Получение и иммунологическая характеризация полноразмерных рекомбинантных белков NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Иванова, Алла Владимировна

• Иванова, Алла Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Иванова, Алла Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Таксономия семейства Филовирусов.

1.2. Морфология и структура вирионов.

1.3. Организация генома, структура и функции белков филовирусов.

1.3.1. Ну кл еопротеин (ИР).

1.3.2. Основной матриксный белок (УР40).

1.3.3. Компонент полимеразного комплекса (УР35).

1.3.4. Гликопротеин (вР).

1.3.5. Минорный компонент нуклеокапсида (УРЗО).

1.3.6. РНК-зависимая РНК-полимер аза (Ь).

1.3.7. Минорный матриксный белок (УР24).

1.4. Предполагаемый природный резервуар возбудителей филовирусной инфекции.

1.5. Клинические симптомы геморрагических лихорадок.

1.6. Использование рекомбинантных белков в иммунодиагностике заболеваний.

1.7. Конструирование гибридных плазмид и получение рекомбинантных белков.

1.8. Рекомбинантные белки как антигены для иммунодиагностики.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и иммунологическая характеризация полноразмерных рекомбинантных белков NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург»

Вирусы Марбург (ВМ) и Эбола (ВЭ), вызывающие геморрагические лихорадки (ГЛ), были открыты более 30 лет назад, однако до настоящего времени эффективных средств специфической .профилактики этих заболеваний для людей не разработано. Филовирусы способны вызывать геморрагические лихорадки у человека с крайне тяжелым течением заболевания и высоким уровнем летальности (до 90%) [57,155].

Вирусы Эбола и Марбург относятся к семейству Filoviridae, включающему в себя два рода: Marburgvirus и Ebolavirus fhttp://www. ncbi. nlm. nih. gov/ICTVdb/Ictv/index, htm). К роду Ebolavirus относятся четыре вида вирусов: Zaire ebolavirus, Sudan ebolavirus, Res ton ebolavirus, Ivory Coast ebolavirus и, возможно, недавно описанный Bundibugyo ebolavirus [72,158] Род Marburgvirus, второй представитель семейства, включает в себя единственный вид Lake Victoria marburgvirus. Геном филовирусов представлен линейной одноцепочечной РНК негативной полярности, 18959 нуклеотидов для ВЭ и 19112 нуклеотидов для ВМ. Вирионы филовирусов имеют характерную - сложную структуру, сформированную белками (NP, VP30, VP40, VP35, L-белок (РНК-зависимая РНК-полимераза) - нуклеокапсид), и вирусная частица покрыта наружной липидной оболочкой, в которой локализуется 2 структурных белка (VP24 и гликопротеин (GP)) [69]. Структурные белки - нуклеопротеин (NP), матриксный белок VP40 и кофактор вирусной полимеразы (белок VP35), являясь основными компонентами нуклеокапсида вирусов Эбола и Марбург, составляют 17%; 37,7% и 24,5% от массы вириона [69] и являются основными иммуногенами.

Симптомы, характеризующие ГЛЭ и ГЛМ в первые несколько дней инфекции, являются неспецифическими и во многом схожими с клинической картиной характерной для ряда заболеваний, вызванных другими вирусами, бактериями или простейшими (желтая лихорадка, лихорадка Ласса, дизентерия, тиф, чума, малярия и т.д. [81]), что усложняет раннюю 6 симптоматическую диагностику. Высокая патогенность данных вирусов весьма затрудняет экспериментальные работы по созданию методов лечения, профилактики и диагностики, потому что исследования ВЭ и ВМ, относящихся к I группе патогенности, требуют специально сконструированных лабораторий с максимальным уровнем биологической защиты В8Ь-4, биоохраны и специальной подготовки персонала. Тем не менее, для проведения многих видов исследований нет необходимости проводить работы с живым вирусным агентом, а достаточно использовать лишь его генетический материал. Длительное и безопасное хранение генетического материала РНК-содержащих вирусов, а также его наработка в стандартных лабораторных условиях, возможны при создании геномных библиотек, представляющих собой коллекцию гибридных плазмид, содержащих фрагменты вирусного генома.

Филовирусные геморрагические лихорадки являются эндемичными заболеваниями (в основном это страны центральной Африки), но их завоз на территорию РФ возможен в связи с поставками экзотических животных для нужд учреждений и частных лиц, а также с увеличивающимся людским потоком между государствами, обусловленным расширяющимися туристическими и экономическими связями со странами африканского континента. В случае возникновения вспышки филовирусных лихорадок в пределах РФ необходимо иметь эффективные средства диагностики данного вида заболеваний.

Наряду с методом ПЦР-диагностики основная роль принадлежит, несомненно, методам серологической диагностики, а именно иммунодиагностике, базирующейся на выявлении специфических антигенов возбудителя в крови и других биологических жидкостях организма. В качестве антигенов для определения титров специфических антител могут быть использованы рекомбинантные вирусные белки, несущие в своём составе антигенные структуры, узнаваемые специфическими антивирусными антителами [137]. С использованием рекомбинантных белков открываются новые возможности для создания тест-систем, неотъемлемой частью которых является наличие библиотек генов рекомбинантных плазмид, кодирующих полноразмерные копии генов этих высокопатогенных вирусов.

Создание библиотек полноразмерных генов позволит надёжно законсервировать в биологически безопасной форме генетический материал для будущих исследований. Поддержание и пополнение клонотек полноразмерных генов ВЭ и ВМ, а также продуцентов рекомбинантных вирусных белков, создаёт предпосылки для их использования в обратной генетике и изучения репликации вирусов.

Целью настоящего исследования являлось: Получение рекомбинантных белков NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург и исследование их иммунохимических свойств, с помощью поликлональных (ПАТ) и моноклональных антител (МКА), специфичных к филовирусам и пополнение коллекции гибридных плазмид, содержащих полноразмерные копии генов филовирусов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Сконструировать экспрессирующие гибридные плазмиды, содержащие полноразмерные копии генов NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург.

2. Оптимизировать условия экспрессии генов, кодирующих белки NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург.

3. Получить аффинно-очищенные препараты полноразмерных рекомбинантных белков NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург. J

4. Исследовать антигенную специфичность и иммуногенность продуктов экспрессии генов NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург.

Научная новизна работы. В результате проведенной работы сконструированы гибридные плазмиды, кодирующие полноразмерные копии 8 генов УР40, ЫР вируса Эбола и УР40, УР35 вируса Марбург, пополняющие коллекцию библиотеки полноразмерных генов филовирусов.

Были оптимизированы условия экспрессии генов в составе плазмид рСХЕЗО- Р40, рС>ЕЗ(ШР ВЭ и рС^ЕЗЬ Р40, рдЕ31-УР35 ВМ в штамме Е. соИ ДМЮЗ. Были наработаны и выделены с помощью аффинной хроматографии полноразмерные рекомбинантные белки филовирусов.

Показано, что аффинно-очищенные препараты рекомбинантных белков сохранили антигенную структуру, сходную со структурой нативных природных белков, что позволило использовать данные препараты в качестве антигенов для выявления специфических противовирусных антител, а также в качестве положительного контроля при конструировании лабораторных тест-систем.

Новизна и приоритет данной разработки подтверждены патентами РФ (патенты № 2395575, № 2395576, № 2395577).

Библиотеки клонов гибридные плазмиды и рекомбинантные белки высокопатогенных вирусов могут быть использованы для обеспечения работ по изучению генетической организации вирусов, а также при разработке современных методов экспресс-диагностики геморрагических лихорадок.

Практическая ценность работы. Сконструированы рекомбинантные плазмиды, кодирующие полноразмерные копии генов ИР, УР40 вируса Эбола и УР40, УР35 вируса Марбург, что позволяет пополнить библиотеку генов гибридных плазмид высокопатогенных вирусов. Штаммы-продуценты Е. соИ позволяют наработать и выделить с помощью аффинной хроматографии полноразмерные рекомбинантные белки филовирусов для исследовательских целей и для получения различных типов иммунобиологических препаратов и вакцин.

Библиотека клонов гибридные плазмиды и рекомбинантные белки представляют собой стандартные препараты, которые могут быть использованы для обеспечения работ по изучению генетической организации вирусов, а также при разработке современных методов экспресс-диагностики геморрагических лихорадок.

Положения, выносимые на защиту.

1. Гибридные плазмиды, кодирующие полные гены NP, VP40 ВЭ и VP40, VP 35 белков вирусов Эбола и Марбург, обеспечивают эффективную продукцию данных белков в прокариотической системе экспрессии.

2. Полученные нами рекомбинантные белки обладают иммуногенностью и индуцируют в сыворотке крови иммунизированных мышей синтез специфических антител с высоким титром (1:2 ООО ООО).

3. Рекомбинантные белки NP, VP40 ВЭ и VP40, VP35 ВМ антигенно подобны вирусным белкам ВЭ и ВМ и могут быть использованы при конструировании иммунодиагностических тест-систем для обнаружения вирусных антигенов и противовирусных антител. Апробация работы. Результаты диссертационной работы представлены автором в форме доклада на VI Международной конференции РФФИ «Результаты фундаментальных исследований для инвестиций», г. Пущино 2001 г.; II Научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера», г. Новосибирск, 29-31 мая 2002 г.; Международной научно-практической конференции «Современные проблемы инфекционной патологии человека», г. Минск, Беларусь, 22-23 октября 2009 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано четыре статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ для кандидатских диссертаций. Получено 5 патентов РФ на изобретение.

Вклад автора. Экспериментальные данные, представленные в диссертации, получены диссертантом, а именно: конструирование гибридных плазмид полноразмерных копий генов под руководством к.б.н. Качко A.B. и совместно с н.с. Сорокиным A.B. Генно-инженерные манипуляции с кДНК, подготовка векторов, получение гибридных плазмид, определение последовательности нуклеотидных остатков ДНК, оптимизация условий экспрессии, получение штаммов-продуцентов рекомбинантных белков и очистка белков в денатурирующих условиях выполнены лично автором. Иммунологическая характеризация продуктов экспрессии рекомбинантных белков выполнена под руководством к.б.н. Казачинской Е.И.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Иванова, Алла Владимировна

выводы

1. Сконструированы экспрессирующие гибридные плазмиды, содержащие гены полноразмерных белков NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург и подобраны условия, обеспечивающие эффективную наработку данных белков в прокариотической системе экспрессии с выходом целевого белка от 25 до 40% от суммарного клеточного белка.

2. Были получены полноразмерные рекомбинантные белки NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург с чистотой 67-88%. При иммунизации аутбредных мышей ICR данные рекомбинантные белки вызывали индукцию антител, которые специфически связывались с природными антигенами вирусов Эбола и Марбург.

3. Рекомбинантные белки NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 , вируса Марбург эффективно распознаются как моноклональными антителами так и поликлональными сыворотками, специфичными к вирусам Эбола и Марбург в иммуноблоте и иммуноферментном анализе. Таким образом, данные белки подобны по своим антигенным свойствам вирусным белкам.

4. Методом иммуноферментного анализа в формате «сэндвич» показано эффективное выявление рекомбинантных белков моноклональными антителами, не имеющими перекрёстной реактивности с гетерологичными антигенами вирусов Эбола и Марбург, с чувствительностью 1 нг/мл, что позволяет использовать полноразмерные рекомбинантные белки NP, VP40 вируса Эбола и VP40, VP35 вируса Марбург в качестве положительного контроля при конструировании иммунодиагностических тест-систем.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Современные молекулярно-биологические исследования вирусов основаны на знаниях о структуре их генома, нуклеотидных последовательностях отдельных вирусных генов и свойствах структурных и неструктурных вирусных белков. Клонирование отдельных вирусных генов, получение вирусных белков является основой для многих прикладных исследований направленных на усовершенствование генетической и иммунологической диагностики вирусных патогенов. При проведении исследований особо опасных вирусов, относящихся к I и II группам патогенности, требуются соблюдение мер специальной биобезопасности. Как правило, требуется проведение исследований в лабораториях с максимальным уровнем биологической защиты ВБЬ-З и В8Ь-4, что существенно затрудняет проведение исследований и повышает стоимость проведения работ. В этом случае молекулярно-биологические исследования предоставляют возможность избежать объёмных работ с высокопатогенным вирусным агентом. Работа с фрагментами вирусного генома и отдельными вирусными генами позволяет обеспечить безопасность работ и при этом обеспечивает создание геномных библиотек, представляющих собой коллекцию гибридных плазмид, содержащих фрагменты вирусного генома. Создание таких коллекций позволяет проводить весь комплекс исследований направленных на совершенствование диагностики, на разработку новых вакцин и даже создание новых антивирусных препаратов.

Одной из задач данного исследования было получение коллекции плазмид, несущих полноразмерные копии вирусных генов УР40 ВЭ и УР40, УР35 ВМ. С этой целью мы использовали плазмиды серии рС^Е, которые могли обеспечить эффективный синтез соответствующих рекомбинантных белков с использованием штамма Е.соИ 1М103. Данный вектор позволяет синтезировать большие количества рекомбинантных белков с использованием штамма Е.соИ 1М103 в качестве хозяина. Плазмиды серии pQE содержат сильный промотор фага Т5, селективный маркерный ген (ген ß-лактамазы), кластер из шести остатков His и короткий участок с несколькими уникальными сайтами, распознающимися ферментами рестрикции - полилинкер. Эффект репрессии обусловлен наличием в промоторной области плазмиды pQE двух копий последовательности оператора lac-оперона, являющихся объектом действия белка-репрессора Lacl. Действие репрессора в индуцибельной системе снималось работой индуктора (ИПТГ).

В 1995 году во ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» были созданы геномные библиотека ВЭ и ВМ в виде рестрикционных фрагментов, полученных гидролизом ДНК-копии полноразмерных геномов ВЭ и ВМ в составе плазмиды pBR322 в клетках E.coli JM103. Нами были получены соответствующие препараты кДНК и на их основе проведено конструирование плазмид, содержащих полноразмерные гены NP, VP40 ВЭ и VP40, VP35 ВМ. Правильность сборки плазмид, несущих встройки соответствующих вирусных генов, была подтверждена секвенированием. Для обеспечения высокого уровня продукции вирусных белков были отобраны клоны штаммов-продуцентов, обеспечивающие наиболее высокий уровень экспрессии вирусных белков по данным иммунологического тестирования с использованием специфичных МКА. Данные клоны в дальнейшем использовались для наработки рекомбинантных вирусных белков в прокариотической системе экспрессии.

Рекомбинантный белок VP40 ВЭ был наработан, очищен и процентный выход целевого белка от суммарного клеточного белка составил около 25%. Электрофоретическая подвижность рекомбинантного белка VP40 ВЭ составляла 37 кДа и соответствовала расчётной. Полученный рекомбинантный белок при иммунизации мышей ICR индуцировал синтез специфических антител к рекомбинантному белку в высоком титре (1:1968300). Антитела мышиных моносывороток, полученных к рекомбинантному белку VP40 ВЭ также эффективно распознавали

102 аналогичный белок в инактивированном препарате ВЭ в ИФА, причем титр антисывороток против VP40 достигал 1:656100. Более того, согласно полученным данным ИБ и ИФА, очищенный рекомбинантный белок VP40 эффективно распознавался специфическими МКА к ВЭ, а также другими иммунными и гипериммунными поликлональными сыворотками (лабораторные животные, иммунизированные инактивированным ВЭ). Эти результаты показывают, что рекомбинантный белок VP40 и вирусный белок VP40 антигенно подобны.

Значительную экспрессию рекомбинантного белка NP ВЭ удалось получить только после проведения оптимизации условий экспрессии. В этом случае доля индуцированного белка NP ВЭ составляла до 40% от общего клеточного белка. В известной нам литературе не удалось найти описание получения полноразмерного рекомбинантного аналога белка NP ВЭ. Данный белок был очищен Ni-хелатной хроматографией и использован для иммунизации мышей ICR. Он также высокоэффективно индуцировал синтез специфичных антител к рекомбинантному белку NP. Титр антител достигал 1:1968300, что позволило говорить о высокой иммуногенности данного рекомбинантного белка. Полученная поликлональная сыворотка эффективно взаимодействовала с антигеном ВЭ в разведении 1: 656100. Интересно отметить, что 10 видов МКА, связывающихся с NP ВЭ, также эффективно распознают рекомбинантный аналог этого белка. Это позволило сделать заключение, что рекомбинантный белок NP сохранил основные антигенные эпитопы, тождественные вирусному белку NP.

Рекомбинантные белки VP35 и VP40 ВМ были получены и очищены способом, аналогичным получению рекомбинантного белка VP40 ВЭ. Выбранные клоны обеспечивали синтез рекомбинантных белков VP35 и VP40 и их получение в препаративных количествах. Аффинно-очищенные рекомбинантные белки VP40 и VP35 ВМ также оказались высокоиммуногенными для лабораторных животных и сохранили свою антигенную структуру. Интересно отметить, что оба рекомбинантных белка эффективно распознавались сывороткой человека рековалесцента. Это позволило предположить, что рекомбинантные белки УР40, УР35 ВМ содержат антигенные детерминанты распознаваемые иммунной системой человека. Также как и рекомбинантные белки ВЭ, белки УР40, УР35 ВМ являются хорошими иммуногенами и сохраняют антигенную структуру характерную для этих вирусных белков.

Антигенная схожесть рекомбинантных белков ЫР, УР40 ВЭ и УР40, УР35 ВМ с нативными вирусными белками позволяет считать, что эти белки могут быть использованы в качестве антигенов для выявления специфических антител к филовирусам. В этом случае полученные нами полноразмерные филовирусные рекомбинантные белки могут быть использованы для конструирования тест систем для выявления вирусспецифических антител методами ИФА и ИБ. Простота получения и низкая стоимость получения этих белков позволяет их использовать для конструирования других иммунологических тестов для оценки В и Т клеточного иммунного ответа против филовирусов или даже для последующего конструирования вакцин против филовирусных инфекций.

Все полученные рекомбинантные белки сохранили способность взаимодействовать с антивирусными МКА. Это позволило сконструировать лабораторные варианты тест-систем с использованием рекомбинантных антигенов и МКА для выявления вирусных антигенов. Оценка чувствительности этих методов показала, что они способны выявлять УР40 и М5 ВЭ и УР40, УР35 ВМ с высокой чувствительностью и специфичностью. Эти экспериментальные иммуноферментные тест-системы на основе МКА антител и рекомбинантных антигенов позволяли выявлять вирусный антиген в концентрации до 1 нг/мл. В наших экспериментах мы использовали меченные биотином МКА для выявления иммунных комплексов. Использование систем иммунодетекции с усилением окраски иммунных комплексов позволяет надеяться на повышение чувствительности предложенных методов иммунодетекции до пикограммового уровня. Также важно отметить, что для филовирусных инфекций характерен высокий уровень концентрации вирусных антигенов в сыворотке крови, что делает иммунологическую детекцию этих инфекций весьма эффективной.

Таким образом, нами были клонированы копии вирусных генов NP, УР40 ВЭ и УР40, УР35 ВМ. Полученные конструкции гибридных плазмид обеспечивали уровень синтеза рекомбинантных полипептидов с выходом целевого белка от 25 до 40% от суммарного клеточного белка. Наличие таких положительных особенностей, как высокий уровень синтеза, технологичность очистки и адекватные антигенные свойства данных белков делают перспективным использование полученных нами рекомбинантных белков для научно-исследовательских работ, в частности для изучения иммунологии филовирусных инфекций, и для создания нового поколения иммунодиагностических тест-систем на основе рекомбинантных антигенов и МКА.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Иванова, Алла Владимировна, 2010 год

1. Бажутин Н.Б., Беланов Е.Ф., Спиридонов В.А. Влияние способов экспериментального заражения вирусом Марбург на особенности протекания болезни у зеленых мартышек. // Вопросы вирусологии. 1992. Т. 3. С. 153-156.

2. Борисевич И.В., Михайлов В.В., Краснянский Б.П. Разработка и изучение свойств иммуноглобулинов против лихорадки Эбола. // Вопросы вирусологии. 1996. Т. 41. № 6. С. 270-273.

3. Букреев A.A., Скрипченко A.A., Гусев Ю.М., Фролов В.Г., Кандрушин Е.В., Красницкая И.М., Шестопалов A.M. Перспективный метод препаративной наработки и очистки вируса Марбург // Вопросы вирусологии. 1995. Т. 4. С. 161-165.

4. Владыко A.C., Чепурнов A.A., Быстрова С.И., Лемешко H.H., Лукашевич И. С. Выявление антигена вируса Марбург методом твердофазного иммуноферментного анализа // Вопросы вирусологии. 1991. Т. 36. № 5. С. 419-421.

5. Гончар Н.И., Пшеничнов В.А., Походяев В.А., Лопатов К.Л., Фирсова И.В. Чувствительность к вирусу Марбург различных экспериментальных животных. // Вопросы вирусологии. 1991. Т. 5. С. 435437.

6. Дрыга С.А., Святченко В.А., Микрюкова Т.П., Дрыга С.А., Святченко В.А., Микрюкова Т.П., Фурсова Е.Ю., Киселев H.H., Гончаров

7. A.M., Фролов И.В., Колыхалов A.A., Агапов Е.В., Нетесов C.B. Получение и исследование рекомбинантных штаммов вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей, экспрессирующих ген preS2-S гепатита В. // Вопросы вирусологии. 1996. Т. 41. № 3. С. 100-102.

8. Ивченко С.Н., Суслопаров И.М., Масычева В.И., Суслопаров М.А., Лосев М.В. Разработка иммуноферментной тест-системы для определения антител в сыворотке крови к цитомегаловирусу человека. // Сибирский медицинский журнал. 2005. Т. 20. № 2. С. 53-55.

9. Казачинская Е.И., Перебоев A.B., Чепурнов A.A., Беланов Е.Ф., Разумов И.А. Моноклональные антитела к вирусу Эбола: получение, характеризация и изучение перекрестной реактивности с вирусом Марбург. // Вопросы вирусологии. 2000. Т. 45. № 3. С. 40-44.

10. Казачинская Е.И., Терновой В.А., Рудзевич Т.Н., Нетесов C.B., Чепурнов A.A., Разумов И.А. Исследование антигенной структуры белка VP35 вируса Эбола. // Вопросы вирусологии. 2001. Т. 46. № 5. С. 25-31.

11. Кизимов Н.В., Луб М.Ю., Черный Н.Б., Беланов Е.Ф. Использование иммуноферментного анализа (ИФА) для обнаруженияантигена вируса Марбург. // Межведомственная конференция "Изучение и профилактика особо опасных вирусных инфекций" 1993. Кольцово

12. Луб М.Ю., Сергеев А.Н., Пьянков О.В., Пьянкова О.Г., Петрищенко В.А., Котляров Л.А. Некоторые патогенетические характеристики заболевания обезьян, аэрогенно инфицированных вирусом Марбург. //Вопросы вирусологии. 1995. Т. 4. С. 158-161.

13. Луб М.Ю., Сергеев А.Н., Пьянкова О.Г., Пьянков О.В., Петрищенко В.А., Котляров Л.А. Клинико-вирусологические характеристики заболевания морских свинок, аэрогенно нфицированных вирусом Марбург. // Вопросы вирусологии. 1995. Т. 40 . № 3. С. 119-121.

14. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. // Москва: Мир, 1984. С. 241-242.

15. Мерзликин Н.В., Чепурнов A.A., Истомина H.H., Офицеров В.И., Воробьева М.С. Разработка и применение иммуноферментных тест-систем для диагностики лихорадки Эбола // Вопросы вирусологии. 1995. Т. 40. № 1. С. 31-35.

16. Мертвецов Н.П., Беклемишев А.Б., Савич И.М. Современные подходы к конструированию молекулярных вакцин. Новосибирск: Наука, 1987.

17. Нетёсов C.B. Филовирусы загадка XX века // Соросовский образовательный журнал. 1999. Т. 8. С. 24-29.

18. Патрушев Л.И. Экспрессия генов. Москва: Наука, 2000. С. 830

19. Плясунов И.В., Суслопаров М.А., Суслопаров И.М., Бахтина М.М., Махова Н.М., Гришаев М.П., Терещенко А.Н., Смердова М.И. Получение рекомбинантного антигена рЮО герпесвируса человека 6-го типа. // Биотехнология. 2004. Т. 6. С. 83-88.

20. Походаев В.А., Гончар Н.И., Пшеничнов В.А. Экспериментальное изучение контактной передачи вируса Марбург. // Вопросы вирусологии. 1991. Т. 6. С. 506-508.

21. Пузаков С.А. Химия. Москва: Медицина, 1995.

22. Пьянков О.В., Сергеев А.Н., Пьянкова О.Г. Патологические изменения в организме приматов, аэрозольно инфицированных вирусом Эбола. // Межведомственная конференция "Изучение и профилактика особоопасных вирусных инфекций" 1993. Кольцово

23. Разумов И.А., Беланов Е.Ф., Букреев A.A., Казачинская Е.И. Моноклональные антитела к белкам вируса Марбург и их иммунохимическая характеризация. //Вопросы вирусологии. 1998. Т. 43. № 6. С. 274-279.

24. Разумов И.А., Казачинская Е.И., Чепурнов A.A. Исследование исходного штамма вируса Эбола-Заир и штамма, адаптированного к морским свинкам с помощью МКА // Вопросы вирусологии. 2010. Т. принята в печать

25. Субботина E.JI., Качко A.B., Чепурнов A.A. Свойства белков вируса Эбола. // Вопросы вирусологии. 2006. Т. 51. № 6. С. 4-10.

26. Чепурнов A.A., Мерзликин Н.В., Рябчикова Е.И., Чепурнова Т.С., Волчков В.Е., Истомина H.H., Кузьмин В.А., Воробьева М.С. Получение очищенного вируса Эбола. // Вопросы вирусологии . 1994. С. 254-257.

27. Чепурнов A.A., Мерзликин Н.В., Чепурнова Т.С., Воробьева М.С. Получение кроличьих антисывороток к вирусу Эбола. // Вопросы вирусологии. 1994. Т. 6. С. 286-288.

28. Чепурнова Т.С., Писанко В.А., Бакулина Л.Ф., Жуков В.А., Чепурнов A.A. Определение содержания вируса Марбург в крови и выделениях экспериментально инфицированных животных. // Вопросы вирусологии. 2000. Т. 45. № 2. С. 18-20.

29. Чумаков М.П., Беляева А.П., Мартьянова Л.И. Выделение и изучение штаммов возбудителя зоонозной церкопитековой гемморагической лихорадки. // 15-я научная сессия : Материалы. 1968. Москва Т. 3. С. 86-88.

30. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия. Ч. 1. Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та, 1994.

31. Ebola haemorrhagic fever in Zaire, 1976 // Bull. World Health Organ. 1978. V. 56. No. 2. P. 271-293.

32. Electronic Citation.Ebola Virus: From Wildlife To Dogs. 2005. // http://www. sciencedaily. com/releases/2005/06/050608065550. htm. Institut De Recherche Pour Le Développement. ScienceDaily.

33. Aman M.J., Bosio C.M., Panchal R.G., Burnett J.C., Schmaljohn A., Bavari S. Molecular mechanisms of filovirus cellular trafficking // Microbes. Infect. 2003. V. 5. No. 7. P. 639-649.

34. Ascenzi P., Bocedi A., Heptonstall J., Capobianchi M.R., Di Caro A., Mastrangelo E., Bolognesi M., Ippolito G. Ebolavirus and Marburgvirus: insight the Filoviridae family // Mol. Aspects Med. 2008. V. 29. No. 3. P. 151-185.

35. Baron R.C., McCormick J.B., Zubeir O.A. Ebola virus disease in southern Sudan: hospital dissemination and intrafamilial spread // Bull. World Health Organ. 1983. V. 61. No. 6. P. 997-1003.

36. Bayer E.A., Wilchek M. The use of the avidin-biotin complex as a tool in molecular biology // Methods Biochem. Anal. 1980. V. 26. P. 1-45.

37. Bazin H., Malache I.M., Nisol F., Delaunay T. In: Rat hybridomas and rat monoclonal antibodies. / Florida: CRC Press, 1990. P. 165-201.

38. Becker S., Feldmann H., Will C., Slenczka W. Evidence for occurrence of filovirus antibodies in humans and imported monkeys: do subclinical filovirus infections occur worldwide? // Med. Microbiol. Immunol. 1992. V. 181. No. l.P. 43-55.

39. Becker S., Huppertz S., Klenk H.D., Feldmann H. The nucleoprotein of Marburg virus is phosphorylated // J. Gen. Virol. 1994. V. 75 ( Pt 4). P. 809818.

40. Becker S., Rinne C., Hofsass U., Klenk H.D., Muhlberger E. Interactions of Marburg virus nucleocapsid proteins // Virology. 1998. V. 249. No. 2. P. 406-417.

41. Beer B., Kurth R., Bukreyev A. Characteristics of Filoviridae: Marburg and Ebola viruses //Naturwissenschaften. 1999. V. 86. No. l.P. 8-17.

42. Belasco J.G., Brawerman G. In: Control of Messenger RNA Stability / Eds. Belasco J.G., Brawerman G. San Diego: Academic Press, 1993. P. 10531057.

43. Bente D., Gren J., Strong J.E., Feldmann H. Disease modeling for Ebola and Marburg viruses // Dis. Model. Mech. 2009. V. 2. No. 1-2. P. 12-17.

44. Biek R., Walsh P.D., Leroy E.M., Real L.A. Recent common ancestry of Ebola Zaire virus found in a bat reservoir // PLoS. Pathog. 2006. V. 2. No. 10. P. e90

45. Bowen E.T., Lloyd G., Harris W.J., Platt G.S., Baskerville A., Vella E.E. Viral haemorrhagic fever in southern Sudan and northern Zaire. Preliminary studies on the aetiological agent // Lancet. 1977. V. 1. No. 8011. P. 571-573.

46. Bray M. The role of the Type I interferon response in the resistance of mice to filovirus infection // J. Gen. Virol. 2001. V. 82. No. Pt 6. P. 1365-1373.

47. Bray M., Murphy F.A. Filovirus research: knowledge expands to meet a growing threat // J. Infect Dis. 2007. V. 196 Suppl 2. P. S438-S443

48. Bukreyev A.A., Volchkov V.E., Blinov V.M., Dryga S.A., Netesov S.V. The complete nucleotide sequence of the Popp (1967) strain of Marburg virus: a comparison with the Musoke (1980) strain // Arch. Virol. 1995. V. 140. No. 9. P. 1589-1600.

49. Bukreyev A.A., Volchkov V.E., Blinov V.M., Netesov S.V. The VP35 and VP40 proteins of filoviruses. Homology between Marburg and Ebola viruses // FEBS Lett. 1993. V. 322. No. 1. P. 41-46.

50. Chen H., Bjerknes M., Kumar R., Jay E. Determination of the optimal aligned spacing between the Shine-Dalgarno sequence and the translation initiation codon of Escherichia coli mRNAs // Nucleic Acids Res. 1994. V. 22. No. 23. P. 4953-4957.

51. Cretich M., Damin F., Pirri G., Chiari M. Protein and peptide arrays: recent trends and new directions // Biomol. Eng. 2006. V. 23. No. 2-3. P. 77-88.

52. Curran J., Kolakofsky D. Replication of paramyxoviruses // Adv. Vims Res. 1999. V. 54. P. 403-422.

53. Dalgard D.W., Hardy R.J., Pearson S.L., Pucak G.J., Quander R.V., Zack P.M., Peters C.J., Jährling P.B. Combined simian hemorrhagic fever and Ebola virus infection in cynomolgus monkeys // Lab Anim Sei. 1992. V. 42. No. 2. P. 152-157.

54. Dessen A., Volchkov V., Dolnik O., Klenk H.D., Weissenhorn W. Crystal structure of the matrix protein VP40 from Ebola virus // EMBO J. 2000. V. 19. No. 16. P. 4228-4236.

55. Elliott L.H., Kiley M.P., McCormick J.B. Descriptive analysis of Ebola virus proteins//Virology. 1985. V. 147. No. l.P. 169-176.

56. Elliott L.H., McCormick J.B., Johnson K.M. Inactivation of Lassa, Marburg, and Ebola viruses by gamma irradiation // J. Clin. Microbiol. 1982. V. 16. No. 4. P. 704-708.

57. Feldmann H., Kiley M.P. Classification, structure, and replication of filoviruses // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1999. V. 235. P. 1-21.

58. Feldmann H., Klenk H.D. Marburg and Ebola viruses // Adv. Virus Res. 1996. V. 47. P. 1-52.

59. Feldmann H., Klenk H.D., Sanchez A. Molecular biology and evolution of filoviruses // Arch. Virol. Suppl. 1993. V. 7. P. 81-100.

60. Feldmann H., Muhlberger E., Randolf A., Will C., Kiley M.P., Sanchez A., Klenk H.D. Marburg virus, a filovirus: messenger RNAs, gene order, and regulatory elements of the replication cycle // Virus Res. 1992. V. 24. No. 1. P. 1-19.

61. Feldmann H., Will C., Schikore M., Slenczka W., Klenk H.D. Glycosylation and oligomerization of the spike protein of Marburg virus // Virology. 1991. V. 182. No. 1. P. 353-356.

62. Frank R. The SPOT-synthesis technique. Synthetic peptide arrays on membrane supports—principles and applications // J. Immunol. Methods. 2002. V. 267. No. l.P. 13-26.

63. Garoff H., Hewson R., Opstelten D.J. Virus maturation by budding // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. V. 62. No. 4. P. 1171-1190.

64. Gear J.H. Hemorrhagic fevers, with special reference to recent outbreaks in southern Africa // Rev. Infect. Dis. 1979. V. 1. No. 4. P. 571-591.

65. Geisbert T.W., Jahrling P.B. Differentiation of filoviruses by electron microscopy // Virus Res. 1995. V. 39. No. 2-3. P. 129-150.

66. Geisse S., Gram H., Kleuser B., Kocher H.P. Eukaryotic expression systems: a comparison // Protein Expr. Purif. 1996. V. 8. No. 3. P. 271-282.

67. Gold L. Expression of heterologous proteins in Escherichia coli // Methods Enzymol. 1990. V. 185. P. 11-14.

68. Haas R., Maas I., Muller I. In: Marburg virus disease / Eds. Haas R., Maas I., Muller I. Berlin: Springer-Verlag, 1971. P. 136-143.

69. Hasan N., Szybalski W. Construction of laclts and laclqts expression plasmids and evaluation of the thermosensitive lac repressor // Gene. 1995. V. 163. No. l.P. 35-40.

70. Hevey M., Negley D., Geisbert J., Jährling P., Schmaljohn A. Antigenicity and vaccine potential of Marburg virus glycoprotein expressed by baculovirus recombinants //Virology. 1997. V. 239. No. 1. P. 206-216.

71. Huang Y., Xu L., Sun Y., Nabel G.J. The assembly of Ebola virus nucleocapsid requires virion-associated proteins 35 and 24 and posttranslational modification of nucleoprotein // Mol. Cell. 2002. V. 10. No. 2. P. 307-316.

72. Jährling P.B., Geisbert T.W., Dalgard D.W., Johnson E.D., Ksiazek T.G., Hall W.C., Peters C.J. Preliminary report: isolation of Ebola virus from monkeys imported to USA // Lancet. 1990. V. 335. No. 8688. P. 502-505.

73. Virulence of Ebola-related Reston virus for experimentally inoculated cynomolgus monkeys. Berlin, Germany. 1990. P. W52-1 VIII-th International Congress of Virology.

74. Jährling P.B., Geisbert T.W., Jaax N.K., Hanes M.A., Ksiazek T.G., Peters C.J. Experimental infection of cynomolgus macaques with Ebola-Reston filoviruses from the 1989-1990 U.S. epizootic // Arch. Virol. Suppl. 1996. V. 11. P. 115-134.

75. Jasenosky L.D., Neumann G., Lukashevich I., Kawaoka Y. Ebola virus VP40-induced particle formation and association with the lipid bilayer // J. Virol. 2001. V. 75. No. 11. P. 5205-5214.

76. Johnson E., Jaax N., White J., Jährling P. Lethal experimental infections of rhesus monkeys by aerosolized Ebola virus // Int. J. Exp. Pathol. 1995. V. 76. No. 4. P. 227-236.

77. Johnson R.F., Bell P., Harty R.N. Effect of Ebola virus proteins GP, NP and VP35 on VP40 VLP morphology // Virol. J. 2006. V. 3. P. 31

78. Johnson R.F., McCarthy S.E., Godlewski P.J., Harty R.N. Ebola virus VP35-VP40 interaction is sufficient for packaging 3E-5E minigenome RNA into virus-like particles // J. Virol. 2006. V. 80. No. 11. P. 5135-5144.

79. Kallstrom G., Warfield K.L., Swenson D.L., Mort S., Panchal R.G., Ruthel G., Bavari S., Aman M.J. Analysis of Ebola virus and VLP release using an immunocapture assay // J. Virol. Methods. 2005. V. 127. No. 1. P. 1-9.

80. Kartalov E.P., Zhong J.F., Scherer A., Quake S.R., Taylor C.R., Anderson W.F. High-throughput multi-antigen microfluidic fluorescence immunoassays //Biotechniques. 2006. V. 40. No. 1. P. 85-90.

81. Kolesnikova L., Bamberg S., Berghofer B., Becker S. The matrix protein of Marburg virus is transported to the plasma membrane along cellular membranes: exploiting the retrograde late endosomal pathway // J. Virol. 2004. V. 78. No. 5. P. 2382-2393.

82. Ksiazek T.G., Rollin P.E., Jährling P.B., Johnson E., Dalgard D.W., Peters C.J. Enzyme immunosorbent assay for Ebola virus antigens in tissues of infected primates // J. Clin. Microbiol. 1992. V. 30. No. 4. P. 947-950.

83. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. V. 227. No. 5259. P. 680-685.

84. Lahm S.A., Kombila M., Swanepoel R., Barnes R.F. Morbidity and mortality of wild animals in relation to outbreaks of Ebola haemorrhagic fever in

85. Gabon, 1994-2003 // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2007. V. 101. No. 1. P. 6478.

86. Lai C.F., Gong S.C., Esteban M. The purified 14-kilodalton envelope protein of vaccinia virus produced in Escherichia coli induces virus immunity in animals//J. Virol. 1991. V. 65. No. 10. P. 5631-5635.

87. Le Guenno B., Formenty P., Wyers M., Gounon P., Walker F., Boesch C. Isolation and partial characterisation of a new strain of Ebola virus // Lancet. 1995. V. 345. No. 8960. P. 1271-1274.

88. Leroy E.M., Kumulungui B., Pourrut X., Rouquet P., Hassanin A., Yaba P., Delicat A., Paweska J.T., Gonzalez J.P., Swanepoel R. Fruit bats as reservoirs of Ebola virus // Nature. 2005. V. 438. No. 7068. P. 575-576.

89. Leroy E.M., Souquiere S., Rouquet P., Drevet D. Re-emergence of ebola haemorrhagic fever in Gabon // Lancet. 2002. V. 359. No. 9307. P. 712

90. Licata J.M., Johnson R.F., Han Z., Harty R.N. Contribution of ebola vims glycoprotein, nucleoprotein, and VP24 to budding of VP40 virus-like particles // J. Virol. 2004. V. 78. No. 14. P. 7344-7351.

91. Phosphorylation of Marburg virus structural proteins. Marburg, Germany.2000. Symposium on Marburg and Ebola viruses.

92. Lowry O.H., ROSEBROUGH N.J, FARR A.L, RANDALL R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. V. 193. No. l.P. 265-275.

93. Lucht A, Grunow R, Moller P, Feldmann H, Becker S. Development, characterization and use of monoclonal VP40-antibodies for the detection of Ebola virus // J. Virol. Methods. 2003. V. 111. No. 1. P. 21-28.

94. Makrides S.C. Strategies for achieving high-level expression of genes in Escherichia coli // Microbiol. Rev. 1996. V. 60. No. 3. P. 512-538.

95. Mitchell S.W, McCormick J.B. Physicochemical inactivation of Lassa, Ebola, and Marburg viruses and effect on clinical laboratory analyses // J. Clin. Microbiol. 1984. V. 20. No. 3. P. 486-489.

96. Monath T.P. Ecology of Marburg and Ebola viruses: speculations and directions for future research // J. Infect Dis. 1999. V. 179 Suppl l.P. S127-S138

97. Muhlberger E, Sanchez A, Randolf A, Will C, Kiley M.P, Klenk H.D, Feldmann H. The nucleotide sequence of the L gene of Marburg virus, a filovirus: homologies with paramyxoviruses and rhabdoviruses // Virology. 1992. V. 187. No. 2. P. 534-547.

98. Muhlberger E., Trommer S., Funke C., Volchkov V., Klenk H.D., Becker S. Termini of all mRNA species of Marburg virus: sequence and secondary structure // Virology. 1996. V. 223. No. 2. P. 376-380.

99. Muhlberger E., Weik M., Volchkov V.E., Klenk H.D., Becker S. Comparison of the transcription and replication strategies of marburg virus and Ebola virus by using artificial replication systems // J. Virol. 1999. V. 73. No. 3. P. 2333-2342.

100. Murphy F.A., van der Groen G., Whitfield S.G., Lance J.V. Ebola and Marburg virus morphology and taxonomy. // In: Ebola virus haemorrhagic fever. / Ed. Pattyn S.R. Amsterdam: Elsevier North-Holland, 1978. P. 61-68.

101. Ning B.F., Zhu H.M., Zhou X.J., Cao Y., Zhou A.G. Prokaryotic expression, purification of prM of JEV and preparation of monoclonal antibody. // Zhonghua Shi Yan. He. Lin. Chuang. Bing. Du Xue. Za Zhi. 2008. V. 22. No. 1. P. 65-67.

102. Nöda T., Sagara H., Suzuki E., Takada A., Kida H., Kawaoka Y. Ebola virus VP40 drives the formation of virus-like filamentous particles along with GP // J. Virol. 2002. V. 76. No. 10. P. 4855-4865.

103. Nöda T., Watanabe S., Sagara H., Kawaoka Y. Mapping of the VP40-binding regions of the nucleoprotein of Ebola virus // J. Virol. 2007. V. 81. No. 7. P. 3554-3562.

104. Okware S.I., Omaswa F.G., Zaramba S., Opio A., Lutwama J.J., Kamugisha J., Rwaguma E.B., Kagwa P., Lamunu M. An outbreak of Ebola in Uganda // Trop. Med. Int. Health. 2002. V. 7. No. 12. P. 1068-1075.

105. Pattyn S., van der G.G., Courteille G., Jacob W., Piot P. Isolation of Marburg-like virus from a case of haemorrhagic fever in Zaire // Lancet. 1977. V. 1. No. 8011. P. 573-574.

106. Peters C.J., Sanchez A., Rollin P.E. Filoviridae: Marburg and Ebola Viruses. // In: Fields Virology. / Ed. Fields B.N. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 1996. P. 1161-1176.

107. Pringle C.R. The order Mononegavirales // Arch. Virol. 1991. V. 117. No. 1-2. P. 137-140.

108. Regnery R.L., Johnson K.M., Kiley M.P. Virion nucleic acid of Ebola virus // J. Virol. 1980. V. 36. No. 2. P. 465-469.

109. Ruigrok R.W., Schoehn G., Dessen A., Forest E., Volchkov V., Dolnik O., Klenk H.D., Weissenhorn W. Structural characterization and membrane binding properties of the matrix protein VP40 of Ebola virus // J. Mol. Biol. 2000. V. 300. No. l.P. 103-112.

110. Rychlik W., Rhoads R.E. A computer program for choosing optimaloligonucleotides for filter hybridization, sequencing and in vitro amplification of

111. DNA //Nucleic Acids Res. 1989. V. 17. No. 21. P. 8543-8551.128

112. Sambrook J., Fritisch T.E., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor. N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

113. Sanchez A., Khan A.S., Zaki S.R., Nabel G.J., Ksiazek T.G., Peters

114. C.J. Filoviridae: Marburg and Ebola viruses // Ed. Fields B.N. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2001. P. 1279-1304.

115. Sanchez A., Kiley M.P., Holloway B.P., Auperin D.D. Sequence analysis of the Ebola virus genome: organization, genetic elements, and comparison with the genome of Marburg virus // Virus Res. 1993. V. 29. No. 3. P. 215-240.

116. Sanchez A., Kiley M.P., Holloway B.P., McCormick J.B., Auperin

117. D.D. The nucleoprotein gene of Ebola virus: cloning, sequencing, and in vitro expression //Virology. 1989. V. 170. No. 1. P. 81-91.

118. Sehr P., Zumbach K., Pawlita M. A generic capture ELISA for recombinant proteins fused to glutathione S-transferase: validation for HPV serology // J. Immunol. Methods. 2001. V. 253. No. 1-2. P. 153-162.

119. Seong S.Y., Choi C.Y. Current status of protein chip development in terms of fabrication and application // Proteomics. 2003. V. 3. No. 11. P. 21762189.

120. Siegert R, Shu H.L, Slenczka W, Peters D, Muller G. On the etiology of an unknown human infection originating from monkeys. // Dtsch. Med. Wochenschr. 1967. V. 92. No. 51. P. 2341-2343.

121. Smith D.H., Johnson B.K, Isaacson M, Swanapoel R, Johnson K.M., Killey M, Bagshawe A, Siongok T, Keruga W.K. Marburg-virus disease in Kenya//Lancet. 1982. V. 1. No. 8276. P. 816-820.

122. Sorokin A.V., Kazachinskaia E.I, Ivanova A.V, Kachko A.V, Netesov S.V., Bukreyev A.A., Loktev V.B, Razumov I.A. Mapping of two dominant sites of VP35 of Marburg virus // Viral Immunol. 2002. V. 15. No. 3. P. 481-492.

123. Stewart B.J, Houghton R.L, Morrow W.J.W, Raychaudhuri S. Design considerations for immunodiagnostics. // IVD Technology. 2006. V. 12. P. 47-53.

124. Subbotina E, Dadaeva A, Kachko A, Chepurnov A. Genetic factors of Ebola virus virulence in guinea pigs // Virus Res. 2010. V. 153. No. 1. P. 121133.

125. Swanepoel R, Leman P.A., Burt F.J, Zachariades N.A, Braack L.E, Ksiazek T.G, Rollin P.E., Zaki S.R, Peters C.J. Experimental inoculation of plants and animals with Ebola virus // Emerg Infect Dis. 1996. V. 2. No. 4. P. 321-325.

126. Theriault S, Groseth A, Neumann G, Kawaoka Y, Feldmann H. Rescue of Ebola virus from cDNA using heterologous support proteins // Virus Res. 2004. V. 106. No. 1. P. 43-50.

127. Timmins J., Scianimanico S., Schoehn G., Weissenhorn W. Vesicular release of ebola virus matrix protein VP40 // Virology. 2001. V. 283. No. 1. P. 1-6.

128. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1979. V. 76. No. 9. P. 4350-4354.

129. Towner J.S., Pourrut X., Albarino C.G., Nkogue C.N., Bird B.H., Grard G., Ksiazek T.G., Gonzalez J.P., Nichol S.T., Leroy E.M. Marburg virus infection detected in a common African bat // PLoS. One. 2007. V. 2. No. 1. P. e764

130. Volchkov V.E., Blinov V.M., Netesov S.V. The envelope glycoprotein of Ebola virus contains an immunosuppressive-like domain similar to oncogenic retroviruses // FEBS Lett. 1992. V. 305. No. 3. P. 181-184.

131. Volchkov V.E., Chepurnov A.A., Volchkova V.A., Ternovoj V.A., Klenk H.D. Molecular characterization of guinea pig-adapted variants of Ebola virus // Virology. 2000. V. 277. No. 1. P. 147-155.

132. Volchkov V.E., Volchkova V.A., Chepurnov A.A., Blinov V.M., Dolnik O., Netesov S.V., Feldmann H. Characterization of the L gene and 5' trailer region of Ebola virus // J. Gen. Virol. 1999. V. 80 ( Pt 2). P. 355-362.

133. Expression strategy of the Ebola virus GP gene: implication of the transcriptional RNA editing. Marburg, Germany.2000. P. 4 Symposium on Marburg and Ebola viruses.

134. Warfield K.L., Swenson D.L., Olinger G.G., Kaiina W.V., Aman M.J., Bavari S. Ebola virus-like particle-based vaccine protects nonhuman primates against lethal Ebola virus challenge // J. Infect Dis. 2007. V. 196 Suppl 2. P. S430-S437

135. Watanabe S., Nöda T., Kawaoka Y. Functional mapping of the nucleoprotein of Ebola virus // J. Virol. 2006. V. 80. No. 8. P. 3743-3751.

136. Watanabe S., Watanabe T., Nöda T., Takada A., Feldmann H., Jasenosky L.D., Kawaoka Y. Production of novel ebola virus-like particles from cDNAs: an alternative to ebola virus generation by reverse genetics // J. Virol. 2004. V. 78. No. 2. P. 999-1005.