Исследование механизмов формирования гетерогенности тромбоцитов крови человека при их активации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Котова, Яна Николаевна

• Котова, Яна Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Котова, Яна Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Тромбоциты.

Рецепторы тромбоцитов.

Рецептор для коллагена.

Тромбиновые рецепторы.

Рецептор для тромбоксана А2.

Пуринэргические рецепторы (Р2 рецепторы).

Рецептор Р2У1.

Рецептор Р2У12.

Р2Х1 рецептор.

Внутриклеточная сигнализация в тромбоците.

Фосфолипаза С.

Фосфоинозитид-З-киназный путь.

Бгс-тирозинкиназа.

Митоген-активируемый протеин киназный путь (МАРК).

О-белок управляемые калиевые каналы.

Циклический аденозин монофосфат (цАМФ).

Трансглутаминазы и тромбоциты.

Тканевая трансглутаминаза 7Х?-2').

Фактор ХШа.

Плазменный фактор XIII.

Тромбоцитарный фактор XIII.

Укутанные» тромбоциты.

ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Материалы.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Выделение тромбоцитов.

2.2.2 Титрование активных сайтов тромбина.

2.2.3 Анализ гетерогенности тромбоцитов на проточном цитометре.

2.2.4 Анализ секреции плотных гранул тромбоцитов.

2.2.5 Окраска активированных тромбоцитов антителами на тромбоспондин, фибриноген, факторУ, РАС-1, CD62P.

2.2.6 Анализ агрегации и гетерогенности субпопуляций тромбоцитов на флуоресг{ентном микроскопе.

2.2.7 Окраска фибриногена флуоресцеином (FITC).

2.2.8 Электрофоретический анализ фибриногена, казеина и активностей фактора XHIa и тканевой трансглутаминазы по отношению к их субстатам.

2.2.9 Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

Характеристика тромбоцитов стимулированных как тромбином, так и тромбин с конвульксином.

Выявление роли вторичной секреции.

Внутриклеточная сигнализация, приводящая к формированию укутанного» тромбоцита.

Выявление типа тромбинового PAR рецептора тромбоцита, участвующего в формировании «укутанного» тромбоцита. роль тромбоцитарных трансглутаминаз в формировании гетерогенности тромбоцитов при их активации.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование механизмов формирования гетерогенности тромбоцитов крови человека при их активации»

Фундаментальной задачей медицины, биофизики, биохимии, молекулярной биологии и медицинской химии является исследование закономерностей функционирования системы гемостаза человека и, как следствие, возможное предотвращение таких патологических состояний, как инсульты, инфаркт, спонтанный тромбоз и др. Гемостаз является защитной реакцией организма, выражающейся в остановке кровотечения при повреждении стенки сосуда. Он возникает в результате спазма кровеносных сосудов и появления закупоривающего сосуд кровяного сгустка. В гемостатической реакции человека принимают участие окружающая сосуд ткань, стенка сосуда, плазменные факторы свертывания крови и клетки крови, в первую очередь тромбоциты. Тромбоциты - двояковыпуклые клетки дисковидной формы диаметром 1-4 мкм. Они образуются в костном мозге путем отщепления от мегакариоцитов. Концентрация тромбоцитов в крови здорового человека составляет 180 ООО - 320 ООО в 1 мкл. Главной функцией тромбоцитов является образование «белого тромба», закрывающего первичное повреждение стенки сосуда: при повреждении сосудистой стенки тромбоциты приклеиваются к месту повреждения (адгезия) и друг к другу (агрегация), создавая механический барьер, перекрывающий повреждение.

В неактивированном тромбоците мембранный бислой ассиметричен, что поддерживается работой транслоказы. Однако, при активации нарушается ассиметричность мембраны тромбоцита, активируются такие ферменты, как скрамблаза, которая кальций-зависимо приводит к фосфолипидному выравниванию между внешней и внутренней поверхностями мембраны. Это ведет к появлению во внешнем слое мембраны отрицательно заряженного фосфатидилсерина. Поверхность становится более прокоагулянтной, на ней начинают собираться прокоагулянтные комплексы свертывания. [Zwaal R.F.A. et al. 1997] Было обнаружено, что по данному параметру (уровень фосфатидилсерина на поверхности клетки) тромбоциты разделяются на две группы. Кроме того, в ходе активации тромбоциты секретируют и содержание своих гранул, альфа и плотные гранулы, которые играют важную роль в свертывании крови.

В настоящее время было показано, что сильная физиологическая активация тромбоцитов (например, тромбином в сочетании с коллагеном или конвульксином, агонистом коллагенового рецептора гликопротеина VI) может привести к развитию неоднородности в ответе тромбоцитов. Альберио JI. с соавторами первыми показали, 4 что комбинированная активация тромбоцитов двумя физиологическими агонистами, тромбином и коллагеном, способствовала экспрессии высокого уровня а-гранулярного фактора V на поверхности части тромбоцитов, кроме того эти клетки обладали высоким уровнем фосфатидилсерина на своей поверхности. Они назвали данную фракцию клеток «укутанными» тромбоцитами. [Alberio L., et al. 2000] Дейл Дж.Л. и его соавторы затем показали, что помимо а-гранулярного фактора V на поверхности «укутанных» тромбоцитов экспрессируются и другие а-гранулярные белки (фибриноген, фактор фон Виллебранта, тромбоспондин, фибронектин и а.2-антиплазмин). [Dale G.L., et al. 2002] Таким образом, новая обнаруженная субпопуляция тромбоцитов, названная «укутанными» тромбоцитами, характеризуется высоким уровнями фосфатидилсерина и альфа-гранулярных белков на своей поверхности.

В ходе изучения свойств новой фракции тромбоцитов, определили, что предшественника «укутанных» тромбоцитов не существует и количество этих клеток зависит только от условий активации. [Alberio L, et al. 2000; London F.S. et al. 2004; Panteleev M.A. et al. 2005]. Однако, важным и пока не совсем разрешимым вопросом в исследовании свойств «укутанных» тромбоцитов остаются механизмы, приводящие к их образованию.

Тромбин, а также тромбин с коллагеном или конвульксином, активируют тромбоцит, приводя к вторичной секреции, с выделением тромбоксана А2 и из плотных гранул АДФ, которые являются физиологическими активаторами тромбоцитов и их выброс важен для формирования и развития тромба при повреждении. Однако их возможная роль в формировании «укутанных» тромбоцитов не совсем понятна. Предполагая, что АДФ через свои пуринэргичсские рецепторы, а тромбоксан Аг через собственный рецептор участвуют в активации тромбоцитов. Они активируют различные сигнальные пути, которые приводят к активации гликопротеина Ilb/IIIa, агрегации, а также секреции

Дейл Дж.Л. с коллегами продемонстрировали в своей работе, что а-гранулярные белки являются субстратами для тромбоцитарных трансглутаминаз, которых выделяют у тромбоцита два вида: тканевая трансглутаминаза и фактор XHIa. Данной группой исследователей было показано, что использование ингибиторов трансглутаминаз приводит к блокированию образования «укутанных» тромбоцитов, что свидетельствует о возможной роли фактора XIHa и тканевой трансглутаминазы в формировании укутанных» тромбоцитов [Dale G.L. et al. 2002]. Кроме того, данная группа и еще некоторые исследователи предполагают, что ведущую роль в формировании 5 укутанных» тромбоцитов может играть фактор XHIa [Сох A., D Devine. 1994; Dale G.L. et al. 2002; Kulkarni S., et al. 2004]. Однако, Джоб C.M. с коллегами в своей работе установили [Jobe S.M. et al. 2005], что мыши дефицитные по фактору XHIa не имели трудностей в образовании «укутанных» тромбоцитов. Эти данные свидетельствуют в пользу того, что фактор XlIIa не является необходимым для образования «укутанных» тромбоцитов, и предполагают, что другая клеточная трансглутаминаза, а именно тканевая трансглутаминаза, может компенсировать отсутствие фактора XlIIa. Вопрос о роли данных ферментов до сих пор не решен.

Можно сказать, что «укутанные» тромбоциты являются очень интересным и важным подклассом тромбоцитов. Имея очень прокоагулянтную поверхность, «укутанные» тромбоциты способны поддерживать протромбиназную активность. Есть указания на то, что они могут быть критическим звеном, как в нормальном гемостазе, так и при тромбозе. Однако, их точное значение в физиологии и патофизиологии, а также механизмы формирования такой гетерогенности тромбоцитов при активации не известны на сегодняшний день. Поэтому изучение сигнальных механизмов, ведущих к формированию «укутанных» тромбоцитов важно.

Цель работы: Экспериментальное исследование механизмов формирования гетерогенности тромбоцитов при их активации in vitro.

Задачи исследования:

1. Определение роли секреции тромбоцитов в образовании «укутанных» тромбоцитов

2. Исследование внутриклеточных путей сигнализации, регулирующих формирование гетерогенности тромбоцитов при их активации

3. Определение роли тканевой трансглутаминазы и фактора XlIIa в формировании гетерогенности тромбоцитов

Научная новизна. В работе показано, что на образование «укутанных» тромбоцитов влияет АДФ, секретируемый из плотных гранул тромбоцитов, через адренергический рецептор P2Y12. Установлено, что в формировании гетерогенности тромбоцитов участвуют внутриклеточные пути сигнализации, идущие от рецептора P2Y12 и связанные с действием аденилатциклазы, фосфоинозитид-3-киназы и Src-тирозинкиназы. Установлено, что фактор XlIIa и, особенно, тканевая трансглутаминаза вносят существенный вклад в формирование гетерогенности тромбоцитов при их активации.

Научно-практическое значение данной работы является фундаментальным. Она вносит вклад в понимание механизмов формирования гетерогенности тромбоцитов 6 крови человека при их активации, а также о предполагаемой роли «укутанных» тромбоцитов. Результаты данной работы могут быть полезны как для понимания происходящих процессов тромбообразования, так и для создания на основе имеющихся знаний новых методов антитромботической терапии.

Положения, выносимые на защиту:

1. АДФ из плотных гранул регулирует формирование гетерогенности тромбоцитов человека.

2. Сигнализация от АДФ, регулирующая образование «укутанных» тромбоцитов, идет через пуринэргический рецептор Р2У12.

3. Пути внутриклеточной сигнализации, ведущие к формированию «укутанных» тромбоцитов: аденилатциклаза, фосфоинозитид-3-киназа и 8гс-тирозинкиназа.

4. Показано, что тканевая трансглутаминаза и фактор ХШа участвуют в формировании гетерогенности тромбоцитов крови человека при их активации.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Котова, Яна Николаевна

выводы

1. Установлено, что тромбоциты, стимулированные одним только тромбином, образуют две субпопуляции, одна из которых является «укутанными» тромбоцитами, то есть имеет высокий уровень фосфатидилсерина и содержит на поверхности альфа-гранулярные белки.

2. Доказано, что АДФ, выделяемый из плотных гранул тромбоцитов при их активации, регулирует развитие гетерогенности тромбоцитов, тогда как тромбоксан Аг не оказывает никакого влияния на этот процесс.

3. Выявлено, что АДФ опосредует свое влияние на образование «укутанных» тромбоцитов при их активации через адренергический рецептор Р2У12.

4. Показано, что внутриклеточные пути сигнализации, регулирующие формирование гетерогенности тромбоцитов при их активации, связаны с ингибированием аденилатциклазы, активированием фосфоинозитид-3 киназы и Эгс тирозинкиназы.

5. Показано, что и фактор ХШа и тканевая трансглутаминаза важны в ходе формирования «укутанных» тромбоцитов. Ингибирование обоих трансглутаминаз приводит к 3-7 кратному снижению количества «укутанных» тромбоцитов при разных видах активации по сравнению с контролем. Выявлено при использовании ингибирующих пептидов, что ингибирование тканевой трансглутаминазы приводит к большему снижению доли «укутанных» тромбоцитов по сравнению с ингибированием фактора ХШа, из чего делается предположение, что она играет более ведущую роль в процессе развития гетерогенности тромбоцитов при их активации.

Благодарности

Я глубоко признательна руководителю лаборатории клинической коагулологии д.м.н. С.А. Васильеву за его помощь в рекрутировании и работе с больными тромбастенией Гланцмана. Благодарю к.ф-м.н. A.B. Пичугина за поддержку и предоставление оборудования в Институте иммунологии РАМН. За предоставленные ингибиторы цистеиновых протеиназблагодарю руководителя лаборатории термодинамики биосистем д.б.н. М.А. Розенфельда и к.х.н. Е.А.Костанову.

Глубоко признательна за помощь, поддержку, советы в работе Пантелееву Михаилу Александровичу

Огромная благодарность научному руководителю д.б.н.Ф.И. Атауллаханову.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Котова, Яна Николаевна, 2009 год

1. Бутенас С., Манн К.Г. «Свертывание крови», Биохимия 2002, 67(1): 5-15.2. под редакцией Козинца Г.И. и Макарова В.А. «Исследование системы крови в клинической практике», Триада-Х, Москва 1998.

2. Костанова Е.А., Розенфельд М.А., Ревина Т.А., Валуева Т.А. «Белковые ингибиторы фибринстабилизирующего фактора (XIII)», Известия академии наук 2007, 3: 347—353

3. Abrams C.S., Brass L.F. «Platelet signal transduction», In: Hemostasis and Thrombosis, edited by Colman R.W., Hirsh J., Marder V.J., Clowes A.W., George J.N. Philadelphia, PA: Lippincott William & Wilkins 2001, p.541-559

4. Adam F., Verbeuren T.J., Fauchere J.-L., Guillin M.-C., Jandrot-Perrus M. «Thrombin-induced platelet PAR4 activation: role of glycoprotein lb and ADP», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2002, 1: 798-804

5. Akimov S.S., Krylov D., Fleischman L.F., Belkin A.M. «Tissue transglutaminase is an integrin-binding adhesion coreceptor for fibronectin», The Journal of Cell Biology 2000, 148(4): 825-838

6. Alberio L, Safa O, Clemetson KJ, Esmon CT, Dale GL. «Surface expression and functional characterization of alpha-granule factor V in human platelets: effects of ionophore A23187, thrombin, collagen, and convulxin», Blood 2000, 95: 1694-1702

7. Brass L.F., Joseph S.K. «А role for inositol triphosphate in intracellular Ca2+ mobilization and granule secretion in platelets», Journal of Biological Chemistry 1985, 260(28): 15172-15179

8. Brass L.F. «Thrombin and platelet activation», CHEST 2003, 124:18S-25S

9. Cooke R.D., Holbrook J.J. «Calcium and the assay of human plasma clotting factor XIII», Biochemical Journal 1974, 141: 71-78.

10. Covic L., Gresser A. L., Kuliopulos A. «Biphasic kinetics of activation and signaling for PARI and PAR4 thrombin receptors in platelets», Biochemistry 2000, 39: 54585467

11. Cox A.D., Cevine D.V. «Factor XHIa binding to activated platelets is mediated through activation of glycoprotein Ilb-IIIa», Blood 1994, 83(4): 1006-1016

12. Dale G.L. «Coated-platelets: an emerging component of procoagulant response», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2005, 3: 2185-2192

13. Dale GL, Friese P, Batar P, Hamilton SF, Reed GL, Jackson KW, Clemetson KJ, Alberio L. «Stimulated platelets use serotonin to enhance their retention of procoagulant proteins on the cell surface», Nature 2002;415:175-179.

14. Dangelmaier C., Jin J., Smith J.B., Kunapuli S.P. «Potentiation of thromboxane A2-induced platelet secretion by Gi signaling through the phosphoinositide-3 kinase pathway», Thrombosis and Haemostasis 2001, 85:341-348

15. Daniel J.L., Dangelmaier C., Jin J., Kim Y.B., Kunapuli S.P. «Role of intracellular signaling events in ADP-induced platelet aggregation», Thrombosis and Haemostasis 1999, 82:1322-1326

16. Dormann D, Clemetson KJ, Kehrel BE. «The GPIb thrombin-binding site is essential for thrombin-induced platelet procoagulant activity», Blood 2000; 96: 2469-2478

17. Dorn G.W.D. «Distinct platelet thromboxane A2/prostaglandin H2 receptor subtypes. A radioligand binding study of human platelets», Journal of Clinical Investigation 1989,84:1883-1891

18. Dorsam R.T., Kunapuli S.P. «Central role of the P2Y12 receptor in platelet activation», Journal of Clinical Investigation 2004, 113(3): 340-345.

19. Dorsam RT, Tuluc M, Kunapuli SP. «Role of protease-activated and ADP receptor subtypes in thrombin generation on human platelets», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2004; 2: 804-812.

20. Erhardt J.A., Toomey J.R., Douglas S.A., Johns D.G. «P2X1 stimulation promotes thrombin receptor-mediated platelet aggregation», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2006, 4: 882-890

21. Feng P, Tracy PB. «Not all platelets are equal procoagulants?», Blood 1998; 98: Suppl. 350a, 1441 (abstr.).

22. Fung C.Y.E., Cendana C., Farndale R.W., Mahaut-Smith M.P. «Primary and secondary agonists can use P2X1 receptors as a major pathway to increase intracellular Ca2+ in the human platelet», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2007, 5: 910-917

23. Garcia A., Shankar H., Muragappan S., Kim S., Kunapuli S.P. "Regulation and functional consequences of ADP receptor-mediated ERK2 activation in platelets", Biochemical Journal 2007, 404: 299-308

24. Gorman J.J., Folk J.E. «Structural features of glutamine substrates for human plasma factor XHIa (activated blood coagulation factor XIII)», Journal of Biological Chemistry 1980, 255(2): 419--427.

25. Greenberg C.S., Birckbichler P.J., Rice R.H. «Transglutaminases: multifunctional cross-linking enzymes that stabilize tissue», FASEB Journal 1991, 5: 3071-3077

26. Griffin M., Casadio R., Bergamini C.M. «Transglutaminases: nature's biological glues», Biochemical Journal 2002, 368: 377-396

27. Habib A., FitzGerald G.A., Maclouf J. «Phosphorylation of the thromboxane receptor a, the predominant isoform expressed' in human platelets», Journal of Biological Chemistry 1999, 274(5): 2645-2651

28. Hamilton SF, Miller MW, Thompson CA, Dale GL. «Glycoprotein Ilb/IIIa inhibitors increase COAT-platelet production in vitro», Journal of laboratory and clinical medicine 2004; 143: 320-326.

29. Hardy A.R., Jones M.L., Mundell S.J., Poole A.W. «Reciprocal cross-talk between P2Y1 and P2Y12 receptors at the level of calcium signaling inhuman platelets», Blood 2004, 104: 1745-1752

30. Hechler B., Cattaneo M., Gachet C. «The P2 receptor in platelet function», Seminars in thrombosis and hemostasis 2005, 31(2): 150-161

31. Hollopeter G.J.H., Vincent D., Li G. et al. «Identification of the platelet ADP receptor targeted by antithrombotic drugs», Nature 2001, 409: 202-207

32. Israels E.D., Paraskevas F., Israels L.G.» Immunological studies of coagulation factor XIII», Journal of clinical investigation 1973, 52(10): 2398--2403.

33. Janiak A., Zemskov E.A., Belkin A.M. «Cell surface transglutaminase promotes RhoA activation via integrin clustering and suppression of the Src-pl90RhoGAP signaling pathway», Molecular Biology of the Cell 2006, 17: 1606-1619

34. Jayo A., Conde I., Lastres P., Jimenez-Yuste V., Gonzalez-Manchon C. «New insight into the expression and role of platelet factor XIII-A», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2009, 7(7): 1184-1191

35. Jin J., Daniel J.L., Kunapuli S.P. «Molecular basis for ADP-induced platelet activation. II. The P2Y1 receptor mediates ADP-induced intracellular calcium mobilization and shape chance in platelets», Journal of Biological Chemistry 1998; 273: 2030-2034

36. Jobe S.M., Leo L., Eastvold J.S., Dickneite G., Ratliff T.L., Lentz S.R., Di Paola J. «Role of FcRy and factor XHIa in coated platelet formation», Blood 2005, 106(13): 4146-4151.

37. Kahner B.N., Dorsam R.T., Kunapuli S.P. «Role of P2Y receptor subtypes in platelet-derived microparticle generation», Bioscience 2008, 13: 433-439

38. Kahner B.N., Shankar H., Murugappan S., Prasad G.L., Kunapuli S.P. «Nucleotide receptor signaling in platelets», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2006, 4:2317-2326

39. Kempton C.L., Hoffman M., Roberts H.R., Monroe D.M. «Platelet heterogeneity: variation on coagulation complex on platelet subpopulations», Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 2005, 25: 861-866.

40. Kim S., Jin J., Kunapuli S.P. «Relative contribution of G-protein-coupled pathways to protease-activated receptor-mediated Akt phosphorylation in platelets», Blood 2006, 107(3): 947-954

41. Kulkarni S., Jackson S.P. «Platelet factor XIII and calpain negatively regulate integrin allbp3 adhesive function and thrombus growth», Journal of Biological Chemistry 2004, 279(29): 30697-30706

42. Lee K.N., Birckbichler P.J., Patterson M.K, Jr. «GTP hydrolysis by guinea pig liver transglutaminase», Biochemical and biophysical research communications 1989, 162: 1370-1375

43. Leon C, Ravanat C, Freund M, Cazenave JP, Gachet C. «Differential involvement of the P2Y1 and P2Y12 receptors in platelet procoagulant activity», Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 2003; 23: 1941-1947

44. Leon C., Alex M., Klocke A., Morgenstern E., Moosbauer C., Eckly A., Spannagl M., Gachet C., Engelmann B. «Platelet ADP receptors contribute to the initiation of intravascular coagulation», Blood 2004, 103: 594-600

45. Lian L., Wang Y., Draznin J., Eslin D., Bennett J.S., Poncz M., Wu D., Abrams C.S. «The relative role of PLC p and PI3Ky in platelet activation», Blood 2005, 106(1): 110-117

46. London F.S., marcinkiewicz M., Walsh P.N. «A subpopulation of platelets responds to thrombin- or SFLLRN-stimulation with binding site for factor IXa», Journal of Biological Chemistry 2004, 279(19): 19854-19859

47. London FS, Marcinkiewicz M, Walsh PN. «PAR-1-stimulated factor IXa binding to a small platelet subpopulation requires a pronounced and sustained increase of cytoplasmic calcium», Biochemistry 2006; 45: 7289-7298.

48. Lorand L., Parameswaran K.N., Velasco P.T., Hsu L.K., Siefring G.E. Jr. «New colored and fluorescent amine substrates for activated fibrin stabilizing factor (Factor XHIa) and for transglutaminase», Analytical biochemistry 1983, 131(2): 419-425.

49. Lorand L. «Factor XIII: structure, activation and interaction with fibrinogen and fibrin», Annals New York academy of Sciences 2001, 936: 291-311

50. Maroney S.A., Haberichter S.L., Friese P., Collins M.L., Ferrel J.P., Dale G.L., Mast A.E. «Active tissue factor pathway inhibitor is expressed on surface of coated platelets», Blood 2007, 109(5): 1931-1937

51. McDonach J., McDonach R.P., Jr., Delage J.-M., Wagner R.H. «Factor XIII in human plasma and platelets», Journal of Clinical Investigation 1969, 48: 940-946

52. Murugappan S., Shankar H., Kunapuli S.P. «Platelet receptors for adenine nucleotides and thromboxane A2», Seminars in thrombosis and hemostasis 2004, 30(4): 411-418

53. Norgard NB, Hann CL, Dale GL. «Cangrelor attenuates coated-platelet formation.», Clinical and applied thrombosis/hemostasis 2009; 15(2): 177-182.

54. Norgard NB, Saya S, Hann CL, Hennebry TA, Schechter E, Dale GL. «Clopidogrel attenuates coated-platelet production in patients undergoing elective coronary catheterization», Journal of cardiovascular pharmacology 2008; 52(6): 536-539.

55. Offermanns S. «Activation of platelet function through G protein-coupled receptors», Circulation Research 2006, 99: 1293-1304

56. Oury C., Toth-Zsamboki E., Vermylen J., Hoylaerts M.F. «P2X(l)-mediated activation of extracellular signal-regulated kinase 2 contributes to platelet secretion and aggregation induced by collagen», Blood 2002, 100(7):2499-2505

57. Oury C., Toth-Zsamboki E., Vermylen J., Hoylaerts M.F. «The platelet ATP and ADP receptors», Current Pharmaceutical Design 2006, 12: 859-875

58. Paul B.Z.S., Jin J., Kunapuli S.P. «Molecular mechanism of thromboxane A2-induced platelet aggregation. Essential role for P2Tac and a2A receptors», Journal of Biological Chemistry 1999, 274(41): 29108-29114

59. Polgar J., Hidasi V., Muszbek L. «Non-proteolytic activation of cellular protransglutaminase (placenta macrophage factor XIII) », Biochemical Journal 1990, 267: 557-560

60. Prodan CI, Joseph PM, Vincent AS, Dale GL. «Coated-platelet levels are influenced by smoking, aspirin, and selective serotonin reuptake inhibitors», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2007; 5: 2149-2151

61. Quinter P.G., Dangelmaier C.A., Quinton T.M., Kunapuli S.P., Daniel J.L. «Glycoprotein VI agonists have distinct dependences on the lipid raft environment», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2007, 5:362-368

62. Rebecchi M.J., Pentyala S.N. «Structure, function and control of phosphoinositide-specific phospholipase C», Physiological Reviews 2000, 80(4): 1291-1335

63. Reed G.L., Matsueda G.R., Haber E. «Platelet factor XIII increase the fibrinolytic resistance of platelet-rich clots by accelerating the crosslinking of ci2-antiplasmin to fibrin», Thrombosis and Haemostasis 1992, 68(3): 315-320

64. Reed G.L. «Platelet secretion». In: , edited by A.D. Michelson, Elsever, 2007, chapter 15, pp. 309-318

65. Remenyi G, Szasz R, Friese P, Dale GL. Role of mitochondrial permeability transition pore in coated-platelet formation. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 2005;25:467-471.

66. Rittenhouse S.E. «Phosphoinositide 3-kinase activation and platelet function», Blood 1996, 88(12): 4401-4414; L.C. Cantley. «The phosphoinositide 3-kinase pathway», Science 2002, 296: 1655-1657

67. Sane D.C., Kontos J.L., Greenberg C.S. «Roles of transglutaminases in cardiac and vascular diseases»,. Bioscience 2007, 12: 2530-2545

68. Schwartz M.L., Pizzo S.V., Hill R.L., McKee P.A. «The Subunit structure of human plasma and platelet factor XIII (Fibrin-stabilizing factor)», Journal of Biological Chemistry 1971, 246(18): 5851-5854

69. Shankar H., Murugappan S., Kim S., Jin J., Ding Z., Wickman K., Kunapuli S.P. «Role of G protein-gated inwardlyrectifying potassium channels on P2Y12 receptor-mediated platelet functional responses», Blood 2004, 104: 1335-1343.

70. Shapiro M. J., Weiss E. J., Faruqi T. R. et al. «Protease-activated receptors 1 and 4 are shut off with distinct kinetics after activation by thrombin», Journal of Biological Chemistry 2000, 275: 25216-25221

71. Szasz R. & Dale G.L. «Thrombospondin and fibrinogen bind serotonin-derivatized protein on COAT-platelets», Blood (2002) 100:2827-2831

72. Takahara K, Murray R, FitzGerald GA, Fitzgerald DJ. «The response to thromboxane A2 analogues in human platelets. Discrimination of two binding sites linked to distinct effector systems», Journal of Biological Chemistry 1990; 265: 6836 6844

73. Voss B., McLaughlin J.N., Holinstat M., Zent R., Hamm H.E. «PARI, but not PAR4, activates human platelets through a Gi/0/Phosphoinositide-3 kinase signaling axis», Molecular Pharmacology 2007, 71:1399-1406

74. Wang D.S., Dickson D.W., Malter J.S. «Tissue Transglutaminase, protein cross-linking and Alzheimer's Disease: Review and Views», International journal of clinical and experimental pathology (2008) 1: 5-18

75. Watson S.P. «Platelet-collagen interaction: is GPVI the central receptor?», Blood 2003, 102(2):449-461

76. Watson S.P., Auger J.M., McCarty O.J.T., Pearce A.C. «GPVI and integrin allbp3 signaling in platelets», Journal of Thrombosis and Haemostasis 2005, 3:1752-1762

77. Webber A. J., Firkin B.G. «Two Populations of Platelets» Nature 205, 1332 (27 March 1965)

78. Wettschureck N., Offermanns S. «Mammalian G proteins and their cell type specific function», Physiological Reviews 2005, 85: 1159-1204

79. Zhang W., Colman R.W. «Thrombin regulates intracellular cyclic AMP concentration in human platelets through phosphorylation/activation of phosphodiesterase 3A», Blood 2007, 110(5): 1475-1482

80. Zwaal R.F.A., Comfurius P., Bevers E.M. «Lipid-protein interaction in blood coagulation», Biochimica et Biophysica Acta 1998, 1376: 433-453

81. Zwaal R.F.A., Schroit A.J. "Pathophysiologic implications of membrane phospholipids asymmetry in blood cells", Blood 1997; 89(4): 1121-1132