Иммуноферментная диагностика лихорадки Эбола: эффективность применения природного антигена для выявления специфических антител тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Пьянков Степан Александрович

• Пьянков Степан Александрович
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Пьянков Степан Александрович

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Актуальность дифференциальной диагностики лихорадок

1.1.1 Общие сведения и эпидемиология вирусов рода Ebolavirus

1.1.2 Структурно-функциональные свойства вирусов рода Ebolavirus

1.1.3 Факторы иммунной системы, определяющие эффективность диагностики лихорадки Эбола

1.1.4 Классические и современные средства диагностики лихорадки Эбола

1.2 Рекомендации ВОЗ по предупреждению эпидемий вызываемых филовирусами: задачи здравоохранения

1.2.1 Действия в случае эпидемии

1.2.2 Мониторинг эпидемиологической обстановки

1.2.3 Методы диагностики лихорадки Эбола

1.2.4 Рекомендации по применению средств иммунодиагностики при разработке терапевтических и вакцинных препаратов. Анализ иммунологической вариабельности вирусов рода Ebolavirus........................................................................................................................^

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материал исследования

2.1.1 Вирусы

2.1.2 Культуры клеток и среды

2.1.3 Животные

2.1.4 Референс-образцы, международные стандарты

2.1.5 Набор ы реагентов

2.1.6 Химические реагенты и реактивы

2.2 Методы исследования

2.2.1 Методы идентификации Zaire Ebolavirus

2.2.2 Культивирование вируса

2.2.3 Определение инфекционной активности вирусных препаратов

2.2.4 Получение природного антигена Zaire Ebolavirus

2.2.5 Анализ препаратов Zaire Ebolavirus

2.2.6 Определение специфической активности образцов

2.2.7 Статистическая обработка

2.2.8 Этические нормы

3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Идентификация штаммов

3.2 Подбор условий приготовления природных антигенов

3.3 Характеристика использованных для сравнения антигенов

3.3.1 Рекомбинантный аналог белка VP40 Zaire Ebolavirus

3.3.2 Синтетические аналоги пептидов белка GP Zaire Ebolavirus

3.4 Разработка панелей для исследования свойств антигенов

3.5 Определение диагностической информативности антигенов

3.6 Выбор штамма Zaire Ebolavirus для использования в качестве антигена при выявлении специфических антител

3.7 Выбор метода выявления специфических антител

3.8 Разработка дизайна медицинского изделия для диагностики лихорадки Эбола

3.9 Клинические исследования диагностической эффективности набора реагентов

3.10 Регистрация медицинского изделия «Вектор ИФА Эбола-АТ скрин»

3.11 Сроки и длительность выявления антител против Zaire Ebolavirus

3.12 Определение специфической активности вакцин против Zaire Ebolavirus

3.13 Определение специфической активности терапевтических препаратов для лечения лихорадки Эбола

3.14 Заключение

ВЫВОДЫ

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АГ антиген

АТ антитело

БОЕ бляшкообразующая единица

БВВМ болезнь, вызываемая вирусом Марбург

БВВЭ болезнь, вызываемая вирусом Эбола

ВВС вирус везикулярного стоматита

ВГЛ вирусные геморрагические лихорадки

ВОЗ Всемирная организация здравоохранения

ВЭЛ венесуэльский энцефалит лошадей

Да Дальтон, единица измерения массы вещества, равная 1,661 х 10-24 г

ДИ диагностическая информативность, способность анализом выявлять

патологические отклонения в организме [ГОСТ Р 53022.3-2008]

ДМСО диметилсульфоксид

ДЭ диагностическая эффективность, доля истинных результатов от общего

числа результатов анализа [ГОСТ Р 53022.3-2008]

ИФА иммуноферментный анализ

ИХА иммунохроматографический анализ

КВЖ культуральная вируссодержащая жидкость

МЕМ среда для культивирования клеток

МИ медицинское изделие

МКА моноклональное антитело

НТД научно-техническая документация

ООВИ особо опасные вирусные инфекции

ОТ-ПЦР полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией

ПА природный, синоним цельновирионного по компонентам, антигена

ПЭГ полиэтиленгликоль

РН реакция нейтрализации

ТУ технические условия

IgG иммуноглобулины класса G (Immunoglobulin G)

IgM иммуноглобулины класса М (Immunoglobulin М)

Vero перевиваемая линия клеток почек африканских зеленых мартышек

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммуноферментная диагностика лихорадки Эбола: эффективность применения природного антигена для выявления специфических антител»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования Клиническая лабораторная диагностика является необходимым элементом эффективного механизма противоэпидемического контроля. Его координацией на международном уровне занимается Всемирная организация здравоохранения. Согласно оценке ВОЗ глобальной ситуации в здравоохранении, в 2016 году инфекционные болезни стали причиной смерти более 330 млн человек, что составило 12% от общей смертности в мире [WHO, 2018]. Хотя наблюдается выраженная тенденция к снижению доли инфекционных заболеваний в общем показателе причин смертности (с 584 млн умерших - 21% в 2000 году до 332 млн в 2016 году - 12%), есть четыре причины рассматривать инфекционные болезни в качестве глобального вызова общественному здравохранению. Первая - высокий риск инфекционного заболевания в раннем возрасте остается одной из главных причин потерянных лет здоровой жизни. Вторая - большинство летальных исходов от инфекционных болезней наблюдается в трех регионах мира (Африка, Юго-Восточная Азия и Восточное Средиземноморье). В этих регионах проживает более 2,3 млрд человек, и на них приходится 81% смертей или 89% потерянных лет здоровой жизни от всех зарегистрированных случаев инфекционных заболеваний в мире. Третья причина - рост числа инфекционных болезней, вызываемых неизвестными ранее патогенами (из которых 60% - это зоонозные). Этот рост с высокой степенью корреляции соотносится с процессом роста населения, повышением его плотности и направлениями миграции; урбанизацией, изменениями в окружающей среде, климате и психологии социального поведения. Четвертая - усиление резистентности патогенов, связанной с генетической изменчивостью. Резистентность выявлена для бактерий, паразитов, вирусов и грибов. ВОЗ в качестве стратегического приоритета называет развитие диагностики как одного из средств преодоления глобального вызова общественному здоровью, исходящего от инфекционных заболеваний [WHO, 2015е].

В России государственной структурой по контролю общественного здоровья в части угрозы инфекционных заболеваний является Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Роспотребнадзор). Службой прослеживается тенденция стабилизации уровня заболеваемости инфекционными болезнями в России. В 2018 г в Российской Федерации общее число зарегистрированных инфекционных и паразитарных заболеваний уменьшилось по сравнению с 2017 годом на 2,6 % и составило 34 млн. 017 тыс. 029 случаев (в 2017 г. - 34 млн. 919 тыс. 200 случаев) [Собрание законодательства РФ, 2018].

Снижение ущерба от инфекционных заболеваний предусмотрено в том числе за счет разработки новых средств лабораторной диагностики, особенно диагностики случаев завоза инфекционных патогенов на неэндемичные территории в результате трудовой и туристической миграции или с целью преднамеренного использования инфекционного агента. В соответствии с документом «Основы государственной политики Российской Федерации в области обеспечения химической и биологической безопасности на период до 2025 года и дальнейшую перспективу» [Президент РФ, 2019], определены основные биологические угрозы безопасности России, в том числе модификация свойств и форм патогенных биологических агентов и свойств их переносчиков; проектирование и создание патогенов с помощью технологий синтетической биологии; теракты, связанные с использованием опасных биологических веществ.

Вирусы играют главную роль в инфекционной патологии человека. Так, из 11 агентов, отнесенных в РФ к I группе патогенности в соответствии с Санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-11 групп патогенности (опасности)», 10 относятся к вирусам (Марбург и Эбола семейства Filoviridae; вирусы Ласса, Хунин, Мачупо, Себиа, Гуанарито семейства Arenaviridae; натуральной оспы, оспы обезьян семейства Orthopoxviridae; обезьяний вирус В семейства Herpesviridae), и лишь один возбудитель чумы отностится к бактериям. Летальность для людей при вирусных инфекциях может достигать 90%. По этой причине своевременная диагностика

вирусных заболеваний остро необходима, т.к. позволяет предотвратить огромные социальные и экономические потери от их распространения.

В связи с интенсивными международными миграционными процессами увеличивается количество завозов известных инфекционных агентов на территорию Российской Федерации и возрастает риск завоза новых, в том числе возбудителей геморрагических лихорадок. Наиболее опасны представители семейства Filoviridae. Летальность некоторых штаммов превышает 50%.

Крупнейшая эпидемия болезни, вызванной вирусом Эбола (БВВЭ) началась в 2014 году на территории западноафриканских государств: Гвинея, Либерия, Сьерра-Леоне. Она длилась более двух лет. Завозные случаи заболевания были зарегистрированы в ряде отдаленных стран. Лабораторно подтвержденные случаи заболевания отмечены у 27850 человек, из них 11280 умерло [WHO, 2016].

Сказанное выше относится и к другому представителю семейства филовирусов. При крупнейшей вспышке болезни, вызванной вирусом Марбург (БВВМ) в Анголе 2004 и 2005 гг смертность составила 90% [Brauburger et al., 2012].

Эффективные средства борьбы с возбудителями геморрагических лихорадок, в том числе БВВЭ, активно разрабатываются и проходят испытания.

Наличие в арсенале медицины средств профилактики и терапии БВВЭ требует разработки тестов на основе иммунологических методов для оценки специфической активности разрабатываемых и серийно выпускаемых препаратов, дифференциальной диагностики заболевания. Традиционные методы иммунодиагностики, например реакция нейтрализации (РН), не позволяют оперативно и масштабно решать эти задачи. Современная медицина и наука называют перспективными такие иммунологические методы, как иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунохроматографический анализ (ИХА). Решению вопросов разработки и эффективного применения перспективных средства иммунодиагностики БВВЭ, посвящена данная работа.

Цель исследования

Изучить культуральные свойства штаммов Zaire ebolavirus с целью получения цельновирионных антигенов, разработать на их основе набор реагентов для выявления антител к вирусу Эбола и определить диагностическую эффективность разработанного набора для решения широкого спектра исследовательских и прикладных задач вирусологии.

Задачи исследования

1. Выявить антигенные различия штаммов Zaire ebolavirus 8МС и H. sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022.

2. Оптимизировать схему получения препаративных количеств Zaire ebolavirus штаммов 8МС и H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022 при культивировании на монослое инфицированных клеток и заражении восприимчивого животного. Разработать технологию концентрирования и очистки цельновирионного антигена с контролируемым отсутствием инфекционности после инактивации.

3. Сравнить диагностическую эффективность использования очищенных инактивированных антигенов, приготовленных из штаммов 8МС и H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022, с эффективностью применения рекомбинантного и пептидного антигенов при постановке ИФА.

4. На основе антигена, обеспечивающего максимальные показатели чувствительности, специфичности и серийной производительности, разработать и зарегистрировать в качестве медицинского изделия набор реагентов для иммунодиагностики БВВЭ.

5. Определить информативность результатов применения набора реагентов при диагностике БВВЭ, оценке величины гуморального иммунитета и изучении специфической активности иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии лихорадки Эбола.

Научная новизна работы

Показано отсутствие антигенных особенностей адаптированного на морских свинках лабораторного штамма 8МС и актуального штамма H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022 Zaire ebolavirus.

Отработана оптимальная схема получения препаративных количеств Zaire ebolavirus штаммов 8МС и H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022 с использованием как культуры клеток, так и восприимчивых животных.

Разработаны методы очистки, инактивации и контроля отсутствия остаточной инфекционной активности препаратов на основе штаммов 8МС и H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022 Zaire ebolavirus, позволяющие получить антиген, более эффективно связывающий специфические антитела чем отдельные рекомбинантные белки или синтетические пептиды.

Показана возможность расширения до двух лет продолжительности выявления специфических антител в крови больных лихорадкой Эбола и реконвалесцентов при использовании диагностического набора на основе иммуносорбента, приготовленного из штамма 8МС.

Показана эффективность использования диагностического набора на основе антигена, приготовленного из штамма 8МС, для выявления антител к единичным эпитопам Zaire ebolavirus при оценке специфической активности полиэпитопной вакцины «ЭпиВакЭбола».

Теоретическая и практическая значимость работы.

Запатентована технология получения очищенного инактивированного антигена на основе выделенного в 2015 году от больного во время эпидемии в Гвинейской республике штамма H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022 Zaire ebolavirus. Показана возможность его использования в качестве основного компонента набора реагентов для диагностики ин витро. Показано, что антиген эффективно связывает в иммунологических реакциях специфические антитела из

крови больных БВВЭ, реконвалесцентов и вакцинированных против лихорадки Эбола.

Выявленная в результате исследования антигенная идентичность штаммов 8МС и H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022 позволила без потери чувствительности анализа применить более продуктивный антиген из штамма 8МС для изготовления иммуносорбента. Антиген на основе штамма 8МС явился ключевым компонентом разработанного диагностикума для выявления антител к циркулирующим и коллекционным штаммам вируса Эбола.

Утверждена и внедрена в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора стандартная операционная процедура СОП № 3 -020/01-15 «Производство цельновирионного концентрированного очищенного инактивированного антигена вируса Эбола» для изготовления диагностических препаратов. Информативность иммунодиагностики с применением антигена подтверждена методами ИФА и Вестерн-блот анализа.

Впервые в России разработан и в установленном порядке зарегистрирован в Российской Федерации «Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител классов G и M к вирусу Эбола «Вектор ИФА Эбола-АТ скрин» по ТУ 9398-60-05664012-2015» (Регистрационное удостоверение №РЗН 2015/3458 от 21.122.2015 г., Приложение 1), на основе иммуносорбента с очищенным инактивированным антигеном из вирионов штамма 8МС Zaire ebolavirus. Его значение для иммунодиагностики показано в 2015 году апробацией в ходе вспышки БВВЭ в Гвинейской Республике.

С момента получения регистрационного удостоверения на набор реагентов «Вектор ИФА Эбола-АТ скрин» было выпущено 6 серий, с использованием которых в различных диагностических лабораториях выпонено около 6 000 анализов по выявлению реконвалесцентов БВВЭ в Гвинейской Республике и оценке эффективности вакцины «ЭпиВакЭбола».

Получен единственный в области диагностики БВВЭ методом выявления специфических антител патент РФ №2631937 от 28.09.2017 г. «Штамм вируса Эбола Заир H.sapiens-wt/GIN/2015/Kalidie-Kindia-1022 и антиген, полученный на

основе указанного штамма и используемый в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для выявления антител классов G и M к вирусу Эбола» (Приложение 2) на применение актуального штамма Zaire ebolavirus в качестве материала для антигена - компонента иммуноферментной тест-системы.

Положения, выносимые на защиту:

1. Штаммы 8МС и H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022 Zaire ebolavirus антигенно идентичны при изучении методами лабораторного анализа.

2. Подобранный способ наработки вируссодержащего материала для получения цельновирионного антигена и использованный способ инактивации вируса не влияют на чувствительность и специфичность методов выявления антител при его применении.

3. Диагностическая эффективность применения в ИФА цельновирионных антигенов, полученных с использованием штамма 8МС, выше чем у рекомбинантного белка - аналога белка VP40 и синтетических полипептидных аналогов двух доменов белка GP вируса Эбола.

4. Использование цельновирионного антигена Zaire ebolavirus в качестве компонента тест-системы приводит к увеличению до двух лет периода детекции специфических антител в крови больных лихорадкой Эбола и реконвалесцентов, значительно превосходя возможности выявления диагностически значимых концентраций антител к отдельным VP40 и GP белкам вируса.

5. Иммуноферментный анализ на основе цельновирионного антигена коллекционного адптированного штамма 8МС диагностически информативен при выявлении случаев заболевания, вызываемых циркулирующими актуальными штаммами Zaire ebolavirus, а также для выявления специфической активности в терапевтических препаратах на основе нейтрализующих антител к единичным эпитопам антигенов вируса.

Степень достоверности результатов проведенных исследований

Достоверность результатов диссертационного исследования обеспечивается репрезентативной выборкой из 1230 образцов сыворотки и плазмы крови человека и животных, содержащих и не содержащих антитела к Zaire ebolavirus; многоцентровой процедурой регистрации медицинского изделия, применением современных и классических методов исследования, адекватных поставленным задачам: ИФА, РН, Вестерн-блот анализ, электронно-микроскопические исследования, электрофорез в полиакриламидном геле.

Личный вклад автора

Лично автором проводилась наработка, концентрирование, очистка и инактивация вирусных частиц актуального штамма H.sapiens/GIN/2015/Makona-Kindia1022 и адаптированного 8МС Zaire ebolavirus. Проведена процедура сравнения антигенных свойств штаммов вируса. На основе лично полученных экспериментальных данных в полевых условиях действовавшего в Гвинейской республике во время эпидемии лихорадки Эбола в 2015 году мобильного комплекса санитарной противоэпидемической бригады Роспотребнадзора и в лаборатории ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора осуществлен отбор клинических образцов сыворотки и плазмы крови человека. Проведена разработка документации и установочные испытания выпущенных экспериментальных серий набора «Вектор ИФА Эбола-АТ скрин».

Забор образцов крови инфицированных пациентов проводился сотрудниками местных учреждений здравоохранения Гвинейской Республики, их пробоподготовка включала личное участие автора работы. Процедура регистрации набора проведена совместно с ОБТК ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора под контролем заведующей Богрянцевой М.П. Культивирование штаммов выполнено совместно с Бодневым С.А.

Отсутствие остаточной вирусной активности препаратов установлено Зайковской А.В. Электрофорез для Вестерн-блот анализа проведен Суслопаровым

И.М. и Протопоповой Е.В. Электронные микрофотографии выполнены Тарановым О.С. Испытания «Вектор ИФА Эбола-АТ скрин» в полевых условиях проведены сотрудниками СПЭБ. Забор образцов крови инфицированных и иммунизированных животных проводился под руководством Пьянкова О.В. Забор крови вакцинированных добровольцев проводился сотрудниками МСЧ-163 ФМБА.

Апробация материалов диссертации

Основные результаты исследования по теме диссертационной работы были представлены и обсуждены на IV Национальном конгрессе бактериологов и Международном симпозиуме «Микроорганизмы и биосфера MICROBIOS -2018», 12-13 сентября (Омск, 2018); XI съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Обеспечение эпидемиологического благополучия: вызовы и решения», 16-17 ноября (Москва, 2017); II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы болезней, общих для человека и животных», 5-6 апреля (Ставрополь, 2017); XXIII заседании рабочей группы «Аэрозоли Сибири», 29 ноября - 02 декабря (Томск, 2016); Научно-практической конференции «Диагностика и профилактика инфекционных болезней», 26-28 сентября (Новосибирск, 2013); II Международном форуме «Инновации в медицине: основные проблемы и пути их решения. Высокотехнологичная медицина как элемент новой инновационной экономики», 22 -23 марта (Новосибирск, 2013).

Публикации по теме диссертации

По теме диссертационного исследования опубликованы 22 научных работы, в том числе 11 статей в рецензируемых журналах (из них 11 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ), 4 научные монографии, 7 тезисов в материалах научных конференций. Получено 6 патентов РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и включает введение, основные главы (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение), выводы, список литературы. Работа иллюстрирована 14 рисунками и 11 таблицами. Список литературы включает 222 литературных источника, из них 21 источник отечественной и 201 источник зарубежной литературы.

Благодарности

Автор выражает благодарность коллегам, осуществлявшим руководство экспериментальной частью процесса разработки антигена и набора (к.б.н. Пьянкову О.В., к.м.н. Бодневу С.А., к.б.н. Зайковской А.В., к.б.н. Богрянцевой М.П.).

Особую благодарность автор выражает своим коллегам из ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора, г. Саратов, Россия к.м.н. Найденовой Е.В. и к.м.н. Никифорову К.А. за помощь при проведении исследований в Гвинейской Республике.

Автор благодарит своих коллег, в плодотворном сотрудничестве с которыми была выполнена диссертационная работа: д.б.н. Рыжикова А.Б., д.б.н. Кочневу Г.В., к.б.н. Протопопову Е.В., к.б.н. Суслопарова И.М., к.б.н. Щербакова Д.Н., к.б.н. Рыжикова Е.А., к.б.н. Таранова О.С., Солодкого В.В., Максимова Н.Л.

Автор выражает искреннюю признательность к.б.н. Иматдинову И.Р. за ценные замечания при чтении и обсуждении данной работы.

Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю д.б.н. Агафонову А.П. за осуществление общего руководства, а также активную поддержку в планировании, проведении и интерпретации результатов исследования.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. 1 Актуальность дифференциальной диагностики лихорадок

В прошлом термин «вирусная геморрагическая лихорадка» (ВГЛ) использовался многими исследователями для целого ряда клинических синдромов, которые имеют сходство друг с другом. Заболевание ВГЛ характеризуется целым спектром проявлений, таких как геморрагическая сыпь, диарея, мышечные и головные боли, кашель, пневмония, энцефалопатия, гепатиты [Bwaka et al., 1999; Gunther et al., 2001; Hirabayashi et al., 1988; Khobloch et al., 1982; Peters et al., 1989; Schmitz, 2000; Suleiman et al., 1980; Teichmann et al., 1999]. Общим клиническим симптомом заболеваний является наличие кровоизлияния, однако проявление заболевания без геморрагического синдрома также имеет место [Burk et al., 2016]. Высокая смертность при ВГЛ обусловлена также высокой контагиозностью возбудителей [Finney, 1971; Khan et al., 1997].

Известный советский вирусолог Чумаков Михаил Петрович (1909 -1993) первым употребил термин «геморрагическая лихорадка» в 1948 году [Чумаков, 1948а; Чумаков, 1948б].

Сегодня большинство исследователей считают возбудителями ВГЛ вирусы Ласса, Хунин, Мачупо, Себиа, Гуанарита, Хантаан, Сеул, Добрава, вирусы лихорадки долины Рифт и Крымской-Конго геморрагической лихорадки, вирусы денге, Эбола и Марбург [Bwaka et al., 1999; Gunther et al., 2001; Hirabayashi et al., 1988; Khobloch et al., 1982; Peters et al., 1989; Schmitz, 2000; Suleiman et al., 1980; Teichmann et al., 1999, Le Guenno, 1995]. Основываясь на аналогии, в этот список добавлены вирус обезьяньей геморрагической лихорадки и вирусы 1 -8 эпизоотической геморрагической лихорадки с возбудителями из семейств Arteriviridae и Reoviridae, соответственно [King et al., 2011].

Несколько других агентов из разных таксонов вызывают ВГЛ только у животных. Например, африканская чума свиней (АЧС) вызывается ДНК-вирусом семейства Asfarviridae [Dixon et al., 2008]. Кроме этого, известны геморрагическая болезнь кролика [Abrantes et al., 2012] и классическая чума свиней [Lange et al.,

2011]. Всего насчитывают около 40 видов и генотипических разновидностей вирусов, вызывающих ВГЛ человека и животных [Grard et al., 2012; Jens et al., 2014]. Лихорадки на ранней стадии имеют похожие симптомы, затрудняющие их диагностику [Kuhn, 2008]. По причине высокой летальности и контагиозности особую опасность представляют лихорадки, вызываемые филовирусами. При появлении в арсенале здравоохранения средств профилактики и терапии этих болезней, необходимы средства их дифференциальной диагностики.

1.1.1 Общие сведения и эпидемиология вирусов рода Ebolavirus

Таксономия возбудителей БВВМ и БВВЭ определена в соответствии с протоколами и решениями Международного Комитета по Таксономии Вирусов. Текущая таксономия отражена в опубликованном 31 мая 2019 года документе «Virus Taxonomy: 2018b.v2 Release» [ICTV, 2019].

Семейство Filoviridae вместе с семействами Artoviridae, Bornaviridae, Lispiviridae, Mymonaviridae, Nyamiviridae, Paramyxoviridae, Pneumoviridae, Rhabdoviridae, Sunviridae, Xinmoviridae входят в порядок Mononegavirales.

Семейство Filoviridae насчитывает пять родов Cuevavirus, Striavirus, Thamnovirus, Ebolavirus и Marburgvirus, представители двух вызывают заболевания человека. Болезнь, вызванная вирусом Марбург (Marburg virus disease) - БВВМ [МКБ-10а, 2019], называемая также геморрагическая лихорадка Марбург; и болезнь, вызванная вирусом Эбола (Ebola virus disease) - БВВЭ [МКБ-10б, 2019], называемая также геморрагическая лихорадка Эбола или лихорадка Эбола. БВВЭ у человека вызывается 4 видами, входящими в род Ebolavirus: Bundibugyo ebolavirus, Zaire ebolavirus, Sudan ebolavirus, и Tai Forest ebolavirus [Siegert et al., 1967; Bowen et al., 1977; Johnson et al., 1977; Kuhn, 2015]. Вспышек ВГЛ у человека, вызываемых представителями пятого вида Reston ebolavirus не зафиксировано.

Еще три рода семейства представлены единственными вирусами Lloviu cuevavirus рода Cuevavirus, Xilang striavirus рода Striavirus и Huangjiao

thamnovirus рода Thamnovirus, вспышек ВГЛ по их причине также не зарегистрировано.

Новейшие исследования свидетельствуют о существовании еще двух представителей филовирусов. Mengla Virus согласно предложениям обнаруживших его РНК в летучих мышах рода Rosettus китайских ученых станет единственным видом рода Dianlovirus [Xing-Lou et al., 2019]. Bombali ebolavirus обнаружен в обитающих в Сьерра-Леоне летучих мышах летом 2018 года американскими исследователями [Goldstein et al., 2019].

Все вызывающие ВГЛ представители рода Ebolavirus считаются «новыми патогенами» [Peters et al., 1994; Howard & Fletcher, 2012; Martina & Osterhaus, 2009]. Это означает, что частота их выявления среди восприимчивых популяций значительно возросла. Ранее они являлись эндемичными только для Африки и вызывали локальные вспышки заболеваний [Roddy, 2014]. Из-за отсутствия диагностических возможностей и доступа к медицинским учреждениям вспышки в большинстве случаев не фиксировались. Системы эпидемиологического надзора за болезнями в государствах Африки, хотя они крайне необходимы, в основном не развиты и методически не готовы к работе с ВГЛ [Senga et al., 2016; Panning et al., 2007]. К открытию новых видов рода Ebolavirus привело появление новых инструментов лабораторной диагностики, начиная с обнаруженного на Филиппинах Reston ebolavirus. Благодаря лабораторному мониторингу клинически подозрительных проявлений заболеваний увеличивается числа зарегистрированных случаев БВВЭ. С другой стороны, антропогенные изменения экосистем Африки привели к более частым и более тесным контактам этих вирусов с людьми [Alexander et al., 2015; Mehedi et al., 2011; Bannister, 2010].

Данные ВОЗ по зарегистрированным вспышкам БВВЭ приведены на Рисунке 1 и в Таблице 1. В Таблице 2 - расследование причины вспышек БВВЭ. Для сравнения масштабов и географии вспышек, на Рисунке 2 ив Таблице 3 приведены данные ВОЗ по зарегистрированным вспышкам БВВМ.

Рисунок 1. Зарегистрированные случаи заболевания БВВЭ [WHO, 2019а]

Таблица 1 - Известные случаи заболевания БВВЭ в хронологическом порядке

Случаев Летальных

Год Страна Город заболевания (%) Возбудитель

2018-. 2020* Демократия еская республика Конго (ДРК) Северное Киву, Итури и Экваториальная провинции, 3444 2264 (66%) Zaire ebolavirus

08- ДРК Провинция 440 255 Zaire ebolavirus

12. 2018 Северное Киву (57,95%)

2017 Демократии еская республика Конго (ДРК) Ликати 8 4 (50%) Zaire ebolavirus

2014- Гвинея, Либерия, Много 28616 11310 Zaire ebolavirus

2016 Сьерра-Леоне (39,5%)

2014 ДРК Много 66 49 (74%) Zaire ebolavirus

2012 Уганда Район Луверо 6 (лаб подтв) 3 (лаб подтв) (50%) Sudan ebolavirus

2012 ДРК Зона Исиро 36 (лаб подтв) 13 (лаб подтв) (36%) Bundibugyo ebolavirus

2012 Уганда Район Кибаале 11(лаб подтв) 4 (лаб подтв) (36%) Sudan ebolavirus

2011 Уганда Район Луверо 1 1 (100%) Sudan ebolavirus

2008 ДРК Луебо 32 15 (47%) Zaire ebolavirus

2007 Уганда Бундибунджио 149 37 (25%) Bundibugyo ebolavirus

2007 ДРК Луебо 264 187 (71%) Zaire ebolavirus

2004 Южный Судан Ямбио 17 7 (41%) Sudan ebolavirus

2003 ДРК Мбомо 35 29 (83%) Zaire ebolavirus

2002 ДРК Мбомо 143 128 (90%) Zaire ebolavirus

2001 ДРК Не известно 57 43 (75%) Zaire ebolavirus

2001 Габон Либервилль 65 53 (82%) Zaire ebolavirus

2000 Уганда Гулу 425 224 (53%) Sudan ebolavirus

1996 Южная Африка Йоханнесбург 2 1 (50%) Zaire ebolavirus

1996 Габон Бооуе 60 45 (75%) Zaire ebolavirus

1996 Габон Майибаут 37 21 (57%) Zaire ebolavirus

1995 ДРК Киквит 315 250 (79%) Zaire ebolavirus

1994 Кот-д-Ивуар Тай Форест 1 0 (0) Taï Forest ebolavirus

1994 Габон Мекука 52 31 (60%) Zaire ebolavirus

1979 Южный Судан Нзара 34 22 (65%) Sudan ebolavirus

1977 ДРК Тандала 1 1 (100%) Zaire ebolavirus

1976 Южный Судан Нзара 284 151 (53%) Sudan ebolavirus

1976 ДРК Ямбуку 318 280 (88%) Zaire ebolavirus

*- эпидемия заканчивается по данным на 12 марта 2020 г.

Таким образом, летальность при БВВЭ колеблется от 36 % до 90%. Каждый случай заболевания ВГЛ подвергается эпидемиологическому расследованию с целью установить все возможные контакты инфицированного для дальнейшего купирования вспышки. Некоторые результаты расследования в качестве образца приведены в таблице 2.

Таблица 2 - Примеры эпидемиологического расследования случаев заболевания

при известных вспышках БВВЭ за период с 1976 по 2013 год [CDC, 2014b].

Число Числ

Год случаев заболев ания о смертей Описание

1 2 3 4

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Пьянков Степан Александрович, 2020 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Государственное издательство медицинской литературы; 1962. 182 с.

2. Бажутин Н.Б., Беланов Е.Ф., Спиридонов В.А., Войтенко А.В., Кривенчук Н.А. и др. Влияние способов экспериментального заражения вирусом Марбург на особенности протекания болезни у зеленых мартышек. // Вопросы вирусологии. - 1992. - №3 (37). - С.153-156.

3. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика: учебное пособие для бакалавров. 12-е изд. М.: Юрайт; 2013. 478 с.

4. Гончар Н.И., Пшеничнов В.А., Походяев В.А., Лопатов К. Л.; Фирсова И. В. Чувствительность к вирусу Марбург различных экспериментальных животных // Вопросы вирусологии. - 1991. - №5. - С.435-437.

5. ГОСТ Р 53022.3-2008. Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 3. Правила оценки клинической информативности лабораторных тестов. [электронный ресурс]. URL: http://docs.cntd.ru/document/902177791 (дата обращения 04.12.2019 г.).

6. Дадаева А.А., Сизикова Л.П., Чепурнов А.А., Субботина Е.Л. Особенности гематологических и иммунологических показателей при пассажах вируса Эбола на морских свинках // Вопросы вирусологии. - 2006. - Т. 51. - № 4. - С.32-37.

7. Кизимов Н.В., Луб М.Ю., Черный Н.Б., Беланов Е.Ф. Использование иммуноферментного анализа (ИФА) для обнаружения антигена вируса Марбург //Материалы Межведомственной конференции «Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций». Кольцово, 7-8 апреля 1993. - С.54.

8. Лопатин А.А., Найденова Е.В., Сафронов В.А., Раздорский А.С., Уткин Д.В. и др. Изучение сохранения вируса Эбола в биологических жидкостях

пациента на поздних стадиях выздоровления // Проблемы особо опасных инфекций. - 2015. - № 3. - С.73-77.

9. МКБ-10а А98.3. Международная классификация заболеваний-10 [электронный ресурс]. URL: http://mkb-10.com/index.php?pid=471 (дата обращения 25.03.2019 г.).

10. МКБ-10б А98.4. Международная классификация заболеваний-10 [электронный ресурс]. URL: http://mkb-10.com/index.php?pid=471 (дата обращения 25.03.2019 г.).

11. Мерзликин Н.В., Чепурнов А.А., Истомина Н.Н., Офицеров В.И., Воробьева М.С. Разработка и применение иммуноферментных тест-систем для диагностики лихорадки Эбола // Вопросы вирусологии. - 1995. - 40(1). - С.:31-5.

12. Михайлов В.В., Борисевич И.В., Черникова Н.К., Потрываева Н.В., Краснянский В.П. Оценка на павианах гамадрилах (Papio hamadryas) возможности специфической профилактики лихорадки Эбола // Вопросы вирусологии. - 1994. - 39 (2). - №9. - С.82-84.

13. Попова А.Ю., Сафронов В.А., Магасуба Н.Ф., Уткин Д.В., Одиноков Г.Н. и др. Организация и проведение диагностических исследований на базе мобильного комплекса специализированной противоэпидемической бригады в Республике Гвинея в период эпидемии лихорадки Эбола в 2014 году // Проблемы особо опасных инфекций. - 2014. - № 4. - С.5-8.

14. Попова А.Ю., Смоленский В.Ю., Ежлова Е.Б., Демина Ю.В., Омариев З.М. и др. Ликвидация эпидемии Эбола в Гвинейской Республике: опыт работы специализированной противоэпидемической бригады Роспотребнадзора // Под редакцией А.Ю. Поповой и В.В. Кутырева. 2 -е издание, переработанное и дополненное. - 2017. - Ижевск: ООО «Принт-2». - 388 с.

15. Походяев В.А., Гончар Н.И., Пшеничнов В.А. Экспериментальное изучение контактной передачи вируса Марбург // Вопросы вирусологии. -1991.- № 6. - С.506-508.

16. Президент РФ. 2019. Указ № 97 от 11 марта 2019 г. «Об Основах государственной политики Российской Федерации в области обеспечения химической и биологической безопасности на период до 2025 года и дальнейшую перспективу» [электронный ресурс]. URL: https://www. garant. ru/products/ipo/prime/doc/72092478/ (дата обращения 17.05.2019 г.).

17. Собрание законодательства РФ. 2018. О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2017 году: Государственный доклад // М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; 2018. - 268 с.

18. Собрание законодательства РФ. 2018. Федеральный закон от 21 ноября 2011 г. № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» в редакции от 03.08.2018 г.

19. Субботина Е. Л. Особенности генетической изменчивости вируса Эбола в процессе адаптации к морским свинкам // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Код специальности 03.00.03. - 2009. - ЦНМБ.; Шифр 03-9276.

20. Чумаков М.П., 1948а. Результаты экспедиции института неворологии по изучению омской геморрагической лихорадки // Вестник академии медицинских наук СССР. - 1948. - № 2. - С.19-26.

21. Чумаков М.П., 1948б. Этиология и эпидемиология геморрагических лихорадок // Терапевтический архив. - 1948. - №20. - С.85-86.

22. Abrantes J., van der Loo W., Le Pendu J., Esteves P.J. Rabbit haemorrhagic disease (RHD) and rabbit haemorrhagic disease virus (RHDV): A review // Veterinary Research. - 2012. - V.43. - Р.12.

23. Alexander K.A., Sanderson C.E., Marathe M., Lewis B.L., Rivers C.M. et al. What Factors Might Have Led to the Emergence of Ebola in West Africa? // PLoS Neglected Tropical Diseases. - 2015. - V.9(6). - e0003652.

24. Alves D.A., Glynn A.R., Steele K.E., Lackemeyer M.G., Garza N.L. et al. Aerosol exposure to the Angola strain of Marburg virus causes lethal viral

hemorrhagic fever in cynomolgus macaques // Veterinary Pathology. - 2010. -V.47. - P.831-851.

25. Baize S., Leroy E.M, Georges-Courbot M.C., Capron M., Lansoud-Soukate J. et al. Defective humoral responses and extensive intravascular apoptosis are associated with fatal outcome in Ebola virus-infected patients // Nature Medicine. - 1999. - V.5. - P.423-426.

26. Bamberg S., Kolesnikova L., Moller P., Klenk H.D., Becker S. VP24 of Marburg virus influences formation of infectious particles // Journal of Virology. - 2005. - V.79. - P.13421-13433.

27. Bannister B. Viral haemorrhagic fevers imported into non-endemic countries: risk assessment and management // British Medical Bulletin. - 2010- V.95. -I.1. - P.193-225.

28. Basler C.F., Wang X., Muhlberger E., Volchkov V., Paragas J. et al. The Ebola virus VP35 protein functions as a type I IFN antagonist // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2000. - V.97.

- P.12289-12294.

29. Becker S., Feldman H., Will C., Slenczka W. Evidence for occurence of filovirus antibodies in humans and imported monkeys do subclinical filovirus infections occur worldwide // Med. Microbiol. Immunol. - 1992. - V.181. - P. 43 - 55.

30. Becker S., Rinne C., Hofsass U., Klenk H.D., Muhlberger E. Interactions of Marburg virus nucleocapsid proteins // Virology. 1998. - V.249. - 406-417.

31. Becker S., Spiess M., Klenk H.D. The asialoglycoprotein receptor is a potential liver-specific receptor for Marburg virus // Journal of General Virology. - 1995.

- V.76. - P.393-399.

32. Becquart P., Mahlakov T., Nkoghe D., Leroy E.M. Identification of continuous human B-cell epitopes in the VP35, VP40, nucleoprotein and glycoprotein of Ebola virus // PLoS ONE. - 2014. - V.9. - e96360.

33. Bente D., Gren J., Strong J. E., Feldmann H.. Disease modeling for Ebola and Marburg viruses // Disease Models & Mechanisms. - 2009. - V.2. - P.12-17.

34. Bharat T.A., Riches J.D., Kolesnikova L., Welsch S., Krahling V. et al. Cryo-electron tomography of Marburg virus particles and their morphogenesis within infected cells // PLoS Biology. - 2011. - V.9. - e1001196.

35. Boehmann Y., Enterlein S., Randolf A., Muhlberger E. A reconstituted replication and transcription system for Ebola virus Reston and comparison with Ebola virus Zaire // Virology. - 2005. - V.332. - P.406-417.

36. Bosio C.M., Aman M.J., Grogan C., Hogan R., Ruthel G. et al. Ebola and Marburg viruses replicate in monocyte-derived dendritic cells without inducing the production of cytokines and full maturation // The Journal of Infectious Diseases. - 2003. - V.188. - P.1630-1638.

37. Bowen E.T., Lloyd G., Harris W.J., Platt G.S., Baskerville A., Vella E.E. «Viral Haemorrhagic Fever in Southern Sudan and Northern Zaire», Preliminary Studies on the Aetiological Agent // Lancet. - 1977. - V.1. - P.571-573.

38. Bramble M.S., Hoff N., Gilchuk P., Mukadi P., Kai L. et al. Pan-Filovirus Serum Neutralizing Antibodies in a Subset of Congolese Ebolavirus Infection Survivors // The Journal of Infectious Diseases. - 2018. - V.218. - I.12. -P.1929-1936

39. Brauburger K., Hume A.J., Muhlberger E., Olejnik J. Forty-Five Years of Marburg Virus Research // Viruses. - 2012. - V.4. - P. 1878-1927.

40. Bray M. The role of the Type I interferon response in the resistance of mice to filovirus infection // Journal of General Virology. - 2001. - V.82. - P.1365-1373.

41. Bray M., Davis K., Geisbert T., Schmaljohn C., Huggins J. A mouse model for evaluation of prophylaxis and therapy of Ebola hemorrhagic fever // The Journal of Infectious Diseases. - 1999. - V.178. - P.651-661.

42. Brindley M.A., Hughes L., Ruiz A., McCray P.B., Sanchez A. et al. Ebola virus glycoprotein 1: identification of residues important for binding and postbinding events // Journal of Virology. - 2007. - V.81. - P.7702-7709.

43. Broadhurst M.J., Kelly J.D., Miller A., Semper A., Bailey D. et al. ReEBOV Antigen Rapid Test kit for point-of-care and laboratory-based testing for Ebola virus disease: a field validation study // Lancet. - 2015. - V.386. - P.867-874.

44. Bwaka M.A., Bonnet M.J., Calain P., Mpia A., Colebunders R. et al. Ebola hemorrhagic fever in Kikwit, Democratic Republic of the Congo: clinical observations in 103 patients // The Journal of Infectious Diseases. - 1999. -V.179. - S.1. - P.7.

45. Burk R., Bollinger L., Johnson J.C., Wada J., Radoshitzky S.R. et al. Neglected filoviruses // FEMS Microbiology Reviews. - 2016. - V.40(4). - P.494-519.

46. Cagigi A., Ploquin A., Niezold T., Zhou Y., Tsybovsky Y. et al. Vaccine-Mediated Induction of an Ebolavirus Cross-Species Antibody Binding to Conserved Epitopes on the Glycoprotein Heptad Repeat 2/Membrane-Proximal External Junction // The Journal of Infectious Diseases. - 2018. -D.10.1093/infdis/jiy450.

47. van Cakenberghe V., de Vree F., Leirs H. On a collection of bats (Chiroptera) from Kikwit, Democratic Republic of the Congo. With French abstract // Mammalia. - 1999. - V.63. - P.291-322.

48. Calisher C.H., Childs J.E., Field H.E., Holmes K.V., Schountz T. Bats: Important reservoir hosts of emerging viruses // Clinical Microbiology Reviews. - 2006. V.19. - P.531-545.

49. Calisher C.H., Holmes K.V., Dominguez S.R., Schountz T., Cryan P. Bats prove to be rich reservoirs for emerging viruses // Microbe (Washington, DC). 2008. -V.3. - P.521-528.

50. Carette J.E., Raaben M., Wong A.C., Herbert A.S., Obernosterer G. et al. Ebola virus entry requires the cholesterol transporter Niemann-Pick C1 // Nature. -2011. - V.477. - P.340-343.

51. Carrion R. The common marmoset as a model for filovirus induced disease // Presented at the XIVth International Conference on Negative Strand Viruses. -Brugge, Belgium. - 2010.

52. CDC. 2007. CDC's Public Health Image Library [электронный ресурс]. URL: http:==phil.cdc.gov=phil=home.asp (дата обновления 01.09.2007 г.).

53. CDC. 2014а. Centers for Disease Control and Prevention. Outbreaks Chronology: Ebola Virus disease. [электронный ресурс] URL: http://www.cdc.gov/vhf/ebola/resources/outbreak-table.html (accessed 6 Sept 2014).

54. CDC. 2014b. Outbreaks Chronology: Ebola Virus Disease. [электронный ресурс]. URL: http:// www.cdc.gov/vhf/ebola/outbreaks/history/chronology. html (дата обновления 18.11.2014).

55. CDC. 2016. Centers for Disease Control and Prevention. Outbreaks Chronology: Ebola Virus disease. [электронный ресурс] URL: http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/205686/1/WH0sitrep_28Apr2016_eng. pdf?ua=1. (accessed 28 APRIL 2016).

56. Connolly B.M., Steele K.E., Davis K.J., Geisbert T.W., Kell W.M. et al. Pathogenesis of experimental Ebola virus infection in guinea pigs The Journal of Infectious Diseases. - 1999. - V.179. - S.1. - P.203-217.

57. Cooper P.D. A method for producing plaques in agar suspensions of animal cells // Virology. - 1955. - V.1. - P.397-401.

58. Cooper P.D. The plaque assay of animal viruses // Advances in Virus Research.

- 1961. - V.8. - P.319-378.

59. Côté M., Misasi J., Ren T., Bruchez A., Lee K. et al. Small molecule inhibitors reveal Niemann-Pick C1 is essential for Ebola virus infection // Nature. - 2011.

- V.477(7364). - P.344-8.

60. Dedkov V.G., Magassouba N., Safonova M.V., Bodnev S.A., Pyankov O.V. et al. Sensitive Multiplex Real-time RT-qPCR Assay for the Detection of Filoviruses // Health Security. - 2018. - V.16(1). - P.14-21.

61. Dixon L.K., Abrams C.C., Chapman D.G., Zhang F. African swine fever virus // In:Animal viruses molecular biology (eds. T. C. Mettenleiter & F. Sobrino). -2008. - Norwich, UK. - Caister Academic Press. - P.457-521.

62. Drosten C., Kummerer B.M., Schmitz H., Gunther S. Molecular diagnostics of viral hemorrhagic fevers // Antiviral Research. - 2003. - V.57. - P.61-87.

63. Dulbecco R. Production of plaques in monolayer tissue cultures by single particles of an animal virus // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 1952. - V.38. - P.747-752.

64. Feldmann H., Kawaoka Y. Molecular determinants of Ebola virus virulence in mice // PLoS Pathogens. - 2006. - V.2. -P.73.

65. Eichner M., Dowell S. F., Firese N. Incubation period of Ebola hemorrhagic virus subtype Zaire // Osong Public Health and Research Perspectives. - 2011. -V.2. - P.3-7.

66. Elliott L. H., Kiley M. P., McCormick J. B. Descriptive analysis of Ebola virus proteins // Virology. - 1985. - V. 147. - P.169-176.

67. Enterlein S., Schmidt K.M., Schumann M., Conrad D. Krähling V. et al. The Marburg virus 3' noncoding region structurally and functionally differs from that of Ebola virus // Journal of Virology. - 2009. - V.83. - P.4508-4519.

68. Feldmann H., Jones S.M., Schnittler H.J., Geisbert T. Therapy and prophylaxis of Ebola virus infections // Current opinion in investigational drugs. - 2005. -V.6. - P.823-830.

69. Finney D.J. Probit analysis, third edition. Cambridge University Press. -Cambridge. - United Kingdom. 1971.

70. Flint J.S., Enquist L.W., Shalka A.M. Virological methods. Principles of Virology. - Third edition. -ASM - 2009. - Chapter 2.

71. Fowler T., Bamberg S., Moller P., Klenk H.D., Meyer T.F. et al. Inhibition of Marburg virus protein expression and viral release by RNA interference // Journal of General Virology. - 2005. - V.86. -P.1181-1188.

72. Francica J.R., Varela-Rohena A., Medvec A., Plesa G., Riley J.L., Bates P. Steric Shielding of Surface Epitopes and Impaired Immune Recognition Induced by the Ebola Virus Glycoprotein // PLOS Pathogens. - 2010. - V.6(9). -e1001098.

73. Geisbert T.W., Jahrling P.B. Differentiation of filoviruses by electron microscopy // Virus Research. - 1995. - V.39. - P. 129-150.

74. Geisbert T. W., Young H. A., Jahrling P. B., Davis K. J., Larsen T. et al. Pathogenesis of Ebola hemorrhagic fever in primate models: Evidence that hemorrhage is not a direct effect of virus-induced cytolysis of endothelial cells // The American Journal of Pathology. - 2003. - V.163. - P.2371-2382.

75. Geisbert T. W., Daddario-DiCaprio K.M., Geisbert J.B., Young H.A., Formenty P. et al. Marburg virus Angola infection of rhesus macaques: Pathogenesis and treatment with recombinant nematode anticoagulant protein c2 // The Journal of Infectious Diseases. - 2007. - V.196. - P.372-381.

76. Goldstein T., Anthony S.J., Gbakima A., Bird B.H., Bangura J. et al. The discovery of Bombali virus adds further support for bats as hosts of ebolaviruses // Nature Microbiology. - 2019. - V.3(10). P.1084-1089.

77. Gramberg T., Hofmann H., Moller P., Lalor P.F., Marzi A. et al. Lectin interacts with filovirus glycoproteins and the spike protein of SARS coronavirus // Virology. - 2005. - V.340. - P.224-236.

78. Grard G., Fair J.N., Lee D., Slikas E., Steffen I. et al. A novel rhabdovirus associated with acute hemorrhagic fever in central Africa // PLoS Pathogens. -2012. - V.8(9). - e1002924.

79. Gunther S., Weisner B., Roth A., Grewing T., Asper M. et al. Lassa fever encephalopathy: Lassa virus in cerebrospinal fluid but not in serum // The Journal of Infectious Diseases. - 2001. -V.184. - P.345 - 349.

80. Han Z., Boshra H., Sunyer J.O., Zwiers S.H., Paragas J., Harty R. N. Biochemical and functional characterization of the Ebola virus VP24 protein: implications for a role in virus assembly and budding // Journal of Virology. -2003. - V.77. - P.1793-1800.

81. Harty R.N., Brown M.E., Wang G., Huibregtse J., Hayes F.P. A PPxY motif within the VP40 protein of Ebola virus interacts physically and functionally with a ubiquitin ligase: implications for filovirus budding // Proceedings of the

National Academy of Sciences of the United States of America. - 2000. - V.97.

- P.13871-13876.

82. Hayman D.T., Emmerich P., Yu M., Wang L.F., Suu-Ire R. et al. Long-term survival of an urban fruit bat seropositive for Ebola and Lagos bat viruses // PLoS One. - 2010. - e11978.

83. Hayman D.T., Yu M., Crameri G., Wang L.F., Suu-Ire R. et al. Ebola virus antibodies in fruit bats, Ghana, West Africa // Emerging Infectious Diseases. -2012. - V.18. - P.1207-1209.

84. Hensley L.E., Alves D.A., Geisbert J.B., Fritz E.A., Reed C. et al. Pathogenesis of Marburg hemorrhagic fever in cynomolgus macaques // The Journal of Infectious Diseases. - 2011. - V.204. - P. 1021-1031.

85. Hensley L.E., Young H.A., Jahrling P.B., Geisbert T.W. Proinflammatory response during Ebola virus infection of primate models: Possible involvement of the tumor necrosis factor receptor superfamily // Immunology Letters. - 2002.

- V.80. - P.169-179.

86. Hirabayashi Y.; Oka S.; Goto H.; Shimada K.; Kurata T. et al. An imported case of Lassa fever with late appearance of polyserositis // The Journal of Infectious Diseases. - 1988. - V.158. - P.872 - 875.

87. Howard C.R., Fletcher N.F. Emerging virus diseases: can we ever expect the unexpected? // Emerging Microbes and Infections. - 2012. - V.1. - e46.

88. Huang Y., Xu L., Sun Y., Nabel G.J. The assembly of Ebola virus nucleocapsid requires virionassociated proteins 35 and 24 and posttranslational modification of nucleoprotein // Molecular Cell. - 2002. - V.10. - P.307-316.

89. ICTV. 2019. International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) [электронный ресурс]. URL: https://talk.ictvonline.org/taxonomy/ (дата обращения 25.03.2019 г.).

90. Moe J.B., Lambert R.D., Lupton H.W. Plaque assay for Ebola virus // Journal of Clinical Microbiology. - 1981. - V.13. - P.791-793.

91. Jack P.J., Boyle D.B., Eaton B.T., Wang L-F. The complete genome sequence of J virus reveals a unique genome structure in the family Paramyxoviridae // Journal of Virology. - 2005. - V.79. - P.10690-10700.

92. Jasenosky L. D., Neumann G., Lukashevich I., Kawaoka Y. Ebola virus VP40-induced particle formation and association with the lipid bilayer // Journal of Virology. - 2001. - V.75. - P.5205-5214.

93. Kuhn J.H., Clawson A.N., Radoshitzky S.R., Wahl-Jensen V., Bavari S, Jahrling P.B. Viral Hemorrhagic Fevers: History and Definitions. In: Viral Hemorrhagic Fevers. SRC Press. - 2014. - P.3-14.

94. Johnson K.M., Webb P.A., Lange J.V., Murphy F.A. Isolation and partial characterisation of a new virus causing acute haemorrhagic fever in Zaire // Lancet. - 1977. - V.309. - P.569-571.

95. Jordan I., Horn D., Oehmke S., Leendertz F.H., Sandig V. Cell lines from the Egyptian fruit bat are permissive for modified vaccinia Ankara // Virus Research. - 2009. - V. 145. - P.54-62.

96. Jouvenet N., Neil S.J., Zhadina M., Zang T., Kratovac Z. et al. Broad-spectrum inhibition of retroviral and filoviral particle release by tetherin // Journal of Virology. - 2009. - V.83. - P.1837-1844.

97. Kainulainen M.H., Nichol S.T., Albarino C.G., Spiropoulou C.F. Rapid Determination of Ebolavirus Infectivity in Clinical Samples Using a Novel Reporter Cell Line // The Journal of Infectious Diseases. - 2017. - V.216(11). -P.1380-1385.

98. Khan A.S., Maupin G.O., Rollin P.E., Noor A.M., Shurie H.H. et al. An outbreak of Crimean-Congo hemorrhagic fever in the United Arab Emirates, 1994-1995 // The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. - 1997. - V.57. - P.519 - 525.

99. Khobloch J., Albiez E., Schmitz H. A serological survey on viral haemorrhagic fevers in Liberia // Annales de l Institut Pasteur Virologie - 1982. - V.133. -P.125 - 128.

100. Kiley M.P., Bowen E.W., Eddy G.A., Isaäcson M., Johnson K.M. et al. Filoviridae: a taxonomic home for Marburg and Ebola viruses? // Intervirology.

- 1982. - V.18. - P.24-32.

101. King A.M.Q., Adams M.J., Carstens E.B., Lefkowitz E.J. Virus Taxonomy— Ninth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. Elsevier/Academic Press. - London. U.K. - 2011.

102. Kissling R. E., Robinson R.Q., Murphy F.A., Whitfield S.G. Agent of disease contracted from green monkeys // Science. - 1968. - V. 160. - P.888-890.

103. Kolakofsky D., Le Mercier P., Iseni F., Garcin D. Viral DNA polymerase scanning and the gymnastics of Sendai virus RNA synthesis // Virology. - 2004.

- V.318. - P.463-473.

104. Kolesnikova L., Berghofer B., Bamberg S., Becker S. Multivesicular bodies as a platform for formation of the Marburg virus envelope // Journal of Virology. -2004. - V.78. - P.12277-12287.

105. Kolesnikova L., Mittler E., Schud, G., Shams-Eldin H., Becker S. Phosphorylation of Marburg virus matrix protein VP40 triggers assembly of nucleocapsids with the viral envelope at the plasma membrane // Cellular microbiology. - 2012. - V. 14. - P.182-197.

106. Kondratowicz A.S., Lennemann N.J., Sinn P.L., Davey R.A., Hunt C.L. et al. T-cell immunoglobulin and mucin domain 1 (TIM-1) is a receptor for Zaire Ebolavirus and Lake Victoria Marburgvirus // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2011. - V.108. -P.8426-8431.

107. Krähling V., Becker D., Rohde C., Eickmann M., Eroglu Y. et al. European Mobile Laboratory consortium. Development of an antibody capture ELISA using inactivated Ebola Zaire Makona virus // Medical Microbiology and Immunology. - 2016. - V.205(2). - P.173-183.

108. Krahling V., Dolnik O., Kolesnikova L., Schmidt-Chanasit J., Jordan I. et al. Establishment of fruit bat cells (Rousettus aegyptiacus) as a model system for

the investigation of filoviral infection // PLoS Neglected Tropical Diseases. -2010. - V.4. - e802.

109. Kuhl A., Hoffmann M., Muller M.A., Munster V.J., Gnirss K. et al. Comparative analysis of Ebola virus glycoprotein interactions with human and bat cells // The Journal of Infectious Diseases - 2011. - V.204(3). - P.840-849.

110. Kuhn J.H. Ebolavirus and Marburgvirus Infections. In: Harrison's Principles of Internal Medicine. McGraw-Hill Education. Columbus. Ohio. USA. - 2015. -P.1323-1329.

111. Kuhn J.H. Filoviruses. 2008. A compendium of 40 years of epidemiological, clinical, and laboratory studies // Archives of Virology. - V. 20. - P.13-360.

112. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. - 1970. - V.227(259). - P.680-685.

113. Laminger F., Prinz A. Bats and other reservoir hosts of Filoviridae. Danger of epidemic on the African continent? A deductive literature analysis // Wiener klinische Wochenschrift. - 2010. - V.122(3). - P. 19-30.

114. Lange A., Blome S., Moennig V., Greiser-Wilke I.. Pathogenesis of classical swine fever—Similarities to viral haemorrhagic fevers: A review // Berliner und Münchener tierärztliche Wochenschrift. - 2011. - V.124. - P.36-47.

115. Le Guenno B. Emerging viruses // Scientific American. - 1995. - V.273. -P.56-64.

116. Leffel E. K., Reed D. S. Marburg and Ebola viruses as aerosol threats. Biosecurity and Bioterrorism. - 2004. - V.2. - P.186-191.

117. Leroy E. M., Baize S., Mavoungou E., Apetrei C. Sequence analysis of the GP, NP, VP40 and VP24 genes of Ebola virus isolated from deceased, surviving and asymptomatically infected individuals during the 1996 outbreak in Gabon: Comparative studies and phylogenetic characterization // Journal of General Virology/ - 2002. - V.83. - P.67-73.

118. Leroy E. M., Baize S., Debre P., Lansoud-Soukate J., Mavoungou E. Early immune responses accompanying human asymptomatic Ebola infections // Journal of Clinical & Experimental Immunology. - 2001. - V.124. - P.453-460.

119. Leroy E. M., Baize S., Volchkov V.E., Fisher-Hoch S.P., Georges-Courbot M.C. et al. Human asymptomatic Ebola infection and strong inflammatory response // Lancet. - 2000. - V.355. - P.2210-2215.

120. Leroy E.M., Kumulungu B., Pourrut X., Rouquet P., Hassanin A. et al. Fruit bats as reservoirs of Ebola virus // Nature. - 2005. - V.438. - P.575-576.

121. Li Z., Yu M., Zhang H., Magoffin D.E., Jack P.J.M. et al. Beilong virus, a novel paramyxovirus with the largest genome of non-segmented negative-stranded RNA viruses // Virology. - 2006. - V.346. - P.219-228.

122. Liu Q., Fan C., Li Q., Zhou S., Huang W. et al. Antibody-dependent-cellular-cytotoxicity-inducing antibodies significantly affect the post-exposure treatment of Ebola virus infection // International Journal of Scientific Reports. - 2017. -V.7. - e45552.

123. Lofts L. L., Wells J. B., Bavari S., Warfield K.L. Key genomic changes necessary for an in vivo lethal mouse marburgvirus variant selection process // Journal of Virology. - 2011. - V.85. - P.3905-3917.

124. Lowry O., Rosebrough N., Farr A., Randall R. Protein measurment with the folin phenol reagent // Journal of Biological Chemistry. - 1951. - V.193. -P.265-270.

125. Maganga G.D., Bourgarel M., Ebang Ella G., Drexler J.F. et al. Is Marburg virus enzootic in Gabon? // The Journal of Infectious Diseases. - 2011. - V.204(3). -P.800-803.

126. Manicassamy B., Wang J., Jiang H., Rong L. Comprehensive analysis of ebolavirus GP1 inviralentry // Journal of Virology. - 2005. - V.79. - P.4793-4805.

127. Martina B.E., Osterhaus A.D.M.E. «Filoviruses»: A real pandemic threat? // EMBO Molecular Medicine. - 2009. - V.1. - P.10-18.

128. Martinez M.J., Biedenkopf N., Volchkova V., Hartlieb B., Alazard-Dany N. et al. Role of Ebola virus VP30 in transcription reinitiation // Journal of Virology. - 2008. - V.82. - P. 12569-12573.

129. Marzi A., Gramberg T., Simmons G., Moller P., Rennekamp A.J. et al. DC-SIGN and DC-SIGNR interact with the glycoprotein of Marburg virus and the S protein of severe acute respiratory syndrome coronavirus // Journal of Virology. - 2004. - V.78 - P. 12090-12095.

130. Matsuno K., Kishida N., Usami K., Igarashi M., Yoshida R. et al. Different potential of C-type lectin-mediated entry between Marburg virus strains // Journal of Virology. - 2010. - V.84. - P.5140-5147.

131. Mehedi M., Falzarano D., Seebach J., Hu X., Carpenter M.S. et al. A new Ebola virus nonstructural glycoprotein expressed through RNA editing // Journal of Virology. - 2011. - V.85. - P.5406-5414.

132. Mehedi M., Groseth A., Feldmann H., Ebihara H. Clinical aspects of Marburg hemorrhagic fever // Future Virology. - 2011. - V.6. - P.1091-1106.

133. Messenger S.L., Rupprecht C.E., Smith J.S. Bats, emerging virus infections, and the rabies paradigm. In: Bat Ecology. - The University of Chicago Press. Chicago. - 2003. - P.622-679.

134. Miller E.H., Chandran K. Filovirus entry into cells-New insights // Current Opinion in Virology. - 2012. - V.2. - P.206-214.

135. Miller E.H., Obernosterer G., Raaben M., Herbert A.S., Deffieu M.S. et al. Ebola virus entry requires the host-programmed recognition of an intracellular receptor // The European Molecular Biology Organization Journal. - 2012. -V.31. - P.1947-1960.

136. Monath T.P. Ecology of Marburg and Ebola Viruses: Speculations and Directions for Future Research // The Journal of Infectious Diseases. - 1999. -V.179(1). - P.127-138.

137. Muhlberger E., Lotfering B., Klenk H.D., Becker S. Three of the four nucleocapsid proteins of Marburg virus, NP, VP35, and L, are sufficient to mediate replication and transcription of Marburg virusspecific monocistronic minigenomes // Journal of Virology. - 1998. - V.72. - P.8756-8764.

138. Muhlberger E., Weik M., Volchkov V.E., Klenk H.D, Becker S. Comparison of the transcription and replication strategies of Marburg virus and Ebola virus by

using artificial replication systems // Journal of Virology. - 1999. - V.73. -P.2333-2342.

139. Muhlberger E., Sanchez A., Randolf A., Will C., Kiley M.P. et al. The nucleotide sequence of the L gene of Marburg virus, a filovirus: Homologies with paramyxoviruses and rhabdoviruses // Virology. - 1992. - V.187. - P.534-547.

140. Mullen L.M., Nair S.P., Ward J.M., Rycroft A.N., Henderson B. Phage display in the study of infectious diseases // Trends in Microbiology. - 2006. - V.14. -P.141-147.

141. Murphy F. A., van der Groen G., Whitfield S.G., Lange J.V. Ebola and Marburg virus morphology and taxonomy. In: Ebola Virus Haemorrhagic Fever. -Amsterdam. The Netherlands. - Elsevier/North-Holland. - 1978. - P.61-82.

142. Negredo A., Palacios G., Vazquez-Moron S., Gonzalez F., Dopazo H. et al. Discovery of an ebolavirus-like filovirus in Europe // PLoS Pathogens. - 2011. -V.7., - e1002304.

143. Ng M., Ndungo E., Jangra R.K., Cai Y., Postnikova E. et al. Cell entry by a novel European filovirus requires host endosomal cysteine proteases and Niemann-Pick C1 // Virology. - 2014. - V.468-470. - P.637-646.

144. Nouvellet P., Garske T., Mills H.L., Nedjati-Gilani G., Hinsley W. et al. The role of rapid diagnostics in managing Ebola epidemics // Nature. - 2015. -V.528. - P. 109-116.

145. Omatsu T., Watanabe S., Akashi H., Yoshikawa Y. Biological characters of bats in relation to natural reservoir of emerging viruses // Comparative Immunology, Microbiology & Infectious Diseases. - 2007. - V.30. - P.357-374.

146. Pande J., Szewczyk M.M. Grover A.K. Phage display: concept, innovations, applications and future // Biotechnology Advances. - 2010. - V.28. - P.849-858.

147. Panning M., Laue T., Ölschlager S., Eickmann M., Becker S. et al. Diagnostic Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction Kit for Filoviruses Based on

the Strain Collections of all European Biosafety Level 4 Laboratories // The Journal of Infectious Diseases. - 2007. - V.196(2). - P.199.

148. Pattyn S., van der Groen G., Courteille G., Jacob W., Piot P. Isolation of Marburg-like virus from a case of haemorrhagic fever in Zaire // Lancet. - 1977. - V.1. - P. 573-574.

149. Peters C.J., Liu C.T., Anderson G.W., Morrill J.C., Jahrling P.B. Pathogenesis of viral hemorrhagic fevers: Rift Valley fever and Lassa fever contrasted // Reviews of infectious diseases. - 1989. - V.11(4). - P.743-749.

150. Peters C.J., Feldmann S.H., Rollin P.E., Nichol S., Ksiazek T.G. Filoviruses as emerging pathogens / Virology. - 1994. - V.5. - P. 147-154.

151. Peterson A.T., Bauer J.T., Mills J.N. Ecologic and geographic distribution of Filovirus disease // Emerging Infectious Diseases. - 2004. - V.10. - P.40-47.

152. Peterson A.T., Ryan Lash R., Carroll D.S., Johnson K.M. Geographical potential for outbreaks of Marburg hemorrhagic fever // The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. - 2006. - V.75. - P.9-15.

153. Pigott D.M., Deshpande A., Letourneau I., Morozoff C., Reiner R.C. et al. Local, national, and regional viral haemorrhagic fever pandemic potential in Africa: a multistage analysis // Lancet. - 2017. - V.390(10113). - P.2662-2672.

154. Pourrut X., Delicat A., Rollin P.E., Ksiazek T.G., Gonzalez J.P., Leroy E.M., Spatial and temporal patterns of Zaire ebolavirus antibody prevalence in the possible reservoir bat species // The Journal of Infectious Diseases. - 2007. -V.196(2). - P.176-183.

155. Pourrut X., Leroy E., Gonzalez J.P. Ebola: From bats to Gorillas // The Gorilla Journal. - 2006. - P. 19.

156. Pyankov O.V., Setoh Y.X., Bodnev S.A., Edmonds J.H., Pyankova O.G. et al. Successful post-exposure prophylaxis of Ebola infected non-human primates using Ebola glycoprotein-specific equine IgG // Scientific Reports. - Article number: 41537 (2017). - [электронный ресурс]. URL: https://doi.org/10.1038/srep41537 (дата обращения 21.05.2019).

157. Pyankov O.V., Bodnev S.A., Pyankova O.G., Solodkyi V.V., Pyankov S.A. et al. A Kunjin replicon virus-like particle vaccine provides protection against ebola virus infection in nonhuman primates // Journal of Infectious Diseases. -2015. - Vol. 212. - P. S368-S371.

158. Raymond J., Bradfute S., Bray M. Filovirus infection of STAT-1 knockout mice // The Journal of Infectious Diseases. - 2011. - V.204(3). - P.986-990.

159. Reed L.J., Muench H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints // The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. - 1938. - V.27. -P.493-497.

160. Robin Y., Bres P., Camain R. Passage of Marburg virus in guinea pigs. In: Marburg Virus. - Springer-Verlag. New York. - 1971. - P. 117-122.

161. Roddy P. A call to action to enhance filovirus disease outbreak preparedness and response // Viruses. - 2014 - V.6. - P.3699-3718.

162. Ryabchikova E.I., Kolesnikova L.V., Netesov S.V. Animal pathology of filoviral infections // Current Topics in Microbiology and Immunology. - 1999. - V.235 - P.145-173.

163. Ryabchikova E., Kolesnikova L., Smolina M., Tkachev V., Pereboeva L. et al. Ebola virus infection in guinea pigs: Presumable role of granulomatous inflammation in pathogenesis // Archives of Virology. - 1996. - V.141. -P.909-921.

164. Ryabchikova E.I., Price B.B.S. Ebola and Marburg viruses—a view of infection using electron microscopy. - Battelle Press. Columbus. Ohio. USA. - 2004.

165. Sanchez A., Lukwiya M., Bausch D., Mahanty S., Sanchez A.J. et al. Analysis of human peripheral blood samples from fatal and nonfatal cases of Ebola (Sudan) hemorrhagic fever: Cellular responses, virus load, and nitric oxide levels // Journal of Virology. - 2004. - V.78. - P.10370-10377.

166. Sanchez A., Trappier S.G., Mahy B.W., Peters C.J., Nichol S.T. The virion glycoproteins of Ebola viruses are encoded in two reading frames and are expressed through transcriptional editing // Proceedings of the National

Academy of Sciences of the United States of America. - 1996. - V.93. -P.3602-3607.

167. Sanchez A., Yang Z.Y., Xu L., Nabel G.J., Crews T., Peters C.J. Biochemical analysis of the secreted and virion glycoproteins of Ebola virus // Journal of Virology. - 1998. - V.72. - P.6442-6447.

168. Schmitz H. Virological and epidemiological aspects of Dengue fever // Nova Acta Leopoldina. - 2000. - V.80. - P.153 - 161.

169. Senga M., Pringle K., Ramsay A., Brett-Major D.M., Fowler R. et al. Factors underlying Ebola virus infection among health workers, Kenema, Sierra Leone, 2014-2015. Clinical Infectious Diseases. 2016. - V.201663. - P.454-459.

170. Siegert R., Shu H.L., Slenczka W., Peters D., Müller G. Zur Ätiologie einer unbekannten, von Affen ausgegangenen menschlichen Infektionskrankheit // Deutsche Medizinische Wochenschrift. - 1967. - V.92. - P.2341-2343.

171. Simmons N.B. Order Chiroptera. In: Mammal Species of the World: A Taxonomic and Geographic Reference, third edition. - Johns Hopkins University Press. Baltimore. MD. - 2005.

172. Simpson D.I., Zlotnik I., Rutter D.A. Vervet monkey disease. Experiment infection of guinea pigs and monkeys with the causative agent // British journal of experimental pathology. - 1968. - V.49. - P.458-464.

173. Singh K., Marasini B., Chen X., Spearman P. A novel Ebola virus antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (Ebola ADCC) assay // The Journal of Immunological Methods. 2018. - V.460. - P.10-16.

174. Sobarzo A., Groseth A., Dolnik O., Becker S., Lutwama et al. Profile and persistence of the virus-specific neutralizing humoral immune response in human survivors of Sudan ebolavirus (Gulu) // The Journal of Infectious Diseases. - 2013. - V.208. - P.299-309.

175. Stroher U., Feldmann H. Progress towards the treatment of Ebola haemorrhagic fever // Expert Opinion on Investigational Drugs. - 2006. - V.15. - P.1523-1535.

176. Strong J.E., Wong G., Jones S.E., Grolla A., Theriault S. et al. Stimulation of Ebola virus production from persistent infection through activation of the Ras/MAPK pathway // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2008. - V.105. - P.17982-17987.

177. Subbotina E., Dadaeva A., Kachko A., Chepurnov A. Genetic factors of Ebola virus virulence in guinea pigs // Virus Research. - 2010. - V.153(1). - P.121-133.

178. Suleiman M.N., Muscat-Baron J.M., Harries J.R, Satti A.G., Platt G.S., Bowen E.T., Simpson D.I. Congo/Crimean haemorrhagic fever in Dubai. An outbreak at the Rashid Hospital // Lancet. - 1980. - V.45. - P.939-941.

179. Swanepoel R., Leman P.A., Burt F.J., Zachariades N.A., Braack L.E.O. et al. Experimental inoculation of plants and animals with Ebola virus // Emerging Infecioust Diseases. - 1996. - V.2. - P.321-325.

180. Swenson D.L., Warfield K.L., Kuehl K., Larsen T., Hevey M.C. et al. Generation of Marburg virus-like particles by co-expression of glycoprotein and matrix protein // FEMS Immunology And Medical Microbiology. - 2004. -V.40. - P.27-31.

181. Taniguchi S., Watanabe S., Masangkay J.S., Omatsu T., Ikegami T. et al. Reston ebolavirus antibodies in bats, the Philippines // Emerging Infectious Diseases. -2011. - V.17. - P1559-1560.

182. Taylor D.J., Ballinger M.J., Zhan J.J., Hanzly L.E., Bruenn J.A. Evidence that ebolaviruses and cuevaviruses have been diverging from marburgviruses since the Miocene // Peer-reviewed Journal of Life and Environmental Sciences. -2014. - V.2. - e556.

183. Teeling E.C., Springer M.S., Madsen O., Bates P., O'Brien S.J., Murphy W.J. A molecular phylogeny for bats illuminates biogeography and the fossil record // Science. - 2005. - V.307. - P.580-584.

184. Teichmann D., Grobusch M.P., Wesselmann H. A haemorrhagic fever from the Cote d'Ivoire // Lancet. - 1999. - V.354. - P. 1608.

185. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and applications // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 1979. - V.76. - P.4350-4354.

186. Towner J.S., Amman B.R., Sealy T.K., Carroll S.A., Comer J.A. et al. Isolation of genetically diverse Marburg viruses from Egyptian fruit bats // PLoS Pathogenes. - 2009. - V.5. - e1000536.

187. Towner J.S., Pourrut X., Albarino C.G., Nkogue C.N., Bird B.H. et al. Marburg virus infection detected in a common African bat // PLoS One. - 2007. - V.2. -P.764.

188. Urata S., Noda T., Kawaoka Y., Morikawa S., Yokosawa H., Yasuda J. Interaction of Tsg101 with Marburg virus VP40 depends on the PPPY motif, but not the PT/SAP motif as in the case of Ebola virus, and Tsg101 plays a critical role in the budding of Marburg virus-like particles induced by VP40, NP, and GP // The Journal of Virology. - 2007. - V.81. - P.4895-4899.

189. Valmas C., Basler C.F. Marburg virus VP40 antagonizes interferon signaling in a species-specific manner // The Journal of Virology. - 2011. - V.85. - P.4309-4317.

190. Valmas C., Grosch M.N., Schumann M., Olejnik J., Martinez O. et al. Marburg virus evades interferon responses by a mechanism distinct from Ebola virus // PLoS Pathogenes. - 2010. - V.6. - e1000721.

191. Van der Groen G., Jacob W., Pattyn S.R. Ebola virus virulence for newborn mice // The Journal of Medical Virology. - 1979. - V.4. - P.239-240.

192. Vetter P., Fischer WA., Schibler M., Jacobs M., Bausch D.G., Kaiser L. Ebola Virus Shedding and Transmission: Review of Current Evidence // The Journal of Infectious Diseases. - 2016. - V.214(3). - P.177-184.

193. Visual Science. 2012. Плакат «Вирус Эбола» [электронный ресурс] URL: https://visual-science.com/ru/projects/ebola/ebola-virus-poster/ (дата загрузки 02.06.2012 г.).

194. Volchkov V.E., Becker S., Volchkova V.A., Ternovoj V.A., Kotov P.A. et al. GP mRNA of Ebola virus is edited by the Ebola virus polymerase and by T7 and vaccinia virus polymerases // Virology. - 1995. - 214, - P.421-430.

195. Volchkov V.E., Volchkova V.A., Stroher U., Becker S., Dolnik O. et al. Proteolytic processing of Marburg virus glycoprotein // Virology. - 2000. -V.268. - P.1-6.

196. Vu H., Shulenin S., Grolla A., Audet J., He S. et al. Quantitative serology assays for determination of antibody responses to Ebola virus glycoprotein and matrix protein in nonhuman primates and humans // Antiviral Research. - 2016. -V.126. - P.55-61.

197. Walker N.F., Brown C.S., Youkee D., Baker P., Williams N. et al. Evaluation of a point-of-care blood test for identifi cation of Ebola virus disease at Ebola holding units, Western Area, Sierra Leone, January to February 2015 // Euro Surveillance. 2015. - V.20. - PII:21073.

198. Wang L.F., Yu M., Hansson E., Pritchard L.I., Shiell B. et al. The exceptionally large genome of Hendra virus: support for creation of a new genus within the family Paramyxoviridae // The Journal of Virology. - 2000. - V.74. - P.9972-9997.

199. Wang L.F., Walker P.J., Poon L.L. Mass extinctions, biodiversity and mitochondrial function: Are bats 'special' as reservoirs for emerging viruses? // Current Opinion in Virology. - 2011. - V.1. - P.649-657.

200. Warfield K.L., Swenson D.L., Olinger G.G., Kalina W.V., Aman M.J., Bavari S. Ebola virus-like particle-based vaccine protects nonhuman primates against lethal Ebola virus challenge. - The Journal of Infectious Diseases. - 2007. -V.196(2). - P.430-437.

201. Warfield K. L., Bradfute S.B., Wells J., Lofts L., Cooper M.T. et al. Development and characterization of a mouse model for Marburg hemorrhagic fever // The Journal of Virology. - 2009. - V.83. - P.6404-6415.

202. Wauquier N., Becquart P., Padilla C., Baize S., Leroy E.M. Human Fatal Zaire Ebola Virus Infection Is Associated with an Aberrant Innate Immunity and with

Massive Lymphocyte Apoptosis // PLoS Neglected Tropical Diseases. 2010. -V.4(10). - P.837.

203. Weissenhorn W., Carfi A., Lee K.H., Skehel J.J., Wiley D.C. Crystal structure of the Ebola virus membrane fusion subunit, GP2, from the envelope glycoprotein ectodomain // Molecular Cell. - 1998. - V.2. - P.605-616.

204. WHO. 2003. Report of a collaborative study to 1) assess the suitability of a candidatereplacement International Standard for HBsAg and a reference panel for HBsAg and 2) to calibrate the candidate standard in IU. [электронный ресурс] URL: https://www.who.int/bloodproducts/publications/en/1987_ HBsAg _20study _draft_report.pdf. (дата обращения 25.03.2019 г.).

205. WHO. 2014а. Case definition recommendations for Ebola or Marburg virus diseases. WHO/EVD/CaseDef/14.1.

206. WHO. 2014b. Laboratory diagnosis of Ebola virus disease. WHO/EVD/GUIDANCE/LAB/14.1.

207. WHO. 2015а. EBOV AgDetect. [электронный ресурс] URL: http://www.who.int/csr/resources/publications/ebola/ebola-antigen-detection/en/.

208. WHO. 2015b. EBOV LabGuid. [электронный ресурс] URL: http://who.int/csr/resources/publications/ ebola/laboratory-guidance/en/.

209. WHO. 2015с. EBOV TargProdProf. [электронный ресурс] URL: http://www. who. int/medicines/publications/target-product-profile. pdf?ua=1.

210. WHO. 2015d. EMERGENCY GUIDANCE. Selection and use of Ebola in vitro diagnostic (IVD) assays. WHO/EVD/HIS/EMP/15.2.

211. WHO. 2015e. Library Cataloguing-in-Publication Data. World health statistics. [электронный ресурс]. URL: https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/ 170250/9789240694439_eng.pdf;jsessionid=5A81593B873FE66AEC38E4E236 5AC284?sequence=1 (дата обращения 25.03.2019 г.).

212. WHO. 2016. Situation report, 28 APRIL [электронный ресурс]. URL: http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/205686/1/WHOsitrep_28Apr2016_eng. pdf?ua=1 (дата обращения 25.03.2019 г.).

213. WHO. 2017а. Marburg virus disease. Fact sheet. [электронный ресурс]. URL: http://www.who.int/csr/disease/marburg/en/ (дата обращения 25.03.2019 г.).

214. WHO. 2017b. WEEKLY EPIDEMIOLOGICAL RECORD, NO 22, 2 JUNE.

215. WHO. 2018. Global Health Estimates 2016: Disease burden by Cause, Age, Sex, by Country and by Region, 2000-2016. Geneva, World Health Organization; 2018

216. WHO. 2019а. Ebola virus disease. Key facts. [электронный ресурс]. URL: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs103/en/ (дата обращения 25.03.2019 г.).

217. WHO. 2019b. SitRep in DRC. [электронный ресурс] URL: https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/311242/SITREP_EVD_DRC_2 0190310-eng.pdf?ua=1 (дата обращения 25.03. 2019 г.).

218. Will C., Muhlberger E., Linder D., Slenczka W., Klenk H.D., Feldmann H. Marburg virus gene 4 encodes the virion membrane protein, a type I transmembrane glycoprotein // The Journal of Virology. 1993. - V.67. -P.1203-1210.

219. Wilson J.A., Hevey M., Bakken R., Guest S., Bray M. et al. Epitopes involved in antibody-mediated protection from Ebola virus // Science. 2000. - V.287. -P.1664-1666.

220. Wong G., Richardson J.S., Pillet S., Patel1 A., Qiu X. et al. Immune parameters correlate with protection against ebola virus infection in rodents and nonhuman primates // Science Translational Medicine. - 2012. - V.4. - P. 158-146.

221. Wong S., Lau S., Woo P., Yuen K.Y. Bats as a continuing source of emerging infections in humans // Science Translational Medicine. - 2007. - V.17. - P.67-91.

222. Yang X.L., Tan C.W., Anderson D.E., Jiang R.D., Li B. et al. Characterization of a filovirus (Mengla virus) from Rousettus bats in China // Nature Microbiology. - 2019. - V.10. - P. 1038.

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

(РОСЗДРЛВ НАДЗОР)

ПРИЛОЖЕНИЕ К РЕГИСТРАЦИОННОМУ УДОСТОВЕРЕНИЮ НА МЕДИЦИНСКОЕ ИЗДЕЛИЕ

от 21 декабря 2015 года № рзн 2015/3458

Лист 1

^¿^Го X р A H fT5^.

ШШшУ

Руководитель Федеральной cuMlii Газа по надзору в сфере здравоохра^да^

М.А. Мурашко

Литры: Пъяиков Стетш Александрович (RV), Пьян ков Олег Никтарокич (RIJ). Займшеши Анна Влади.» upouita (RV), Соладкий Владислав Валерьевич (RV), Бодиев Сергеи Александрович fRU)t Бул ычев Леон ид Егоровы ч (RU)f Нестеров An дрен Егорович (R V), Сергеев Артемий Александрович (Rl>), Сергеев Александр Александрович (Rlf), Агафонов .Александр Петрович (RU), Михеев Валерий Нимиасвич fRt )

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

(191

RU

пи

2 631 93/"' C1

(31» Ml IK

С/2Ы 7Я0 <200601 I

GOiH XVS3 <2006.011

CÜ7K 200 <2006011

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖКА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

О

СО О) т—

со со см

Э

к

('^ ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

(21 )(22) Заявка: 2016126787, 04 07 2016

(24| Дата начала отсчета срока kAl ihk плгми 04.07.2016

Прворигст(ы):

(221 Ддти подлчм кивки 0407 2016

(45| Опубликовано 28.09 2017 Bio l .4; 2S

Адрес ,ия переписки:

630559, Иппоситтрска* обл . Новосибирск и* р-н. рп КолыФБУН Г11Ц ВБ 'Вектор". bi патентным отделом Мис тюрмну ЮН

(72» Авторы»:

Пышков Стеши Александрович (RU), Пыяков Олег Викторович (RUX litooKtu Анна Владимирские (RU). С плодкий Владислав Валерьевич (KU). Болис» Сергей Александрович (RU), Булычев Леонид Егорович (RU), Нестеров Андрей Егорович (RU), Сергее» Артемий Александрович (KU). Сергее« Александр Александрович (RU), Агафоиов Александр Петрович (KU). Михее» Валерий Николаекич (RU)

(73) Патентообладатели!!):

Фелералыюе бюджетное учреждение науки 'Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") (RU)

(56» Список документов, цитированных в отчете о поиске: ADAM MACNEIL е( al.. Serologie Cion-Reactivity of Human IgM and IjG Antibodies lo Five Specie« of Ebola Viru». PLOS June 2011. Volume 5. Issue 6. ell75. MASAYUKI SAIJO el al.. Laboratory Diagnostic System« for Ebola and Marburg Hemorrhagic Fever« Developed with Recombinant Protein«. CLINICAL AND VACCINE IMMUNOLOGY. Apr 2006. Vol. 13. No 4. pp 444 451 RU 2450274 CI. 1005-2012.

7J С

N3

at

CO

cc

со

-si

О

(541 Штамм амруса Эбола Заир Н ирка> и*Х^'/201 М(»М>е КшАа 1022 дл» получения антигена, используемого в качестве компонента юшувофермеятной тест-системы лля выявления антител классов в и М к вирусу Эбола

(57) Формула изобретения Штамм вируса Эбола Заир Н чар1спч-«(/С.1М/2()15/Кд1и11с-К|п<1»а-1Й22 для получения антигена, используемого в качестве компонента иммуног^рментной тест-системы для выявления антител классов О и М к вирусу Эбола. депонированный в государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсмоэов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» под номером У-695.

Cm I

В ПАТЕНТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕ

№ 2631937

Изменение наименования, фамилии, имени, патентообладателя

Патентообладатель(и): Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ЯП), Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУНГНЦВБ "Вектор" Роспотребнадзора) (Ш)

■

..............

Запись внесена в Гос изобретений Российс 14 января 2019 г.

Руководитель Федеральной службы по интеллектуальной собственности

Ш(ПШШШАЖ #ВД№АЩШШ

Настоящие технические условия распространяются на набор реагентов дли иммуноферментиого выявления антител классов G и М к вирусу Эбола «Вектор 11ФА Эбола-Л'1 скрин», предназначенный для совместного и раздельного выявления антител классов G и М к вирусу )оола в сыворотке и плазме крови человека методом иммуноферментного анализа (ИФЛ). далее по тексту - набор.

1 laóop выпускается в комплектации на 96 анализов, включая контрольные образцы.

В состав набора входят следующие реагенты:

- Иммуносорбент - планшет;

- К* контрольный положительный образец;

- К- контрольный отрицательный образец:

- Кг анти-IgM: 20х концентрат моноклинальных мышиных антител к IgM человека, коныогировапных с пероксидазой хрена;

- Кг анти-IgG: 20х концентрат моноклинальных мышиных антител к Ig(¡ человека, коныогировапных с пероксидазой хрена;

- РЬР-С буферный раствор для разведения сывороток:

- РБР-К буферный раствор для разведения коныогата:

- 1'МЬ хромоген тетраметилбензилнн;

- БРГ ни грат-фосфатный растворе перекисью водорода для разведения 1Mb:

- ФСЬ-Т (концентрат х25) 25-кратный концентрат фосфат но-солсво1 о буферного раствора с твнном;

- с гон-реагент.

Дополнительно в комплект входит пленка для заклеивания планшета, ванночки дин реагентов, наконечники для автоматического дозатора lia 4-2GÜ мкл.

Комплект набора рассчитан на 96 анализов, включая контрольные образны.

Прн исследовании небольшою количества образцов возможно проведение 12 независимых постановок ИФЛ по 8 анализов в каждой, включая контрольные образцы.

11римср записи набора при его заказе и в документации другого изделия: - Набор реагентов «Вектор ИФА Эбола-АТ скрин» на 96 анализов, включая контроли. но ТУ 9398-60-05664012-2015. код OKI 1 93 9817;

Область применения - клиническая лабораторная диагностика.

Him Лин

Фамилии

IIo.uihli.

ТУ 9398-60-05664012-2015

Дета

PjjjiaG

НыаыяСЛ

11 jH'sqv

Л| а (чинш Л II

1/

II K'niitp

lioipmiLicn М II

Vi иерд.

Михее и В II

¿ti;* <i' Набор реагентов

для имиуноферментиого аыкн.теннн — аитктея классов G н М к ннрусу Эбола

'»" «Вектор ИФЛ ">н> ia-ЛТ скрип».

Технические условии___

Лик-pa Лист

Л ист ов

19

ФЬУН Г11ЦВБ «Вектор»

Рекламации на качество набора реагентов «Вектор ИФА Эбола-АТ скрин» направлять на предприятие-изготовитель: 630559, Россия, Новосибирская область, Новосибирский район, р.п. Кольцове, ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», тел. [phone], факс [phone].

Заведующий лабораторией производства средств иммунодиагностики

ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»

С Л. Пьянков

Зав ОБТК

ФБУ11 ГНЦ ВБ «Вектор»

М.П. Богрянцева

Директор ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумнь институт «Микроб» Росиотребнадзора академик РАН, д.м.н., профессор

ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" 630559 Кольцово Новосибирской

Отдел разработки, производства и Телефон ОБТК: 8(383)-336-73-16

применения средств иммунодиагиостики вирусных и риккетсиозных заболеваний (отд. 03.13.00)

Аналитический лист

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител классов О и М к вирусу Эбола «Вектор ИФА Эбола-АТ скрип»

для научных исследований

Номер серии 1

Количество тест-систем в серии 5 Дата изготовления 25.01.2015 г.

Дата выпуска продукции 06.02.2015

Анализ выполнен по проекту ТУ 9398-060-05664012-2015

Наименование показателя Требования НТД Результаты анализа

1 Внешний вид

1.1 Иммуносор-бент - планшет Планшет разборный (12 восьмилуночных стрипов) с прозрачными бесцветными лунками соответствует

1.2 К+ Прозрачная красного цвета жидкость соответствует

1.3 к- Прозрачная желтого цвета жидкость соответствует

1.4 Кг анти-^М Прозрачная синего цвета жидкость соответствует

1.5 Кг анти-^О 11розрачная зеленого цвета жидкость

1.6 РБР-С Прозрачная синего цвета жидкость соответствует

1.7 РБР-К Прозрачная зеленого цвета жидкость соответствует

1.8 ТМБ Прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость соответствует

1.9 БРС Прозрачная бесцветная жидкость соответствует

1.10 ФСБ-Т (концентрат х25) Прозрачная, слегка опалесцирующая, бесцветная жидкость, допускается выпадение кристаллического осадка, растворяющегося при нагревании при температуре 37 С в течение 30 мин соответствует

1.11 стоп-рсагент Прозрачная бесцветная жидкость соответствует

2 Технические характеристики

2.1 Каждое значение ОП в лунках с К- (ОП К-) Не более 0,200 o.e. соответствует

2.2 Значение ОП в лунке с контролем конъюгата (К Кг) Не более 0,150 o.e. соответствует

2.3 Значение ОП в лунке с К+ (ОП К+) Более 0,500 o.e. соответствует

3 Показатели правильности определения

3.1 Диагностическая чувствительность Должна быть равна 100 % при выявлении всех положительных образцов рабочей панели образцов предприятия «РП ЛТ(+/-)Эбола». соответствует

3.2 Диагностическая специфичность Должна быть равна 100 % при определении всех отрицательных образцов рабочей панели образцов предприятия «РП АТ(+/-)Эбола» как отрицательные. соответствует

3.3 Воспроизводимость

4 Комплектность Согласно требованиям ТУ п.1.3.3. соответствует

«Вектор ИФА Эбола-АТ скрип» Страница 1 из 2

ФБУН ГНЦ Bb "Вектор" 630559 Кольцово Новосибирской

Отдел разработки, производства и Телефон ОБТК: 8(383>-336-73-16

применения средств иммунодиагностики вирусных и риккстсиозных заболеваний (отд. 03.13.00)

Аналитический лист Набор реагентов для иммуноферменгного выявления ашшел классов G и M к вирусу Эбола «Вектор ИФА Кюла-ЛТ скрип»

O im научных исследовании

11омср ссрнн 2

Количество тсет-систем н серии 5 ,'1ага изготовления 05.02.2015 i

Дата выпуска продукции 06 02.2015

Атитчипо mai по проекту ТУ УЗОЛ-ОЛО-ОЗбШ!2-2015

Наименование показателя Требования НТД Результаты анализа

1 Внешний и ил

1.1 Иммуносор-бент - планшег Планшет разборный (12 восьмнлу ночных стрипов) с прозрачными бссивстныын лунками соответствует

1.2 К+ 1(розрачная красного цвета жидкость соответствует

1.3 К- 11розрачная желтого нвега жидкость соответствует

1.4 Кг антн-lgM Прозрачная синего цвета жидкость соотве гств\ ет