Иммуноаффинное концентрирование и тест-определение некоторых полициклических ароматических углеводородов и микотоксинов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Юрасов, Николай Александрович

• Юрасов, Николай Александрович
• кандидат химических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат химических наук Юрасов, Николай Александрович

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ .ОБЗОР. ИММУНОХИМИЧЕСКОЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ В МЕТОДАХ РАЗДЕЛЕНИЯ И

ОПРЕДЕЛЕНИЯ.

1.1. Иммуноаффинное концентрирование ПАУ и микотоксинов.

1.1.1. Устройство и принцип работы иммуноаффинной колонки.

1.1.2. Аналитические характеристики иммуноаффинных колонок.

1.1.3. Применение золь-гель технологии в создании сорбентов для иммуноаффинных колонок.

1.2. Иммунофильтрационные тесты.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1. Вещества и материалы.

2.2. Конструкция и характеристики иммуноаффинной колонки.

2.3. Конструкция иммунофильтрационного теста.

2.4. Оборудование и методика измерений.

2.5. Расчет аналитических характеристик тест-метода.

ГЛАВА 3. ИММУНОАФФИННОЕ КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ПАУ И ОХРАТОКСИНА А.

3.1. Иммуноаффинное концентрирование ПАУ.

3.1.1. Сравнение сорбционных свойств золь-гель материала и сефарозного геля.

3.1.2. Изучение сорбционных свойств золь-гель материала, содержащего антитела, специфичные к пирену.

3.1.3. Изучение селективности золь-гель сорбента по отношению к другим ПАУ.

3.1.4. Получение золь-гель материала с иммобилизованными антителами на бенз[а]пирен и изучение его сорбционных свойств.

3.1.5. Применение полученных золь-гель колонок при определении ПАУ в природных объектах.

3.2. Иммуноаффинное концентрирование охратоксина А.

3.2.1. Золь-гель сорбенты для иммуноаффинного концентрирования охратоксина А.

3.2.2. Сефарозный гель для иммуноаффинного концентрирования охратоксина А.

ГЛАВА 4. МЕМБРАННЫЕ ИММУНОФИЛЬТРАЦИОННЫЕ ТЕСТЫ ДЛЯ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗЕАРАЛЕНОНА, ОХРАТОКСИНА А, ФУМОНИЗИНА В1.

4.1. Выбор оптимальных условий индивидуального определения микотоксинов в модельных растворах.

4.1.1. Оптимизация условий определения зеараленона.

4.1.2. Оптимизация условий определения охратоксина А.

4.1.3. Оптимизация условий определения фумонизина В1.

4.2. Одновременное определение ЗЕА и OTA в модельных растворах.

4.3. Оптимизация условий определения микотоксинов в пшенице.

4.4. Оптимизация условий определения микотоксинов в кукурузе.

4.5. Одновременное определение ЗЕА, OTA и ФУМ в модельных растворах, пшенице и кукурузе.

4.6. Новый подход к определению микотоксинов иммунохимическим мембранным тест-методом на двух контрольных уровнях.

4.7. Определение микотоксинов в кормовом силосе.

ГЛАВА 5. СНИЖЕНИЕ ФОНОВОГО СИГНАЛА В ИММУНОФИЛЬТРАЦИОННЫХ ТЕСТАХ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ

В КАЧЕСТВЕ ФЕРМЕНТА ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА.

5.1. Выбор оптимальных условий тест-определения ДОН и НТ-2 токсина в модельных системах.

5.1.1. Оптимизация условий определения НТ-2 токсина.

5.1.2. Оптимизация условий определения ДОН.

5.2. Одновременное определение ДОН и НТ-2 в модельных растворах.

5.3. Выбор оптимальных условий иммунофильтрационного определения микотоксинов в пшенице и кукурузе.

5.3.1. Оптимизация методики пробоподготовки пшеницы и кукурузы.

5.3.2. Влияние процедуры анализа на определение токсикантов.

5.4. Одновременное определение ДОН и суммы Т-2 и НТ-2 токсинов в пшенице и кукурузе.

5.5. Определение ДОН и суммы Т-2 и НТ-2 токсинов в кормовом силосе.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммуноаффинное концентрирование и тест-определение некоторых полициклических ароматических углеводородов и микотоксинов»

Актуальность темы.

Разработка простых и доступных широкому кругу потребителей методик, позволяющих осуществлять контроль качества окружающей среды, продуктов питания и кормов является в настоящее время одной из важнейших задач аналитической химии. В этом плане возможности иммунохимических методов разделения, концентрирования и определения токсикантов, характеризующихся высокой селективностью и чувствительностью, использованы не полностью.

Полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) и микотоксины относятся к высокотоксичным и широко распространенным загрязнителям, которые содержатся в объектах окружающей среды и пищевых продуктах в следовых количествах. Чаще всего для их определения используют дорогостоящие и трудоемкие хроматографические методы анализа. В то же время актуальной является разработка доступных потребителю экспрессных методов их определения, а также способов выделения и концентрирования указанных токсикантов из объектов сложной природы. Все большую популярность в аналитической практике приобретают иммуноаффинные колонки для концентрирования токсикантов и иммунотесты для их обнаружения, основанные на специфическом взаимодействии антиген-антитело, построенном на принципе биологического распознавания. Одной из тенденций развития иммуноаффинного концентрирования является использование золь-гель технологии при иммобилизации иммунореагентов, позволяющей регулировать размер пор полимерной сетки и обеспечивать защитное окружение для биомолекул. Однако в литературе описаны лишь единичные примеры применения золь-гель материалов в качестве иммуноаффинных сорбентов и отсутствуют сведения о сравнении различных подходов к иммобилизации антител при концентрировании аналитов. Применение иммуно фильтрационных тестов ограничено высоким матричным фоном для сложных объектов анализа и, как правило, определением индивидуальных токсикантов. Таким образом, изучение и применение в иммуноаффинном концентрировании , новых материалов с иммобилизованными антителами, поиск подходов к снижению фонового сигнала и одновременному определению нескольких аналитов с использованием иммунофильтрационных тестов является актуальным.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является разработка и оптимизация простых, экспрессных иммунохимических методик концентрирования и тест-определения представителей полициклических ароматических углеводородов и микотоксинов.

Для достижения поставленной цели решены следующие задачи:

- изучены сорбционные свойства иммуносорбентов на основе золь-гель материала с инкапсулированными антителами и сефарозного геля с ковалентно-связанными Ат специфичными к ПАУ и охратоксину A (OTA);

- разработаны методики иммуноаффинного концентрирования ПАУ и OTA из природных вод и красного вина, соответственно, с последующим хроматографическим или флуориметрическим определением;

- расширены возможности иммунофильтрационных мембранных тест-систем в плане одновременного анализа трех микотоксинов (OTA, зеараленона (ЗЕА), фумонизина В1 (ФУМ)) при иммобилизации специфических антител на отдельных зонах мембраны;

- оценена возможность использования иммунофильтрационного тест-метода для определения микотоксинов на двух контрольных уровнях, показана применимость данного подхода при анализе реальных объектов;

- оптимизированы методики иммунофильтрационного тест-определения микотоксинов, что позволило уменьшить матричный эффект при использовании пероксидазы хрена (ПХ) в качестве ферментной метки;

- разработаны методики тест-определения микотоксинов (OTA, ЗЕА, ФУМ, дезоксиниваленола (ДОН), суммы Т-2- и НТ-2-токсина (Т-2/НТ-2) в пшенице, кукурузе и силосе.

Методы и объекты. Для решения поставленных в работе задач применяли комплекс иммунохимических (иммуноаффинные колонки, иммуно-фильтрационные мембранные тесты) и физико-химических (флуориметрия, спектрофотометрия, ВЭЖХ, ГХ-МС) методов анализа и исследования. Объектами исследования явились следующие вещества: ПАУ - пирен, бенз[а]пирен (БАЛ); микотоксины - зеараленон, охратоксин А, фумонизин В1, Т-2 и НТ-2 токсины, дезоксиниваленол.

Научная новизна состоит в следующем:

- проведена сравнительная оценка сорбционных свойств золь-гель материалов и сефарозного геля с иммобилизованными антителами, специфичными к ПАУ и OTA;

- показана возможность использования иммуноаффинных колонок на основе золь-гель материалов для выделения и концентрирования ПАУ из водных сред и колонок на основе сефарозного геля для выделения OTA из красного вина;

- разработаны и оптимизированы иммунофильтрационные мембранные тесты для индивидуального определения микотоксинов (ЗЕА, OTA, ФУМ, ДОН, Т-2/НТ-2) и одновременного определения двух-трех аналитов указанного ряда в пшенице, кукурузе, силосе;

- оценена возможность снижения матричного фона при одновременном определении микотоксинов в сложных матрицах (пшеница, кукуруза, силос) методом иммунофильтрационного анализа с использованием ПХ в качестве ферментной метки путем введения добавок полимеров;

- разработана методика визуального определения микотоксинов на двух контрольных уровнях, позволяющая оценивать степень загрязненности анализируемых образцов выше или ниже установленных количественных пределов.

Практическая значимость работы. Разработаны тест-методики для индивидуального и одновременного определения нескольких микотоксинов (ЗЕА, OTA, ФУМ, ДОН, Т-2/НТ-2) в пшенице, кукурузе, кормовом силосе, а также методики концентрирования пирена, БАП и OTA из водных сред. Методики могут быть использованы в экологическом контроле, контроле качества пищевых продуктов и кормов. Оптимизированы условия иммобилизации антител в золь-гель материалы на основе тетраметоксисилана. Разработан подход к обнаружению аналитов на нескольких контрольных уровнях с использованием иммунофильтрационных мембранных тест-систем и подход к количественной оценке результатов тестов с использованием офисной техники (компьютер и планшетный сканер).

Положения, выносимые на защиту:

Способы концентрирования пирена, БАП и OTA с использованием иммуноаффинных колонок на основе двух типов сорбентов: золь-гель материала с инкапсулированными антителами и сефарозного геля с ковалентно-связанными антителами.

Подход к одновременному имму но фильтрационному тест-определению аналитов на двух контрольных уровнях, основанный на варьировании концентрации иммобилизованных антител.

Способ снижения матричного фона при использовании пероксидазы хрена в качестве ферментной метки путем введения добавок катионного полиэлектролита.

Оригинальные методики индивидуального и одновременного тест-определения микотоксинов (OTA, ЗЕА, ФУМ, ДОН, Т-2/НТ-2) методом мембранного иммуноферментного анализа в пшенице, кукурузе, силосе.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены на следующих конференциях: IV Всероссийская научнопрактическая конференция «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, Россия, 2009); Международная научная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов 2011» (Москва, Россия, 2011); Всероссийская конференция «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез» (Краснодар, Россия, 2010); Всероссийская молодежная выставка-конкурс прикладных исследований, изобретений и инноваций (Саратов, Россия, 2009); 1st Int. summer school "Nanomaterials and nanotechnologies in living systems" (Москва, Россия, 2009); VII Всероссийская конференция по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2009» (Йошкар-Ола, Россия, 2009); Съезд аналитиков России «Аналитическая химия - новые методы и возможности» (Москва, Россия, 2010); IV Международная конференция «Экстракция органических соединений» (ЭОС-2010) (Воронеж, Россия, 2010); VI и VII Всероссийская конференция молодых ученых с международным участием «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Саратов, Россия, 2010, 2011).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 18 публикаций, в том числе 3 статьи в международном и российских журналах из списка ВАК, 6 - в сборниках статей, 9 тезисов докладов международных и всероссийских конференций.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы, содержащего 178 ссылок, приложения. Работа изложена на 179 страницах, содержит 78 рисунков и 58 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Юрасов, Николай Александрович

ВЫВОДЫ:

1. Предложены новые варианты использования взаимодействия «антиген-антитело» в иммуноаффинных колонках для концентрирования и иммунофильтрационных мембранных тестах для экспрессного определения некоторых представителей полициклических ароматических углеводородов и микотоксинов.

2. Получены иммуносорбенты на основе двух типов материалов (золь-гель сорбенты на основе тетраметоксисилана с инкапсулированными антителами и сефарозный гель с ковалентно-связанными антителами) для выделения и концентрирования пирена, бенз[а]пирена и охратоксина А из жидких сред. При выбранных оптимальных сорбентах и условиях сорбции степень извлечения указанных токсикантов составила, не менее 92 %. Разработанные иммуноаффинные колонки применены при определении указанных ПАУ в объектах окружающей среды (образцы природных вод и ливневых стоков) и охратоксина А в красном вине.

3. Разработаны методики одновременного тест-определения микотоксинов - охратоксина А, зеараленона и фумонизина В1 — методом мембранного иммунофильтрационного анализа с использованием щелочной фосфатазы в качестве ферментной метки. Оптимизирована процедура приготовления мембран и выбраны условия определения микотоксинов в модельных смесях, экстрактах пшеницы, кукурузы и силоса. Контрольные уровни обнаружения ЗЕА, OTA и ФУМ в пшенице составили 50; 2,5 и 500 мкг/кг, соответственно, в кукурузе 100; 2,5 и 500 мкг/кг, и в силосе 125; 25 и 1250 мкг/кг. Методики отличаются экспрессностыо (25 мин для 10 образцов), простотой процедуры пробоподготовки и выполнения анализа, возможностью внелабораторного использования.

4. Предложен подход к одновременному определению микотоксинов на двух контрольных уровнях, основанный на варьировании концентрации иммобилизованных на мембране специфичных антител. Подход применен для определения охратоксина и зеараленона в образцах пшеницы и кукурузы на уровнях Уг и 2 ПДК.

5. Установлена возможность снижения матричного фона в иммунофильтрационных тестах при использовании в качестве метки традиционного фермента - пероксидазы хрена - путем введения добавок катионных полиэлектролитов. Наибольший эффект при определении микотоксинов в экстрактах пшеницы, кукурузы и силоса достигается при использовании растворов полиэтиленполиаминов при концентрации 0,5 %, 1% и 0,1 % соответственно.

6. Разработаны методики иммунофильтрационного индивидуального и одновременного тест-определения ДОН и суммы Т-2/НТ-2 токсинов (фермент - пероксидаза хрена) в экстрактах пшеницы, кукурузы (силоса) на контрольных уровнях 25 (20) нг/мл и 2 (10) нг/мл, соответственно. Методики апробированы при анализе искусственно и природно-загрязненных образцов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Юрасов, Николай Александрович, 2011 год

1. Senyuva H.Z., Gilbert J. Immunoaffinity column clean-up techniques in food analysis: a review // J. of Chromatography B. 2010. Vol. 878, P. 115-132.

2. МУК 4.1.2204—07. Методические указания «Обнаружение, идентификация и количественное определение охратоксина А в продовольственном сырье и пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии».

3. Zhong Y.B., Zhang L.J., Zhang Н.С., Liu J.X., Wang J.P. Immunoaffinity-based solid phase extraction for the determination of melamine in animal-derived foods followed by LC // Chromatographia. 2011. Vol. 73. P. 1211-1215.

4. Rahmani A., Jinap S., Soleimany F., Khatib A., Tan C.P. Sample preparation optimization for the simultaneous determination of mycotoxins in cereals // Eur. Food Res. Technol. 2011. Vol. 232. P. 723-735.

5. Li B., Li C., Jiang H., Wang Z., Cao X., Zhao S., Zhang S., Shen J. Purification of nine sulfonamides from chicken tissues by immunoaffinity chromatography using two monoclonal antibodies //J. AO AC Int. 2008. Vol. 91, № 6. P. 1488-1493.

6. Klinglmayr C., Nobauer K., Razzazi-Fazeli E., Cichna-Markl M. Determination of deoxynivalenol in organic and conventional food and feed by sol-gel immunoaffinity chromatography and HPLC-UV detection// J. Chromatogr. B. 2010. Vol. 878. P. 187-193.

7. Li Y., Wang Y., Yang H., Gao Y., Zhao H., Deng A. Establishment of an immunoaffinity chromatography for simultaneously selective extraction of Sudan I, II, III and IV from food samples // J. Chromatogr. A. 2010. Vol. 1217. P. 7840-7847.

8. Wang Y., Xu Y., Zhang X., Wang E., Dong Y. Preparation of an immunoaffinity column and its application in sample cleanup for methandrostenolone residues detection // J. Chromatogr. B. 2011. Vol. 879. P. 2149-2154.

9. Reiter E.V., Cichna-Mark M., Chung D.-H., Zentek J., Razzazi-Fazeli E. Immuno-ultrafiltration as a new strategy in sample clean-up of aflatoxins // J. Sep. Sci. 2009. Vol. 32. P. 1729-1739.

10. Chen H.-X., Huang T., Zhang X.-X. Immunoaffinity extraction of testosterone by antibody immobilized monolithic capillary with on-line laser-induced fluorescence detection // Talanta. 2009. Vol. 78. P. 259-264.

11. Qiao Y., Yang H., Wang B., Song J., Deng A. Preparation and characterization of an immunoaffinity chromatography column for the selective extraction of trace contraceptive drug levonorgestrel from water samples // Talanta. 2009. Vol. 80. P. 98-103.

12. Qiu S., Xu L., Cui Y.-R., Deng Q.-P., Wang W., Chen H.-X., Zhang X.-X. Pseudo-homogeneous immunoextraction of epitestosterone from human urine samples based on gold-coated magnetic nanoparticles // Talanta. 2010. Vol. 81. P. 819-823.

13. Zhang S., Wang J., Li D., Huang J., Yang H., Deng A. A novel antibody immobilization and its application in immunoaffinity chromatography // Talanta. 2010. Vol. 82. P. 704-709.

14. Аффинная хроматография. Методы: Пер. с англ./Под ред. П. Дина, У. Джонсона, Ф. Мидла. М.: Мир. 1988. - 278 с.

15. Chapuis-Hugon F., du Boisbaudry A., Madru В., Pichon V. New extraction sorbent based on aptamers for the determination of ochratoxin A in red wine // Anal. Bioanal. Chem. 2011. Vol. 400. P. 1199-1207.

16. Vukovic G.L., Pavlovic S.D., Ristic M.S. Comparison of two sample preparation procedures for HPLC determination of ochratoxin A // Arch. Biol. Sci. (Belgrade). 2009. Vol. 61, №4. P. 639-644.

17. Belajova E., Rauova D. Comparison of two clean up techniques in isolation of ochratoxin A from red wine // Czech J. Food Sci. 2010. Vol. 28. P. 233-241.

18. Vega M., Munoz K., Sepulveda C., Aranda M., Campos V., Villegas R., Villarroel O. Solid-phase extraction and HPLC determination of Ochratoxin A in cereals products on Chilean market // Food Control. 2009. Vol. 20. P. 631-634.

19. Rhouati A., Paniel N., Meraihi Z., Marty J.-L. Development of an oligosorbent for detection of ochratoxin A // Food Control. 2011. Vol. 22. P. 1790-1796.

20. De Girolamo A., McKeague M., Miller J.D., DeRosa M.C., Visconti A. Determination of ochratoxin A in wheat after clean-up through a DNA aptamer-based solid phase extraction column//Food Chem. 2011. Vol. 127. P. 1378-1384.

21. Jeronimo P.C.A., Araujo A.N., Montenegro M.C.B.S.M. Optical sensors and biosensors based on sol-gel films (review) // Talanta. 2007. Vol. 72. № 1. P. 13-27.

22. Gupta R., Kumar A. molecular imprinting in sol-gel matrix // Biotechnology Advances. 2008. Vol. 26. P. 533-547.

23. Avnir D., Braun S., Lev O., Ottolenghi M. Enzymes and Other Proteins Entrapped in SolGel Materials // Chem. Mater. 1994. Vol. 6. P. 1605-1614.

24. Dave B.C., Dunn B., Valentine J.S., Zink J.I. Sol-Gel Encapsulation Methods for Biosensors // Anal. Chim. Acta. 1994. Vol. 66. P. 1120A-1127A.

25. Dave B.C., Miller J.M., Dunn B., Valentine J.S., Zink J.I. Encapsulation of proteins in bulk and thin film sol-gel matrices // J. Sol-Gel Sci. Technol. 1997. Vol. 8. P. 629-634.

26. Dunn B., Zink J.I. Probes of Pore Environment and Molecule-Matrix Interactions in SolGel Materials // Chem. Mater. 1997. Vol. 9. P. 2280-2291.

27. Adhikari B., Majumdar S. Polymers in sensor applications // Prog. Polym. Sci. 2004. Vol. 29. P. 699-766.

28. Tan F., Yan F., Yu H. A designer ormosil del for preparation of sensitive immunosensor for carcinoembrionic antigen based on simple direct electron transfer // Electrochemistry Comm. 2006. Vol. 8. P. 1835-1839.

29. Dooby M.A., Baker S.P., Bright F.V. Affinity and mobility of polyclonal anti-dansyl antibodies sequestered within sol-gel-derived biogels // Chem. Mater. 2000. Vol. 12. P. 11421147.

30. Pulido-Tofino P., Barrero-Moreno J.M., Perez-Conde M.C. Analysis of isoproturon at trace level by solid phase competitive fluoroimmunosensing after enrichment in a sol-gel immunosorbent//Analytica Chimica Acta. 2006. Vol. 562. P. 122-127.

31. Hodson R.J., Brook M.A., Brennan J.D. Capillary-scale monolithic immunoaffinity columns for immunoextraction with in-line laser-indused fluorescence detection // Anal. Chem. 2005. Vol. 77. P. 4404-4412.

32. Development and application of a sol-gel immunosorbent based method for the determination of isoproturon in surface water / Zhang X., Martens D., Kramer P.M. et all // J. of Chromatography A. 2006. Vol. 1102. P. 84-90.

33. Incapsulation of biomolecules for bioanalytical purposes: preparation of diclofenac antibody-doped nanometer-sized silica particles by reverce micelle and sol-gel processing /

34. Tsagkogeorgas F., Ochsekuhn-Petropoulou M., Niessner R., Knopp D. // Anal. Chem. Acta.2006. № 573-574. P. 133-137.

35. Flow injection fluorescence immunoassay for gentamicin using sol-gel derived mesoporous biomaterial Yang H.-H., Zhu O.Z., Qu H.-Y. et all // Anal. Biochemistry. 2002. № 208. P. 71-76.

36. Cuchna M., Knopp D., Niessner R. Immuaffinity chromatography of polycyclic aromatic hydrocarbons in columns prepared by the sol-gel method // Anal. Chem. Acta. 1997. № 339. P. 241-250.

37. Altstein M., Bronshtein A., Glattstein B., Zeichner A., Tamiri T., Almog J. Immunochemical approaches for purification and detection of TNT traces by antibodies entrapped in a sol-gel matrix // Anal. Chem. 2001. Vol. 73. P. 2461-2467.

38. Cuchna M., Markl P., Knopp D., Niessner R. On-line coupling of sol-gel generated immunoaffinity columns with high-performance liquid chromatography // J. of Chromatography A. 2001. №919. P. 51-58.

39. Vazquez-Lira J.C., Camacho-Frias E. Pena-Alvarez A., Vera-Avila L.E. Preparation and chractirization of a sol-gel immunosorbent doped witn 2,4-D antibodies // Chem. Mater. 2003. № 15. P.154-161.

40. Schoringhumer K., Cichna-Markl M. Sample clean-up with sol-gel enzyme and immunoaffinity columns for the determination of bisphenol A in human urine // Journal of Chromatography B. 2006. Vol. 850. № 1-2. P. 361-369.

41. Brenn-Struckhofova Z., Cichna-Markl M., Bolhm C., Razzazi-Fazeli E. Selective sample cleanup by reusable sol-gel immunoaffinity columns for determination of deoxynivalenol in food and feed samples // Anal. Chem. 2007. Vol. 79, P. 710-717.

42. Tan F., Yan F., Yu H. Sensitive reagent less electrochemical immunosensor based on an ormosil sol-gel membrane for humane chorionic gonadotrophin // Biosensors and Bioelectronics.2007. Vol. 22. № 12. P. 2945-2951.

43. Stalikas C., Knopp D., Niessner R. Sol-gel glass immunosorbent based determination of s-triazines in water and soil samples using gas chromatography with a nitrogen phosphorous detection system //Envoronment Sci. Thechnol. 2002. Vol. 36. P. 3372-3377.

44. Pulido-Tofíno P., Barrero-Moreno J.M., Pirer-Conde M.C. sol-gel glass doped with isoproturon antibody as selective support for the development of a flow-through fluoroimmunosensor // Anal. Cem. 2001. № 429. P. 337-345.

45. Bronstein A., Aharonson N., Avnir D., Turniansky A., Alstein M. Sol-gel matrixes doped with atrazine antibodies: atrazine binding properties // Chem. Mater. 1997. № 9. P. 2632-2639.

46. Bronstein A., Aharonson N., Avnir D., Turniansky A., Alstein M. Sol-gel based immunoaffinity chromatography: application to nitroaromatic compounds // Chem. Mater. 2000. № 12. P. 2050-2058.

47. Rogers K.R., Wang J., Pamidi P.Y.A. Sol-gel derived theck-film amperometric immunosensors//Anal. Chem. 1998. Vol. 70. P. 1171-1175.

48. Schneider E., Usleber E., Maertlbauer E., Dietrich R., Terplan G. Multimycotoxin dipstick enzyme immunoassay applied to wheat // Food Addit. Contam. 1995a. Vol. 12. No 3. P. 387-393.

49. Collin R., Schneider E., Briggs L., Towers N. Development of immunodiagnostic field tests for the detection of the mycotoxin, sporidesmin A // Food Agricultural Immunology. 1998. Vol. 10. №2. P. 91-104.

50. Sibanda L., De Saeger S., Van Peteghem C. Development of a portable field immunoassay for the detection of aflatoxin Ml in milk // Intern. J. Food Microbiol. 1999. Vol. 48. P. 203-209.

51. Bhattacharya R., Bhattacharya D. and Dhar T.K. A novel signal amplification technology based on catalyzed reporter deposition and its application in a Dot-ELISA with ultra high sensitivity // J. Immun. Methods. 1999. Vol. 227, № 1-2. P. 31-39.

52. Sibanda L., De Saeger S., Van Peteghem C., Grabarkiewicz-Szczesna J., Tomczak M. Detection of T-2 toxin in different cereals by flow-through enzyme immunoassay with a simultaneous internal reference // J. Agric. Food Chem. 2000. Vol. 48. P. 5864-5867.

53. De Saeger S., Sibanda L., Desmet A., Van Peteghem C. A collaborative study to validate novel field immunoassay kits for rapid mycotoxin detection // Int. J. Food Microbiology. 2002. Vol. 75. № 1-2. P. 135-142.

54. Henderson K., Stewart J. Factors influencing the measurements of oestrone sulphate by dipstick particle capture immunoassay // J. Immunol. Methods. 2002. Vol. 270. P. 77-84.

55. Xiang X., Tianping W., Zhigang T. Development of a rapid, sensitive, dye immunoassay for schistosomiasis diagnosis: a colloidal dye immunofiltration assay // J. Immunol. Methods. 2003. Vol. 280. P. 49-57.

56. Pal A., Dhar T.K. An analytical device for on-site immunoassay. Demonstration of its applicabiliti in semiquantitative detection of aflatoxin B1 in a batch of samples with ultrahigh sensitivity // Anal. Chem. 2004. Vol. 76. P. 98-104.

57. Pal A., Acharya D., Saha D., Dhar T.K. Development of a membrane-based immunofiltration assay for the detection of T-2 toxin // Anal. Chem. 2004. Vol. 76. № 14. P. 4237-4240.

58. Paepens C., De Saeger S., Sibanda L., Barna-Vetro I., Leglise I., Van Hove F., Van Peteghem C. A flow-through enzyme immunoassay for the screening of fumonisins in maize // Anal. Chim. Acta. 2004. Vol. 523. P. 229-235.

59. Schneider E., Curtui V., Seidler C., Dietrich R., Usleber, E., Martlbauer E. Rapid methods for deoxynivalenol and other trichothecenes // Toxicology Letters. 2004. Vol. 153. P. 113-121.

60. Wang S., Zhang C., Zhang Y. Development of a flow-through enzyme-linked immunosorbent assay and a dipstick assay for the rapid detection of the insecticide carbaryl // Anal. Chem. Acta. 2005. Vol. 535. P. 219-225.

61. Wang S., Zhang C., Zhang Y. Development of colloidal gold-based flow-through and lateral-flow immunoassays for the rapid detection of the insecticide carbaryl // Anal. Chem. Acta. 2005. Vol. 546. P. 161-166.

62. Saha D., Acharya D., Roy D., Shrestha D., Dhar T.K. Simultaneous enzyme immunoassay for the screening of aflatoxin B1 and ochratoxin A in chili samples // Anal. Chim. Acta. 2007. Vol. 584. № 2. P. 343-349.

63. Kolosova A.Yu., De Saeger S., Eremin S.A., Van Peteghem C. Investigation of several parameters influencing signal generation in flow-through membrane-based enzyme immunoassay // Anal. Bioanal. Chem. 2007. Vol. 387. P. 1095-1104.

64. Wang S., Quan Y., Lee N. Rapid Determination of Fumonisin B1 in Food Samples by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Colloidal Gold Immunoassay. // J. Agric. Food Chem. 2006. Vol. 54. № 7. P. 2491-2495.

65. Salter R, Douglas D, Tess M, Markovsky B, Saul S.J. Interlaboratory study of he Charm ROSA Safe Level Aflatoxin Ml Quantitative lateral flow test for raw bovine milk // J. AOAC Intern. 2006. Vol. 89. № 5. P. 1327-1334.

66. De Saeger S., Van Peteghem C. Flow-through membrane-based enzyme immunoassay for rapid detection of ochratoxin A in wheat // J. Food Protect. 1999. Vol. 62. № 1. P. 65-69.

67. Sibanda L., De Saeger S., Barna-Vetro I., Van Peteghem C. Development of a solidphase cleanup and portable rapid flowthrough enzyme imunoassay for the detection of ochratoxin A in roasted coffee // J. Agric. Food Chem. 2002. Vol. 50. P. 6964-6967.

68. Hawkes R., Identification of concanavalin A-bilding proteins after sodium dodecyl sulfate-gel electrophoresis and protein blotting // Anal. Biochem. 1982. Vol. 123. P. 143.

69. Saha D., Acharya D., Dhar Т.К. Method for homogeneous spotting of antibodies on membranes: Application to the sensitive detection of ochratoxin A // Anal. Bioanal. Chem. 2006. Vol. 385. № 5. P. 847-854.

70. Pal A., Acharya D., Saha D., Roy D., Dhar Т.К. In situ sample cleanup during immunoassay: a simple method for rapid detection of aflatoxin B1 in food samples // J. Food Protection. 2005. Vol. 68. P. 2169-2177.

71. Garrett G. Modulating the red cell membrane to produce universal/stealth donor red cells suitable for transfusion // Vox Sanguinis. Vol. 94. 2007. P. 87-95.

72. Гембицкий П. А. Вредные вещества в промышленности. 7 издание. Т. 2. М: 1976. -235 с.

73. Роговин 3. А. Химия целлюлозы. М.: 1972. С. 402-404.

74. Нудьга JI. А., Плиско Е. А., Данилов С. Н. N-алкилирование хитозана // Журнал общей химии. 1973. Т. 63. С. 2756-2760.

75. Zhishen Jia, Dongfeng shen, Weiliang Xu. Synthesis and antibacterial activities of quaternary ammonium salt of chitosan // Carbohydrate research. 2001. Vol. 333. № 1. P. 1-6.

76. Biagini G., Bertani A. Wound managment with N-carboxybutil chitosan // Biomaterials 1991. Vol. 12. April. P. 281-285.

77. Meneely J.P., Sulyok M., Baumgartner S., Krska R., Elliott C.T. A rapid optical immunoassay for the screening of T-2 and HT-2 toxin in cereals and maize-based baby food // Talanta. Vol. 81. 2010. P. 630-636.

78. Hermanson G.T. Bioconjugate techniques. Academic Press. 1996. 785 p.

79. De Saeger S., Van Peteghem C. Detection of mycotoxins by flow-through membrane-based enzyme immunoassay. European patent No. 0893690 (Bulletin 2004/29, 14.07.2004)

80. Web-сайт «Pall Corporation»: http://labfilters.pall.com/catalog/laboratory35881.asp

81. Trullols E., Ruisanchez I., Rius F.X. Validation of qualitative analytical methods // Trends Anal. Chem. 2004. Vol. 23. № 2. P. 137-145.

82. Lobeau M., De Saeger S., Sibanda L., Barna-Vetrô I., Van Peteghem C. Development of a new clean-up tandem assay column for the detection of ochratoxin A in roasted coffee // Anal. Chim. Acta. 2005. Vol. 538. P. 57-61.

83. Майстренко B.H., Хамитов P.3., Будииков Т.К. Эколого-аналитический мониторинг супертоксикантов. М.: Химия. 1996. 319 с.

84. Пурмаль А.П. Антропогенная токсикация планеты // Соровский образовательный журнал. 1998. № 9. С. 46-51.

85. Гигиенические нормативы. Предельно допустимые концентрации (ПДК) химических веществ в воде водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования //ГН 2.1.5.1315-03 от 15.06.2003.

86. Commission regulation (ЕС) № 208/2005 of 4 February 2005 amending Regulation (EC) № 466/2001 as regards polycyclic aromatic hydrocarbons // Official Journal of the European Union, 2005, Vol. 34, P. 3-5.

87. Oliferova L., Statkus M., Tsysin G., Shpigun O., Zolotov Yu. On-line solid-phase extraction and HPLC determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in water using fluorocarbon polymer sorbents // Anal. Chim. Acta. 2005. Vol. 538. P. 35-40.

88. Романовская Г.И., Оленин А.Ю., Васильева С.Ю., Крутяков Ю.А. «Химически модифицированные наночастицы серебра новый сорбент для концентрирования полициклических ароматических углеводородов из водных растворов». // ДАН. 2008, Т.422, №3, с. 339-342.

89. Liu J., Chi Y.-G, Jiang G-B, Tai C., Hu J. Use of cotton as a sorbent for on-line precolumn enrichment of polycyclic aromatic hydrocarbons in waters prior to liquid chromatography determination// Microchem. J. 2004. Vol. 77. P. 19-22.

90. Commission Regulation (EC) No. 1881/2006 of 19 December 2006 setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs. Off. J. Eur. Union L364/5.

91. СанПиН 2.3.2.1078-01 "2.3.2. Продовольственное сырье и пищевые продукты "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов".

92. Русанова Т.Ю., Левина Н.А., Юрасов Н.А., Горячева И.Ю. Нанопористые золь-гель материалы с иммобилизованными антителами для иммуноаффинного концентрирования пирена// Сорбционные и хроматографические процессы. 2009. Т. 9, вып. 3. С. 391-398.

93. Русанова Т.Ю. Нано- и супрамолекулярные системы в оптических, пьезоэлектрических сенсорах и тест-методах анализа. Дис. д-ра хим. наук. Саратов., 2009. - 320 с.

94. ИЗ. Crowser J.R. ELISA Theory and Practice // Humana Press, New Jersey. 1995. 229 p.

95. Yao В., Yang L., Hu Q., Shigendo A. Cloud point extraction of polycyclic aromatic Hydrocarbons in aqueous solution with silicone surfactants // Chin. J. Chem. Eng. 2007. Vol. 15. №4. P. 468-473.

96. Основы аналитической химии. В 2 кн. Кн. 1. Учеб. для вузов // Ю.А. Золотов, Е.Н. Дорохова В. И. Фадеева и др.; Под ред. Ю-А. Золотова. М.: Высш. шк. 1996. -383 с: ил.

97. Вэб-сайт компании «Аквилон»: http://www.prochrom.ru/ru/view/?info=vesh&id=92.

98. Rusanova T.Yu., Beloglazova N.V., Goryacheva I.Yu., Lobeau M., Van Peteghem C., De Saeger S. Non-instrumental immunochemical tests for rapid ochratoxin A detection in red wine // Anal. Chim. Acta. 2009. Vol. 653. № 1. P. 97-102.

99. Донченко JI.B., Надыкта В.Д. //Безопасность пищевой продукции. —М.: ДеЛи принт. 2005. — 539 с.

100. Харченко С.Н., Литвин В.П., Тарабара И.М. Справочник по микозам и микотоксикозам сельскохозяйственных животных. —Киев: Урожай. 1982. —168 с.

101. Weidenborner М. Mycotoxins in Foodstuff. Springer. 2007. 900 p.

102. Золотов Ю.А., Иванов B.M., Амелин В.Г. Химические тест-методы анализа. -М.: Едиториал УРСС. 2002. 304 с.

103. Commission Recommendation of 17 August 2006 on the presence of deoxynivalenol, zearalenone, ochratoxin A, T-2 and HT-2 and fumonisins in products intended for animal feeding (2006/576/EC). Off. J. Eur. Union L229/7.

104. ГОСТ P 51550-2000. Комбикорма-концентраты для свиней. Общие технические условия. С поправками от 2009 г. Госстандарт России. -М.

105. Горячева И.Ю., Русанова Т.Ю., Бурмистрова Н.А., Де Саегер С. Иммунохимические методы определения микотоксинов // Журн. анал. химии. 2009. Т.64. № 8. С. 788-806.

106. Урусов А.Е., Жердев А.В., Дзантиев Б.Б. Иммунохимические методы анализа микотоксинов (обзор) // Прикл. биохим. микроб. 2010. Т. 46. № 3. С. 276-290.

107. Zheng M.Z., Richard J.L., Binder J. A review of rapid methods for the analysis of mycotoxins//Mycopathologia. 2006. Vol. 161. P. 261-273.

108. Zinedine A., Soriano J.M., Molto J.C., Manes J. Review on the toxicity, occurrence, metabolism, detoxification, regulations and intake of zearalenone: an oestrogenic mycotoxin // Food Chem. Toxicol. 2007. Vol. 45. P. 1-18.

109. Pfohl-Leszkowicz A., Manderville R.A. Ochratoxin A: An overview on toxicity and carcinogenicity in animals and humans // Mol. Nutr. Food Res. 2007. Vol. 51. № 1. P. 61-99.

110. Berthiller F., Sulyok M., Krska R., Schuhmacher R. Chromatographic methods for the simultaneous determination of mycotoxins and their conjugates in cereals // Int. J. Food Microbiol. 2007. Vol. 119. № 1-2. P. 33-37.

111. Cavaliere C., Foglia P., Pastorini E., et al. Development of a multiresidue method for analysis of major Fusarium mycotoxins in corn meal using liquid chromatography/tandem mass spectrometry // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005. Vol. 19. P. 2085-2093.

112. Liu R., Yu Z., He Q., Xu Y. An immunoassay for ochratoxin A without the mycotoxin // Food Control. 2007. Vol. 18. № 7. P. 872-877.

113. Alarcon S.H., Palleschi G., Compagnone D., Pascale M., Visconti A., Barna-Vetro I. Monoclonal antibody based electrochemical immunosensor for the determination of ochratoxin A in wheat // Talanta. 2006. Vol. 69. № 4. P. 1031-1037.

114. Юрасов H.A., Бурмистрова H.A., Русанова Т.Ю. Одновременное определение зеараленона и охратоксина А в пшенице иммунофильтрационным тест-методом // Известия Саратовского университета. Нов. сер. Сер. Химия. Биология. Экология. 2011. Вып. 2. С. 13-18.

115. Вэб-сайт энциклопедии "Википедия": http://ru.wikipedia.org/wiki/Цвeтoвaя модель

116. Егоров A.M., Осипов А.П. Теория и практика иммуноферментного анализа // М.: Высшая школа. 1991. Т. 33. 288 с.

117. Cavaliere Ch., Ascenzo G. D., Foglia P., Pastorini E., Samperi R., Lagana A. Determination of type В trichothecenes and macrocyclic lactone mycotoxins in field contaminated maize // Food Chemistry. 2005. Vol. 92. P. 559-568.

118. EC Commission Decision 657/2002 of 12 August 2002. Implementing Council Directive 96/23/EC Concerning the Performance of Analytical Methods and the Interpretation of Results. Official Journal of the European Communities L221/8.

119. Басова Е.Ю. Иммунохимические тест-методы определения токсикантов в продуктах питания и объектах окружающей среды : автореф. дисс. : канд. хим. Наук / Е.Ю. Басова; Саратовский гос. ун-т. им. Н.Г. Чернышевского. Саратов., 2010. - 22 с.

120. Монастырский О. Разработка биопрепаратов для защиты посевов и зерна злаковых культур от поражения токсиногенными грибами и накопления опасных микотоксинов -Федеральный вестник экологического права. № 2. 2004. С. 5-18.

121. Lattanzio V.M.T., Solfrizzo M., Visconti A. Enzymatic hydrolysis of T-2 toxin for the quantitative determination of total T-2 and HT-2 toxins in cereals // Anal Bioanal Chem. 2009. Vol. 395. P. 1325-1334.

122. Тутельян B.A., Кравченко JI.B. Микотоксины (медицинские и биологические аспекты). М.: Медицина. 1985. - 320 с.

123. Буряк В,Н. Микотоксикозы свиней и их профилактика // Зоотехника. 2007. № 9. С. 11-12.

124. Canady R., Raymond D. Coker, et al. Deoxynivalenol. http://www.inchem.org/documents/jecfa/jecmono/v47je05.htm.

125. Visconti A., Lattanzio V.M.T., Pascale M., Haidukowski M. Analysis of T-2 and HT-2 toxins in cereal grains by immunoaffinity clean-up and liquid chromatography with fluorescence detection // Journal of Chromatography A, T.1075. 2005. P. 151-158

126. Rezar V., Frankic T. Dose-dependent effects of T-2 toxin on performance, lipid peroxidation and genotoxicity in broiler chickens // Poult Sci. 2007. Vol. 86. P. 1155.

127. Krska R., Baumgartner S., Josephs R. The state-of-art in the analysis of type-A and -B trichothecene mycotoxins in cereals // Fresenius Journal of Analytical Chemistry. 2001. Vol. 371. P. 285-299.

128. Lattanzio V.M.T., Pascale M., Visconti A. Current analytical methods for trichothecene mycotoxins in cereals // Trends in Analytical Chemistry. Vol. 28. № 6. 2009. P. 758-768.

129. Krska R., Welzig E., Boudra H. Analysis of Fusarium toxins in feed // Animal Feed Sci. Technol. 2007. Vol. 137. P. 241-264.

130. Ler S.G., Lee F.K., Gopalakrishnakone P. Trends in detection of warfare agents: Detection methods for ricin, staphylococcal enterotoxin В and T-2 toxin // J Chromatogr A. 2006. Vol. 1133. № 1-2. P. 1-12.

131. Langseth W., Rundberget T. Instrumental methods for determination of nonmacrocyclic trichothecenes in cereals, foodstuff and cultures//J. Chromatogr. A. 1998. Vol. 815. P. 103121.

132. Buttinger G., Krska R. Determination of B-trichothecenes in wheat by post column derivatisation liquid chromatography with fluorescence detection (PCD-HPLC-FLD) // MycotoxinRes. 2003. Vol. 19. № 2. P. 139-143.

133. Takumi Y., Hiroaki K. A practical method for measuring deoxynivalenol, nivalenol and T-2+HT-2 toxin in foods by an enzyme-linked immunosorbent assay using monoclonal antibodies // Biosci Biotechnol Biochem. 2004. Vol. 68. P. 2076-2085.

134. Schwenecke H., Mayer D. Benzidine and Benzidine Derivatives in Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. 2005. Wiley-VCH. Weinheim.

135. Кирейко A.B., Веселова И.А. Шеховцова Т.Н. Механизм реакций пероксидазного окисления о-дианизидина, 3,3',5,5'-тетраметилбензидина и о-фенилендиимина в присутствии додецилсульфата натрия // Биоорг. химия. 2006. Т. 32. № 1. С. 80-86.

136. Вэб-сайт "Сведения о микотоксинах": http://www.knowmycotoxins.com.

137. Maragos М., Mecormick P. // Monoclonal antibodies for the mycotoxins deoxynivalenol and 3. acetyl, deoxyni food and agricultural immunology. 2000. Vol. 12. P. 181-192.

138. Кудряшова E.B. Функционирование и структура белков (ферментов) в коллоидных системах, на поверхности раздела фаз и в микроэмульсиях : автореф. дисс.: д-ра хим. наук / Е.В. Кудряшова ; Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова. М., 2009. с. 48.

139. Вэб-сайт энциклопедии " Химик": http//www.xumuk.ru/encyklopedia/2/3602.html.

140. Бровко О.С., Паламарчук И.А., Вишнякова А.П. Влияние молекулярной массы лигносульфоната натрия на комплексе образование с полиэтиленполиамином // Химия раст. сырья. 2011. № 1. С. 65-70.

141. Бровко О.С., Паламарчук И.А., Макаревич Н.А., Бойцова Т.А. Полимолекулярные характеристики лигносульфонатов натрия, хитозана и полиэтиленполиамина // Химия раст. сырья. 2009. № 1. С. 29-36.

142. Веселова И.А., Кирейко А.В., Шеховцова Т.Н. Повышение каталитической активности и стабильности пероксидазы хрена за счет включения ее в полиэлектролитный комплекс с хитозаном // Прикладная биохим. и микробиол. 2009. Т. 45. №2. С. 143-148.

143. Hunter K.W., Brimfiled А.А., Miller М., Finkelman F.D., Chu S.F. Preparation and characterization of monoclonal antibodies to the trichothecenes mycotoxin T-2 // Appl Environ Microbiol. 1985. Vol. 49. P. 168-172.

144. De Saeger S., Sibanda L., Paepens S., Lobeau M., Delmulle В., Barna-Vetro I., Van Peterghem C. Novel developments in rapid mycotoxin detection // Mycotoxin Research. 2006. Vol. 22. №2. P. 100-104.

145. Автор благодарит Prof. Sarah De Saeger (Гентский университет, Бельгия), Prof. R. Niessner, Prof. Dietmar Knopp (Мюнхенский технический университет, Германия) за предоставленные иммунореагенты.

146. Глубокая признательность д.х.н., проф. Горячевой И.Ю., к.х.н., доценту Бурмистровой H.A. за плодотворное сотрудничество, ценные советы и помощь, оказанную на разных этапах выполнения работы.