Ионы металлов как метки для определения иммунореагентов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Дыхал, Юлия Ивановна

• Дыхал, Юлия Ивановна
• кандидат химических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат химических наук Дыхал, Юлия Ивановна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

1. КЛАССИФИКАЦИЯ ИММУ НОХИМИ ЧЕСКИХ МЕТОДОВ АНАЛИЗА

1.1. Основные факторы, лежащие в основе классификации методов ИХА

1.1.1 Метки, используемые в иммунохимическом анализе 1.1.2. Способы детекции биоспецифических взаимодействий

1.2. Тенденции развития иммунохимического анализа

2. НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ КАТАЛИТИЧЕСКОГО ВЫДЕЛЕНИЯ ВОДОРОДА И ВОЗМОЖНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЦЕЛЕЙ ИММУНОАНАЛИЗА

2.1. Общая характеристика процессов, связанных с каталитическим выделением водорода

2.2. Механизм каталитического выделения водорода

3. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ, АППАРАТУРА, ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА

3.1. Постановка задачи

3.2. Объекты исследования и приготовление растворов

3.3. Приборы и техника измерений

3.4. Иммобилизация иммунореагентов для проведения иммунохимических определений

3.5. Определение удельной активности рибонуклеазы

3.6. Получение ангидрида ДТПА

3.7. Получение меченного ионом Со(П) антигена РНКазы

3.8. Качественная оценка образования иммунокомплексов

4. ВЫБОР ИНДИКАТОРНОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ РЕГИСТРАЦИИ БИОСПЕЦИФИЧЕСКИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ

4.1. Электрохимическое поведение систем: ион переходного металла-иммунореагент

4.2. Влияние некоторых факторов на процессы электровосстановления ионов Со(П) и №(П) в присутствии белков

4.3. Изучение свойств нитроцеллюлозных мембран с некоторыми модификаторами в присутствии ионов металлов

4.4. Иммунохимическое определение Аг РНКазы

4.5. Использование каталитических волн выделения водорода для оценки биоспецифического взаимодействия в системах [Ат-Аг] РкВ и [Ат-Аг] СагМУ

4.6. Влияние рибонуклеиновой кислоты на рибонуклеазу

4.7. Влияние различных факторов на удельную активность рибонуклеазы

5. КОНКУРЕНТНЫЙ ИММУНОАНАЛИЗ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОНЪЮГАТА, СОДЕРЖАЩЕГО ИОНЫ МЕТАЛЛА

5.1. Получение конъюгата РНКаза-ангидрид ДТПА-Со(П) и определение молярного соотношения компонентов в нем

5.2. Оценка иммунологических свойств конъюгата и образование иммунных комплексов в присутствии и в отсутствие немеченых антигенов

5.3. Отщепление метки и разрушение иммунных комплексов

5.4. Определение антигена рибонуклеазы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ионы металлов как метки для определения иммунореагентов»

Развитие иммунологии послужило основой исследований, сформировавшихся в самостоятельные научные направления и имеющих важное прикладное значение. Одной из таких ветвей иммунологии является иммунохимический анализ (ИХ А), в основу которого положены иммунологические принципы для выявления и количественного определения как высоко-, так и низкомолекулярных соединений.

Интерес к разработке новых вариантов ИХА не ослабевает [1-3]. Достижения современной иммунологии, биотехнологии, с одной стороны, и развитие новых методов регистрации физико-химических процессов, с другой, способствуют внедрению ИХА в различные области жизнедеятельности человека. Иммунохимический анализ имеет широкий спектр применения в фундаментальных биохимических исследованиях, в клинических анализах, медицинской диагностике, в контроле состояния окружающей среды, качества пищевых продуктов.

Иммунологические реакции все чаще используются в настоящее время в практике аналитической химии. Это обусловлено высокой селективностью этих реакций и возможностью с высокой чувствительностью регистрировать степень протекания биоспецифических взаимодействий, что достигается при использовании различных меток. Наиболее часто в качестве меток используют ферментные и флуоресцентные маркеры, при этом детекция метки может осуществляться различными физико-химическими методами. Предпочтительно для регистрации ферментной метки используют спектрофотометрические методы, а для обнаружения флуоресцентной метки - эффект поляризации флуоресценции. В меньшей мере используются способы анализа с электрохимической регистрацией биоспецифических взаимодействий. В последнее время определенное развитие получили электрохимические 6 иммуноферментные сенсоры, основанные на сочетании иммунологических и ферментативных реакций. Применение ферментативных реакций в качестве инструмента, позволяющего оценить степень протекания иммунологических реакций, имеет и свои преимущества, и определенные недостатки. Одним из ограничений иммуноферментного анализа с электрохимическим детектированием является необходимость использования в качестве метки тех фермент-субстратных систем, которые сами по себе или продукты их взаимодействия обладают электрохимической активностью.

При решении конкретных аналитических задач не всегда имеется возможность реализовать эти подходы и возникает необходимость в простых по выполнению способах иммунохимического анализа, не требующих использования дорогостоящих препаратов, к числу которых относятся и очищенные ферменты. Один из путей достижения этой цели -использование для регистрации биоспецифических взаимодействий в качестве меток ионов металлов.

Несмотря на многообразие существующих методов, использованию металлов в качестве меток уделяется мало внимания. Ионы металлов легко детектируются по своей собственной электрохимической активности в достаточно широкой и доступной области потенциалов, а использование каталитических эффектов с их участием может позволить снизить нижний предел определяемых концентраций, сделать анализ более чувствительным и значительно расширить число определяемых биологически активных соединений, включив в их ряды и те, которые сами по себе не обладают электрохимической активностью.

Цель исследования заключалась в разработке новых вариантов иммунохимического анализа с вольтамперометрическим контролем с использованием эффекта каталитического выделения водорода в 7 присутствии ионов переходных металлов в качестве меток для оценки биоспецифических взаимодействий.

Научная новизна и практическая значимость. Показана и обоснована возможность использования ионов Со(П) и N1(11) в качестве меток для иммунохимического анализа некоторых антигенов. Разработаны новые варианты иммунохимического анализа, отличающиеся по способу введения метки в один из компонентов биоспецифического взаимодействия. Для оценки степени протекания иммунных реакций использована способность комплексов некоторых белков в присутствии ионов Со(П) и №(П) вызывать каталитическое выделение водорода. Определено влияние различных факторов (рН и природы буферных растворов, буферной емкости, концентрации иммунореагентов, ионов металла) на величину аналитического сигнала.

Получены нитроцеллюлозные мембраны с иммобилизованными антителами (Ат) против панкреатической рибонуклеазы быка.

Показана возможность получения конъюгата, включающего исследуемый антиген, бифункциональный хелатобразующий реагент и металлическую метку. Найдены условия функционирования систем на основе иммобилизованных Ат и конъюгата антигена (Аг) с металлической меткой, позволяющие регистрировать каталитическую волну выделения водорода.

Предложены новые варианты иммунохимических определений с аналитическими характеристиками, отвечающими требованиям иммуноанализа. Обоснованы подходы, позволяющие предложить разработанные методики для определения рибонуклеазы в биологических жидкостях и вируса крапчатости гвоздики в растительных экстрактах на уровне наномолей. Разработанные способы анализа основаны на использовании доступных реагентов в качестве метки (ионы металлов) и 8 более просты в исполнении по сравнению с используемыми в настоящее время видами иммуноанализа.

На защиту выносятся

- обоснование выбора индикаторной системы иммунореагент - ион металла (для разработки новых вариантов иммунохимического анализа);

- интерпретация данных об электровосстановлении ионов металлов в присутствии изучаемых антител или антигенов и факторы, определяющие величину аналитического сигнала (рН и природа буферных растворов, буферная емкость, концентрации иммунореагентов и ионов металла);

- совокупность стадий предлагаемых вариантов иммунохимического анализа;

- характеристики конъюгата, включающего исследуемый антиген, бифункциональный хелатобразующий реагент и металлическую метку;

- условия функционирования систем на основе Ат, иммобилизованных в нитроцеллюлозные мембраны, антигенов или конъюгатов, включающих антиген и металлическую метку;

- новые методики иммунохимического определения рибонуклеазы.

Работа по теме диссертации выполнялась в соответствии с координационном планом РАН по направлению 2.20.1 (разделы 2.20.2.1 и 2.20.4.7) и при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проекты № 97-03-33232 и №00-03-32389). Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на П-ой Всероссийской конференции молодых ученых "Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Саратов, 1999г.), ЬХХХ Поволжской региональной конференции "Физико-химические методы в координационной и аналитической химии" (Казань, 1999г.), 5-ой Всероссийской конференции "Электрохимические методы анализа" 9

Москва, 1999г.), 8-ой Международной конференции по электроанализу (Бонн, 2000г.), Всероссийской конференции "Химический анализ веществ и материалов" (Москва, 2000г.), Всероссийской конференции с международным участием "Сенсор 2000. Сенсоры и микросистемы" (Санкт-Петербург, 2000г.)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ. Из них 1 статья и 6 тезисов докладов на всероссийских и международных конференциях, одна статья принята к печати.

Структура и объем работы Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста, содержит 6 таблиц и 14 рисунков. Работа состоит из введения, пяти глав, выводов и списка литературы, включающего 140 наименований.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Дыхал, Юлия Ивановна

ВЫВОДЫ

1. Предложены новые варианты иммунохимического анализа некоторых антигенов. Обоснован выбор индикаторных систем иммунореагент - ион переходного металла - буферный раствор, позволяющих регистрировать каталитические токи выделения водорода.

2. Каталитический эффект наблюдается в присутствии в растворах ионов Со(П) и М(П) антигенов РНКазы, СагМУ и РИВ на фоне аммиачного буфера с рН 9.5-10.0 и трис-НС1 буфера с рН 7.2-7.8. Каталитическое выделение водорода обнаружено также в растворе ионов Со(П) в присутствии нативных Ат против РИВ в области концентраций от 5x10" до 5x10"'1 мг/мл. Максимальный каталитический эффект наблюдается в среде трис-НС1 буфера с рН 7.5 и (3=0.2 при концентрации ионов Со(П) 5х 10"4 М в присутствии РНКазы и РИВ, а так же в аммиачном буфере с рН 9.5 и (3=0.5 в присутствии СагМУ.

3. Разработан способ иммобилизации антител против РНКазы путем включения в пленку из нитроцеллюлозы, позволяющий сохранить их способность к иммунохимическим взаимодействиям в течение месяца.

4. Предложен вариант иммунохимического анализа для определения РНКазы с использованием ионов Со(П) в качестве метки. Наибольшая чувствительность анализа реализуется при введении металлической метки на стадии регистрации аналитического сигнала, что позволяет определять

О с

РНКазу в области концентраций 2х10~~-2х10" мг/мл; СагМУ в интервале 0.5-2.0 мг/мл и РИВ в диапазоне 0.01-0.06 мг/мл.

5. Разработан конкурентный вариант ИХА, основанный на использовании специально полученного конъюгата состава РНКаза- -ангидрид ДТПА-ион Со(П). Максимальное соотношение ионы Со(П): белок составило 6:1.

101

При этом модифицированный Аг сохраняет свои иммунологические свойства.

6. Наиболее полное отщепление металлической метки (85-90%) от конъюгата достигается при использовании 1М НС1 или глицин-НС1 буферного раствора с рН 2.2, при этом РНКаза сохраняет способность участвовать в реакции каталитического выделения водорода.

7. Найдены рабочие условия проведения конкурентного иммуноанализа РНКазы, позволяющие регистрировать металлическую метку на заключительной стадии анализа. Предложена методика определения Аг РНКазы в области концентраций 2x10" - 2x10" мг/мл.

102

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Дыхал, Юлия Ивановна, 2000 год

1. Новые методы иммуноанализа/Под ред. У.П. Коллинза. - М.: Мир, 1991. -280 с.

2. Теория и практика иммуноферментного анализа/А.М. Егоров, А.П. Осипов, В.Б. Дзантиев и др. М.: Высш. Шк., 1991. - 288 с.

3. Morgan C.L., Newman D.J., Price С.P. Immunosensors: technology and opportunities in laboratory medicine//Clin.Chem. 1996. - V.42, №2. - P. 193209

4. Katoh S., Miura T. Sandwich-type immunoassay with an affinity column coupled to anti-peptide antibodies//J. of Chromatog. -1999. V.852, №1. -P.97-104

5. Application of hemin as a labeling reagent in mimetic enzyme immunoassay for hepatitis surface antigen/Q.Z. Zhu, X.Y.Zheng, J.G. Xu e.a.//Anal.Lett.1998. V.31, №6. - P.963-971

6. An enzymatic amplification cycle for high sensitive immunoassay/F.F. Bier, E. Ehrentreichforster, A. Makower e.a.//Anal.Chim.Acta. 1996. - V.328, №1. - P.27-32

7. Шманай B.B., Найденов В.Э. Экспресс-определение иммуноглобулина G человека твердофазным иммуноферментным методом//Журн.аналит.химии. 1999. - Т.54, № 6. - С.659-665

8. Fernandezsanchez С., Costagarcia A. Competitive enzyme immunosensor developed on a renewable carbon paste electrode support//Anal.Chim.Acta.1999. V.402, №1-2. - P.l 19-127

9. A general method to perform a noncompetitive immunoassay for small molecules/G. Giraudi, L. Anfossi, I. Rosso, C. Bagiani, C. Giovannoli, C. Tozzi//Anal.Chem. 1999. - V.71, №20. - P.4697-4700103

10. Zhang S.S., Jiao К., Chen H.Y., Wang M.X. Detection of ferritin in human serum with m-aminophenol H202 - horseradish peroxidase voltammetric enzyme-linked immunoassay system//Talanta. - 1999. - V.50, №1. - P. 95-101

11. Simultaneous homogeneous immunoassay of phenytoin and phenobarbital using a Nafion-loaded carbon paste electrode and two redox cationic labels/A.L. Bordes, B. Limoges, P. Brossier e.a.//Anal.Chim.Acta. 1997. -V.356, №2-3.-P.l95-203

12. Determination of fenoterol and ractopamin in urine by enzyme immunoassay/W. Haasnat, P. Stouten, A. Lomnen e.a.//Analyst. 1994. -V.l 19, №12. - P.2675-2680

13. Иммобилизованные ферменты/И.В. Березин, H.JI. Клячко, А.В. Левашов, К. Мартинек и др.//Сер. Биотехнология.-М.: Высш. Шк., 1987. -Т.7. 159с.

14. Годжевъргова Ц., Барева Р. Иммобилизация иммуноглобулина G на модифицированной полиамидной мембране //Год.Висш.хим.технол.инст., Бургас. 1992. - Т.27. - С.31-36.

15. Тарун Е.И., Савенкова М.И., Метелица Д.И. Определение строфантина К иммуноферментным методом с использованием антител, иммобилизованных на активированных полистирольных шариках//Журн.аналит.химии. -1993.-Т.48, № 1. С. 145-150

16. Fung Y.S., Si S.H., Zhu D.R. Piezoelectric crystal for sensing bacteria by immobilizing antibodies on divinylsulphone activated poly-m-aminophenol film//Talanta. 2000. - V.51, №1. - P.l51-158

17. Zen J.M., Yu T.Y., Shih Y. Determination of teophylline in tea and drug formulation using a Nafion (R)/ lead-ruthenium oxide pyrochlore chemically modified electrode//Talanta. 1999. - V.50, №3. - P.635-640104

18. Direct on-filter immunoassay of some beta-lactam antibiotics for rapid analysis of drug captured from the workplace atmosphere/F.G. Rowel, F. Miaoz, R.N. Reeves e.a.//Analyst. 1997. - V.122, №12. - P. 1505-1508

19. Enzyme immunoassay for the detection of isoxazolyl penicilin antibiotics in milk/E. Usleber, M. Lorber, M. Straka e.a.//Analyst. 1994. -V.119, №12. -P.2765-2768

20. Immunochemical detection of antibiotics and sulfonamides/E. Martlbauer, E. Usleber, E. Schneider e.a.//Analyst. 1994. - V.l 19, №12. -P.243-2548

21. Арефьев А.А., Осипов А.П. Проточно-инжекционный твердофазный иммуноферментный анализ биологически активных соединений//Итоги науки и техники, сер. Биотехнология. М.: ВИНИТИ, 1990. - Т.24. - С.4-83

22. Highly sensitive flow-injection immunoassay system for rapid detection of bacteria/I. Abdelhamid, D. Ivnitski, P. Atanasov, E. Wilkins.//Anal.Chim.Acta. 1999. -V.399, №1-2. - P.99-108

23. Ghous Т., Townshend A. Flow-injection method for the determination of tiroxine by inhibition of glutamat dehydrogenase//Anal.Chim.Acta. 2000. -V.411. - P.45-49

24. Automated stande-alone flow injection immunoanalysis system for the determination of cephalexin in milk/U.J. Meyer, Z.L. Zhi, E. Loomans e.a.//Analyst. 1999. - V. 124, № 11. - P. 1605-1610

25. Watanabe H., Satake A., Kido Y., Tsuji A. Production of monoclonal antibodies and development of ELISA for kanamicin in biological matrices//Analyst. 1999. - V. 124, №11. - P. 1611-1615105

26. Syntheses of novel hapten-protein conjgates for production of highly specific antibodies to formononetin, daidzein and genistein/C. Lehouerou, C. Bennetaupelissero, V. Lamothe e.a.//Tetragedron. 2000. - V.56, №2. - P.295-301

27. Multiple-analyte fluoroimmunoassay using an integrated optical waveguide sensor/T.E. Plowman, J.D. Durstchi, H.K. Wang e.a.//Anal.Chem. 1999. -V.71, №19. - P.4344-4352

28. Ткачева Г.А., Балаболкин И.П., Ларичева М.И. Радиоиммунологические методы исследования. М: Медицина, 1983. -192с

29. Gow S.M., Caldwell G., Toft A.D., Beckett G.J. SimuTRAC™ Simultaneous Radioimmunoassay of Thyrotropin and Free Thyroxin Evaluated//Clin.Chem. 1986. - V.32, №12. - P.2191-2194

30. Gutcho S., Mansbach L. Simultaneous Radioassay of Serum Vitamin Bi2 and Folic Acid.//Clin.Chem. 1977. - V.23, №9. - P. 1609-1614

31. Khaw B.A., Fallon J.T., Strauss H.W., Haber E. Myocardial Infarct Imaging of Antibodies to Canine Cardias Myosin with Indium-lll-Diethylenetriamine Pentaacetic Acid.//Science. 1980. - V.209, №11. - P.295-297

32. Radioactive Labeling of Antibody: A Simple and Efficient Method/D.J. Hnatowich, W.W. Layne, R.L. Childs, D. Lanteigne, M.A. Davis//Science. -1980. V.209, №11. - P.

33. Кашкин А.П. Иммуноферментный анализ биологически активных веществ. М.: Медицинская промышленность, 1985. - 43с.106

34. Иммуноферментный анализ/Под ред. Т.Т. Нго, Г. Ленхоффа. М.: Мир, 1988. - 446с.

35. Егоров A.M. Современный иммунохимический анализ и перспективы его развития//Журн.Всесоюз.хим.общества. 1988. - Т.ЗЗ, №5. - С.494-501

36. Иммунологические методы исследований/Под ред. И. Лефковитса, Б. Перниса. М.: Мир, 1988. 530 с.

37. Твердофазный иммуноферментный анализ//Сборник научных трудов.- Л.: Изд. Института им. Пастера, 1988. 160с.

38. Immunoelectrochemical assay in combination with homogeneous enzyme-labeled antibody conjugation for rapid detection of Salmonella/Y. Zhongrin, L. Yanbin, Ch. Bahgtas, M. Slavik, D. Paul//Electroanalysis. 1998. - V. 10, №13.- P.913

39. Kokado A., Arakawa H., Maeda M. New electrochemical assay of alkaline phosphatase using ascorbic acid 2-phosphate and its application to enzyme immunoassay//Analyt.Chim.Acta. 2000. - V.407, №1-2. - P.l 19-125

40. Enzyme-linked immunosorbent assay for 2-deoxycytidine/I. Darwish, S. Emara, H. Askal, N. Elrabbat e.a.//Anal.Chim.Acta. 2000. - V.404, №2. -P. 179-186

41. Wijayawardhana C.A., Halsall H.B., Heineman R. Micro volume rotating disk electrode amperometric detection for a bead-based immunoassay//Anal.Chim.Acta. 1999. - V.399, №1-2. - P.3-11

42. Kreuzer M.P., Osullivan C.K., Guilbault G.G. Development of an ultrasensitive immunoassay for rapid measurement of okadaic acid and its isomers//Anal.Chem. 1999. - V.71, №19. - P.4198-4202

43. O-aminophenol H202 - horseradish peroxidase voltammetric enzyme-linked immunoassay for trace ferritin in human serum/S.S. Zang, K. Jiao, H.Y. Chen e.a.//Acta Chim.Sinica. - 1999. - V.57, №8. - P.914-921

44. Zang S.S., Jiao K., Chen H.Y. Voltammetric enzyme-linked immunoassay for trace a-fetoprotein in human serum using o-, m- and p-aminophenol as substrate//Anal.Lett. 1999. - V.32, №9. - P. 1761-1773

45. Савицкий А.П. Флуоресцентный иммуноанализ//Итоги науки и техники, сер. Биотехнология. М.: ВИНИТИ, 1987. Т.З. - С.117-166

46. Барбан П.С., Пшеничнов Р.А., Пантюхина А.Н., Ившина И.Б. Иммунофлуоресцентный анализ. Свердловск: УрО АН СССР, 1988. С.6

47. Гаврилова Е.М. Люминесцентный иммуноанализ//Итоги науки и техники, сер. Биотехнология. М.: ВИНИТИ, 1987. Т.З. - С.6 -55

48. Kricka L.J. Chemiluminescent detection of enzyme labels : clinikal applications// Pittsburgh Conf. presents PITTCON '95, New Orleans, La, March 5-10, 1995: Book Abstr. P.l 1

49. Marguette C.A., Coulet P.R., Blum L.J. Semi-automated membrane based chemiluminescent immunoassay for flow-injection analysis of ocadaik acid in mussels//Anal.Chem.Acta. 1999. - V.398, № 2-3 - P. 173-182

50. Dreveny D., Klammer C., Michalowsky J., Gubitz G. Flow-injection and sequential-injection immunoassay for triiodothyronine using acridinium ester chemiluminescence detection//Anal.Chim.Acta. 1999. - V.398, №2-3. -P.183-190

51. Ashimona I., Rokugawa K. High sensitive microcapsule immunoassay for protein antigen or antibody//Anal.Chim.Acta. 1993. - V.248, №1. - P.227-234108

52. Immunoassay using chemiluminescence detection of dyestuff-containing liposomes as a labeling reagent/K. Tsukagoshi, H. Akasaka, Y. Okumura, R. Fukaya e.a.//Anal.Sciences. 2000. - V. 16, №2. - P. 121 -124

53. Thermally reversible hydrogel based fluoroimmunoassay of methyltestosterone/J. Gao, Y.Z. Li, Z.Q. Guo, W.B. Chang, Y.X. Ci//Anal.Lett. 1999. - V.32, №9. - P. 1787-1798

54. Mounsly A., Strachan D., Rowell V., Tison F.D. Direct determination of some phenothiazine seditives in greyhound urine by fluoroimmunoassay//Analyst. 1996. - V.121, №7. - P.955-958

55. Gutierrez M.C., Gomer-Hens A., Perer-Bendito D. Immunoassay methods based on fluorescence polarization//Talanta. 1998. - V.36, № 12 - P. 11871201

56. Development of a for sulfamethazine using an automated analyser// S.A. Eremin, J. Landon, D.S. Smith e.a.//Analyst. 1994. - V.119, №12 - P.2723-2726

57. Gooch J.C., Gallacher G., Machmood S.A. Detection of phencyclidine in urine using polarization fluoroimmunoassay//Analyst. 1994. - V.119, №8 -P.1797-1800

58. Harma H., Aronkyto P., Lovgren T. Multiplex immunoassays on size-categorized individual beads using time-resolved fluorescence//Anal.Chim.Acta. 2000. - V.410. - P.85-96

59. Vuori S., Rasi T., Takala K. Vaananen.Dual-Label. Time-Resolved Fluoroimmunoassay for simultaneous Detection of Myoglobin and Carbonic Anhydrase HI in Serum//Clin.Chem. 1991. - V.37, №12. - P.2087-2092

60. Hemmila L., Hoittinen S., Pettersson K., Lovgren T. Double-Label Time-Resolved Immunofluorometry of Lutropin and Follitropin in Serum//Clin.Chem. 1987. - V.33, №12. - P.2281-2283109

61. Heineman W.R., Anderson C.W., Halsall H.B. Immunoassay by differential pulse polarografy//Seience.- 1979. -Y.204. P.865-866

62. Wehmeyer K.R., Halsall H.B., Heineman W.R. Electrochemical Investigation of Hapten-Antibody Interaction by Differential Pulse Polarography//Clin.Chem. 1982. - V.28. - P. 1968-1972

63. Hile H.A.O. Assay techniques utilising specific binding agents. European Patent Application № 84303090.9. 1984

64. Robinson G.A., Martinazzo G., Forrest G.C. A homogeneous bioelectrochemical immunoassay for thyroxine//.!. Immunoassay. 1986. - V.7. -P.1-15

65. Heineman W.R., Halsall H.B. Strategies for electrochemical immunoassay//Anal.Chem. 1985. - V.57, №12. - P.1321A-1331A

66. A new application of bioorganometallics: the first simultaneous triple assay by the carbonylmetalloimmunoassay method/M. Salmain, A. Vessieres, A.varenne, P. Brossier, G. Jaouen//J. of Organometallic Chem. 1999. - V.589, №1. - P.92-97

67. Alam I.A., Christian G.D. Voltammetric Immunoassay of Human Albumin and Goat Antiserum to Human Albumin by Nickel Labeling//Frez.Z.Anal.Chem. 1985. - V.320. - P.281-284

68. Alam I.A., Christian G.D. Voltammetric Immunoassay of Human Albumin and Goat Antiserum to Human Albumin by Cobalt Labeling//Frez.Z.Anal.Chem. 1984. - V.318. - P.33-36но

69. Alam I.A., Christian G.D. Voltammetric Detection of Lead Labelled Albumin and of Albumin Antiserum by Immunoassay//Anal.Lett. 1982. -V.15(B18). - P.1449-1456

70. Doyle M.J., Halsall H.B., Heineman W.R. Heterogeneous immunoassay for serum proteins by pulse anodic stripping voltammetry//Anal.Chem. 1982. -V.54. -P.2318-2322

71. Hayes F.J., Halsall H.B., Heineman W.R. Simultaneous Immunoassay using electrochemical detection of metal ion labels//Anal.Chem. 1994. - V.66. - P.1860-1865

72. Дячина M.H., Титова О.JI., Яковлева Л.В.//Тез. докл. Всерос. конф. "Химический анализ веществ и материалов". Москва, 2000. С.116

73. Биосенсоры: основы и приложения/Под ред. Э. Тернера, И. Краубе, Дж. Уилсона. М.: Мир, 1992. - 616с.:

74. Dual immunoassay of human horionic gonadotropin and human placental lactogen at a microfabricated substrate by scanniny electrochemical microscopy/H. Shiku, Y. Нага, T. Matsue e.a.//J.Electroanal.Chem. 1997. -V.438, №1-2. - P.187-190

75. Immunoelectrochemical assay in combination with homogeneous enzyme-labeled antibody conjugation for rapid detection of Salmonella/Z.P. Yang, Y.B. Li, C. Balagatas e.a.//Electroanalysis. 1998. - V. 10, №13. - P.913-916

76. Xu J.Q., Song J.F., Guo W. Polarografic enzyme immunoassay for trace hepatitis В surface antigen//Anal .Lett. 1996. - V.29, №4. - P.565-573

77. Beta-lactamase label-based potentiometric biosensor for a-2 interferon detection/T.A. Sergeyeva, A.P. Soldatkin, A.E. Rachkov, M.I. Tereschenko e.a.//Anal.Chim.Acta. 1999. - У.390, №1-3. - P.73-81

78. Capillary enzyme immunoassay with electrochemical detection for determining indol-3-acetic acid in tomato embryos/H.Y. Gao, T.B. Jiang, W.R.1.l

79. Heineman, H.B. Halsall, J.L. Caruso//Frez.J.Anal.Chem. 1999. - V.364, №12. - P.170-174

80. Амперометрический иммуноферментный электрод на основе иммобилизованной холинэстеразы/Э.П. Медянцева, С.С Бабкина, Г.К. Будников, И.Л. Федорова, И.Н. Ибрагимова //Журн.аналит.химии. 1992. - Т.47, № 6. - С.1101-1106

81. Определение антигена Candida Albicans с помощью амперометрического иммуноферментного сенсора/М.П. Кутырева, Э.П. Медянцева, Е.В. Халдеева, Г.К. Будников, Н.И. Глушко //Вопросы медицинской химии. 1998. - Т.44, №2. - С. 172-178

82. Определение антигена Phytophtora infestans с помощью амперометрического иммуноферментного сенсора/Э.П. Медянцева, М.П. Кутырева, Е.В. Халдеева, Н.И. Глушко, Г.К. Будников //Журн.аналит.химии. 1999. - Т.54. № 12. - С.1294-1299

83. Бабкина С.С., Винтер В.Г., Зайнуллина А.С. Иммуноферментный метод определения органических соединений со спектрофотометрической индикацией аналитического сигнала//Журн.аналит.химии. 1994. - Т.49, №9. - С.1119-1123

84. Label of a-fetoprotein antibody and electrochemiluminescence immunoassay/H.S. Zhuang, Q.E. Wang, G.N. Chen, J.L. Huang, P.C. Lin//Chem.J.Chinese Univers. 1999. - V.20, №8. - P. 1194-1199

85. Arai K., Takahashi K., Kusu F. An electrochemiluminescence flow throught-cell and its applications to sensitive immunoassay using N-(Aminobutyl)-N-ethylisoluminol//Anal.Chem. 1999. - V.71, №11. - P.2237-2240

86. Ohkuma H., Abe K., Kosaka Y., Maeda M. Simultaneous assay of pepsinogen I and pepsinogen II in serum by bioluminescent enzyme112immunoassay using two kinds of Luciola lateralis luciferase//Anal.Chim.Acta. -1999. V.395, №3. - P.265-272

87. Lam M.T., Wan Q.H., Boulet C.A., Le X.C. Competitive immunoassay for staphylococcal enterotoxin A using capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection//J.of Chromatography. 1999. - V. 853, №1-2. - P.545-553

88. Roederer J.E., Bastiaans G.J. Microgravimetric immunoassay with piezoelectric crystals//Anal.Chem. 1983. - V.55. - P.2333-2336

89. Curi C.R., Raje M., Mishra G.C. Determination of immunoglobulin M concentration by piezoelectric crystal immunobiosensor coated with protamine//Biosens.Bioelectron. 1994. - V.9. - P.325-332

90. Piezoelectric crystal immunosensor for sensitive detection of methamphetamine (stimulant drug) in human urine/N. Miura, H. Higobashi, G. Sakai, A. Takeyashu, T. Uda, N. Yamazoe//Sensors.Actuators.B.Chem. 1993. - V.13. - P.188-191

91. Gizeli E., Goddard N.J., Lowe C.R., Stevenson A.C. A love plate biosensor utilizing a polymer layer//Sensors.Actuators.B.Chem. 1992. - V.6. - P. 131137

92. A silicon based ultrasonic immunoassay for detection of breast cancer antigens/A.W. Wang, R. Kiwan, R.M. White e.a.//Sensors and Actuators B-Chemical. 1998. - V.49, №1-2. - P. 13-21

93. Choi M.J., Kim S.Y., Choi J., Paeng I.R. Labeling digoxin antibody with colloidal gold and ferrocene for its use in a membrane immunostrip and immunosensor//Microchemical J. V.63, №1. - 1999. - P.92-99

94. Heiss C., Weller M.G., Neiessner R. Dip-and-read test strips for the determination of trinitrotoluene in drinking water//Anal.Chim.Acta. 1999. -V.396, №2-3. - P.309-316113

95. Scladal P. Advances in electrochemical immunosensors //Electroanalysis. 1997. - V.9, №10. - P.737-745

96. Ивницкий Д.М., Курочкин И.Н., Варфоломеев С. Д. Электрохимические биосенсоры//Журн.аналит.химии. 1991. - Т.46, №8. -С.1462-1479

97. Sadik О.A., Van Emon J. М. Applications of electrochemical immunosensors to environmental monitoring//Biosens.Bioelectron. 1996. -V.l 1, №8. - P. 1-10

98. O'Sullivan C.K., Vaughan R., Guilbault G.G. Piezoelectric immunosensors theory and applications//Anal.Lett. - 1999. - V.32. - 1999. -P.2353-2377

99. Иванов И.Д. Полярография белков, энзимов и аминокислот. М.: Изд-во Академии наук СССР, 1961. - 255с.

100. Кузнецов Б. А., Шумакович Г.П. Полярографический анализ микроколичеств белков//В сб. "Методы современной биохимии". М.: Наука. 1975. - с. 160-163

101. Полярография. Проблемы и перспективы/Под ред. Я.\ I. Страдыня и С.Г. Майрановского. Рига: Зинатне, 1977. 416 с.

102. Прохорова Г.В., Виноградова Е.Н., Пронина И.В. О каталитическом выделении водорода в присутствии комплексов кобальта с диоксимами//Журн.аналит.химии. 1970. - Т.25. - С.2073

103. Езерская Н.А., Киселева И.Н., Казакевич И.Л. Каталитические токи водорода в растворах комплексов родия (III) с органическими лигандами, содержащими различные функциональные группы//Журн.аналит.химии. -1984. Т.39, №4. - С.654-658

104. Прохорова Г.В., Виноградова Е.Н., Гребнева И.С., Скобелкина Е.В. Экстракционно-полярографическое определение микрограммовых количеств никеля//Журн.аналит.химии. 1973. - Т.28, №1. - С. 123-126114

105. Улахович H.A., Медянцева Э.П., Фролова В.П., Романова О.Н. Использование каталитических токов водорода комплексных соединений металлов с серосодержащими лигандами в экстракционной вольтамперометрии//Журн.аналит.химии. 1983. - Т.38, №11. - С.1963-1968

106. Каталитические токи водорода в растворах комплексных соединений кобальта с этилксантогенатом/ В.Ф. Торопова, Г.К. Будников, H.A. Улахович, Э.П. Медянцева, В.П. Фролова//Журн.общей химии. 1978. -Т.48, №2. - С.420-423

107. Toropova Y.F., Budnikov Н.С., Ulahovich N.A., Medyantseva E.P. Catalytic evolution of hydrogen on a mercury electrode in cyclic voltammetry and its analytical apphcatiorV/J.Electroanal.Chem. 1983. - V.144, №1. - P.l-10

108. Гейровский Я., Кута Я. Основы полярографии. М.: Мир, 1965. -559с

109. Торопова В.Ф., Анисимова JI.A., Ибрагимов Д.А., Павличенко JI.A. Исследование каталитической волны водорода в растворах комплексных соединений кобальта с тиогликолевой кислотой//Журн.общей химии. -1968. Т.38, №6. - С.1360-1365

110. Торопова В.Ф., Будников Г.К., Медянцева Э.П., Фролова В.П. Изучение каталитических токов водорода в растворах 2-меркаптобензтиазола в присутствии ионов Со(П)//Журн.общей химии. -1977. Т.47, №1. - С. 154-156

111. Торопова В.Ф., Будников Т.К., Улахович H.A. Изучение механизма каталитического выделения водорода в растворах комплексных соединений кобальта с производными дитиокарбаминовой кислоты//Журн.общей химии. 1976. - Т.46, №3. - С.638-645115

112. Езерская Н.А., Киселева И.Н. Каталитические полярографические токи в растворах комплексов платиновых металлов и их применение для определения микроконцентраций этих элементов//Журн.аналит.химии. -1984. т.39, №9. - С.1541-1549

113. Езерская Н.А., Киселева И.Н. Каталитические токи водорода в буферных растворах комплексов родия с тиосемикарбазидом и их использование для полярографического определения микрограммовых количеств родия//Журн.аналит.химии. 1973. - Т.23, №2. - С.316-322

114. Езерская Н.А., Казакевич И.А., Прохорова F.B., Щубочкин J1.K. Каталитические токи ионов водорода в присутствии комплексов с а-фурилмонооксимом и их применение для определения иридия//Журн.аналит.химии. 1981. - Т.36, №3. - С.523-529

115. Торопова В.Ф., Елизарова Г.Л. Полярографические каталитические токи водорода в растворах комплексных соединений некоторых металлов//Журн.аналит.химии. 1963. - Т. 18, №1. - С.4-8

116. Будников Т.К., Медянцева Э.П., Фролова В.П., Торопова В.Ф. Каталитические токи водорода в растворах комплексных соединений некоторых переходных металлов с 8-меркаптохинолином//Журн.общей химии. 1975. - Т.45, №11. - С.2361-2364

117. Майрановский С.Г. Каталитические и кинетические волны в полярографии. М.: Наука, 1966. - 287с.

118. Kolthoff I. М., Mader P. Diffusion controlled polarographic catalytic hydrogen (Brdicka) currents in systems containing cobalt(II), cycteine-like116compounds, and alkaline buffers//Anal.Chem. 1970. - V.42, № 14. - P.1762-1769

119. Гороховская В.И. Каталитические системы типа системы Брдички в вольтамперометрии переменного тока с прямоугольным напряжением//Журн.аналит.химии. 2000. - Т.55, №4. - С.401-405

120. Krejcarek G.E., Tucker K.L. Covalent attachment of chelating groups to macromolecules//Biochem.Biophys.Res.Commun. 1977. - V.77. - P.581-585

121. Christian G.D. Analytical Chemistry. Publ. University of Washington, 1977. -P.578

122. Кузнецов Б.А., Шумакович Г.П. Изучение адсорбции белков на ртутном электроде по емкости двойного электрического слоя и каталитические реакции Брдички//В сборнике "Адсорбция и двойной электрический слой в электрохимии". М.: Наука, 1972. - С.227-234

123. Медянцева Э.П., Будников Т.К. Каталитическое выделение водорода на графитовом и угольно-пастовом электродах в растворах комплексов свинца и кадмия с серосодержащими лигандами//Журн.аналит.химии. -1991. Т.46, №4. - С.783-788

124. Н.М. Дятлова, В.Я. Темкина, И.Д. Колпакова. Комплексоны. М.: "Химия", 1970. -с.

125. Лененджер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. - Т.1. - 367с.

126. Лещинская И.Б., Варламов В.П., Куриненко Б.М. Нуклеазы бактерий. Казань: Изд-во Казанского университета, 1991. - 232с.

127. Кнорре Д.Г., Мызина С.Д. Биологическая химия. М.: Высш.шк., 1998. - 479с.

128. Филиппович Ю.Б. Основы биохимии.- М.: Высш.шк., 1993. 496с.

129. Уэбб Л. Ингибиторы ферментов и метаболизма. Общие принципы торможения. М.: Мир, 1966. - 862с.