Иммунобиологические свойства возбудителя респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, выделенного на территории Российской Федерации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Кирпиченко Владимир Владимирович

• Кирпиченко Владимир Владимирович
• кандидат наук
• 2021

Оглавление диссертации кандидат наук Кирпиченко Владимир Владимирович

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Характеристика семейства Пневмовирусов

2.2 Характеристика респираторно-синцитиальной вирусной инфекции

2.2.1 Строение вируса респираторно-синцитиальной инфекции КРС

2.2.2 Устойчивость вируса

2.2.3 Эпизоотическая ситуация в мире

2.2.4 Эпизоотическая ситуация в России

2.2.5 Патогенез и клиническая картина при респираторно-синцитиальной вирусной инфекции КРС

2.2.6 Патологоанатомические изменения

2.2.7 Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции КРС

2.2.8 Меры борьбы

2.3 Заключение по обзору литературы

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Материалы

3.1.1 Вирусы

3.1.2 Культуры клеток

3.1.3 Животные

3.1.4 Реактивы, растворы, буферные смеси, питательные среды

3.1.5 Оборудование

3.1.6 Коммерческие наборы

3.2 Методы

3.2.1 Постановка ПЦР в режиме реального времени

3.2.2 Секвенирование

3.2.3 Выделение вируса РСИ КРС

3.2.4 Получение препаратов антигена

3.2.5 Иммунизация животных

3.2.6 Статистическая обработка результатов

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

4.1 Разработка метода выявления генома вируса РСИ КРС с помощью ПЦР-РВ

4.2 Выделение изолята вируса РСИ КРС из проб патологического материала в культуре клеток

4.3 Выделение изолята вируса РСИ КРС в КК

4.4 Скрининг культур клеток чувствительных к изоляту вируса РСИ КРС

4.4 Оптимизация параметров культивирования изолята вируса РСИ КРС

4.4.1 Определение влияния посевной концентрации клеток на репродукцию изолята вируса РСИ КРС

4.4.2 Влияние возраста монослоя КК на репродукцию изолята вируса РСИ КРС

4.4.3 Определение влияния множественности заражения при культивировании изолята вируса РСИ КРС

4.4.4 Влияние времени культивирования изолята вируса РСИ КРС на инфекционную активность вируса

4.4.5 Влияние рН поддерживающей среды на репродукцию изолята вируса РСИ КРС в культурах клеток КВТ, FBT и ВТ

4.4.6 Оптимизация состава питательной среды для КК, при культивировании изолята вируса РСИ КРС

4.4.7 Влияние концентрации сыворотки крови в питательной среде на активность изолята вируса РСИ КРС

4.5 Устойчивость изолята вируса РСИ КРС при различных температурах хранения59

4.6 Изучения иммунобиологических свойств изолята вируса РСИ КРС на лабораторных и естественно-восприимчевых животных

4.6.1 Осветление вирусного сырья изолята РСИ КРС от клеточного субстрата

4.6.2 Оптимизация условий инактивации вируссодержащего сырья, изолята вируса РСИ КРС

4.6.3 Изучение имуногенных свойств изолята вируса РСИ КРС при введении лабораторным животным

4.7 Депонирование выделенного изолята вируса РСИ КРС

4.7.1 Оценка внешнего вида образцов изолята «Вологда/2019» вируса РСИ КРС

4.7.2 Определение растворимости образцов изолята «Вологда/2019» вируса РСИ КРС

4.7.3 Определение массовой доли влаги образцов изолята «Вологда/2019» вируса РСИ КРС

4.7.4 Контроль отсутствия контаминации образцов изолята «Вологда/2019» вируса РСИ КРС

4.7.5 Определение цитопатической активности (титра вируса) образцов изолята «Вологда/2019» вируса РСИ КРС в культуре клеток

4.7.6 Генетическая идентификация образцов изолята «Вологда/2019» вируса РСИ КРС

4.7.7 Заключение по депонированию изолята «Вологда/2019» вируса РСИ КРС

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5.1 Выводы

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунобиологические свойства возбудителя респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, выделенного на территории Российской Федерации»

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Внедрение в животноводство промышленных методов, наряду с увеличением продуктивности животных, способствовало возникновению благоприятных условий для массового распространения инфекционных заболеваний. Ведущую позицию среди самых распространенных заболеваний крупного рогатого скота (КРС) занимают респираторные болезни [88, 92, 94, 93]. Которые могут возникать как самостоятельно (парагрипп-3 (ПГ-3), инфекционный ринотрахеит (ИРТ), вирусная диарея (ВД), аденовирусы, респираторно-синцитиальная инфекция (РСИ)) [27], так и в различных ассоциациях вирусной и бактериальной этиологии, нанося огромный экономический ущерб животноводству, связанный с потерей продуктивности у взрослого поголовья и отставанием в росте и развитии у молодняка КРС [88, 92, 94, 93].

В настоящее время PCИ КРС зарегистрирована во многих странах мира (Япония, Германия, США, Хорватия, Бельгия и др.), в том числе с 1975 г. и в России [100, 99, 51, 74].

Возбудитель РСИ КРС относится к семейству Pneumoviridae, роду Orthopneumovirus, виду Orthopneumovirus bovine. К вирусу восприимчив КРС всех пород. По данным отечественных и зарубежных авторов, наиболее подвержены заболеванию РСИ КРС телята в возрасте от одного месяца до года [94]. Однако у молодняка до 4-недельного возраста заболевание встречается реже. Имеются данные о возникновении вспышек и среди взрослого поголовья КРС, что может быть связано с механическим заносом возбудителя в стадо, где не применялись профилактические меры для предупреждения заноса РСИ КРС [85, 87]. К таким случаям можно отнести закупку инфицированного скота, использование при транспортировке не-сертифицированных перегонных участков и т. д.

Источником инфекции являются больные или ранее переболевшие животные. Наиболее вероятными способами передачи вируса считается аэрогенный или контактный, через выделения из глаз, носа и слизистой оболочки трахеи [85, 50, 39].

Инкубационный период возбудителя РСИ КРС составляет от 2 до 5 суток. В течении инфекционного процесса РСИ КРС различают три формы: субклиническую, острую и сверхострую [95].

Одним из ключевых аспектов борьбы и контроля с РСИ КРС, является своевременная и точная диагностика заболевания.

Диагноз на РСИ КРС ставят на основании эпизоотологических и клинических данных, патологоанатомических изменений и лабораторных исследований. Лабораторная диагностика включает обнаружение специфических антител или антигена методом иммуноферментного анализа (ИФА), идентификация генома вируса РСИ КРС с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и выделение вируса из биологического материала от животных культуральными методами [87, 89, 101, 97 98, 100]. Как правило, материалом для исследования служат сыворотки крови, пробы носовых выделений, трахеальные и бронхиальные экссудаты, кусочки легкого, трахеи и бронхов.

Выделение вируса РСИ КРС в культуре клеток чаще всего затруднено ввиду его лабильности и неустойчивости в условиях внешней среды [98]. Результат выделения вируса в культуре клеток и его дальнейшая идентификация в ПЦР или ИФА во многом зависят от правильного отбора, хранения и транспортировки проб биоматериала от больных животных [90, 98, 97]. Также для успешного выделения и идентификации вируса РСИ КРС большое значение имеет строгое соблюдение выработанных схем культивирования возбудителя, которые могут отличаться в зависимости от штаммов вируса РСИ КРС. Для выделения возбудителя, согласно данным отечественных и зарубежных авторов, используют гомологичные, первично трипси-низированные эмбриональные культуры клеток эмбриона КРС почка эмбриона КРС (ПЭК), легкие эмбриона КРС (ЛЭК) и др. [97, 98].

Для диагностики РСИ КРС наиболее перспективной является ПЦР-РВ в сочетании с ретроспективными серологическими методами, с последующим выделением вируса в культуре клеток [95]. Следует отметить, что вирусологические методы являются важным звеном при разработке диагностических систем и средств специфи-

ческой профилактики заболевания. При производстве качественных тест-систем, наборов, вакцин и специфических сывороток крайне важно получить высокоактивный культуральный вирусный материал [91].

Исходя из экономических потерь при возникновении вспышек РСИ КРС, а так же относительно низкой степени проработки в вопросах выделения и оптимизации параметров культивирования (выделение на эмбриональных первичных культурах), представляется актуальным изучение иммунобиологических свойств вируса РСИ КРС для оптимизации методов выделения возбудителя и наработка вируссодержа-щего сырья для создания средств диагностики и профилактики данного заболевания.

Степень разработанности проблемы. Для диагностики РСИ КРС в разных странах мира используются такие методы как: ИФА, ПЦР, культуральные методы, РСК и РН [89, 11].

Наибольшее распространение имеют такие методы диагностики как ПЦР-РВ, ИФА и выделение вируса в культуре клеток.

Диагностика методом ПЦР-РВ. При диагностике РСИ КРС во многих странах мира (Бельгия, Хорватия, Великобритания и др.), в виду затруднения при выделении и диагностики возбудителя культуральными методами, ПЦР-РВ в совокупности с эпизоотологическими данными, считается золотым стандартом [15, 35, 52]. Зарубежной коммерческой фирмой Qiagen, Hilden, Германия предложены наборы QIAamp и Rneasy Mini Kit, для выделения вирусной РНК из различных проб биологического материала. При диагностике РСИ КРС методом ПЦР-РВ в России наряду с вышеупомянутыми наборами, используют набор для выделения вирусной РНК Ампли прайм «Рибо-Сорб», компании AmpliSens, Россия. Кроме того в России имеется разработанная в 2011 году тест-система для диагностики РСИ КРС разработанная Войтовой К.В..

Диагностика методом ИФА. Зарубежными коммерческими фирмами предложены тест-системы для обнаружения антигена РСИ КРС «ELISA kit for antigenic diagnosis of Bovine Respiratory Syncytial Virus (BRSV); Bio-X Diagnostics, Бельгия, а

для идентификации наличия антител к вирусу РСИ КРС в сыворотке крови «INgezim BRSV COMPAC 12.BRS.K.3» фирмы Ingenasa Испания.

Диагностика культуральными методами. По данным отечественных авторов, чувствительными к вирусу РСИ КРС считаются такие культуры клеток, как диплоидные культуры клеток легкого (Л5Э) и почки эмбриона (П5Э) коровы, перевиваемые линии почки эмбриона овцы (FLK), почки теленка (Т-1, ПТ) и первично трип-синизированная культура клеток ЛЭК [96, 97, 98].

Однако выделение вируса РСИ КРС затруднено ввиду его чрезвычайной лабильности и возможно только на ранней стадии инфекции [96, 97, 98]. Вероятность выделения снижается с появлением признаков заболевания [96, 97, 98].

Из-за сложности выделения и культивирования вируса РСИ КРС in vitro, а также проблематичности получения достаточного количества вирусного материала с высокой цитопатической активностью, делает цели и задачи диссертационной работы актуальными.

Цель и задачи исследований. Целью диссертационной работы являлось изучение иммунобиологических свойств возбудителя респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, выделенного на территории Российской Федерации.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Провести исследования паталогических проб полученных от животных с респираторной клиникой;

2. Выделить и адаптировать к КК изолят вируса РСИ КРС;

3. Провести подбор оптимальных систем для репродукции вируса РСИ КРС и оптимизировать параметры культивирования в чувствительных клеточных системах;

4. Определить оптимальные условия хранения изолята вируса РСИ КРС;

5. Изучить иммуногенные свойства изолята вируса РСИ КРС на лабораторных и естественно восприимчивых животных.

Научная новизна исследований.

1. Выполнена работа по оптимизации методов отбора, хранения и транспортировки проб паталогического материала, от больных животных с признаками респираторной патологии;

2. Разработаны методические рекомендации для диагностики вирусного генома РСИ КРС в пробах биологического материала;

3. Проведена работа по выделению вируса РСИ КРС из проб паталогического материала;

4. Изучены иммунобиологические свойства изолята вируса РСИ КРС и определены оптимальные параметры культивирования;

5. На лабораторных и естественно-восприимчивых животных изучены иммунологические свойства изолята вируса РСИ КРС;

6. В коллекцию штаммов и микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» депонирован изолят вируса РСИ КРС.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Теоретическая значимость работы заключается в том, что результате проведенных исследований на территории РФ в 2019 г. выделен и идентифицирован вирус РСИ КРС, который депонирован в коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером (ссылкой) - «Вологда/2019».

Определенные параметры культивирования вируса РСИ КРС штамм «Вологда/2019», создают перспективы, для разработки методов диагностики и средств специфической профилактики возбудителя РСИ КРС. Изученные иммунобиологические свойства изолята вируса РСИ КРС, на лабораторных и естественно-восприимчивых животных, создают основу для будущих исследований активности разрабатываемых вакцинных препаратов для построения схем опытов.

Практическая значимость работы. Практическая значимость работы заключается в том, что в результате проведенных исследований разработаны комиссионно проверены и утверждены методические рекомендации по выявлению РНК вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота с помощью поли-

меразной цепной реакции в режиме реального времени, позволяющие дифференцировать данный вирус с аналитической чувствительностью 0,10 ^ ТЦД50/см3. Разработаны комиссионно проверены и утверждены методические рекомендаций по выделению вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота в культуре клеток и СТО на штаммы вируса РСИ КРС.

Результаты научного исследования соответствуют следующим пунктам паспорта специальности 06.02.02 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология»:

1. Природа и происхождение, структура, химический состав, морфологические, биологические, физико-химические свойства патогенных бактерий, вирусов и токсичных грибов. Классификация возбудителей и вызываемыхими инфекционных болезней животных.

2. Генетика и селекция, культивирование бактерий, вирусов, грибов. Создание новых штаммов микроорганизмов, разработка, стандартизация, технология и контроль производства биопрепаратов на основе патогенных микроорганизмов.

3. Инфекционный процесс. Природа патогенности, явления, процессы и процессы взаимодействия микро- и макроорганизмов на всех уровнях (молекулярно-генетическом, клеточном, тканевом, организменном, популяционном) в условиях воздействия экзогенных и эндогенных факторов.

4. Методы выделения микроорганизмов и вирусов из патологического материала, средства и методы диагностики инфекционных болезней животных, индикация патогенных микроорганизмов.

5. Общая и частная инфекционная патология. Семиотика, патогенез и патофизиология инфекционных болезней животных.

6. Эпизоотологический процесс, общие и частные вопросы эпизоотологии инфекционных болезней животных. Новые инфекции животных, болезни, общие для человека и животных. Эпизоотологический метод исследования, аналитическая эпизоотология.

7. Активная специфическая профилактика инфекционных болезней животных, вакцины, вакцинология, способы вакцинации. Средства и методы лечения и лекарственной профилактики инфекционных болезней животных.

Методология и методы исследования. При проведении исследований использовали различные методики, материалы и животных (лабораторных и естественно восприимчивых). Для работы с вирусным материалом использовали следующие методы: вирусологические (выделение, культивирование и титрование вируса) молекулярно-биологические (ПЦР-РВ и секвенирование), серологические (непрямой, конкурентный вариант ИФА), а также физико-химические (приготовление химических растворов, питательных сред, антигенных смесей, центрифугирование и др.).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на публичное представление:

1. Разработка методических рекомендаций по выявлению РНК вируса респи-раторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота с помощью полимераз-ной цепной реакции в режиме реального времени;

2. Выделение изолята, вируса РСИ КРС из проб патологического материала;

3. Адаптация изолята вируса РСИ КРС к различным линиям культур клеток;

4. Оптимизация параметров культивирования в чувствительных клеточных системах;

5. Разработка методических рекомендаций по выделению вируса респира-торно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота в культуре клеток;

6. Определить оптимальные условия хранения изолята вируса РСИ КРС;

7. Изучение имуногенных свойств изолята вируса РСИ КРС на лабораторных и естественно восприимчивых животных;

8. Депонирование в коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» изолята вируса РСИ КРС под регистрационным номером (ссылкой) -«Вологда/2019».

Личный вклад соискателя. Исследования по теме диссертационной работы (планирование и выполнение основных работ экспериментов, обобщение полученных результатов) проведены автором самостоятельно. Консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы оказывали: к.б.н Кононова С.В., к.б.н. Бьядовская О.П., к.б.н. Спрыгин А.В., к.б.н. Манин Б.Л., д.в.н. Мищенко В.А., Жбанова Т.В., Шумилова И.Н., Нестеров А.А., Туркова М.В., Бухон Е.А., за что автор выражает им глубокую признательность.

Исследования по диссертационной работе были выполнены в период с 2017 по 2020 гг. в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»).

Апробация и достоверность результатов работы. Результаты проведенных исследований достоверны, что подтверждается комиссионными испытаниями разработанных и утвержденных методических рекомендаций и СТО на штаммы вируса РСИ КРС, а так же большим объемом экспериментального материала, результаты обработаны статистическими методами и не вызывают сомнений в их достоверности. Выводы и практические предложения обоснованы и вытекают из результатов исследований, изложенных в диссертации.

Результаты исследования были доложены и опубликован в сборнике статей всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и студентов "Инициативы молодых ученых в науке и производстве" Пенза 2020 год, с темой «Выделение возбудителя респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота из проб биологического материала в культуре клеток».

Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 3 научные работы, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования и обсуждение, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение и список литературы, который состоит из 1 01 источник,

в том числе 19 работ на русском языке. Работа иллюстрирована 17 таблицами, 18 рисунками и дополнена приложением документов, подтверждающих внедрение результатов работы в ветеринарную практику.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика семейства Пневмовирусов

Pneumoviridae (от греческого Pneumo-, легкое, -viridae, вирус, от латинского яд, слизистая жидкость) — семейство РНК-содержащих вирусов, было создано в 2015 году путем исключения подсемейства Pneumovirinae из общего семейства па-рамиксовирусов. В семейство Pneumoviridae входит 2 рода: Metapneumovirus и Orthopneumovirus (Таблица 1).

Таблица 1 Таксономия вируса РСИ КРС

Семейство Род Вид

Metapneumovirus Avian metapneumovirus

Human metapneumovirus

Рпвытоутйав Bovine orthopneumovirus

Orthopneumovirus Human orthopneumovirus

Murine orthopneumovirus

Как показано в таблице 1, семейство Pneumoviridae представлено двумя родами: Metapneumovirus и Orthopneumovirus. В семействе относительно небольшое количество вирусов, так в состав рода Metapneumovirus входят метапневмовирусы человека и птиц, а в состав рода Orthopneumovirus - респираторно-синцитиальный вирус КРС, два вируса респираторно-синцитиальной инфекции человека (вирусы РСИ человека типа А2 и В1) и вирус пневмонии мышей [95].

Рисунок 1 - Схематическое изображение родовой вирусной частицы пневмови-русов

Примечания: «№> - нуклеокапсидный белок; «Р» - фосфопротеин; «М1, М2-1, М2-2» - матричные белки; «F» -белок слияния; <^№> - гидрофобный белок; «С» - гликопротеин типа II; «Ь» - РНК-зависимая РНК-полимераза

Репликация вируса происходит в цитоплазме. Цикл репродукции начинается с прикрепления вируса к клеточной поверхности и слияния вирусной оболочки с плазматической мембраной клетки хозяина [95]. В результате слияния липидных слоев вируса с плазматической мембраной образуется пора, через которую нук-леокапсид проникает в цитоплазму, где начинается транскрипция вирусных генов находящихся в составе нуклеокапсида вирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы. Целостность нуклекапсида при этом сохраняется. Полимераза транскрибируя геномную РНК, сдвигает белковый чехол, образованный белком N но не устраняет его, и после прохождения полимеразного комплекса структура нуклеокапсида на транскрибированном участке восстанавливается [95].

2.2 Характеристика респираторно-синцитиальной вирусной инфекции

Возникновение респираторно-синцитиальной вирусной инфекции КРС, обуславливается различными факторами, такими как условия содержания, рацион, стресс факторы, а также воздействие бактериальных и вирусных агентов [92, 94, 11, 70].

Синергическое взаимодействие вирусных и бактериальных патогенов обуславливают различные расстройства функционирования респираторного тракта у продуктивных домашних животных [93, 101, 77]. Одним из примеров синергии вирусной и бактериальной инфекции является взаимодействие вируса респираторно-синцитиальной инфекции КРС и возбудителя пастереллеза КРС Pasteurella multocida [93, 77]. При поражении дыхательных путей вирусом РСИ и воздействии стресс факторов на организм животного, бактерии рода P. multocida, могут вызвать гнойные поражение в нижних частях дыхательных путях КРС, бронхопневмонию и как следствие тяжелые клиническое состояние и смерть животного [93, 77, 36]. Так же многими авторами было отмечено, синергическое взаимодействие вируса РСИ КРС и возбудителя микоплазмоза КРС [60, 38].

2.2.1 Строение вируса респираторно-синцитиальной инфекции КРС

Вирусные единицы полиморфные или филаментозные [95]. Размер вируса варьирует от 35 до 150 нм в диаметре. Оболочка вируса состоит из липидов клетки-хозяина. Нуклеокапсид, состоящий из белковой оболочки и нуклеиновых кислот вируса, спирально симметричный. Размер нуклеокапсида составляет 13,5 нм в диаметре, с шагом спирали в 6,5 нм. Геном вируса состоит из одноцепочечной, несегмен-тированной, отрицательной РНК [95]. Размер генома составляет 15 кб и он кодирует 11 белков. Уникальной особенностью генома является ген М2, который способен кодировать белки М2-1 и М2-2. Белок М2-1 является уникальным и ни в одном другом семействе, по настоящее время, похожего белка не обнаружили. Белок М2-1 является фактором процессивности для вирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы и способствует синтезу вирусной РНК [95].

Нуклеокапсидный белок (N3 необходим для репликации и трансмиссии вируса. Играет главную роль в формировании капсида вокруг вируса. Необходимый для репликации фосфопротеин (Р) облегчает прикрепление РНК-зависимой РНК-полимеразы и рекрутирует белок М2. Матричный белок М1 облегчает взаимодействие нуклеокапсида и оболочки. М2-1 является фактором внутригенной и межгенной транскрипции мРНК [95].

2.2.2 Устойчивость вируса

Имеются данные многих авторов, что вирус РСИ КРС не устойчив к положительным и отрицательным температурам [95, 90, 97, 98]. При 56°С инактивация вируса происходит за 30-40 минут, а в диапазоне от -20 до -70 градусов вирус теряет свою активность в течении 1-2 месяцев. Большинство штаммов обладают высокой чувствительностью к низким значениям рН - от 6,8 и ниже [91, 14]. Оптимальной средой для репликации вируса РСИ КРС считается питательная среда с показателями рН от 7,0 до 7,4. Данных по устойчивости вируса РСИ КРС во внешней среде крайне мало, по настоящее время данный вопрос остается малоизученным.

2.2.3 Эпизоотическая ситуация в мире

В 1956 году в одной из лабораторий Вашингтона, впервые был зарегистрирован и выделен вирус респираторно-синцитиальной инфекции человека (hRSV) [95, 17]. Уже через пару лет было предположено, что РСВ является основным агентом при возникновении респираторных заболеваний у молодняка КРС. В 1984 году было подтверждено, что в сыворотке крови КРС были обнаружены антитела к РСВ человека [19, 41, 78]. Опубликованные результаты исследования положили начало для идентификации вируса РСИ у КРС.

В 1970-х годах в Швеции было опубликовано несколько отчетов о вспышках респираторных заболеваний среди КРС, как результат в этом же году был выделен вирус многим связанный с РСВ человека, который назвали респираторно-синцитиальный вирус КРС [70, 19].

В то же время на территории Японии 1паЬа Y, с соавторами исследовали многочисленные вспышки респираторных заболеваний у молодняка КРС. В результате проведенной работы, в том же году, учеными был выделен вирус «№ш[», который позже был переименован в РСВ КРС. В последующие года вирус РСИ КРС был обнаружен и выделен во многих странах Европы [50, 51, 14, 49, 3].

В США были опубликованы первые отчеты о респираторных вспышках у КРС, от больных респираторной клиникой животных в процессе работы был выделен вирус РСИ КРС [17, 38, 39].

В дальнейшем вирус РСИ КРС обнаруживали во многих странах мира, причиной быстрого распространения вируса считается методы и способы ведения животноводства.

Частота заражения вирусом РСИ КРС в некоторых молочных стадах превышает 50% [6, 27, 40]. Исследования, проведенные в Швеции и Бельгии, показали, что от 40 до 100% КРС являются серопозитивными к вирусу РСИ КРС. Уровень се-ропозитивности животных напрямую коррелировал с географическим местоположением зараженных и условно здоровых стад, а так же плотностью поголовья в них [15, 40, 42]. В Дании, при выборке из общего количества 50 хозяйств, уровень антител к РСВ, в сыворотках крови КРС, достигал более 70% [45, 22, 44, 67]. Официально опубликованных отчетов о серопозитивности животных в Великобритании меньше, чем в соседних странах, однако результаты «национального обследования» в Англии и Уэльсе показали, что большая часть животных подвергалась воздействию вируса РСИ КРС [9, 59, 55].

В ходе исследований на откормочных площадках в Эквадоре, где наблюдали вспышки респираторных заболеваний КРС, вирус РСИ КРС был обнаружен в 43% случаев [58].

В Канаде 1989 году, исследовали завезенных из стран Европы телят, в ходе исследования был отмечен высокий уровень антител к вирусу РСИ КРС, хотя животные ранее не вакцинировались против данного заболевания. При этом серопри-валентность животных варьировала от 50 до 80% в различных стадах [73, 20]. Аналогичные результаты были получены при исследовании поголовья КРС в США. Кроме того авторы обнаружили, что уровень серопозитивности к вирусу РСИ КРС у взрослого поголовья значительно выше, чем у телят в первые месяцы жизни [12, 75, 13, 37]. В Мексике исследования сыворотки крови КРС, показали, что степень серо-позитивности животных к вирусу РСИ, напрямую зависит о плотности поголовья в стаде, территориального расположения откормочных площадок и количества импортного скота [66].

2.2.4 Эпизоотическая ситуация в России

На территории Российской Федерации, вирус РСИ КРС был обнаружен в 1970-1975 гг. (В.В. Гуненков с соавторами). В эти годы поступали данные о распространенности РСИ КРС среди животных в Европе, но авторам так и не удавалось выделить вирус в виду его чрезвычайной лабильности и неустойчивости при транспортировке [98, 100, 99].

В 1975-1976 годах проблемами разработки и диагностики вирусных заболеваний, в том числе вируса РСИ КРС занимались Халенев Г.А. и Гуненков В.В.. В 1975 году была проведена комплексная диагностика РСИ у молодняка в двух хозяйствах. В результате был опубликована работа с подтверждением обнаружения антител к вирусу РСИ КРС в сыворотке крови животных. В результате проделанной работы и совместных усилий отечественными учеными была опубликована диссертация, на соискание научной степени кандидата ветеринарных наук, посвященная диагностике вируса РСИ КРС [100, 99].

В 1977 году Гуненков В.В. и Халенев Г.А. разработали и успешно опробовали набор для диагностики РСИ КРС, в пробах патологического материала. Набор был разработан для выявления вирусного антигена, методом иммунофлуоресценции (ИФ), реакции связывания комплемента (РСК) и реакции диффузной преципитации (РДП) [99].

В течении последующих лет неоднократно сообщалось о вспышках респираторных инфекций с участием вируса РСИ КРС в разных регионах РФ [83, 85, 86, 87].

В дальнейшем были выполнены множество работ по разработке и усовершенствованию методов диагностики вируса РСИ КРС [95].

В России за последние 7 лет официально были зарегистрирована только 2 вспышки этой инфекции (Калининградская область (2014 г.) и Вологодская область (2018 г.)). Однако, существует немало аргументов в пользу того, что РСИ имеет более широкое распространение: это наблюдения ветеринарных специалистов, результаты экспертиз ветеринарных диагностических лабораторий и научных исследований [86, 87].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кирпиченко Владимир Владимирович, 2021 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. A bovine model of vaccine enhanced respiratory syncytial virus pathophysiology / L.J. Gershwin, E.S. Schelegle, R.A. Gunther [et al.] // Vaccine. - 1998. - Vol. 16. - N 11-12. - P. 1225-1236. doi: 10.1016/s0264-410x(98)80123-0. PMID: 9682383.

2. A comparison of three vaccines against respiratory syncytial virus in calves / E.J. Stott, L.H. Thomas, G. Taylor [et al.] // J. Hyg. (Lond). - 1984. - Vol. 93, N 2. - P. 251-261. doi: 10.1017/s0022172400064779. PMID: 6501875; PMCID: PMC2129425.

3. A severe outbreak of respiratory tract disease associated with bovine respiratory syncytial virus probably enhanced by vaccination with modified live vaccine / T.G. Kim-man, J. Sol, F. Westenbrink, P.J. Straver // Vet. Q. - 1989. - Vol. 11, N 4. - 250-253. doi: 10.1080/01652176.1989.9694231. PMID: 2603358.

4. A survey of virus infections of the respiratory tract of cattle and their association with disease / E.J. Stott, L.H.Thomas, A.P. Collins [et al.] // J. Hyg. (Lond). - 1980. -Vol. 85, N 2. - P. 257-270. doi: 10.1017/s0022172400063294. PMID: 6256435; PMCID: PMC2133932.

5. An experimental infection model for reproduction of calf pneumonia with bovine respiratory syncytial virus (BRSV) based on one combined exposure of calves / K. Tjemeha , A. Uttenthal, B. Viuff // Res. Vet. Sci. - 2003. - Vol. 74, N 1. - P. 55-65. doi: 10.1016/s0034-5288(02)00154-6. PMID: 12507567; PMCID: PMC7126694.

6. An experimental study of a concurrent primary infection with bovine respiratory syncytial virus (BRSV) and bovine viral diarrhoea virus (BVDV) in calves / M. Elvander, C. Baule, M. Persson [ et al.] // Acta Vet. Scand. - 1998. - Vol. 39, N 2. - P. 251-264. PMID: 9787488.

7. Antibody dynamics in BRSV-infected Danish dairy herds as determined by isotype-specific immunoglobulins / A. Uttenthal, L.E. Larsen, J.S. Philipsen [et al.] // Vet. Microbiol. - 2000. - Vol. 76, N 4. - P. 329-341. doi: 10.1016/s0378-1135(00)00261-3. PMID: 11000530; PMCID: PMC7117174.

8. Antibody responses against the G and F proteins of bovine respiratory syncytial virus after experimental and natural infections / R.S. Schrijver, J.P. Langedijk, W.H. van

der Poel [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 1996. - Vol. 3, N 5. - P. 500-506. PMID: 8877125; PMCID: PMC170396.

9. Antigenic heterogeneity of the attachment protein of bovine respiratory syncytial virus / J. Furze, G .Wertz, R. Lerch, G. Taylor // J. Gen. Virol. - 1994. - Vol. 75, N 2. -P. 363-370. doi: 10.1099/0022-1317-75-2-363. PMID: 8113757.

10. Association of bovine respiratory disease or vaccination with serologic response in dairy heifer calves up to three months of age / M.C. Windeyer, K.E. Leslie, S.M. Godden [et al.] // Amer. J. Vet. Res. - 2015. - Vol. 76, N 3. - P. 239-245. doi: 10.2460/ajvr.76.3.239. PMID: 25710760.

11. Babiuk, L.A. Viral-bacterial synergistic interaction in respiratory disease / L.A. Babiuk, M.J. Lawman, H.B. Ohmann // Advances Virus Res. - 1988. - Vol. 35. - P. 219-249. doi: 10.1016/s0065-3527(08)60713-7. PMID: 3148270; PMCID: PMC7172562.

12. Baker, J.C. Seroepizootiologic study of bovine respiratory syncytial virus in a beef herd / J.C. Baker, T.R. Ames, R.E. Werdin // Amer. J. Vet. Res. - 1986. - Vol. 47, N 2. -P. 246-253. PMID: 3954199.

13. Belknap, E.B. Experimental respiratory syncytial virus infection in calves and lambs / E.B. Belknap, D.K .Ciszewski, J.C. Baker // J. Vet. Diagn. Invest. - 1995. - Vol. 7, N 2. - P. 285-298. doi: 10.1177/104063879500700226. PMID: 7619920.

14. Bovine respiratory syncytial virus. Studies on an outbreak in Japan, 1968-1969 / Y. Inaba, Y. Tanaka, K. Sato [et al.] // Jpn. J. Microbiol. - 1972. - Vol. 16, N 5. - P. 373383. PMID: 4345977.

15. Boxus, M. Real Time RT-PCR for the detection and quantitation of bovine respiratory syncytial virus / M. Boxus, C. Letellier, P. Kerkhofs // J. Virol. Methods. - 2005. -Vol. 125, N 2. - P. 125-130. doi: 10.1016/j.jviromet.2005.01.008. PMID: 15794981.

16. BRSV subgroup B is circulating in Brazil / R.S. Almeida, H.G. Domingues, F.R. Spliki [ et al.] // Veterinary Record. - 2005. - Vol. 36. - P. 213-218.

17. Callan, R.J. Biosecurity and bovine respiratory disease / R.J .Callan, F.B. Garry // Vet. Clin. North. Amer. Food. Anim. Pract. - 2002. - Vol. 18. - P. 57-77. doi: 10.1016/s0749-0720(02)00004-x. PMID: 12064169; PMCID: PMC7126375.

18. Chamorro, M.F. Bovine respiratory disease vaccination against viral pathogens: modified-live versus inactivated antigen vaccines, intranasal versus parenteral, what is the evidence? / M.F. Chamorro, R.A. Palomares // Vet. Clin. North. Amer. Food Anim. Pract. - 2020. - Vol. 36, N 2. - P. 461-472. doi: 10.1016/j.cvfa.2020.03.006. PMID: 32451035; PMCID: PMC7244452.

19. Chanock, R. Recovery from infants with respiratory illness of a virus related to chimpanzee coryza agent (CCA). I. Isolation, properties and characterization / R. Chanock, B. Roizman, R. Myers // Amer. J. Hyg. - 1957. - Vol. 66, N 3. - P. 281-290. doi: 10.1093/oxfordjournals.aje.a119901. PMID: 13478578.

20. Comparison of caprine, human and bovine strains of respiratory syncytial virus / M. Trudel, F. Nadon, C. Simard [et al.] //Arch. Virol. - 1989. - Vol. 107, N 1-2. - P. 141149. doi: 10.1007/BF01313886. PMID: 2803001.

21. Development of nested PCR assays for detection of bovine respiratory syncytial virus in clinical samples / S. Vilcek, M. Elvander, A. Ballagi-Pordany, S. Belak // J. Clin. Microbiol. - 1994. - Vol. 32, N 9. - P. 2225-2231. doi: 10.1128/JCM.32.9.2225-2231.1994.

22. Diagnosis of enzootic pneumonia in Danish cattle: reverse transcription-polymerase chain reaction assay for detection of bovine respiratory syncytial virus in naturally and experimentally infected cattle / L.E. Larsen, K. Tj0rneh0j, B. Viuff [et al.] // J. Vet. Di-agn. Invest. - 1999. - Vol. 11, N 5. - P. 416-422. doi: 10.1177/104063879901100505. PMID: 12968754.

23. Differential chemokine and cytokine production by neonatal bovine y5 T-cell subsets in response to viral toll-like receptor agonists and in vivo respiratory syncytial virus infection / J.L. McGill, B.J. Nonnecke, J.D. Lippolis [et al.] // Immunology. - 2013. -Vol. 139, N 2. - P. 227-244. doi: 10.1111/imm.12075. PMID: 23368631; PMCID: PMC3647189.

24. Differential expression of cytokines in response to respiratory syncytial virus infection of calves with high or low circulating 25-hydroxyvitamin D3 / R.E. Sacco, B.J.Nonnecke, M.V. Palmer [et al.] // PLoS One. - 2012. - Vol. 7, N 3. - P. e33074.

doi: 10.1371/journal.pone.0033074. Epub 2012 Mar 8. PMID: 22412984; PMCID: PMC3297628.

25. DNA vaccination against respiratory syncytial virus in young calves / G. Taylor, C. Bruce, A.F. Barbet [et al.] // Vaccine. - 2005. - Vol. 10. - P. 1242-150. doi: 10.1016/j.vaccine.2004.09.005. PMID: 15652666.

26. Dynamics of bovine respiratory syncytial virus infections: a longitudinal epidemiological study in dairy herds // W.H. Van der Poel, J.A. Kramps, W.G. Middel [et al.] // Arch. Virol. - 1993. - Vol. 133, N 3-4. - P. 309-321. doi: 10.1007/BF01313771. PMID: 8257292.

27. Elvander, M. Severe respiratory disease in dairy cows caused by infection with bovine respiratory syncytial virus / M. Elvander // Vet. Record. - 1996. - Vol. 5. - P. 101105. doi: 10.1136/vr.138.5.101. PMID: 8650902.

28. Epidemiological study of bovine respiratory syncytial virus infections in calves: influence of maternal antibodies on the outcome of disease / T.G. Kimman, G.M. Zimmer, F. Westenbrink [et al.] // Vet. Record. - 1988. - Vol. 123, N 4. - P. 104-109. doi: 10.1136/vr. 123.4.104. PMID: 3413952.

29. Estimation of nasal shedding and seroprevalence of organisms known to be associated with bovine respiratory disease in Australian live export cattle / S.J. Moore, M.A. O'Dea, N. Perkins, A.J. O'Hara // J. Vet. Diagn Invest. - 2015. - Vol. 27, N 1. - P. 6-17. doi: 10.1177/1040638714559741. PMID: 25525134.

30. Evaluation and application of an indirect ELISA for the detection of antibodies to bovine respiratory syncytial virus in milk, bulk milk, and serum / M. Elvander, S. Edwards, K. Naslund, N. Linde // J. Vet. Diagn. Invest. - 1995. - Vol. 7, N 2. - P. 177182. doi: 10.1177/104063879500700202. PMID: 7619898.

31. Evaluation of a nested reverse transcription-PCR assay based on the nucleoprotein gene for diagnosis of spontaneous and experimental bovine respiratory syncytial virus infections / J.F. Valarcher, H. Bourhy, J. Gelfi, F. Schelcher // J. Clin. Microbiol. - 1999. -Vol. 37, N 6. - P. 1858-1862. doi: 10.1128/JCM.37.6.1858-1862.1999. PMID: 10325337; PMCID: PMC84970.

32. Evaluation of severe disease induced by aerosol inoculation of calves with bovine respiratory syncytial virus / A.R. Woolums, M.L.Anderson, R.A. Gunther [et al.] // Amer. J. Vet. Res. - 1999. - Vol. 60, N 4. - P. 473-480. PMID: 10211692.

33. Evidence of airborne transmission of the severe acute respiratory syndrome virus / I.T. Yu, Y. Li, T.W. Wong [et al.] / N Engl. J. Med. - 2004. - Vol. 350, N 17. - P. 1731-1739. doi: 10.1056/NEJMoa032867. PMID: 15102999.

34. Field trial of a quadrivalent vaccine against calf respiratory disease / E.J. Stott, L.H. Thomas, C.J. Howard, R.N. Gourlay // Vet. Record. - 1987. - Vol. 121, N 15. - P. 342347. doi: 10.1136/vr.121.15.342. PMID: 2825397.

35. Genetic analysis of bovine respiratory syncytial virus in Croatia / N. Kresic, T. Bedekovic, D. Brnic [et al.] // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. - 2018. - Vol. 58. - P. 52-57.

36. Gershwin, L.J. Immunology of bovine respiratory syncytial virus infection of cattle / L.J. Gershwin // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. - 2012. - Vol. 35, N 3. - P. 253-257. doi: 10.1016/j.cimid.2012.01.005. Epub 2012 Mar 10. PMID: 22410266.

37. Grubbs, S.T. Prevalence of ovine and bovine respiratory syncytial virus infections in cattle determined with a synthetic peptide-based immunoassay / S.T. Grubbs, S.A. Kania, L.N. Potgieter // J. Vet. Diagn. Invest. - 2001. - Vol. 13, N 2. - P. 128-132. doi: 10.1177/104063870101300206. PMID: 11289208.

38. Hal, C.B. Possible transmission by fomites of respiratory syncytial virus / C.B. Hall, R.G. Douglas, J.M. Geiman // J. Infect. Dis. - 1980. - Vol. 141, N 1. - P. 98-102. doi: 10.1093/infdis/141.1.98. PMID: 7365274.

39. Hall, C.B. Respiratory syncytial virus and parainfluenza virus / C.B. Hall // N. Engl. J. Med. - 2001. - Vol. 344, N 25. - P. 1917-1928. doi: 10.1056/NEJM200106213442507. PMID: 11419430.

40. High mortality rate associated with bovine respiratory syncytial virus (BRSV) infection in Belgian white blue calves previously vaccinated with an inactivated BRSV vaccine / P. Schreiber, M. Heimann, J.J. Letesson [et al.] // J. Vet. Med., B. Infect. Dis. Vet.

Public Health. - 2000. - Vol. 47, N 7. - P. 535-550. doi: 10.1046/j.1439-0450.2000.00380.x. PMID: 11048435.

41. Infection of gnotobiotic calves with a bovine and human isolate of respiratory syncytial virus. Modification of the response by dexamethasone / L.H. Thomas, E.J. Stott, A.P. Collins // Arch. Virol. - 1984. - Vol. 7, N 1-2. - P. 67-77. doi: 10.1007/BF01314304. PMID: 6365036.

42. Isolation of mycoplasma species from the lower respiratory tract of healthy cattle and cattle with respiratory disease in Belgium / A. Thomas, H. Ball, I. Dizier [et al.] // Vet. Record. - 2002. - Vol. 151, N 16. - P. 472-476. doi: 10.1136/vr.151.16.472. PMID: 12418530.

43. Kimman, T.G .Priming for local and systemic antibody memory responses to bovine respiratory syncytial virus: effect of amount of virus, virus replication, route of administration and maternal antibodies / T.G. Kimman, F. Westenbrink, P.J. Straver // Vet. Immunol. Immunopathol. - 1989. - Vol. 22, N 2. - P. 145-160. doi: 10.1016/0165-2427(89)90057-3. PMID: 2530685.

44. Larsen, L.E. Extensive sequence divergence among bovine respiratory syncytial viruses isolated during recurrent outbreaks in closed herds / L.E. Larsen, K. Tj0rneh0j, B. Viuff // J. Clin. Microbiol. - 2000. - Vol. 38, N 11. - P. 4222-4227. doi: 10.1128/JCM.38.11.4222-4227.2000. PMID: 11060095; PMCID: PMC87568.

45. Larsen, L.E. Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) pneumonia in beef calf herds despite vaccination / L.E. Larsen, C. Tegtmeier, E. Pedersen // Acta Vet. Scand. -2001. - Vol. 42, N 1. - P. 113-121. doi: 10.1186/1751-0147-42-113. PMID: 11455891; PMCID: PMC2202333.

46. Local and systemic antibody response to bovine respiratory syncytial virus infection and reinfection in calves with and without maternal antibodies / T.G. Kimman, F. Westenbrink, B.E .Schreuder, P.J. Straver // J. Clin. Microbiol. - 1987. - Vol. 25, N 6. - P. 10971106. doi: 10.1128/JCM.25.6.1097-1106.1987. PMID: 2954996; PMCID: PMC269144.

47. MacLauchlan, N.J . Fenner's Veterinary Virology / N.J.MacLachlan, E.J. Dubovi . - Amsterdam: Acad. Press, 2011.

48. Morbidity in Swedish dairy calves from birth to 90 days of age and individual calf-level risk factors for infectious diseases / C. Svensson, K. Lundborg, U. Emanuelson, S.O. Olsson [et al.] // Prevent. Vet. Med. - 2003. - Vol. 58, N 3-4. - P. 179-197. doi: 10.1016/s0167-5877(03)00046-1. PMID: 12706057.

49. Motha, M,X. Prevalence of IBR, PI 3, BRS and BCV infections in the dairy cattle population of New Zealand / M.X. Motha, M.F. Hansen // N. Z. Vet. J. - 1998. - Vol. 46, N 6. - P. 239-240. doi: 10.1080/00480169.1998.36097. PMID: 16032057.

50. Observations on outbreaks of respiratory disease in housed calves--(1) Epidemiological, clinical and microbiological findings / D.G. Bryson, J.B. McFerran, H.J. Ball, S.D. Neill // Vet. Record. - 1978. - Vol. 103, N 22. - P. 485-489. DOI: 10.1136/vr.103.22.485.

51. Observations on outbreaks of respiratory disease in housed calves--(2) Pathological and microbiological findings / D.G.Bryson, J.B. McFerran, H.J. Ball, S.D. Neill // Vet. Record. - 1978. - Vol. 103, N 23. - P. 503-509. DOI: 10.1136/vr.103.23.503.

52. One-step multiplex real time RT-PCR for the detection of bovine respiratory syn-cytial virus, bovine herpesvirus 1 and bovine parainfluenza virus 3 / L.Thonur, M. Maley, J. Gibray [et al.] // BMC Vet Res. 2012 - Vol. 8. - P. 37. doi: 10.1186/1746-6148-8-37. PMID: 22455597; PMCID: PMC3349549.

53. Paccaud, M.F. A respiratory syncytial virus of bovine origin / M.F. Paccaud, C. Jacquier / Arch. Ges. Virusforsch. - 1970. - Vol. 30, N 4. - P. 327-342. doi: 10.1007/BF01258363. PMID: 4195627.

54. Passive protection of gnotobiotic calves using monoclonal antibodies directed at different epitopes on the fusion protein of bovine respiratory syncytial virus / L.H. Thomas, R.S. Cook, S.G. Wyld [et al.] // J. Infect. Dis. - 1998. - Vol. 177, N 4. - P. 874-880. doi: 10.1086/515234. PMID: 9534958.

55. Patel, J.R. Evaluation of efficacy of an inactivated vaccine against bovine respiratory syncytial virus in calves with maternal antibodies / J.R. Patel, S.A. Didlick // Amer. J. Vet. Res. - 2004. - Vol. 65, N 4. - P. 417-421. doi: 10.2460/ajvr.2004.65.417. PMID: 15077682.

56. Pathogens of bovine respiratory disease in North American feedlots conferring multidrug resistance via integrative conjugative elements / C.L. Klima, R. Zaheer, S.R. Cook [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2014. - Vol. 52, N 2. - P. 438-448. doi: 10.1128/JCM.02485-13. Epub 2013 Nov 20. PMID: 24478472; PMCID: PMC3911356.

57. Persistent infection of B lymphocytes by bovine respiratory syncytial virus / J.F. Valarcher, H. Bourhy, A. Lavenu [et al.] // Virology. - 2001. - Vol. 291, N 1. - P. 5567. doi: 10.1006/viro.2001.1083. PMID: 11878876.

58. Prevalence of and risk factors for bovine respiratory syncytial virus (BRSV) infection in non-vaccinated dairy and dual-purpose cattle herds in Ecuador / L.R. Saa, A. Perea, D.V. Jara [et al.] // Trop. Anim. Health Prod. - 2012. - Vol. 44, N 7. - P. 1423-1427. doi: 10.1007/s11250-012-0082-8. Epub 2012 Jan 24. PMID: 22270243.

59. Production and characterization of bovine monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus / H.E. Kennedy, B.V. Jones, E.M .Tucker [et al.] // J. Gen Virol. - 1988. -Vol. 69, N 12. - P. 3023-3032. doi: 10.1099/0022-1317-69-12-3023. PMID: 3199102.

60. Protection against respiratory disease in calves induced by vaccines containing respiratory syncytial virus, parainfluenza type 3 virus, Mycoplasma bovis and M dispar / C.J. Howard, E.J. Stott, L.H. Thomas [ et al.] // Vet. Record. - 1987. - Vol. 121, N 16. - P. 372-376. doi: 10.1136/vr.121.16.372. PMID: 2827366.

61. Protection of calves by a prefusion-stabilized bovine RSV F vaccine / B. Zhang, L. Chen, C. Silacci [et al.] // NPJ Vaccines. - 2017. - N 2. - P. 7. doi: 10.1038/s41541-017-0005-9. PMID: 29021918; PMCID: PMC5627276.

62. Replication and clearance of respiratory syncytial virus: apoptosis is an important pathway of virus clearance after experimental infection with bovine respiratory syncytial virus / B. Viuff, K. Tj0rneh0j, L.E. Larsen [et al.] // Amer. J. Pathol. - 2002. - Vol. 161, N 6. - P. 2195-2207. doi: 10.1016/S0002-9440(10)64496-3. PMID: 12466134; PMCID: PMC1850917.

63. Respiratory syncytial virus infections in human beings and in cattle / W.H. Van der Poel, A. Brand, J.A. Kramps, J.T. Van Oirschot // J. Infect. - 1994. - Vol. 29, N 2. - P. 215-228. doi: 10.1016/s0163-4453(94)90866-4. PMID: 7806887.

64. Risk factors for seropositivity to bovine coronavirus and bovine respiratory syncytial virus in dairy herds / A. Ohlson, C. Heuer , C. Lockhart [et al.] // Vet. Record. - 2010. - Vol. 167. - P. 201-206.

65. Role of T-lymphocyte subsets in recovery from respiratory syncytial virus infection in calves / G. Taylor, L.H. Thomas, S.G. Wyld [et al.] // J. Virol. - 1995. - Vol. 69, N 11. - P. 6658-6564. doi: 10.1128/JVI.69.11.6658-6664.1995. PMID: 7474075; PMCID: PMC189575.

66. Sarmiento-Silva, R.E. Epidemiology, molecular epidemiology and evolution of bovine respiratory syncytial virus / R.E. Sarmiento-Silva, Y. Nakamura-Lopez, G. Vaughan // Viruses. - 2012. - Vol. 4, N 12. - P. 3452-3467. doi: 10.3390/v4123452. PMID: 23202546; PMCID: PMC3528274.

67. Serological and genetic characterization of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) indicates that Danish isolates belong to the intermediate subgroup: no evidence of a selective effect on the variability of G protein nucleotide sequence by prior cell culture adaption and passages in cell culture or calves / L.E .Larsen, A. Uttenthal, P. Arctander [et al.] // Vet. Microbiol. - 1998. - Vol. 62, N 4. - P. 265-279. doi: 10.1016/s0378-1135(98)00226-0. PMID: 9791873.

68. Serological indication for persistence of bovine respiratory syncytial virus in cattle and attempts to detect the virus [et al.] / W.H.Van der Poel, J.P. Langedijk, J.A. Kramps // Arch. Virol. - 1997. - Vol. 142, N 8. - P.1681-1696. doi: 10.1007/s007050050189. PMID: 9672628.

69. Sites of replication of bovine respiratory syncytial virus in naturally infected calves as determined by in situ hybridization / B. Viuff , A. Uttenthal, C. Tegtmeier, S. Alexandersen // Vet. Pathol. - 1996. - Vol. 33, N 4. - P. 383-390. doi: 10.1177/030098589603300403. PMID: 8817835.

70. Spatial patterns of bovine corona virus and bovine respiratory syncytial virus in the Swedish beef cattle population / F. Beaudeau, C.Bjorkman, S. Alenius, J. Frossling // Acta Vet. Scand. - 2010 - Vol. 52, N 1. - P. 33. doi:10.1186/1751-0147-52-33.

71. The effect of formalin-inactivated vaccine on respiratory disease associated with bovine respiratory syncytial virus infection in calves / K. West, L. Petrie, D.M. Haines [et al.] // Vaccine. - 1999. - Vol. 17, N 7-8. - P. 809-820. doi: 10.1016/s0264-410x(98)00265-5. PMID: 10067686.

72. The effect of maternally derived immunoglobulin G on the risk of respiratory disease in heifers during the first 3 months of life / A.M. Virtala, Y.T. Grohn, G.D. Mechor, H.N. Erb // Prevent. Vet. Med. - 1999. - Vol. 39, N 1. - P. 25-37. doi: 10.1016/s0167-5877(98)00140-8. PMID: 10081786.

73. The frequency, distribution and effects of antibodies, to seven putative respiratory pathogens, on respiratory disease and weight gain in feedlot calves in Ontario / S.W. Martin, K.G. Bateman, P.E. Shewen [et al.] // Canad. J. Vet. Res. - 1989. - Vol. 53, N 3. -P. 355-362. PMID: 2766158; PMCID: PMC1255725.

74. The relationship between antibody status to bovine corona virus and bovine respiratory syncytial virus and disease incidence, reproduction and herd characteristics in dairy herds / A. Ohlson, U. Emanuelson, M. Traven, S. Alenius // Acta Vet. Scand. - 2010. -Vol. 52, N 1. - P. 37. doi: 10.1186/1751-0147-52-37. PMID: 20525326; PMCID: PMC2891787.

75. The role of passive immunity in bovine respiratory syncytial virus-infected calves / E.B. Belknap, J.C. Baker, J.S. Patterson [et al.] // J. Infect. Dis. -1991. - Vol. 163, N 3. -P. 470-476. doi: 10.1093/infdis/163.3.470. PMID: 1847400.

76. Uttenthal, A. Viral aetiology of enzootic pneumonia in Danish dairy herds: diagnostic tools and epidemiology / A. Uttenthal, N.P. Jensen, J.Y. Blom // Vet. Record. -1996. - Vol. 139, N 5. - P. 114-147. doi: 10.1136/vr.139.5.114. PMID: 8856889.

77. Vaccine-induced immunopathology during bovine respiratory syncytial virus infection: exploring the parameters of pathogenesis / A.F. Antonis, R.S. Schrijver, F. Daus [ et al.] // J. Virol. - 2003. - Vol. 77, N 22. - P.12067-12073. doi: 10.1128/jvi.77.22.12067-12073.2003. PMID: 14581543; PMCID: PMC254282.

78. Valarcher, J.F. Evolution of bovine respiratory syncytial virus / J.F. Valarcher Schelcher, F.H. Bourhy // J. Virol. - 2000. - Vol. 74, N 22. - P. 10714-10728. doi: 10.1128/jvi.74.22.10714-10728.2000. PMID: 11044116; PMCID: PMC110946.

79. Van der Sluijs, M.T. W. A single vaccination with an inactivated bovine respiratory syncytial virus vaccine primes the cellular immune response in calves with maternal antibody / M.T.W. Van der Sluijs, E.M. Kuhn, B. Makoschey // BMC Vet. Res. - 2010. -Vol. 6, N 1. - P. 2. doi: 10.1186/1746-6148-6-2. PMID: 20064236; PMCID: PMC2824702.

80. Verhoeff , J. Prevention of bovine respiratory syncytial virus infection and clinical disease by vaccination / J. Verhoeff, A.P. van Nieuwstadt // Vet. Record. - 1984. - Vol. 115, N 19. - P. 488-492. doi: 10.1136/vr.115.19.488. PMID: 6097014.

81. Yates, W.D. A review of infectious bovine rhinotracheitis, shipping fever pneumonia and viral-bacterial synergism in respiratory disease of cattle / W.D. Yates // Canad. J. Comp. Med. - 1982. - Vol. 46, N 3. - P. 225-263. PMID: 6290011; PMCID: PMC1320319.

82. Астаханова, Л.Н. О методах иммунизации пригодных для серийного приготовления диагностических сывороток к РС-вирусу / Л.Н. Астаханова, М.Г Брайнин-гер // Вопросы этиологии, эпидемиологии, патогенеза и диагностики вирусных заболеваний. - Свердловск, 1976. - С. 3-9.

83. Баженов, К.С. Распространение вирусов парагриппа-3 и респираторно- синци-тиальной инфекции среди телят на откорме в осенне-зимний период // Бюллетень ВИЭВ. - 1983. - Вып.50. - С. 6-8.

84. Войтова, К.В. Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции: дис. ... канд. вет. наук: 06.02.02 / Войтова Ксения Васильевна. - Новосибирск, 2011. - 122 с.

85. Вспышка острого респираторного заболевания телят, вызванная респиратор-но-синцитиальным и адено-вирусами / В.Н. Муравьев, Г.В. Усманова, В.М. Беляев,

B.И. Басов // Ветеринария. - 1986. - № 7. - С. 11-13.

86. Генчев, Г. Энзоотии респираторных заболеваний телят с признаками респира-торно-синцитиального вируса // XXI Всемирный вет. конгр. - М., 1979. - Т. З. -

C.101.

87. Журавлева, Е.А. Нозоареал респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота / Е.А. Журавлева // БИО. - 2018. - № 12. - С. 3-8.

88. Изучение распространения вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота у жвачных животных / В.А. Мищенко, В.В. Думова, М.Ю. Киселев, А.В. Мищенко // Ветеринарна медицина. - 2011. - Вип. 95. - С. 169-170.

89. Испытание сухого эритроцитарного диагностикума РС-инфекции крупного рогатого скота / Г.Д. Метревели, Ю.Ф. Борисович, З.Я. Чистова [и др.] // Сборник науч. тр. / ВГНКИ ветпрепаратов. - М., 1983.- С. 57-60.

90. Кочиш, Т.Ю. Разработка набора реагентов для определения уровня антител к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота в иммунофермент-ном анализе: дис. ... канд. биол. наук: 03.00.23 / Кочиш Татьяна Юрьевна. - Шелково, 2004. - 156 с.

91. Макарян, Э.А. Способ получения высоких урожаев PC-вируса / Э.А. Макарян // Тезисы докл. X Мечниковской конф. молодых ученых-медиков, 15-17сент. 1987 . - СПб, 1987. - 1 с.

92. Мищенко, В.А. Проблема респираторной патологии у новорожденных телят /

B.А Мищенко, А.В. Мищенко, О.Ю. Черных // Ветеринария Кубани. - 2013. - № 6. -

C. 19-20.

93. Мищенко, В.А. Смешанное течение респираторных инфекций у молодняка КРС / В.А Мищенко, А.М. Рахманов // Актуальные проблемы патологии с.-х. животных. - Минск, 2003. - С. 212-214.

94. Особенности респираторных инфекций телят / В.А. Мищенко, А.А. Гусев, Н.А. Яременко [и др.] // Ветеринария. - 2000. - № 9. - С. 5-6.

95. Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота : рекомендации / А. Г. Глотов, Т. И. Глотова, С. В. Котенева [и др.] ; РАСХН, Сиб. регион. отд -ние; ГНУ ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 2010. - 26 с.

96. Сергеев, В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных / В.А. Сергеев. - М.: Колос, 1976. - 303 с.

97. Строганова, И.Я. Чувствительность диплоидных культур клеток к респира-торно-синцитиальну вирусу крупного рогатого скота / И.Я. Строганова, Н.П. Сим-бирцев // Интенсификация с. -х. производства в условиях радикальной экономической реформы: тез. докл. Всесоюз. научно - практ. конф. - Сумы, 1989. - С. 175176.

98. Строганова, И.Я. Чувствительность первичных культур клеток к респиратор-но-синцитиальну вирусу крупного рогатого скота / И.Я. Строганов, Л.М. Акбаева //

Проблемы биологии и патологии с.-х. животных: сб. науч. тр. / Моск. вет. академия - М., 1987. - С. 96-98.

99. Халенев, Г.А. Разработка методов производства диагностикумов и усовершенствование лабораторной диагностики вирусной диареи и респираторно -синцитиальной инфекции крупного рогатого скота: дис. ... канд. вет. наук: 16.00.03 / Халенев Георгий Александрович. - М., 1976. - 270 с.

100. Халенев, Г.А. Комплексная диагностика респираторно-синцитиальной инфекции молодняка крупного рогатого скота в двух хозяйствах / Г.А. Халенев, В.В. Гуненков // Проблемы молекулярной биологии и патологии: сб. науч. тр. / Моск. вет. академия. - М., 1975. - Т. 80. - С.

101. Этиология, меры профилактики и борьбы с респираторными болезнями молодняка КРС / В.А. Мищенко, Ю.А. Костыркин, О.И. Гетманский [и др.] // Материалы Всерос. научно-практ. конф. - Курск, 2005. - С. 118-121.

Приложение № 1

1|>н1шриоч\ « t IIA« Uli \

федеральное государственное бюлжеаиое учреждение «Федеральный ucHip охраны пороньн живогнык» (ФГКУ «ВНИИЗЖ»)

»1НН1..ЙН .яАор»...,.„. M >Ь аа««>р>. Цчм|.М II,......ip> и .Л,.

(

600901, Россия. Владимирская область, г. Владимир, мкр. Юрьевен тел.: [phone], тел./факс: 26-38-77 E-mail: nuulfr' .ni i.ih.m

20.

I uiHiTiMcica при niiipuui

СПРАВКА „Ys 168 - деи / 19-58 о депонировании шта.ч.ма « Во:югда/2019» вируса респираторно-синцитиальной инфекции КРС

Форма депонирования: «Гарантийное хранение».

Авторы штамма: В.В. Кирпиченко. A.B. Кононов. Р.В. Яшин. C.B. Кононова. О.II. Бьядовская. A.B. Спрыгин. И.Н. Шумилова.

Депозитор: ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»

(ФГБУ «ВНИИЗЖ»).

Вирус был выделен из клинического материала, полученного от крупного рогатого скота в Вологодской области в 2019 г.

Штамм получен путем адаптации в течение 7 последовательных пассажей в перевиваемой культуре клеток слизистой носовых перегородок КРС (КК ВТ), перевиваемой культуре клеток почки теленка (КК RBT) и перевиваемой культуре клеток трахеи эмбриона КРС (КК FBT) в условиях ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Штамм относится к отряду Mononegavirales, семейству Pneumoviridae. роду Orthopneumovirus, виду Bovine orthopneumovirus.

Штамм предложен в качестве производственно-контрольного для изготовления средств диагностики респнраторно-синпитиальной инфекции КРС и лекарственных препаратов, а также их контроля.

Регистрационный номер: № 168 - деп / 19-58 - КШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Местом хранения штамма определена Коллекция штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») по адресу: 600901, Россия. Владимирская область, г. Владимир, мкр. Юрьевен.

Дата депонирования штамма: 20 декабря 2019 г.

Зам. директора ФГБУ «ВНИИЗЖ по качеству

Руководитель Коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ

С.К. Старов

г pvrftrytf

УЧТЕННЫЙ ЭКЗЕМПЛЯР » 1

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ «ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ОХРАНЫ ЗДОРОВЬЯ ЖИВОТНЫХ» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

СОГЛАСОВАНО

УТВЕРЖДАЮ

Заместитель директора по НИР и мониторингу ФГБУ «ВНИИЗЖ»

Заместитель директора по качеству ФГБУ «ВНИИЗЖ»

« »

« <л

С.К. Старое 20 Л г.

СТАНДАРТ ФГБУ «ВНИИЗЖ»

ШТАММЫ ВИРУСА РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРОИЗВОДСТВЕННЫЕ И КОНТРОЛЬНЫЕ.

МЕТОДЫ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И КОНТРОЛЯ ПОСЕВНЫХ МАТЕРИАЛОВ

СТО 00495527-0349-2019

Технические условия

Приложение № 2 (продолжение)

*

Учтенные ч V МП Пчр | 1 ^

СТО 00495527-0349-2019

ОКС 11.220 ОКПД2 21.10.60.197

Ключевые слова: вирус респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, крупный рогатый скот, штаммы, главный посевной материал, рабочий посевной материал, инфекционная активность, антигенная активность (титр вируса).

Руководитель разработки:

Начальник отдела диагностики и профилактики болезней сельскохозяйственных животных

Заведующая референтной лабораторией болезней крупного рогатого скота

Ответственные исполнители:

А В Кононов

_О.П. Бьядовская

Старший научный сотрудник референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

Старший научный сотрудник референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

Ведущий ветврач референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

Исполнители:

Аспирант ФГБУ «ВНИИЗЖ»

Младший научный сотрудник референтной лаборатории болезней крупного рогатого скота

Согласовано:

Руководитель Коллекции штаммов микроорганизмов

Заведующий референтной лабораторией вирусных болезней птиц

Начальник отдела Управления качеством

22

С В. Кононова

А В Спрыгин

АА. Нестеров

В В. Кирпиченко

уС/- И Н Шумилова

С.А. Похвальный

Д Б. Андрейчук

епурная

Т»а.

г р«г*тI

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ВЫЯВЛЕНИЮ РНК ВИРУСА РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО

ВРЕМЕНИ

Авторы: Кирпиченко В.В.

Нестеров A.A. Белый A.C. Спрыгин A.B. Бьядовская О.П.

Рассмотрено и одобрено методкомиссией Протокол № 05 от «19» августа 2020 г.

Рассмотрено ученым советом и рекомендовано к утверждению Протокол № 06 от «20» августа 2020 г.