Идентификация возбудителя вирусной геморрагической септицемии рыб методом полимеразной цепной реакции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Колбасов, Никита Владимирович

• Колбасов, Никита Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Колбасов, Никита Владимирович

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность темы.

1.2. Цель и задачи исследования.

1.3. Научная новизна работы.

1.4. Практическая значимость.

1.5. Основные положения выносимые на защиту.

1.6. Личный вклад соискателя.

1.7. Апробация результатов исследований.

1.8. Публикации научных исследований.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Характеристика вирусной геморрагической септицемии рыб.

2.2. Клинические признаки.

2.3. Патологоанатомические изменения.

2.4. Морфология и физические свойства вириона.

2.5. Структура генома.

2.6. Устойчивость вируса.

2.7. Патогенные свойства вируса ВГС рыб.

2.8. Эпизоотическая ситуация по вирусной геморрагической септицемии рыб.

2.9. Профилактика и меры борьбы.

2.10. Методы диагностики вирусной геморрагической септицемии рыб.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Идентификация возбудителя вирусной геморрагической септицемии рыб методом полимеразной цепной реакции»

1.1.Актуальность темы

Вирусная геморрагическая септицемия (ВГС) рыб - заразная болезнь, поражающая пресноводных и морских рыб. Гибель рыб, в зависимости от возраста, может достигать 50 - 70%.

Переносчиками возбудителя являются беспозвоночные. Распространению заболевания способствует ввоз живой икры и мальков из эпизоотически неблагополучных зон. Этиологический агент, вызывающий ВГС рыб, относится к роду МоуиЪаЬскмгиз семейства ШгаЬсктпёае. По классификации Международного эпизоотического бюро ВГС рыб относится к категории особо опасных, декларируемых болезней рыб.

Возбудитель вирусной геморрагической септицемии распространен на территории США, Канады и ряда европейских стран, таких как Дания, Финляндия, Норвегия, Швеция и в странах Балтии. Резервуары инфекции существуют в Балтийском и Северном морях, а так же в Тихом океане. ВГС рыб была широко распространена на Украине, отмечена в Прибалтике и Грузии. Сегодня ВГС рыб в России не установлена, однако угроза заноса инфекции вполне реальна в связи с ввозом рыбы из мест, неблагополучных по данному заболеванию.

Диагноз на ВГС рыб ставят на основании выполнения комплекса исследований, включающих: анализ эпизоотологических данных, клинических признаков заболевания и патологоанатомических изменений, результаты вирусологических исследований по выделению и серологической идентификации вируса с последующей постановкой биопробы.

Высокая контагиозность и смертность рыб при данной вирусной инфекции обуславливают необходимость разработки экспресс методов диагностики ВГС рыб с целью быстрого и своевременного принятия карантинных мер и профилактических мероприятий. Одним из таких методов является полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая уже нашла применение в диагностических исследованиях в ветеринарии.

Избирательная амплификация отдельных участков вирусного генома с помощью полимеразной цепной реакции, дополняя серологические и вирусологические методы, открывает новые возможности для быстрой идентификации возбудителя ВГС рыб.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Колбасов, Никита Владимирович

6. выводы

1. При изучении чувствительных к возбудителю ВГС рыб клеточных систем установлено, что наиболее перспективной для получения вирусного материала является перевиваемая культура клеток ЕРС (эпидермальных новообразований больного оспой карпа);

2. Инфицирование перевиваемых клеточных линий ЯТ02 (гонад радужной форели) и ЕРС (эпидермальных новообразований больного оспой карпа) в дозе 0,1-0,01 ТЦД50/клетка обеспечивает накопление на 2-4 сутки штамма ЧФ 1.2/К возбудителя ВГС рыб в титрах 6,7-7,0 и 8,0-8,5 ^ ТЦД5о/мл соответственно;

3. Установлено, что при пассировании в течение 7 последовательных пассажей в чувствительных клеточных системах патогенные для годовиков радужной форели свойства штамма ЧФ 1.2/К возбудителя ВГС рыб сохраняются;

4. Отработаны оптимальные условия постановки полимеразной цепной реакции с использованием праймеров, комплементарных нуклеотидным последовательностям гена гликопротеина, позволяющие при температуре отжига 54° С выявлять РНК возбудителя ВГС рыб;

5. Разработанная «Тест-система для идентификации РНК возбудителя ВГС рыб методом ПЦР» обеспечивает минимальную чувствительность 100 ТЦДзо/см3;

6. На основании филогенетического анализа участка генома отечественного штамма ЧФ 1.2/К с последовательностями, опубликованными в генбанках, установлено, что он относится к европейскому генотипу при уровне гомологии 96-99%.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны и утверждены директором ГНУ ВНИИВВиМ и академиком-секретарем отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии A.M. Смирновым «Методические рекомендации по применению тест-системы для выявления РНК возбудителя ВГС рыб методом полимеразной цепной реакции»;

2. Разработанная тест-система на основе полимеразной цепной реакции может быть использована для идентификации штаммов и полевых изолятов возбудителя ВГС рыб и рекомендована для включения в схему лабораторных исследований при диагностике болезни;

3. Депонированный отечественный референс-штамм ЧФ 1.2/К в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ (инв. №2601 от 10 февраля 2005 г.), может использоваться для проведения научно-исследовательской работы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Колбасов, Никита Владимирович, 2008 год

1. Адаме, Р. Методы культуры клеток для биохимиков / Р. Адаме. -М.:Мир, 1983,- С.258.

2. Бирман, Б .Я. Современные средства оздоровления прудового карпа в рыбхозах республики Беларусь / Б.Я. Бирман, Т.В. Безнос, Р.Н. Даниленко // Ветеринарная наука производству: материалы Междунар. науч.- практ. конф. - Вып. 38.- Минск, 2005.- С. 94-100.

3. Болезни рыб: обзор эпизоотической ситуации за 2006 год // Ветеринарная жизнь.- 2007.- № 14.- С. 2-3.

4. Бучацкий, Л.П. Вирусные инфекции морских и пресноводных животных / Л. П. Бучацкий .- Киев, 1994.- 130 с.

5. Бауер, О.Н. Вопросы паразитологии и патологии рыб / О.Н. Баер // Тр. Зоол. ин-та АН СССР. М.: Наука, 1987. - Т. 171. - С. 47-67.

6. Витакер, А. Среды для культивирования клеток млекопитающих / А. Витакер // Новые методы культуры животных тканей; под ред. Фридлянского.-М.:Мир, 1976,- С. 18.

7. Грищенко, Л.И. Болезни рыб и основы рыбоводства / Л.А. Грищенко и др. М.:Колос,1999.- 456 с.

8. Дьяконов, Л. П. Культуры клеток животных. Современные аспекты биотехнологии и взаимодействия клеток с инфекционными патогенами / Л.П. Дьяконов // Цитология.- 1994.- Т.36.- С. 503-504.

9. Ю.Дьяконов, Л. П. Животная клетка в культуре / Л.П. Дьяконов, В.И. Ситьков // Москва, 2000.- С.102-140.

10. Здоровье рыб, качество и безопасность рыбной продукции в России и ее соответствие международным требованиям / Н.Л Зуев В. В., Юрков С. Г., Курносов А. Н. Зимин и др. // Ветеринарная жизнь.- 2004.- № 5.-С. 4-5.

11. Зуев, B.B. Коллекция культур клеток / В.В. Зуев, С.Г. Юрков, А Н. Курносов // Вестник Рос. акад. сельск. наук.- 1997.- № 2.- С. 69-70.

12. Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов и др.; под. ред. A.A. Сидорчука.- М.: КолосС, 2007. 671с.

13. Казарникова, A.B. Заболевания осетровых рыб в замкнутой системе водоснабжения/ A.B. Казарникова //Ветеринария.-2007.-№3.-С.25-29

14. Козлов, В.И. Аквакультура / В.И. Козлов, JI.A. Никифоров-Никишин, A.JI. Бородин. М.: КолосС, 2006.-445 с.

15. Ламберт, К. Дж. Среды для выращивания клеток / К. Дж. Ламберт, Дж. Р. Берг // Биотехнология клеток животных; под ред. Р. Е. Спиера.- М., Мир, 1989.- С. 98-125.

16. Литвиненко, В.В. Выявление антител против Rhabdovirus carpio в сыворотке крови рыб при помощи люминесцентной микроскопии /В.В. Литвиненко, Ю.Д. Тимниханов // Рыбное хозяйство. 1989.- Вып.43.-С.62-64.

17. Линпик, В.Я. Состояние и перспективы профилактики основных болезней рыб в прудовых хозяйствах Беларуси / В.Я. Линник, М.П. Голенкова // Ветеринарная наука производству:материалы Междунар. науч.- практ. конф. Вып. 38,- Минск, 2005.- С.322-323.

18. Пичугина, Т. Д. Влияние вирусных инфекций на развитие аквакультуры в России / Т.Д. Пичугина, Е.А. Завьялова // Ветеринарная медицина: Междунар. тематический науч. сб. Вып. 85. - Харьков, 2005,- Т. 2.-С. 906-912.

19. Прудников, B.C. Болезни прудовых рыб монография / B.C. Прудников, A.B. Мясоедов, Б .Я. Бирман.- Минск:Технопринт, 2003.- 96 с.

20. Пичугина, Т.Д. Весенняя виремия карпов / Т.Д. Пичугина и др. // Ветеринария. 2004. - №5. - С.28-30.

21. Рудиков, Н.И. Диагностика весенней вирусной болезни рыб/ Н.И. Рудиков // Новые методы лечения инфекционных болезней рыб: тез. докл. 11 Всес. симпоз. М., 1975. - С.93-95

22. Рудиков, Н.И. Особенности течения вспышек весенней вирусной болезни рыб в зависимости от погодных условий / Н.И. Рудиков, Т.Д. Пичугина // Тез.докл. V Всес. симп. по инфекционным болезням рыб.-М.,1986. С.86-87.

23. Самуйленко, А. Я., Рубан Е. А. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов / А.Я. Самуйленко, Е.А. Рубан. М, 2000.- Т. 1.- С. 199-202.

24. Сергеев, В. А. Репродукция и выращивание вирусов / В.А. Сергеев -М.:Колос, 1976.- С. 15-125.

25. Спиер, Р. Е. Биотехнология клеток животных / P.E. Спиер, Дж.Б. Гриффите. -М., 1989.-34 с.

26. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. М.: Отдел маркетинга АМБ-агро, 1998.- 310 с. (Библиотека консультанта информ.- консульт. службы Минсельхозпрода России).

27. Смирнова, И.Р. Ветеринарно-санитарная и экологическая оценка продукции водоемов комплексного назначения / И.Р. Смирнова и др. // Ветеринария,- 2004.- № 11,- С. 39-44.

28. Щелкунов, И.С. Эпизоотическая ситуация по вирусным болезням культивируемых рыб / И.С. Щелкунов // Ветеринария.- 2006.- № 4.- С. 22-25.

29. Щелкунов, И.С. Rhabdovirus carpió у растительноядных рыб (выделение, идентификация, патогенность) / И.С. Щелкунов, Т.И.

30. Щелкунова // Сборник науч. трудов ВНИИПРХ. 1987. - Т.53. - С. 311.

31. Щелкунов, И.С. Гибридизационная тест-система для экспресс-диагностики весенней виремии карпа / И.С. Щелкунов и др. // Избранные труды ВНИИПРХ. 2002. - Т.2. - С. 471-473.

32. Щелкунов И.С. Разработка тест-систем для идентификации возбудителя весенней виремии карпа на основе методов анализа генома: автореф. дис. . канд. наук / Щелкунов Игорь Степанович. -Покров.-2005.- 26с.

33. Щелкунов, И.С. Карповые гипериммунные антисыворотки для идентификации возбудителя весенней виремии карпа / И.С. Щелкунов, Т.И. Щелкунова//Эспресс-информ. ВНИИПРХ, 1991.-Вып. 1. С. 1-6.

34. Юрков, С. Г, Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ / С.Г. Юрков и др. // Покров, Россельхозакадемия, ВНИИВВиМ, 2000. 78с.

35. Ahne W. Occurrence of VHS in wild white fish (Coregonus sp.) / W.Ahne, I.Thomsen // Journal of Veterinary Medicine. 1985. - P.75.

36. Basurco, B. Distant strains of the fish rhabdovirus VHSV maintain a sixth functional cistron which codes for a nonstructural protein of unknown function / B. Basurco, A. Benmansour // Virology. 1995. - Vol.212, N2.-P.741-745.

37. Basurco, B. Genetic diversity and phylogenetic classification of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) / B. Basurco et al. // Vet Res. -1995. -Vol.26, N5-6. -P.460-463.

38. Basurco, B. The free nucleocapsids of the viral haemorrhagic septicaemia virus contain two antigenically related nucleoproteins / B. Basurco et al. // Arch Virol. 1991 .- Vol.119, N 3-4. - P. 153-163.

39. Bearzotti, M. The glycoprotein of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV): antigenicity and role in virulence / M. Bearzotti et al. // Vet Res.-1995. Vol. 26, N 5-6. - P. 413-422.

40. Benmansour, A. Sequence variation of the glycoprotein gene identifies three distinct lineages within field isolates of viral haemorrhagic septicaemia virus, a fish rhabdovirus / A. Benmansour et al. // J Gen Virol. 1997. -Vol. 78, N 11.-P. 2837-2846.

41. Bernard, J. Cloning and sequencing the messenger RNA of the N gene of viral haemorrhagic septicaemia virus / J. Bernard et al. // J Gen Virol. -1990. Vol.71, N 8. - P. 1669-1674.

42. Bernard, J. Molecular biology of fish viruses: a review / J. Bernard, M. Bremont//Vet Res. 1995. - Vol. 26, N5-6. - P. 341-351.

43. Bernard, J. Nucleocapsid gene sequence of a North American isolate of viral haemorrhagic septicaemia virus, a fish rhabdovirus / J. Bernard , M. Bremont, J. Winton // J. Gen. Virol.-1992 .- Vol. 73, N 4.- P. 1011-1014.

44. Betts, A.M. Nucleotide sequence analysis of the entire coding regions of virulent and avirulent strains of viral haemorrhagic septicaemia virus/ A.M. Betts, D.M. Stone // Virus Genes. 2000. - Vol. 20, N 3. - P.259-262.

45. Bowden, T.J. A study of the susceptibility of Atlantic halibut, Hippoglossus hippoglossus (L.), to viral haemorrhagic septicaemia virus isolated from turbot, Scophthalmus maximus (L.) / T.J. Bowden // J. Fish Dis. 2003. -Vol.26, N4.-P. 207-212.

46. Bruchhof, B. Differential diagnosis of fish pathogenic rhabdoviruses by reverse transcriptase-dependent polymerase chain reaction / B. Bruchhof, O. Marquardt, P.J. Enzmann // J. Virol. Methods. 1995. - Vol.55, N1. -P.l 11119.

47. Brudeseth, B.E. Occurrence of viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) in wild marine fish species in the coastal regions of Norway/ B.E. Brudeseth, O. Evensen // Dis. Aquat.Organ. 2002. - Vol.52, N1. - P. 21-28.

48. Chico, V. Rapid detection and quantitation of viral hemorrhagic septicemia virus in experimentally challenged rainbow trout by real-time RT-PCR / V. Chico, N. Gomez, A. Estepa // J. Virol. Methods. 2006. - Vol.132, N1-2. -P.154-159.

49. Chilmonczyk, S. Pathogenesis of viral haemorrhagic septicaemia virus: cellular aspects / S. Chilmonczyk, I. Voccia, D. Monge // Vet Res. 1995. -Vol.26, N5-6.-P.505-511.

50. Cupit, P.M. Neutralisation and binding of VHS virus by monovalent antibody fragments/ P. M. Cupit, N. Lorenzen, G. Strachan // Virus Res. -2001. Vol. 81, N1-2. - P.47-56.

51. Dixon, P.F. Four years of monitoring for viral haemorrhagic septicaemia virus in marine waters around the United Kingdom / P.F. Dixon et al. // Dis Aquat Organ. 2003. - Vol.54, N3. - P. 175-186.

52. Dopaz, C. P. Isolation of viral hemorrhagic septicemia virus from Greenland halibut Reinhardtius hippoglossoides caught at the Flemish Cap / C.P. Dopaz et al. //Dis. Aquat. Organ. 2002. - Vol.50, N3. - P. 171-179.

53. Dorson, M. Selection of rainbow trout resistant to viral haemorrhagic septicaemia virus and transmission of resistance by gynogenesis / M. Dorson, E. Quillet, M.G. Hollebecq // Vet Res. 1995. - Vol. 26, N 5-6. -P. 361-368.

54. Einer-Jensen, K. Evolution of the fish rhabdovirus viral haemorrhagic septicaemia virus/ K. Einer-Jensen, P. Ahrens, R. Forsberg // J. Gen. Virol.- 2004. Vol.85, N5. - P.l 167-1179.

55. Einer-Jensen, K. Genotyping of the fish rhabdovirus, viral haemorrhagic septicaemia virus, by restriction fragment length polymorphisms / K. Einer-Jensen, J. Winton, N. Lorenzen // Vet. Microbiol. 2005. - Vol.106, N 3-4.- P.167-178.

56. Estepa, A. Detection of trout haemorrhagic septicaemia rhabdovirus by capture with monoclonal antibodies and amplification with PCR / A. Estepa, C. De Blas, F. Ponz // Vet Res. 1995. - Vol. 26, N 5-6. - P. 530-532.

57. Fabregas, J. In vitro inhibition of the replication of haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) and African swine fever virus (ASFV) by extracts from marine microalgae / J. Fabregas et al. // Antiviral Res. 1999. - Vol. 44, N 1. - P. 67-73.

58. Fernandez-Alonso, M. Mapping of linear antibody epitopes of the glycoprotein of VHSV, a salmonid rhabdovirus / M. Fernandez-Alonso et al. // Dis. Aquat. Organ. 1998. - Vol.34, N3. - P. 167-176.

59. Fichtner, D. Characterization of viral hemorrhagic septicemia (VHS) virus isolates in Trout/ D. Fichtner et al. // Berl. Munch. Tierarztl. Wochenschr. 1998. -H.111,N3. - S. 93-99.

60. Fijan, N Fish biology / N. Fijan et al. //Ann Virol(Inst.Pasteur).-1983.-143 E.

61. Gagne, N. Isolation of viral haemorrhagic septicaemia virus from mummichog, stickleback, striped bass and brown trout in eastern Canada / N. Gagne et al. //J. Fish Dis. 2007. - Vol. 30, N 4. - P. 213-23.

62. Gaudin, Y. Mutations in the glycoprotein of viral haemorrhagic septicaemia virus that affect virulence for fish and the pH threshold for membrane fusion /Y. Gaudin , P. de Kinkelin , A. Benmansour // J. Gen. Virol. 1999. -Vol. 80, N5.-P. 1221-1229.

63. Hedrick, R.P. Host and geographic range extensions of the North American 1 strain of viral hemorrhagic septicemia virus / R. P. Hedrick et al. // Dis. Aquat Organ. 2003. - Vol.55, N 3. - P. 211-220.

64. Hershberger, P.K. Epizootiology of viral hemorrhagic septicemia virus in Pacific herring from the spawn-on-kelp fishery in Prince William Sound, Alaska, USA / P.K. Hershberger et al. // Dis. Aquat. Organ. 1999. - Vol. 37, N1. - P.23-31.

65. Hoffmann, B. Fish rhabdoviruses: molecular epidemiology and evolution / Hoffmann B., Beer M., Schutze H. // Curr Top Microbiol Immunol. 2005. -Vol. 292.-P. 81-117.

66. Kim, D.H. Complete nucleotide sequence of the hirame rhabdovirus, a pathogen of marine fish / D.H. Kim et al. // Virus Res. 2005. - Vol. 107, N1. -P. 1-9.

67. King, J.A. Distribution of viral haemorrhagic septicaemia virus in wild fish species of the North Sea, north east Atlantic Ocean and Irish Sea / J.A. King, M. Snow, D.A. Smail // Dis. Aquat Organ. 2001. - Vol. 47, N 2. - P. 8186.

68. Knuesel, R. A survey of viral diseases in farmed and feral salmonids in Switzerland / R. ICnuesel, H. Segner, T. Wahli // J. Fish Dis.-- 2003. -Vol.26, N3.-P. 167-182.

69. Kurath, G. Distribution and variation of NV genes in fish rhabdoviruses / G. ICurath, K.H. Higman, H.V. Bjorklund // J. Gen. 1997. - Vol.78, N 1.-P.113-117.

70. LaPatra, S.E. Protection of rainbow trout against infectious hematopoietic necrosis virus four days after specific or semi-specific DNA vaccination / S.E. LaPatra et al. // Vaccine. 2001. - Vol. 19, N28. - 29. - P/ 4011-4019.

71. Lopez-Vazquez, C. Development of a rapid, sensitive and non-lethal diagnostic assay for the detection of viral haemorrhagic septicaemia virus / C. Lopez-Vazquez et al. // J. Virol. Methods. 2006. - Vol. 133, N2. - P. 167-174.

72. Lorenzen, E. Inter-laboratory comparison of cell lines for susceptibility to three viruses: VHSV, IHNV and IPNV / E. Lorenzen, B. Carstensen, N. J. Olesen // Dis. Aquat Organ. 1999. - Vol. 37, N 2. - P.81-88.

73. Lorenzen, N. Multiplication of VHS virus in insect cells / N. Lorenzen , N.J. Olesen // Vet. Res. 1995. - Vol. 26, N5-6. - P.428-432.

74. Lorenzen, N. Neutralization of Egtved virus pathogenicity to cell cultures and fish by monoclonal antibodies to the viral G protein / N. Lorenzen, N.J. Olesen, P.E. Jorgensen // J. Gen. Virol. 1990. - Vol.71, N. 3. -P.561-567.

75. Lorenzo, G. Fast neutralization/immunoperoxidase assay for viral haemorrhagic septicaemia with anti-nucleoprotein monoclonal antibody / G. Lorenzo, A. Estepa, J.M. Coll // J. Virol. Methods. 1996. - Vol.58, N1-2. -P.l-6.

76. Lorenzo, G.A. Mapping of the G and N regions of viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) inducing lymphoproliferation by pepscan / G. A. Lorenzo, A. Estepa, S. Chilmonczyk // Vet. Res. 1995. - Vol.26, N 5-6. -P.521-525.

77. Marroqui, L. Assessment of the inhibitory effect of ribavirin on the rainbow trout rhabdovirus VHSV by real-time reverse-transcription PCR /L. Marroqui, A. Estepa, L. Perez // Vet. Microbiol. 2007. - Vol.122, N1-2. -P. 52-60.

78. Mas, V. Reversible inhibition of spreading of in vitro infection and imbalance of viral protein accumulation at low pH in viral hemorrhagic septicemia rhabdovirus, a salmonid rhabdovirus / V. Mas et al. // J. Virol. -2004. Vol.78, N4. - P. 1936-44.

79. McAllister, K.W. Salmonid fish viruses / In:Fish Medicine, edited by M.K.Stoslcopf.- Philadelphia:W.B.Saunders Co, 1993.- 380-408p.

80. Micol, V. The olive leaf extract exhibits antiviral activity against viral haemorrhagic septicaemia rhabdovirus (VHSY) / V. Micol et al. // Antiviral Res. 2005. - Vol.66, N2-3. - P.129-136.

81. Mortensen, H.F. Isolation of viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) from wild marine fish species in the Baltic Sea, Kattegat, Skagerrak and the North Sea /H.F. Mortensen et al.// Virus Res.-1999.- Vol.63,N1-2.-P.95-106.

82. Mourton, C. Antigen-capture ELISA for viral haemorrhagic septicaemia virus serotype I / C. Mourton et al. // J. Virol. Methods. 1990. -Vol.29, N3.-P.325-333.

83. Muroga, K. Experimental horizontal transmission of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) in Japanese flounder Paralichthys olivaceus/ K. Muroga // Dis. Aquat Organ. 2004. - Vol.58, N 2-3. - P. 111115.

84. Nishizawa, T. Genetic relatedness among Japanese, American and European isolates of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) based on partial G and P genes / T. Nishizawa et al. // Dis. Aquat Organ. 2002. -Vol.48, N2.-P.143-148.

85. Nishizawa, T. Genotyping and pathogenicity of viral hemorrhagic septicemia virus from free-living turbot (Psetta maxima) in a Turkish coastal area of the Black Sea / T. Nishizawa et al. // Appl. Environ. Microbiol. -2006. Vol.72, N4. - P.2373-2378.

86. Nishizawa ,T. Nucleotide sequence of the 2 matrix protein-genes (Ml and M2) of hirame rhabdovirus (HRV), a fish rhabdovirus/ T. Nishizawa,

87. G. Kurath, J.R. Winton // Vet Res. 1995. - Vol.26, N5-6. - P.408-412.th

88. OIE Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals, 4 ed. Office1.ternational des Epizooties, Paris, 2003.

89. Perez, L. Purification of the glycoprotein G from viral haemorrhagic septicaemia virus, a fish rhabdovirus, by lectin affinity chromatography / L. Perez L, A. Estepa, J.M. Coll // J. Virol. Methods. 1998. - Vol.76, N 1-2. -P.1-8.

90. Quillet, E. In vitro viral haemorrhagic septicaemia virus replication in excised fins of rainbow trout: correlation with resistance to waterborne challenge and genetic variation / E. Quillet et al. // Dis. Aquat Organ. -2001.- Vol.45, N3.-P.171-82.

91. Quillet, E. Wide range of susceptibility to rhabdoviruses in homozygous clones of rainbow trout / E. Quillet // Fish Shellfish Immunol.-2007. -Vol.22, N5. P.510-519.

92. Raja-Halli, M. Viral haemorrhagic septicaemia (VHS) outbreaks in Finnish rainbow trout farms / M. Raja-Halli et al. // Dis Aquat Organ. -2006 -Vol.72, N3.-P. 201-11.

93. Rehulka, J. Haematological analyses in rainbow trout Oncorhynchus mykiss affected by viral haemorrhagic septicaemia (VHS) / J. Rehulka // Dis. Aquat Organ. -2003. -Vol.56, N 3. P. 185-193.

94. Rocha, A. Antibody response to a fragment of the protein G of VHS rhabdovirus in immunised trout / A. Rocha et al. // Vet. Immunol. Immunopathol. 2002. - Vol. 86, N1-2. - P. 89-99.

95. Rocha, A. Characterisation of the syncytia formed by VHS salmonid rhabdovirus G gene transfected cells / A. Rocha et al. // Vet; Immunol Immunopathol. 2004. - Vol.99, N 3-4. - P.143-152.

96. Said, T. An RNA-binding domain in the viral haemorrhagic septicaemia virus nucleoprotein / T. Said et al. // J. Gen. Virol. 1998. -Vol.79, N l.-P. 47-50.

97. Sanz, F. Neutralizing-enhancing monoclonal antibody recognizes the denatured glycoprotein of viral haemorrhagic septicaemia virus / F. Sanz, J.M. Coll // Arch Virol. 1992.-Vol. 127, N 1-4. - P.223-232.

98. Schutze, H. Complete genomic sequence of viral hemorrhagic septicemia virus, a fish rhabdovirus / H. Schutze, E. Mundt, T.C. Mettenleiter // Virus Genes. 1999. - Vol.19, N 1.- P. 59-95.

99. Schutze, H. Identification of the non-virion (NV) protein of fish rhabdoviruses viral haemorrhagic septicaemia virus and infectious haematopoietic necrosis virus / H. Schutze et al. // J. Gen. Virol. 1996. -Vol. 77, N6. - P. 1259-1263.

100. Slcall, H.F. Experimental infection of rainbow trout Oncorhynchus mykiss with viral haemorrhagic septicaemia virus isolates from European marine and farmed fishes / H. F. Slcall et al. // Dis. Aquat Organ. 2004. -Vol.58, N2-3. -P.99-110.

101. Slcall, H.F. Prevalence of viral haemorrhagic septicaemia virus in Danish marine fishes and its occurrence in new host species / H.F. Slcall, N.J. Olesen, S. Mellergaard // Dis. Aquat Organ. 2005. - Vol.66, N2. -P.145-151.

102. Slcall, H.F. Viral haemorrhagic septicaemia virus in marine fish and its implications for fish farming—a review / H.F. Slcall, N.J. Olesen, S. Mellergaard // J. Fish Dis. 2005. - Vol.28, N9. - P. 509-29.

103. Snow, M. Analysis of the nucleoprotein gene identifies distinct lineages of viral haemorrhagic septicaemia virus within the European marine environment / M. Snow M, et al. // Virus Res. 1999. - Vol.63J N 1-2. - P. 35-44.

104. Snow, M. Comparative susceptibility of turbot Scophthalmus maximus to different genotypes of viral haemorrhagic septicaemia virus / M. Snow et al.// Dis. Aquat Organ. 2005. - Vol.67, N 1-2. - P. 31-38.

105. Snow, M. Experimental susceptibility of turbot Scophthalmus maximus to viral haemorrhagic septicaemia virus isolated from cultivated turbot / M. Snow, D. Smail // Dis. Aquat Organ. 1999. - Vol. 38, N3. -P.163-168.

106. Snow, M. Genetic population structure of marine viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) / M. Snow et al. // Dis. Aquat Organ. 2004. -Vol.61, N 1-2. - P. 11-21.

107. Snow, M. Virulence and nucleotide sequence analysis of marine viral haemorrhagic septicaemia virus following in vivo passage in rainbow trout Onchorhynchus mykiss / M. Snow, C.O. Cunningham // Dis. Aquat Organ. -2000.-Vol. 42, N1.-P. 17-26.

108. Soliman, H. Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) for rapid detection of viral hemorrhagic septicaemia virus (VHS) / H. Soliman, M. El-Matbouli // Vet. Microbiol. -2006. Vol.114, N 3-4. - P. 205-213.

109. Thiery, R. Phylogenetic analysis of viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) isolates from France (1971-1999) / R. Thiery et,al. // Dis. Aquat Organ. 2002. - Vol. 52, N1. - P. 29-37.

110. Thiry, M. Molecular cloning of the mRNA coding for the G protein of the viral haemorrhagic septicaemia (VHS) of salmonids / M. Thiry et al. // Vet. Microbiol. 1990. -Vol. 23, N1-4. - P. 221-226.

111. Vautherot, D. Expression of viral hemorrhagic septicemia virus structural proteins in the baculovirus expression system / D. Vautherot et al. // Vet. Res. 1995. - Vol.26, N5-6. - P.548-549.

112. Walker, P.J. et al.: In:van Regenmortel M.H.V., Fauquet C.M., Bishop D.H.L., Carstens E.B., and 7 others (Eds.), The 7th Report of the International Committee for Taxonomy of Viruses. Academic Press, San Diego, CA. 2000.

113. Williams, K. Multiplex reverse transcriptase PCR assay for simultaneous detection of three fish viruses / K. Williams et al. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol. 37, N12. - P.4139-4141.

114. Wolf, K. Fish viruses and fish viral diseases / K. Wolf. Cornell University Press, 1988. - 476 p.