Исследование биологической активности хитозановых препаратов из цист Artemia Salina тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.16, кандидат биологических наук Шикера, Виктория Васильевна

• Шикера, Виктория Васильевна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шикера, Виктория Васильевна

Введение

Глава 1 Структура, свойства, способы получения и эффективность использования хитина и его производных

1.1 Сырьевые источники хитина

1.2 Структура, свойства и нахождение хитина и хитозана

1.3 Способы получения хитина и хитозана

1.4 Производные хитина и хитозана

Глава 2. Объекты, условия и методики исследования

2.1 Методы выделения хитина, хитозана, хитодекстринов и их структурных аналогов: D-глюкозамина хлоргидрата, фосфата и сульфата целлюлозы

2.2 Методы исследования образцов

2.2.1 Определение степени дезацетилирования хитозана

2.2.2 Определение средней молекулярной массы хитозана

2.2.3 Исследование ИК-спектров полученных образцов

2.2.4 Электронная микроскопия

2.3 Условия проведения лабораторных и полевых опытов

Глава 3 Получение и определение состава хитозансодержащих препаратов из цист Artemia salina и рачка-бокоплава

Gammarus lacustris

3.1 Получение хитозансодержащих препаратов из цист Artemia salina и рачка-бокоплава Gammarus lacustris

3.2 Электронно-микроскопическое исследование хитозана, хитодекстринов и их структурных аналогов: D-глюкозамина хлоргидрата, фосфата и сульфата целлюлозы и хитозансодержащих препаратов, полученных модифицированным способом

3.3 Исследование образцов хитина, хитозана и их структурного аналога: D-глюкозамина хлоргидрата методом

ИК-спектроскопирования

Глава 4. Оценка биологической активности хитозансодержащих препаратов

4.1 Стимулирующие свойства хитозана и его водорастворимых форм - хитодекстринов, полученных в «жестких» условиях дезацетилирования из Gammarus lacustris

4.2 Стимулирующие свойства сульфата и фосфата целлюлозы

4.3 Стимулирующие свойства структурной единицы хитозана — fr D-глюкозамина хлоргидрата

4.4 Стимулирующие свойства хитозановых препаратов, полученные путем модифицированного («холодного») способа дезацетилирования

4.5 Влияние хитозанового препарата Sx на энергию прорастания и всхожесть семян по методу песчаных культур (пшеницы Triticum aestivum и гречихи Fagopirum esculentum)

4.6 Влияние хитозановых препаратов на количественные и качественные показатели льна-долгунца 108 Выводы 112 Библиографический список 113 Приложение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование биологической активности хитозановых препаратов из цист Artemia Salina»

Актуальность темы. Для выращивания экологически чистой сельскохозяйственной продукции необходим комплекс благоприятных воздействий. Все изменения, происходящие при этом, в том числе и в почве, отражаются в конечном итоге на человеке. Растения поглощают любые вещества, будь это удобрения, пестициды или другие препараты. Поэтому необходимо, чтобы вещества, вносимые в почву, не были вредными или перерабатывались растениями в приемлемую для человека форму (Фелленберг, 1997).

Роль агрономических препаратов могут выполнять хитин и хитозан, являющиеся биосовместимыми и биоразлагаемыми полимерами, которые широко применяются более чем в 70-ти направлениях в сельском хозяйстве, пищевой, косметической и медицинской промышленности (Быков, 1977).Основным источником хитина и хитозана до сих пор являются Arthro-poda - панцири креветок, крабов, омаров, лангустов и раков (Николаева, 1968; Sen, Mathew, 1975; Austin, Brine at al., 1981; Быков, Фурман, 1999). Считается (Варламов, 2001), что биологическая активность хитозана обратно пропорциональна его молекулярной массе. В настоящее время разработано более 15 методов получения хитозана из хитина, из которых наиболее часто используют методы с агрессивными условиями: концентрированной щелочью и высокой температурой (Куприна, 2002), что делает эти методы экологически опасными.

Вместе с тем, панцири ракообразных - это дорогостоящее сырье, цена которого зависит от вида, возраста и сезонного вылова. Аквабиоресурсы Алтайского края богаты рачком Gammarus lacustris и яйцом Artemia salina, которые ежегодно добываются в объемах 50. 100 тыс. т в год. Благодаря высокой производительности Artemia salina (рачок размножается, давая четыре приплода за сезон), при соблюдении всех правил отлова можно, без ущерба для природы, обеспечить производство хитина и хитозана, используя некондиционное сырье. Применение яйца Artemia salina в производстве стартовых кормов для скармливания молоди рыб предусматривает использование только полноценного сырья, а поврежденные оболочки цист Artemia salina с низкой проклевываемостью в настоящее время не имеют промышленного применения.

В связи с изложенным выше представляется очевидной необходимость разработки безотходной технологии производства хитиновых производных из отходов цист Artemia salina с целью получения из них низкомолекулярных производных хитина для выращивания сельскохозяйственных культур.

Цели и задачи исследования. Цель исследования — разработать методику получения хитина и хитозана и препаратов на их основе из отходов яиц Artemia salina, а также изучить возможность использования полученных препаратов в ростостимулирующей активности растений наравне с хитином и хитозаном, полученными по традиционной технологии.

В задачи исследований входило:

1. Разработать методику получения хитозансодержащих препаратов из отходов цист Artemia salina.

2. Исследовать свойства и инфракрасные спектры поглощения хитозана из цист Artemia salina.

3. Исследовать превращения, происходящие на поверхности частиц хитина в процессе дезацетилирования методом сканирующей электронной микроскопии.

4. Сравнить биологическую активность хитозана, полученного в «жестких» условиях дезацетилирования, с хитозансодержащими препаратами, полученными в «холодных» условиях дезацетилирования, низкомолекулярными хитиновыми препаратами (хитодекстрины и глюкозамин) и с препаратами на основе целлюлозы.

5. Изучить влияние синтезированных препаратов хитинового ряда на урожайность и качество овощей, картофеля, пшеницы и гречихи.

Научная новизна. Впервые разработана экологически безопасная безотходная технологическая схема получения хитозансодержащих препаратов из цист Artemia salina. Исследована надмолекулярная структура, характеристические свойства, биологическая и фунгицидная активность хитина и хито-зана, полученных в «жестких» условиях дезацетилирования, и хитозансодер-жащих препаратов, полученных «холодным» способом дезацетилирования. Установлены эффективные дозы и сроки внесения препаратов в целях повышения урожайности и улучшения основных показателей качества картофеля и овощных культур.

Практическая значимость. Разработанный способ получения хитоза-на и хитозансодержащих препаратов может быть положен в основу промышленного производства стимуляторов роста растений. Предложенный способ получения препаратов не требует значительных затрат на их производство, характеризуется высокой биологической активностью по отношению к сельскохозяйственным культурам.

Положения, выносимые на защиту.

1. Метод получения хитозановых препаратов из цист Artemia salina.

2. Факторы, обуславливающие биологическую активность хитозановых препаратов из цист Artemia salina.

3. Способ применения хитозановых препаратов из цист Artemia salina при выращивании сельскохозяйственных культур.

Апробация работы. Основные результаты работы были доложены на Всероссийской научно-технической конференции «Лекарственные средства и пищевые добавки на основе растительного сырья» (Бийск, 2001); 2-ой Международной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2001); 2-ой Международной научно-практической конференции «Гуминовые удобрения и стимуляторы роста в сельском хозяйстве» (Бийск, 2002); Всероссийском семинаре «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2002); Региональной научно-практической конференции «Повышение устойчивости и эффективности агропромышленного производства в Сибири: наука, техника, практика» (Кемерово, 2002); Седьмой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана (Санкт-Петербург-Репино, 2003); XVII-ом Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Казань, 2003); Международной научно-практической конференции «Стратегия качества, безопасность и конкурентоспособность товаров и услуг на потребительском рынке» (Орел, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, подана заявка на патент РФ Регистрационный № 2003137322 от 24.12.2003. «Способ получения жидкого органо-минерального удобрения из хитозансодержащего сырья».

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 136 страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания объектов, условий и методик исследования, трех глав результатов собственных исследований, выводов и библиографического списка литературы (200 ссылок), содержит 24 таблицы и 40 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Экология», Шикера, Виктория Васильевна

112 Выводы

1. Впервые разработан безотходный энергосберегающий способ получения хитозансодержащих препаратов из цист Artemia salina и рачка Gammarus lacustris, по следующей схеме: измельчение сырья —> депротеинирование, деминерализация и дезацетилирование —► хитозансодержащий препарат.

2. Установлено, что характеристические полосы ИК-спектров хитина и хитозана, полученных традиционным и модифицированным способом из цист Artemia salina, соответствуют характеристическим полосам спектров хитозана, полученного из другого сырья.

3. Показано, что образцы хитозана из цист Artemia salina, полученные традиционным и модифицированным способами, имеют сходную морфологию поверхности с образцами хитозана, полученного из рачка Gammarus lacustris.

4. Изучена зависимость биологической активности хитозансодержащих препаратов от степени дезацетилирования. Выявлено, что максимальной биологической активностью обладают препараты из Gammarus lacustris со степенью дезацетилирования 62%, и препараты из цист Artemia salina со степенью дезацетилирования 78%.

5. Определено, что применение хитозансодержащих препаратов, полученных модифицированным способом, при посеве картофеля, моркови, свеклы, пшеницы способствует увеличению урожайности, по сравнению с контролем: картофеля на 89%, моркови - 80%, свеклы - 78%, пшеницы -58%, с повышением качества выращенной продукции.

6. Установлено, что при обработке семян пшеницы хитозансодер-жащими препаратами из Gammarus lacustris снижается фитопатогенная нагрузка паразитами Helmintosporium sp. - на 28,6%, Fusarium sp. - на 66,7%, колонии Alternarium sp. сократились на 80%, а препараты Sx из Artemia salina по сапрофитам снижают инфекционную нагрузку семян ячменя - на 90%.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шикера, Виктория Васильевна, 2004 год

1. Абдулов А.И., Симонова Л.В., Фролова М.А., Пилипейко Е.А, Фоменко А.С. Перспективы применения хитозана в косметике //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 117-118.

2. Акопова Т.А., Роговина С.З., Горбачева И.Н., Вихорева Г.А., Зе-ленецкий С.Н. Влияние размола на структуру и свойства хитозана //ВМС -1996. Т.38, №2. - С. 23-28.

3. Актуганова Г.Э., Мелентьев А.И., Усанова Н.Г. Особенности продукции комплекса хитинолетических ферментов в периодической культуре Bacillus sp. 739 //Биотехнология. 2001- №3.- С. 25-28.

4. Актуганова Г.Э., Широкова А.В., Мелентьева А.И. Выделение и свойства хитозаназы штамма Bacillus sp. 739. //Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т39, № 5. - С 536-541.

5. Албулов А.И., Белоусов В.И. Промышленные технологии получения сорбентов //Тез. докл. Материалы седьмой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана»: М.: ВНИРО, 2003. - С. 215-216.

6. Андрианова И.Е. Противолучевые свойства хитозана // Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана»: М.: ВНИРО, 2001. - С. 126-128.

7. Банникова Г.Е., Андрюшина И.А., Варламов В.П., Рогожин С.В. Использование сульфатированных полисахаридов для выделения, очистки и иммобилизации ферментов: Биосинтез ферментов микроорганизмами: Тез. докл. 4 Всесоюз. конф. Ташкент. - 1988. - С 32-38.

8. Бегунов И.И., Калугин Н.Ф., Довгаленко В.Н., Стрелков Е.В. Нарцисс — альтернатива химическим протравителям // Тез. докл. Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы Шестой Международной конференции. М.: ВНИРО, 2001. - С. 76-78.

9. Бегунов И.И., Надыкта В.Д., Исмаилов В.Я. Индуцированная устойчивость озимой пшеницы к корневым гнилям // Тез. докл. Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы Пятой конференции, М.: ВНИРО, 1999. - С. 81-83.

10. Беллами JI. Новые данные по ИК-спектрам сложных молекул. -М.: «Мир», 1971.-318 с.

11. Быков В.Г. Состояние и перспективы развития производства хитина, хитозана и продуктов на их основе из панциря ракообразных //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 15-18.

12. Быков В.Л, Фурман Д.И. Получение хитозана из гаммаруса // Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 18-20.

13. Быков В.М., Немцев С.В. Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана //Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение / Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука, 2002. - С. 724

14. Быков В.П. Перспективы использования хитина и хитозана // Рыб. хоз-во. 1977. - №11. - С. 94-95.

15. Быкова В. М, Кривошеина Л.И., Глазунов О.И., Ежова Е.А. Использование хитозана для получения биологически активных пищевых добавок // Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. 147-149.

16. Васильева С.В., Глез В.М., Немцев С.В., Сушков И.В. Защитно-стимулирующее действие хитозанового препарата "Нарцисс" на картофеле //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 83.

17. Вихорева Г.А., Роговина С.З., Акопова Т.А., Зеленецкий С.Н., Гальбрайх Л.С. Изучение фракционного состава хитозана, полученного твердофазным и суспензионным методом //ВМС -1996.-ТЗ8,№10.-С. 1781-1785.

18. Гамзазаде А.И., Скляр A.M., Павлова С.А., Рогожин С.В. О вяз-косзных свойствах растворов хитозана. //ВМС. 1981 - Т23, №3. - С.594-597.

19. Гамзазаде А.И., Скляр А.И., Рогожин С.В. Некоторые особенности получения хитозана //ВМС. 1985. - Т.27, №6. - С.2812-2816.

20. Гартман О.Р. Способ и термодинамика получения хитина и хитозана. Автореф. дис. канд. хим. наук. Барнаул., 1998. - 15 с.

21. Гольбрайх JI.C. Хитин и хитозан: строение, свойства, применение //Соросовский образовательный журн. 2001. - Т. 7, № 7. - С. 51-56.

22. Горовой Л.Ф. Хитинсодержащие материалы "Микотон", получаемые из грибной биомассы //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана»-М.: ВНИРО, 1999.-С. 130-134.

23. Горовой Л.Ф., Петюшенко А.П. Механизмы сорбции ионов металлов грибными хитинсодержащими комплексами. //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» -М.: ВНИРО, 1999.-С. 134-137.

24. Данилов С.Н., Плиско Е.А. Действие на хитин кислот и щелочей //Журнал общей химии. 1954. -Т.24, №10. - С. 1761-1768.

25. Доспехов В.А. Методика полевого опыта. — М.: Колос, 1979.-227 с.

26. Ежова Е.А. Модификация «холодного» способа деацетилирова-ния //Тез. докл. Материалы седьмой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2003.-С. 17-19.

27. Заявка 1-281102 Япония, МКИ5 С08 В 37/08 /Получение низкомолекулярного хитозана.

28. Заявка 2-11601 Япония, МКИ5 С 08 В 37/08 /Способ получения хитозана.

29. Заявка 2-22301 Япония, МКИ5 С08 В 37/08 /Способ получения водорастворимого хитозана.

30. Заявка 2597335 Франция, МКИ А 61 К 7/06 /Косметические препараты с хитозаном.

31. Заявка 2650282 Франция, МКИ5 С08 В 37/08 /Способ получения хитозана дезацетилированием хитина.

32. Заявка 3537333 ФРГ, МКИ А 61 К 7/043 /Лак для ногтей на основе алкиловых эфиров хитина.

33. Заявка 3703760 ФРГ, МКИ С 08 В 37/08 /Косметические средства на основе N-гидроксибутилхитозана

34. Заявка 3715576 ФРГ, МКИ С 08 В 37/08 /Новые производные хитозана для ухода за волосами и кожей на основе нового производного хитозана

35. Заявка 3723911 ФРГ, МКИ С 08 В 37/08 / Лак для ногтей на основе о-бензил-м-гидроксилалкилхитозана.

36. Заявка 53-127824 Япония, МКИ 30 В 2/00 /Удобрения, содержащие хитозан или производные хитина.

37. Заявка 63-156726 Япония, МКИ А 61 К 31/73 /Препараты для лечения заболевания костей (содержащие хитин, хитозан или их производные).

38. Иванов А.В., Смирнов И.В., Раевских В.М., Бондарев А.А., Гарт-ман О.Р. Получение хитозана из пчел //Тез. докл. Материалы седьмой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2003. - С. 24-25.

39. Идзумэ М. Применение хитина и хитиновой кислоты в косметике и мыловарении // Био. индустр. 1989. -V.6, № 7. - С. 557-565.

40. Ильина А.В., Варламов В.П. Влияние степени ацетилирования на ферментативный гидролиз хитозана препаратом Целловиридин Г20Х. //Приклад. биох. и микробиология 2002. - Т.39, № 3 - С. 273-277.

41. Ильина А.В., Зуева О.Ю., Лопатин С.А., Варламов В.П. Ферментативный гидролиз а-хитина. //Приклад, биох. и микробиология. 2004 - Т. 40, №1.- С 42-45.

42. Ильина А.В., Татаринова Н.Ю., Варламов В.П., Албулов А.И. Низкомолекулярный водорастворимый хитозан //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» — М.: ВНИРО, 1999. С. 270-273.

43. Кайминь И.Ф., Озолиня Г.А. Температурные характеристики хитозана и его комплексов. //Тез. докл. Всесоюз. конф. По производству и использованию хитина и хитозана из панциря криля и других ракообразных. -Владимир, 1983 -С 59-61.

44. Кайминьш И.Ф., Киселева Т.Е., Клявинын З.В., Озолиня Г.А. Получение диетической пищевой добавки на основе хитозана //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» -М.: ВНИРО, 2001. С. 175-177.

45. Каплун А.Л, Бурделев О.О., Андия-Правдивый Ю.Э. Модулирование активности комплемента заряженными субстанциями //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. С. 146-148.

46. Кашин В.И., Поликарпова Ф.Я., Борисова А.А., Скрябин К.Г.,

47. Немцев С.В., Варламов В.П. Оценка эффективности лактата хитозана при размножении садовых растений зелеными черенками //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана»- М.: ВНИРО, 2001. С. 82-85.

48. Кочкина З.М., Чирков С.Н. Влияние хитозана на фаговые инфекции //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 151-153.

49. Кошевский И.И., Теслюк В.В. Эффективность применения препарата Микосан и хитозана для обработки семян гороха //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2001. - С. 85-86.

50. Красавцев В.Е. Криль как сырьевая основа хитинового производства//Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. — 35-37.

51. Кращенко В.В. Гелеобразные заливки для пресервов из гидробионтов, содержащих хитозан //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» -М.: ВНИРО, 2001.-С. 201-203.

52. Крешков А. П. Основы аналитической химии. Т.2, Количественный анализ. — Ленинград: Химия. 1976. - 400 с.

53. Куприна Е.Э., Водоложская С.В. Способы получения и активация хитина и хитозана. //Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение / Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука, 2002. - С. 44-64.

54. Ленинджер А. Биохимия. М.: «Мир». - 1976. - 910 с.

55. Лукьянович Т.И. Исследование хитозана в качестве росторегуля-тора и индуктора болезнеустойчивости сои. //Тез. докл. Материалы седьмой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2003. - С. 91-93.

56. Максимов В.И., Родоман В.Е. Продукты функционального питания из панцирьсодержащих отходов // Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» — М.: ВНИРО, 2001.-С. 161-163.

57. Марков С.Т. Метод получения D-глюкозамина хлоргидрата //«Фармация» 1964. - Т. 14, №2. - С.30-32.

58. Маркович Н.А., Коновалова Г.Л. Литические ферменты Tricho-derma и их роль при защите растений от грибковых заболеваний. //Прикладная биохимия и микробиология. 2002. -Т. 39, № 4. - С.389-400.

59. Маслова Г.В. Теория и практика получения хитина электрохимическим способом. //Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение / Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука, 2002. - С. 24-44.

60. Маслова Г.В., Куприна Е.Э., Богерук А.К. Модуль установки для производства хитина электрохимическим способом //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» -М.: ВНИРО, 1999. С. 46-48.

61. Милушева Р.Ю., Рашидова С.Ш., Рубан И.Н., Воропаева Н.Л. Исследование и применение хитина и его производных //Узбекский химический журнал. Ташкент, 1991. - С. 23-25.

62. Наканиси К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений. М. «Мир». - 1965. - 210 с.

63. Немцев С.В., Авдиенко И.Д., Варламов В.П. Скрябин К.Г. Росто-регулирующее действие низкомолекулярного хитозана //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2001. - С. 94-96.

64. Немцев С.В., Ильина С.М., Албулова А.И., Варламов В.П. Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана. //Биотехнология, 2001.-№6.-С. 37-42.

65. Немцов С.В., Гамзазаде А.И., Рогожин С.В., Быкова В.М., Быков В.П. Деацетилирование хитина в гомогенных условиях //Приклад, биох. и микробиология. 2002 - Т.38, №6. - С 609-615.

66. Никитенкова В.Н., Сафонов В.В. Применение хитозана в печатании хлопчатобумажных тканей //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» — М.: ВНИРО, 2001. С. 42-45.

67. Николаева Н.Е. Химический состав и промышленное использование креветок //Пищев. технология. 1968, №5. - С. 56-58.

68. Новиков В.Ю. Кислотный гидролиз хитина и хитозана. // Приклад. биох. и микробиология. 2004 - Т. 77, №3. - С.490-493.

69. Новиков В.Ю., Орлов Т.Н. Многократное использование раствора гидроокиси натрия для дезацетилирования хитина //Рыбное хозяйство. 1988-№12.-С.76-78.

70. Нудьга Л.А., Плиско Е.А., Данилов С.И. Получение хитозана и изучение его фракционного состава //Журнал общей химии. 1971. — Т.43, №12-С. 2555-2558.

71. Овчаренко А.Г., Антонова О.И., Братилов Б.И., Василишин М.С. Аквабиоресурсы Алтая как основа экономического роста //Ползуновский альманах. 1999. -№1. - С. 48-50.

72. Патент RU № 2065447 С 08 В 37/08 Способ получения хитозана. Голицин В.П., Цветков В.Г., Иванов А.В., Гартман О.Р.

73. Патент RU № 2073016 С 08 В 37/08 / Способ получения низкомолекулярного водорастворимого хитозана. Варламова В.П., Стояченко И.А., Буданов М.В.

74. Патент RU № 2073017 6С 08 В 37/08 Способ получения хитозана. Банников В.В., Львович Ф.И., Фрайман Д.Б.

75. Патент RU № 2087483 6С 08 В 37/08 Способ получения хитозана. Сова В.В., Фрайман Д.Б., Банников В.В., Львович Ф.И.

76. Патент RU № 2099351 С 08 В 37/08 / Способ получения водорастворимых производных хитозана. Чернецкий В.Н., Нифатьева Н.Э.

77. Патент RU № 2117673 6С 08 В 37/08 Способ получения хитозана. Иванов А.В., Гартман О.Р., Цветкова А.В., Полторацкая Е.Б.

78. Патент RU № 2118640 С 08 В 37/08 / Способ получения биологически активного препарата «Солихит» из хитина. Максимов В.И., Смирнова Ю.В, Зашихина Д.В., Савченко С.Н., Мосин В.А.

79. Патент RU № 2147590 7С 08 В 37/08 Способ получения хитозана. Сафронова Т.М., Игнатюк Л.Н., Максимова С.Н.

80. Патент USA 4,195,175, 1980 / Process for the manufacture of chito-san. Peniston O.P. and Johson E.L.

81. Патент USA 4,199,496 April 22, 1980. Process for the recovery of chemicals from the shells of crustacean. Peniston O.P., Johson E.L.

82. Патент USA 4,964,894 October 23, 1990 Plant growth regulators derived from chitin. Freepons; Donald.

83. Патент USA 4,978,381 December 18, 1990 / Method for treating cereal crop seed with chitosan to enhance yield, root growth, and stem strength. Had-wiger; Lee A.

84. Патент USA 5,554,445 September 10, 1996/ Method for seed encrusting. Struszczyk; Henryk; Kivekas; Olli

85. Патент USA 5,726,123 March 10, 1998 / Method for treating cotyle-donous plants. Heinsohn G. E. и Bjornson A.S.

86. Патент USA 5,733,851 March 31, 1998 /Formulation and procedure to increase resistance of plants to pathogenic agents and environmental stress. Villanueva; Jaime и Valenzuela; Pablo D.T.

87. Патент USA 6,407,040 June 18, 2002 / Composition and method for reducing transpiration in plants. Nichols, Everett J.

88. Петербургский А.В. Практикум по агрономической химии. М.: Колос, 1968.-496 с.

89. Петрухина М.Т., Максимов В.И., Лунцевич В.Г., Бордак М.Н. Перспективы использования хитодекстрина в растениеводстве //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 98-100.

90. Пинече-Ковас К., Нието X. М., Гарсиа-Алонсо И. Влияние некоторых параметров приготовления хитозана и изучение его фракционного состава //Журнал общей химии. 1971. - Т.43, №12 - С.2555-2560.

91. Пинече-Ковас К., Нието Х.М., Гарсиа-Алонсо И. Влияние некоторых параметров приготовления хитозана на его характеристики //Биоорг. химия.-1984.-Т. 10, № 9. С. 1248-1251.

92. Плиско Е.А., Нудьга Л.А., Данилов С.Н. N-алкилирование хитозана //Журнал общей химии. 1972. - Т. 42, №. 12. - С.2756-2768.

93. Плиско Е.А., Нудьга Л.А., Данилов С.Н. Хитин и его химическиепревращения //Успехи химии. 1977.- Т.46, № 8. - С.1470-1483.

94. Практикум по агрохимии. / Под редакцией Р.А. Фишера. М.: Агропромиздат, 1989. - 214 с.

95. Рашидова С.Ш., Милушева Р.Ю., Воропаева H.JL, Рубан И.Н. Использование хитина в сельском хозяйстве //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999.-С. 101-103.

96. Рубан Е.А., Самуйленко А.Я. Сравнительный анализ флокули-рующих добавок при осаждении биологически активных веществ //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 250-254.

97. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов / Под редакцией И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. — М.: Бран-дес, Медицина, 1998. — 511 с.

98. Сафронова Т.М., Бойцова Т.М. Хитозан как флокулянт нативного рыбного белка //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 251-255.

99. Седельников Л.И. Переработка полимерных отходов рецик-линг, биодеградация //Эколог, промыш. производства. - 1993.-№2.-С. 27-29.

100. Симараха Кэндзо. Новые способы получения хитина и хитозана //Сэни гаккайси. 1990.-№ 12. - С.1547-1552.

101. Симонова Л.Ю., Пашук Л.К. Использование хитозана в качестве косметических препаратов //Тез. докл. 2-й Международной конференции «Биологически активные вещества и новые продукты в косметике». — М.: ВНИРО, 1997.-С. 13-15.

102. Скляр A.M., Гамзазаде А.И., Роговина Л.З., Титкова Л.В., Павлова С.А., Рогожин С.В., Слонимский Г.Л. Исследование реологических свойств разбавленных растворов хитозана//ВМС-1981. -А23, №6. -С. 1396-1403.

103. Тарчевский И.А. Взаимодействие сигнальных систем клеток растений, «включаемых» олигосахаридами и другими элиситорами //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. - С. 105-107.

104. Тарчевский И.А., Чернов В.М., Молекулярные аспекты фитоим-мунитета //Микология и фитопатология. 2000. - Т.34, № 3. - С. 1-10.

105. Тейлор Д, Грин Н., Стаут У. Биология: В 3-х т. Т. 1: Пер. с анг. / Под ред. С. Сопера М.: Мир.-2004. - 454 с.

106. Тейлор Д, Грин Н., Стаут У. Биология: В 3-х т. Т.З: Пер. с анг. / Под ред. С. Сопера М.: Мир.-2004. - 454 с.

107. Тюпенко Г.И., Орловский А.Ф., Кирпотин Д.Б. Полиэлектролитные композиции из агара и хитозана для электрофореза лекарств в стоматологии //Интерполимерные комплексы: Тез. докл. 2 Всесоюзной конференции. -Рига, 1989.-С. 387-388.

108. Тютерев C.J1. Научные основы индуцированной болезнеустойчивости растений. Санкт-Петербург: ВИЗР, - 2002 - 328 с.

109. Тютерев C.JL, Якубчик М.С. Хитозан биологически активное экологически безопасное средство, повышающее устойчивость растений к болезням. - Санкт-Петербург: ВИЗР, - 1994. - 38 с.

110. Тютерев CJ1. Молекулярные механизмы действия хитозана в качестве повышающего болезнеустойчивость растений //Тез. докл. Материалы седьмой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2003. С. 118-120.

111. Фелленберг Г. Загрязнение природной среды. Введение в экологическую химию. М.: Мир, 1997. -232 с.

112. Феофилова EJL, Терешина В.М. Перспективные источники получения хитина из природных объектов //Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» — М.: ВНИРО, 1999.-С. 76-78.

113. Физиология и биохимия сельскохозяйственных растений / Под ред. Н.Н. Трятьекова. М.: Колос, 1998. - 640 с.

114. Хисматуллин Р.Г. Пчела — это не только вкусный мед //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2001. - С. 72-75.

115. Хохлов П.С., Шкаликов В.А. Индуцированный иммунитет в защите от сельскохозяйственных растений, от грибных, бактериальных и вирусных болезней //Агрохимия 1998. - T.XXI, №8 - С. 8-9.

116. Чернецкий В.Н., Нифатьев Н.Э. Хитозан вещество XXI века. Есть ли у него будущее в России? // Журн. РХО им. Д.И.Менделеева. - 1997. - T.XLI, № 1. - С. 80-83.

117. Чернин JI.C. Бактериальные хитиназы в биоконтроле растений //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2001. - С. 118-120.

118. Чертова Т.С. Биологически активные вещества в защите растений //Защита и карантин растений. 2000. - №6. - С. 58-62.

119. Чирков С Н. Противовирусные свойства хитозана //Тез. докл. Материалы шестой международной конференции «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 2001. - С. 120-123.

120. Чирков С.Н, Поспишны Г. Индукция противовирусной устойчивости у растений хитозаном // Тез. докл. Материалы пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана» М.: ВНИРО, 1999. — С. 111-114.

121. Чирков С.Н. Противовирусная активность хитозана. //Прик. биох. и микробиология. 2002. -Т 38, №1. - С. 5-13

122. Шарнина Ф.Ф., Ившина Т.Н., Ившин В.П. Грибы Марий Эл как возможный источник получения солянокислого D-глюкозамина. //Структура и динамика молекулярных систем. 2003. - Выпуск X., Часть 2. - С. 274-277.

123. Шиммель Г. Методика электронной микроскопии // Перевод с немецкого Розенфельда А. М. и Спасского М. Н. Под редакцией д-ра физ.-мат. наук Рожанского В. Н. М.: «Мир». 1972 - 252с.

124. Шиповский А.Б., Фомина В.И., Солонина Н.А., Казмичева О.Ф., Козлов В.А., Тимофеева Г.Н. Особенности структурообразования в растворах хитозана // Химия и компьютерное моделирование. 2002. - №6- С 1 -4.

125. Ягодин Б.А., Жуков Ю.П., Кобзаренко В.И. Агрохимия. М.: Колос, 2002. - 584 с.

126. Austin P.R., Brine C.J., Castle I.E., Zikakis J.P. Chitin: newfakets of research //Science. -1981. Vol. 212, № 4496. - P.749-753.

127. Averbach B.L. The structure of chitin and chitosan. Cambridge, Mass.: Massachusetts Institute of Technology. 1975 -1110 p.

128. Berkeley R.C.W. Chitin, chitosan and their depredator enzymes // Mikrob. polysac and polysaccharases. London - 1979. - P. 205-236.

129. Bubel A., Stepfens R.M., Fenn R.H., Fieth P. An electron microscopy, X-ray diffraction and amino acid analysis of crab shell //Biochem. and Physiol. 1983. - Vol.74, №.4. - P.837-850.

130. Carreno-Gomez В., Duncan R., Evaluation of the biological properties of soluble chitosan and chitosan microspheres //Int. J. Pharm. -1997. -V.148. P. 231-235.

131. Cho Y.I., No H.K., Meyers S.P. Physicochemical characteristics and functional properties of various commercial chitin and chitosan products. //J. Ag-ric. food chem. 1998. V. 46, № 9 - P. 3839-3843.

132. Denuziere A., Ferrier D., Domard A. Interaction between chitosan and glycosaminoglycans, physicochemical and biological studies //Ann. Pharm. Fr. 2000. - V.58, №1 - P. 47-53.

133. Deshpande M.V. Enzymatik degradation of chitin and its biological applications //J. Sci. and Ind. Res. 1986. - V.45, №6. - P.273-280.

134. Foster А В., Webber M Chitin. //Adv. Caibohyd. Chem. -1960. -P. 371-390.

135. Gardner K.H., Blackwell J. The substructure of crystalline cellulose and chitin microfibrils //J. Polym. Sci. 1971. - V. 16, №36. - P.327 - 340.

136. Hackman R.H., Goldberg M. Light scattering and infrared- spectra-photometric studies of chitin and chitin derivatives // Carbohydrates Res. 1974. -V.38, №1 - P.35-45.

137. Hirano Sh., Nashiki Y.,Kinugava J. Chitin and chitosan for use as a novel biomedical material // Polym. Mater. Sci. and Eng.:Proc. ACS Div. V.53. Fall Meet, Chicago. Washington. - 1985. - P.649-653.

138. Knorr D. Use of chitinous polymers in food // Food Technol.-1984-V.38, №1.-P.85-89.

139. Knorr D., Daly M. Mechanisms and diffusional changes observed in multilayer chitosan (alginate coacervate capsules) //Process Biochem. 1988. -Vol.23, №2. -P.48-50.

140. Kramer K.J., Koga D. Insect chitin. Physical state, synthesis, degradation and metabolic regulation //Insect Biochem. 1986. - V. 16, № 6. - P.851-877.

141. Maruca R., Suoler B.J., Wightman J.P. Interaction of heavy metals with chitin and chitosan. Chromium //J. Appl. Polym. Sci. - 1982. - V.27, № 12. - P.4827-4837.

142. Muzzarelli R.A.A. Chitin // Oxford, ect. Pergamon press. 1977. -1125 p.

143. Muzzarelli R.A.A., Tanfani F., Scarpini G., Muzzarelli M.G. ESR characterization of chitin and chitosan //Biochem. and biophys. Res. Com-mun. 1979. - V.89, №2. - P.706-712.

144. Nair K.G., Ramachandran , Madhavan P. Chitosan for removal of mercury from water // Fish. Technol. 1984. - V.21, № 2. - P. 109-112.

145. Pervais S.M., Abdul H.M. Studies on the structure of p-chitin // Z. Naturforsch. 1975. - Bd.30 C., № 9-10. - P.571-574.

146. Rao M.,Sh., Stevens W., F. Processing parameters in scaling-up of lactobacillus fermentation of shrimp biowastell // Advancing chitin science, 7th ICCC Lyon. 1997. - P 88-93.

147. Sannan Т., Kurita K., Iwakura Y. Studies on chitin. Solubility change by alkaline treatment and film Casting // Macromol. Chem. 1975. - V. 1976, №4.-P. 1191-1195.

148. Sen D.P., Mathew G. Fish by products and processing of miscellaneous marine fauna //Symp. Fish Process, md. India. Mysore, - 1975. - P.33-36.

149. Stanley W.L., Watters G.G., Kelly S.H. Immobilization of glucose isomerase on chitin with glutaraldehyde and by simple adsorption //Biotech-nol. and Bioeng. 1976. - V. 18, № 3. - P.439-443.

150. Vaidya M.V., Bulusu K.R. Chitosan as coagulant and coagulant aid // J.Inst. Eng. (India). Environ. Eng. Div. 1984. - V.64, №2. - P.43-47.

151. Vermeulen C.A., Wessels J.G.N. Chitin biosynthesis by a fungal membrane preparation. Evidence for a transient nonciystalline state of chitin //Eur. J. Biochem. 1986. - V. 158., №2. - P.411-415.

152. Wang W., Bo S., Li S., Qin W. Determination of Mark-Houwink equation for chitosans with different degrees of deacetylation //Int. J. biol. Macro* mol. 1991. - V.13. - P.381-385.

153. Wieckowcka E. Oznaczanie chityny napodstawi zanartosci gluko-zaminu//Chem. analiti. (Polska)- 1968.-V.13,№6-P. 1311-1317.

154. Woycicki W., Kreglewski A. Thermodynamic excess function of the binary systems of trifluoroacetic anhydride //Bull. acad. Polon. Sci. Ser. Chim. -1964. V.12. -P.263-5266.

155. Энергия прорастания определялась на 3 сутки, относительная всхожесть на 7 сутки.1. Результаты испытаний.

156. Лучшие результаты по относительной всхожести были получены на модификациях:8 85% №10-86% л №11- 86%12 85% при средней всхожести на контроле 82%

157. Таким образом, относительная всхожесть семян пшеницыобработанных препаратами по сравнению с контролем увеличилась на 3 4%

158. Все препараты ускоряют всхожесть на 3 4 дня.

159. По ячменю эффект на паразитах выглядит слабее, хотя опытные ростки выгодно отличаются от контрольных.

160. По сапрофитам наилучший результат показал на семенах ячменя препарат № 12, снижая инфекционную нагрузку на 90%.1. Общие выводы

161. Испытываемые образцы модификаций жидкого комплексного хитозансодержащего удобрения, обладают стимулирующий способностью и снижают фитопатогенную нагрузку на семена, особенно по сапрофитам.

162. Препараты требуют дополнительных испытаний на различных культурах и других видах фитопатогенов.

163. Препараты представляют несомненный интерес и являются перспективными для дальнейших разработок и производства.

164. Зав. Кафедрой общей химии и экспертизы товаров Бийского /технического института, профессор, к.х.н. ^ A. J1. Верещагин

165. Начальник Бийской государственной семенной инспекции1. Г. И. Масликова1. Заведующая Бийскимпунктом сигнализации и прогноза /Л^ Л. И. Адамец