Использование Salmonella typhimurium для первичного выявления мутагенной активности загрязнителей воды (экспериментальное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.07, кандидат биологических наук Дуган, Алексей Мартемьянович

• Дуган, Алексей Мартемьянович
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Дуган, Алексей Мартемьянович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Бактериальные тесты в мутагенных исследованиях.

1.2. Методы исследований на 4(*Сг»о»ь№а. lypUivnuxiuv*

1.3. Область применения теста Эймса.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

Глава 3. Усовершенствование стандартной схемы исследования в тесте Эймса.

3.1. Исследование спонтанного фона мутирования -ЦвРтомМа iypbivfiniiuv*

3.2. Выбор позитивных контролей.

3.3. Разработка критериев учета мутагенных эффектов в тесте Эймса.

Глава 4. Исследование мутагенной активности загрязнителей воды в тесте Эймса.

4.1. Исследование мутагенной активности антрахино-новых красителей.

4.2. Исследование мутагенной активности анилиновых красителей (аминопроизводных бензольного ряда).

4.3. Исследование мутагенной активности поверхностно-активных веществ.

4.4. Исследование мутагенной активности акрилонит-рила.

4.5. Исследование мутагенной активности бихромата калия.

4.6. Исследование мутагенной активности метилхлоро-форма.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Использование Salmonella typhimurium для первичного выявления мутагенной активности загрязнителей воды (экспериментальное исследование)»

Принятая ХХУ1 съездом программа "Основные направления экономического и социального развития СССР на 1981 - 1985гг. и на период до 1990 года" предусматривает меры по усилению охраны природы, обеспечению рационального использования природных ресурсов.

Одной из важных составных частей охраны окружающей среды является разработка гигиенических нормативов, имеющих своей целью защитить человеческую популяцию от неблагоприятного воздействия загрязнения природы вредными веществами.

Особенно актуальной данная проблема стала в последние десятилетия в связи с расширяющимся применением вновь синтезированных биологически активных соединений в различных сферах производства и в быту. В подавляющем большинстве случаев биологическое действие этих веществ на организм неизвестно.

Всестороннее токсикологическое исследование загрязнителей окружающей среды включает учет отдаленных эффектов, одним из которых является мутагенный, то есть, способность химических веществ повышать частоту мутаций в соматических и половых клетках.

Таким образом, учет мутагенной опасности химических факторов окружающей среды является чрезвычайно актуальным, а генетическая оценка химических веществ становится непременным условием их токсикологического исследования (Г.Н.Красовский, B.C. Журков, 1977, И.В.Саноцкий, В.Н.Фоменко, 1979).

Однако, оценить генетическую опасность всех химических веществ в опытах на млекопитающих не представляется возможным, во-первых, из-за огромного их числа, во-вторых, из-за больших временных и материальных затрат. Следовательно, необходимо установить приоритетность в оценке; их генетической опасности; выбрать такие вещества, которые вероятнее всего окажутся мутагенными для человека (М.Л.Крэнмер, 1978).

G целью установить приоритетность в оценке генетической опасности химических загрязнителей окружающей среды был предложен принцип ЭТАПНОСТИв изучении мутагенности (Н.П.Боч-ков и соавт., 1975; Л.М.Фонштейн и соавт., 1977; В.С.Журков, 1981), сущность которого заключается в первичном выявлении мутагенов (I этап), используя быстрые, дешевые, информативные методы, обладающие большой пропускной способностью. Вещества, показавшие мутагенную активность на. первом этапе, в дальнейшем исследуются в опытах на млекопитающих (II и III этапы).

В подавляющем большинстве случаев на первом этапе - этапе ВЫЯВЛЕНИЯ (скрининга) мутагенов применяются микроорганизмы. Объясняется это тем, что их отличает короткий период роста, хорошая воспроизводимость результатов, относительная простота и дешевизна проведения экспериментов, а также хорошая изученность их в генетическом отношении.

Одной из самых распространенных тест-систем, используемых на I этапе исследования, является методика с использованием гис-тидинзависимых штаммов в качестве тесторганизма и микросомальной активирующей смеси для метаболической активации химических веществ (тест Эймса, тест/микросомы) . Данный тест наиболее полно отвечает перечисленным требованиям при скрининге на мутагенность химических загрязнителей окружающей среды. На сегодняшний день он применяется во всех лабораториях мира, занимающихся выявлением и оценкой генетической активности факторов окружающей среды.

Несомненными преимуществами теста Эймса над другими скрининг-методами является использование штаммов-тестеров, позволяющих регистрировать мутагены по разным механизмам действия

- б сдвиг считывания и замена пар оснований). С введением в методику Эймса системы метаболической активации стало возможным выявление мутагенности не только самих химических веществ, но и их метаболитов, что, с одной стороны, расширяет спектр тестируемых соединений, а с другой - позволяет сделать вывод о потенциальной канцерогенной опасности исследуемого вещества.

Данные по мутагенной активности веществ, полученные в тесте Эймса, широко используются Международным Раковым Агенством для первичной оценки потенциальной канцерогенной опасности химических агентов ( ^^С УПоиоогаркъ си "iht Emq£uaiio^ o^^bz сагс«*и0^еи;с Hi-ik о/ lo-Huv»a» t ОЫобсъ, 1982).

Большое значение для гигиенической практики имееет изучение мутагенного действия красителей, ПАВ, тяжелых металлов и галогеноводородов, во-первых, из-за их широкого применения в народном хозяйстве и быту, во-вторых, многие из веществ этих групп нормированы без учета мутагенной активности.

Красящие вещества применяются в качестве пищевых красителей, красителей для водос, тестильных изделий, лекарственных средств. Актуальность изучения мутагенных эффектов красителей продиктована малоизученностью этих соединений и тем фактом, что для некоторых из них наедены канцерогенные эффекты (йг^и/и , 1980).

Поверхностно-активные вещества являются основой для производства синтетических моющих средств. Они в больших концентрациях присутствуют в сточных водах (как промышленных, так и бытовых) , широко применяются в быту и могут вызывать неблагоприятные эффекты у человека.

Тяжелые металлы и галогеноводороды также являются загрязнителями воды и изучение их мутагенных свойств имеет большое значение для гигиены.

В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы было: использование теста Эймса для первичного выявления мутагенной активности химических веществ - загрязнителей воды для последующей оценки генетической опасности при установлении ЦЦК этих веществ.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие основные задачи:

1. Усовершенствовать стандартную схему исследования химических загрязнителей воды в тесте Эймса: а) проанализировать спонтанный фон мутирования штаммов-тестеров для установления пределов колебания ревертантных колоний по каждому штамму ^ б) установить зависимость уровня спонтанного фона мутирования от состояния системы метаболической активации, в) подобрать позитивные контроли для штаммов ТА 1535 и ТА 100 для вариантов с полной и неполной системой метаболической активации , г) разработать критерии оценки мутагенных эффектов в тесте Эймса.

2. Изучить мутагенную активность ряда загрязнителей воды: красителей производных антрахинона и анилина, ПАВ, акрилонит-рила, бихромата калия и метилхлороформа в тесте Эймса.

3. Разработать критерии составления приоритетного списка веществ, показавших мутагенную активность в тесте Эймса для последующих количественных исследований в опытах на млекопитающих.

4. Подготовить приоритетный список изученных веществ для дальнейшего изучения их в опытах на млекопитающих.

Научная новизна работы.

- По результатам исследований проанализированы колебания спонтанного фона мутирования щтаммов-тестеров и влияние системы метаболической активации на выход ревертантных колоний в контрольных вариантах опытов; обоснованы граничные уровни колебания спонтанного фона мутирования для каждого штамма.

- Предложены новые позитивные контроли для ТА 1535 и ТА 100: тиофосфамид в вариантах с неполной системой метаболической ак-вавации, циклофосфамид с полной системой метаболической активации.

- На основании сравнительного анализа подходов к оценке результатов тестирования мутагенности химических веществ в тесте Эймса впервые предложены граничные соотношения числа колоний-ревер-тантов в опытных вариантах над контрольными, при превышении которых мутагенный эффект считается установленным.

- Впервые изучена мутагенная активность 9 производных антрахи-нона, 8 производных анилина и 12 ПАВ.

- Впервые предложены критерии составления приоритетного списка веществ, показавших мутагенную активность в тесте Эймса для последующего количественного исследования в опытах на млекопитающих. Составлен приоритетный список изученных веществ.

Практическая ценность работы.

1. Материалы по изучению мутагенной активности 1,1,1-три-хлорэтана (метилхлороформа) использованы при установлении среднесуточной ЦЦК данного вещества в атмосферном воздухе. Норматив одобрен Секцией (протокол №5 от 29.10.81г.) и утвержден ГСЭУ Минздрава СССР на уровне 0,2 мг/м3 (№2616 - 82 от 27 ав -густа 1982).

2. Усовершенствованная схема выявления мутагенной активности факторов окружающей среды на 4 с@лм о и Z {урМшиъ'иь (тест ^й&нотШ- /микросомы) внедрен и используется в практике научных исследований в лаборатории санитарной охраны водоемов и лаборатории по гигиеническому изучению препаратов бытовой химии НШ общей и коммунальной гигиены им. А.Н.Марзеева МЗ УССР, г. Киев (справка № 1084 от 19.04 84 г.).

3.Результаты исследований, проведенных с использованием усовершенствованной схемы выявления мутагенов в тесте Эймса вошли в проект "Методических рекомендаций по изучению мутагенной активности химических соединений при обосновании их ЦЦК в воде водных объектов" ( справка №11-13 а/122 от 14.05. 84г).

4. Материалы работы экспонировались на ВДНХ СССР и были отмечены дипломом участника (свидетельство №9902, 1982).

5. Внесено рационализаторское предложение "Способ учета результатов тестирования химических загрязнителей окружающей среды на мутагенную активность" (свидетельство №318 от 2.02.81г).

Материалы диссертационной работы доложены на конференциях молодых ученых и специалистов в гг. Ереване (1980), Ленинграде (1981), Таллине (1982), Кееве (1983).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, выводов, указателя литературы, 8 приложений, иллюстрирована таблицами и диаграммами.

Заключение диссертации по теме «Гигиена», Дуган, Алексей Мартемьянович

ВЫВОДЫ

1. По результатам экспериментов дана характеристика спонтанного фона мутирования штаммов-тестеров ТА 1535, ТА 1538, ТА 98 и ТА 100. Число колоний-ревертантов в контрольных вариантах не зависело от состояния системы метаболической активации. Установлены пределы колебаний среднего числа колоний на чашку в контроле: для ТА 1535 от 5 до 20 колоний, для ТА 1538 от 2 до 36 колоний, для ТА 98 от 23 до 83 колоний, для ТА 100 от 48 до 92 колоний.

2. Предложены новые позитивные контроли для ТА 1535 и ТА 100: тиофосфамид в вариантах с неполной системой метаболической активации (200 мкг/чашку) и циклофосфамид в вариантах с полной системой метаболической активации (200 мкг/чашку).

3. Обоснованы граничные соотношения числа колоний-ревертантов в опытных и контрольных вариантах, при превышении которых мутагенный эффект считается установленным:

4. Изучена мутагенная активность 16 красителей производных антрахинона. Два вещества (2-хлорантрахинон и 1-нитроан-трахинон) показали среднюю степень мутагенной активности; 7 веществ (I,5-диаминоантрахинон; 1-метиламиноантрахинон; 1,2-дигидроксиантрахинон; лейко-1,4-диаминоантрахинон; 1-хлор-антрахинон; I,8-дигидроксиантрахинон и 1-хлор-4-бензиламино-антрахинон) проявили слабую степень мутагенной активности.

Все вещества были эффективны в вариантах с полной и неполной для ТА 1535 и ТА 1538 - 2,2; для ТА 98 для ТА 100

- 2,0; - 1,8. системой метаболической активации преимущественно на штаммах, регистрирующих мутации сдвига рамки считывания генетического кода.

5. Исследована мутагенная активность 9 красителей производных анилина. Три вещества (3-нитроанилин, анилин-3-суль-фокислота и 4-нитроанилин-2-сульфокислота) проявили слабую степень мутагенной активности, не зависящую от метаболической активации. Все производные анилина, показавшие мутагенную активность в наших исследованиях, индуцировали мутации только на штаммах ТА 1538 и ТА 98.

6. Из 14 изученных ПАВ б веществ (синтамид - 5, 0П - 7, синтанол МЦ - 10, олефиносульфонаты, ДНС - АК и алкилдиметил-карбоксибетаин) оказались слабыми мутагенами на штаммах,ТА 1538 и ТА 98, за исключением ДНС - АК (индуцировал мутации у штамма ТА 1535). Во всех случаях мутагенный эффект не зависел от метаболической активации.

7. Акрилонитрил ицдуцировал мутации у штаммов ТА 1535, ТА 100 и ТА 98 преимущественно с метаболической активацией. На штаммах ТА 1535 и ТА 100 была выявлена средняя степень мутагенной активности, на ТА 98 - слабая.

Бихромат калия проявил среднюю мутагенную активность без метаболической активации на штаммах, регистрирующих мутагены по обоим механизмам действия (ТА 1535 и ТА 1538).

Метилхлороформ показал слабую мутагенную активность, не зависящую от метаболической активации.

8. Разработаны критерии составления приоритетного списка химических загрязнителей окружающей среды.

Глава 5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Примененный в наших исследованиях тест Эймса является наиболее подходящим для целей первичного скрининга генотокси-ческих агентов. Наряду с использованием для выявления мутагенности индивидуальных загрязнителей, он широко используется для оценки суммарной мутагенной активности объектов окружающей среды (воды, воздуха, консервированных пищевых продуктов).

Однако, относительное несовершенство методики Эймса (применительно к изучению мутагенности водных загрязнителей) не позволяет достаточно надежно идентифицировать мутагены.

Не совсем отработанная система оценки мутагенных эффектов приводит к регистрации значительного числа ложных результатов.

Усовершенствование схемы исследования, проведенное в нашей работе, привело к установлению пределов колебания числа колоний-ревертантов в контрольных вариантах по каждому выбранному штамму; также было показано, что число ревертантных колоний в контрольных вариантах опытов не зависело от состояния системы метаболической активации.

Определение числа колоний в контроле в пределах величин, указанных в главе 3.1; позволило в значительной степени стандартизировать условия проведения экспериментов и избежать ложных результатов за счет методических ошибок.

Разработка критериев учета эффектов, то есть установление граничных значений соотношения числа колоний-ревертантов в опытных и контрольных вариантах, начиная с которых мутагенный эффект в данном тесте для данного штамма считался бы установленным, позволила избежать большого числа ложноположительных результатов. Так, для штамма ТА 100 соотношение Хо Дот 1,8 и выше дает статистически значимые результаты в 100% случаев (табл.3.3.2) однако, за счет малой дисперсии опыта статистически значимые результаты встречаются и при соотношении Хо/Ук 1»2 (17%). Следовательно, фиксируя факт мутагенности вещества для штамма ТА 100 при Xo/Хк - 1,8, можно со 100% вероятностью сделать вывод, что данное вещество является мутагеном.

Таким образом, установленные нами величины соотношенияХо/Ук для каждого штамма значительно повышают надежность полученных результатов.

Подобный способ учета мутагенных эффектов в тесте Эймса может быть применен не только при изучении индивидуальных загрязнителей, но и при оценке суммарной мутагенной активности факторов окружающей среды.

К несомненным достоинствам теста Эймса относится получение информации о том, является ли исследуемое вещество прямым мутагеном, или активность определяется его метаболитами. Получение такой информации обеспечивается введением в эксперименты системы метаболической активации. Последняя, с одной стороны, позволяет выявлять мутагены среди более широкого набора химических веществ за счет косвенных мутагенов, а с другой - сделать вывод о потенциальной канцерогенной опасности тестируемых соединений.

Примером косвенных мутагенов в наших исследованиях является акрилонитрил. Подавляющее большинство изученных нами веществ - прямые мутагены.

С использованием теста Эймса в качестве скрининг-метода информации., связано получение такжёуи о степени выраженности эффекта, что позволяет (условно) разделить вещества на сильные слабые и средние мутагены. Это дает возможность рекомендовать вещества на второй этап исследования в определенной очередности. Сведения о первоочередности изучения химических агентов на втором этапе дает приоритетный список, который составляется из веществ, показавших мутагенную активность в тесте Эймса. Вещества могут принадлежать к одной группе или классу, либо состоять из набора веществ различных классов и групп.

Химические агенты в приоритетном списке располагаются в порядке убывания их потенциальной мутагенной силы. В основу составления списка нами были положены следующие принципы:

1. Кратность превышения числа колоний-ревертантов в опытных вариантах по отношению к контролю.

2. Наличие зависимости мутагенного эффекта от дозы исследуемого вещества.

3. Наличие эффекта на штаммах, регистрирующих мутагены, вызывающие мутации по разным механизмам.

При определении степени мутагенности кратность превышения числа колоний-ревертантов в опытных вариантах над контрольными имеет решающее значение . По этому критерию производится ранжировка мутагенов на сильные (ХсД"к более 100), средние от 10 до 100 ) и слабые {b/хк до 10) (Л.М.Фонштейн и соавт., 1977, 1983). Вещества в пределах определенной степени мутагенности ранжируются с учетом критериев 2) и 3).

По данным наших исследований ни одно вещество не показало сильного мутагенного эффекта.

Средний - был выявлен у четырех веществ, которые в приоритетном списке (табл.5.1.) должны быть расположены в следующем порядке: бихромат калия, акрилонитрил, 1-нитроантрахинон, 2-хлорантрахинон. Эти вещества обладают примерно одинаковой потенциальной мутагенной силой и отдать предпочтение какому-либо из них в первоочередности исследования в опытах на млекопитающих трудно. Тем более, что они относятся к разным химическим классам. Однако, при исследовании в тесте Эймса большого набора веществ и при выявлении мутагенности средней силы у значительного количества химических агентов, приоритетный список позволит выбрать среди них наиболее опасные в мутагенном отношении агенты для последующих исследований. Это особенно наглядно можно продемонстрировать при изучении большого числа веществ, принадлежащих к одному классу, где есть вероятность выявления сильных, средних и слабых мутагенов.

Остальные 17 веществ из таблицы 5.1. относятся к слабым мутагенам. Расположение в приоритетном списке отражает их потенциальную мутагенную силу. Исследование этих веществ на следующем этале также необходимо, но по сравнению со средними мутагенами - во вторую очередь (в случае, когда нужно установить генетическу опасность для человека всех веществ из списка).

При необходимости изучения генетической опасности, например, только антрахиноновых красителей,из списка видно, что средней мутагенной активностью обладают I-нитроантрахинон и 2-хлорантрахинон. Их надо исследовать в первую очередь. Затем (в порядке убывания их потенциальной мутагенной силы) №№ 6,7, 8,10,12,18,19 (табл.5.I.).

Исследование в опытах на млекопитающих красителей анилинового ряда следует начинать с 3-нитроанилина,так как средних мутагенов среди соединений производных анилина обнаружить не удалось.

Все тестированные ПАБы оказались слабыми мутагенами. Наибольшая потенциальная мутагенная сила была выявлена у алкил-диметилкарбокеибетаина. В общем приоритетном списке это соединение стоит под №5. Однако, для группы ПА.В вещество должно изучаться на млекопитающих в первую очередь, затем синтамид-5 (№11), ДНС - АК (№15), олефиносульфонаты (№16), 0П - 7 (№20) и синтанол МЦ - 10.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Дуган, Алексей Мартемьянович, 1984 год

1. Абилев С.К., Фонштейн Л.М., Мигачев Г.И., Андриевский A.M. О мутагенном действии производного тетрагидроазопирена на бактерии.- Генетика,1979, ХУ, №5, 807-811.

2. Бочков Н.П., Шрам Р.Я., Кулешов Н.П., Шурков B.C.,Система оценки химических веществ на мутагенность для человека. Общие принципы, рекомендации и дальнейшие разработки.-Генетика, 1975, И, №10, с.156-169.

3. Бобринев Е.В., Облапенко Н.Г., Подольная М.А., Ревезова Ю.А. Фонштейн Л.М. Анализ и планирование экспериментов с использованием теста^а^о\AiWa- /микросомы.- Генетика, 1983, XIX, №11, с.1835-1840.

4. Бигалиев А.Б. Аберрации хромосом в культуре лимфоцитов лиц, контактирующих с хромом.- Цитология и генетика, 1981, 15, №6, с. 63-68.

5. Бигалиев А.Б., Шпак Н.К., Смагулов А.С. К механизмам цитологического действия хрома как загрязнителя окружающей среды.-Доклады АН СССР, 1979, 245, №25, с.1234-1236.

6. Бигалиев А.Б., Туребаев М.И., Емелесова М.Ш. Цитогенетичес-кие исследования мутагенных свойств соединений хрома в условиях i* VtV о В сборнике "Генетические последствия загрязнения окружающей среды." М., "Наука", 1977, с.173-176.

7. Бигалиев А.Б., Туребаев А.Н., Елемесова М.Ш., Бигалиева Р.К. Культура клеток как тест-система для исследования потенциальной мутагенной активности промышленных загрязнителей.

8. В сборнике "Генетические последствия загрязнения окружающей среды. Выпуск 2". М., 1977, с.74-84.

9. Бигалиев АЛО., Елемесова М.Ш., Бигалиева Р.К. Хромосомные аберрации в соматических клетках млекопитающих, вызванныесоединениями хрома,- Цитология и генетика, 1976, 10, №3, с. 223-224.

10. Дубинин Н.П., Пашин Ю.В. Мутагенез и окружающая среда. М., Наука, 1978.

11. Дубинин Н.П. Генетические аспекты "Человек и биосфера". В сборнике "Гннетические проблемы загрязнения окружающей среды на территории Молдавской ССР". г.Кишинев, 1980, с.3-6.

12. Журков B.C., Шрам Р.Я., Дуган A.M. Анализ мутагенной активности акрилонитрила.- Гигиена и санитария, 1983, №1, с.71-72.

13. Журков B.C. Подходы к регламентации химических загрязнителей окружающей среды, обладающих мутагенной активностью.

14. В сборнике "Медицинские проблемы охраны окружающей среды". Москва, 1981, с.88-95.

15. Журков B.C., Новакова Я., Шрам Р.Я. Частота хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей при воздействии циклофосфамидом.- Гигиена и санитария, 1978, №1, с.12-14.

16. Крэнмер М.Ф. Использование экспериментальных животных и лабораторных тестов для контроля токсических эффектов.

17. В сборнике "Всесторонний анализ окружающей природний среды". Труды III Советско Американского симпозиума. Ленинград, Гидрометеоиздат, 1978, с.56-59.

18. Лазарева Н.В., Левитина Э.Н. Вредные вещества в промышленности., том II, Издательство "Химия", 1976, с.105-108.

19. Григорьева Л.В. Санитарная бактериология и вирусология синтетических моющих средств. Киев., "Здоров'я", 1980.

20. Можаев Е.А. Загрязнение водоемов поверхностно-активными веществами. Москва, "Медицина", 1976.

21. Ильин И.Е. Гигиеническое изучение стабильности детергентов в воде.- "Вопросы окружыющей среды". Тезисы докладов конференции "Системный подход в охране окружающей среды"., Октябрь, 1979, Пермь, 1979.

22. Рамая Л.К., Померанцева М.Д., Вилкина Г.А. Сообщение I. Частота доминантных летальных мутаций и хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей, индуцированных нитро-зоморфолином, нитрозометилмочевиной и циклофосфамидом.-Генетика, №6, с.1036-1040.

23. Пашин Ю.В., Козаченко В.И., Зацепилова Т.А., Соболева Л.С. Комплексное испытание генетической активности шестивалентногохромайи Vlito и viio Цитология и генетика., 15, 1981, 66-69.

24. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. М. /'Медицина", 1979, с.231.

25. Фонштейн Л.М., Калинина Л.М., Полухина Г.Н., Абилев С.К., Шап ро А.А. Тест-система оценки мутагенной активности загрязнителей среды на ^аЫотЫси (Методические указания).,1. М М., 1977, с. 1-52.

26. Фонштейн Л.М., Абилев С.К., Зехнов В.М., Шапиро А.А. Исследование эффекта мутагенной метаболической активации У-нит-розоморфолина на микроорганизмах.- Генетика, 1976, XII,5, c.-Hq-US

27. Фонштейн Л.М., Ревазова Ю.А. Оценка мутагенной активности лекарств.- Химико-фармацевтический журнал, 1976, №6, с.6.

28. Фонштейн Л.М., Золотарева Ю.А., Ревазова Ю.А., Шапиро А.А., Лексин В.А., Исхакова Э.Н., Радченко В.А., Брацлавский В.А., Подольная М.А. Изучение мутагенной активности диоксидина.-Химико-фармацевтический журнал, 1978, №2, с.24-29,- из

29. Ames B.N. The detection of chemical mutagens with enteric bacteria. In: Hollander A (ed) Chemical Mutagens, vol. 1, Plenum Press, N.X., 1971, p.267.

30. Alink G.M., Frederix-WoIters E.M.H., Van der Goad M.A., Van der Kerkhoff J.E.J., Poels C.L.M. Induction of sister-chroma-tide exchanges in fish exposed to Rhine water. Mutat. Res., 1980, 28, 369-374.

31. Andrews A.W., Lenito H., Thibault, Lijinsky W. The relationship between carcinogenicity of some polynuclear hydrocarbons.-Mutat. Res., 1978, 3, 311-318.

32. Andrews A.W., Zawistowski E.S., Valentine C.R. A comparision of the mutagenic properties of vinil chloride and methyl chloride. Mutat. Res., 1976, 40, 273.

33. Bridges B.A., Mottershead R.P., Rothwell N.A., Green H.L. Repair-deficient bacterial strains suitable for mutagenicity screenings Tests with the fungicide captan. Chem. Biol. Interact., 1972, 77-84.

34. Bridges B.A. The three-tier approach to mutagenicity screening and the concept of radiation-equivalent dose. Mutat. Res., 1974, 26, 335.

35. Bos R.P., Browns P.M.E., Van Doom R., Theuws J.L., Henderson P.Th. The appearance of mutagens in urine of rats after the administration of benzidine and some other aromatic amines. -Toxicology, 1980, 16, II3-I22.

36. Blanderen van P.J., Breimer D.D., Rotteveel G.M.T., Mohn G.R. Mutagenic activation of dibromomethane and diiodomethane by mammalian microsomes and glutatione S-trans-feres. Mutat.Res., 1980, 2ft» 5, 341-346.

37. Brown J.P. A review of the genetic effects of naturally occuring flavonoids, anthraquinomes and related compounds. Mut. Res.,1980, 25, 243-277.

38. Brown J.P., Ditrich P.S. Mutagenicity of anthraquinone and benzanthrone derivatives in the Salmonella/microsome test. -Mutat. Res., 1979, 66, I, 9-24.

39. Bos R.P., Browns R.M.E., Van Doom R., Theus J.L.G., Henderson P.Th. Iuvolvment of non-oxidative enzymes in mutagenic activation of urine from rats given benzidine and some other aromatic amines. Toxicology, 1981, 2, 3, 223-233.

40. Bertani G.A. A methods for detection of mutations using streep-tomicin dependens in Escherichia coli. Genetics, 1951, 33» 598-611.

41. Battalgia В., Bisol P.M., Fossato V.U., Rodino E. Studies of the genetic-effect of pollution in the sea. Rapp. P-v Reum. Cons. int. Explor. Mer., 1980, 149.267-279.

42. McGann J., Ames B.N. The Salmonella/microsome mutagehicity test: predective value for animal carcinogenicity. Mutagenesis, 1978, 87-Ю8.

43. McCann J., Choi E., Jamasaki E., Ames B.N. Detection of carcinogens as mutagens in the Salmonella/microsome test: Assay of- 117 500 chemicals. -Proc. Natl. Sci. (USA), 1975, Xg9 5135-5139.

44. McCana J., Ames B.N. Detection of carcinogens as mutagens in the Salmonella/microsome test: Assay of 300 chemicals: Discussion. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 1976, 21* 950-954.

45. McCann J., Ames B.N. Detection of carcinogens as mutagens in the Salmonella/microsome test: Assay of 300 chemicals. Part II. • Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 1976, 21* 721.63* Carrow B.W., Meier P. Air pollution and pulmonary cancer.

46. McCoy E.C., Rosenkranz J., Rosenkranz H.S., Mermelstein R. Nitrated fluorene derivatives are potent frameshif mutagens.-Mutat. Res., 1981, ^0, I, 11-20.

47. Couch D.B., Allen P.F., Abernethy D.J. The mutagenicity of dinitrotoluenes in Salmonella typhimurium. Mutat. Res., 1981, £0, 4, 373-383.

48. Demerec M. Reaction of genes of Escherichia coli to certain mutagens. Symp. Soc. Exp. Biol., 1953» £> 43-54.

49. Chu E.C., Patel A.H., Lin R.E., Tarons M.S., Linhart M.S., Dunkel V.C. Evaluating statistical analysis and reproducibility of microbiol mutagenicity assays. Mut. Res., 1981, 5» II9-I32.

50. Dobias L. Human blood mutagenicity for Salmonella typhirium tester strains after oral application of entizol. Mut. Res., 1980, 2Zt 357-380.

51. Dehner W. Mutagenic activity of airborne particulate pollutans.-Short-Term Test Syst. Detecting carcinog., 1980, 384-394,

52. Eisenstadt E., Gold A. Gyclopenta (c,d) pyrene. A hyghly mutagenic polycyclic aromatic hydrocarbon. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1978, 4, I667-I669.

53. Edmunds Henry Ph.O., Baden J.M., Simmon V.F. Mutagenicity studies with volatile metabolities of halothane. Anesthesiology, 1979, 51, 424-429.

54. Fishbein L. (Ed) Porential Industrial Carcinogens and mutagens. Studies in Environmental Science, Elsevier, Amsterdam, 4, 241-245.

55. Flora de S. The problem of chromium mutagenicity as related to carcinogenicity and epidemiological date. -Mut.Res., 1979» 64, 2, 102.- 119

56. Flora de S. Metabolic deactivation of mutagens in the Salmonella/micro some test. Nature, 1978, 2£Е, 4-55-4-56.

57. Flam W.G. A tier system apporach to mutagen testing. Ivlut. Res., 1974, 26, 529.

58. Flessel С .P.' Metals as mutagens . Inorg. a. Natur. Aspects Cancer. Proc. Inst. Couf. Int. Assoc. Bioinorg. Sci. La Jolla, Calif., 1977, N.Y.-London, 1978, II7-I28.

59. Frezz Domenico, Pegoraro В., Prescinttini S. A marine host-mediated assay for the detection of mutagenic compounds in polluted sea waters. Mut. Res., 1982, 104, 4-5, 215-225.

60. Friedrich U., Aeschbach H.U., Seiler J.P., Wttgler E.E. The Salmonella/microsome assay some possible causes for interlabora-tory variations. Mutat. Res., 1982, 105. 153-140.

61. Garner Colin. Assessment of in vitro methods of detecting mutagens and carcinogens. Chem. and Ind., 1980, 21, 84-4-847•

62. Garner R.C., Nutman C.A. Testing of some azo days and their reproduction products for mutagenicity using Salmonella/typhi-murium ТА 1558. Mut. Res., 1977, 44, 9-19»

63. Greim H.W., GOggelmann W., Summer K.H., Wolff T. Mutagenicity testing with Salmonella typhimurium microsome test.' Arch.' Toxicol., 1980, 46, 1-2, 51-40.

64. Green S. In short-term in vitro testing for carcinogenesis, mutagenesis and toxicity. J. Berky and C. Sherrod Eds (Franklin, Miladephia), 1977, 154-164.

65. McGregor J.T., Fridman M. Hon mutagenicity of tetrabromophtha-lic anhydride and tetrobromoptiialic acid in the Ames Salmonel-la/Microsome mutagenicity test. Mut.Res., 1977, 1,81-84.

66. McGregor, Douglas В., Colin G. Riach, Hastwell R.M., Dacre J.C. Genotoxic activity in microorganisms of tetryl, 1,3-dinitro-benzene and 1,3,5,-trinitrobenzene. Environm. Mut., 1980, 2,4, 531-541.

67. Hales B.F., Gain R. Characteristic of the activation of cyclophosphamide to a mutagen by rat liver. Biochem. Pharmacol.,1980, 29, 256-259.

68. Ishio S., Chen J.C., Kawasaki J., Ohba N. Cell devision of Gyrodinium sp. and mitotic delay indused by casual substances of algal tumor and carcinogens. Bull. Jap. Soc. Scient. Fisheries, 1977, 4£, 507-516.

69. IARC Monographs on the Evaluation of the carcinogenic Risk of chemicals to Human, October 1982.

70. J. Jagomatt D.R., D'addario A.P., Brusick D.J. Mutagenic activity of I-fluoro-2,4-dinitrobenzene in the Ames test. Mut. Res.,1980, I-,91-95.

71. Knutzen J., Sortland B. Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in some algal and invertebrates from moderately polluted parts of the coust of Norway. Water res., 1982, 16, 421-428.

72. Kier I.D., Iamasaki E., Ames B.N. Detection of mutagenic activity in cigarette smoke condesates. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1974, 21, 4159-4163.

73. Krone A., Cheryl, Nayne T. Iwaoka. Mutagen formation during the cooking of fish. Cancer. Lett., 1981, 14, 93-99.

74. King Leon C., Mike J. Kohan, Ann C. Austin, Larry D. Cloxton, J. Lewtas Huising. Evaluation of the release of mutagens form diesel particles in the presents of phisiological fluids. -Environm. Mutagenesis., 1981, ^ 2, I09-I2I.

75. Kinoshita Takeshi, Santella R., Pulkrabek P., Jeffery A.M. Benzene oxide, genetic toxicity. Mutat. Res., 1981, 9I«2« 99-Ю2.

76. Kada T., Sadoie J., Hara M. Analysis of mutagen-antimutagen reactions in food and food additives by the rec-assay and reversion-assay procedures. Mut .Res., 1978, 206-207.i

77. Kaplan R.W. Probleme der Prflfung von Pharmakazusatzstof f e, u.a. auf ihre nrutationslflsende Wirkung. Naturwis senschaft en, 1962, 42, 457-462.

78. Kondo S. Evidence that mutagens are indused by errors in repaier Genetics, 1973, 22, 109-122.

79. Levin D.E. , Blunt E.L., Levin R.E. Modified fluctation test for the direct detection of mutagens in food with Salmonella typhi-rnurium ТА 98. Mut. Rs., 1981,25, 309-321.

80. Lavoie E., Tulley L., Fow E., Hoffman D. Mutagenicity of amino-phenyl and nitrophenyl ethers, sulfides and disulfides. Mut. Res., 1979, 62, I23-I3I.

81. Liberman D.F., Schoefer R.C., Frederick L., Mulcahy J., Stark Avishay-Abraham. Mutagenicity of anthraquinone and hydrooxyla-ted anthraquinones in the -Ames Salmonella/microsome system. -Appl. and Environm. Microbiol., 1982, 42, 6, 1354-1359.

82. Lambotte-Vanderpaer M., Duverger van Bogaert M., de Meester F.Poucelat, Mercier. Mutagenicity of urine from rats and mise treated with acrilonitrile. Toxicology, 1980, 16, 67-71»'

83. Levan A., Tjio J.H. Induction of chromosome fragmentation by phenols. Heriditas, 1978, j>4> 453~484.:

84. Meester de C., Poncelet P., Eoberfroid M., Mercier M. Mutagenicity of acrilonitrite. Toxicology, 1978, II, 19-27."

85. Meester de C., Bodarent M., Duverger- van, Depaer, bambotte-van, Roberfroid M., Poncellent P., Mercier M. Mutagenicity of venyl chloride in Ames test. Possible artifacts related with experimental conditions. Mut. Res., 1980, 21* Г/5-179*

86. Meester de C., Poncelet F., Roberfroid M., Mercier M., Impact of microsomal enzymes on the mutagenicity of acrilonitrile, butadiene and styrene. Mut. Res., 1979, 64, 2, IJ2.

87. Mitchell I. de G-. Microbiol assay for mutagenicity: a modified loquid culture method compared with the agar plate. Mut. Res., 1978, 54, I-I6.

88. Mitchell D., Waters, Vincent F. Simmon, Ann D. Mitchell, Ted A. Jorganson and Ruby Valencia. An over view of short-term tests for the mutagenic and carcinogenic potential of pesticides. -J. Environm. Sci. Health., 1980, В 15 (6), 867-906.

89. Mailing H.V. Dimethylnitro s amine: Formation of mutagenic compound by interaction with mouse liver microsomes. Mut.Res.,1971, 13, 425-429.

90. Mailing H.V. Dimethylnitrosamine: Formation of mutagenic compounds by interaction with mouse liver microsomes. Mut. Res., 1975, 51, 3^7-364.

91. Mailing H.V. Mutagenic activation of ADMN and DEN in host-mediated assay and the microsomal system. Mut. Res., 1974, 26,465.

92. Moller M., Alfheim J. Mutagenicity and РАН-analysis of airborne particulate matter. Atmos. Environm., 1980, 14, I, 8388.

93. Milvy P., Kingley K. Mutagenicity of S9 major arts and printing days. J. Toxicol, and Environmental Health, 1978, 4, I. 31-36.

94. Milvy P., Wolff M. Mutagenic studies with acrylonitrile. -Mut.Res., 1977, 48, 271-278.

95. Milvy P. Letter to the Editor. Mut.Res., I97S,57, II0-II2.'

96. Mori I., Niwa Т., Hori Т., Joyoshi K. Mutagenicity of 3*-methyl-N,N-dimethyl-4-aminoazobenzene metabolites and related compounds.' Carcinogenesis, 1980, 1,121-127.

97. Nean S.H., Hoebermen B.H., Frantz S.W., Seinsheimer J.E. Sub-stituent effects of the mutagenicity of phenyl glycidyl ethers in Salmonella typhimurium. Mut. Res., 1982, 297-304.

98. Nagao M.M., Honda Y., Seino Yohadi, Sugimura T. Mutagenesis of smoke condesates and the Charred surface of fish and meat. -Cancer Lett., 1977, 2, 221-226.

99. Nobutake Kanematsu, Нага Masaka, Kada Tsuma. Rec-assay and mutagenicity studies on metal compounds. Mut. Res., 1980, ZZ, 2, I09-II6.

100. Nesman E.R., Otson R., William D.T. , Kowbel D.J.1 Mutagenicity of point removes counting dichloromethane. Cancer Letters, 1981, II, 4, 295-302.

101. Noda Maroto, Toshita Takono, Harumico Sakurai. Mutagenic activity of selenium compounds. Mutat. Res., 1979» 66, 2, 175179.

102. Puchase I.F.H., Londstaff E., Ashby J., Styles J.A., Anderson D.', Lefevxe P.A.-, Westwood F.R. Evaluation of sis: short-term tests for detecting organic chemical carcinogens and recomen-dations for their use. Nature, 1976 , 264 , 624-627.:

103. Purchase J.F.H., Londstaff E., Ashby J., Styles J.A., Anderson D., Lefevre P.A., Westwood F.R. An evaluation of short-term tests for detecting organic chemical carcinogens. Br, J. Cancer, 1978, 3Z, 873-959.

104. Penman Bruce W., Debra A., Kaden Howard L., Liber CD.R., Skopek, William G., Thylly, Ronald A. Perylene is a more potent mutagen than benzo(a)pyrene for Salmonella typhimurium. Mut.Res. , 1980, 73, 3, 271-277.

105. Pitts I.N., Greijean D., Miscke T.M., Simmon V.F., Pool D; Mutagenic activity by airborne particulate organic pollutants. -Toxicol. Lett., 1977, 65-70.

106. Payne J.F., Rahimtula A. Water chlorination as a source of aquatic environmental mutagens. Toxicology of halogenated hydrocarbons: Health and Ecological Effects, Edited by M.A.Q. Khan and Standon R.H., Pergamon Press, N.Y., 1981, 209-221.

107. Parry J., Al-Massawi M.A.J. The detection of mutagenic chemicals in the tissue of the mussel mytilus edulis. Environm. Pollut., 1979, 12, 3, 175-186.

108. Petrilli F.L., De Frora S. Metabolic deactivation of hexava-lent chromium mutagenicity. Mutat. Res., 1978, j?4, 139-147.

109. Rflhrborn Assesment of Mutagenicity tests. Arch. Toxicol., 1980, 4, 3.

110. Ray Verne. Are benzene effects limited to the chromosomal level ? Assoss. Ohem. Mtag. Risk.Hum. Proc. Nat. Lloyd Harbor N.Y., 1978. Cold spring Harbor., 1979, 201-206.

111. Rosenkranz H.S., Poirier L.A. Evaluation of the mutagenicity and DNA-modifying activity of carcinogens and nonearcinogens in microbial system. -J.Natl. Cancer Inst., 1979, 62,873-892.

112. Rosenkranz H.S., McCoy E.C. Aniline and Aniline Hydrochloride (Contract N I-CP-65855), Bethesda, M.D. National Cancer Institute Devision of Cancer Couse and Prevention, 1981, pp.739747, 837-844.

113. Salamone M.F., Heddle J.A., Katz M. The mutagenic activity of thirty polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) and oxides in urban airborne particulates. Environm. Internat., 1979» 2, 37-43*'

114. Sasaki Juko, Rynichi Endo, Yoshoi Koido. Direct mutagens in the gaseous component of automobile exhaust detected with Bacillus substilis spores. Mut. Res., 1980 , 22.1 I8I-I84.

115. Simmon V.F., Kauhanen K., Mortelmous K., Tardiff R. Mutagenic activity of chemicals identified in drinking water. Mut. Res., 1978, 2, 262.

116. Simmon V.F., Kauhanen K., Tardiff R.G. Mutagenic activity of chemicals identified in drinking water, in: D.Scott, B.A. Bridges and E.H. Sobels (Eds). Progress in Genetic Toxicology Elsevier North-Holland, Amsterdam, 1977, 249-286.

117. Summer K.-H., Waltrand G6ggelman. I-chloro-2,4-dinitrobenzene depletes glutatione in rat skin and is mutagenic in Salmonella typhimurium. Mut. Res., 1980, 22» I» 91-95*

118. Simmon V.F. In vitro mutagenicity assay of chemical carcinogens and related compounds with Salmonella typhimurium. J. Cancer- 128 1.st., 1979, 62, 893-899.

119. Shanin Majdi M., Van Barstel R.C. Comparisons of mutation induction in reversion system of saccharomyces cerevisiae and Salmonella typhimurium. Mut. Res., 1978, I, I-IO.

120. Scribner J.D., Sharon R. 3?isk and Norma E. Scribner. Mechanisms of action of carcinogenic aromatic amines on investigation using mutagenesis in bacteria. Chem.-Biol.- Interactions,1979, 26, I, И-25.

121. Stherr G.H., Fishman M., Weaver R. The mutagenicity of some carcinogenic compounds for Escherichia coli. Genetics, 1954, I4I-I49.

122. Slater E.E., M.D.Anderson, Rosenkranz H.S. Rapid detection of mutagens and carcinogens. Cancer. Res., 1971» j5I, 97B-973.

123. Seeres de R.J., Sheby M.D. Recomendations on date production and analysis using the Salmonella/microsome mutagenicity assay. Mut. Res., 1979, 64, 159-165.

124. Tonooka H. Development and applications of Bacillus subtilis test system for mutagens, involving DNA-repair deficiency and suppresible auxotrophic mutants. Mut. Res., 1977, 19-32.

125. Tonooka H. Application of Bacillus substilis spores in the detection of gas mutagens: a case of ethilene oxide. Mut. Res., 1979, 64, 453-435.

126. Tanaka Ken-Ichi, Shogo Marui, Toshico Mii. Mutagenicity of extracts of urine from rats treated with aromatic amines.- 129

127. Mut. Res., 1980, 22» 173-176.1.9« Tindall K.R., Hsie A.W. Mutagenic and cytotoxic effects of liexavalent and trivalent chromium in the CXO/HGRT system. -Environm. Mutagenesis, 1980, 2,2, 293-294.

128. Tindall K.R., Hsie A.W. Mutagenic and cytotoxic effects of hexavalent and trivalent chromium in the CHO/HGPRT system. -Hlth. Ann. Meet. Environm. Mutagen. Soc. Nashvill., Tenn., March 16-19, 1980. Program and Abstr. Bethesda, Md, s.a., II8-II9.

129. Tatum E.L. Induced biochemical mutations in bacteria. Cold spring Harbor Symp. Quant. R. Biol., 1946, II, 278-283.

130. Venturini S., Tamaro M., Monti-Bragadin C., Carlasare P. Mutagenicity in Salmonella typhimurium of same angelicin derivatives proposed as new monofunctional agents for the photochemotherapy of psoriasis. Mut. Res., 1981, 88, I, 17-22.

131. Venturini S., Tamaro M. Mutagenicity of antraquinone and azo dyes in Ames' Salmonella typhimurium test. Mut. Res., 1979, 68, 307-312.

132. Walker G.C. Theory and design of short-term Bacterial tests for mutagenesis. Assess. Chem. Mutag. Risk Hum. Proc. Meet. Lloyd Harbor, 1978, 2; Cold spring Harbor, 1979, 63-80.

133. Ocubo S., T. Jonagida. Isolation of a suppressor mutant in Bacillus subtilis. J. Bacterid., 1968, II7-H8.

134. Whong W.-Z., Sorenson W.G., Elloitt J.A., Stewart J., Simp- 130 son J., Piacitelly L. , McCawley M., Ong T. Mutagenicity of oil-shale ash. Mut. Res., 1982, I, 103, 5-12.

135. Waters M.D., Vincent F. Simmon, Ann D. Mitchell, Ted A. Jorgenson, Ruby Valencia. An overview of short-term tests for the mutagenic and carcinogenic potential of pesticide. -J. Environm. Sci. Hlth., 1980, 1315, 6, 867-906.

136. Wehner F.C., Rensburg S.J., Thiel P.G. Mutagenicity of marijuana and transkei tobacco smoke condensates in the Sal-monella/microsome assay. Mut. Res., 1980, 22.» 135-142.

137. Wung Wai Tso, Wai-Ping Fung. Mutagenicity of metalic cations. Toxicology Lett., 1981, 8, 4-5, 195-200.

138. Witkin E.M. Mutations in Escherichia coli induced by chemical agents. Cold spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1947, 12. 256-264.

139. Zettenberg G. Effects of an antipsoriotic agent, dithranol, on mitochondrial and nuclea functions in yeast cells. -Hereditos., 1977, 86, 191-204.

140. МУТАГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ КРАСИТЕЛЕЙ ПРОИЗВОДНЫХ АНТРАХИНОНА В ТЕСТЕ ЭЙМСА1. МИКРОСОМЫ.п/п, Название ! ТА 1535 ТА 1538 ТА 98 ТА 100

141. Доза j мкг/ч 1 МС+ МС ! МС+ ! МС- МС+ МС MC-f ! МС-y Хо. ! У L Хо. X Хо. j ! у i Хо. » у i Хо. I у i Хо. X Ко. ! v I Хо.

142. К 352,0 22,0 974,0 97,0 754,0 16,5 171,0 2,4

143. К 227,6 25,3 730,0 81,0 764,0 16,4 224,0 4,4

144. К 164,0 16,4 901,0 60,3 693,0 13,4 178,0 3,3