Биотехнологические экспресс-методы в микробиологии и вирусологии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, доктор биологических наук Макарян, Эдуард Артемович

• Макарян, Эдуард Артемович
• доктор биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации доктор биологических наук Макарян, Эдуард Артемович

СПИСОСК СОКРАЩЕНИЙ И СЛОВ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Инфекционные заболевания животных, распространение и клинические признаки

1.2 Репликация, антигенные свойства и размножение микроорганизмов

1.3 Патогенность возбудителей инфекционных заболеваний в эксперименте

1.4 Культуральные свойства микроорганизмов

1.5 Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний.

1.6 Лечение инфекционных заболеваний

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы

2.2 Микроорганизмы

2.3 Культуры клеток, среды и растворы

2.4 Культивирование диплоидных культур клеток

2.5 Культивирование микробов

2.6 Культивирование вируса в культуре клеток—; 2.7 Приготовление препаратов для изучения цитоморфологии

2.8 Титрование вируса методом бляшек

2.9 Титрование вируса по бляшкообразующим единицам в модификации—59 ' 2.10 Реакция агглютинации-;

2.11 Качественная реакция агглютинации целлюлозы

2.12 Способ приготовления латексного диагностикума

2.13 Бумажная хромотография

2.14 Реакция нейтрализации вируса

2.15 Экспериментальные животные

2.16 Сыворотки

2.17 Способ максимального выделения вирусных антигенов

2.18 Электорофез вирусных антигенов

2.19 Иммунизирующий препарат

2.20 Состав для получения перитонеальных макрофагов А-2ПТК

2.21 «Повин-ВМ»- препарат для лечения и профилактики респираторных желудочно-кишечных инфекций вирусной и бактериальной этиологии и. средство для инактивации микроорганизмов in vitro

2.22 Разработка схемы лечения трансмиссивного гастроэнтерита кроликов

2.23 Реакция торможения миграции лейкоцитов

2.24 Реакция Ерне-Каненгема

2.25 Разработка схемы лечения «Повином-ВМ» пневмоэнтерита у морских свинок

2.26 Разработка схемы лечения «Повином-ВМ» инфекционного мастита крыс

2.27 Разработка профилактического применения «Повина-ВМ» в свиноводстве

2.28 Иммунизирующий препарат PC-вируса

2.29 Статистическия обработка данных

З.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Изучение спектра чувствительности, культур клеток к штаммам «РС-Б» и «Long»

3.1.1 Подбор тканей для культивирования респиратоно-синцитиального вируса штамма «Long»

3.1.2 Изучение чувствительности первичных культур клеток к респираторно-синцитиальному вирусу штамма «РС-Б»

3.1.3 Чувствительность диплоидных культур клеток к штамму «РС-Б»

3.1.4 Чувствительность перевиваемых клеточных линей к штамму «РС-Б»—

3.2 Оптимизация условий культивирования штаммов «РС-Б» и «Long» в чувствительных культурах клеток---—ВО

3.2.1 Влияние концентрации респиратоно-синцитиального вируса штамма «Long» на урожайность--87'

3.2.2 Определение максимального урожая респираторно-синцитиального1 вируса штамма «Long» в динамике

3.2.3 Адаптация штамма «РС-Б» к культуре клеток

3.2.4 Стимуляция инфекционной активности респираторно-синцитиального вируса для получения высоких урожаев

3.3 Увеличение выхода бакмассы при культивировании микроорганизмов—

3.4 Методы контроля размножения и определения инфекционной активности респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота и человека в культурах клеток

3.4.1 Определение инфекционной активности вируса по бляшкообразующим единицам

3.5 Разработка экспресс-методов определения респираторно-синцитиального вируса и гриппа

3.5.1 Активность антигенов респираторно-синцитиального вируса, накопленных в разных культурах клеток для приготовления целлюлозных диагностику-мов-1

3.5.2 Титры респираторно-синцитиального вируса в реакции коагглютинации-стафилококка в модификации

3.5.3 Разработка экспресс-метода в диагностике респираторно-синцитиального вируса в реакции агглютинации целлюлозы

3.5.4 Способ определения иммуноглобулинов в биологических жидкостях в реакции агглютинации целлюлозы

3.6 Способ экспресс-диагностики PC- вируса в реакции агглютинации латекса

3.6.1. Экспресс-диагностика гриппозной инфекции в реакции агглютинации латекса

3.7 Способ выделения вирусных антигенов--—

3.8 Получение гипериммунных сывороток к РС-вирусу

3.8.1 Стимулированное получение гипериммунных сывороток к РС-вирусу

3.8.2 Определение титра антител к,РС-вирусу в сыворотке крови мышей в реакции коагглютинации стафилококка в модификации

3.8.3 Титры антител к РС-вирусу после интраназального заражения морских свинок методом реакции коагглютинации стафилококка в модификации—

3.9 Реакция гиперчувствительности замедленного типа на мышах, зараженных РС- вирусом-:

3.10 Стимулятор индукции перетониальных макрофагов в эксперименте—

3.11 Способ определения миграционной активности макрофагов и лейкоцитов

3.12 Метод бумажной хромотографии для определения степени воспаления Респираторного тракта при РС-вирусной инфекции и определение содержания СОг в модификации

3.13 Определение инфекционной активности РС-вируса при разработке противовирусного препарата

3.13.1 Средство для инактивации микроорганизмов

3.13.2 Изучение ростовой активности культуральных сред и сывороток, содержащих деконтамирующие средства

3.13.3 Препарат для профилактики и лечения респираторных и желудочно-кишечных заболеваний бактериальной и вирусной этиологии сельскохозяйственных животных и способ профилактики и лечения респираторных и желудочно-кишечных инфекционных заболеваний, бактериальной и вирусной этиологии сельско-хозяйственных животных

3.13.3.1 Лечение трансмиссивного гастроэнтерита кроликов

3.13.3.2 Лечебная эффективность при пневмоэнтеритах у морских свинок

3.13.3.3 Лечение инфекционного мастита крыс

3.13.3.4 Применение «Повина-ВМ» на свиньях

3.14 Иммунизирующие препараты респираторно-синцитиального вируса—

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биотехнологические экспресс-методы в микробиологии и вирусологии»

1.1.Актуальность темы. Значительные успехи, достигнутые в области биохимии, вирусологии и> микробиологии, создали предпосылки для- управления элементарными механизмами жизнедеятельности клетки, что явилось мощным, импульсом для развития биотехнологии. Эти достижения^ поставили биотехнологию * на- новый уровень, качественно отличающийся» возможностью качественно управлять клеточными процессами. Биотехнологический процесс включает в себя ряд этапов: подготовку объекта, его культивирование, выделение, очистку, модификацию и использование продуктов. Многоэтапность процесса обуславливает необходимость привлечение к его осуществлению разных специалистов: молекулярных биологов, биохимиков, вирусологов, микробиологов. Биотехнология позволяет проводить раннюю диагностику инфекционных заболеваний на основе применению препаратов антигенов и антител. Для этого необходимы экспресс - методы инфекционных болезней, позволяющих в течение нескольких минут установить эпизоотический статус. Чтобы повысить эффективность диагностики и лечения в системе организации противоэпизоотических мероприятий необходимо расширить ассортимент высокоэффективных диагно-стикумов, лечебных препаратов и вакцин, пригодных к использованию в лабораторных и полевых условиях. С помощью новых вакцинных препаратов возможно предупреждение инфекционных болезней. Однако универсальных сред, пригодных для роста всех без исключения ^микроорганизмов, вирусов «и клеток не существует. Длительное благополучие нашей страны по инфекционным болезням требует усиленного контроля над соблюдением животных в связи с их восприимчивостью.

Значительную проблему в ветеринарии представляют собой респираторные вирусные инфекции и другие заболевания инфекционной природы, которые наносят большой экономический ущерб промышленному животноводству (Дегтярев В.П. 1968; Гуненков В.В. 1975, 1977; Воронин Е.С. 1989Д991; Сюрин В.Н. 1998; Белоусова Р.В., Преображенский Н.И., 2001; Петров A.M., 2002; Белоусова Р.В. 2008).0дной из них является респираторно-синцитиальная,инфекция крупного рогатого скота - контагиозная, болезнь, вызываемая респиратор-но-синцитиальным вирусом (РСВ), относящимся к семейству парамиксовиру-сов, роду - пневмовирусы. Болезнь проявляется поражением нижних отделов* респираторного1 тракта, повышением .температуры, затрудненным дыханием; одышкой, истечением из носа, сильным кашлем с последующим развитием' бронхопневмоний и интерстициальных эмфизем. Сложности культивирования, в свою очередь, затрудняют получение вирусного сырья в достаточном количестве и с необходимой инфекционной активностью для изготовления диагностических препаратов и средств специфической профилактики.

Остается весьма важной разработка иммунологических средств и методов лабораторной экспресс-диагностики с использованием гомологичного вируса и антител. Поэтому, ускоренное культивирование PC-вирусных штаммов «Long» человека и «РС-Б» PC-вируса крупного рогатого скота, а также инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусов, поражающих желудочно-кишечный тракт (вирус диареи, ротавирусы) для изготовления' диагностикумов, разработки оптимальных условий репродукции вирусов, бактерий и грибов являются важным биотехнологическим вопросом. Решение этих проблем позволили бы получить максимальные титры микробных антигенов и активного вируса, необходимых для производства средств лечения и специфической профилактики, приготовления иммуностимулирующих препаратов для получения* антисывороток, модификации иммунологических методов исследований.

1.2.Цель и задачи исследований. Целью работы явилась разработка эффективных методов культивирования возбудителей вирусных, бактериальных и грибных респираторно-кишечных инфекций животных и человека, а также способов получения антигенов микроорганизмов (вирусов, бактерий и грибов), обеспечивающих максимальное накопление антигенов для получения диагностических и иммунизирующих препаратов, экспресс-методов диагностики инфекционных болезней.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить чувствительность первичных, диплоидных и перевиваемых культур клеток к штамму «РС-Б» респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота и к штамму «Long» респираторно-синцитиального вируса человека. Разработать оптимальные способы культивирования микроорганизмов: бактерий, грибов, вирусов PC-вируса штаммов «РС-Б» и «Long», вируса диареи (ВД), ПГ-3, инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и ротавируса (РВ) крупного рогатого скота;

2. Изучить использование вирусов, выращенных на различных культурах клеток, для изготовления латексных и целлюлозных диагностикумов;

3. Разработать экспресс-методы получения вирусных антигенов для приготовления диагностических и иммунизирующих препаратов;

4. Испытать антигенные свойства PC-вируса штаммов «РС-Б» крупного рогатого скота и «Long» человека на лабораторных животных и получить соответствующие антисыворотки;

5. Разработать ускоренный способ максимального получения микроорганизмов (вирусов, бактерий и грибов) на необогащенных средах;

6. Модифицировать методы исследования для контроля иммунизирующих свойств разных антигенов PC-вируса in vitro;

7. Разработать иммуномодулятор для повышения титра антител к РС-вирусу на лабораторных животных при моделировании заболевания;

8. Испытать антимикробные средства с расширенным спектром действия для деконтаминации питательных сред и сывороток крови животных;

9. Разработать препараты на основе антибиотиков, обладающие противовирусным и антимикробным действиями;

10.Приготовить PC-вирусный препарат, обладающий иммунизирующими свойствами.

1.3.Научная новизна. Изучена репродуктивная способность штаммов «РС-Б» и «Long» PC-вируса крупного рогатого скота и человека в первичных, диплоидных, перевиваемых, гомологичных и гетерологичных культурах клеток.

Впервые разработаны технологичные способы культивирования и получения вирусов, микробов и грибов с использованием стимуляторов роста.

Определены оптимальные условия их накопления в различных культурах клеток и питательных средах, для изготовления иммунизирующих препаратов и экспресс-диагносикумов.

Разработан и апробирован метод контроля размножения и учета инфекционной активности вирусов: PC-вируса штаммов «РС-Б» и «Long», вируса диареи (ВД), ПГ-3, инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и ротавируса (РВ) крупного рогатого скота

Модифицированы реакция торможения миграции лейкоцитов (макрофагов) ш реакция Ерне- Каненгема для иммунологических исследований.

Разработан эффективный метод очистки и выделения антигенов РС-вирусов, ВД, ИРТ, ПГ-3.

Предложены стимуляторы антителогенеза и перитонеальных макрофагов для лабораторных животных.

Приготовлена лекарственная форма на основе антибиотика для лечения вирусных и микробных заболеваний.

Разработан иммуностимулятор пролонгированного действия с противовирусной и антимикробной активностью.

Создан иммунизирующий PC-вирусный препарат на основе синтезированных сополимеров.

Научная новизна проведенных исследований подтверждена патентом и 10 авторскими свидетельствами:

Патент РФ на изобретение №22816171 от 27.10.2006г. «Препарат для профилактики и лечения респираторных и желудочно-кишечных инфекций бактериальной и вирусной этиологии с/х животных и способ профилактики и лечения респираторных и желудочно-кишечных инфекций бактериальной и вирусной этиологии с-х животных»

Авторское свидетельство СССР на изобретение № 1785659 от 08.09.1992 «Способ определения респираторно-синцитиальной вирусной инфекции».

Авторское свидетельство СССР на изобретение №1596252 от 01.06.1990г. «Способ определения миграционной способности макрофагов и лейкоцитов».

Авторское свидетельство СССР на изобретение N2 1719432 от 15.11.1991г. «Способ выделения вирусных антигенов».

Авторское свидетельство СССР на изобретение №1655983 от 15.02.1991г. «Способ культивирования респираторно-синцитиального вируса».

Авторское свидетельство СССР на изобретение №1834288 от 13.10.1992г. «Способ культивирования микроорганизмов».

Авторское свидетельство СССР на изобретение № 1785660 от 08.09.1992г. «Способ определения респираторно-синцитиальной вирусной инфекции».

Авторское свидетельство СССР на изобретение № 1785658 от 08.09.1992г. «Способ диагностики гриппозной инфекции».

Авторское свидетельство СССР на изобретение № 1767517 от 08.06.1992г. «Стимулятор индукции перитонеальных макрофагов для экспериментального животного».

Авторское свидетельство СССР на изобретение № 1561687 от 03.01.1990г. «Способ для определения иммуноглобулинов в биологических жидкостях».

Авторское свидетельство СССР на изобретение № 1536316 от 15.09.1989 «Способ оценки лечения хронического катарального бронхита».

Положительное решение на изобретение по заявке 4678450/14(054942) от 13.03.1989г. «Средство для лечения заболеваний, вызванных вирусной инфекцией».

1.4.Теоретическая и практическая значимость работы. Разработка и внедрение полученных препаратов, соединений и способов позволят решить важные научно-производственные проблемы, имеющие большое хозяйственное и промышленное значение.

Разработан проект лабораторного регламента культивирования респиратор-но-синцитиальных вирусов КРС и человека: PC-вируса штаммов «РС-Б» и «Long» в культуре- клеток для изготовления, специфических вирусных антигенов, необходимых для экспресс-диагностики.

Предложен целлюлозный диагностикум для выявления антител к РС-вирусу в сыворотках крови крупного рогатого скота, овец и коз, который опробован в лабораторных и производственных испытаниях.

Установлен эффект стимуляции репродуктивной активности вирусов с использованием стимулятора «Триптоксид». Неприспособленные к питательным средам и клеткам вирусы в присутствии стимулятора и УФЛ-экспонированной сыворотки позволяют получить за короткий отрезок времени максимальный' титр вирусов.

Выявлена неспецифическая активность препарата «Пинексид», обладающего стимуляцией роста грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, мицелиальных и дрожжеподобных грибов на необогащенных питательных средах.

Доказана высокая специфичность, простота постановки и учета результатов исследований при использовании экспресс-диагностикумов на основе латекс-ных частиц и порошковой целлюлозы.

Впервые показана возможность получения стабильной композиции диагно-стикумов в связи с применением 10%-го кальция хлорида, глютар-альдегида и красителя азура II

Показана эффективность выделения вирусных антигенов с применением преципитационной смеси (ПС) и экстракционной смеси (ЭС).

Концентрация вирусных белков, полученных в результате выделения и очистки вирусов на низкоскоростных центрифугах, во много раз превышает показатели, полученные известными способами. Об этом свидетельствуют результаты электрофореза (ЭФ) и определения белка в вирусных антигенах.

Проведена широкая апробация модифицированной пластиковой чашки Петри для проведения иммунологических, фармакологических, вирусологических и других исследований. Простая постановка камеральных опытов позволила значительно упростить проведение реакций, сократить время и учет результатов в реакции торможения миграции лейкоцитов (макрофагов) (РТМЛ(М), реакции Ерне-Каненгема (РЕК), по бляшкообразующим единицам (БОЕ), цито-патическому действию ЦПД и т. д.

Учет репродуктивной активности вирусов стал нагляднее в камере чашки Петри, содержащей взвесь культуры клеток в питательной среде. За короткий отрезок времени (6-1 Оч.) ЦПД очевидно по БОЕ.

Средство для стимулированного получения перитонеальных макрофагов стало возможным в связи с использованием «А-2ПТК» (смеси гидроокиси алюминия, пептона, ПГ, трипсина, и кальция хлорида). Образовавшиеся восковидные тельца после в/б введения ирританта обеспечивают быстрое появление ПМФ в течении в 100-120 дней. ПМФ, помещенные в камеру модифицированной чашки Петри в присутствии антигенов, антител, лекарственных средств, являются доступной моделью в иммунологических, фармакологических и токсикологических исследованиях.

Применение препарата «Тризолон» лабораторным животным, как стимулятора антителогенеза, за 2-4 часа перед интраназальным заражением PCB позволяет получить высокотитражные антисыворотки.

Выявлена лечебная эффективность препарата «Дикалсид» (смесь диклокса-циллина, кальция хлорида, трипсина и ДМСО) при интраназальном введении в случаях респираторных заболеваниях и разных видов герпес-вирусной инфекции.

Проведенная апробация препарата «Повин-ВМ» при инфекционном мастите крыс, пневмоэнтеритах морских свинок, трансмиссивном гастроэнтерите кроликов, РС-вирусиой инфекции показала высокую терапевтическую активность: однократное, парентеральное введение обеспечивает курс лечения в связи с пролонгированной формой препарата. «Повин-ВМ» эффективен при вирусных и. микробных заболеваниях разной локализации- как иммуномодулятор клеточного и гуморального ответов. Показаны положительные результаты деконтами-нации питательных сред (среда Эрла, Хенкса1, 199, МПБ и МПА). Апробация препарата на свиньях с профилактической целью обеспечила сохранность поголовья, увеличение прироста массы тела, экономию вакцин, антисывороток и антибиотиков.

Иммунизирующий РС-вирусный препарат на основе ВА/ВП-ДФХ при ин-траназальном введении стимулировал клеточный и гуморальный иммунитет.

Результаты проведенных исследований нашли отражение в методических рекомендациях: «Профилактика и терапия инфекционных болезней животных»,ч «Интенсификация культивирования микроорганизмов и вирусов», «Экспресс-диагностика инфекционных болезней животных», рассмотренных и одобренных на заседании научно-технического совета ФГОУ ВПО МГАВМиБ (протокол № 2 от 16.10.09г.) и на заседании секции инфекционной патологии животных Отделения ветеринарной медицины РАСХН, (протокол № 4 от 21.10.09г.), методические рекомендации по применению «Повипа-ВМ»- пролонгированного иммуностимулятора однократного применения противомикробного и противовирусного действия в свиноводстве, методические рекомендации по применению набора для выявления респираторно-синцитиального вируса и антител к нему в реакции агглютинации целлюлозы, методические рекомендации по применению чашечной камеры в ветеринарной иммунологии, одобренных методическим советом Тверской государственной сельскохозяйственной академии (протокол №10 от 19.04.06г.).

1.5.Апробация работы. Основные -положения диссертации были доложены и обсуждены на межлабораторных заседаниях Государственного научного центра РФ Института иммунологии Федерального медико-биологического агентства (ГНЦ «Институт иммунологии» (1987-88), на конференциях молодых ученых (Саратов, 1987-88), на курсах информации' и стажировки врачей-вирусологов по теме: «Современные методы диагностики» ротавирусной инфекции» в Республиканской санэпидстанции Минздрава СССР, в* Институте вирусологии им. Ивановского, Академии медицинских наук СССР (Москва, 1988); на Каунасском предприятии по производству бактерийных препаратов (1987), на Всесоюзной научно-практической конференции МГАВМиБ (1989), на заседании лаборатории инфекционной патологии при муниципальном госпитале г. Осло (Норвегия, 1991), на свинокомплексе «Владимирский» Владимирской области (1990), на племзаводе «Заволжский»,Тверской области (2004), на Международных научно-практических конференциях (2006-2009), на внутрикафед-ральном и. межкафедральном совещаниях по апробации диссертационной темы (2010).

1.6.Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 41 работе, в том числе в журналах, рекомендованных ВАК РФ-б, 1 патенте РФ, 10 авторских свидетельствах, 17 - в сборниках научных конференций, а также в 6 методических рекомендациях.

1.7.Сгруктура и объем работы. Диссертация изложена на 299 страницах1 машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, данных о практическом использовании научных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка использованной литературы и 30 страниц приложений. Работа содержит 56 таблиц и 21 рисунок. Список литературы включает 235 источников, из них 69 отечественных и 166 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Макарян, Эдуард Артемович

5. ВЫВОДЫ

1. Подобраны органные, первично-трипсинизированные клетки и их субкультуры, диплоидные и- перевиваемые клеточные культуры к РС-вирусам штаммов «РС-Б» КРС и «Long» человека (диплоидные культуры клеток легкого (Л5Э) и почки, эмбриона коровы (П5Э), перевиваемая линия почки эмбриона овцы (FLK), первично-трипсинизированная культура клеток легкого * коровы (ЛЭК), фибробласты легких мышей BALB/c, тестикул бычка. Наибольший титр PC-вируса штамма «РС-Б» определен в культурах клеток ЛЭК, ПЭК и ТБ. Для штамма «Long» оптимальными оказались фибробласты легких мышей BALB/c (4,001g) и тестикулы бычка (3,10 lg).

2. Установлен оптимальный режим получения PC-вируса штаммов «РС-Б» и «Long»: возраст клеточных культур (ЛЭК, ПЭК, ТБ, HeLa и фибробласты легких мышей).

3. Обработка вирусов преципитационной и экстракционной средами позволили выделить максимальное количество обогащенной-фракции вирусных белков: PC-вирус- выход вирусных белков- 553,2%, в титрах РСК 1:18920,2±17,99; вирус ИРТ-822,7%; в титрах РСК 39477,2± 15,49; вирус диареи- 1184,3%; в титрах РСК 1:95755,9±20,05. :

4. Разработана система стимулированного роста вирусов с применением облученной ультрафиолетом сыворотки КРС (2%) и препарата «Трипоксид»- смеси 0,25% раствора трипсина с диметилсульфоксидом в соотношении 9:1. Внесение «Триптоксида» в- количестве 1% в суспензионную клеточно-культуральную среду, одновременно или за 1-2 часа до инокуляции вирусами, позволило получить обогащенный вирусный антиген без предварительной адаптации к условиям культивирования вирусов в клеточно-культуральных средах. Титры PC-вируса с «Триптоксидом» составили 1:65536±2,48.

5. Установлен широкий спектр микробной ростстимулирующей активности смеси питуитрина (маммофизина, гифотоцина, окситоцина) с диметилсульфоксидом в соотношении 9:1 («Пинексид»). Отмечено раннее появление роста и наибольшее накопления бакмассы грамотрицательных, грамположительных бактерий, грибов, дрожжей за короткий промежуток времени. С.albicans: «Пи-нексид»- рост через 36±5,0ч.; бакмасса-108,7±10,4мг.; с эритрит-агаром-195,3±10,4ч.; бакмасса-75,7±6,2мг. P.notatum: «Пинексид»- рост через 20±1,0ч.; бакмасса 275,4±4,5мг.; с эритрит-агаром - 235,0±3,5ч.; бакмасса- 162,4±7,0мг.

6: Изучены иммуностимулирующие свойства смеси 0,25% раствора»трипсина с преднизолоном в соотношении 9: Г «Тризолон». Парентеральное-(внутримышечное, подкожное) применение «Тризолона» за 2-4 часа до 1-4-х кратного интраназального заражения PC-вирусом белых мышей* и морских свинок позволило получить гипериммунные сыворотки в титрах 1:512-1:1024.

7. Разработан состав А-2ПТК на полимерной основе для стимуляции получения перитонеальных макрофагов (ПМФ) в максимальном количестве за короткий промежуток времени. ПМФ можно использовать как модельные клетки для изучения фармакологического, иммунологического и других свойств препаратов. Через сутки в группе лабораторных животных, получивших А-2ПТК, количество ПМФ было в 2,7 больше в сравнении с прототипом и в 3,6 раза по сравнению с контролем. Максимальный пик индукции наблюдался на 5 сутки: Количество ПМФ в группе, получившей А-2ПТК, составило 100%, в-прототипе - 95%, а в контроле - 29%. Процент жизнеспособных ПМФ в группе с А-2ПТК составил 95,8±0,72%, в прототипе - 71,5±0,2%, в контроле - 65,2±0,17%.

8. Предложена модификация чашки Петри для приготовления, камеры, которая обеспечивает возможность проследить торможение миграции иммуно-компетентных клеток и выработки антител лимфоцитами. В используемой модели камеры наблюдается торможение миграции макрофагов и лейкоцитов, выделяющих при контакте с антигенами интерлейкины - маркеры чувствительности к антигенам, как результат положительной реакции на заболевание. Камера обеспечивает демонстративность, достоверность и повторяемость исследований. Применение модифицированной пластиковой чашки Петри позволило ускорить рост и дифференциальную диагностику возбудителей заболеваний по бляшкооборазующим единицам и другим проявлениям цитопатического действия инфектантов.

9. Вирусные антигены штаммов «РС-Б» и «Long» PC-вируса использованы для изготовления целлюлозных диагностикумов «Вироцелл-вирус» и «Виро-целл-антитело» в реакции агглютинации целлюлозы (РАД). РАЦ осуществляли в качественной и в количественной постановке-на-предметных стеклах. Лабораторные, клинические и производственные испытания антительных и антигеных диагностикумов-показывают их высокую специфичность, активность, воспроизводимость результатов, достоверность и простоту исполнения.

10. Модифицированные реакции агглютинации латекса на предметных стеклах обеспечивают быстрый и простой учет результатов по гриппу серотипов А и Б, PC-вируса штаммов «РС-Б» и «Long», вируса диареи (ВД), ПГ-3, инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и ротавируса (РВ) крупного рогатого скота.

11. Экспресс-методы диагностики воспаления респираторного тракта человека и животных с использованием целлюлозных фильтров в хроматографиче-ском исследовании позволило определить клинику и дифференциацию хронических неспецифических заболеваний легких. Окраска образцов смывов в темно-синий цвет указывает на обострение заболевания, а отсутствие окрашивания- на клиническое выздоровление. Модификация определения СОг в воздухе помещения позволила быстро контролировать его концентрацию в помещениях для животных и человека.

12. Композиция-антибиотика диклоксациллина с 10% кальция хлорида, ди-метилсульфоксидом и трипсином- «Дикалсид», является эффективным препаратом для лечения PC-вирусной, микробной и других видов инфекции. Местное и интраназальное применение «Дикалсида» быстро устраняло клинику заболевания PC-вирусной инфекции (гнойно-катаральные выделения из носа, кашель и другие) и герпес-вирусной инфекции (зуд, припухание, покраснение, воспаление на коже губ, глаз, лимфоузлов). «Дикалсид» в 95% случаях эффективен при герпесе глаз, носа, губ, герпес Зостер: прекратились зуд, жжение, покраснение, разрешились очаги, исчезли пузырьки, отечность, боли, уменьшились регионарные лимфоузлы за 1-3 суток. Количество РСВ по БОЕ в легочной ткани у санированных «Дикалсидом» мышей составило 24±2,1, интерфероном-31,5±8,4, коммерческой РСВ сывороткой- 63±15,9.

13. Препарат «Повин-ВМ»- лекарственная форма, содержащая тетрациклин, сополимеры, трипсин, раствор Версен, обладает широким спектром антибактериальной и противовирусной активности при деконтаминации питательных и культуральных сред. В 95-98% «Повин-ВМ» блокировал формирование БОЕ PC-вируса, ротавируса, парагриппа-3. Подавление микробного роста с применением «Повина-ВМ»: 15,2±0,4 (Р<0.01), тетрациклина- 195,7±20,3 (Р<0.01). Показана иммуностимулирующая, антибактериальная и противовирусная активность «Повина-ВМ» при парентеральном применении.

14. Интраназальное введение иммунизирующего комплекса ядерных (нук-леокапсидных) и оболочечных (суперкапсидных) фракций белков РС-вируса штамма «Long» на основе виниламин-вилилпирролидона-дифенилхинона способствовало выработке антител и обеспечило клеточную защиту иммунизированных мышей. Отмечено преимущество нуклеокапсидных препаратов: в 14 раз возросли титры антител в парных сыворотках (7 и 21 день), данные PTMJI и РГЗТ указывали на клеточную стимуляцию иммунного ответа

6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Результаты исследований использованы при составлении методических рекомендаций, рассмотренных и одобренных на заседании^ научно-технического совета ФГОУ ВПО МГАВМиБ (протокол № 2'от 16.10.09г.),и на заседании секции-инфекционной патологии животных Отделения ветеринарной медицины РАСХН .(протокол № 4 от 21.10.09г.): «Экспресс-диагностика инфекционных болезней животных», «Интенсификация' культивирования микроорганизмов и вирусов», «Профилактика и терапия инфекционных болезней животных».

2. Методические рекомендации: «Применение набора по выявлению респи-раторно-синцитиального вируса и антител к нему в реацаии аглллютинации целлюлозы», «Применение чашечной камеры в ветеринарной иммунологии», «Применение «Повина-ВМ»- пролонгированного иммуностимулятора однократного применения противомикробного и противовирусного действия» (протокол № 8 от 14.04.2006г.).- Тверь, 2006.

3. Разработаны проекты нормативных документов для диагностики РС-вирусной инфекции.

4. Результаты исследований по использованию биотехнологических экспресс-методов в микробиологии и вирусологии внедрены (с 1988 по 2010гг.):

•* В Витебском медицинском институте им. Дружбы народов 8.07.198826.09.1989г.

• В Литовской республиканской ветеринарной лаборатории, Г8.05.1988г.

• В Эстонской республиканской ветеринарной лаборатории г. Таллинн, 28.06.1988г.

• В ВНИВИП, 18.06.1990г.

• В лаборатории молекулярной биологии Института биохимии и физиологии АН Кирг. ССР, 04.04.1990г.

• В Ошской областной ветеринарной лаборатории, 21.07.1989г.

• В республиканской ветеринарной лаборатории Кирг. ССР, 27.07.1989г.

• В Куйбывшевской области, совхоз «Алексеевский», 27.01.1992г.

• Во Владимирской области, свинокомплекс «Владимирский», 14.10.1990г.

• В Тверской области, свинокомплекс «Верхневолжский», 10.05.2005г.

• МГАВМиБ имени К.И. Скрябина в научно-исследовательской лаборатории инфекционной патологии и биотехнологии от 10.01.2010г.

• В Тверской государственной сельскохозяйственной академии 19.04.2006г.

• ГН1Д «Институт иммунологии»

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Для сокращения времени роста грамположительных, грамотрицательных микроорганизмов, дрожжевых и мицелиальных грибов, а также получения обогащенной бакмассы, в питательные среды рекомендуется вносить «Пинексид»: 1мл. стимулятора на 100мл питательной среды.

2. Для ускорения появления и обогащения урожаев ДНК- и РНК- содержащих вирусов необходимо вносить «Триптоксид» в клеточно-культуральную среду: 1мл. стимулятора на 100мл среды.

3. Ускоренный и упрощенный способ очистки обогащенных белковых фракций вирусов для получения антигенов, можно использовать для приготовления диагностикумов, иммунизирующих препаратов и получения антисывороток.

4. Для экспресс-диагностики в лаборатории и на производстве целесообразно использовать латексные и целлюлозные диагностикумы, способы их приготовления и постановки реакции.

5. Для получения высокотитражных сывороток, за 2-4 часа до заражения вирусами, в/м или п/к рекомендуется вводить лабораторным животным «Три-золон»- смесь 0,25% р-ра трипсина с ДМСО, 9:1.

6. Предлагается контролировать показатели иммунологической резистентности с помощью модифицированной чашки Петри в РТМЛ(М) и РЕК.

7. Камеральную (модифицированную) чашку Петри можно использовать для определения коли-титра, коли-индекса, токсикологических исследований препаратов на культурах клеток или тканей, бактериальной загрязненности молока и т.д.

8. Для профилактики респираторных заболеваний предлагается проводить исследование воздуха на содержание СО 2, а носовые или бронхиальные смывы- методом бумажной хроматографии.

9. Для лечения инфекционных заболеваний лабораторных животных при наружной локализации рекомендуется применять нанесение «Дикалсида».

10. Однократное в/м или п/к использование препарата «Повин-ВМ» с профилактической целью в свиноводстве позволяет получить максимальный прирост массы тела, сохранность поголовья и сокращение времени откорма для сдачи на мясокомбинат. «Повин-ВМ» можно также применять для лечения инфекционных заболеваний лабораторных животных. сения 5мкл исследуемого образца носового или бронхиального смывов с последующим окрашиванием в 0,25% водном растворе азура И. Критерием диагностики является окрашивание фильтра в темно-синий цвет при воспалении, и едва заметное окрашивание при отсутствии такового. Проведенные лабораторные и клинические исследования показали: данный метод может найти применение не только для определения степени воспаления, но и дифференциального диагноза аллергозов от инфекционно-аллергического процесса, что позволит своевременно и правильно назначить курс патогенетической терапии.

В борьбе с PCB и др. видами инфекции были исследованы антибиотики (ам-пиокс, оксациллин, диклоксациллин, канамицин и др.), интерферон, сконструированы вакцины на основе PCB белков и лекарственной антибактериальной формы, содержащей сополимеры, ферменты и детергенты. Результаты показали лечебную эффективность иммунизирующего препарата на основе 1% и 10% нуклеокапсидной и 10% суперкапсидной фракции PCB. Из антибиотиков - диклоксациллин и ампиокс. Успешным было действие интерферона.

Разработана лекарственная форма, включающая в себя диклоксациллин, трипсин, ДМСО и 10% кальция хлорид («Дикалсид»). Показана высокая эффективность при наружном применении и закапывании в нос в случаях PCB инфекций. «Дикалсид» оказался активным при некоторых грибных инфекциях, герпес-вирусных инфекциях, гриппе, парагриппе и аденовирусах. Назначение «Дикалсида» при герпесе глаз, носа, губ, гениталий, опоясывающего герпеса Зостер показало, что в 98% отмечено клиническое выздоровление: прекратились зуд, жжение, покраснение, исчезновение пузырьков, отечности, боли и уменьшение регионарных лимфоузлов за короткое время. Препарат устранял клинику воспаления десен, губ, языка, в случаях стафилококковой, дрожжевой и вирусной этиологии стоматитов, пародонтитов, афтах губ, языка и слизистых щек. Исследования по однократному интраназальному применению «Дикалсида» зараженным PCB мышам позволило определить, что титры PCB по БОЕ в легочной ткани у санированных «Дикалсидом» мышей составили 24±2,1, ин

Биотехнологи ческие шпресс-методы

8 Г5 Ы П и л

2 » а чз о и 03 О За о Н 03 о X а V м* И а г> Я н м а а ас ш ¥иг0

Пинексид

МВГАВМиБ

Ветеринарные лаборатории разных городов

Омский ветеринарный институт

НИИ разных городов

Институт »ллкра-биологиим зпи

ДИ'ЛЮЛЗГИИ им

Н.©.Гамглаи

Витебский мед. институт

Триптоксид

МВГАВМиБ

Витебский мед. институт

Экспресс-диагностика инфекционных заболеваний

МВГАВМиБ

Ветеринарные и медицинские и производственные лаборатории

Ветеринарные лаборатории разных городов

Повин-ВМ

МВГАВМиБ

НИИ разных городов

Инфекционньэ ззбалавгнич лг5ор=тарньа ¡яизгпных

13000 голов свиней

1ГШХГО

131

Дикалсид

Тркзолон

МВГАВМиБ

ЦКВИиГКВД

НИИ разных городов

МВГАВМиБ

Витебский мед. институт ю ю

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Макарян, Эдуард Артемович, 2011 год

1. Астахова Л.Н., Методы получения стандартных диагностических сывороток креспираторно-синцитальному виру су/Астахова Л.Н., Брайнингер М.Г.// Лаб. Дело. 1975. -№ 12.-С. 730-732.

2. Баженов К.С. Распространение вирусов, парагриппа-3 и респираторно-синицитальной инфекции среди телят на откорме в осенне-зимний период /Баженов К.С. // Бюлл. ВИЭВ.- 1983.- Вып. 50.-С. 6-8.

3. Беннер Ф., Биология вирусов животных. /Беннер Ф., Мак-Ослен Б., Мисис С.,

4. Уайт Д. Под ред. В.И. Агола.-М.: «Мир», 1977.-Т.1 С. 161-338.

5. Борисович Ю.Ф., Инфекционные болезни животных: Справочник / Борисович

6. Ю.Ф., Кириллов Л.В. Под ред. Д.Ф. Осидзе.- М.: Агропромиздат, 1987.- С. 7778.

7. Боровкова Н.М. Сравнительное Изучение Методов идентификации риновирусови диагностики риновирусных инфекций : Автореф. дис. канд. мед. Наук: 16.00.03

8. Бостанджиева Р., Доказване на респираторно-синцнтиальната вирусная инфекция по телятата через реакция за свързване на комплемента /Бостанджиева Р., Текерлеков М., Хараламбиев Х.Е. //Вет. мед. науки.- София. 1984. XXI. - № 9. - С. 45-50.

9. Бостанджиева Р., Иммунофлуоресцентное доказательство респираторно-синцитиальной вирусной инфекции у телят / Бостанджиева Р., Митов Б., Хараламбиев Х.Е.//Вет. мед. науки. София, 1985. - № 9. - С. 20-26.

10. Бостанджиева Р. Чувствительность на клеточные культури към говяждия рес-пираторно-синцитиаленый вирус / Бостанджиева Р. //Вет. мед. науки. София, 1986.-XXII.-№2.-С. 12-18.

11. Щ) 12. Бостанджиева Р. Культивирование и диагностика респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота : Автореф. дис. канд. биол. наук: 16.00.03

12. Букринская А.Г. Вирусология. /Букринская А.Г.-М.: Медицина, 1986. С. 271274.$

13. Вилдс Б., Вирусология/ под ред. Б. Вилдса, Д. Найпа. М. : Мир, 1989. - Т.1. — С. 41-42.

14. Вилдса Б., Вирусология/ под ред. Б. Филдса, Д. Найпа. М. : Мир, 1989. - Т.2. -С. 473-480.

15. Волкова О.В. Основы гистологии с гистологической техникой / Волкова О.В., Елецкий Ю.К. М. : Медицина, 1971. - С. 201-205.

16. Генчев Г. Энзоотии респираторно-синцитиального вируса // XXI Всемирный вет. конгресс. М., 1979. - Т.З. - С. 101.

17. Грязин В.Н. Этиология респираторных заболеваний телят и меры специфической профилактики в условиях спецхоза //Научно-технический бюллетень Всесоюзной академии с-х. наук им. В.И. Ленина Сибирское отделение. 1982. -№11.-С. 19-22.

18. Гуненков В.В., Респираторно-синцитиальная вирусная инфекция / Гуненков

19. B.В., Халенев Г.А., Сюрин В.Н. // Животноводство и ветеринария. -М., 1975. -Т.8. С. 70-76.

20. Звягин И.В., Хорьков И.А., Токарин Э.Ф. Методические рекомендации по разработке режимов замораживания-высушивания биологических препаратов. — М, 1981. -С. 33.

21. Бостанджиева Р., Изоляция на респираторно-синцитиалния вирус от телят с респираторни заболевания /Хараламбиев Х.Е., Бостанджиева Р., и др.//Ве1. мед. науки.- София, 1984. XXI. - № 2. - С. 3-7.

22. Бориосивч Ю.Ф., Испытание сухого эритроцитарного диагностикума РС-инфекции крпного рогатого скота /Метревели Г.Д., Бориосивч Ю.Ф., Чистова З.Я. и др. //Сб. науч. тр. ВГНКИ ветпрепаратов. 1983. - С. 57-60.

23. Казанцев А.П., Матковский B.C. Справочник по инфекционным болезням. 3-е изд., перераб. и доп. /Казанцев А.П., Матковский B.C. - М.: Медицина, 1986.1. C. 85-87.

24. Иванов П.А., Комплексная диагностика вирусных респираторных заболеваний крупного рогатого скота / Погуляева Л.В., Иванов П.А., Цунская Н.И.,. //Инфекционные болезни с-х животных. 1984. -С. 102-105.

25. Гаврилов В.И., Культура ткани в вирусологических исследованиях /Анджапаридзе О.Г., Гаврилов В.И., Семенов В.Ф., //-М.: Гос. изд. мед. литер., 1962.-С. 57-146.

26. Глухо в В.Ф., Культивирование клеток и тканей животных : Учебно-методическое пособие /Дьяконов Л.П., Глухов В.Ф., Поздняков A.A., Денисенко Г.Ф., Калмыкова Т.П. Ставрополь, 1986. - 96с.

27. Лещинская Н.П., Лабораторная диагностика респираторно-синцитиальной инфекции : /Лещинская Н.П., Покровская Е.П., Юрлова Т.И. и др.t

28. Методические рекомендации под ред. Я.С. Шварцмана; НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекц. Болезней.: Алма-Ата., 1985. 43с.

29. Лакин Г.Ф. Биометрия./ Лакин Г.Ф. М. : Высшая школа. 1980. - 294с.

30. Лебедев Л.И. некоторых биологических свойствах респираторно-синцитиального вируса / Лебедев Л.И., Авилов B.C. //Актуальные вопросы вет. вирусологии ; Тез. докл. 5-й Всесоюз. науч. конф. Казань, 1980. — С. 83-84.

31. Лещинская Н.П. Эпидемиология гриппа и других ОРЗ / Лещинская Н.П. , Юрлова»Т.И.// Сб. науч. тр./ВНИИ МЗ СССР. Л., 1983. - С, 148-177.

32. Лещииская Н.П. Молекулярная биология и генетика вирусов гриппа: /Лещинская Н.П.//С6. науч. тр. /ВНИИ гриппа МЗ СССР. Л., 1983. - С. 13-22.

33. Лещинская Н.П. Вакцинация против респираторно-синцитиальной инфекции / Лещинская Н.П.// Вопр. вирусол. 1986. -Т.31., № 5, - С. 517-527.

34. Лещинская Н.П., Респираторно-синцитиальная вирусная инфекция /Лещинская Н.П., Камфорин Л.Е// Медицина и здравоохранение: Сер. Эпидемиология, вирусология и инфекционные заболевания. М., - 1986. - 77с.

35. Лопатина O.A., Респираторно-синцитиальная вирусная инфекция / Лопатина O.A., Плетнева B.A.II МРЖ, 1989. № 3 РЗ. - С. 50-54.

36. Лопатина O.A. Клинико-иммунологические показатели и лечение больных респираторно-синцитиальными вирусными заболеваниями: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1989. - 24с.

37. Мартынов Ю.В.,Выделение PCB от телят с респираторным синдромом /Мартынов Ю.В., Орлов М.И., // Патогенез, лечение и профилактика болезней жвач. жив. в Зап. Сибири. Омск, 1985. - С. 22-24.

38. Методические указания по применению перевиваемых клеточных культур для диагностики вирусных заболеваний сельскохозяйственных животных. Госаг-ропром СССР. - М., 1988. - 12с.

39. Сюрин В.Н., Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных: Справочник/Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Соловьев Б.В.// М.: Агропромиздат, 1986.-352с.

40. Метревели Г.Д. Реакция непрямой гемагглюшнации /РНГА/ в диагностике респираторно-синцитиалыюй инфекции крупного рогатого скота //Сб. науч. тр. ВГНК ветпрепаратов. М., 1983. - С. 99-100.

41. Метревели Г.Д. Биологические свойс1ва вируса и серологическая диагностика PC-инфекции крупного рогатого скота: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1989.-19с.

42. Метревели Г.Д., Гуненков В.В. Современная диагносгика залог успешной борьбы с PC-инфекцией крупного рогатого скота //Тез. докл. Всесоюз. научн. конф. По проблемам эпизоотологии. - Казань, 1983. - С. 94.

43. Новак М. Культивирование в суспензии эксплантатов легких эмбриона крупного рогатого скота вируса парагриппа-3 и его некоторые биологические свойства: Дис. канд. биол. наук. — М., 1986. 16.00.03

44. Лопатина O.A., Особенности клинического течения респираторно-синцитиального вирусного заболевания у взрослых /Лопатина O.A., Крылов В., Иванова Л.А., и др.// -М., -1989,

45. Архипов Н.И., Патологоанатомическая диагностика вирусных болезней животных: Справочное издание / Архипов Н.И., Чевелев С.Ф., Брагин Г.И., и др//; Под ред. Н.И. Архипова. М., Колос, 1984. - С. 76-78.

46. Лопатина О.А Показатели циркулирующего интерферона при различных вирусных заболеваниях /Лаврухина Л.А., Ершов Ф.И., Лопатина О.А и др.//Вопр. Вирусологии. 1989. - № 2. - С. 244-247.

47. Прингл. К. Пневмовирусы //Вирусология. Методы: Пер. с англ.; Под ред. В. Мейхи. М., Мир. — 1988. - С. 131-159.

48. Пушкарев Н.В., Основы вариационной статистики/ Пушкарев Н.В., Соболев А.Д.//методические указания для аспирантов зооветеринарных специальностей.- 2-е изд. М.: МСЗ СССР Моск. вет. академия. - 1983. - 21с.

49. Денер Л., Разработка метода получения высокоактивного респираторно-синцитиального вирусного диагностикума для непрямой реакции гемагглюти-нации /Денер Л., Дрейзен Р.,С., Янкевич О.Д., и др.//Вопр. Вирусологии. 1976.- № 6. С. 739-745.

50. Васильев A.B., РИГА в серодиагностике респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота /Васильев A.B., Осидз Н.Г., Сюрин В.Н., и др//Ветеринария. 1988. - № Ю: - С. 33-34.

51. Сергеев В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных./Сергеев В.А./ — М.: Колос, 1976.-С. 302.

52. Сергеев В.А.,. Структура и биология вирусов животных. / Сергеев В.А., Орлян-кин Б.Г.// М.: Колос, 1983. - С. 252-267.

53. Слепенко Т.Б. Выделение и? клеток и изучение свойств вируса герпеса индеек: Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 1987. 16.00.03- 19с.

54. Соминина A.A., Получение комплементсвязывающего антигена PC в суспензионных клеточных культурах /. Соминина A.A., Румель Н.Б //Сб. тр./ВНИИ гриппа. 1976. - № 17. - С. 116-120.

55. Бектемиров Т.А., Состояние и перспективы специфической^ профилактики гриппа и?других 0Р37Бектемиров;Т.А., Лонекая Н.И., Кастрикина Л.Н., и др.// Вопр: Вирусологии. 1987.-№ 4: - С. 393i

56. Строганова И;Я:, Чувствительность первичных;культур клеток к:респираторно-синцитиальному /Р С/ вирусу крупного рогатого скота / Строганова ИЯ.,Акбаева Л.М.//Проблемы биологии и патологии с-х животных: Сб. науч. тр./Моск. вет. академия, 1987. С. 96-98.

57. Сюрин В .ТТ. Частная, ветеринарная вирусология / Сюрин В.Ы., Фомина Н:В. /Справочная<книга. Ms: Колос, 1979. - С. 257-262.

58. Сюрин BiH., Ветеринарная вирусология./ Сюрин В.Н., Белоусова Р1В., Фомина

59. H.B:- Mi: Колос, 1984. С. 61-63. •*

60. Трофимова; M.F. Повышение Чувствительности реакции пассивной гемагглю-тинации; с эритроцитарными диагностикумом респираторно-синицитиального вируса / Трофимова.М.Г., Быков И.Н., Семенова Н.С. //Вопр. Вирусологии. -1985.-№2.-С. 236-239.

61. Халенев Г.А. Разработка методов производства диагностикумов и усовершенствование лабораторной диагностики вирусной диареи и респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота : Дис. канд. вет. на-ук.:16.00.03 / Халенев Г.А. -М., 1976. 270 с.

62. Халенев Г.А., Респираторно-синицитиальиая, реовирусная и риновирусная инфекция крупного рогатого CKOia / Халенев Г.А., Гуненков В.В. //Лекция 15-я/ Моск. вет. академия. 1977. - С. 3-9.

63. Юрлова Т.И., Изучение естественной популяционной изменчивости респира-торно-синцитиальных вирусов по их интерферирующим и репродуктивным свойствам./ Юрлова Т.И., Зощенко Н.Я., Карпова Л.С. // — Acta virol. 1985. - № 29. - С. 279-284.

64. Stott Е. J.,Acomparison of three vagoines againat respiratoiy synoytial virus in calvts /Stott E. J., Thomas L.N., Taylor G., //J. Hyg. 1984. - v.93. - P. 251-261.

65. Andrews A.H., Crunstll C.S.G., Hill F.W.G. Respiratory disease in calves //The veterinary annual . 1983. - v.23. - P. 48-55.

66. Ward K.A., Antibodies to respiratory syncytial virus polypeptides and their significance in human infection /Ward K.A., Lambden P.R., Ogilvie M.M., // J. gen. Virol -1983/- v. 64.-P. 1867-1876.

67. Armstrong J.A., Morphology and development of reapiratory syncytial vims in cell cultures / Armstrong J.A., Pereira H.G., Valentine B.C. // Nature. 1962. - v. 196. -P. 1179-1181.

68. Floeger H. W., A sero-epidemiological survey of infections with the bovinerespirato-ry syncytial virus in firetsea son grasing calves / Floeger H. W., Boon J.H., Klaasen C.H.L., // J. Vtt. Med. 1986. - v. 33, № 4. - P. 311-318.

69. Beem M., Association of the chimpansee coryga agtnt with acute respiratory disease in children / Beem M., Wright P.H., Hamre D.,// New Eng. J. Med. 1960. - v. 263. -P. 523-530.

70. Stott E.J., A survey of virus infections of the respirators tract of cattle and their association with disease / Stott E.J., Thomas L.H., Collins A.P., // J. Hyg. 1980. - v. 83.-P. 257-270.

71. Bachi T., Morphogenesis and ultrastructure of respiratory syncytial virus / Bachi T., £ Howe C. HZ. Virol. 1973. - v. 12. - P. 1173-1180.

72. Baker J.C., Serologic studies of bovine respiratory syncytial virus in Minnesota cattle / Baker J.C., Ames T.R., Markham R.J.F. // Am. J. veter. Res. 1985. - v. 46, № 4. -P. 891-892.

73. Baldridge P., Persiatent infection of cells in culture by respiratory syncytial virus / Baldridge P., Senterfit L.B. //Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1976. - v. 151. - P. 684688.

74. Bartha A., Bovin respiratory syncytial virusfertosottseg es kovetkezmenyel nagyu-seml azarvasmarha-allamanyokban / Bartha A., Benko M., Vetial F // Magyar allatov.

75. Lapja. 1986. — v. 41, № 8.-P. 451-454.

76. Bennett C.R., Growth and serological charecteristics of respiratory syncytial virus / Bennett C.R., Hamre D. // J. inf. Dis. 1962. - v. 110. - P. 8-16.

77. Berthiaume L.,Comparative structure, morphogenesis and bioiogical characteristics of the respiratory syncytial (R'S) virus and the pneumonia virus of mice / Berthiaume L., Joncas J., Pavilanis V. //Arch. ges. Virusforsch. 1974. - v. 45. - P. 39-51.

78. Bloth B., Fractionation of respiratory syncytial virus componente by centrifugation techniques / Bloth B., Norrby E.// Arch. Ges. Virusforsch. 1966. - v. 19. - P. 385392.

79. Matumoto M., Bovin Respirarory syncytial Virus : Host Range in laboratory Animals and Cell Cultures / Matumoto M., Inaba Y., Kurogi H., Sato K., Omori T., Goto Y., Hirose O. // Arch. Ges. Virusforsch. 1974. - v. 44. - P. 280-290.

80. Inaba V.,Bovine respiratory syncytial virus. Studies on an outbreak in Japan 19681969/ Inaba V., Tanaka V., Sato K., // Jap. J. Microbiol. 1972. - v. 16. - P. 373383.

81. Brenner S., A negarive staining method for high Resolution Eiectron Microscopy of virusas / Brenner S., Home R.W // Biochim. Et Biophs. Acta. 1959. - v. 34. - P. 103-110.

82. Cash P., The polypeptides of human respiratory syncytial virus: products of cell-free protein synthesic and post-translational modifications / Brenner S., Home R.W //Virology. 1979. - v. 92. - P. 375-384.

83. Chalal Y.D., The pathogenesis of respiratory symptomaticall virus in lung of animals/ Chalal Y.D., Elashary Y.//act a veterinar. 79th Annu. Nett. Amer. Soc. Microbiol. Los angeles Calif. P.28-31

84. Chanook R.M., Recovery from infants with respiratory illnese of a virus related to chimpansee coryza agent (CCA) II, Epidemiologie aspecta of infection in infants and young children / Chanook R.M., Finberg L. //Amor. J. Hyg. 1957. - v. 66. - P. 291300.

85. Chanock R.M. Acute respiratory disease in infoncy and childbood : present understanding and prospects for prevention / Chanock R.M., Parrott R.H.//Pediat. 1965. -v. 36.-P 21-39.

86. Chanock R.M., Regovery from in fants with respiratory illness of a virus to chim-panztee coryza agent (CCA). J. Isolation properties and characteristion / Chanock R.M., Rolaman B., Myers R. H Amer. J. Hyg. 1957. - v. 66. - P 281-290.

87. Churchill A.E., Agent of Marek's disense in tiasue culture / Churchill A.E., Biggs P.M. //Nature (London). 1967. - v. 215. - P. 528-530.

88. Churchill A.E., The attenuation with loss of oncogenicity of the horpestype virus of Marek's disease (strain HPRS-16) on passage in cell culture / Churchill A.E., Chubb R.C., Baxendale W. // J.Cen. Virol. 1969. - v. 4. - P. 557-564.

89. Collins P.L., Identification of a tenth RNA of respiratory syncytial virus and assign-meht of polypeptides to the 10 viral genes / Collins P.L., Huang Y.T., Wertz G.W. //J. Virol. 1984. - v. 49. - P. 572-578.

90. Watenbrink F.,Comparison of a newly developed anzymelinked immunosorbent assay of bovine respiratory syncytial virus infections / Watenbrink F., Brinkhof J.M.A., Straver P.J., Quak J., De Leeuw P.W.//Res. Vet. Sci. 1985. - v. 38, № 3. -P. 334-340.

91. Coulis Paul A. Questions and ans were about screening tests / Coulis Paul A.//Disiena John J. AIDS Patient Care. 1987. - v. 1, № 1. - P. 25-27.

92. Cutlip R.C. Lesions in lambs experimentally infected with bovine respiratory syncytial virus / Cutlip R.C., Lehmkuhl H.D. // Am. J. Vet. Res. 1979. - v. 40. - P. 1479-1482.

93. De Jong J.C., Stimulated growth of respiratory syncytial virus in the presence of notinomycin D. Antonie van Leeuvvenhoek / De Jong J.C., Harmsen N. // J. Microbiol. Serol. 1973. - v. 39. - P. 409-413.

94. Bansal R.P., Detection of rinderpast by latex agglutination test /Bansal R.P., Joshi R.C., Chandra U., Sharma B.// Acta virol. 1988. - v. 32. - № 3. - P. 275-277.

95. Takahashi E., Diagnosis of bovine respiratory syncytial virus infection by complement fixation test / Takahashi E., Inaba Y., Kurogi H., Sato K., Goto Y., Omort T. / Nat. lust/ Anim. Health Quart. 1975. - v. 15, № 4. - p. 179-185.

96. Kiman T.G., Diagnosis of bovine respiratory syncytial virus infections improved by virus detection i lung lavage samples / Kiman T.G., Limmer G.M., Straver P.J., //Am. J. Veter. Rea. 1986. - v. 47, № l.-P. 143-147.

97. Doggett J.E., A study of an inhibitor in bovine serum active against respiratory syncytial virus / Doggett J.E., Taylor-Robinson D., Gallop R.G.C. //Arch. ges. virusforsch. 1968. - v. 23. - P. 126-137.

98. Dubovi E.J., Inhibition of respiratory syncytial virus by BIS (5-amidino-2-bensimidasolyl) methane / Dubovi E.J., Gerats J.D. Tidwell R.R.,// Virology. 1980. -v. 103.-P. 502-504.

99. Dubovi E.J., Enhancement pf respiratory syncytial virus induced cytopathology by trypsin, thrombin and plasmin / Dubovi E.J., Geratz J.D., Tidwell R.R. //Infect. Immun. - 1983. - v. 40. - P. 351-358.

100. Elashary M.A.S.Y. A natural cutbreak of bovine respiratory disease caused by bovine respiratory syncytial virus / Elashary M.A.S.Y., Silim A., Morin M. //Cornell Vet. 1982. - v. 72, № 3. - P. 325-333.

101. Belanger F., Electron microscopic evidence for bridges betwean bovine respiratory syncytial virus particles /Belanger F., Berthiaume L., Alain R., Lussier G., Trudel M. // J. Gen. Virol. 1988. - v. 69, № 6. - P. 1421-1424.

102. Kalica A. R.,Electron microscopi studies of respiratory syncytial virus temperature -sensitive mutants /Kalica A. R., Wrigth P.F., Hetrick F.M., Chanock R.M. //Aroh. Ges. Virusfosch. 1973. - v. 41. - P. 248-258.

103. De Girolami P.C., Evaluation of a new latex agglutination method for detection of antibody to herpes simplex virus /De Girolami P.C., Dokos J., Eichelberger K., Biano S. //J. Clin. Microbiol. 1988. - v. 26. № 5. - P. 1024-1025.

104. Thomas L.H., Experimental pneumonia in gnotobiotic calves produced by respiratory syncytial virus /Thomas L.H., Stott E.J., Collins A.F., Jebbett J. //Br. J. Exp. Path. 1984. - v. 65.-19-28.

105. Mills J., Experimental respiratory syncytial virus infection of abults /Mills J., Van Kirk J.E., Wright P.F., Chanook R.M. //J. Immunol. 1971. - v. 107. - P. 123-130.

106. Fernil B.P., The stabilization and purification of respiratory syncytial virus using Mg So 4 / Fernil B.P., Gerin J.L//Virology. 1980. - v. 106. - P. 141-144.

107. Pernil B.F.,. The development of BALB/c celle persistent ly infected with respiratory syncytial virus: Presense of ribonuoleprotein on the call surfoce / Pernil B.F., Ford E.C., Gerin J.L. //Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1981. - v. 167. -P 83-86.

108. Forsyth B.R. Identification of respiratory syncytial virus antigens by agar diffusion andimmunmcelectrophoresis / Forsyth B.R. //Proc. Soc. Exp Biel. Ked. 1970. - v. 133.-P 568-572.

109. Forayth B.R., Biophysical studies of respirstory syncytial virus. Identification of two soluble cjmplement fixing antigens of respiratory syncytial virus. / Forayth B.R., Coates R.V., Chanook R.M. //J. Bact. - 1966. - v. 91. - P 1270-1276

110. Gabathuler K. Respira torisches Syncytial virus Riderpraxis / Gabathuler K. //Sechweiz. Aroh/ Tierheilk. 1983. - h. 125. - S. 149-153.

111. Gillete K.G., Respiratora syncytial virus indection in trsnsported calves / Gillete K.G., Smith P.C. //Am. J. Veter. Rec. 1985. - v. 46, № 12. - c. 2596.

112. Graham D., Proteolitic enhanocment of rotavirus infectivity : biiologie mechanisms / Graham D., Estes M.K. //Virology. 1980. - v. 101, № 2. - P. 432-439.

113. Grist N.R., Influenza respiratory syncytial virus and pneumonia in Glasgow 19621965 / Grist N.R., Ross C.A.C., Stott E.J //Br. Med. J. 1967. - v. 1. - P. 456-457.

114. Hall C.B., Modes of transmission of respiratory syncytial virus / Hall C.B., Douglas K.G. //J. Pediat. 1981. - v. 99. - P. 100-103.

115. Hall C.B., Respiratory syncytial virus infections in infants : quantitation and duration of shedding / Hall C.B., Douglas R.G., Geiman J.M. //J. Pediat. 1976. - v. 89. -P.ll-15.

116. Hall C.B., Possible transmission by fomites of respiratory syncytial virus / Hall C.B., Douglas R.G., Geiman J.M.//J. Inf. Dis. 1980. - v. 141.-P. 98-102.

117. Hambling M.H. Survival of respiratory syncytial virus during storage under various conditions /Hambling M.H.//Brit. J. exp. Path. 1964. - v. 45. - P. 647-655.

118. Holzhauer C., De etiologischi rol van het bovine respiratory syncytial virus bij pinkengriep. Tijdschr /Holzhauer C., van Nieuwstadt A.P.//Diergeneoskd. 1976. -v. 101.-P. 1023-1031.

119. Huang. Y.T., The genome of respiratory syncytial virus is a negative stranded БУМА that codes for ft least seven in RNA species / Huang. Y.T., Werts G.W. //J. Virol. -1982.-v. 43.-P. 150-157.

120. Trudel M., Immunovirological studies on human respiratory syncytial virus structural proteins /Trudel M., Nadon F., Sequin C., Ghoubril S., Paument P., Trepanier P. //Can. J. Microbiol.- 1986.-v. 32, № 1.-P. 12-15.

121. Pona Marcel W., Improvement of respiratory syncytial virus replication in actively growing Hep-2 cells /Pona Marcel W., Lambert A. L., Lambert D.M., Rochovansky O.M. //J. Virol. Meth. 1983. - v. 7, № 4. - P. 217-221.

122. Hall C.B.,Infectivity of respiratory syncytial virus by various routes of inoculation /Hall C.B., Douglas R.G., Sehnabel K.C., Geiman J.M. //Infect. Immun. 1981. - v. 33.-P. 779-783.

123. Ingh P.S.G.A.M., Clinical and pathological observat ons an spontaneous bovine respiratory syncytial virus infections in calves / Ingh P.S.G.A.M., Verhoeff I., Nieuwstadt A.P.K.M.I. //Res. In veter.Sc. 1982. - v. 33, № 2. - P. 152-158.

124. Inhibition of respiratory syncytial, parainfluenza 3 and measles viruses by 2-Deoxy-D-glucose. /Hodes D.S., Schnitzel T.J., Kalica A. R., Camargo E., Chanock R.M. //Virology. 1975. - v. 63. - P. 201-208.

125. Dubovi E.J., Inhibition of respiratory syncytial virus hoat cell. interactions by monoand diamidines /Dubovi E.J., Geratz J.D., Shaver S.R., Tidwell R.R. //Antimicrob. Ag. Chemother. - 1981. - v. 19. - P. 649-656.

126. Pringle C.R,. Initiation and maintenance of persistent infection by respiratory syncytial virus /Pringle C.R, Shirodarla P.V., CashP., Chiswell D.J., Malley P. //J. Virol. -1978.-v. 28.-P. 199-211.

127. Witter R.L., Isolation from turkeys of a cell-associated herpesvirus antigenically related to Marek's disease virus /Witter R.L., Nazerian K., Purchase H.G., Burgoyne G.H. //Am. J. Vet. Res. 1970. - v. 31. - P. 525-538.

128. Calnek B.W., In vitro methods for assay of turkey herpesvirus /Calnek B.W., Garrido C., Okazaki W., Patrascu I.V. //Avian Dis. 1972. - v. 16. - P. 52-56.

129. Joncas J., The structure of respiratory syncytial virus / Joncas J., Berthfaume L., Pavilanis V.//Viroligy. 1969. - v. 38. - P. 493-496.

130. Jordan W.S. Groqth Characteristics of respiratory syncytial virus / Jordan W.S. //J. Immunol. 1962.-v. 88. - P. 581-590.

131. Kisch Q.L., A plaque assouy for respiratory syncytial virus / Kisch Q.L., Johnson K.N.// Prac. Soc. Exp. Biol. Med. 1963.-v. 112,№3.-P. 583-589.

132. Koves B., Isolation of respiratory syncytial (RS) virus from coffle diseased with respiratory symptoms / Koves B., Bartha A. //Acta vet. Acad, soi hung. 1975 (1976). - v. 25, № 4. - P. 357-362.

133. Koves B., Respiratory syncytial (RS) virus isolalosa legzoszer vi tunetekkel meg betegibitt szarvasmarhakbol / Koves B., Bartha A. //Magy. Ellatorv. Lapja: 1976. -v. 31, №2.-P. 99-102.

134. Lambert D.M., Respiratory syncytial virus glycoproteina / Lambert D.M., Pons M.W. //Virology. 1983. - v. 130. - P. 204-214.

135. Lohmkuhl H.D.,Charaterization and identification of a bovine respiratory syncytial virus isolated from Young Calves / Lohmkuhl H.D., Coug P.M., Reed D.E.//Am. J. veter. Res. 1979: - v. 40, № 1. - P. 124-126.

136. Lehmkuhl H.D., Experimentally induced respiratory syncytial virus infection in lambs / Lehmkuhl H.Dt, Cutlip R.C. //Am. J. vet. Reb. 1979. - v. 40. - P. 512-514.

137. Lehmkuhl H.D., Morphogenesi and structure of caprine respiratory syncytial virus / Lehmkuhl H.D., Smith M.H., Cutlip R.C.//Virok 1980. - v. 65. - P. 269-276.

138. Polypeptides of respiratory syncytial virus /Levine S. J.// Virol. — 1977. v. 21. - P. 427-431.i

139. Levine S., Late stage synchronization of respiratory syncytial virus replication /Levine S., Buthala D., Hamilton KM Virology. 1971. - v. 45. - P. 390-400.

140. Levine S., Kinetics of respiratory syncytial virus growth cycle HeLa ctlls / Levine S., Hamilton R. //Aroh. ges. Virusforsch. 1969. - v. 28. - P. 122-132.

141. Levine S., Effect of respiratory syncytial virus infection on HeLa macromolecular synthesis / Levine S., Peebles M., Hamilton R. //J. gen. Virol. 1977. - v. 37. - P. 563.

142. Linggi T., Das bovine respiratorische synzytiabvirus als Erreger van Respirationstrakterkrankungen des epidemiologishe Untersucbung in der Schweiz /. Linggi T., WylerR. //Schweiz. Arch. Teirheilk. 1985. -Bd. 127. -H. 10. - S. 651-659.

143. Martin H.T. Indirect haemagglutination test for the detection and assay of antibody to bovine respiratory syncytial virus /Martin H.T//Vet. Rec. — 1983. V. 113, № 3. — P. 290-293.

144. Matthews R.E.F. Classification and nomenclature of viruses /Matthews R.E.F. //Intervirology. 1982. - v. 17.-P. 104-105.

145. Monulty M.S., Experimental respiratory syncytial virus pneumonia in young calves : Microbiologic and immunofluorescent findings / Monulty M.S., Bryson D.G., Allan G.M. //Am. J. Vet. Res. 1983. - v. 44. - P. 1656-1659.

146. Mohanty S.B., Experimentally induced respiratory syncytial viral infection in calves. / Mohanty S.B., Ingling A.L., Lillie M.G. //Am. J. Vet. Res. 1975. - v. 36, №4.-P. 417-419.

147. Taylor G., Monoclonsl antibodies protect against respiratory syncytial virus infection in mice /Taylor G., Stott E.J., Bew N., Fernie B.F., Cote P.J., Cjllins A.P., Hughes M., Jebbett J. //Immunol. 1984. v. 52. - P. 137-142.

148. Morris J.A, Recovery of cytopathic agent from chimpanzees with coryza / Morris J.A, Blount R.E, Savage R.E.// Prjc. Soc. Exp. Biol. Med. 1956. - v. 92. - P. 544549.

149. Moyr A. Virus krankheiten der Kalber / Moyr A.// Reportsand summaries-rapparte et resumes Reforate und zusammenfassugen. 1980. - P. 233-260.

150. Van Nieuwstadt A.P,Serology for diagnosis and cpizootilogical studies of bovine respiratory syncytial virus infections /Van Nieuwstadt A.P, Verhoeff J.//Research in Veterinary Science. 1983. - v. 35. P. 153-159.

151. Norrby E, Differences on the appearance of antibodies to structural components of measles virus after immunization with inactivated and live virus / Norrby E, Enders-Ruchle G, Ter-Meulen.V. //J. Inf. Dis. 1975. - v. 132. - P. 262-269.

152. Hall C.B, Noscomial respiratory syncytial virus infections /Hall C.B, Douglas R.G, Gefman J.M, Mesner M.K. //Ne2w Eng. J. Med. 1975. - v. 293. - P. 13431346.

153. Lambert D.M, Nucleic acide of respiratory syncytial vims / Lambert D.M, Pons

154. M.W, Mbuy G.N, Dorech-Hasler K. //J. Virol. 1980. - v. 36. - P. 837-846.i

155. Hunes A, Defeccion de anticuerpos contra el virus sincitial respirstorio bovino por seroneutralizacion / Hunes A, Castell S. //Rev. Salud anim. 1987. - v. 9, № 3. - P. 266-267.

156. Odegaard O.A.,A field caused by bovine respiratory syncytial virus / Odegaard* O.A., Krogerud J. //Acta vet. Scand. 1977. - v. 18. - P. 429-431.

157. Paccaud M.F., A respiratory syncytial virus of bovine origin / Paccaud M.F., Jacquier A. //Arch. Des. Virusforsch. 1970. - v. 30. - P. 327-342.

158. Kingsbury D.W., Paramyxovirides /Kingsbury D.W., Bratt M.A., Choppin P.W., Hanson R.P., Hosaka Y., ter Meulen V., Norrbij E., Plowright W., Rott R., Wunner W.H. //Inteiwology. 1978. - v. 10. - P. 1370152.

159. Parry J.E., Pneumoviruses : the cell surfoce of lytically and persistently infected cells / Parry J.E., Shirodaria P.V., Pringle C.R. //J. Cen. Virol. 1979. - v. 44. - P. 479-491.

160. Peacoch D., Respiratory syncytial virus in Britain / Peacoch D., Clarks S.K.R.//Lancet. 1961. - v. 2. - P. 466.

161. Peebles M., Metobolic regyirements for the naturation of respiratory syncytial virys / Peebles M., Levine S. //J. gen. Virol. 1980. v. 50. - P. 81-88.

162. Pirie H.M., Acute fetal pneumonia in calves due to respiratory syncytial virus / Pirie H.M., Petrie L., Pringle C.R. //Vet. Rec. 1981. - v. 108. - P. 411-416.

163. Inaba Y., Physicochemical properties of bovine respiratory syncytial virus /Inaba Y., anaka Y., Omort T., Matumoto M. //Jap. J. Microbiol. 1973. - v. 17. - P. 211-216.

164. Porter D.D., The age dependence of respiratory syncytial virus growth in ferret lung can be show in organ and monolayer cultures / Porter D.D., Muck K.B., Prince G.A //Clin Immund. Immunopath. 1980. - v. 15, № 3. - P. 415-423.

165. Pospisil L., leolation and Identification of a Bovine Respiratory syncytial virus in Czechoslovakia / Pospisil L., Moneik J., Valicek L //Acta vet. Brno. — 1978. v. 47. -P. 79086.

166. Potgieter L.N.D., tjse of inderect fluorescent antebidy test in the detection of bovine respiratory syncytial virus antibodies in Bovine serum / Potgieter L.N.D., Aidrida P.L. //Amer. J. Vet. Res. 1977. - v. 38, № 9. - P. 1341-1343.

167. Prince G.A., The pathogenesis of respiratory syncytial virus infection in infant forrets /Prince G.A., Porter D.D.// Am. J. Pathol. 1976. - v. 82. - P. 339-350.

168. Pringle C.R., Location and quantitation of antigen on the surfas oa virus-infected cells by specific bacterial adherence and senhing electron microscjpy / Prince G.A., Porter D.D. //J. Viral. Meth. 1980. - v. 1. - P. 61-75.

169. Charlier G., Propagation of bovine respiratory syncytial virus in calftesticle microcarrier culture / Charlier G., Wellwmans G., Lale A., strobbe R. //Arch. Exp. Vetei-narmed . 1984. - v.38, № 6. - P. 894-899.

170. Wermann J.F., Properties of a respiratory syncytial virus isolated from a sheep with rhinitis /Wermann J.F., Liggitt H.D., Parish S.M., Word A.C.S., Lea Master B.R. // J.

171. Vet. Res. 1985. - v. 46, № 4.

172. Reed L.J., A simple method of estimating 50 percent endpoints / Reed L.J., Muenchi

173. H.A. //Am. J. Hyg. 1938. - v. 27. - P. 493-497.

174. Reichselner J. The real inactivation of respiratory syncytial virus in water hypertonic solutions /Reichselner'J. // J. gen. Virol. 1969. - v. 5. - P. 397-403.

175. Richardson Wyatt L.S., Respiratory syncytial virus antibodies in non-human primates and domestic animals /Richardson - Wyatt L.S., Belshe R.B., London W.T., Sly D.L., Camargo E., ChanockR.M. //Lab. Anim. Sci. - 1981. - v. 31. - P. 413-415.

176. Johnson K.M., Respiratory syncytial virus. IV. Correlation of virus shedding, serologie response and illness imadult volunteers /Johnson K.M., Chanock R.M., Rif-hind D., Kravets H.M., Knight V. //J/ Amer. Med. Ass. 1961. - v. 176. - P. 663667.

177. Chanock R.M., Respiratory syncytial virus. IV : Evans A.S. (ed) / Chanock R.M., Kim H. W., Brandt C., Parrott R.H. //Viral Infections of Humans. Epidemiology and Control : Plenum. 1976. - P. 365-382.

178. Suto T., Respiratory syncytial virus infection and its serologie epidemiology /Suto T., Yano N., Ikeda M., Miyamoto M., Takai S., Jhigeta S., Himema Y., Ishida N. //Am. J. Epidem. 1965. - v. 82. - P. 211-224.

179. Prince G.A.,Respiratory syncytial virus infection in inbred mice /Prince G.A., Horswood R. L., Berndt J., Suffin S.C., Chanock R.M. //Infect. Immun. 1979. - v. 26.-P. 764-766/

180. Taylor G., Respiratory syncytial virus infection in mice /Taylor G., Stott E., Hughes N., Collins A.P. //Infect. Immun. 1984. - v. 43.-P. 649-655.

181. Lekeux P., Respiratory syncytial vims pneumonia in Priesian* calves : physiological findings /Lekeux P., Verhooff J., Hajer R., Breukink H.J. //Res. In veter. Sc. 1985. V. 39, № 3.

182. Bryson D.G., Respiratory syncytial vims pneumonia in young calves: Clinical ad pathologic findings /Bryson D.G., Monulty M.S., Logan E.F., Cush P.F. //Am.J. Vet. Res. 1983.-v. 44, №9.-P. 1648-1655.

183. Kravetz H.M., Respiratory syncytial vims III. Production of illness and clinical observations adult volunteers /Kravetz H.M., Knight V., Chanock R.M., Morris J.A., Johnoson K.M., Rifkind D., Utz J.P. //Amer. Med. Ass. -1961. v. 176. - P. 657663.

184. Respiratoiy Syncytial virus tomutants and nuclear immunofluorescance //j. Virol. -1976. v. 20, № 2. - P. 487-500.

185. Respiratory syncytial vims vaccine, Marck and Ca. Inc. Пат. 46727, Ирландия, заявк. 19.4.78 № 768/78. Опублик. 7.9.83. МК 61 К 39/12, с 127/08.

186. Richman A.V., Tauraso N.M. Growth of respiratory syncytial vims in suspension cell culture / Richman A.V., Tauraso N.M. //Appl. Microbiol. 1971. - v. 22. - P. 1123-1125.

187. Rossi C.R.,Serological evidence for the associationof bovine respiratory syncytial virus with respiratory tract disease in Alabama cattle / Rossi C.R., Kiesel G.K. //Infect. Immun. 1974. - v. 10. - P. 293-298.

188. Rosi C.R., Bovine respiratory syncytial virus infection of bovine embryonic lung cultures : a kinetic study by the fluorescent antibody techique / Rosi C.R., Kisel G.K. //Amer. J. Vet. Res.-1977. v. 38, №11.-p. 1901-1904.

189. Schirrmeier H. Zur morphologischen und immunhistologischen diagnostic virusbedingter respiratorischer Erkrankungen der Kalber . /Schirrmeier H. Zur //Mil. Vet.

190. Med. 1980. - H. 35. - B. 35-39.

191. Senterfit L.B., Separation and concentration of respiratory syncytial virus (RSV) antigens / Senterfit L.B., Baldridge P.B. //J. Immunol. Meth. 1974. - v. 4. - P. 349357.

192. Berthiaume L., Serological evidence of respiratory syncytial virus infection in shepp /Berthiaume L., Joncas J., Boulay G., Pavilabic V. //Vet. Rec. 1973. - v. 93. - P. 337-338.

193. Shahrabadi M.S., Calcium reguirement for syncytium formation in Hep-2 cells by respiratory suncytial vims / Shahrabadi M.S., Lee atrick W.K. //J. Clin. Micrjbiol.1988.-v. 26, № l.-P. 139-141.1. J f

194. Smith M.H., Isolation and characterisation of a bovine syncytial virus / Smith M.H., Frey M.L., Dierks R.E. //Vet. Rec. 1974. - v. 94. - P. 599.

195. Storch G.A., Evalution of a latex agglutination test for herpes simplex virus / Storch G.A., Reed C.A., Dalu L.A.//J. Clin. Microbiol. 1988. - v. 26, № 4. - P. 787-788.

196. Ito Y., Tanaka Y., Structure of bovine respiratory syncytial virus /Ito Y., Tanaka Y., Inaba Y., Omorl T. //Arch. Ges. Virusforsch. 1973. - v. 40. - P. 198-204.

197. Stott E.J., Respiratory syncytial virus / Stott E.J., Taylor G. //Arch. Virol. 1985. -v. 84.-P. 1-52.

198. Stott E.J., The characterissation and uses of monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus /Stott E.J., Bew M.PL, Taylor G., Jebbett J., Collins A.P. //Develop. Diol. Standart. 1984.

199. Routledge E.G., The development of monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus and their use in diagnosis by indirect immunofluorescence /Routledge E.G., McQuillin J, Samson F.C.R, Toms G.L. //J. Ved. Virol. 1985. - v. 15, № 3. - P. 305-320.t

200. Thomas L.N, The growth of respiratory syncytial virus in organ cultures of bovine foetal trachea / Thomas L.N, Stoff E.J, Jebbett J, hamiltot S. //Arch. Virol. 1976. -v. 52.-P. 251-258.

201. Prince G.A, The pathogenesis of respiratory syncytial virus infection in cotton rats /Prince G.A, Jenson A.B., Horawood R.L, Camargo E, Chanock R.M. //Am. J. Pathol. 1978. - v. 93. - P. 771-784.

202. Tlorent G, Bovines respiratorisches syncytial virus (BRSV) in der sohweiz : eiene serologische stutie / Tlorent G, DeMarneffe C. Boller E. //Schwauz. l.s.h. Tiasfeuk. -1985.-v. 10.-P. 127.

203. Trepanier P, Concentration of human respiratory syncytial virus usingammonium sulphate polyethylene glycol or hollow fibre ultrafiltration / Trepanier P, Payment P, Trudel M. //J. Virol. Meth. 1981. - v. 3. - P. 201-211.

204. Treuhaft M.W. A colorimetric assay for quanti fication of defective interfering particles of respiratory syncytial virus /Treuhaft M.W.//J. gen. Virol. 1983. - v. 64. -P. 1301-1309.

205. Treuhaft M.W, Becm M.O. Defective interfering particles of respiratory syncytial virus Infect /Treuhaft M.W,//Immun. 1982. - v. 37. - P. 439-444.

206. Ueba O. Purification and polypeptides of respiratory syncytial virus /Ueba O. //Microbiol. Immunol. 1980. - v. 24. - P. 361-364.

207. Dreixin R.S, Untersuchungen sum Einsetz der inderekten hemagglutination bei der serodiagnostik experimentller und naturlicher RS-Virusin jektipnen / Dreixin R.S,

208. Dohner L., Jankewitsch O.D., Mentel R., Mitjewa W., Grodnitzkaja N.A. // Dtach. Gesundheitsw. 1977. - v. 32, № 18. - P. 854-858.

209. Verhoeff J., Bovine respiratory syncytial virus infection in young dairy cattle : clinical and haematological fmdinys /Verhoeff J., Van der Ban. M., Nieuwstadt A.P.K.M.I. //Vet. Rec. 1984. - v. 114, № 1. - P. 9-12.

210. Gardner P.S., Virus cross-infection in paediatric wards /Gardner P.S., Court S.D.M., Brocklebank J.T., Downham M.A.P.S., Weightman D. //Br. Med. J. 1973. - v. 2. -P. 57-575.

211. Walsh E.E., Monoklonal antibodies to respiratory syncytial virus proteins : Identification of the fusion protein / Walsh E.E., Hruska J. //J. Virol. 1983. - v. 47. - P. 171-177.

212. Walsh E.E., Purification and characterisation of GP 90, one of the velope dlyco-proteins of respiratory syncytial virus / Walsh E.E., Schesinger J.J., Brandriss M.W. //J. gen. Virol. 1984. - v. 65. - P. 761-767.

213. Wellemans G., Vaccination des bovins contre le virus respiratore syncytial (RSB) au moyen d'une souche attenues / Wellemans G., van Opdenbosch E. //Ann. Med. Vet. -1978.-v. 122.-P. 537-543.

214. Wunner W.H., Respiratory syncytial virus some biological and biochemioal propee-ties./ Wunner W.H., Faulkner G.P., Pringle G.R. // New York : Academic Press, 1975.-P. 193-201.

215. Wunner W.H., Respirstory syncytial virus proteins I Wunner W.H., Pringle C.R //Virology. 1076. - v. 73. - P. 228-243.

216. Yurlova T. J., Natural varisbility of respiratory syncytial viruses, Their interference and reproduction characteristics / Yurlova T. J., Zoshchenkova N.Ya., Karpova L.S. //Acta Virol. 1985. - v. 29, № 4. - P. 279-284.

217. Zakestiloknya L. The morphological characterisation of respiratory syncytial virus by a simple electron microscope technique / Zakestiloknya L. Ya., Almeida J.D., Bradstreet C.M.P. //Acta Virol. 1967. - v. 11. - P. 420-423.

218. Zrein M., Use of egg-yalk antibody for detection of respiratory sybcytial virus in nasal secretions by ELISA / Zrein M., Obert G., Regonmortal M.H. van. //Arch. Virol. —1986. v. 90, № 3. - P. 197-206.

219. Zygraich N. Vaccination against RS virus : a five year experience with Rispoval /Zygraich N. //Proceodinge of XII World Congress on Diseases of Cattle. 1982.1. P. 189-195.