Исследование физико-химических свойств и стандартизация нового антистеатозного лекарственного средства на основе 4,4’-(пропандиамидо)дибензоата натрия тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Генералова Юлия Эдуардовна

• Генералова Юлия Эдуардовна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Генералова Юлия Эдуардовна

Обозначения и сокращения

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика лекарственных препаратов, обладающих антистеатозным действием

1.1.1. Эпидемиология и патогенез неалкогольной жировой болезни печени

1.1.2. Подходы к лечению неалкогольной жировой болезни печени

1.1.3. Характеристика производных малоновой кислоты в лечении стеатоза печени

1.2. Синтез и доказательство структуры 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия

1.3. Подходы к стандартизации лекарственных средств

1.3.1. Выбор показателей контроля качества для разработки нового лекарственного средства

1.3.2. Методы определения констант диссоциации веществ

1.3.3. Методы исследования спектральных свойств соединений

1.3.4. Определение родственных примесей лекарственных средств хроматографическими методами

1.3.5. Определение родственных примесей лекарственных средств методом капиллярного электрофореза

1.3.6. Идентификация родственных примесей лекарственных средств масс-спектрометрическими методами

1.3.7. Определение содержания остаточных органических растворителей и летучих примесей в лекарственных средствах

Выводы по главе

Глава 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты диссертационного исследования

2.2. Оборудование и материалы

2.3. Стандартные образцы и реактивы

2.4. Приготовление исследуемых растворов

Глава 3. ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МАЛАБЕНА

3.1. Изучение спектральных характеристик малабена

3.2. Изучение кислотно-основных свойств малабена

3.3. Определение содержания родственных примесей опытного образца малабена

3.3.1. Изучение содержания родственных примесей малабена методом ГХ

3.3.2. Изучение хроматографического поведения малабена и его родственных примесей в условиях ВЭЖХ

3.3.3. Изучение электрофоретического поведения малабена и его родственных примесей в условиях капиллярного электрофореза

3.3.4. Идентификация примесей малабена методом ВЭЖХ-МС

Выводы по главе

Глава 4. Стандартизация фармакопейного стандартного образца, фармацевтической субстанции и лекарственного препарата на основе малабена

4.1. Разработка и валидация методики анализа родственных примесей методом ВЭЖХ

4.2. Разработка и валидация методики определения родственной примеси малонового эфира методом газовой хроматографии

4.3. Разработка и валидация методики определения остаточных органических растворителей (о-ксилола)

4.4. Разработка и валидация методики количественного определения малабена титриметрическим методом

4.5. Разработка и валидация методики идентификации и количественного определения малабена в ГЛС методом ВЭЖХ

4.5.1. Оптимизация хроматографических условий

4.5.2. Выбор условий проведения теста «Растворение» таблеток малабена

4.5.3. Валидация аналитической методики идентификации и количественного определения малабена в таблетках

4.6. Разработка проектов нормативных документов и изучение стабильности ФС и ГЛС

малабена

Заключение

Список литературы

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

147

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГЛС - готовое лекарственное средство

ГХ - газовая хроматография

ГФ - Государственная Фармакопея

ДМД - диодно-матричный детектор

ИК-спектроскопия - инфракрасная спектроскопия

КО - количественное определение

КЭ - капиллярный электрофорез

ЛП - лекарственный препарат

ЛС - лекарственное средство

Малабен - 4,4'-(пропандиамидо)дибензоат натрия

МБЧ - микробиологическая чистота

МК - малоновая кислота

МС - метаболический синдром

МС-спектрометрия - масс-спектрометрия

МЭ - малоновый эфир

НАЖБП - неалкогольная жировая болезнь печени

НАСГ - неалкогольный стеатогепатит

НД - нормативный документ

ООР - остаточные органические растворители

ОФС - общая фармакопейная статья

ПАБК - п-аминобензойная кислота

ПКО - предел количественного определения

ПМПВ - потеря в массе при высушивании

ПО - предел обнаружения

ПФ - подвижная фаза

РКИ - рандомизированное контролируемое исследование

РП - родственные примеси

СД - сахарный диабет

CO - стандартный образец

ТСХ - тонкослойная хроматография

ТЭ - точка эквивалентности

УФ-спектрометрия - спектрометрия в ультрафиолетовой области спектра

ФС - фармацевтическая субстанция

ФСО - фармакопейный стандартный образец

ЭОП - электроосмотический поток

Этмабен - 4-(3-оксо-3-этоксипропаноил)амино)бензойная кислота

ЭФГ - электрофореграмма

ЭФП - электрофоретическая подвижность

ЯМР-спектрометрия - спектрометрия ядерного магнитного резонанса

ESI - ионизация электроспрей

RSD - относительное стандартное отклонение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование физико-химических свойств и стандартизация нового антистеатозного лекарственного средства на основе 4,4’-(пропандиамидо)дибензоата натрия»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. В настоящее время наблюдается неуклонное увеличение частоты заболеваний, в основе которых лежат ассоциированные нарушения углеводного и липидного обменов (метаболический синдром, сахарный диабет 2 типа, ожирение, дислипидемия), что сопровождается пропорциональным ростом специфических поражений печени в виде жировой болезни печени. По данным последних исследований распространенность такой патологии в развитых странах в виде стеатоза может составлять в популяции свыше 25 % (в некоторых регионах и более 50 %), а неалкогольного стеатогепатита — до 5 % [2]. По данным Российского исследования DIREG 2 у 37,3% пациентов, обратившихся за помощью к терапевту, обнаружена неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП), в то время как в 2007 г. она составила 27,0% (прирост более 10%), в результате чего НАЖБП заняла первое место среди заболеваний печени - 71,6% [14].

Несмотря на большой перечень ЛС, применяемых для коррекции НАЖБП, эффективная фармакотерапия этого заболевания на данный момент не разработана, поэтому создание новых эффективных и безопасных лекарств, способных оказывать лечебное воздействие при стеатозе печени является актуальным и остаётся высокая потребность в появлении новых ЛС, которые позволили бы расширить действующий арсенал препаратов, способных оказывать терапевтическое воздействие на различные патогенетические механизмы при жировом поражении печени и ассоциированных с этим состояниях.

Учитывая потребность практической медицины в эффективных антистеатозных средствах, на кафедре органической химии ФГБОУ ВО СПХФУ было синтезировано производное малоновой кислоты - 4,4'-(пропандиамидо)дибензоат натрия, проявляющий антистеатозную активность [11]. Так как расширение перечня лекарственных средств -приоритетная задача здравоохранения, то разработка и стандартизация нового лекарственного средства, создание проектов нормативных документов (НД) для целей контроля качества представляют собой актуальные вопросы, которые имеют теоретическое и практическое значение.

Степень разработанности темы. Синтез 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия был предложен в 60-х годах XX века путём ацилирования п-аминобензойной кислоты (ПАБК) недокисью углерода или малонилдихлоридом, исследованы его антиалкогольные свойства и кардиотропная активность [Дашкевич, 1961]. Тогда соединение не было зарегистрировано в качестве лекарственного средства и литературные данные по изучению аналитических характеристик и физико-химических свойств 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия отсутствуют. В 2017 году был запатентован альтернативный способ синтеза 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия, использующий более безопасные для человека исходные

продукты и растворители. Проведение фармакологических исследований показало отсутствие токсического эффекта и наличие фармакологической активности в отношении НАЖБП, а также выявило, что его влияние на динамику апоптоза и пролиферации гепатоцитов у мышей сопоставимо с метформином, но эффективность достигается в меньших дозах [Патент РФ № 2702003]. В связи с этим, изучение физико-химических свойств для целей стандартизации новых лекарственных средств (фармацевтической субстанции (ФС) и лекарственного препарата (ЛП) в форме таблеток) на основе 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия является актуальным исследованием.

Цель исследования. Изучить физико-химические свойства 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия (малабен), разработать аналитические методики и создать проекты нормативных документов для контроля качества фармацевтической субстанции, фармакопейного стандартного образца и лекарственного препарата на его основе.

Задачи исследования:

1. Изучить кислотно-основные свойства 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия, его спектральные характеристики, хроматографическое и электрофоретическое поведение.

2. Подобрать хроматографические и электрофоретические условия для выявления и установления структуры родственных примесей в опытных образцах 4,4' -(пропандиамидо)-дибензоата натрия.

3. Разработать и валидировать методики анализа для контроля качества фармацевтической субстанции 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия и лекарственного препарата в форме таблеток на его основе.

4. Создать проекты нормативных документов для контроля качества фармацевтической субстанции, фармакопейного стандартного образца и лекарственного препарата в форме таблеток 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия.

5. Изучить стабильность фармацевтической субстанции и лекарственного препарата в форме таблеток на основе 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия для установления их сроков годности.

Научная новизна. Впервые исследованы физико-химические свойства (спектральные характеристики, кислотно-основные свойства, хроматографическое и электрофоретическое поведение) нового соединения 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия, обладающего антистеатозной активностью, выявлены и идентифицированы родственные примеси 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия. На основании изученных физико-химических свойств разработаны и валидированы аналитические методики для контроля качества новой фармацевтической субстанции и фармакопейного стандартного образца 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия.

Разработана и валидирована универсальная ОФ-ВЭЖХ-УФ методика определения «Подлинности», «Количественного определения», «Однородности дозирования», проведения теста «Растворения» для ЛП в форме таблеток на основе 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия.

Теоретическая и практическая значимость работы. Впервые разработаны и валидированы методики анализа для нового соединения 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия, обладающего фармакологической активностью, методами ИК-, УФ- МС-спектрометрии, ВЭЖХ, ГХ. Составлены три проекта нормативных документов на фармацевтическую субстанцию, фармакопейный стандартный образец и лекарственный препарат (таблетки) на основе 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия. Для фармацевтической субстанции и таблеток изучена стабильность методами ускоренного старения и долгосрочных испытаний, установлены сроки годности.

Исследования проведены в рамках выполнения государственного контракта Федеральной целевой программы «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» (государственный контракт N214.N08.11.0131 от 28 апреля 2017 года «Доклинические исследования лекарственного средства на основе 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия, обладающего антистеатозным действием»). По результатам работы, представленным в диссертационном исследовании, получен патент на изобретение №2721908 «Способ определения родственных примесей в 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия методом капиллярного электрофореза».

Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедры аналитической химии ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России по учебной дисциплине «Хроматографические и смежные методы анализа» по направлению подготовки 04.03.01 Химия, бакалавриат, очная форма обучения (акт внедрения от 24 сентября 2021 г.); по программе дополнительного профессионального образования «Применение ФХМА в производстве и контроле качества БАВ, ГЛС и фитопрепаратов» в рамках ЦПКС ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России, (акт внедрения от 24 сентября 2021 г.), в научно-исследовательскую деятельность отдел синтеза кафедры органической химии ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России, (акт внедрения от 24 сентября 2021 г.), в деятельность ООО «Люмэкс-Маркетинг» (акт внедрения от 28 сентября 2021 г.).

Методология и методы исследования. Теоретическую основу работы составляли труды зарубежных и отечественных учёных по изучению свойств соединений, разработке и валидации аналитических методик. В работе использовали комбинации классических

химических и инструментальных методов анализа, а также тестеры технологических показателей для твёрдых дозированных лекарственных форм. Расчёты и статистическую обработку результатов анализа проводили с использованием электронных таблиц Microsoft Office Excel 365.

Степень достоверности результатов исследования и апробация работы.

Достоверность полученных результатов обеспечивается посредством комплексного использования современных химических, физико-химических и технологических методов исследования. Обоснованность и достоверность научных положений, выводов и рекомендаций основана на последовательности проведения эксперимента и статистической обработке полученного массива данных.

Основные результаты данного диссертационного исследования были представлены на: Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновации в здоровье нации» (Санкт-Петербург, 2017 и 2018 г.г.), Международной конференции «Современные достижения фармацевтической науки и практики» (Витебск, 2019), научно-практической конференции «Современное состояние фармацевтической отрасли: проблемы и перспективы» (Ташкент, 2019), Международной научно-практической конференции «Современная фармация: новые подходы в образовании и актуальные исследования» (Астана, 2021).

Положения, выносимые на защиту:

- спектральные характеристики и кислотно-основные свойства 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия,

- хроматографические и электрофоретические условия определения родственных примесей в образце 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия;

- структуры и свойства родственных примесей в образце 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия;

- аналитические методики контроля качества фармацевтической субстанции 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата натрия и лекарственного препарата на его основе;

- проекты нормативных документов для контроля качества фармацевтической субстанции, фармакопейного стандартного образца и лекарственного препарата в форме таблеток 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия;

- результаты изучения стабильности лекарственных средств на основе 4,4' -(пропандиамидо)дибензоата.

Связь задач с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России в рамках научного направления «Инновационные подходы в стандартизации

лекарственных средств синтетического и природного происхождения» (номер государственной регистрации АААА-А19-119030590044-6) и проведена в рамках Государственного контракта Федеральной целевой программы «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» (государственный контракт №14.N08.11.0131). Результаты работы отмечены дипломом победителя «Конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых учёных, молодых кандидатов наук 2017 года».

Личный вклад автора в проведённое исследование и получение научных результатов. Все экспериментальные исследования выполнены лично автором или при его непосредственном участии с соавторами научных публикаций. Степень личного участия в общем объёме работ составляет не менее 90%. Автор непосредственно участвовал в обсуждении цели и задач исследования, в разработке плана эксперимента, интерпретации полученных результатов, осуществлял написание статей и текста диссертационной работы.

Соответствие диссертационной работы паспорту научной специальности.

Диссертационная работа соответствует паспорту научной специальности 3.4.2 -фармацевтическая химия, фармакогнозия, а именно пунктам 2 «Формулирование и развитие принципов стандартизации и установление нормативов качества, обеспечивающих терапевтическую активность и безопасность лекарственных средств» и 3 «Разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства и потребления».

Публикации материалов исследования. По теме диссертации получен 1 патент на изобретение, опубликовано 8 научных работ, из них 2 статья в журнале, который входит в «Перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендованных Высшей аттестационной Комиссией Минобрнауки России», в том числе 1 статья в журнале индексируемом Scopus (импакт-фактор 4.8).

Объем и структура диссертации. Материалы диссертационной работы изложены на 150 страницах. Диссертация состоит из введения, списка сокращений и условных обозначений, обзора литературы (глава 1), глав, содержащих результаты экспериментальных исследований (главы 3 и 4), заключения, списка литературы, 5 приложений. Работа иллюстрирована 52 рисунками и содержит 38 таблиц. Библиография включает 164 ссылки на литературные источники.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Характеристика лекарственных препаратов, обладающих антистеатозным действием

1.1.1. Эпидемиология и патогенез неалкогольной жировой болезни печени

Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) - это клинико-патологический комплекс заболеваний печени, варьирующийся от изолированного стеатоза, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) до фиброза и цирроза. НАЖБП определяется как развитие стеатоза в более чем 5% гепатоцитов, идентифицированных гистологически или радиологически, при отсутствии вторичных причин, таких как вирусный гепатит, алкоголь или наследственные заболевания печени [1]. В последние годы НАЖБП стала наиболее распространённым хроническим заболеванием печени [2]. Число пациентов с НАЖБП растёт как в развитых, так и развивающихся странах из-за глобальной эпидемии ожирения, кроме того, отмечена ещё одна интересная тенденция - рост заболеваемости НАЖБП среди педиатрических возрастных групп [3,4,5], что неудивительно, учитывая современные тенденции безответственности в питании и преобладанию малоподвижного образа жизни [6]. Кроме того, наблюдается линейный рост НАЖБП по сравнению с сахарным диабетом (СД) и метаболическим синдромом (МС) [7,8].

В настоящее время наблюдается неуклонное увеличение частоты заболеваний, в основе которых лежат ассоциированные нарушения углеводного и жирового обменов (МС, СД 2 типа, ожирение, дислипидемия, НАЖБП). Так, по данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) численность больных сахарным диабетом (СД) в мире за последние 10 лет увеличилась более чем в 2 раза, и в настоящее время составляет 422 миллиона человек [9]. Такая же тенденция наблюдается и на территории Российской Федерации, где отмечается значимый рост числа пациентов с СД [10,11]. Распространённость МС составляет 20-40% населения развитых стран [12,13].

По данным Российского исследования DIREG 2 у 37,3% пациентов, обратившихся за помощью к терапевту, обнаружена НАЖБП, в то время как в 2007 г. она составила 27,0% (прирост более 10%), в результате чего она заняла первое место среди заболеваний печени -71,6% [14-18].

Приведённые выше данные согласуются с данными ВОЗ, в соответствии с которыми за последние 20 лет в мире наметилась отчётливая тенденция к росту числа заболеваний печени. Только в странах СНГ ежегодно регистрируется от 500 тысяч до 1 миллиона человек, страдающих разными патологиями печени [9]. Заболевания печени как медико-социальная проблема имеет большую актуальность, это связано с высокими рисками развития таких поражений лиц любого возраста. За два прошедших десятилетия стало совершенно ясно, что

среди болезней печени, особенно в Западных странах, НАЖБП и НАСГ выходят на первый план. За этот период распространённость НАЖБП удвоилась, в то время как число других хронических заболеваний печени не изменилась, или даже снизилась. Более свежие данные подтверждают, что НАЖБП и НАСГ играют одинаково важную роль на Ближнем Востоке, на Дальнем Востоке, в Африке, в Карибском бассейне и Латинской Америке [6,19-22]. НАЖБП быстро становится одной из наиболее частых причин хронических заболеваний печени во всем мире в связи со снижением физической активности и тенденцией к увеличению потребления населением высококалорийной пищи [23-26].

За последнее десятилетие было показано, что НАЖБП является мультисистемным заболеванием, затрагивающим многие органы и регуляторные пути [27]. У таких больных, повышен риск возникновения патологии со стороны сердца и сосудов, что подтверждается многочисленными исследованиями в этой области [14,28-39]. Исходом развития стеатоза печени почти в половине случаев является цирроз органа, а примерно в 5% возникает гепатоцеллюлярная карцинома [6,16,40,41].

В настоящее время распространенность НАЖБП среди населения составляет примерно 30-40% у мужчин и 15-20% у женщин [42] и ещё выше у людей с сахарным диабетом 2 типа (СД2) и встречается у 70% этой группы пациентов [43].

Хотя основные факторы риска развития печеночного жира и фиброза печени при НАЖБП хорошо известны (например, возраст старше 50 лет, ожирение, инсулинорезистентность, СД 2 типа, повышенный уровень ферритина и пататин-подобный фосфолипазный домен (PNPLA3), содержащий полиморфизм 1148М)) [44-46], патологические механизмы, с помощью которых каждый из этих факторов риска (особенно генотип PNPLA3) вызывает прогрессирование НАЖБП, менее изучены. Среди больных с нарушениями углеводного обмена, например СД второго типа НАЖБП обнаруживается в 50-75% случаев. Многие исследователи рассматривают СД-2 как фактор риска развития неалкогольного стеатогепатита. С другой стороны, НАЖБП, протекающая с повышением уровня аланинаминотрансферазы, может являться предиктором развития СД-2 [47-50].

Неалкогольная жировая болезнь печени, что неудивительно, как следует из названия, связана с отложением жира в печени. В частности, отличительной особенностью является накопление свободных жирных кислот и триглицеридов, которое, по крайней мере частично, связано с инсулинорезистентностью и ожирением [51]. При этом патогенные компоненты НАЖБП сложны и многофакторны, и в литературе представлены различные теории. Была предложена модель развития НАЖБП двумя путями, первый из которых состоит из накопления липидов в печени, малоподвижного образа жизни, диеты с высоким содержанием жиров, ожирения и инсулинорезистентности [52]. Второй путь активирует воспалительное событие с

ассоциированным фиброгенезом [53]. Эта модель потеряла некоторую популярность, поскольку считалась слишком упрощенной, чтобы полностью описать сложность НАЖБП человека, когда множество факторов действуют согласованно друг с другом у генетически предрасположенного человека [52]. Как говорили ранее, множество факторов способствуют развитию НАЖБП и имеют некоторую связь с ним [54]. Однако именно инсулинорезистентность играет ключевую роль в развитии стеатоза и НАСГ, что приводит к липогенезу в печени de novo и последующему снижению липолиза жировой ткани с последующим увеличением содержания жирных кислот в печени [55]. Нарушения продукции и секреции адипокинов и воспалительных цитокинов являются следствием дисфункции жировой ткани, вызванной инсулинорезистентностью [56]. Производство активных форм кислорода и стресс эндоплазматического ретикулума в сочетании с митохондриальной дисфункцией происходит в результате накопления жира в печени, особенно в форме триглицеридов. Избыток питательных веществ подавляет эндоплазматический ретикулум, который затем включает развернутый белковый ответ и, как следствие, запускает развитие инсулинорезистентности посредством ряда механизмов, включая активацию N-концевой киназы c-jun и воспаление [57].

Таким образом, неалкогольная жировая болезнь печени, манифестирующая в виде стеатоза или стеатогепатита с исходами в цирроз или гепатоцеллюлярную карциному представляет собой полиэтиологичное заболевание, в основе которого лежат нарушения углеводного и жирового обмена, как в самом органе, так и в организме в целом в рамках метаболического синдрома, ожирения, сахарного диабета. При этом печень не только выступает в роли мишени этих нарушений, но и сама активно участвует в развитии вторичных поражений других органов.

1.1.2. Подходы к лечению неалкогольной жировой болезни печени

Не существует единого подхода, который был бы полностью эффективным в лечении НАЖБП. Основными целями лечения являются улучшение стеатоза и предотвращение прогрессирования заболевания. Интенсивное изменение образа жизни и устранение факторов риска являются краеугольными камнями ведения болезней. Медицинские и хирургические вмешательства служат в качестве лечения второй линии.

В нескольких исследованиях было показано, что устойчивое и эффективное снижение веса за счёт ограничения калорий и повышенной физической активности улучшает функцию печени и гистологию печени [58,59,60]. Было показано, что как физические упражнения, так и диетические вмешательства по отдельности или в комбинации улучшают биохимические и гистологические параметры НАЖБП. Низкоуглеводная диета с высоким содержанием жиров показала свою эффективность в улучшении всех патологических клинических и биохимических

параметров метаболического синдрома и НАЖБП в многочисленных исследованиях [61,62]. Рацион их должен быть дополнен витаминами, клетчаткой, омега-3 и полиненасыщенными жирными кислотами [63-65]. В рандомизированном исследовании было высказано предположение, что средиземноморская диета, которая очень богата мононенасыщенными и полиненасыщенными жирными кислотами, может приводить к снижению жировых отложений в печени и уменьшить связанную с этим инсулинорезистентность даже без потери массы тела [60]. Для больных с НАЖБП характерен сидячий, малоподвижный образ жизни [66], в то время как физическая активность снижает риск артериальной гипертензии, СД, МС, инсулинорезистентности и дислипидемии, также снижая риск смертности по любой причине [67,68].

Основное направления фармакотерапии при лечении НАЖБП: снижение воспаления, устранение инсулинорезистентности и проявление антифибротического эффекта [69].

Одной из основных групп ЛС, применяемых для медикаментозной терапии, являются препараты, повышающих чувствительность к инсулину. Метформин и группа противодиабетических средств тиазолидиндиона являются наиболее изученными препаратами этой группы. Хотя использование метформина было связано со значительным улучшением инсулинорезистентности и печеночных трансаминаз, препарат не показал улучшения гистологических параметров, таких как стеатоз, воспаление, и фиброз [70-73]. Однако из-за противодиабетической эффективности, метформин следует назначать пациентам с СД2 или даже с преддиабетическими состояниями и НАЖБП [74]. Наиболее направленное действие на патогенез НАСГ оказывают тиазолидиндионы (глитазоны), они модулируют чувствительность тканей к инсулину посредством передачи сигналов рецептора и улучшают контроль уровня глюкозы в крови. Розиглитазон и пиоглитазон - это агенты, широко изучаемые в этом классе препаратов для лечения СД2. Было показано, что пиоглитазон улучшает чувствительность печени к инсулину и окисление жирных кислот, а также ингибирует липогенез в печени [75-78]. В сочетании с интенсивным изменением образа жизни этот препарат следует назначать пациентам с НАСГ.

Окислительный стресс играет важную роль в патогенезе НАЖБП, и несколько исследователей широко изучали действие антиоксидантов [79-82]. Витамин Е является наиболее изученным препаратом в этой группе. Его приём был связан со значительным улучшением всех гистологических параметров, таких как стеатоз, увеличение гепатоцитов, лобулярное воспаление и фиброз, по сравнению с плацебо [81]. Витамин Е используется в дозе 800 международных единиц в день для пациентов с НАСГ [2,82]. Хотя несколько агентов, таких как К-ацетилцистеин, бетаин, пробукол, виусид и силибинин (расторопша), использовались в

различных исследованиях, использование этих агентов не рекомендуется в текущей клинической практике из-за противоречивых и недостаточных доказательств [82].

Гиполипидемические средства полезны для лечения, особенно у пациентов с одновременной дислипидемией и НАЖБП. В обзоре Cochrane 2013 г. сообщалось о возможных улучшениях уровней аминотрансфераз в сыворотке и ультразвуковых отклонениях в случаях, получавших статины, хотя исследования, включенные в обзор, были небольшими с высоким риском систематической ошибки [83]. В обзоре [84] авторы сделали вывод, что статины могут улучшить неблагоприятные исходы, связанные с НАСГ. У пациентов с сопутствующими заболеваниями, такими как гиперлипидемия, сахарный диабет и метаболический синдром. Недавнее небольшое рандомизированное контролируемое исследование (РКИ) показало, что монотерапия розувастатином может улучшить подтверждённый биопсией НАСГ с разрешением метаболического синдрома в течение 12 месяцев лечения [84]. К сожалению, вероятность осложнений, связанных с биопсией печени, затрудняет проведение крупных исследований у пациентов с НАСГ. В экспериментальных моделях НАЖБП использование фенофибрата также снижает стеатоз печени, связанный с диетой с высоким содержанием жиров, СД2 и метаболическим синдромом [85].

Урсодезоксихолевую кислоту исследовали в нескольких РКИ в разных дозах до 2-х лет, результаты показали только биохимические, но не гистологические улучшения [86-88].

Лекарства, которые помогают похудеть, могут потенциально изменить патогенные механизмы НАЖБП и могут быть полезны у отдельных пациентов. Большинство этих лекарств дают лишь умеренную пользу в снижении веса. Два РКИ показали положительные эффекты орлистата у пациентов с НАСГ, но неясно, была ли польза связана с потерей веса, вызванной препаратом, или прямым эффектом [89-91]. Так же проводились РКИ по изучению влияния лорказерина [92,93], комбинации налтрексона и бупропиона [94], комбинации фентермина и топирамата [95], но эти результаты противоречивы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Генералова Юлия Эдуардовна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Yki-Jarvinen, H. Non-alcoholic fatty liver disease as a cause and a consequence of metabolic syndrome / H.Yki-Jarvinen // The Lancet Diabetes & Endocrinology. - 2014. - №2. - P. 901910.

2. Carr R.M.Nonalcoholic fatty liver disease: pathophysiology and management / R.M. Carr, A. Oranu, V. Khungar // Gastroenterology Clinics of North America. - 2016. - №45. - P.639-652.

3. Schwimmer J.B. Histopathology of pediatric nonalcoholic fatty liver disease / J.B. Schwimmer, C. Behling, R. Newbury, R. Deutsch, C. Nievergelt, N.J. Schork, et al. // Hepatology. - 2005. -№42. - P. 641-649.

4. Anderson E.L. The prevalence of non-alcoholic fatty liver disease in children and adolescents: a systematic review and meta-analysis / E.L. Anderson, L.D. Howe, H.E. Jones, J.P.T. Higgins, D A. Lawlor, A. Fraser // PLoS One. - 2015. - №10. - e0140908

5. Alisi A. Pediatric nonalcoholic fatty liver disease: a multidisciplinary approach / A. Alisi, A.E. Feldstein, A. Villani, M. Raponi, V. Nobili // Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. -2012. - №9. - P.152-161.

6. Sayiner M. Epidemiology of Nonalcoholic Fatty Liver Disease and Nonalcoholic Steatohepatitis in the United States and the Rest of the World / M. Sayiner, A. Koenig, L. Henry, Z.M. Younossi // Clinical Liver Disease. - 2016. - №20. - P.205-214.

7. Calzadilla Bertot L. The Natural Course of Non-Alcoholic Fatty Liver Disease / L. Calzadilla Bertot, L A. Adams // International Journal of Molecular Sciences. - 2016. - №17 (5). - P.774.

8. Younossi Z.M. Association of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) with hepatocellular carcinoma (HCC) in the United States from 2004 to 2009 / Z.M. Younossi, M. Otgonsuren, L. Henry, et al. // Hepatology. - 2015. - №62. - P.1723-1730.

9. Глобальный доклад по диабету / Резюме. - Всемирная организация здравоохранения, 2016. - С.8.

10. Дедов И.И. Эпидемиология сахарного диабета в Российской Федерации: Клинико-статистический анализ по данным Федерального регистра сахарного диабета / И.И. Дедов, М.В. Шестакова, О.К. Викулова // Сахарный диабет. - 2017. - Т.20, №1. - С. 13-20

11. Дедов И.И. Распространенность сахарного диабета 2 типа у взрослого населения России (исследование NATION) / И.И. Дедов, М.В. Шестакова, Г.Р. Галстян // Сахарный диабет. -2016. - Т.19, №2.- С.104-112.

12. O'Neill S. Metabolic syndrome: A closer look at the growing epidemic and its associated pathologies / S. O'Neill, L. O'Driscoll // Obesity Reviews. - 2015. - №161. - P.1-12.

13. Никитин Ю.П. Распространенность компонентов метаболического синдрома Х в неорганизованной городской популяции (эпидемическое исследование) / Ю.П. Никитин, Г.Р. Казека, Г.И. Симонова // Кардиология. 2001. - №9. - С.37

14. Ивашкин В.Т. Распространенность неалкогольной жировой болезни печени у пациентов амбулаторно-поликлинической практики в Российской Федерации: результаты исследования DIREG 2 / В.Т. Ивашкин, О.М. Драпкина, И.В. Маев // Российский Журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. - 2015. - Т.25. - №6. - С.31.

15. Lassailly G. Bariatric surgery reduces features of non-alcoholic steatohepatitis inmorbidly obese patients / G. Lassailly, R. Caiazzo, D. Buob et al. // Gastroenterology. - 2015. - Vol.149. -P.377-388.

16. Ивашкин В.Т. Клинические рекомендации по диагностике и лечению неалкогольной жировой болезни печени Российского общества по изучению печени и Российской гастроэнтерологической ассоциации / В.Т. Ивашкин, О.М. Драпкина, Ю.О. Шульпекова и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2016. -№26(2). - С.24-42.

17. Драпкина О.М. Статины и неалкогольная жировая болезнь печени / О.М. Драпкина, А.Г. Авилова // Атеросклероз и дислипидемии. - 2014. - №1. - С.31-35

18. Галеева З.М. Неалкогольная болезнь / З.М. Галеева, И.А. Гималетдинова, Н.Б. Амиров // Вестник современной клинической медицины. - 2014. - №1. - С.55-59.

19. Неалкогольная жировая болезнь печени и неалкогольный стеатогепатит. Глобальные практические рекомендации всемирной гастроэнтерологической организации. - World Gastroenterology Organisation. - 2012. - С.32.

20. Masuoka H.C. Nonalcoholic fatty liver disease: an emerging threat to obese and diabetic individuals / H.C. Masuoka, N. Chalasani // Annals of the New York Academy of Sciences. -2013. - №1281. - Р.106-122.

21. National Health Survey: First Results, 2017-18. Australian Bureau of Statistics. Режим доступа: https://www.abs.gov.au/statistics/health/health-conditions-and-risks/national-health-survey-first-results/latest-release. Дата обращения 02.09.2021.

22. Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económicos. Obesity Update 2017. OECD Update Report - 2017. - №13. - Р. 331-341.

23. Whalley S. Hepatology outpatient service provision in secondary care: a study of liver disease incidence and resource costs / S. Whalley, P. Puvanachandra, A. Desai, H. Kennedy // Journal of Clinical Medicine. - 2007. - №7. - Р.119-124.

24. Lee Y.H. Sarcopaenia is associated with NAFLD independently of obesity and insulin resistance: Nationwide surveys (KNHANES 2008-2011) / Y.H. Lee, K.S. Jung, S.U. Kim, et al. // Journal of Hepatology. - 2015. - Vol.63. - P.486-493.

25. Browning J. Prevalence of hepatic steatosis in an urban population in the United States: impact of ethnicity / J. Browning // Hepatology. - 2004. - Vol. 40. - P. 1387-1395.

26. Clark J.M. The prevalence and etiology of elevated aminotransferase levels in the United States. / J.M. Clark // The American Journal of Gastroenterology. - 2003. - Vol. 98. - P. 960-976.

27. Armstrong M.J., Adams L.A., Canbay A., Syn W.K. Extrahepatic complications of nonalcoholic fatty liver disease / M.J. Armstrong, L.A. Adams, A. Canbay, W.K. Syn // Hepatology. - 2014. -№59. - Р.1174-1197.

28. Ткаченко Е.И. Неалкогольная болезнь печени и метаболический синдром: единство патогенетических механизмов и подходов к лечению / Е.И. Ткаченко, Ю.П. Успенский, Л.Н. Белоусова, В.В. Петренко // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. -2008. - №2. - С.93-97.

29. Корнеева О.Н. Неалкогольная жировая болезнь печени как проявление метаболического синдрома / О.Н. Корнеева, О.М. Драпкина, А.О. Буеверов // Фарматека. - 2011. - №15. -С. 19-24.

30. Тирикова О.В. Неалкогольная жировая болезнь печени и ее роль в развитии сердечнососудистых заболеваний / О.В. Тирикова, Н.М. Козлова, С.М. Елисеев, Р.Р. Гумеров // Сибирский медицинский журнал. - 2015. - №1. - С.30-36.

31. Lacobellis G. Epicardial fat thickness and nonalcoholic fatty liver disease in obese subjects/ G. Lacobellis, G. Barbarini, C. Letizia, G. Barbaro // Obesity. - 2014. - №22(2). - Р.332.

32. Targher G. Risk of cardiovascular disease in patients with nonalcoholic fatty liver disease/ G. Targher, C.P. Day, E. Bonora // The New England Journal of Medicine. - 2010. - Vol. 363. - Р. 1341-1350.

33. Драпкина О.М. Атерогенная дислипидемия и печень / О.М. Драпкина, Е.Л. Буевероваа, В.Т. Ивашкин // Атеросклероз и дислипидемии. - 2010. - №1. - С.25-31.

34. Singal A.G. The effect of PNPLA3 on fibrosis progression and development of hepatocellular carcinoma: a meta-analysis / A.G. Singal, H. Manjunath, A.C. Yopp, et al. // The American Journal of Gastroenterology. - 2014. - Vol.109. - P.325-334.

35. Беволол А.Н. Влияние метаболических и кардиогемодинамических нарушений на течение неалкогольной жировой болезни печени и артериальной гипертензии / А.Н. Беволол и др. // Медичний форум. - 2016. - Т.8. - С.16

36. Sumida Y. Limitations of liver biopsy and noninvasive diagnostic tests for the diagnosis of nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis / Y. Sumida, A. Nakajima, Y. Itoh // World Journal of Gastroenterology. - 2014. - Vol.20. - P.475-485.

37. Чумакова Г.А., Эпикардиальное ожирение как фактор риска коронарного атеросклероза / Г.А.Чумакова, Н.Г.Веселовская, О.В.Гриценко и др. // Кардиология. - 2013. - №1. - С. 5155.

38. Petkeviciene J. Physical activity, but not dietary intake, attenuates the effect of the FTO rs9939609 polymorphism on obesity and metabolic syndrome in Lithuanian adult population / J. Petkeviciene, A. Smalinskiene, J. Klumbiene et al. // Public Health. - 2016. - pii: S0033-3506(16)00066-4

39. Petta S. Patophysiologe of Non Alkoholis Fatty Liver Disease. / S. Petta, A.Gastaldelli, E.Robelos, E.Bugianes et al. // International Journal of Molecular Sciences. - 2016. - №17. - Р. 2082-2106.

40. Koo B.K. Sarcopenia is an independent risk factor for non-alcoholic steatohepatitis and significant fibrosis / B.K. Koo, D. Kim, S.K. Joo, et al. // Journal of Hepatology. - 2017. -Vol.66. - P.123-131.

41. Kanwar P. The Metabolic Syndrome and Its Influence on Nonalcoholic Steatohepatitis / P. Kanwar, K.V. Kowdley // Clinical Liver Disease. - 2016. - №20. - P. 225-243.

42. Browning J.D. Prevalence of hepatic steatosis in an urban population in the United States: impact of ethnicity / J.D. Browning, L.S. Szczepaniak, R. Dobbins, P.Nuremberg, J.D. Horton, J.C. Cohen // Hepatology. -2004. - 40. - Р.1387-1395.

43. Blachier M., Leleu H., Peck-Radosavljevic M., Valla D.C., Roudot-Thoraval F. The burden of liver disease in Europe: a review of available epidemiological data / M. Blachier, H. Leleu, M. Peck-Radosavljevic, D.C. Valla, F. Roudot-Thoraval // Journal of Hepatology. - 2013. -№58. -Р.593-608.

44. Romeo S. Genetic variation in PNPLA3 confers susceptibility to nonalcoholic fatty liver disease / S. Romeo, J. Kozlitina, C. Xing, A. Pertsemlidis, D. Cox, L.A. Pennacchio, et al. // Nature Genetics. - 2008. - №40. - Р.1461-1465.

45. Anstee Q.M. Progression of NAFLD to diabetes mellitus, cardiovascular disease or cirrhosis / Q.M. Anstee, G. Targher, C.P. Day // Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. - 2013. - №10. - Р.330-344.

46. Hyysalo J. A population-based study on the prevalence of NASH using scores validated against liver histology / J. Hyysalo, V.T. Mannisto, Y. Zhou, J. Arola, V. Karja, M. Leivonen, et al. // Journal of Hepatology. - 2013. - №60. - Р.839-846.

47. Marchesini G. Nonalcoholic fatty liver disease: a feature of the metabolic syndrome / G. Marchesini, M. Brizi, G. Bianchi, et al. // Diabetes. - 2001. - Vol.50. - P.1844-1850.

48. Magnusson I. Increased rate of gluconeogenesis in type II diabetes mellitus. A 13C nuclear magnetic resonance study / I. Magnusson, D.L. Rothman, L.D. Katz, R.G. Shulman, G.I. Shulman // Journal of Clinical Investigation. - 1992. - №90(4). - P.1323-1327.

49. Kral J.G. Effects of surgical treatment of the metabolic syndrome on liver fibrosis and cirrhosis / J.G. Kral, S.N. Thung, S. Biron et al. // Surgery. - 2004. - Vol.135. - P.48-58.

50. Macauley M. Diurnal variation in skeletal muscle and liver glycogen in humans with normal health and Type 2 diabetes / M. Macauley, F.E. Smith, P.E. Thelwall et al. // Clinical Science. -2015. - №128(10). - P.707-713.

51. Townsend S.A. Non-alcoholic fatty liver disease in 2016 / S.A. Townsend, P.N. Newsome. // British Medical Bulletin. - 2016. - №119. - P.143-156.

52. Buzzetti E. The multiple-hit pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) / E. Buzzetti, M. Pinzani, E.A. Tsochatzis. // Metabolism. - 2016. - №65. - P.1038-1048.

53. Peverill W. Evolving concepts in the pathogenesis of NASH: beyond steatosis and inflammation / W. Peverill, L.W. Powell, R. Skoien. // International Journal of Molecular Sciences. - 2014. -№15. - P.8591-8638.

54. Petta S. A "systems medicine" approach to the study of non-alcoholic fatty liver disease / S. Petta, L. Valenti, E. Bugianesi, G. Targher, S. Bellentani, F. Bonino. // Digestive and Liver Disease. - 2016. - №48. - P.333-342.

55. Bugianesi E. Insulin resistance in nonalcoholic fatty liver disease / E. Bugianesi, S. Moscatiello, MF. Ciaravella, G. Marchesini // Current Pharmaceutical Design. - 2010. -№16. - P.1941-1951.

56. Guilherme A. Adipocyte dysfunctions linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes / A. Guilherme, J.V. Virbasius, V. Puri, M.P. Czech // Nature Reviews Molecular Cell Biology. -2008. - №9. - P.367-377.

57. Cusi K. Role of insulin resistance and lipotoxicity in nonalcoholic steatohepatitis / K. Cusi // Clinical Liver Disease. - 2009. - №13. - P.545-563.

58. Golabi P. Effectiveness of exercise in hepatic fat mobilization in non-alcoholic fatty liver disease: Systematic review / P. Golabi, C.T. Locklear, P. Austin, S. Afdhal, M. Byrns, L. Gerber, et al. // World Journal of Gastroenterology. - 2016. - №22. - P.6318-6327.

59. Katsagoni CN, Georgoulis M, Papatheodoridis GV, Panagiotakos DB, Kontogianni MD. Effects of lifestyle interventions on clinical characteristics of patients with non-alcoholic fatty liver disease: A meta-analysis / C.N. Katsagoni, M. Georgoulis, G.V. Papatheodoridis, D.B. Panagiotakos, M.D. Kontogianni // Metabolism. - 2017. - №68. - P.119-132.

60. Ryan M.C., The Mediterranean diet improves hepatic steatosis and insulin sensitivity in individuals with non-alcoholic fatty liver disease / M.C. Ryan, C. Itsiopoulos, T. Thodis, et al.// Journal of Hepatology. - 2013. - Vol.59. - P.138-143.

61. Noakes T.D. Evidence that supports the prescription of lowcarbohydrate high-fat diets: a narrative review / T.D. Noakes, J. Windt // British Journal of Sports Medicine. - 2017. - №51. -P.133-139.

62. Nseir W. Role of diet and lifestyle changes in nonalcoholic fatty liver disease / W. Nseir, E. Hellou, N. Assy. // World Journal of Gastroenterology. - 2014. - №20. - P. 9338-9344.

63. Zelber-Sagi S. Nutrition and physical activity in NAFLD: an overview of the epidemiological evidence / S. Zelber-Sagi, V. Ratziu, R. Oren // World Journal of Gastroenterology. -2011. -Vol.17. - P.3377-3389.

64. Zelber-Sagi S. Long term nutritional intake and the risk for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD): a population based study / S. Zelber-Sagi, D. Nitzan-Kaluski, R. Goldsmith, et al. // Journal of Hepatology. - 2007. - Vol.47. - P.711-717.

65. Ouyang X. Fructose consumption as a risk factor for non-alcoholic fatty liver disease / X.Ouyang, P.Cirillo, Y.Sautin, et al. // Journal of Hepatology. - 2008. - Vol.48. - P.993-999.

66. Kistler K.D. Physical activity recommendations, exercise intensity, and histological severity of nonalcoholic fatty liver disease / K.D. Kistler, E.M. Brunt, J.M. Clark, et al. // The American Journal of Gastroenterology. - 2011. - Vol.106. - P.460-468.

67. Wen C.P. Minimum amount of physical activity for reduced mortality and extended life expectancy: a prospective cohort study / C.P. Wen, J.P. Wai, M.K. Tsai, et al. // Lancet. - 2011. - Vol.378. - P.1244-1253.

68. Lee I.M. Effect of physical inactivity on major non-communicable diseases worldwide: an analysis of burden of disease and life expectancy / I.M. Lee, E.J. Shiroma, F. Lobelo, et al. // Lancet. - 2012. - Vol.380. - P.219-229.

69. Nobili V. Pediatric non-alcoholic fatty preventive and therapeutic value of lifestyle intervention / V. Nobili, A. Alisi, M. Raponi // World Journal of Gastroenterology. - 2009. - Vol.15. -P.6017-6022.

70. Li Y. Metformin in non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis / Y. Li, L. Liu, B. Wang, J. Wang, D. Chen. // Biomedical Reports. - 2013. - №1. - P.57-64.

71. Bugianesi E. A randomized controlled trial of metformin versus vitamin E or prescriptive diet in nonalcoholic fatty liver disease / E. Bugianesi, E. Gentilcore, R. Manini et al. // The American Journal of Gastroenterology. - 2005. - Vol.100. - P.1082-1090.

72. Haukeland J.W. Metformin in patients with non-alcoholic fatty liver disease: a randomized, controlled trial / J.W. Haukeland, Z. Konopski, H.B. Eggesbo et al. // Scandinavian Journal of Gastroenterology. - 2009. - Vol.44. - P.853-860.

73. Shields W.W. The effect of metformin and standard therapy versus standard therapy alone in nondiabetic patients with insulin resistance and nonalcoholic steatohepatitis (NASH): a pilot trial / W.W. Shields, K.E. Thompson, G.A. Grice, et al. // Therapeutic Advances in Gastroenterology. - 2009. - Vol.2. - P.157-163.

74. Bhat A. Systematic review: Preventive and therapeutic applications of metformin in liver disease / A. Bhat, G. Sebastiani, M. Bhat. // World Journal of Hepatology. - 2015. - №7. - Р.1652-1659.

75. Belfort R. A placebocontrolled trial of pioglitazone in subjects with nonalcoholic steatohepatitis / R. Belfort, S.A. Harrison, K. Brown, C. Darland, J. Finch, J. Hardies, et al. // The New England Journal of Medicine. - 2006. - №355. - Р.2297-2307.

76. Singh S. Comparative effectiveness of pharmacological interventions for nonalcoholic steatohepatitis: A systematic review and network meta-analysis. / S. Singh, R. Khera, A.M.Allen, M.H. Murad, R. Loomba. // Hepatology. - 2015. - №62. - Р.1417-1432.

77. He L. Thiazolidinediones for nonalcoholic steatohepatitis: A meta-analysis of randomized clinical trials / L. He, X. Liu, L. Wang, Z. Yang. // Medicine (Baltimore). -2016. - 95. -e4947.

78. Xu A. The fat-derived hormone adiponectin alleviates alcoholic and nonalcoholic fatty liver diseases in mice / A.Xu, Y.Wang, H.Keshaw, et al. // Journal of Clinical Investigation. - 2003. -Vol.112. - P.91-100.

79. Singh S. Comparative effectiveness of pharmacological interventions for nonalcoholic steatohepatitis: A systematic review and network meta-analysis / S. Singh, R. Khera, A.M. Allen, M.H. Murad, R. Loomba // Hepatology. -2015. - Vol.62. - P. 1417-1432

80. He L. Thiazolidinediones for nonalcoholic steatohepatitis: A meta-analysis of randomized clinical trials / L. He, X. Liu, L. Wang, Z. Yang // Medicine (Baltimore). - 2016. - Vol. 95. - P. e4947.

81. Xu R. Association between vitamin E and non-alcoholic steatohepatitis: a meta-analysis / R. Xu, A. Tao, S. Zhang, Y. Deng, G.Chen // International Journal of Clinical and Experimental Medicine. - 2015. - Vol.8. - P. 3924-3934.

82. Korean Association for the Study of the Liver (KASL). KASL clinical practice guidelines: management of nonalcoholic fatty liver disease. Clinical and Molecular Hepatology. - 2013. -Vol.19. - P. 325-348.

83. Eslami L. Statins for non-alcoholic fatty liver disease and non-alcoholic steatohepatitis / L.Eslami, S. Merat, R. Malekzadeh, S. Nasseri-Moghaddam, H.Aramin // Cochrane Database Syst Rev 2013:CD008623.

84. Kargiotis K. Resolution of non-alcoholic steatohepatitis by rosuvastatin monotherapy in patients with metabolic syndrome / K. Kargiotis, V.G. Athyros, O. Giouleme, N. Katsiki, E. Katsiki, P. Anagnostis, et al. // World Journal of Gastroenterology. - 2015. - Vol.21. - P. 7860-7868.

85. Kostapanos M.S. Current role of fenofibrate in the prevention and management of non-alcoholic fatty liver disease / M.S. Kostapanos, A. Kei, M.S. Elisaf // World Journal of Gastroenterology. -2013. - Vol.5. - P. 470-478.

86. Lindor K.D. Ursodeoxycholic acid for treatment of nonalcoholic steatohepatitis: results of a randomized trial / K.D. Lindor, K.V. Kowdley, E J. Heathcote et al. // Hepatology. - 2004. -Vol.39. - P.770-778.

87. Dufour J.F. Randomized placebo-controlled trial of ursodeoxycholic acid with vitamin E in nonalcoholic steatohepatitis / J.F. Dufour, C.M. Oneta, J.J. Gonvers et al. // Clinical Gastroenterology and Hepatology. - 2006. - Vol.4. - P.1537-1543.

88. Leuschner U.F. High-dose ursodeoxycholic acid therapy for nonalcoholic steatohepatitis: a double-blind, randomized, placebo-controlled trial / U.F. Leuschner, B. Lindenthal, G.Herrmann et al.// Hepatology. - 2010. - Vol.52. - P.472-479.

89. Zelber-Sagi S. A double-blind randomized placebo-controlled trial of orlistat for the treatment of nonalcoholic fatty liver disease / S. Zelber-Sagi, A. Kessler, E. Brazowsky, M. Webb, Y. Lurie, M. Santo, et al. // Clinical Gastroenterology and Hepatology. - 2006. - Vol.4. - P.639-644.

90. Harrison S.A. Orlistat for overweight subjects with nonalcoholic steatohepatitis: A randomized, prospective trial / S.A. Harrison, W. Fecht, E.M. Brunt, B.A.Neuschwander-Tetri // Hepatology. - 2009. - Vol.49. - P.80-86.

91. Younossi Z.M. Systematic review with meta-analysis: non-alcoholic steatohepatitis - a case for personalised treatment based on pathogenic targets / Z.M. Younossi, M.J. Reyes, A.Mishra, R. Mehta, L. Henry // Alimentary Pharmacology & Therapeutics. - 2014. - Vol.39. - P.3-14.

92. Apovian C.M. Pharmacological management of obesity: an endocrine Society clinical practice guideline / C.M. Apovian, L.J. Aronne, D.H. Bessesen, M.E. McDonnell, M.H. Murad, U. Pagotto, et al. // The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 2015. - Vol.100. -P.342-362.

93. Mehal W.Z. Lorcaserin improves the NASH clinical score in the majority of high-risk patients: a retrospective analysis of three phase 3 studies / W.Z. Mehal, R. Fain, A. Glicklich, Y. Li, W. Shanahan, W. Soliman // Hepatology. - 2014. - Vol.60. - P.427A.

94. Winokur A. Naltrexone/ Bupropion Extended-Release 32 mg/360 mg significantly improves liver enzymes in obese/overweight individuals with elevated liver enzymes / A. Winokur, A. Halseth, C. Dybala, H. Lam, S. Chen, N. Chalasani // Hepatology. - 2015. - Vol.62. - P.1268A.

95. Barb D. Pharmacological management of nonalcoholic fatty liver disease / D. Barb, P. Portillo-Sanchez, K. Cusi // Metabolism. - 2016. - Vol.65. - P.1183-1195.

96. Ye J.H. Pentoxifylline ameliorates non-alcoholic fatty liver disease in hyperglycaemic and dyslipidaemic mice by upregulating fatty acid P-oxidation / J.H. Ye, J. Chao, M.L. Chang, W.H. Peng, H.Y. Cheng, J.W. Liao, et al. // Scientific Reports. - 2016. - Vol.6. - P.33102.

97. Власов Б.Я. Экспериментальное обоснование возможности применения малоновой кислоты для коррекции психоэмоционального стресса / Б.Я. Власова, Л.Н.Карелина // Бюллетень ВСНЦ РАМН. - 2011. № 1 (77), Часть 1. - С. 216-218.

98. Percival M. Antioxidants / M.Percival // Clinical Nutrition Insights. - 1998. - Vol.10. - http.: www.acudok.com / Antioxidants .PDF.

99. RahaS. Метаболическое действие свободных радикалов / S.Raha, B.H.Robinson // Сердце и метаболизм. - 2005. - №14. - С.3-8.

100. Shankar Ram Upadhayaya. Design, synthesis, biological evaluation and molecular modelling studies of novel quinoline derivatives against Mycobacterium tuberculosis/ Shankar Ram Upadhayaya, Jaya Kishore Vandavasi, Nageswara Rao Vasireddy et.al. //Bioorganic & Medicinal Chemistry. - 2009. - Vol. 17, Issue 7 - P. 2830-2841.

101. Sonawane N.D. Lectin Conjugates as Potent, Nonabsorbable CFTR Inhibitors for Reducing Intestinal Fluid Secretion in Cholera/ Sonawane N.D., Dan Zhao, Olga Zegarra-Moran, Luis J.V. Galietta, A.S. Verkman // Gastroenterology. - 2007. - Vol. 132, Issue 4. - P. 1234-1244.

102. Chaitman B.R. Anti-Ischemic effects and long-term survival during ranolazine monotherapy in patients with chronic sever angina / B.R.Chaitman, S.L.Scettino, J.O.Parcer et al. // J. Am. Coll. Cardiol. - 2007. - Vol.43, N8. - P.1375-1382.

103. Hassan Heba A. 1-Malonyl-1,4-dihydropyridine as a novel carrier for specific delivery of drugs to the brain/ Hassan Heba A., Abdel-Aziz Mohamed, El-Din A.A Gamal. Abuo-Rahma, Hassan H. Farag // Bioorganic & Medicinal Chemistry, Volume 17, Issue 4, 15 February 2009, Pages 1681-1692.

104. Niwano Y. et al. Acceleration of liver regeneration by malotilate in partially hepatectomized rats // The Japanese Journal of Pharmacology. - 1986. - Т. 40. - №. 3. - С. 411-415.

105. Tokada A., Nei J. Tamico H. et al. Effects of malotilate on ethanol inhibited hepatocyte regeneration in rats // Journal of Hepatology. - 1987. - Vol.5, №3. - P.336-343.

106. Takase S. et al. Effects of malotilate treatment on alcoholic liver disease // Alcohol. - 1989. - Т. 6. - №. 3. - С. 219-222.

107. Ryle P. R., Chakraborty J., Thomson A. D. The effect of di-isopropyl 1,3 dithiol-2-ylidenemalonate (Malotilate) on the hepatic changes induced by ethanol administration in the rat //Biochemical pharmacology. - 1988. - Vol. 37. - №. 22. - С. 4341-4351.

108. Патент РФ № 2515245 C1 от 07.02.2013. Способ получения 4-[(3-этокси-3-оксопропаноил)амино]бензойной кислоты // Патент России № 2515245 C1. 2013 / В.Н. Юсковец, И.П. Яковлев, И. А. Наркевич.

109. Яковлев И.П. Синтез, строение, физико-химические свойства и методы анализа новой фармацевтической субстанции - 4-(3-оксо-3-этоксипропанамидо) бензойной кислоты / И.П. Яковлев, ВН. Юсковец, А.Б. Зеленцова, Н.Ю. Сипкина, И.А. Наркевич, В.А. Вайнштейн, А.А. Теслев // В мире научных открытий. - 2014. - Т.12 №60. - С. 90-117.

110. Ивкин Д. Ю. Влияние производного бензойной кислоты на формирование экспериментальной хронической сердечной недостаточности / Д.Ю. Ивкин, А.А. Карпов, А.В. Драчева, Н.Н. Питухина, А.С. Ивкина, А.В. Бурякина, А.А. Теслев // Фармация. -2016. - Т. 65. - №. 4. - С. 49-52.

111. Патент РФ № 2624729 C1 от 21.06.2016. Способ получения 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия // Патент России № 2624729 C1. 2016 / В.Н. Юсковец, Н.М. Чернов, И.П. Яковлев, И.А. Наркевич.

112. Бажанова Е. Д. Влияние 4,4'-(пропандиамидо)дибензоата натрия и метформина на динамику апоптоза и пролиферации гепатоцитов у мышей с сахарным диабетом и ожирением / Е. Д. Бажанова, С. В. Оковитый, М. А. Белых // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2018. - Т.81 №5. - С. 17-20.

113. Патент РФ № 2702003 C1 от 18.03.2019. Антистеатозное средство // Патент России № 2702003 C1. 2019 / Оковитый С.В., Ивкин Д.Ю., Анисимова Н.А., Белых М.А., Спасенкова О.М., Кириллова Н.В., Яковлев И.П., Чернов Н.М.

114. Патент CCCP № 1787030 от 07.01.1993. Вещество с антиоксидантной активностью // Патент России CCCP № 1787030. 1993. Бюл.1. / В.А. Доровских, Е.А. Бородин, ЕВ. Зражевская

115. Дашкевич Л.Б. Недокись углерода и ее некоторые реакции. Взаимодействие ароматических электрофильнозамещенных аминов с недокисью углерода в неводной среде / Л.Б. Дашкевич, Е.Н. Куваева // Журнал общей химии. - 1961. - Т. 31. - С. 1669

116. А.с. 207236 СССР, МПК С07С. Способ получения натриевых или калиевых солей N,N'-малонил-бис-аминобензойных кислот

117. Патент CCCP № 1773234 от 30.10.1992. Средство, обладающее антиалкогольным действием // Патент России CCCP № 1773234. 1992. Бюл.40. / В.А. Доровских, Н.Р. Левченко, С.Н. Тарасенко

118. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издание. - Москва, 2018.

119. Миронов, А.Н. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Т. II. / А.Н. Миронов, В.П. Бондарев, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильев, В.Г. Кукес, В.К. Лепахин, Н.В. Медуницын, В.А. Меркулов, И.В. Сакаева. - М.: Гриф и К., 2013. - 280 с.

120. International Conference on Harmonisation (ICH) (2006) Harmonised Tripartite Guideline. Q3A(R2) Impurities in New Drug Substances.

121. International Conference on Harmonisation (ICH) (2006) Harmonised Tripartite Guideline Q3B(R2) Impurities in New Drug Products.

122. International Conference on Harmonisation (ICH) (2005) Harmonised Tripartite Guideline Q2 (R1) Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology.

123. Руководство для предприятий фармацевтической промышленности / методические рекомендации. М.: - Издательство «Спорт и Культура - 2000», 2007. - 192 с.

124. Аладышива Ж.И. Валидация аналитических методик для производителей лекарств: типовое руководство предприятия по производству лекарственных средств / Ж. И. Аладышива, О.Р. Спицкий. - М.: Литтерра, 2008. - 132 с.

125. Ebead Y.H. The role of the medium on the acid dissociation constants of some azo dyes in view of experimental and theoretical data / Y.H. Ebead // Journal of Molecular Structure. - 2010. -Vol.982. - P. 100-106.

126. Rukiye Saygili. Synthesis of some 1,8-dioxoacridine carboxylic acid derivatives and the determination of their ionization constants in ethanol-water mixtures / Rukiye Saygili et al. // Journal of Molecular Structure. - 2015. - Vol.1083. - P. 252-259.

127. Stephan M.C. Buckenmaier. Determination of ionisation constants of organic bases in aqueous methanol solutions using capillary electrophoresis / Stephan M.C. Buckenmaier, David V. McCalley, Melvin R. Euerby // Journal of Chromatography A. - 2004. - Vol. 1026. - P. 251259.

128. Michael E. Morgan. Microscale titrimetric and spectrophotometric methods for determination of ionization constants and partition coefficients of new drug candidates / Michael E. Morgan, Kui Liu, Bradley D. Anderson // Journal of Pharmaceutical Sciences. - 1998. - Vol. 87, No. 2. - P. 238-245.

129. Janos P. Determination of equilibrium constants from chromatographic and electrophoretic measurements / Pavel Janos // Journal of Chromatography A. - 2004. - Vol. 1037. - Р. 15-28.

130. Cleveland J.A. Spectrophotometric determination of ionization constants by capillary zone electrophoresis / J.A. Cleveland, Jr. C.L. Martina, S.J. Gluckb // Journal of Chromatography A. -1994. - Vol. 679. - P. 167-171/

131. Maryam Taghizadeh-Behbahani. Colorimetric determination of acidity constant using a paper-based microfluidic analytical device / Maryam Taghizadeh-Behbahani, Bahram Hemmateenejad, Mojtaba Shamsipur // Chemical Papers. - 2018. - Vol. 72, P. 1239-1247.

132. Патент РФ № 2394131 C1 от 19.11.2018. Способ оценки константы диссоциации органических соединений методом капиллярного электрофореза// Патент России № 2394131 C1. 2018 / Костюнин А.П., Полякова Г.Ю., Серебренников Б.В., Дымнич С.А.

133. Sobanska А. Rapid HPTLC quantification of p-aminobenzoic acid in complex pharmaceutical preparations / Anna W. Sobanska, Elzbieta Brzezinska // Journal of Planar Chromatography. -2010. - Vol. 23 (2). - P. 141-147.

134. Snyder. L.R. Practical HPLC Method Development, 2nd edition / L.R. Snyder, J.J. Kirkland.; J.L. Glajch. // John Wiley & Sons, Inc., New York. - 1997. - Р. 233-264.

135. Bondigalla Ramachandra. Development of impurity profiling methods using modern analytical techniques / Bondigalla Ramachandra // Critical Reviews in Analytical Chemistry. - 2017. -Vol. 47 № 1. - Р. 24-36.

136. Merey H.A. Validated simultaneous determination of antipyrine and benzocaine HCl in the presence of benzocaine HCl degradation product / Hanan A. Merey, Hala E. Zaazaa // Analytical Methods. - 2014. - Vol. 6 (15). - P. 6044-6050.

137. Mugunthu R. D. Rapid and sensitive HPLC assay for simultaneous determination of procaine and para-aminobenzoic acid from human and rat liver tissue extracts/ Mugunthu R. Dhananjeyana, Jill A. Trendela, Crystal Bykowskia, Jeffrey G. Sarvera, Howard Andob,PaulW.Erhardta // Journal of Chromatography B. - 2008. - Vol. 867. - P. 247-252.

138. Andelija Malenovic. Optimization of liquid chromatographic method for the separation of folic acid and its two impurities / Andelija Malenovic, Marko Jovanovic, Sonja Petrovic, Nada Kostic, Ana Vemic, Biljana Jancic-Stojanovic // Instrumentation Science & Technology. - 2012. - Vol. 40. - Р. 138-149.

139. Khan A.R. Determination of nicotinamide and 4-aminobenzoic acid in pharmaceutical preparation by LC / Abdul Rafiq Khan, Khalid Mohammad Khan, Shahnaz Perveen, Naeem Butt // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 2002. - Vol. 29. - Р. 723-727.

140. Phenomenex. Application. Procainamide on Luna 5 C18(2). Режим доступа https://www.phenomenex.com/Application/Detail/16951?returnURL=/Application/Search&fsr= 1. Дата обращения 12.03.2021

141. Shu-Ping Wang. Determination of p-aminobenzoates and cinnamate in cosmetic matrix by supercritical fluid extraction and micellar electrokinetic capillary chromatography / Shu-Ping Wang, Woan-Jen Chen // Analytica Chimica Acta. - 2000. - Vol. 416. - Р. 157-167.

142. Lih-Jeng Juang. Simultaneous identification of eight sunscreen compounds in cosmetic products using high-performance liquid chromatography and capillary electrophoresis / Lih-Jeng Juang, Bor-Sen Wang, Huo-Mu Tai, Wei-Jing Hung, Ming-Hsing Huang // Journal of Food and Drug Analysis. - 2008. - Vol. 16, No. 6. - 2008. - P. 22-28.

143. Phenomenex. Application. Water soluble vitamins on Kinetex. Режим доступа https://www.phenomenex.com/Application/Detail/20596?returnURL=/Application/Search&fsr= 1. Дата обращения 12.03.2021

144. Wen-Yao Hsiaoa. Determining ultraviolet absorbents in sunscreen products by combining direct injection with micelle collapse on-line preconcentration capillary electrophoresis / Wen-Yao Hsiaoa, Shiuh-Jen Jiangb, Chia-Hsien Fenga, Shih-Wei Wangc, Yen-Ling Chen // Journal of Chromatography A. - 2015. - Vol. 1383. - Р. 175-181.

145. Debasish Swaina. UPLC Separation of forced degradation and process related impurities of Velpatasvir and structure elucidation by online LC-Quadrupole-Time of Fight-Tandem mass Spectrometry / Debasish Swaina, Amrej Singh Yadava, Chandrasekhar Sasapua, Venkatakrishna Akulab, Gananadhamu Samanthula // Microchemical Journal. - 2020. - Vol.155. - P. 104657.

146. Nagaraju Rajana. Characterization of five oxidative degradation impurities and one process impurity of suvorexant drug substance by LC-MS/MS, HR-MS and 1D, 2D NMR: validation of suvorexant drug substance and process impurities by HPLC and UPLC / Nagaraju Rajana, Dharamasoth Rama Devi, Dinne Naresh Kumar Reddy, J. Moses Babu, K. Basavaiah, K. Balakumaran // Journal of Chromatographic Science. - 2020. - Vol.58 № 5. -P. 433-444.

147. Peize Wu. Impurity identification and quantification for arginine vasopressin by liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry / Peize Wu, Sijian Ye, Ming Li, Hongmei Li, Ying Kan, Zecheng Yang // Rapid Communications in Mass Spectrometry. - 2020. - Vol.34. -P.e8799.

148. Joanna Wittckind Manoel. Determination of empagliflozin in the presence of its organic impurities and identification of two degradation products using UHPLC-QTOF/MS / Joanna Wittckind Manoela Gabriele, Bordignon Primierib Livia, Maronesi Buenoa Camila, F.A.Giordania Julia, et al // Microchemical Journal. - 2021. - Vol. 161. - Р. 105795.

149. Singh S. A critical review on the use of modern sophisticated hyphenated tools in the characterization of impurities and degradation products / S. Singh, T. Handa, M. Narayanam, A. Sahu, M. Junwal, R.P. Shah // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 2012. -Vol. 69. -P. 148-173.

150. Qiushi Sun. Isolation and identification of two unknown impurities from the raw material of clindamycin hydrochloride / Qiushi Sun, Yue Li, Li Qin // Journal of Separation Science. - 2014. - Vol. 37. - P. 2682-2687.

151. Yiwen Huang. Identification, isolation, characterization and ultra-performance liquid chromatography quantification of potential genotoxic impurities in linagliptin / Yiwen Huang, Hui Lu1, Fuli Zhang, Chunyan Min // Journal of Separation Science. - 2018. - Vol. 41 №21. -P.3985-3994.

152. National Library of Medicine. Diethyl malonate. Режим доступа https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/7761. Дата обращения 12.03.2021

153. Maria J. Jordan. Characterization of the aromatic profile in aqueous essence and fruit juice of yellow passion fruit (Passiflora edulis Sims F. Flavicarpa degner) by GC-MS and GC/O / Maria J. Jordan, Kevin L. Goodner, And Philip E. Shaw // Journal of Agricultural and Food Chemistry.

- 2002. - Vol. 50. - P. 1523-1528/

154. Lipp S.V. Retention Indices of Symmetric Dicarboxylic Acid Esters / S.V. Lipp, E.L. Krasnykh, and S.V. Levanova // Journal of Analytical Chemistry. - 2008. - Vol. 63 No. 4. - P. 349-352.

155. Joan Bosch-Fuster. Volatile profiles of sparkling wines obtained by three extraction methods and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis / Joan Bosch-Fuster, Montserrat Riu-Aumatell, Josep M. Guadayol, Josep Caixach, Elvira Lorpez-Tamames, Susana Buxaderas // Food Chemistry. - 2007. - Vol. 105. - P. 428-435.

156. National Library of Medicine. O-Xylene. Режим доступа https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/7237. Дата обращения 12.03.2021.

157. Yawei Wanga. Preliminary study of the retention behavior for different compounds using cryogenic chromatography at different initial temperatures / Yawei Wanga, Jiemin Liub, Ning Lia,b, Guoqing Shib, Guibin Jianga,T, Weiping Ma // Microchemical Journal. - 2005. - Vol. 81.

- P. 184 - 190.

158. Collin D. Wicka. Temperature effects on the retention of n-alkanes and arenes in helium-squalane gas-liquid chromatography Experiment and molecular simulation / Collin D. Wicka, J. Ilja Siepmanna, Wendy L. Klotzb, Mark R. Schureb // Journal of Chromatography A. - 2002. -Vol. 954. - P. 181-190.

159. Chen J.P. Prediction of GC retention values under various column temperature conditions from temperature programmed data / J.P. Chen, X.M. Liang, Q. Zhang, L.F. Zhang // Chromatographia. - 2001. - Vol. 53. P. 539-547.

160. NIST Chemistry WebBook, Diethyl malonate. Режим доступа: https://webbook.nist.gov/cgi/cbook.cgi?ID=C105533&Mask=2000#Gas-Chrom. Дата обращения 12.03.2021

161. NIST Chemistry WebBook, o-Xylene. Режим доступа: https://webbook.nist.gov/cgi/cbook.cgi?ID=C95476&Units=SI&Mask=2000#Gas-Chrom. Дата обращения 12.03.2021.

162. Thayer, M. P. pH-dependent spectral properties of para-aminobenzoic acid and its derivatives / M.P.Thayer, C. McGuire, E.M.S. Stennett, M.K. Lockhart, D. Canache, M. Novak, S.J. Schmidtke // Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. - 2011. -Vol. 84(1). P. 227-232.

163. Альберт А. Константы ионизации кислот и оснований / А. Альберт, Е. Сержент // М.: Химия, 1964. — 179 c.

164. National Library of Medicine. 4-Aminobenzoic acid. Режим доступа https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/978. Дата обращения 12.03.2021

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Номер реестровой записи №_

Дата внесения в государственный реестр лекарственных средств « » 20 г.

(наименование юридического лица, на имя которого выдано решение о внесении фармацевтической субстанции в государственный реестр лекарственных средств, адрес)

НОРМАТИВНЫЙ ДОКУМЕНТ (ПРОЕКТ)

_(номер)

Малабен

торговое наименование лекарственного препарата

4,4'-Г(1,3-диоксопропан-1,3 -диил)диимино1дибензоат натрия химическое наименование

фармацевтическая субстанция лекарственная форма

ПРОИЗВОДИТЕЛЬ

ФАСОВЩИК (ПЕРВИЧНАЯ УПАКОВКА)

УПАКОВЩИК (ВТОРИЧНАЯ (ПОТРЕБИТЕЛЬСКАЯ) УПАКОВКА)

ВЫПУСКАЮЩИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

СПЕЦИФИКАЦИЯ

Малабен, фармацевтическая субстанция

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ

Описание Визуальный Кристаллический порошок белого или почти белого цвета без запаха

Растворимость ГФ РФ Легко растворим в воде; практически не растворим в ацетонитриле, этаноле, этилацетате, хлороформе

Подлинность ИК-спектрометрия ИК-спектр субстанции по положению полос поглощения должен соответствовать спектру ФСО малабена

УФ- спектрофотометрия УФ-спектр поглощения 0,0005% раствора субстанции в области от 210 до 320 нм должен иметь максимум поглощения при 268±2 нм

Температура плавления,°С ГФ РФ От 325 до 328 (с разложением)

Родственные примеси ВЭЖХ Единичная примесь - не более 0,1 %; сумма примесей - не более 0,5 %

ГХ Малоновый эфир - не более 0,05%

Сульфатная зола ГФ РФ Не более 0,1 %

Тяжёлые металлы ГФ РФ, метод 1 Не более 0,001 %

Потеря в массе при высушивании ГФ РФ Не более 0,5 %

Остаточные органические растворители ГФ РФ О-ксилол - не более 0,217%

Микробиологическая чистота ГФ РФ Категория 2.2

Количественное определение Титриметрия От 99,0 до 101,0 % СпН^Об^ в пересчёте на сухое вещество

Упаковка ГФ РФ По 1 г в укупоренных резиновой пробкой стеклянных ёмкостях

Маркировка ГФ РФ В соответствии с ГФ

Хранение ГФ РФ В сухом, защищённом от света месте при температуре не выше 25 °С

Срок годности ГФ РФ 2 года

Химическое назван

диил)диимино]дибензоата натрия Структурная формула:

название

по

IUPAC: 4,4'-[(1,3 -диоксопропан-1,3-

О

О

иы

ж

Чч чч

чч

Структурная формула 4,4'-[(1,3-диоксопропан-1,3-диил)диимино]дибензоат натрия

Эмпирическая формула: С17Ш2№ОбКа2

Молекулярная масса: 386.3

Описание. Кристаллический порошок белого или почти белого цвета без запаха

Растворимость. Легко растворим в воде; практически не растворим в ацетонитриле, этаноле, этилацетате, хлороформе.

Подлинность.

1. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом (1-3 мг субстанции смешивают в 200-300 мг калия бромида) в области от 4000 до 400 см-1, по положению полос поглощения должен соответствовать спектру ФСО малабена.

2. 0,05 г субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде очищенной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают.

Ультрафиолетовый спектр поглощения полученного раствора в области от 210 до 320 нм должен иметь максимум при 268±2 нм.

Температура плавления. От 325 до 328 (с разложением).

Потеря в массе при высушивании. Около 1,0 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре 100 - 105°С до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5 %.

Сульфатная зола. Сульфатная зола из 1,0 г (точная навеска) субстанции не должна превышать 0,1%.

Тяжёлые металлы. Сульфатная зола из 1,0 г субстанции должна выдерживать испытание на тяжёлые металлы.

Родственные примеси.

1. Определение методом ВЭЖХ

Единичная примесь - не более 0,2 %;

сумма примесей - не более 0,5 %.

Реактивы.

Метанол для ВЭЖХ ((Ultra) Gradient HPLC или аналогичного качества.

Фосфорная кислота «осч» или аналогичного качества.

Вода для хроматографии или аналогичного качества.

Приготовление растворов:

Раствор фосфорной кислоты (ПФ А). К 1000 мл воды добавляют 0,2 мл фосфорной кислоты концентрированной, перемешивают, дегазируют, фильтруют.

Испытуемый раствор. Навеску 0,025 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 25,0 мл, растворяют в воде, раствор доводят до метки водой, перемешивают, фильтруют (концентрация 1 мг/мл).

Раствор сравнения. 1,0 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу объёмом 10,0 мл, доводят до метки водой, перемешивают.

1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу объёмом 10,0 мл, доводят до метки водой, перемешивают.

1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу объёмом 10,0 мл, доводят до метки водой, перемешивают, фильтруют (концентрация 1 мкг/мл).

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. 5,0 мл раствора сравнения помещают в мерную колбу объёмом 10,0 мл, доводят до метки водой, перемешивают, фильтруют (концентрация 0,5 мкг/мл).

Приготовленные растворы стабильны в течение 3 суток.

Колонка

Хроматографические условия ProntoSIL 120-5-C18 AQ 75 мм х 2 мм х 5 мкм или

Подвижная фаза Скорость потока Температура колонки

аналогичная, удовлетворяющая критериям пригодности хроматографической системы

Раствор фосфорной кислоты (рН=2,8) : метанол (60:40). 0,1 мл/мин

40 °С

Длина волны детектора 270 нм

Объём пробы

4 мкл

Колонку уравновешивают подвижной фазой (40% ПФ В) до стабилизации базовой линии. Хроматографируют растворитель (получая 1 хроматограмму), раствор для проверки чувствительности хроматографической системы (получая 1 хроматограмму), раствор сравнения (получая не менее 5 хроматограмм). Время удерживания пика малабена составляет около 7 минут, время записи хроматограммы для растворителя и испытуемого раствора должно не менее, чем в 2,2 раза превышать время удерживания пика основного вещества, для раствора проверки чувствительности хроматографической системы и раствор сравнения - не менее, чем в 1,2 раза.

Оценивают пригодность хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной если выполняются следующие критерии:

- на хроматограмме растворителя отсутствуют пики с коэффициентом ёмкости больше

0,5;

- отношение сигнал/ шум (S/N) на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы не менее 10;

- эффективность хроматографической колонки (N) на хроматограмме раствора сравнения не менее 1500;

- фактор асимметрии (As) на хроматограмме раствора сравнения в пределах 0,8-1,5;

- относительное стандартное отклонение (RSD) для времени удерживания пика на хроматограммах раствора сравнения (n>5) не более 2,0%, для площади пика - не более 10%.

Хроматографируют испытуемый раствор, получая не менее 3 хроматограмм.

Примеси, которые могут содержаться в субстанции:

Примесь Название Структурная формула RRT k

Примесь А (пик 1) 4-аминобензойная кислота nh2 Л ho^o 0,35 1,18

Примесь В (пик 2) 4-[(карбоксиацетил)амино]-бензойная кислота o o XX hn ^oh X но^Ч 0,51 1,30

Примесь С (пик 3) 4-[(3-этокси-3- оксипропаноил)амино]бензойная кислота ы( ы \ к с с с 0,85 1,26

Примесь Б (пик 5) 4-[(4-ацетамилобензоил)амино]-бензойная кислота НС С > ч. Ч 2,05 1,00

Хроматограмма раствора субстанции, содержащая все указанные примеси:

0.2----------

0.15

с

о

• 0.12

д

У

0 2 4 6 8 10 12 14 16

Время, мин

На хроматограмме испытуемого раствора площадь единичной примеси с учётом поправочного коэффициента (к) не должна превышать площадь пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%), сумма всех площадей пиков примесей должна превышать 5 площадей пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%). Не учитывают пики, площадь которых составляет менее площади пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (не более 0,05%) и пики растворителя.

2. Определение методом ГХ

Малоновый эфир - не более 0,05%.

Реактивы.

Спирт этиловый.

Стандартные образцы.

СО диэтилмалоната.

Испытуемый раствор. Навеску 0,50 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в 5,6 мл воды очищенной, доводят до метки спиртом этиловым 96%.

Раствор сравнения. Навеску 0,25 г (точная навеска) стандартного образца диэтилмалоната помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и растворяют в 30 мл спирта этилового 50%, доводят объём раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.

1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объём раствора спиртом этиловым 50% до метки и перемешивают.

Раствор спирта этилового 50%. В колбу объёмом 500 мл отмеривают 113 мл спирта этилового 96 % и 137 мл воды очищенной, перемешивают.

Растворы используют свежеприготовленными.

Хроматографические условия Колонка капиллярная HP-5 30м, 0,25 мм, 0,25 мкм.

Допускается использование альтернативной колонки, удовлетворяющей требованиям пригодности

хроматографической системы Газ-носитель азот, 2 мл/мин, деление потока 20 мл/мин

Температура термостата 100°С в течение 2 минут, увеличение температуры со

колонки скоростью 20°С/мин до 180°С, затем 4 минуты при

конечной температуре Температура инжектора 250°С

Температура детектора 250°С

Детектор ионизационно-пламенный, расход водорода - 40 мл/мин,

расход воздуха - 400 мл/мин Объём пробы 1 мкл

Время хроматографирования 10 мин

Хроматографируют раствор сравнения, получая не менее 5 хроматограмм.

Порядок выхода компонентов: пик этанола, пик диэтилмалоната.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

- значение сигнал-шум, рассчитанное для пика диэтилмалоната на хроматограммах раствора сравнения, не менее 10/1;

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику диэтилмалоната на хроматограммах раствора сравнения, не менее 5000 теоретических тарелок;

- фактор асимметрии пика диэтилмалоната на хроматограммах раствора сравнения не более 2.

- относительные стандартные отклонения времён удерживания и площадей пиков диэтилмалоната, рассчитанные по 5 последовательным хроматограммам раствора сравнения, не более 5,0 %.

Хроматографируют испытуемый раствор, получая не менее 3 хроматограмм.

На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с коэффициентом ёмкости менее 0,8, пики, относящиеся к растворителю и системные пики.

На хроматограмме испытуемого раствора препарата площадь пика диэтилмалоната должна быть менее площади пика диэтилмалоната на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

Остаточные органические растворители. Содержание этанола в субстанции должно быть не более 0,5%, содержание о-ксилола - не более 0,217%.

Определение этанола проводят методом «Потеря в массе при высушивании», определение о-ксилола - методом газовой хроматографии.

Реактивы.

Диметилсульфоксид для хроматографии или аналогичного качества;

Стандартные образцы.

ГСО состава о-ксилол, 99,6%.

Испытуемый раствор. Около 0,10 г (точная навеска) субстанции помещают во флакон для парофазного анализа, добавляют 5,0 мл диметилсульфоксида, закрывают пробкой и герметично укупоривают.

Стандартный раствор. Около 0,434 г (точная навеска) стандартного образца о-ксилола помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объём раствора диметилсульфоксидом до метки и перемешивают.

1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объём раствора диметилсульфоксидом до метки и перемешивают.

Растворы используют свежеприготовленными.

5,0 мл стандартного раствора помещают во флакон для парофазного анализа, закрывают пробкой и герметично укупоривают.

Готовят не менее трех проб испытуемого образца и пяти проб стандартного раствора.

Колонка

Газ-носитель Температура термостата колонки

Температура инжектора Температура детектора Детектор

Парофазный дозатор: Температура

термостатирования образца Время термостатирования 30 мин Температура иглы 115°С

Температура линии переноса 120°С Время нагнетания 2 мин

Ввод пробы 0,06 мин (1,7 мл)

Давление 26 psi

Время хроматографирования 15 мин

Хроматографируют паровую фазу стандартного раствора, получая не менее 5 хроматограмм.

Порядок выхода компонентов: пик о-ксилола, пик диметилсульфоксида. Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику о-ксилола на хроматограмме стандартного раствора, не менее 10000 теоретических тарелок;

- фактор асимметрии пика о-ксилола на хроматограмме стандартного раствора не более

2,0;

Хроматографические условия капиллярная Rtx 1301 60м, 0,32 мм, 1,8 мкм, допускается использование альтернативной колонки, удовлетворяющей требованиям пригодности

хроматографической системы азот, 2 мл/мин, деление потока 10 мл/мин 120°С в течение 4 минут, увеличение температуры со скоростью 10°С/мин до 180°С, затем 5 минуты при конечной температуре 120°С 220°С

ионизационно-пламенный, расход водорода - 40 мл/мин, расход воздуха - 400 мл/мин

110°С

- разрешение между пиками о-ксилола и пиком растворителя (диметилсульфоксид) на хроматограмме стандартного раствора не менее 1,5;

- относительные стандартные отклонения времён удерживания и площадей, рассчитанные по пику о-ксилола на хроматограмме стандартного раствора, не более 5 %.

Хроматографируют паровую фазу испытуемых растворов, получая не менее 3 хроматограмм.

На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с коэффициентом емкости менее 0,5, пики, относящиеся к растворителю и системные пики.

Содержание о-ксилола в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

5 • ап • 5 • Р Б • ап • Р

X =-0-=-0-, где

• а • 100•100 •а •2000

£ - значение площади пика о-ксилола на хроматограмме испытуемого раствора, |^*сек;

£0 - среднее значение площадей пиков стандартного раствора о-ксилола, |^*сек;

а0 - навеска стандартного образца о-ксилола, в граммах;

а - навеска испытуемой субстанции, в граммах;

Р - содержание основного вещества в стандартном образце, в процентах.

За результат принимают среднее значение трех испытаний.

Микробиологическая чистота. Испытания проводят в соответствии с требованиями ГФ РФ. Категория 2.2.

Количественное определение. От 99,0 до 101,0 % С17Ш2№ОбКа2 в пересчёте на сухое вещество.

Около 0,15 г (точная навеска) субстанции растворяют в 20 мл воды очищенной, перемешивают до полного растворения. Полученный раствор титруют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты от синего до жёлтого окрашивания (индикатор - 0,1 мл (2 капли) бромкрезолового зелёного (синего)).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 19,31 мг СпИ^Об^.

Упаковка. По 1 г в укупоренных резиновой пробкой стеклянных ёмкостях.

Маркировка. В соответствии с ГФ.

Хранение. В сухом, защищённом от света месте при температуре не выше 25°С.

Срок годности. 2 года.

Назначение. Для производства нестерильных лекарственных форм.

ПРИЛОЖЕНИЕ 2

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Номер реестровой записи №_

Дата внесения в государственный реестр лекарственных средств « » 20 г.

(наименование юридического лица, на имя которого выдано регистрационное удостоверение,

адрес)

НОРМАТИВНЫЙ ДОКУМЕНТ (ПРОЕКТ)

_(номер)

Малабен

торговое наименование лекарственного препарата

4,4'-[( 1,3-диоксопропан- 1,3-диил)диимино]дибензоат натрия химическое наименование

фармакопейный стандартный образец лекарственная форма

ПРОИЗВОДИТЕЛЬ

ФАСОВЩИК (ПЕРВИЧНАЯ УПАКОВКА)

УПАКОВЩИК (ВТОРИЧНАЯ (ПОТРЕБИТЕЛЬСКАЯ) УПАКОВКА)

ВЫПУСКАЮЩИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

СПЕЦИФИКАЦИЯ

Малабен, фармакопейный стандартный образец

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ

Описание Визуальный Кристаллический порошок белого или почти белого цвета без запаха

Растворимость ГФ РФ Легко растворим в воде; практически не растворим в ацетонитриле, этаноле, этилацетате, хлороформе

Подлинность ИК-спектрометрия ИК-спектр ФСО по положению полос поглощения должен соответствовать рисунку спектра 4,4'-[(1,3-диоксопропан-1,3-диил)диимино]дибензоата натрия

Масс-спектрометрия Наличие в масс-спектре иона 341 m/z (ESI-)

Температура плавления,°С ГФ РФ От 325 до 328 (с разложением)

Родственные примеси ВЭЖХ Единичная примесь - не более 0,1 %; сумма примесей - не более 0,5 %

ГХ Малоновый эфир - не более 0,05%

Сульфатная зола ГФ РФ Не более 0,1 %

Тяжёлые металлы ГФ РФ, метод 1 Не более 0,001 %

Потеря в массе при высушивании ГФ РФ Не более 0,5 %

Остаточные органические растворители ГФ РФ О-ксилол - не более 0,217%

Количественное определение Титриметрия От 99,0 до 101,0 % СпН^Об^ в пересчёте на сухое вещество

Упаковка ГФ РФ По 1 г в укупоренных резиновой пробкой стеклянных ёмкостях

Маркировка ГФ РФ В соответствии с ГФ

Хранение ГФ РФ В сухом, защищённом от света месте при температуре не выше 25°С

Срок годности ГФ РФ 2 года