Иммунологические последствия индукции антител к IFN#3[Г]#1 и IL-4 их пептидными фрагментами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Шевелев, Сергей Владимирович

• Шевелев, Сергей Владимирович
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Шевелев, Сергей Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Субпопуляции Т-хелперов, их дифференцировка и выработка цитокинов.

1.1.1. Дифференцировка Т-хелперов. Роль цитокинов.

1.1.2. Дисбаланс ТЫ - и ТЬ2-клеток и его связь с аллергопатологией.

1.2. Антитела к цитокинам и их использование в клинике.

1.2.1. Естественные и индуцированные аутоантитела к цитокинам у людей в норме, при патологии и после введения цитокинов.

1.2.2. Использование антител к цитокинам в антицитокиновой терапии.

ГЛАВА И МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Экспериментальные животные.

2.2. Препараты.

2.3. Расчёт иммунодоминантных эпитопов цитокинов.

2.4. Синтез пептидов и их конъюгатов с гемоцианином.

2.5. Иммунизация мышей пептидными фрагментами.

2.6. Иммуноферментное определение антител.

2.7. Определение внутриклеточных цитокинов.

2.8. Проточная лазерная цитометрия.

2.9. Приготовление клеточных суспензий.

2.10. Оценка гуморального иммунного ответа на эритроциты барана.

2.11. Оценка клеточного иммунного ответа на эритроциты барана гиперчувствительность замедленного типа).

2.12.Приготовление гидроокиси алюминия.

2.13.Реакция пассивной кожной анафилаксии.

2.14.Статистическая обработка данных.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Изучение последствий индукции антител к IFN-y.

3.1.1. Расчет иммунодоминантных эпитопов и синтез пептидов к IFN-y.

3.1.2. Оценка эффективности иммунизации пептидом 99-113 из IFN-y.

3.1.3. Влияние иммунизации пептидом к IFN-y на способность спленоцитов мышей синтезировать IFN-y и IL-4.

3.1.4. Изменение популяций лимфоцитов и их пролиферативной активностьи под влиянием иммунизации против IFN-y.

3.1.5.Влияние иммунизации пептидом из IFN-y на иммунный ответ мышей.

3.2. Изучение последствий индукции антител к IL-4.

3.2.1. Расчет иммунодоминантных эпитопов и синтез пептидов к IL-4.

3.2.2. Оценка эффективности иммунизации пептидами к IL-4.

3.2.3 Влияние иммунизации пептидом к IL-4 на способность спленоцитов мышей синтезировать IFN-y и IL-4.

3.2.4. Влияние иммунизации пептидом к IL-4 на иммунный ответ мышей.

3.2.5. Влияние иммунизации пептидом к IL-4 на аллергический ответ мышей.

ГЛАВА IV Обсуждение результатов.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунологические последствия индукции антител к IFN#3[Г]#1 и IL-4 их пептидными фрагментами»

В конце 80-х годов прошлого столетия сложилась концепция о контроле иммунного ответа Т-хелперами двух типов - ТЫ и ТЪ2 -отличающимися спектром вырабатываемых цитокинов. Согласно этой концепции ТЫ-клетки обеспечивают (за счет контактных взаимодействий и эффекта, соответствующих цитокинов) развитие иммунного ответа против внутриклеточных патогенов путем стимуляции бактерицидной активности макрофагов, а ТЬ2-клетки поддерживают развитие гуморального иммунного ответа, действенного в отношении внеклеточных патогенов и их токсинов, а также макропаразитов, путем стимуляции дифференцировки В-лимфоцитов в антителообразующие клетки. Эти представления, разработаннные в экспериментальных моделях на мышах с некоторыми оговорками были перенесены на иммунную систему человека. При определенной схематичности концепции, она оказалась полезной теоретической основой для изучения указанных процессов.

В связи с особенностями генетического контроля дифференцировки Т-хелперов и взаимным ингибирующим действием ТЫ- и ТЬ2-клеток существует реальная вероятность поляризации развития Т-хелперов в направлении одного из рассматриваемых типов. Возникающий при этом клеточный дисбаланс является условием, благоприятствующим развитию иммуноптаологии. Так, преоблание ТЫ-клеток повышает склонность организма к развитию аутоиммунных процессов клеточного типа (сахарного диабета 1-го типа, рассеянного склероза и т.д.), тогда как несбалансированное развитие Т-хелперов ТИ2-типа повышает вероятность аллергических процессов. Несмотря на то, что в реальности при заболеваниях названных групп нередко проявляется действие Т-хелперов обоих типов, в принципе указанная закономерность имееет место и должна учитываться при лечении заболеваний указанных групп.

В последнее десятилетие предпринимаются активные поиски путей лечения аллергических и аутоиммунных заболеваний с учетом патогенетической роли Т-хелперов и продуцируемых ими цитокинов. В этом контексте разрабатываются методы анти-цитокиновой терапии, направленной на ослабление влияния цитокинов, вырабатываемых Т-хелперами, причастными к патогенезу заболевания. С этой целью применяют моноклональные антитела к цитокинам, растворимые рецепторы цитокинов, рецепторные антагонисты. Вполне успешным явилось применение подобных подходов для лечения воспалительных заболеваний (наиболее известные примеры — препараты инфлексимаб на основе моноклональных антител к ЮТа и этернацепт на основе растворимого рецептора ТЫРИЛ, используемые для лечения ревматоидного артрита и ряда других хронических воспалительных заболеваний). Применение анти-цитокиновой терапии, в частности в форме моноклональных антител к цитокинам, для лечения аутоиммунных и аллергических процессов находится на стадиях разработки и испытания. Хотя клинические испытания препаратов на основе моноклональных антител к 1Ь-5, 1Ь-13 и 1Ь-4 при аллергических заболеваниях не дали ожидаемых результатов, поиски в этом направлении продолжаются.

Ограниченный успех анти-цитокиновых антител при аллергии обусловлен отсутствием исчерпывающей информации о патогенетической роли соответствующих цитокинов, избыточностью цитокинового контроля иммунологических функций, а также недостатком сведений о свойствах, биораспределении и других характеристиках испытуемых препаратов. В этом отношении полезным истчоником информации могут служить результаты изучения свойств и биологических эффектов, естественных и индуцированных аутоантител к цитокинам у человека и животных. Однако в имеющихся публикациях на эту тему недостаточно сведений о биологической активности анти-цитокиновых аутоантител, в частности, данных об их возможном вмешательстве в цитокиновую сеть и влиянии на баланс ТЫ - и ТЬ2-цитокинов.

Из вышесказанного вытекает необходимость экспериментального анализа и моделирования влияния анти-цитокиновых факторов, в особенности антител, как эндогенных аутоантител, так и экзогенных моноклональных антител, на иммунную систему в условиях физиологии и патологии.

Цель исследования, положенного в основу данной диссертации, состояла в экспериментальном изучении условий индукции эндогенных сайт-специфичных антител к ключевым цитокинам ТЫ- и ТЬ2-клеток и их влияния на различные формы иммунного ответа, в том числе аллергического. Задачи исследования.

1. Синтезировать пептидные фрагменты молекул ШЫ-у и 1Ь-4, воспроизводящие их иммунодоминантные эпитопы.

2. Индуцировать образование антител, реагирующих с целыми молекулами цитокинов, путем иммунизации мышей конъюгатами, содержащими иммунодоминантные пептиды.

3. Определить влияние накопления антител к цитокинам в организме мышей на способность Т-лимфоцитов, активированных т уИхо в присутствии и в отсутствие аутологичных сывороток, секретировать ПЧМ-у и 1Ь-4.

4. Оценить влияние индуцированных антител к цитокинам на гуморальный и клеточный иммунный ответ на тимусзависимый антиген (эритроциты барана).

6. Изучить особенности аллергического ответа мышей на овальбумин, развивающегося у мышей с различным уровнем антител к 1ЕЬГ-у и 1Ь-4.

Научная новизна. Впервые на основе теоретического анализа рассчитана локализация иммунодоминантных эпитопов молекул IFN-y и IL-4 мыши. Синтезирован один петид, воспроизводящий иммунодоминантный эпитоп IFN-y, и два пептида, соответствующие иммунодоминантным эпитопам IL-4 мыши. Отработаны условия иммунизации, позволившие индуцировать антитела к пептидному фрагментаму 99-113 из IFN-y, и антитела к пептидному фрагменту 2140 из IL-4 у большинства иммунизированных мышей. Впервые, путем иммунизации пептидными фрагментами цитокинов, удалось получить сайт-специфческие антитела, реагирующие с целой молекулой.

Установлено, что Т-лимфоциты селезенки мышей, содержащие циркулирующие антитела к ключевым цитокинам Thl- и ТЬ2-клеток, сами по себе не отличаются от Т-клеток интактных и контрольных (введение адъюванта) мышей по способности к синтезу IFN-y и IL-4 в условиях активации in vitro. Введение в культуру аутологичных сывороток, содержащих антитела к цитокинам, приводит к ослаблению продукции того цитокина, против которого были направлены антитела, не влияя на образование оппозитного цитокина.

Накопление в циркуляции мышей антител к IFN-y вызывает ослабление как гиперчувствительности замедленного типа (клеточный иммунный ответ), так и формирования антителообразующих клеток (гуморальный иммунный ответ) при иммунизации эритроцитами барана. Иммунизация пептидом к IL-4 не влияет на клеточный, но снижает гуморальный иммунный ответ при условии индукции антител, реагирующих с целой молекулой IL-4.

Получены данные, свидетельствующие в пользу ингибирующего действия накопления антител к IL-4 на уровень аллергического ответа (титр реагинов в реакции пассивной кожной анафилаксии).

Научно-практическая значимость.

Диссертационная работа основана на экспериментальных исследованиях и ориентирована на получение фундаментально-научной информации. Некоторые ее результаты могут быть учтены при разработке антицитокиновой терапии с помощью индукции эндогенных антител к цитокинам. Показана действенность рассчетов иммунодоминантных эпитопов, а также частичная сохранность структуры большинства линейных эпитопов в составе целой молекулы цитокина, поскольку два из трех апробированных пептидов, воспроизводящих структуру таких эпитопов, индуцировали достаточно высокий уровень антител, взаимодействующих с целой молекулой цитокина. Отработанные схемы иммунизации пептидами или их конъюгатами с белком носителем могут быть использованы при реализации аналогичного варианта антицитокиновой терапии в клинике. Данные о влиянии антител к 1Ж-у и 1Ь-4 на гуморальный и клеточный иммунный ответ должны учитываться при разработке методов анти-цитокиновой терапии. Результаты, свидетельствующие в пользу ингибирующего влияния эндогенных антител к 1Ь-4 на развитие аллергии, после расширенного воспроизведения могут послужить обоснованием возможности применения метода индукции эндогенных антител к цитокинам для воздействия на аллергические процессы.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Шевелев, Сергей Владимирович

Выводы

1. Теоретический расчет с использованием известных алгоритмов, основанных на оценке физико-химических параметров макромолекул, позволяет вычленить в молекуле IFN-y мыши потенциально четыре, а в молекуле IL-4 -три потенциально иммунодоминантных В-эпитопа.

2. Иммунизация мышей пептидными фрагментами, соответствующими . иммунодоминантным эпитопами молекул мышиных цитокинов - IFN-y (позиции 99-113) и IL-4 (21-40), конъюгированных с гемоцианином, индуцирует образование IgG-антител, взаимодействующих не только с пептидом-иммуногеном, но и с целой молекулой соответствующего цитокина. Активность антител выявляется в сыворотках мышей в течение нескольких месяцев после завершения иммунизации.

3. Накопление в сыворотке крови мышей антител к IFN-y и IL-4 не влияет на способность их Т-лимфоцитов при стимуляции in vitro вырабатывать указанные цитокины. Введение в культуру аутологичных сывороток, содержащих антитела к тому или другому цитокину, подавляет его синтез Т-клетками, не влияя на образование оппозитного цитокина.

4. Следствием иммунизации против IFN-y является подавление как гуморального, так и клеточного иммунного ответа на тимусзависимый антиген (эритроциты барана). Иммунизация против IL-4 подавляет гуморальный, но не клеточный иммунный ответ.

5. При высоком уровне индуцированных антител к IL-4 в сыворотке мышей, реагиновый ответ на сенсибилизацию овальбумином, оценивавшийся в реакции пассивной кожной анафилаксии, снижается пропорционально активности антител к IL-4.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Шевелев, Сергей Владимирович, 2008 год

1. Гущин И.С. Аллергическое воспаление и его фармакологический контроль. М., «Фармарус Принт». 1998

2. Лукина Г.В. Перспективы анти-цитокиновой терапии при ревматоидном артрите. Вестн. Российской Акад. Мед. Наук. 2003. №7. С.23-27.

3. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., Артамасова А.В. Аллергические заболевания. М., «Медицина». 1991, с. 366

4. Сергеев П.В., Шимановский H.JI. Рецепторы физиологически активных веществ. М., «Медицина». 1987.

5. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология Учебник. М., «Медицина» , 2002.

6. Шарова Н.И., Литвина М.М., Шевелев С.В., Дзуцев А.Х., Ярилин А.А. Выработка интерферона g и интерлейкина 4 тимоцитами человека in vitro. Цитокины и Воспаление. 2002. №4. С. 10-15.

7. Ярилин А.А., Основы Иммунологии, Москва, «Медицина», 1999

8. Ярилин А.А. Интерфероны. Молекулярное многообразие и биологические свойства Биопрепараты. 2006. №3. С. 2-4.

9. Abbas А. К., Lichtman А.Н., Pober J.S. Cellular and molecular immunology. 2nd ed. W.B Saunders Co.Philadelphia. 1994.

10. Afeltra A. Treatment of rheumatoid arthritis: new therapeutic approaches with biological agents. Curr Drug Targets Immune Endocr Metabol Disord. 2001 May; 1(1): 45-65.

11. Agnello D, Lankford CS, Bream J, Morinobu A, Gadina M, O'Shea JJ, Frucht DM. Cytokines and transcription factors that regulate T helper cell differentiation: new players and new insights. J Clin Immunol. 2003 May; 23(3): 147-61.

12. Allen JE, Maizels RM. Thl-Th2: reliable paradigm or dangerous dogma? Immunol Today. 1997 Aug; 18(8): 387-92.

13. Amerio P, Frezzolini A, Feliciani C, Verdolini R, Teofoli P, De Pita O, Puddu P. Eotaxins and CCR3 receptor in inflammatory and allergic skin diseases: therapeutical implications. Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2003 Mar; 2(1): 81-94.

14. Andreakos ET, Foxwell BM, Brennan FM, Maini RN, Feldmann M. Cytokines and anti-cytokine biologicals in autoimmunity: present and future. Cytokine Growth Factor Rev. 2002 Aug-Oct; 13(4-5): 299-313.

15. Antonelli G, Currenti M, Turriziani O, Dianzani F. Neutralizing antibodies to interferon-alpha: relative frequency in patients treated with different interferon preparations. J Infect Dis. 1991 Apr; 163(4): 882-5.

16. Ashkar S, Weber GF, Panoutsakopoulou V.et al. Critical contribution of 0X40 ligand to T helper cell type 2 differentiation in experimental leishmaniasis. J Exp Med. 2000 Jan 17; 191(2): 375-80.

17. Balamuth F, Leitenberg D, Unternaehrer J, Mellman I, Bottomly K. Distinct patterns of membrane microdomain partitioning in Thl and th2 cells. Immunity. 2001 Nov; 15(5): 729-38

18. Balsari A, Caruso A. Natural antibodies to IL-2. Biotherapy. 1997; 10(1): 25-8.

19. Banchereau J, Briere F, Liu YJ, Rousset F. Molecular control of B lymphocyte growth and differentiation. Stem Cells. 1994 May; 12(3): 278-88.

20. Barrera P., Oyen W.J., Boerman O.C. and Van Riel P.L. (2003) Scintigraphic detection of TNF in patients with rheumatoid arthritis. Ann.Rheum.Dis. 62, 825828.

21. Bendtzen K, Hansen MB, Ross C, Poulsen LK, Svenson M. Cytokines and autoantibodies to cytokines. Stem Cells. 1995 May; 13(3): 206-22.

22. Blease K., Jakubzick C., Westwick J. Lukacs N., Kunkel S.L. Hogaboam C.M. (2001) Therapeutic effect of IL-13 immunoneutralization during chronic experimental fungal asthma. J. Immunol. 166, 5219-5224.

23. Boehm U., Klamp T., Groot M. Howard J.C. (1997) Cellular responses to interferon-gamma. Annu. Rev. Immunol. 15, 749-795.

24. Borish L., Nelson H., Corren J., Bensch G., Busse W.W., Whitmore J.B. Agosti J.M. (2001) Efficacy of soluble IL-4 receptor for the treatment of adults with asthma. Allergy Clin. Immunol. 107, 963-970.

25. Borish LC, Nelson HS, Lanz MJ, Claussen L, Whitmore JB, Agosti JM, Garrison L. Interleukin-4 receptor in moderate atopic asthma. A phase I/II randomized, placebo-controlled trial. Am J Respir Crit Care Med. 1999 Dec; 160(6): 1816-23.

26. Bradley LM, Dalton DK, Croft M. A direct role for IFN-gamma in regulation of Thl cell development. J Immunol. 1996 Aug 15; 157(4): 1350-8.

27. Brinkmann V, Geiger T, Alkan S, Heusser CH. Interferon alpha increases the frequency of interferon gamma-producing human CD4+ T cells. J Exp Med. 1993 Nov 1; 178(5): 1655-63.

28. Caruso A, Foresti I, Gribaudo G, Bonfanti C, Pollara P, Dolei A, Landolfo S, Turano A. Anti-interferon-gamma antibodies in sera from HIV infected patients. J Biol Regul Homeost Agents. 1989 Jan-Mar; 3(1):8-12.

29. Cher DJ, Mosmann TR. Two types of murine helper T cell clone. II. Delayed-type hypersensitivity is mediated by TH1 clones. J Immunol. 1987 Jun 1; 138(11): 3688-94.

30. Cohn L, Whittaker L, Niu N, Homer RJ. Cytokine regulation of mucus production in a model of allergic asthma. Novartis Found Symp. 2002; 248: 20113

31. Constant SL, Bottomly K. Induction of Thl and Th2 CD4+ T cell responses: the alternative approaches. Annu Rev Immunol. 1997; 15: 297-322.

32. Cote-Sierra J, Foucras G, Guo L, Chiodetti L, Young HA, Hu-Li J, Zhu J, Paul WE. Interleukin 2 plays a central role in Th2 differentiation. Proc Natl Acad Sci USA. 2004 Mar 16; 101(11): 3880-5.

33. Cunningham A.J. (1965) A method of increased sensitivity for detecting single antibody-producing cells. Nature 207, 1106-1107.

34. Davidson N.J. The therapeutic potential of anti-cytokine antibodies in the treatment of chronic inflammatory disease. Expert Opin. Investig. Drugs. 1998. Vol.7 P.l 115-1120.

35. De Maeyer-Guignard J, Cachard-Thomas A, De Maeyer E. Naturally occurring anti-interferon antibodies in Lou/c rats. J Immunol. 1984 Aug; 133(2): 775-8.

36. De Maeyer-Guignard J, De Maeyer E. Natural antibodies to interferon-alpha and interferon-beta are a common feature of inbred mouse strains. J Immunol. 1986 Marl; 136(5): 1708-11.

37. Dinarello C.A. (1992) Anti-cytokine strategies. Eur Cytokine Netw. 3, 7-17.

38. Erb KJ. Helminths, allergic disorders and IgE-mediated immune responses: where do we stand? Eur J Immunol. 2007 May; 37(5): 1170-3.

39. Fahy JV, Corry DB, Boushey HA. Airway inflammation and remodeling in asthma. Curr Opin Pulm Med. 2000 Jan; 6(1): 15-20.

40. Flood-Page PT, Menzies-Gow AN, Kay AB, Robinson DS. Eosinophil's role remains uncertain as anti-interleukin-5 only partially depletes numbers in asthmatic airway. Am J Respir Crit Care Med. 2003 Jan 15; 167(2): 199-204.

41. Fox D.A., Choilazzi N. and Katz D.H. (1976) Hapten-specific IgE antibody response in mice. Differential resistance of IgE and IgG B-lymphocytes to X-radiation. J.Immunol. 117,1622-1628.

42. Fulcher D.A., Wong S. Carboxifluorescein succinyl ester-based proliferative assays for assessment of T cell function in the diagnostic laboratory. Immunology and Cell biology. 1999. V. 77. P. 559-564.

43. Genberg H., Hansson A., Wernerson A., Wennberg L. and Tyden G. (2006) Pharmacodynamics of rituximab in kidney transplantation. Am.J.Transplant. 6, 2418-2428.

44. Graber P, Gretener D, Herren S. et al. The distribution of IL-13 receptor alphal expression on B cells, T cells and monocytes and its regulation by IL-13 and IL-4. Eur J Immunol. 1998 Dec; 28(12):4286-98.

45. Grakoui A, Donermeyer DL, Kanagawa O, Murphy KM, Allen PM. TCR-independent pathways mediate the effects of antigen dose and altered peptide ligands on Th cell polarization. J Immunol. 1999 Feb 15; 162(4): 1923-30.

46. Green JM, Noel PJ, Sperling AI, Walunas TL, Gray GS, Bluestone JA, Thompson CB. Absence of B7-dependent responses in CD28-deficient mice. Immunity. 1994 Sep;l(6):501-8.

47. Groux H, Sornasse T, Cottrez F, de Vries JE, Coffman RL, Roncarolo MG, Yssel H. Induction of human T helper cell type 1 differentiation results in loss of IFN-gamma receptor beta-chain expression. J Immunol. 1997 Jun 15; 158(12):5627-31.

48. Gu L, Tseng S, Horner RM, Tam C, Loda M, Rollins BJ. Control of TH2 polarization by the chemokine monocyte chemoattractant protein-1. Nature. 2000 Mar 23; 404(6776) :407-ll.

49. Hansen MB, Svenson M, Diamant M, Abell K, Bendtzen K. Interleukin-6 autoantibodies: possible biological and clinical significance. Leukemia. 1995 Jul; 9(7):1113-5.

50. Holgate S.T. Cytokine and anti-cytokine therapy for the treatment of asthma and allergic disease. Cytokine. 2004.- Vol.28.- P. 152-157.

51. Hopp T.P., Woods K.R. A computer program for predicting protein antigenic determinants. Mol.Immunol. 1983. Vol.20. P.483-489.

52. Hosken NA, Shibuya K, Heath AW, Murphy KM, O'Garra A. The effect of antigen dose on CD4+ T helper cell phenotype development in a T cell receptor-alpha beta-transgenic model. J Exp Med. 1995 Nov 1; 182(5): 1579-84.

53. Hsieh CS, Macatonia SE, Tripp CS, Wolf SF, O'Garra A, Murphy KM Development of TH1 CD4+ T cells through IL-12 produced by Listeria-induced macrophages. Science. 1993 Apr 23; 260(5107):547-9.

54. Heusser CH, Bews J, Brinkmann V, Delespesse G, Kilchherr E, Ledermann F, Le Gros G, Wagner K. New concepts of IgE regulation. Int Arch Allergy Appl Immunol. 1991; 94(1-4):87-90.

55. Ichinose M, Barnes PJ. Curr Cytokine-regulated accumulation of eosinophnjis in inflammatory disease. Drug Targets Inflamm Allergy. 2004 Sep; 3(3):263-9.

56. Ichinose M, Barnes PJ. Cytokine-directed therapy in asthma. Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2004 Sep; 3(3): 263-9.

57. Jacob CO, Holoshitz J, Van der Meide P, Strober S, McDevitt HO. Heterogeneous effects of IFN-gamma in adjuvant arthritis. J Immunol. 1989 Mar 1; 142(5): 1500-5.

58. Jung T., Schauer U. Heusser C, Neumann C, Rieger C. Detection of intercellular cytokines by flow cytometry. J.Immunol. Meth. 1993. Vol. 159. P. 197-207.

59. Jyonouchi H., Sun S., Winship T., Kuchan M. J. Dietary ribonucleotides modulate type 1 and type 2 T-helper cell responses against ovalbumin in young BALB/cJ mice. J. Nutr. 2001 Vol. 131. P. 1165-1170.

60. Kidd P. Thl/Th2 balance: the hypothesis, its limitations, and implications for health and disease. Altern Med Rev. 2003 Aug; 8(3): 223-46.

61. Kips JC, O'Connor BJ, Langley SJ. et al. Effect of SCH55700, a humanized antihuman interleukin-5 antibody, in severe persistent asthma: a pilot study. Am J Respir Crit Care Med. 2003 Jun 15; 167(12): 1655-9.

62. Knight DM, Trinh H, Le J, Siegel S, Shealy D, McDonough M, Scallon B, Moore MA, Vmicek J, Daddona P, et al. Construction and initial characterization of a mouse-human chimeric anti-TNF antibody. Mol Immunol. 1993 Nov; 30(16):1443-53.

63. Kopf M, Le Gros G, Bachmann M, Lamers MC, Bluethmann H, Köhler G. Disruption of the murine IL-4 gene blocks Th2 cytokine responses. Nature. 1993 Mar 18; 362(6417): 245-8.

64. Leckie MJ, ten Brincke A, Khan J. et al. Effects of an interleukin-5 blocking monoclonal antibody on eosinophils, airway hyper-responsiveness, and the late asthmatic response. Lancet. 2000 Dec 23-30; 356(9248):2144-8.

65. Mac Donald S. M., Lichtenstein L. M. Histamine releasing factots and heterogeneity of IgE. Springer Sem. Immunopathol. 1990, v. 12, p. 415-428.

66. Maini R.N., Taylor P.C. (2000) Anti-cytokine therapy for rheumatoid arthritis. Annu. Rev. Med. 51,207-229.

67. Magram J, Sfarra J, Connaughton S, Faherty D, Warrier R, Carvajal D, Wu CY, Stewart C, Sarmiento U, Gately MK. IL-12-deficient mice are defective but not devoid of type 1 cytokine responses. Ann N Y Acad Sci. 1996a Oct 31; 795: 6070.

68. Magram J, Connaughton SE, Warrier RR, Carvajal DM, Wu CY, Ferrante J, Stewart C, Sarmiento U, Faherty DA, Gately MK. IL-12-deficient mice are defective in IFN- gamma production and type 1 cytokine responses. Immunity. 1996b May; 4(5):471-81.

69. Moll H, Rollinghoff M. Resistance to murine cutaneous leishmaniasis is mediated by TH1 cells, but disease-promoting CD4+ cells are different from TH2 cells. Eur J Immunol. 1990 Sep; 20(9):2067-74.

70. Moser M, Murphy KM. Dendritic cell regulation of TH1-TH2 development. Nat Immunol. 2000 Sep; 1(3): 199-205.

71. Mosmann TR, Cherwinski H, Bond MW, Giedlin MA, Coffman RL. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profejies of lymphokine activities and secreted proteins. J Immunol. 1986 Apr 1; 136(7):2348-57.

72. Mosmann TR, Sad S. The expanding universe of T-cell subsets: Thl, Th2 and more. Immunol Today. 1996 Mar; 17(3): 138-46.

73. Muraille E, Leo O. Revisiting the Thl/Th2 paradigm. Scand J Immunol. 1998 Jan; 47(1): 1-9.

74. Nakamura T, Lee RK, Nam SY, Podack ER, Bottomly K, Flavell RA. Roles of IL-4 and IFN-gamma in stabilizing the T helper cell type 1 and 2 phenotype. J Immunol. 1997 Mar 15; 158(6): 2648-53.

75. Noben-Trauth N, Kropf P, Müller I. SusceptibHJiity to Leishmania major infection in interleukin-4-deficient mice. Science. 1996 Feb 16; 271(5251):987-90.

76. O'Byrne PM. Cytokines or their antagonists for the treatment of asthma. Chest. 2006 Jul; 130(l):244-50.

77. Okayama Y, Kawakami T. Development, migration, and survival of mast cells. Immunol Res. 2006; 34(2):97-l 15.

78. Oppmann B, Lesley R, Blom B et al. Novel pl9 protein engages IL-12p40 to form a cytokine, IL-23, with biological activities similar as well as distinct from IL-12. Immunity. 2000 Nov; 13(5):715-25.

79. Parham C, Chirica M, Timans J et al. A receptor for the heterodimeric cytokine IL-23 is composed of IL-12Rbetal and a novel cytokine receptor subunit, IL-23R. J Immunol. 2002 Jun 1; 168(11):5699-708.

80. Perez VL, Lederer JA, Lichtman AH, Abbas AK. Stability of Thl and Th2 populations. Int Immunol. 1995 May; 7(5): 869-75.

81. Pflanz S, Timans JC, Cheung J. et al. IL-27, a heterodimeric cytokine composed of EBI3 and p28 protein, induces proliferation of naive CD4(+) T cells. Immunity. 2002 Jun; 16(6):779-90.

82. Presky DH, Yang H, Minetti LJ, Chiia AO, Nabavi N, Wu CY, Gately MK, Gubler U. A functional interleukin 12 receptor complex is composed of two betatype cytokine receptor subunits. Proc Natl Acad Sei USA. 1996 Nov 26; 93(24):14002-7.

83. Pullerits T. Cytokine modulation for anti-allergic treatment. Curr Pharm Des. 2002; 8(20): 1845-53.

84. Purkerson J, Isakson P. A two-signal model for regulation of immunoglobulin isotype switching. FASEB J. 1992 Nov; 6(14):3245-52.

85. Raza A. Anti-TNF therapies in rheumatoid arthritis, Crohn's disease, sepsis, and myelodysplastic syndromes. Microsc. Res. Tech. 2000.- Vol. 50.- P.229-235.

86. Revoltella RP, Laricchia-Robbio L, Moscato S, Genua A, Liberati AM. Natural and therapy-induced anti-GM-CSF and anti-G-CSF antibodies in human serum. Leuk Lymphoma. 1997 Dec; 26 Suppl 1:29-34.

87. Revoltella RP. Natural and therapeutically-induced antibodies to cytokines. Biotherapy. 1998; 10(4):321-31.

88. Rincón M, Anguita J, Nakamura T, Fikrig E, Flavell RA. Interleukin (IL)-6 directs the differentiation of IL-4-producing CD4+ T cells. J Exp Med. 1997 Feb 3; 185(3):461-9.

89. Rogge L, Barberis-Maino L, Biffi M, Passini N, Presky DH, Gubler U, Sinigaglia F. Selective expression of an interleukin-12 receptor component by human T helper 1 cells. J Exp Med. 1997 Mar 3; 185(5):825-31.

90. Rogge L, D'Ambrosio D, Biffi M, Penna G, Minetti LJ, Presky DH, Adorini L, Sinigaglia F. The role of Stat4 in species-specific regulation of Th cell development by type I IFN-s. J Immunol. 1998 Dec 15; 161(12):6567-74.

91. Romagnani S. Human TH1 and TH2 subsets: regulation of differentiation and role in protection and immunopathology. Int Arch Allergy Immunol. 1992; 98(4):279-85.

92. Romagnani S. The Thl/Th2 paradigm. Immunol Today. 1997 Jun; 18(6):263-266.

93. Romagnani S.Thl and Th2 in human diseases. Clin Immunol Immunopathol. 1996 Sep; 80(3 Pt l):225-35.

94. Ross C, Hansen MB, Schyberg T, Berg K. Autoantibodies to crude human leucocyte interferon (IFN-), native human IFN-, recombinant human IFN-alpha 2b and human IFN-gamma in healthy blood donors. Clin Exp Immunol. 1990 Oct; 82(l):57-62.

95. Rost B. PHD: predicting one-dimensional protein structure by profile based neural networks. Meth. in Enzymolgy, 266, 525-539, 1996

96. Ryan JJ, Kashyap M, Bailey D, Kennedy S, Speiran K, Brenzovich J, Barnstein B, Oskeritzian C, Gomez G. Mast cell homeostasis: a fundamental aspect of allergic disease. Crit Rev Immunol. 2007; 27(l):15-32.

97. Schijns VE, Haagmans BL, Wierda CM, Kruithof B, Heijnen IA, Alber G, Horzinek MC. Mice lacking IL-12 develop polarized Thl cells during viral infection. J Immunol. 1998 Apr 15; 160(8):3958-64.

98. Schweitzer AN, Borriello F, Wong RC, Abbas AK, Sharpe AH. Role of costimulators in T cell differentiation: studies using antigen-presenting cells lacking expression of CD80 or CD86. J Immunol. 1997 Mar 15; 158(6):2713-22.

99. Scott P. IFN-gamma modulates the early development of Thl and Th2 responses in a murine model of cutaneous leishmaniasis. J Immunol. 1991 Nov 1; 147(9): 3149-55.

100. Shiohara M, Koike K. Regulation of mast cell development. Chem Immunol Allergy. 2005; 87: 1-21.

101. Simon HU. Cytokine and anti-cytokine therapy for asthma. Curr Allergy Asthma Rep. 2006 Mar; 6(2): 117-21.

102. Sitkauskiene B, Radinger M, Bossios A, Johansson AK, Sakalauskas R, Lotvall J. Airway allergen exposure stimulates bone marrow eosinophilia partly via IL-9. Respir Res. 2005 Apr 11; 6: 33.

103. Steinhoff U, Muller U, Schertler A, Hengartner H, Aguet M, Zinkernagel RM. Antiviral protection by vesicular stomatitis virus-specific antibodies in alpha/beta interferon receptor-deficient mice. J Virol. 1995 Apr; 69(4): 2153-8.

104. Steinke JW. Anti-interleukin-4 therapy. Immunol Allergy Clin North Am. 2004 Nov; 24(4): 599-614.

105. Steinke JW.,Vexler V., Lane N. et al. The safety and pharmacokinetics of SB240683 in patients with mild to moderate asthma. J. Allergy Clin. Immunol. 2001; 107: S317.

106. Sumi Y, Hamid Q. Airway remodeling in asthma. Allergol Int. 2007 Dec; 56(4): 341-8.

107. Svenson M, Hansen MB, Ross C, Diamant M, Rieneck K, Nielsen H, Bendtzen K. Antibody to granulocyte-macrophage colony-stimulating factor is a dominant anti-cytokine activity in human IgG preparations. Blood. 1998 Mar 15; 91(6): 2054-61.

108. Szabo SJ, Dighe AS, Gubler U, Murphy KM. Regulation of the interleukin (IL)-12R beta 2 subunit expression in developing T helper 1 (Thl) and Th2 cells. J Exp Med. 1997 Mar3; 185(5):817-24.

109. Szabo SJ, Sullivan BM, Peng SL, Glimcher LH. Molecular mechanisms regulating Thl immune responses. Annu Rev Immunol. 2003; 21: 713-58.

110. Van der Meide PH, Schellekens H. Anti-cytokine autoantibodies: epiphenomenon or critical modulators of cytokine action. Biotherapy. 1997; 10(1): 39-48.

111. Vermeer PD, Harson R, Einwalter LA, Moninger T, Zabner J. Interleukin-9 induces goblet cell hyperplasia during repair of human airway epithelia. Am J Respir Cell Mol Biol. 2003 Mar; 28(3): 286-95.

112. Walsh GM. Targeting airway inflammation: novel therapies for the treatment of asthma. Curr Med Chem. 2006; 13(25): 3105-11.

113. Wendling D, Racadot E, Wijdenes J. Treatment of severe rheumatoid arthritis by anti-interleukin 6 monoclonal antibody. J Rheumatol. 1993 Feb; 20(2): 25962.

114. Wenner CA, Guler ML, Macatonia SE, O'Garra A, Murphy KM. Roles of IFN-gamma and IFN-alpha in IL-12-induced T helper cell-1 development. J Immunol. 1996 Feb 15; 156(4): 1442-7.

115. Wills-Karp M. Interleukin-13 in asthma pathogenesis. Immunol Rev. 2004 Dec; 202: 175-90.

116. Wu C, Ferrante J, Gately MK, Magram J. Characterization of IL-12 receptor betal chain (IL-12Rbetal)-deficient mice: IL-12Rbetal is an essential component of the functional mouse IL-12 receptor. J Immunol. 1997 Aug 15; 159(4): 165865.

117. Wu C, Wang X, Gadina M, O'Shea JJ, Presky DH, Magram J. IL-12 receptor beta 2 (IL-12R beta 2)-deficient mice are defective in IL-12-mediated signaling despite the presence of high affinity IL-12 binding sites. J Immunol. 2000 Dec 1; 165(11): 6221-8.

118. Yamagata T, Ichinose M. Agents against cytokine synthesis or receptors. Eur J Pharmacol. 2006 Mar 8; 533(1-3):289-301.

119. Yoshinaga SK, Whoriskey JS, Khare SD, et al. T-cell co-stimulation through B7RP-1 and ICOS. Nature. 1999 Dec 16; 402(6763): 827-32.

120. Zuany-Amorim C, Manlius C, Dalum I, Jensen MR, Gautam A, Pay G, Mouritsen S, Walker C. Induction of TNF-alpha autoantibody production by

121. Auto Vac TNF106: a novel therapeutic approach for the treatment of allergic diseases. Int Arch Allergy Immunol. 2004 Feb; 133(2): 154-63.О1. Благодарности /