoglycemic activity of Subetta and rosiglitazone on the model of streptozotocin-induced diabetes mellitus in rats / I.A. Kheyfets, A.A. Spasov, M.P. Voronkova, et al. // Bull. Exp. Biol. Med. - 2012. - V. 153. - № 1. - P. 54-56.

134. Khoufache, K. Protective role for protease-activated receptor-2 against influenza virus pathogenesis via an IFN-gamma-dependent pathway / K. Khoufache, F. LeBouder, E. Morello, et al. // J. Immunol. - 2009. - V. 182. - № 12. - P. 7795-7802. doi: 10.4049/jimmunol.0803743.

135. Killip, M.J. Influenza virus activation of the interferon system / M.J. Killip, E. Fo-dor, R.E. Randall // Virus Res. - 2015. - V. 209. - P. 11-22. doi: 10.1016/j.vi-rusres.2015.02.003.

136. Klassen, B.T. Quantitative EEG as a predictive biomarker for Parkinson disease dementia / B.T. Klassen, J.G. Hentz, H.A. Shill, et al. // Neurology. - 2011. - V. 77. - № 2. - P. 118-124. doi: 10.1212/WNL.0b013e318224af8d.

137. Klein, S.D. Comparison of homeopathic globules prepared from high and ultrahigh dilutions of various starting materials by ultraviolet light spectroscopy / S.D. Klein, U. Wolf // Complement. Ther. Med. - 2016. - V. 24. - P. 111-117. doi:10.1016/j.ctim.2015.12.017.

138. Kohler, H. Natural autoantibodies as tools to predict the outcome of immune response? / H. Kohler, J. Bayry, A. Nicoletti, et al // Scand. J. Immunol. - 2003. - V. 58. -№ 3. - P. 285-289.

139. Kokornaczyk, M.O. Polycrystalline structures formed in evaporating droplets as a parameter to test the action of Zincum metallicum 30c in wheat seed model / M.O. Ko-kornaczyk, S. Baumgartner, L. Betti // Homeopathy. - 2016. - V. 105. - P. 173-179. doi:10.1016/j.homp.2015.10.002.

140. Kong, W. Novel reassortant influenza viruses between pandemic (H1N1) 2009 and other influenza viruses pose a risk to public health / W. Kong, F. Wang, B. Dong, et al // Microb. Pathog. - 2015. - V. 89. - P. 62-72. doi: 10.1016/j.micpath.2015.09.002.

141. Koya, T. Anti-interferon-gamma autoantibody in a patient with disseminated Mycobacterium avium complex / T. Koya, C. Tsubata, H. Kagamu, et al. // J. Infect. Chemother. - 2009. -V. 15. - № 2. - P. 118-122. doi: 10.1007/s10156-008-0662-8.

142. Krammer, F. Advances in the development of influenza virus vaccines / F. Kram-mer, P. Palese // Nat. Rev. Drug. Discov. - 2015. - V. 14. - № 3. - P. 167-182. doi: 10.1038/nrd4529.

143. Kudin, M.V. Anaferon (pediatric formulation) in prophylactics of acute respiratory viral infection in children / M.V. Kudin, S.A. Tarasov, M.V. Kachanova, et al // Bull. Exp. Biol. Med. - 2009. - V. 148. - № 2. - P. 279-282.

144. Kwok, A.Y. Human interferon-gamma has three domains associated with its antiviral function: a neutralizing epitope typing scheme for human interferon-gamma / A.Y. Kwok, X. Zu, C. Yang, et al. // Immunology. - 1993. - V. 79. - № 1. - P. 131 - 137.

145. Lamb, R.A. In: Influenza (MS 654). / R.A. Lamb, K.L. Roberts /In: Reference Module in Biomedical Science (Caplan MJ, editor). Chapter 02606. - Amsterdam: Elsevier Inc. 2014.

146. Lane, C.Vaccination-induced autoimmune vitiligo is a consequence of secondary trauma to the skin / C. Lane, J. Leitch, X. Tan, et al. // Cancer Res. - 2004. - V. 64. - № 4. - P.1509-1514.

147. Lane, S.K. Clinical utility of common serum rheumatologic tests / S.K. Lane, J.W.Jr. Gravel // Am. Fam. Physician. - 2002. - V. 65. - № 6. - P. 1073-1080.

148. Leneva, I. The neuraminidase inhibitor GS4104 (oseltamivir phosphate) is efficacious against A/Hong Kong/156/97 (H5N1) and A/Hong Kong/1074/99 (H9N2) influenza virus / I. Leneva, N. Roberts, E. Govorkova, et al. // Antiviral Res. - 2000. - V. 48. - № 2. - P. 101-115.

149. Lin, C.H. Identification of a major epitope by anti-interferon-gamma autoantibodies in patients with mycobacterial disease / C.H. Lin, C.Y. Chi, H.P. Shih, et al. // Nat. Med. - 2016. - V. 22. - № 9. - P. 994-1001. doi: 10.1038/nm.4158.

150. Liu, C.C. Biomarkers in systemic lupus erythematosus: challenges and prospects for the future / C.C. Liu, A.H. Kao, S. Manzi, et al. // Ther. Adv. Musculoskelet. Dis. -2013. - V. 5. - № 4. - P. 210-233. doi: 10.1177/1759720X13485503.

151. Lundell, D.L. Structural elements required for receptor recognition of human inter-feron-gamma / D.L. Lundell, S.K. Narula // Pharmacol. Ther. - 1994. - V. 64. - № 1. -P. 1-21.

152. Lutz, H.U. Homeostatic roles of naturally occurring antibodies: an overview // J. Autoimmun. - 2007. - V. 29. - № 4. - P. 287-294.

153. Lutz, H.U. Naturally occurring auto-antibodies in homeostasis and disease / H.U. Lutz, C.J. Binder, S. Kaveri // Trends Immunol. - 2009. - V. 30. - № 1. - P. 43-51. doi: 10.1016/j.it.2008.10.002.

154. Ma, N.L. A Review of the "Omics" approach to biomarkers of oxidative stress in Oryza sativa / N.L. Ma, Z. Rahmat, S.S. Lam // Int. J. Mol. Sci. - 2013. - V. 14. - № 4. - P. 7515-7541. doi: 10.3390/ijms14047515.

155. Madariaga, L. Detection of anti-interferon-gamma autoantibodies in subjects infected by Mycobacterium tuberculosis / L. Madariaga, C. Amurrio, G. Martin, et al. // Int. J. Tuberc. Lung Dis. - 1998. - V. 2. - № 1. - P. 62-68.

156. Mahler, M. Autoantibodies in systemic autoimmune disorders / M. Mahler, S. Pie-rangeli, P.L. Meroni, et al. // J. Immunol. Res. - 2014. - V. 2014. - P. 263091. doi: 10.1155/2014/263091.

157. Mahmuda, A. Monoclonal antibodies: A review of therapeutic applications and future prospects / A. Mahmuda, F. Bande, K. Jameel, et al. // Tropical Journal of Pharmaceutical Research. - 2017. - V. 16. - № 3. - P. 713-722.

158. Maity, T. Effect of dielectric dispersion on potentised homeopathic medicines / T. Maity, D. Ghosh, C.R. Mahata // Homeopathy. - 2010. - V. 99. - P. 99-103. doi:10.1016/j.homp.2009.10.004.

159. Mannoor, K. Natural autoantibodies and associated B cells in immunity and autoimmunity / K. Mannoor, Y. Xu, C. Chen // Autoimmunity. - 2013. - V. 46. - № 2. -P. 138-147. doi: 10.3109/08916934.2012.748753.

160. Martyushev-Poklad, A.V. A novel antiviral based on oral antibodies: clinical benefits in paediatric upper respiratory infections / A.V. Martyushev-Poklad, V.F. Uchaikin, M.P. Kotelnikova, et al. // Clin. Microbiol.Infect. - 2004. - V. 10. - Suppl. 3. - P. 125126.

161. Matejuk, A. Exclusion of natural autoantibody-producing B cells from IgG memory B cell compartment during T cell-dependent immune responses / A. Matejuk, M. Beardall, Y. Xu, et al. // J. Immunol. - 2009. - V. 182. - № 12. - P. 7634-7643. doi: 10.4049/jimmunol.0801562.

162. Mayeux, R. Biomarkers: potential uses and limitations // NeuroRx. - 2004. - V. 1. - № 2. - P. 182-188.

163. McDermott, J.E. Challenges in Biomarker Discovery: Combining Expert Insights with Statistical Analysis of Complex Omics Data / J.E. McDermott, J. Wang, H. Mitchell, et al. // Expert Opin. Med. Diagn. - 2013. - V. 7. - № 1. - P. 37-51.

164. Mclntyre, J.A. Autoantibodies unmasked by redox reactions / J.A. Mclntyre, D.R. Wagenknecht, W.P. Faulk // J. Autoimmun. - 2005. - V. 24. - № 4. - P. 311-317. doi: 10.1016/j.jaut.2005.03.005.

165. Meager, A. Natural autoantibodies to interferons // J. Interferon Cytokine Res. -1997. - V. 17. - Suppl. 1. - P. 51-53.

166. Meager, A. Anti-cytokine autoantibodies in autoimmunity: preponderance of neutralizing autoantibodies against interferon-alpha, interferon-omega and interleukin-12 in patients with thymoma and/or myasthenia gravis / A. Meager, M. Wadhwa, P. Dilger, et al. // Clin. Exp. Immunol. - 2003. - V. 132. - № 1. - P. 128-136.

167. Mehrani, T. IgM anti-02 glycoprotein I is protective against lupus nephritis and renal damage in systemic lupus erythematosus / T. Mehrani, M. Petri // J. Rheumatol. -2011. - V. 38. - № 3. - P. 450-453. doi: 10.3899/jrheum.100650.

168. Menetrier-Caux, C. Identification of human IgG autoantibodies specific for IL-10 / C. Menetrier-Caux, F. Briere, P. Jouvenne et al. // Clin. Exp. Immunol. - 1996. - V. 104. - № 1. - P. 173-179.

169. Miescher, S.M. The future of immunoglobulin therapy: an overview of the 2nd international workshop on natural antibodies in health and disease / S.M. Miescher, F. Käsermann // Autoimmun. Rev. - 2013. - V. 12. - № 6. - P. 639-642. doi: 10.1016/j.autrev.2013.01.003.

170. Miller, S.E. Detection and identification of viruses by electron microscopy.// Journal of electron microscopy technique. -1986. - V.4 -P. 265-301.

171. Mkrtumyan, A. Efficacy and safety of Subetta add-on therapy in type 1 diabetes mellitus: The results of a multicenter, double-blind, placebo-controlled, randomized clinical trial / A. Mkrtumyan, T. Romantsova, S. Vorobiev, et al. // Diabetes Res. Clin. Pract.

- 2018. - V. 142. - P. 1-9.

172. Montagnier, L. Electromagnetic signals are produced byaqueous nanostructures derived from bacterial DNA sequences / L. Montagnier, J. Aissa, S. Ferris, et al. // Inter-discip. Sci. - 2009. - V. 1. - P. 1-90. doi: 10.1007/s12539-009-0036-7.

173. Moore, B.P.L. Antibody uptake: the first stage of the haemagglutination reaction. In: Bell CA, editor. A Seminar on Antigen-antibody Reactions Revisited. Arlington VA: AABB; 1982. p. 47-66.

174. Moorthy, N.S. Viral M2 ion channel protein: a promising target for anti-influenza drug discovery / N.S. Moorthy, V. Poongavanam, V. Pratheepa // Mini Rev. Med. Chem.

- 2014. - V. 14. - № 10. - P. 819-830.

175. Nagele, E.P. Natural IgG autoantibodies are abundant and ubiquitous in human sera, and their number is influenced by age, gender, and disease / E.P. Nagele, M. Han, N.K. Acharya, et al. // PLoS One. - 2013. - V. 8. - № 4. - P. e60726. doi: 10.1371/jour-nal.pone.0060726.

176. Narasaraju, T. Adaptation of human influenza H3N2 virus in a mouse pneumonitis model: insights into viral virulence, tissue tropism and host pathogenesis / T. Narasaraju, M.K. Sim, H.H. Ng, et al. // Microbes. Infect. - 2009. - V. 11. - № 1. - P. 2-11. doi: 10.1016/j.micinf.2008.09.013.

177. Nguyen-Van-Tam, J.S. Neuraminidase inhibitors: who, when, where? / J.S. Nguyen-Van-Tam, S. Venkatesan, S.G. Muthuri, et al. // Clin. Microbiol. Infect. - 2015.

- V. 21. - № 3. - P. 222-225. doi: 10.1016/j.cmi.2014.11.020.

178. Nicoll, J. Subetta Treatment Increases Adiponectin Secretion by Mature Human Adipocytes In Vitro / J. Nicoll, E.A. Gorbunov, S.A. Tarasov, et al. // Int. J. Endocrinol.

- 2013. - V. 2013. - Article ID 925874. doi: 10.1155/2013/925874.

179. Nishimura, T. Recurrence of Disseminated Mycobacterium avium Complex Disease in a Patient with Anti-Gamma Interferon Autoantibodies by Reinfection / T. Nishimura, Y. Fujita-Suzuki, M. Yonemaru, et al. // J. Clin. Microbiol. - 2015. - V. 53. - № 4. - P. 1436-1438. doi: 10.1128/JCM.03339-14.

180. Notkins, A.L. Polyreactivity of antibody molecules // Trends Immunol. - 2004. -V. 25. - № 4. - P. 174-179.

181. Nowak, M. Current clinical application of serum biomarkers to detect ovarian cancer / M. Nowak, L. Janas, G. Stachowiak, et al. // Prz. Menopauzalny. - 2015. - V. 14. -№ 4. - P. 254-259. doi: 10.5114/pm.2015.55887.

182. Ochsenbein, A.F. Control of early viral and bacterial distribution and disease by natural antibodies / A.F. Ochsenbein, T. Fehr, C. Lutz, et al. // Science. - 1999. - V. 286.

- № 5447. - P. 2156-2159.

183. Oh, D.Y. A Review of the Antiviral Susceptibility of Human and Avian Influenza Viruses over the Last Decade / D.Y. Oh, A.C. Hurt // Scientifica (Cairo). - 2014. - V. 2014. - Article ID 430629. doi: 10.1155/2014/430629.

184. Oppezzo, P. Autoantibodies, tolerance and autoimmunity / P. Oppezzo, G. Dig-hiero // Pathol. Biol. (Paris). - 2003. - V. 51. - № 5. - P. 297-304.

185. Pal, M.K. MicroRNA: a new and promising potential biomarker for diagnosis and prognosis of ovarian cancer / M.K. Pal, S.P. Jaiswar, V.N. Dwivedi, et al. // Cancer Biol. Med. - 2015. - V. 12. - № 4. - P. 328-341. doi: 10.7497/j.issn.2095-3941.2015.0024.

186. Paludan, S.R. Innate Antiviral Defenses Independent of Inducible IFNa/ß Production // Trends Immunol. - 2016. - V. 37. - № 9. - P. 588-596. doi: 10.1016/j.it.2016.06.003.

187. Patel, S.Y. Anti-IFN-gamma autoantibodies in disseminated nontuberculous mycobacterial infections / S.Y. Patel, L. Ding, M.R. Brown, et al. // J. Immunol. - 2005. -V. 175. - № 7. - P. 4769- 4776.

188. Peteranderl, C. Human influenza virus infections / C. Peteranderl, S. Herold, C. Schmoldt // Semin. Respir. Crit. Care. Med. - 2016. - V. 37. - № 4. - P. 487-500. doi: 10.1055/s-0036-1584801.

189. Petrova, N.V. Efficacy of novel antibody-based drugs against rhinovirus infection: In vitro and in vivo results / N.V. Petrova, A.G. Emelyanova, E.A. Gorbunov, et al. // Antiviral Res. - 2017. - V. 142. - P. 185-192.

190. Prabhu, N. Gamma interferon regulates contraction of the influenza virus-specific CD8 T cell response and limits the size of the memory population / N. Prabhu, A.W. Ho, K.H. Wong, et al. // J. Virol. - 2013. - V. 87. - № 23. - P. 12510-12522. doi: 10.1128/JVI.01776-13.

191. Pschenitza, M. Application of a heterogenes immunoassay for the quality control testing of release-active forms of diclofenac / M. Pschenitza, E.S. Gavrilova, S.A. Tara-sov, et al. // Int. Immunopharmacol. - 2014. - V. 21. - № 1. - P. 225-230.

192. Puel, A.. Autoantibodies against cytokines: back to human genetics / A. Puel, J.L. Casanova // Blood. - 2013. - V. 121. - № 8. - P. 1246-1247. doi: 10.1182/blood-2013-01-474213.

193. Quintana, F.J. The natural autoantibody repertoire and autoimmune disease / F.J. Quintana, I.R. Cohen // Biomed. Pharmacother. - 2004. - V. 58. - № 5. - P. 276-281.

194. Rafalsky, V. Efficacy and safety of Ergoferon versus oseltamivir in adult outpatients with seasonal influenza virus infection: a multicenter, open-label, randomized trial / V. Rafalsky, A. Averyanov, B. Bart, et al. // Int. J. Infect. Dis. - 2016. - V. 51. - P. 4755.

195. Rao, M.L. Characterization of the structure of ultra dilute sols with remarkable biological properties / M.L. Rao, R. Roy, I. Bell // Mater. Lett. - 2008. - V. 62. - P. 14871490. doi:10.1016/j .matlet.2007.09.007.

196. Rapisarda, A.. Kinetic discrimination of DNA single-base mutations by localized surface plasmon resonance / A. Rapisarda, N. Giamblanco, G. Marletta // J. Colloid Interface Sci. - 2017. - V. 487. - P. 141-148. doi: 10.1016/j.jcis.2016.10.026.

197. Reed L.J. A simple method of estimating fifty per cent endpoints // Am. J. Hyg. -V. 27. - № 3. - P. 493-497.

198. Reeves, P.T. In: Drug action and pharmacodynamics. Merck Manual. Vol. 2015. / P.T. Reeves, C. Roesch, M.N. Raghnaill / Merck, http://www.merckvetma-nual.com/mvm/pharmacology/pharmacology_introduction/drug_action_ and_pharmaco-dynamics.html

199. Reinisch, W. Fontolizumab in moderate to severe Crohn's disease: a phase 2, randomized, double-blind, placebo-controlled, multiple-dose study / W. Reinisch, W. de Vil-liers, L. Bene, et al. // Inflamm. Bowel Dis. - 2010. - V. 16. - № 2. - P. 233-242. doi: 10.1002/ibd.21038.

200. Reverberi, R. Factors affecting the antigen-antibody reaction // R. Reverberi, L. Reverberi / Blood Transfus. - 2007. - V. 5. - № 4. - P. 227-240. doi: 10.2450/2007.004707.

201. Rich, R.L. Higher-throughput, label-free, real-time molecular interaction analysis / R.L. Rich, D.G. Myszka // Anal. Biochem. - 2007. - V. 361. - № 1. - P. 1-6. doi: 10.1016/j.ab.2006.10.040.

202. Riedmaier, I. Transcriptional biomarkers - high throughput screening, quantitative verification, and bioinformatical validation methods / I. Riedmaier, M.W. Pfaffl // Methods. - 2013. - V. 59. - № 1. - P. 3-9. doi: 10.1016/j.ymeth.2012.08.012.

203. Rifai, N. Protein biomarker discovery and validation: the long and uncertain path to clinical utility / N. Rifai, M.A. Gillette, S.A. Carr // Nat. Biotechnol. - 2006. - V. 24. - № 8. - P. 971-983.

204. Rimmelzwaan, G.F. Comparison of RNA hybridization, hemagglutination assay, titration of infectious virus and immunofluorescence as methods for monitoring influenza virus replication in vitro / G.F. Rimmelzwaan, M. Baars, E.C. Claas, et al. // J. Virol. Methods. -1998. - V. 74. - № 1. - P. 57-66.

205. Robey, I.F. Human monoclonal natural autoantibodies against the T-cell receptor inhibit interleukin-2 production in murine T cells / I.F. Robey, S.F. Schluter, E. Ak-poriaye, et al. // Immunology. - 2002. - V. 105. - № 4. - P. 419-429.

206. Ronda, N. Normal human IgG prevents endothelial cell activation induced by TNFalpha and oxidized low-density lipoprotein atherogenic stimuli / N. Ronda, F. Bernini, R. Giacosa, et al. // Clin. Exp. Immunol. - 2003. - V. 133. - № 2. - P. 219-226.

207. Ross, C. Specific autoantibodies directed against interferon-alpha in pharmaceuti-cally prepared human immunoglobulin preparations / C. Ross, M. Svenson, M.B. Hansen, et al. // J. Interferon Res. - 1994. - V. 14. - № 4. - P. 159-160.

208. Salahvarzia, A. Localized surface plasmon resonance based gold nanobiosensor: Determination of thyroid stimulating hormone / A. Salahvarzia, M. Mahania, M. Torkzadeh-Mahanib, et al. // Anal. Biochem. - 2017. - V. 516. - P. 1-5. doi: 10.1016/j.ab.2016.10.003.

209. Salhany, J.M. Characterization of immunoglobulin binding to isolated human erythrocyte membranes: evidence for selective, temperature-induced binding of naturally occurring autoantibodies to the cytoskeleton / J.M. Salhany, K.S. Cordes, R.L. Sloan // Bio-chim. Biophys. Acta. - 2001. - V. 1511. - № 1. - P. 168-180.

210. Sauerborn, M. Natural antibodies against bone morphogenic proteins and interferons in healthy donors and in patients with infections linked to type-1 cytokine responses / M. Sauerborn, E. van de Vosse, D. Delawi, et al. // J. Interferon Cytokine Res. -2011. - V. 31. - № 9. - P. 661-669. doi: 10.1089/jir.2010.0075.

211. Schettino, E.W. VHDJH gene sequences and antigen reactivity of monoclonal antibodies produced by human B-1 cells: evidence for somatic selection / E.W. Schettino, S.K. Chai, M.T. Kasaian, et al. // J. Immunol. - 1997. - V. 158. - № 5. - P. 2477-2489.

212. Schwartz-Albiez, R. Natural antibodies, intravenous immunoglobulin and their role in autoimmunity, cancer and inflammation / R. Schwartz-Albiez, R.C. Monteiro, M. Rodriguez, et al. // Clin. Exp. Immunol. - 2009. - V. 158. - Suppl. 1. - P. 43-50. doi: 10.1111/j.1365-2249.2009.04026.x.

213. Sela-Culang, I. The structural basis of antibody-antigen recognition // Front. Immunol. - 2013. - V. 4. - P. 302. doi: 10.3389/fimmu.2013.00302.

214. Sharp, P.M. Origins of human virus diversity / I. Sela-Culang, V. Kunik, Y. Ofran // Cell. - 2002. - V. 108. - № 3. - P. 305-312.

215. Shoenfeld, Y. Protective autoantibodies: role in homeostasis, clinical importance, and therapeutic potential / Y. Shoenfeld, E. Toubi // Arthritis Rheum. - 2005. - V. 52. -№ 9. - P. 2599-2606.

216. Shridhar, K. DNA methylation markers for oral pre-cancer progression: A critical review / K. Shridhar, G.K. Walia, A. Aggarwal, et al. // Oral Oncol. - 2016. - V. 53. - P. 1-9. doi: 10.1016/j.oraloncology.2015.11.012.

217. Sigounas, G. Polyreactive IgM antibodies in the circulation are masked by antigen binding / G. Sigounas, N. Kolaitis, E. Monell-Torrens, et al // J. Clin. Immunol. - 1994. - V. 14. - № 6. - P. 375-381.

218. Silo§i, I. The role of autoantibodies in health and disease / I. Silo§i, C.A. Silo§i, M.V. Boldeanu, et al. // Rom. J. Morphol. Embryol. - 2016. - V. 57. - Suppl. 2. - P. 633638.

219. Silverman, G.J. Protective autoantibodies in the rheumatic diseases: lessons for therapy / G.J. Silverman, J. Vas, C. Gronwall // Nat. Rev. Rheumatol. - 2013. - V. 9. -№ 5. - P. 291-300. doi: 10.1038/nrrheum.2013.30.

220. Singer, C.F. Predicting the efficacy of trastuzumab-based therapy in breast cancer: current standards and future strategies / C.F. Singer, W.J. Kostler, G. Hudelist // Biochim. Biophys. Acta. - 2008. - V. 1786. - № 2. - P. 105-113. doi: 10.1016/j.bbcan.2008.02.003.

221. Skarnovich, M.A. Activity of ergoferon against lethal influenza A (H3N2) virus infection in mice / M.A. Skarnovich, A.G. Emelyanova, N.V. Petrova, et al. // Antivir. Ther. - 2017. - V. 22. - № 4. - P. 345-351. doi: 10.3851/IMP3115.

222. Smith, J.R. The use of antiviral agents for the management of severe influenza / J.R. Smith, R.E. Ariano, S. Toovey // Crit. Care Med. - 2010. - V. 38. - Suppl 4. - P. e43-51. doi: 10.1097/CCM.0b013e3181c85229.

223. Stevens, F.J. A modification of an ELISA-based procedure for affinity determination: correction necessary for use with bivalent antibody // Mol. Immunol. - 1987. - V. 24. - № 10. - P. 1055-1060. doi: 10.1016/0161-5890(87)90073-3.

224. Stojanovich, L. Stress as a trigger of autoimmune disease / L. Stojanovich, D. Ma-risavljevich // Autoimmun. Rev. - 2008. - V. 7. - № 3. - P. 209-213. doi: 10.1016/j.autrev.2007.11.007.

225. Sukul, A. Altered solution structure of alcoholic medium of potentized Nux vomica underlies its antialcoholic effect / A. Sukul, P. Sarkar, S.P. Sinhababu, et al. // Br. Homoeopath. J. - 2000. - V. 89. - P. 73-77.

226. Suzuki, H. Anti-IL-la autoantibodies in patients with rheumatic diseases and in healthy subjects / H. Suzuki, T. Ayabe, J. Kamimura, et al. // Clin. Exp. Immunol. - 1991.

- V. 85. - № 3. - P. 407-412.

227. Svenson, M. IgG autoantibodies against interleukin-1 alpha in sera of normal individuals / M. Svenson, L.K. Poulsen, A. Fomsgaard, et al. // Scand. J. Immunol. - 1989. -V. 29. - № 4. - P. 489-492.

228. Takemura, H. Anti-interleukin-6 autoantibodies in rheumatic diseases. Increased frequency in the sera of patients with systemic sclerosis / H. Takemura, H. Suzuki, K. Yoshizaki, et al. // Arthritis Rheum. - 1992. - V. 35. - № 8. - P. 940-943.

229. Tanaka, D. High-sensitivity surface plasmon resonance sensors utilizing high-refractive-index silver nanoparticle sheets / D. Tanaka, S. Shinohara, E. Usukura, et al. // Jap. J. Appl. Phys. - 2014. - V. 53. - № 1S. doi: 10.7567/JJAP.53.01AF01

230. Tanaka, Y. Disseminated Mycobacterium avium complex infection in a patient with autoantibody to interferon-gamma / Y. Tanaka, T. Hori, K. Ito, et al. // Intern. Med.

- 2007. - V. 46. - № 13. - P. 1005-1009.

231. Tarasov, S. Oral antibody to interferon gamma in ultra low doses: clinical efficacy and interferon stimulation in patients with upper respiratory viral infections / S. Tarasov, J. Dugina, S. Sergeeva, et al. // Fund. Clin. Pharmacol. - 2008. - V. 22. - Suppl. 2. - P.

37.

232. Tarasov, S.A. Activity of ultra-low doses of antibodies to gamma-interferon against lethal influenza A(H1N1)2009 virus infection in mice / S.A. Tarasov, V.V. Zarubaev, E.A. Gorbunov, et al. // Antiviral Res. - 2012. - V. 93. - № 2. - P. 219-224. doi: 10.1016/j.antiviral.2011.11.018.

233. Tarasov, S.A. Anaferon, released-active from of antibodies to IFNy, as an effective medicine for treatment and prophylaxis of a wide spectrum of infections / S.A. Tarasov, M.V. Kachanova, E.A. Gorbunov, et al. // Clin Res Trials 2. - 2016. doi: 10.15761/CRT.1000152.

234. Thiel, D.J. Observation of an unexpected third receptor molecule in the crystal structure of human interferon-gamma receptor complex / D.J. Thiel, M.H. le Du, R.L. Walter, et al. // Structure. - 2000. - V. 8. - № 9. - P. 927-936.

235. Thorpe, S.J. Immunochemical characterization of the Rh CW antigen using human monoclonal antibodies / S.J. Thorpe, C.E. Boult, K.M. Thompson // Vox Sang. - 1997. -V. 73. - № 3. - P. 174-181.

236. Tiberio, L. The detection and biological activity of human antibodies to IL-2 in normal donors / L. Tiberio, A. Caruso, A. Pozzi, et al. // Scand. J. Immunol. - 1993. - V. 38. - № 5. - P. 472-476.

237. Tiezzi, E. NMR evidence of a supramolecular structure of water // Ann. Chim. -2003. - V. 93. - P. 471-476.

238. Tiller, T. Autoreactivity in Human IgG+ Memory B Cells / T. Tiller, M. Tsuiji, S. Yurasov, et al. // Immunity. - 2007. - V. 26. - № 2. - P. 205-213.

239. Trinchieri, G. Immune interferon: a pleiotropic lymphokine with multiple effects / G. Trinchieri, B. Perussia // Immunol. Today. - 1985. - V. 6. - № 4. - P. 131-136. doi: 10.1016/0167-5699(85)90080-5.

240. Van Der Merwe, P.A. Surface plasmon resonance. In: Harding SE, Chowdhry BZ (eds) Protein-ligand interactions: hydrodynamics and calorimetry. - Oxford: Oxford University Press, 2001. - pp 137-170.

241. Van Oss, C.J. Hydrophobic, hydrophilic and other interactions in epitope-paratope binding // Mol. Immunol. - 1995. - V. 32. - № 3. - P. 199-211.

242. Vani, J. Role of natural antibodies in immune homeostasis: IVIg perspective / J. Vani, S. Elluru, V.S. Negi, et al. // Autoimmun. Rev. - 2008. - V. 7. - № 6. - P. 440444. doi: 10.1016/j.autrev.2008.04.011.

243. Vasil'ev, A.N. Use of ultralow doses of antibodies to gamma-interferon in the treatment and prophylaxis of viral infections / A.N. Vasil'ev, S.A. Sergeeva, M.V. Ka-chanova, et al. // Antibiot. Khimioter. - 2008. - V. 53. - № 3-4. - P. 32-35.

244. Vetlugina, T.P. Adjunctive use of interferon y inducer for treatment of patients with schizophrenia / T.P. Vetlugina, O.A. Lobacheva, S.A. Sergeeva, et al. // Acta Neuropsychiatry. - 2015. - P.1-8.

245. Viral Pathogenesis. (N. Nathanson, F. A. Murphy, R. Ahmed, K. Holmes, D. Griffin, F. Gonzales and H. Robinson, eds), - Publisher: Raven Pr; 1st edition 1997, - pp.940.

246. von Gunten, S. Cell death modulation by intravenous immunoglobulin / S. von Gunten, H.U. Simon // J. Clin. Immunol. - 2010. - V. 30. - Suppl. 1. - P. 24-30. doi: 10.1007/s10875-010-9411-8.

247. Voronina, T.A. Antibodies to S-100 Protein in Anxiety-Depressive Disorders in Experimental and clinical Conditions. / T.A. Voronina, S.A. Sergeeva, A.V. Martyushev-Poklad, et al. / In: Animal Models in Biological Psychiatry Editor: Allan V. Kalueff. -Nova Science Publishers, Inc., 2006. -P.137-52.

248. Walter, M.R. Crystal structure of a complex between interferon-gamma and its soluble high affinity receptor / M.R. Walter, W. Windsor, T.L. Nagabhushan, et al. // Nature. - 1995. - V. 376. - № 6537. - P. 230-235. doi: 10.1038/376230a0.

249. Wang, R. Antiviral responses in mouse embryonic stem cells: differential development of cellular mechanisms in type I interferon production and response / R. Wang, J. Wang, D. Acharya, et al. // J. Biol. Chem. - 2014. - V. 289. - № 36. - P. 2518625198. doi: 10.1074/jbc.M113.537746.

250. Watson, J.D. Molecular Biology of the Gene./ J.D. Watson, T.A. Baker, S.P. Bell, et al. / - San Francisco: California Pearson/Benjamin Cummings, 2004-pp.732.

251. Waynforth, H.B. Good Practice Guidelines. Administration of Substances (Rat, Mouse, Guinea Pig, Rabbit). / H.B. Waynforth, P. Brain, T. Sharpe, et al. // LASA GOOD PRACTICE GUIDELINES. - 1998. - Series 1. - Issue 1.- P. 4.

252. Weingärtner, O. What is the therapeutically active ingredient of homeopathic potencies? // Homeopathy. - 2003. - V. 92. - P. 145-151.

253. Welcsh, P.L. BRCA1 and BRCA2 and the genetics of breast and ovarian cancer / P.L. Welcsh, M.C. King // Hum. Mol. Genet. - 2001. - V. 10. - № 7. - P. 705-713.

254. Wiley, J.A. Production of interferon-gamma by influenza hemagglutinin-specific CD8 effector T cells influences the development of pulmonary immunopathology / J.A. Wiley, A. Cerwenka, J.R .Harkema, et al. // Am. J. Pathol. - 2001. - V. 158. - № 1. - P. 119-130.

255. Wolf, U. Homeopathic preparations of quartz, sulfur and copper sulfate assessed by UV-spectroscopy / U. Wolf, M. Wolf, P. Heusser, et al // Evid. Based Complement. Altern. Med. - 2011. - V. 2011. - 692798. doi:10.1093/ecam/nep036.

256. Wu, Q. Revealing potential biomarkers of functional dyspepsia by combining 1H NMR metabonomics techniques and an Integrative multi-objective optimization method / Q. Wu, M. Zou, M. Yang, et al // Sci. Rep. - 2016. - V. 6. - P. 18852. doi: 10.1038/srep18852.

257. Yurasov, S. Regulation of autoreactive antibodies / S. Yurasov, M.C. Nussenzweig // Curr. Opin. Rheumatol. - 2007. - V. 19. - № 5. - P. 421-426.

258. Zhdanova, O.B. Crystallogenesis of bioliquid in the homoeopathy / O.B. Zhdanova, S.I. Viacheslavovich, A.K. Martusevich, et al // Int. J. High Dilution Res. -2012. - V. 11. - P. 118-119.

259. Zhou, Z.H. The broad antibacterial activity of the natural antibody repertoire is due to polyreactive antibodies / Z.H. Zhou, Y. Zhang, Y.F. Hu, et al // Cell Host Microbe. -2007. - V. 1. - № 1. - P. 51-61.

260. Zu, X.W. The E1 functional epitope of the human interferon gamma is a nuclear targeting signal-like element. Mapping of the E1 epitope / X.W. Zu, F.T. Jay // J. Biol. Chem. - 1991. - V. 266. - № 10. - P. 6023-6026.

261. Zuber, B. Epitope Mapping of Neutralizing Monoclonal Antibodies to Human Interferon^ Using Human-Bovine Interferon-y Chimeras / B. Zuber, K. Rudström, C. Ehrn-felt, et al // J. Interferon Cytokine Res. - 2016. - V. 36. - № 9. - P. 542-551. doi: 10.1089/jir.2016.0017.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение А

Сенсограммы взаимодействия образцов и интерферона гамма с иммобилизованными антителами в поверхностном плазмонном резонансе

Рисунок А.1 - Сенсограммы взаимодействия смеси РАФ Ат к ИФНу и интерферона гамма с иммобилизованными антителами .№1 в виде разности сигналов биосенсора рабочего и контрольного каналов. Обозначения: 1 — начало инжекции образца, 2 — окончание инжекции образца.

Рисунок А.2 - Сенсограммы взаимодействия смеси технологического плацебо и интерферона гамма с иммобилизованными антителами №1 в виде разности

сигналов биосенсора рабочего и контрольного каналов. Обозначения: 1 — начало инжекции образца, 2 — окончание инжекции образца.

ог

1600-,

1200

800

400-

ч

ш

-400-1

100 нМ 50 нМ -25 нМ

200

400

600

800

Время, с

Рисунок А.3 - Сенсограммы взаимодействия смеси воды и интерферона гамма с иммобилизованными антителами №1 в виде разности сигналов биосенсора рабочего и контрольного каналов. Обозначения: 1 — начало инжекции образца, 2 — окончание инжекции образца.

ей

600-1

400-

200-

ч ы

-200

100 нМ 50 нМ -25 нМ

1000

Время, с

Рисунок А.4 - Сенсограммы взаимодействия смеси РАФ Ат к ИФНу и интерферона гамма с иммобилизованными антителами №5 в виде разности сигналов биосенсора: рабочего и контрольного каналов. Обозначения: 1 — начало инжекции образца, 2 — окончание инжекции образца.

1600 -1

1200

800-

400-

ы

-400 -1

100 нМ 50 нМ -25 нМ

200

400

600

800

1000

Время, с

Рисунок А.5 - Сенсограммы взаимодействия смеси технологического плацебо и интерферона гамма с иммобилизованными антителами №1 в виде разности сигналов биосенсора: рабочего и контрольного каналов. Обозначения: 1 — начало инжекции образца, 2 — окончание инжекции образца.

-400-1

Время, с

Рисунок А.6 - Сенсограммы взаимодействия смеси воды и интерферона гамма с иммобилизованными антителами №1 в виде разности сигналов: биосенсора рабочего и контрольного каналов. Обозначения: 1 — начало инжекции образца, 2 — окончание инжекции образца.

Приложение Б

Дополнительный подбор условий и реактивов для проведения ИФА

Оптимальной скоростью перемешивания образцов при преинкубации была выбрана скорость 600-700 об/мин (Д=9,4%, р<0,05), так как при превышении данных значений могло иметь место расплескивание образца. Температура предварительной инкубации была выбрана равной 37°С, что соответствует физиологической температуре тела человека (Д=8,9%, р<0,01). При более низкой температуре и вообще без инкубации отличия между препаратом и плацебо были гораздо меньше.

Максимальное различение между образом и контролем было получено с использованием соотношения ТАБЛИЦАгамма: образец 1:2 (А=21,9%, р<0,001) (Рисунок Б.1). Таким образом, было предположено, что для эффективного определения препарата, его количество по объему должно быть достаточно большим.

о

УГ,

-т

С О

□ Плацебо ■ Препарат

1:2

1 6,64%

1:1

2:1

ИФНугобразец

Рисунок Б.1 - Влияние соотношения ИФНу: образец на величину разницы между образцом РАФ Ат к ИФНу (на рисунке «Препарат») и плацебо.

Оптимальное разведение конъюгата подбирали специально для каждой новой партии покрытых планшетов. При выборе субстрата ТМБ протестировали 3 вида субстрата: двухкомпонентный субстрат Капель, а также 2 вида однокомпонентных субстратов Sigma и Acros с соответствующими стоп-растворами. В целом результаты эксперимента свидетельствуют о том, что

субстрат компании Капель (0,72±0,09) по значениям оптической плотности не отличается от такового Sigma (0,71±0,08) и они оба могут быть использованы в работе, тогда как однокомпонентный субстрат Acros показал статистически значимо более низкий сигнал (0,61 ±0,04), чем Капель и Sigma. Субстрат Капель выбран для использования в дальнейших экспериментах по причине низкой стоимости.

Условия инкубации планшетов в ходе анализа также подбирали: один планшет на всех стадиях инкубировали стандартным образом в термостате 1час

Термостат

Термошеикер

Рисунок Б.2 - Влияние способа инкубации в ИФА на качество анализа при 37 °С, а второй - в термошейкере 1 час, 37 °С, 500 rpm. Согласно полученным данным при использовании термостата среднее значение оптической плотности (1,4) выше, чем при использовании термошейкера (1,24) (Рисунок Б.2). При анализе CV по стрипам и по рядам во всех случаях выявлено, что CV при использовании термостата заметно ниже, чем при использовании термошейкера. Полученные данные указывают на предпочтительность использования термостата при выполнении рутинных анализов. Однофакторный дисперсионный анализ (One-way ANO VA) с критерием Тьюки для множественных попарных сравнений не выявил разницы между стрипами, а также между верхней и нижней половинами обоих планшетов. Выявлены статистически значимые отличия между левой и правой половинами планшета 2 (термошейкер) и не выявлено таких отличий для планшета 1 (термостат), что говорит о неравномерности нагрева планшета в термошейкере и

подтверждает предпочтительность использования термостата для анализа. После разработки метода основного метода дополнительные работы по обеспечению качества анализа были проведены. Так, были протестированы различные способы формирования раскладки образцов, различные способы отмывки планшетов, влияние фактора оператора и др.

Сравнение старого и нового вошера не выявило преимуществ использования нового. Среднее значение оптических плотностей примерно одинаковое при отмывке на двух вошерах (1,74 (CV=7%) - планшет 1 и 1,63 (CV=9%) - планшет 2). Однофакторный дисперсионный анализ (One-way ANOVA) с критерием Тьюки для множественных попарных сравнений не выявил статистически значимых отличий между стрипами, а также между левой и правой половинами обоих планшетов не выявлено, что указывает на равномерность отмывки планшетов обоими вошерами. Увеличение циклов отмывки с 3 до 5 также не приводит к значимому снижению разбросов (Таблица Б.1).

При изучении влияния фактора оператора показано, что у обоих операторов внутрипланшетный CV не превышает 10%. Влияние раскладки образцов было изучено на примере калибровочных кривых (Таблица Б.2). Калибровочная кривая, полученная при лестничной раскладке планшета, статистически значимо отличалась от всех остальных. Все другие калибровочные кривые статистически неразличимы между собой. Таким образом, лестничная расклад-

Таблица Б.1 - Влияние на качество анализа количества циклов отмывки

Междустрочные отличия2

A B C D E F G H

A -9% -6% -12% -15% -21% 15% -8%

B 10% 3% -3% -7% -13% -7% 1%

3 C 6% -3% -6% -10% -16% 10% -2%

цик D 13% 3% 7% -4% -10% -3% 4%

ла E 18% 8% 11% 4% -6% 1% 9%

F 26% 15% 19% 11% 7% 8% 16%

G 17% 7% 11% 4% -1% -7% 8%

H 9% -1% 2% -4% -8% -14% -7%

2* за 100% принимали максимальное значение ОП

Продолжение таблицы Б. 1

А -10% -18% -15% -18% -21% 16% -10%

В 11% -9% -6% -10% -12% -7% -1%

5 С 21% 10% 3% -1% -4% 2% 9%

цик D 17% 6% -3% -4% -7% -1% 6%

лов Е 23% 11% 1% 4% -3% 4% 10%

F 26% 14% 4% 8% 3% 7% 13%

G 18% 7% -2% 1% -3% -6% 7%

Н 11% 1% -8% -5% -9% -12% -6%

ка является наименее предпочтительной по сравнению с остальными.

Таблица Б.2 - Влияние различных способов рандомизации на качество анализа

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

А 11,25 45 180 11,25 22,5 45 90 180 11,25 11,25 11,25 11,25

В 11,25 45 180 11,25 22,5 45 90 180 22,5 22,5 22,5 22,5

С 11,25 45 180 11,25 22,5 45 90 180 45 45 45 45

Б 11,25 45 180 11,25 22,5 45 90 180 90 90 90 90

Е 22,5 90 22,5 11,25 22,5 45 90 180 180 180 180 180

F 22,5 90 90 180 11,25 22,5 45 90 180 11,25 22,5 90

G 22,5 90 180 45 90 11,25 22,5 45 90 180 45 11,25

Н 22,5 90 11,25 В1апк 180 45 11,25 22,5 45 90 180 22,5