Функционирование ЭФР-рецепторной системы в культивируемых эндометриальных мезенхимных стромальных клетках человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Каменцева Римма Сергеевна

• Каменцева Римма Сергеевна
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Каменцева Римма Сергеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования

Цели и задачи исследования

Положения, выносимые на защиту

Научная новизна полученных результатов

Теоретическая и практическая значимость работы

Личный вклад автора

Апробация работы

Финансовая поддержка работы

Объем и структура диссертации

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

Статьи в журналах из списка ВАК

Тезисы

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Мезенхимные стромальные клетки

1.2. Эндометриальные мезенхимные стромальные клетки

1.2.1. Менструальный цикл

1.2.2. Животные модели для исследования эндометрия

1.2.3. МСК в эндометрии и культуре

1.3. Рецептор ЭФР

1.3.1. Семейство ЕгЬВ и лиганды РЭФР

1.3.2. Функционирование и регуляция РЭФР

1.3.3. Рецептор ЭФР в нормальных и трансформированных клетках

1.3.4. Рецептор ЭФР в эндометрии

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Клеточные культуры

2.2. Реагенты

2.3. Анализ пролиферации

2.4. Децидуализация

2.5. Электрофорез и иммуноблотинг

2.6. Выделение РНК и количественная ПЦР с обратной транскрипцией

2.7. Иммунофлуоресценция и лазерная сканирующая конфокальная микроскопия

2.8. Анализ рециклирования РЭФР

2.9. Прижизненная микроскопия

2.10. Анализ экспрессии поверхностных маркеров

2.11. Иммуноферментный анализ

2.12. Статистический анализ

Глава 3. Результаты

3.1. Определение уровня белка и мРНК РЭФР в различных мезенхимных стро-мальных и трансформированных клеточных линиях

3.2. ЭФР, ТФР-а и АР по-разному влияют на пролиферацию энМСК и HeLa

3.3. ЭФР и ТФР-а подавляют децидуализацию энМСК

3.4. Эндометриальные МСК секретируют амфирегулин

3.5. Интернализация и внутриклеточный транспорт РЭФР в энМСК

3.6. Лиганд-зависимая деградация РЭФР

3.7. Экспрессия поверхностных маркеров МСК может регулироваться ЭФР-рецеп-

торной системой

Глава 4. Обсуждение

4.1. Влияние лигандов РЭФР на физиологические ответы энМСК

4.2. Интернализация и лизосомальная деградация РЭФР в энМСК

4.3. Изменение состояния энМСК

Глава 5. Заключение

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

8-Вг-цАМФ — 8-бромаденозин-3',5'-циклический монофосфат АР — амфирегулин

БСА — бычий сывороточный альбумин

ДСН-ПААГ — додецилсульфат натрия-полиакриламидный гель

кДНК — комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота

КОП — клетки опухолевого происхождения

КТ — комнатная температура

ЛГ — лютеинизирующий гормон

мРНК — матричная рибонуклеиновая кислота

МСК — мезенхимные стромальные клетки

ОТ-кПЦР — количественная полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией

ПКС — полная культуральная среда

РЭФР — рецептор эпидермального фактора роста

ТБС-Т — трис-буфер солевой + 0.5 % Triton X100

ТК — тирозин-киназа

ТФР — трансформирующий фактор роста

ФСБ — фосфатно-солевой буфер

ФСГ — фолликулостимулирующий гормон

ХГЧ — хорионический гормон человека

энМСК — эндометриальные мезенхимные стромальные клетки ЭФР — эпидермальный фактор роста E2 — estradiol (эстрадиол)

FGF — fibroblast growth factor (фактор роста фибробластов) IGFBP1 — insulin-like growth factor binding protein 1 (белок 1, связывающий инсулиноподобный фактор роста)

P4 — progesterone (прогестерон)

PDGF-BB — platelet-derived growth factor (фактор роста тромбоцитов)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Функционирование ЭФР-рецепторной системы в культивируемых эндометриальных мезенхимных стромальных клетках человека»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования

Мезенхимные стромальные клетки (МСК) представляют большой интерес для различных терапевтических применений в области регенеративной медицины. Многочисленные исследования последних лет были посвящены анализу функционирования МСК с основным акцентом на механизмы поддержания и реализации их «стволовости». В результате сформировалась парадигма, в которой ключевая роль в физиологии МСК отводится сигнальным путям, связанным с Wnt, Notch, ТФР-в и FGF [1-3]. Несколько меньше внимания уделялось такой канонической сигнальной системе, как рецептор эпидермального фактора роста (РЭФР) и его лиганды, хотя участие ЭФР-рецепторной системы в эмбриональном развитии тканей и жизнедеятельности плюрипотентных стволовых клеток уже давно не подлежит сомнению [4-7]. Экспрессия этой прототипической рецепторной тирозинки-назы обнаружена также в МСК различного тканевого происхождения, включая эндометрий [8-10].

Основной массив данных позволяет предполагать, что РЭФР, активируемый своими лигандами, в частности, эпидермальным фактором роста (ЭФР), опосредует пролиферацию МСК. В результате ЭФР, наряду с фибронектином и FGF2 являются обязательными компонентами бессывороточных сред, используемых для длительного культивирования пролиферирующих МСК [11].

Однако, исследования роли РЭФР в МСК эндометрия (энМСК) дают весьма неоднозначную картину, поскольку свидетельствуют в пользу его участия в регуляции как пролиферации энМСК, так и тканеспецифической дифференциров-ке (децидуализации), которые необходимы для имплантации эмбриона [8]. Нужно подчеркнуть, что эндометрий — ткань, состоящая из сложно организованных слоев, включающих множество типов клеток, которые претерпевают трансформацию в течение менструального цикла. При этом работа вовлечённых сигнальных систем, в том числе и РЭФР-зависимой, находятся под контролем эстрогена и прогестерона [12, 13]. Молекулярные механизмы функционирования ЭФР-рецептор-

ной системы в эндометрии в целом, и в энМСК, в частности, особенно в аспекте координации с другими сигналами, до конца не изучены. Кроме того, имеющиеся результаты весьма противоречивы, в значительной степени из-за того, что исследователи используют разные модели - биопсийный материал, содержащий разные типы клеток эндометрия, и изолированные культивируемые клетки энМСК. В первом случае трудно определить, какой именно тип клеток продуцирует тот или иной белок, тогда как во втором изолированные энМСК не подвергаются гормональному контролю и существуют вне своей тканевой ниши. Следует подчеркнуть, что основные данные по экспрессии рецептора ЭФР и членов его семейства, а также их лигандов, и по изменению их уровня на разных стадиях цикла, получены преимущественно с использованием биопсийного материала [14-17].

Для корректной интерпретации и объединения данных по ЭФР-рецепторной системе необходимо создать функциональный портрет культивируемых энМСК, позволяющий определить не только динамику и уровень экспрессии РЭФР, но и понять, какие лиганды рецептора синтезируются самими энМСК, а какие являются для них экзогенными, а также насколько профили экспрессии воспроизводятся для разных линий энМСК и МСК другого тканевого происхождения.

Кроме того, РЭФР является в течение нескольких десятилетий одной из основных модельных систем, на которых изучается процесс эндоцитоза, как в аспекте выявления общих механизмов регуляции везикулярного транспорта, так и понимания роли интернализованного рецептора в проведении сигналов, стимулируемых его различными лигандами. Как ни удивительно, нам не удалось найти ни одной работы, в которых бы исследовалась роль эндоцитоза и его последствий в регуляции жизненного цикла МСК вообще, и энМСК в частности.

Следует отметить, что функции РЭФР долгое время изучались на имморта-лизованных клетках, полученных преимущественно из тканей опухолевого происхождения. Подавляющее большинство этих линий экспрессируют, по разным оценкам, от сотен тысяч (HeLa, А549) до 1-3 миллионов (А431) молекул РЭФР на клетку [18, 19], что облегчает обнаружение этого белка как биохимическими, так

и микроскопическими методами. Однако имеются убедительные доказательства того, что высокий уровень экспрессии рецептора часто коррелирует с малигниза-цией и плохим прогнозом для пациента [20-23]. Обычно такие клеточные линии зависят от экзогенных митогенных стимулов в меньшей степени, чем нормальные клетки, по нескольким причинам. Во-первых, в них, даже при отсутствии мутаций в самом РЭФР, гены, связанные с пролиферацией, транскрипцией и репарацией ДНК, зачастую активированы по сравнению с нормальными тканями, как это было показано для линии карциномы шейки матки HeLa [24].

Во-вторых, известно, что высокая плотность РЭФР на поверхности клетки в результате амплификации/оверэкспрессии гена РЭФР стимулирует гомо- и гете-родимеризацию рецепторов. Вследствие этого становится возможной независимая от лиганда активация тирозинкиназы РЭФР [25-27]. В-третьих, многие опухолевые клетки секретируют такие лиганды, как трансформирующий фактор ро-ста-а (ТФР-а), тем самым поддерживая пролиферацию клеток через аутокринную петлю обратной связи [28]. И, наконец, высокие уровни белка РЭФР, а также некоторые мутации в его вне- и внутриклеточных доменах влияют на поведение рецептора после его интернализации в результате связывания с лигандом, изменяя путь лизосомной деградации на путь рециклирования, что позволяет постоянно поддерживать популяцию активированных РЭФР [29, 30].

Парадокс состоит в том, что основные представления об организации ЭФР-зависимых сигнальных каскадов и ЭФР-стимулируемых процессах, таких как эн-досомальный процессинг лиганд-рецепторных комплексов, сформировались на основе данных, полученных на таких трансформированных линиях. Априори предполагается, что регуляция везикулярного транспорта практически универсальна, и данные, полученные на трансформированных клетках, транслируются на все остальные. В связи с этим МСК представляют интерес, как возможная модель «нормальных клеток», экспрессирующих РЭФР, способных длительное время оставаться в пролиферативном состоянии под контролем гормонов и факторов роста, а также подвергаться дифференцировке или старению. Однако, остается

неясным, существуют ли какие-либо различия в регуляции функционирования ЭФР-рецепторной системы в МСК и в трансформированных клетках на уровне физиологического ответа и внутриклеточной судьбы рецептора. В представленной работе проводится сравнительный анализ влияния ЭФР, ТФР-а и амфирегу-лина (АР), которые, как считается, определяют различную внутриклеточную судьбу рецептора, на пролиферацию и стимулированную децидуальную дифференци-ровку энМСК, а также на внутриклеточную судьбу лиганд-рецепторных комплексов в энМСК и клетках линии карциномы человека HeLa. Выбор лигандов производился на основе их способности инициировать различные внутриклеточные пути рецептора - путь лизосомной деградации (ЭФР) и рециклирования (ТФР-а и АР) в клетках типа HeLa.

Цели и задачи исследования

Целью данной работы было выявить особенности функционирования рецептора эпидермального фактора роста в культивируемых энМСК по сравнению с трансформированными клеточными линиями при его активации лигандами ЭФР, ТФР-а и амфирегулином (АР) на уровне физиологического ответа и внутриклеточной судьбы лиганд-рецепторных комплексов.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. сравнить уровни мРНК и белка РЭФР в МСК различного тканевого происхождения, в том числе энМСК, и в нескольких линиях трансформированных клеток при культивировании в присутствии сыворотки;

2. оценить влияние ЭФР, ТФР-а и АР - лигандов с разной спецификой взаимодействия с рецептором - на пролиферацию энМСК и клеток линии HeLa;

3. исследовать влияние этих лигандов РЭФР на тканеспецифическую дифференцировку энМСК;

4. охарактеризовать интернализацию и эндоцитозный путь РЭФР при его стимуляции ЭФР, ТФР-а и АР в энМСК и HeLa;

5. сравнить динамику деградации РЭФР в энМСК и в HeLa при действии ЭФР, ТФР-а и амфирегулина;

6. проанализировать экспрессию некоторых поверхностных маркеров энМСК при действии ЭФР, ТФР-а и АР.

Положения, выносимые на защиту

1. Уровень РЭФР в нескольких линиях МСК различного тканевого происхождения, в том числе энМСК, сравним с таковым в опухолевых линиях клеток, для которых характерна оверэкспрессия рецептора, связываемая со злокачественностью. Поскольку культивируемые МСК сохраняют свойство контролируемого роста, т. е. являются моделью нормальных клеток, оверэксперссия РЭФР не является сама по себе ультимативной причиной трансформации.

2. Эффекты ЭФР, ТФР-а и АР на пролиферацию энМСК и клеток линии HeLa противоположны.

3. ЭФР и ТФР-а способствуют пролиферации энМСК и препятствуют их децидуализации, а АР не оказывает никакого действия. Если в HeLa ЭФР приводит к снижению уровня РЭФР и затем его восстановлению, то в энМСК ЭФР вызывает устойчивое длительное падение количества рецепторного белка, что может создавать условия для последующей дифференцировки.

4. Выявлены различия в организации эндоцитозного пути РЭФР в энМСК по сравнению с HeLa: в энМСК значительная доля эндосом не вступает в канонический ЕЕА1-зависимый цикл, ведущий к лизосомной деградации через поздние эндосомы, а его деградация замедлена, предположительно, на стадии доставки в лизосомы.

5. Наряду с уровнем РЭФР снижается поверхностная экспрессия одного из маркеров энМСК — CD146. Таким образом, можно предположить, что состояние клетки изменяется под действием лигандов РЭФР. Возможно, это один из механизмов, оркеструющий участие сопряженных сигнальных каскадов, регулирующих последовательность фаз пролиферации и дифференцировки.

Научная новизна полученных результатов

Впервые продемонстрировано, что уровень РЭФР в пролиферирующих МСК различного происхождения сопоставим с его уровнем в трансформированных клетках, для которых, как считается, характерна его оверэкспрессия. Также впервые описана динамика интернализации и лизосомальной деградации РЭФР в энМСК. Обнаружено, что культивирование энМСК с ЭФР и ТФР-а приводит к долговременному снижению уровня РЭФР, а также одного из маркеров энМСК CD146, что может указывать на переход клеток в новое состояние. В общем, в работе впервые продемонстрированы различия в регуляции ЭФР-рецепторной системы в трансформированных клетках и в энМСК.

Теоретическая и практическая значимость работы

Изучение особенностей механизмов функционирования ЭФР-рецепторной системы в МСК разного тканевого происхождения существенно для понимания феномена стволовости как таковой и возможности использования МСК в качестве модели нормальных клеток. Наши данные стимулируют расширение исследований на линиях МСК различного тканевого происхождения, для выявления специфических и общих принципов работы протоптипической ЭФР-рецепторной системы в МСК в целом. С практической точки зрения, данные, полученные на энМСК, важны для разработки подходов к лечению дисфункций эндометрия, таких как бесплодие, эндометриоз и др. Кроме того, изолированные линии энМСК могут быть использованы для моделирования побочных эффектов при лечении РЭФР-зависимых опухолей. Действительно, применение ингибиторов тирозинкиназной активности РЭФР является популярным подходом в противораковой терапии, которая неминуемо задевает пролиферирующие МСК, и энМСК в частности. Знания различий в механизмах функционирования ЭФР-рецепторной системы в МСК по сравнению с трансформированными клетками может выявить новые мишени и разработать улучшенные протоколы воздействия на опухоли при минимальном повреждающем влиянии на МСК.

Поскольку показано, что в МСК из других источников уровень РЭФР также высок, перспективно дальнейшее исследование этой сигнальной системы и возможностей её применения в регенеративной медицине. Например, лиганды РЭФР можно рассматривать не просто как ростовой фактор, но как фактор для прекон-диционирования МСК перед дифференцировкой. Стоит отметить, что лиганды РЭФР вызывают интерес также с точки зрения современной биотехнологии -многие лиганды устойчивы в различных биологических средах и могут производиться в больших объемах, что позволяет использовать их при промышленном масштабировании клеточно-терапевтических препаратов.

Личный вклад автора

Все основные результаты представленной работы получены автором лично или при её непосредственном участии. Дизайн экспериментов и полученные результаты обсуждались совместно с научным руководителем Корниловой Е.С. Публикации готовились совместно с соавторами, указанными в перечне публикаций.

Апробация работы

Основные положения диссертации представлены и обсуждены на 10 международных и Всероссийских конференциях: XXIV съезде физиологического общества им. И. П. Павлова (2023), V Национальном конгрессе по регенеративной медицине (2022), 10th Imaging the Cell congress (2019), IX Российском симпозиуме «Белки и пептиды» (2019), Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные проблемы клеточной биологии и клеточных технологий» (2019), 3rd International conference «Smart Bio» (2019), Всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий» (2018), VI Молодёжной конференции по молекулярной и клеточной биологии Института цитологии РАН (2018), Международной медико-биологической научной конференции молодых учёных «Фундамен-

тальная наука и клиническая медицина» (2018), International EMBO conference «Endocytic trafficking and signaling in health and disease» (2017).

Финансовая поддержка работы

Работа выполнена в рамках грантов РФФИ № 18-34-00188, РНФ № 19-1400108, РНФ № 23-14-00335 и государственного задания №2021-0005.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждений, выводов и списка литературы, содержащего 213 ссылок на первоисточники. Работа изложена на 112 страницах, содержит 20 рисунков и 1 таблицу.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

Статьи в журналах из списка ВАК

1. Kamentseva R. S. EGF, TGF-a and Amphiregulin Differently Regulate Endometrium-Derived Mesenchymal Stromal/Stem Cells / Kamentseva R. S., Kharchenko M. V., Gabdrahmanova G. V., Kotov M. A., Kosheverova V. V., Ko-rnilova E. S. // International Journal of Molecular Sciences. - 2023. - Т. 24. - № 17. -С. 13408. doi:10.3390/ijms241713408

2. Kamentseva R. Functional cycle of EEA1-positive early endosome: Direct evidence for pre-existing compartment of degradative pathway / Kamentseva R., Kosheverova V., Kharchenko M., Zlobina M., Salova A., Belyaeva T., Nikolsky N., Kornilova E. // PLoS ONE. - 2020. - Т. 15. - № 5. - С. e0232532. doi:10.1371/jour-nal.pone.0232532

3. Kamentseva R. Epidermal Growth Factor Causes the Decrease of CD146 Level Not Related to its Internalization in Human Endometrial Mesenchymal Stromal Cells / Kamentseva R., Istomina M., Kharchenko M., Kornilova E. // Cell and Tissue Biology. - 2021. - Т. 15 - № 1. - С. 19-23. doi:10.1134/S1990519X21010053 (оригинал: Каменцева, Р. С. Эпидермальный фактор роста в мезенхимных стромальных

клетках эндометрия человека вызывает уменьшение количества CD146, не влияя

12

на его интернализацию / Каменцева, Р. С., Истомина, М. В., Харченко, М. В., Корнилова, Е. С. // Цитология. - 2020. - Т. 62. - № 7. - С. 487-492. doi:10.31857/ S0041377120070020)

Тезисы

1. Каменцева Р. С. ЭФР-рецепторная сигнальная система в мезенхим-ных стромальных клетках человека. / Каменцева Р. С., Кошеверова В. В., Харченко М. В., Корнилова Е. С. // Сборник тезисов XXIV съезда физиологического общества им. И. П. Павлова (Санкт-Петербург, 11-15 сентября 2023 г.). - 2023. -С. 108

2. Корнилова Е. С. Роль рецептора эпидермального роста и его лигандов в регуляции функционирования эндометриальных стромальных клеток человека / Корнилова Е. С., Харченко М. В., Каменцева Р. С. // Гены & Клетки. - 2022. -Т. XVII. - № 3 (Тезисы V Национального конгресса по регенеративной медицине, Москва, 23-25 ноября 2022 г.). - С. 120

3. Каменцева Р. С. Динамика деградации рецептора ЭФР в мезенхим-ных стромальных клетках человека / Каменцева Р. С., Харченко М. В., Габдрахма-нова Г. В., Котов М. А., Корнилова Е. С. // Гены & Клетки. - 2022. - Т. XVII. -№ 3 (Тезисы V Национального конгресса по регенеративной медицине, Москва, 23-25 ноября 2022 г.). - С. 102

4. Харченко М. В. Влияние лигандов рецептора ЭФР на пролиферацию и дифференцировку эндометриальных мезенхимных стромальных клеток человека / Харченко М. В., Каменцева Р. С., Корнилова Е. С. // Гены & Клетки. - 2022. -Т. XVII. - № 3 (Тезисы V Национального конгресса по регенеративной медицине, Москва, 23-25 ноября 2022 г.). - С. 246

5. Kamentseva R. The object-based colocalization for analysis of CD146 and EGFR subcellular localization in endometrium-derived mesenchymal stromal cells / Kamentseva R., Kosheverova V., Istomina M., Kharchenko M., Kornilova E. // Abstract book of 10th Imaging the Cell congress (Lyon, France, 4-6 November). - 2019. - С. 46

6. Каменцева Р.С. Сигнализации и эндоцитоз рецептора эпидермально-го фактора роста в мезенхимных стромальных клетках эндометрия человека / Каменцева Р. С., Кошеверова В. В., Истомина М. В., Семёнов О. М., Шатрова А. Н., Харченко М. В., Корнилова Е. С. // Acta Naturae. - 2019. - Спецвыпуск (II объединенный научный форум. VI съезд физиологов СНГ. VI съезд биохимиков России. IX Российский симпозиум «Белки и пептиды» (Сочи - Дагомыс, 1-6 октября). Научные труды.) - Т. 1. - С. 108

7. Истомина М.В. Оценка тотального количества рецептора эпидермаль-ного фактора роста и CD146 в различных линиях опухолевых и мезенхимных стромальных клеток / Истомина М. В., Каменцева Р. С., Кошеверова В. В., Харченко М. В., Корнилова Е. С. // Гены & Клетки. - 2019. - Т. XIV. - № 3 (Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные проблемы клеточной биологии и клеточных технологий» (Санкт-Петербург, 8-11 октября)). - С. 80-81

8. Каменцева Р. С. Снижение количества CD146 на поверхности эндо-метриальных МСК под действием ЭФР не связано с его депонированием в эндо-сомальном компартменте / Каменцева Р. С., Истомина М. В., Кошеверова В. В., Харченко М. В., Корнилова Е. С. // Гены & Клетки. - 2019. - Т. XIV. - № 3 (Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные проблемы клеточной биологии и клеточных технологий» (Санкт-Петербург, 8-11 октября)). - С. 81

9. Kamentseva R. Concentration Dependence of the Effect of EGFR Ligands on Human Endometrial Mesenchymal Stromal Cells / Kamentseva R., Kosheverova V., Istomina M., Kharchenko M., Semyonov O., Kornilova E. // Abstract book of 3rd International conference «Smart Bio» (Kaunas, Lithuania, 02-04 May). - 2019. -С. 106

10. Kamentseva R. S. The dynamics of epidermal growth factor receptor signalling and endocytosis in the endometrial mesenchymal stromal cells under TGF-a treatment / Kamentseva R. S., Kosheverova V. V., Istomina M. V., Kharchenko M. V.,

Semyonov O. M., Kornilova E. S. // Сборник материалов Всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий» (Санкт-Петербург, 15-17 ноября). - 2018. - С. 139

11. Kosheverova V. V. EGF and TGF-a decrease CD146+ population of human mesenchymal stromal cells / Kosheverova V. V., Kamentseva R. S., Kharchenko M. V., Istomina M. V., Semyonov O. M., Shatrova A. N., Domnina A. P., Kornilova E. S. // Сборник материалов Всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий» (Санкт-Петербург, 15-17 ноября). - 2018. - С. 144

12. Istomina M. V. The analysis of endocytosis of EGF-receptor complexes and EGF-dependent signaling in human endometrial mesenchymal stromal cells / Istomina M. V., Kamentseva R. S., Kosheverova V. V., Kharchenko M. V., Semyonov O. M., Kornilova E. S. // Сборник материалов Всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий» (Санкт-Петербург, 15-17 ноября). - 2018. - С. 138

13. Каменцева Р. С. Доля CD146+ клеток в популяции эндометриальных мезенхимных стромальных клеток снижается под действием ЭФР / Каменцева Р. С., Кошеверова В. В., Харченко М. В., Истомина М. В., Семенов О. М., Шатрова А. Н., Люблинская О. Г., Домнина А. П., Корнилова Е. С. // Тезисы VI Молодёжной конференции по молекулярной и клеточной биологии Института цитологии РАН (Санкт-Петербург, 25-27 апреля). - 2018. - С. 46-47

14. Кошеверова В. В. Характеристика эндоцитоза рецептора ЭФР и ЭФР-зависимых сигнальных путей в эндометриальных мезенхимных стромальных клетках человека / Кошеверова В. В., Каменцева Р. С., Харченко М. В., Сало-ва А. В., Беляева Т. Н., Семёнов О. М., Истомина М. В., Баранова Д. Н., Корнилова Е. С. // Тезисы VI Молодёжной конференции по молекулярной и клеточной биологии Института цитологии РАН (Санкт-Петербург, 25-27 апреля). - 2018. -С. 60-62

15. Семёнов О. М. Использование эндометриальных мезенхимных стро-мальных клеток человека в качестве модели для исследования эндоцитоза рецептора эпидермального фактора роста / Семёнов О. М., Баранова Д. Н., Истомина М. В., Каменцева Р. С., Кошеверова В. В. // Тезисы Международной медико-биологической научной конференции молодых учёных «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 14 апреля). - 2018. - С. 384-385

16. Kharchenko M. EEA1 and APPL1 interactions with endosomes after stimulation of EGF receptor endocytosis depend on cell type / Kharchenko M., Baranova D., Salova A., Kamentseva R., Kosheverova V., Belyaeva T., Kornilova E. // Abstracts of International EMBO conference «Endocytic trafficking and signaling in health and disease» (Serock, Poland, 10-15 September). - 2017. - С. 181

Глава 1. Обзор литературы 1.1. Мезенхимные стромальные клетки

Термин «стволовая клетка» (нем. «Stammzelle») встречается в литературе ещё в работах Эрнста Геккеля . Однако, в то время у него было другое значение: этим термином Геккель определял одноклеточный организм, от которого произошли все многоклеточные, а затем, на основе идеи сходства филогенетического и эмбрионального развития, и оплодотворенную яйцеклетку [31]. Кроме того, в некоторых исследованиях в области биологии развития стволовыми клетками называли клетки зародышевой линии - уникальную группу клеток, которая обособляется ещё в раннем эмбриогенезе и предназначена для сохранения генетического материала до момента образования гамет.

Открытие стволовых клеток в современном понимании приписывают Александру Александровичу Максимову [32], который предложил модель гематопоэза из единой гемопоэтической стволовой клетки (ГСК), хотя в подобном смысле термин упоминался и в более ранних работах [33].

ГСК стали прототипом, на основании которого сложились современные представления о роли стволовых клеток в физиологическом обновлении тканей организма. Стволовые клетки определяют, как клетки, способные пролифериро-вать долгое время, поддерживая исходный фенотип (самообновление), а также в результате ассиметричного деления давать потомков, приобретающих специализированный фенотип (дифференцировка) [34].

Выделяют несколько типов СК согласно их дифференцировочному потенциалу [35]:

1. Тотипотентные клетки могут давать начало всем клеткам эмбриона и внезародышевых тканей. Тотипотентными являются зигота и бластомеры до определенной стадии развития (у человека до 16-клеточной стадии).

2. Плюрипотентные клетки могут дифференцироваться во все клетки зародыша, но не внезародышевых тканей. К ним относятся клетки внутренней массы бластоцисты, которые при культивировании in vitro называют эмбриональны-

ми СК, а также индуцированные плюрипотентные СК, которые получают путёт дедифференцировки соматических клеток.

3. Мультипотентные клетки более дифференцированы — они способны давать начало многим типам клеток, как правило в пределах тканей конкретного зародышевого листка.

4. Олигопотентные клетки - более специализированные потомки мульти-потентных клеток, которые способны дифференцироваться в несколько типов клеток. Например, мультипотентные ГСК дают начало олигопотентным клеткам-предшественникам миелоидного и лимфоидного рядов.

5. Унипотентные клетки-предшественники еще способны пролифериро-вать, но их дифференцировочный потенциал ограничен одним типом клеток.

В 1970-х предположили, что в костном мозге, кроме ГСК, дающих начало клеткам крови, есть еще отдельные клетки-предшественники, образующие строму костного мозга [36]. В 1976 г. Александр Яковлевич Фриденштейн выделил предшественники фибробластов из костного мозга, селезёнки и тимуса [37]. Впоследствии клетки подобного типа назовут мезенхимными стромальными клетками, а затем и мезенхимными стволовыми клетками (в обоих случаях — МСК).

Международное Сообщество Клеточной и Генной Терапии (International Society for Cell & Gene Therapy (ISCT)) определяет МСК как клетки фибробласто-подобной морфологии, обладающие адгезией к пластику, способные дифференцироваться в адипогенном, остеогенном и хондрогенном направлениях in vitro, а также обладающие характерным набором поверхностных маркеров [38]. Однако, стромальные фибробласты также подходят под эти критерии, хотя имеют низкую клоногенность, в то время, как для классических стволовых клеток характерна высокая клоногенность, отражающая их пролиферативный потенциал [39]. Поэтому в недавнем заявлении Международное Сообщество Клеточной и Генной Терапии отметило, что в большинстве случаев по отношению к МСК правильнее использовать термин «стромальные», так как выделяемые клетки представляют собой гетерогенную популяцию, присутствие в которой «стволовых» клеток необходимо

скрупулёзно доказывать [40]. При этом, для использования в клинической практике «стромальные» клетки тоже подходят, вследствие того, что, по-видимому, основной терапевтический эффект МСК оказывают за счёт паракринного и имму-номодулирующего действия.

МСК являются наиболее доступными для исследования и клинического применения стволовыми клетками взрослого человека. Источником МСК могут служить многие ткани и органы, например, красный костный мозг [41], пульпа зуба [42], жировая ткань [43], мышцы [44], эндометрий [45] и др. Хотя МСК из разных источников характеризуют по одинаковым критериям, тканевое происхождение клеток не может не накладывать на них отпечаток. Например эндометри-альные МСК (энМСК) сохраняют способность дифференцироваться в тканеспе-цифическом децидуальном направлении [46]. А МСК, полученные из скелетных мышц или кожи, имеют меньшую склонность к дифференцировке в адипогенном направлении [47].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Каменцева Римма Сергеевна, 2024 год

Е - Е

щ i -

Рисунок 3.12. Поверхностная экспрессия CD146 в энМСК снижается при культивировании с лигандами РЭФР. К клеткам добавляли ЭФР (10 нМ), ТФР-а (20 нМ) или АР (20 нМ) в полной культуральной среде. Для подавления активности тирозинкиназы РЭФР вместе с лигандами добавляли ингибитор AG-1478 (1 мкМ, в). Клетки культивировали в средах, содержащих лиганды, в течение 5 дней, а затем фенотипировали с использованием РЕ-конъюгированных антител против CD105 или CD140b (а), а также FITC-конъюгированных антител против CD146 (а, б, в). Для того, чтобы оценить вклад влияния плотности клеток, клетки сеяли с разной начальной плотностью. Начальная и конечная плотность клеток указана в таблице (б). На графике представлена средняя интенсивность CD146-FITC ± ст. ошибки. Скобками обозначены различия с значениями р < 0.05.

3-мерному культивированию [195] и т. д. Поскольку ЭФР приводит к долговременному изменению состояния энМСК, которое определяется снижением уровня РЭФР, есть вероятность, что эти изменения могут затрагивать и другие поверхностные маркеры, особенно те, уровни которых снижаются при культивировании.

Рисунок 3.13. Внутриклеточная локализация CD146 при эндоцитозе РЭФР. (а) эндоцитоз в энМСК стимулировали добавлением

ЭФР (10 нМ), затем клетки фиксировали через 60 мин и метили антителами против CD146 (зеленый) и РЭФР (красный). Представлены проекции максимальной яркости типичных клеток (масштабная линейка 10 мкм). Представлены результаты оценки количества везикул (б), а также доли РЭФР-положительных везикул, колокализующихся с CD146-положительными везикулами (в).

С помощью проточной цитометрии были проанализированы уровни поверхностной экспрессии трёх маркеров, характерных для энМСК: CD105, CD140b и CD146. Оказалось, что уровни CD105 и CD140b, не изменяются при культивировании с ЭФР в течение 5 сут, однако снижается уровень CD146 (рис. 3.12 а). Поскольку CD146 является молекулой адгезии, на его уровень может влиять плотность клеток, которая различается в контроле и под действием ЭФР, поскольку он усиливает пролиферацию энМСК. Для того, чтобы достигнуть большей плотности в контроле, клетки сеяли с большей исходной плотностью (рис. 3.12 б). В этом случае действительно наблюдали снижение уровня CD146, тем не менее, различия с клетками, обработанными ЭФР, были достоверно больше.

Самым интересным оказалось то, что не только ЭФР и ТФР-а приводят к снижению уровня CD146 на мембране, но и АР, который не стимулирует ни пролиферацию энМСК, ни интернализацию РЭФР (рис. 3.12 в). При этом подавление

а ПКС ПКС+ЭФР

& 0 5000 10000 15000 20000 0 10000 20000 30000 40000 ° 200 400 600

Средняя интенсивно сть флуоре сценции клетки, у. е. Средняя интенсивно сть флуоре сценции клетки, у. е. Средняя интенсивно сть флуоре сценции

везикул в клетке, у.е.

Рисунок 3.14. Интенсивность флуоресцентного мечения CD146 и РЭФР снижается в течение 5 сут культивирования в среде, содержащей ЭФР. ЭФР (10 нМ) добавляли к клеткам в полной культуральной среде. Клетки культивировали в среде, содержащей лиганды, в течение 5 дней. Затем клетки фиксировали, метили антителами против CD146 (зеленый) и РЭФР (красный) и окрашивали Hoechst33342 (синий). (а) Представлены проекции максимальной яркости типичных полей зрения (масштабная линейка — 50 мкм). На графиках показана плотность распределения средней интенсивности флуоресцентного мечения всей клетки (б) или CD146-положительных везикул (в).

тирозинкиназной активности РЭФР нивелирует влияние его лигандов на уровень поверхностного CD146, что говорит о вовлечённости РЭФР-стимулируемых сигнальных каскадов в регуляцию его экспрессии.

Мы предположили, что этот эффект может опосредоваться РЭФР-зависи-мой стимуляцией эндоцитоза СD146. Чтобы проверить, приводит ли инкубация с ЭФР к интернализации CD146, была исследована его внутриклеточная локализация. Показано, что в контрольных энМСК CD146 локализуется как на плазматической мембране, так и во внутриклеточных везикулах (рис. 3.13 а). Оказалось, что если под действием ЭФР его рецептор в энМСК подвергается быстрой интернали-зации и за 15 мин образуются более 200 эндосом на клетку, но количество CD146-положительных везикул за этот период не увеличивается (рис. 3.13 б). При этом всего лишь около 25% РЭФР-положительных везикул колокализуются с CD146 (рис. 3.13 б), что говорит о возможности взаимодействия эндосом и везикул, содержащих CD146, но снижение поверхностной экспрессии CD146 не связано с увеличением его интернализации под действием ЭФР. Однако значимое снижение уровня CD146 на поверхности энМСК происходит в течение 5 сут культивирования с ЭФР. С помощью иммунофлуоресцентного анализа мы обнаружили, что снижается общее количество CD146 во всей клетке, как на плазматической мембране, так и на мембранах везикул (рис. 3.14). Кроме того, снижается и общая интенсивность флуоресценции РЭФР. Таким образом, снижение количества CD146 при культивировании в среде, содержащей ЭФР, не связано со стимуляцией одновременной интернализацией CD146. Механизм, приводящий к снижению уровня CD146 в клетках под действием ЭФР, требует дальнейшего изучения.

Глава 4. Обсуждение

В работе была охарактеризована роль рецептора эпидермального фактора роста (РЭФР) в культивируемых мезенхимных стромальных клетках эндометрия (энМСК), и сравнить его гомеостаз в этих клетках с имеющимися каноническими данными, полученными на модельных трансформированных клеточных линиях, таких как HeLa. Исторически трансформированные клеточные линии с высоким уровнем рецепторного белка, такие как А431 и HeLa, были первыми модельными объектами, позволявшими анализировать поведение РЭФР на уровне оптической микроскопии и определять его биохимически. Проводившиеся методом Скэтчард-анализа оценки количества рецепторов на поверхности клеток дали наиболее высокие результаты для клеток линии А431 - до 3 миллионов молекул рецепторного белка. Поскольку эти данные неоднократно подтверждались [147, 148, 196], можно, ориентиуясь на них, оценить количество связывающих лиганд сайтов на клетках HeLa на уровне 100-300 тыс. на клетку, тогда как количество рецепторов в нетрансформированных клетках обычно менее 100 тыс., а в нормальных дифференцированных фибробластах РЭФР не детектируется, что не исключает его экспрессии на уровне нескольких сотен молекул [148, 149]. Хотя причины малигнизации могут быть весьма разнообразны, к концу 90-х годов сложилось представление о корреляции между оверэкспрессией РЭФР (что особенно характерно для карцином) и злокачественной трансформацией. Эксперименты на таких клетках привели к формированию основных представлений как об РЭФР-зависимых сигнальных путях, так и о регуляции эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов, распространившиеся на все типы клеток, экспрессирующих рецептор. Однако не исключено, что и сигнализация, и рецептор-опосредованный эндо-цитоз могут иметь определенные отличия в нормальных клетках с контролируемым ростом, и понимание того, насколько такие различия зависят от типа клеток, весьма существенно как с фундаментальной, так и практической точки зрения.

4.1. Влияние лигандов РЭФР на физиологические ответы энМСК

Как известно, при культивировании in vitro энМСК обладают высокой про-лиферативной активностью, а также способностью дифференцироваться не только в трёх направлениях, характерных для МСК (адипогенном, остеогенном и хон-дрогенном), но и в тканеспецифическом децидуальном направлении. Таким образом, хотя они и изолированы как от влияния своей эндометриальной ниши, так и от циклической гормональной регуляции организма, культивируемые клетки сохраняют свои тканеспецифические особенности.

Ранее было показано, что ЭФР может модулировать пролиферацию и диф-ференцировку МСК [160, 171], а также что РЭФР экспрессируется в энМСК [8]. Однако мы не нашли источноков, в которых оценивалось бы количество рецепторов ЭФР на клетку. В данной диссертации впервые, насколько можно судить, продемонстрировано, что РЭФР экспрессируется в нескольких линиях МСК различного происхождения в большом количестве, сравнимом с опухолевыми клеточными линиями, которые, как считается, оверэкспрессируют РЭФР (рис. 3.1).

Широко признано, что малигнизация клеток может быть связана с амплификацией гена, кодирующего РЭФР, а также с накоплением мутаций в этом гене, которые приводят к нарушению регуляции передачи сигнала, опосредованной РЭФР, а также механизмов обратной связи, в частности, деградации рецептора в лизосомах (этот феномен известен как даун-регуляция РЭФР). Кроме того, эти изменения часто сопровождаются увеличением секреции некоторых лигандов РЭФР за счет аутокринных петель обратной связи, в результате чего опухолевые клетки теряют чувствительность к экзогенным факторам роста [21, 25-27]. Наиболее часто синтезируется опухолевыми клетками ТФР-а, он также считается более сильным митогеном по сравнению с ЭФР, о секреции которого клетками HeLa также сообщалось [197]. Действительно, в нашей работе показано, что и ЭФР, и ТФР-а в полной среде с добавлением сыворотки не оказывают никакого дополнительного влияния на скорость пролиферации HeLa. Однако в отличие от клеток HeLa, для энМСК человека даже в полной среде с сывороткой эти два лиганда являются ми-

тогенами (рис. 3.2). Третий исследуемый лиганд, амфирегулин (АР), напротив, продемонстрировал про-пролиферативную активность в HeLa, но не в энМСК, что согласуется с отсутствием его секреции в HeLa и активной секреции растворимого АР всеми протестированными линиями энМСК, но не клетками HeLa (табл. 3.1). Таким образом, вероятно, что энМСК просто не чувствуют экзогенный АР, поскольку эндогенный фактор уже связан с большинством рецепторов на поверхности клетки. Это предположение не противоречит влиянию на пролиферацию энМСК экзогенных ЭФР и ТФР-а из-за гораздо более высокого сродства к рецептору последних факторов по сравнению с АР [119].

Другой важный аспект физиологии МСК, который находится в балансе с пролиферацией — дифференцировка. Как отмечалось выше, энМСК сохраняют в культуре свои тканеспецифические особенности, такие как способность к дециду-ализации. И это наиболее интересный вариант дифференцировки энМСК, поскольку в эндометрии под контролем эндокринной регуляции циклически нарастает, готовится к имплантации эмбриона и деградирует в отсутствие бластоцисты довольно большой объём ткани. Участие РЭФР и его лигандов в циклической де-цидуализации и имплантации было показано ранее, однако стадия, на которой включается рецептор, остается дискуссионной [8, 198, 199]. В данной работе показано, что добавление к энМСК ЭФР и ТФР-а, но не АР, подавляет стимулированную децидуализацию, и этот эффект опосредуется активированным рецептором, поскольку ингибирование тирозинкиназы РЭФР многократно увеличивает количество секретируемого IGFBP1, маркера дифференцировки. Эти данные согласуются с некоторыми публикациями [171, 200], но противоречат ряду других исследований [8, 198], в которых утверждается, что РЭФР необходим именно для децидуализации, а не пролиферации эндометрия. Мы предполагаем, что такое расхождение может быть связано с используемыми моделями - если первые две работы были выполнены на изолировнных линиях энМСК, то две другие - на биопсийном материале эндометрия. Очевидно, что если нет волны пролиферации энМСК, то и процесс децидуализации также сильно подавляется, а в случае

биопсийного материала разделить эти два процесса достаточно сложно. Кроме того, может играть роль и то, в какой фазе цикла изолированы энМСК: если выделенные из менструальной крови клетки скорее соответствуют ранней пролифера-тивной фазе, то энМСК, выделенные из биопсии эндометрия могут различаются в зависимости от времени биопсии. Например, ранее было показано, что энМСК, выделенные из менструальной крови или с помощью биописии, различаются экспрессией некоторых маркеров, таких как OCT-4 [11]. Однако данные об экспрессии РЭФР в ткани эндометрия в ходе цикла также расходятся: в одних работах самая высокая экспрессия мРНК РЭФР обнаружена на ранней пролиферативной фазе [14], тогда как в других утверждается, что уровни мРНК РЭФР значительно выше в секреторной фазе [16, 164], что, однако, может коррелировать с уровнем белка не напрямую. Но важно подчеркнуть, что многие исследования проводились на биоптатах эндометрия, которые, очевидно, представляют собой более физиологические и сложные системы, чем клетки в культуре, особенно в аспекте того, какие именно компоненты ткани, на каком уровне и в какой стадии экспрессируют как рецептор, так и его лиганды, существенно различающиеся по вызываемым ими эффектам. Так, с помощью иммуногистохимического анализа белок РЭФР был обнаружен в эпителии эндометрия [14-16] и строме эндометрия [15], в то время как мРНК в большинстве работ выделяется из цельной ткани, содержащей разные клеточные типы. Присутстве РЭФР в стромальных клетках может отражать его локализацию как в энМСК, так и в фибробластах стромы. Секреция ЭФР, ТФР-а и АР, а также гепарин-связывающего ЭФР-подобного фактора роста (ГС-ЭФР) и бе-тацеллюлина также были обнаружены в эндометрии [14, 16]. Более того, показано, что уровни РЭФР и его лигандов меняются в течение менструального цикла [14, 15] под контролем эстрогена/прогестерона. При этом важно отметить, что лиганды могут секретироваться разными типами клеток, образующих эндометрий, и многие эффекты могут быть опосредованы пара-, юкста- и эндокринными механизмами. Перспективными направлениями для дешифровки этой запутанной системы являются имитация менструального цикла in vitro путём манипуляций с

уровнями гормонов в среде [201], а также секвенирование одиночных клеток, позволяющее идентифицировать разные клеточные популяции в ткани и сравнивать экспрессию целевых молекул в них [60].

В настоящей работе роль РЭФР и его лигандов была исследована в редуцированной системе энМСК в культуре. Однако в будущем и данные, полученные на таких простых системах, могут внести свой вклад в понимание всего процесса. В нашей модели активность РЭФР стимулировала пролиферацию, но подавляла децидуализацию, что соответствует идее о том, что эти два процесса в стволовых клетках до определенной степени исключают друг друга. Тем не менее, хотя считается, что на стадии самообновления СК делятся редко, перед дифференциров-кой их потомки - более специализированные прогениторные клетки, - всё-таки довольно интенсивно пролиферируют для наращивания массы ткани.

4.2. Интернализация и лизосомальная деградация РЭФР в энМСК

Одним из ключевых моментов настоящей работы является демонстрация того, что инкубация энМСК с ЭФР и ТФР-а, но не АР, приводит к медленной деградации РЭФР ( 4-8 ч) и его стабилизации на низком уровне в течение как минимум 5 сут, в то время как в HeLa эти факторы стимулируют быструю деградацию (2 ч) и восстановление исходного уровня за 24 ч. При этом в энМСК обнаружены существенные различия во внутриклеточном транспорте РЭФР, связанного с разными лигандами, которые не укладываются в современную парадигму, в основе которой лежат многочисленные данные, полученные на трансформированных клеточных линиях, в частности, на линии HeLa. В соответствии с этими взглядами, все лиганды индуцируют интернализацию РЭФР, но из-за различной чувствительности связи между лигандами и рецептором к внутриэндосомному уровню рН ЭФР не диссоциирует с рецептором до достижения рН меньше 5.0 и в результате и рецептор, и лиганд направляются в лизосомы и деградируют там, тогда как комплекс рецептора с ТФР-а или АР разрушается при рН около 6.0, в в результате чего деактивированный рецептор рециклирует РЭФР из ранних эндосом обратно на плазматическую мембрану, где он способен повторно связываться с новым ли-

гандом [139]. Именно с этом свойством связывали больший митогенный потенциал ТФР-а по сравнению с ЭФР, поскольку сигналы в случае повторных циклов рециклирования длятся гораздо дольше. Это означает, что в рамках традиционных представлений только ЭФР должен активно стимулировать деградацию РЭФР.

В самом деле, HeLa демонстрируют типичное поведение эндосом, содержащих комплексы ЭФР-РЭФР, которые благодаря эффективному слиянию, с ранними ЕЕА1-позитивными эндосомами со временем увеличивались в размерах и концентрировались в околоядерной области клеток, где локализуются лизосомы, в результате взаимодействия с которыми происходит быстрое снижение общего белка РЭФР в течение 2 часов. В то же время под действием ТФР-а образуются многочисленные эндосомы, но через 60 мин ТФР-а-стимулированный РЭФР обнаруживается преимущественно в слабо-окрашенных рециклирующих структурах и на плазматической мембране, что указывает на эффективное рециклирование. Напротив, в энМСК оба лиганда стимулировали образование эндосом, которые сохранялись в цитоплазме не менее 2 ч, и в конечном итоге, вызывали снижение уровня РЭФР через 6-8 ч, подтверждая тем самым деградацию белка. При этом энМСК обладают достаточно развитым лизосомальным аппаратом, способным эффективно деградировать белки, а зависимость деградации РЭФР от закисления эндосом указывает на участие лизосом в деградации РЭФР и в этих клетках. Мы предполагаем, что в энМСК замедлена доставка РЭФР в лизосомы, возможно из-за проблем с созреванием эндосом. Действительно, если в HeLa подавляющее большинство интернализованных рецепторов колокализовалось на ранних стадиях с ЕЕА1-положительными ранними эндосомами, то в энМСК очевидно существуют две популяции - минорная проходит через классический ЕЕА1-опосредуе-мый цикл слияний и, по-видимому, отправляется на деградацию, тогда как мажорная представлена множеством долгоживущих мелких рецептор-содержащих эндосом, распределенных по всей цитоплазме. Наши данные показывают, что эта популяция не участвует в рециклировании, и рецептор в конечном итоге деградиру -ет в лизосомах. Одной из возможных причин может быть различие в динамике за-

кисления эндосом в HeLa и в энМСК, поскольку известно, что «окно слияний» открыто при рН от 6.2 до 6.0. Если предположить, что в энМСК закисление эндосом происходит существенно быстрее, чем в HeLa, то доля первичных эндосом, успевших пройти слияние с ЕЕА1-позитивными везикулами, будет соответственно меньше. Также не исключено использование неканонических путей как интер-нализации, так и лизосомной деградации в энМСК. Дальнейшие исследования должны решить эту проблему. Тем не менее, наши данные несомненно свидетельствуют о том, что эндосомальная стадия жизненного цикла рецептора участвует в регуляции его функций в энМСК, хотя и остаётся много неясного с точки зрения молекулярных механизмов такой регуляции.

Интересно также, что АР не индуцировал деградацию РЭФР, а также практически не стимулировал интернализацию РЭФР как в клетках HeLa, так и в энМСК, поскольку в периоды, типичные для путей рециклирования, не было обнаружено РЭФР-позитивных эндосомальных структур. В течение всего времени эксперимента РЭФР локализовался на плазматической мембране.На уровне спекуляции, обобщая наши данные по АР, можно предполагать, что его роль в энМСК состоит в блокировке рецепторов РЭФР, экспонированных на плазматической меме-бране, от преждевременной стимуляции другими лигандами или в предотвращении интернализации рецептора в соседствующих с энМСК клетках.

Таким образом, наиболее заметное различие между HeLa и энМСК заключается в том, что в энМСК, во-первых, ЭФР и ТФР-а ведут себя одинаково как в регуляции пролиферации/дифференцировке, так и при эндоцитозе, и во-вторых, деградация РЭФР происходит гораздо медленнее, чем в HeLa. Более того, если в HeLa после быстрой деградации РЭФР его уровень возвращается к исходному уровню через 24 ч (эффект более выражен в эксперименте с импульсной стимуляцией, когда короткое добавление лиганда стимулировало только один цикл интер-нализации-деградации), то в энМСК РЭФР оставался на невысоком уровне в течение не менее 5 сут эксперимента. Если считать, что высокий уровень РЭФР необходим на стадии пролиферации, то механизм его снижения и поддержания на низ-

HeLa - возврат к исходному состоянию

энМСК в

состоянии, готовом к дифферецировке

Регуляция на уровне эндосом

Рисунок 4.1. Регуляция уровня РЭФР на уровне эндоцитоза может приводить к изменению состояния энМСК

ком уровне делает возможной последующую дифференцировку. Очевидная причина поддержания низкого уровня белка РЭФР в энМСК по сравнению с HeLa может быть связана с ингибированием синтеза рецептора de novo в этих клетках; однако обработка ингибитором синтеза белка циклогексимидом, показывает, что синтез РЭФР в энМСК происходит на уровне, сравнимом с таковым в HeLa, хоть и не приводит к полному восстановлению исходного уровня. Таким образом, регуляция уровня РЭФР в этих клетках — более многофакторный процесс.

Интересно, что лиганды одного и того же рецептора могут опосредовать совершенно разные клеточные ответы. Одним из объяснений этих различий как для клеточных линий, так и для лигандов могут быть разные профили фосфорилиро-вания тирозиновых остатков в регуляторном домене РЭФР в зависимости от ли-ганда: это могут быть разные сайты фосфорилирования, а также может различать -ся длительность фосфорилирования. Например, показано, что фосфорилирование Tyr-1045, сайта связывания убиквитинлигазы c-Cbl, ответственного за сортировку РЭФР на лизосомальную деградацию, происходит под действием ЭФР, но не АР [202]. Более того, РЭФР может образовывать димеры с другими членами рецепторов семейства c-ErbB, профиль экспрессии которых может зависеть от кле-

81

точной линии. Также РЭФР может фосфорилироваться серин-треониновыми ки-назами [203] и участвовать в процессах транс-активации [21]. Эти вариации могут также влиять на способ интернализации [204] и, следовательно, на регуляцию внутриклеточной судьбы РЭФР. Наконец, можно предположить, что энМСК могут быть более чувствительны к стимуляции аутофагии, и если это так, то снижение скорости прохождения РЭФР по эндолизосомальному пути может происходить из-за конкуренции некоторых ключевых регуляторов лизосомальных и ауто-фагосомных процессов, таких как Vps34 [205-208]. Кроме того, нельзя исключать гормонального влияния на ЭФР-рецепторную систему в энМСК: как упоминалось в Обзоре литературы, экспрессия РЭФР и АР может регулироваться эстрогеном, но также ген АР представляет собой мишень прогестерона Р4 [8].

4.3. Изменение состояния энМСК

Как уже упоминалось, менструальный цикл представляет собой систему хорошо организованных последовательных событий. Показано, что успешная деци-дуализация происходит в два этапа и требует пролиферативной волны для запуска программы дифференцировки [8]. При этом если баланс нарушается в сторону более интенсивной пролиферации, например при эндометриозе, это может приводить к нарушению фертильности [209]. Возможно, ЭФР или ТФР-а вносят вклад в пролиферативную волну и одновременно меняют протеомный профиль клетки, готовя её к следующей волне. Один из признаков, который был обнаружен в данной работе — устойчивое снижение уровня РЭФР. На необходимость снижения уровня РЭФР для нормальной децидуализации эндометрия указывают данные, показывающие, что при эндометриозе уровень РФЭР в эндометрии повышен в секреторной фазе цикла по сравнению с нормальным эндометрием [210].

Нами также были проанализированы некоторые из поверхностных маркеров, по экспрессии которых идентифицируют энМСК (рис. 3.12). Из проанализированных маркеров только уровень CD146 снижался под действием всех трёх исследуемых лигандов РЭФР. Причём этот эффект зависел от тирозинкиназной активности рецептора, и, вероятно, был вовлечён сигнальный каскад, запускающий-

ся на плазматической мембране, поскольку неинтернализуемый АР тоже вызывал снижение CD146. Хотя ЭФР не вызывал увеличения количества CD146, локализованного в эндосомах, т.е. он не действует через рекрутирование этого белка в рецептор-положительные эндосомы, количество белка CD146 достоверно снижалось как на плазматической мембране, так и на мембранах CD146-содержащих везикул, поэтому механизмы, задействованные в снижении уровня CD146, вероятно, отличаются от показанных для РЭФР. Возможно, в деградации CD146 задействованы более медленные пути эндоцитоза [211]. Значение этих изменений для функционального фенотипа энМСК ещё предстоит исследовать. Некоторые исследователи считают, что CD146 маркер истинных стволовых клеток в гетерогенной популяции мезенхимных стромальных клеток [11]. Однако его точные функции, как молекулы клеточной адгезии, в МСК неясны. Одной из возможностей снижения его уровня является облегчение выхода стимулированных ЭФР энМСК из ниши при усилении пролиферации.

Таким образом, под действием лигандов РЭФР действительно меняется состояние энМСК, по крайней мере на уровне состава поверхностных маркеров, к которым можно отнести и сам РЭФР. Это позволяет рассматривать РЭФР как один из кандидатов на роль ключевого посредника циклических преобразований эндометрия, находящегося под контролем гормональной регуляции. В дальнейших исследованиях перспективными кажутся транскриптомные и протеомные подходы, которые позволят более точно описать различия в состоянии энМСК с высоким и низким уровнем РЭФР.

Глава 5. Заключение

В настоящей работе был проведён сравнительный анализ действия трех лигандов РЭФР с разным сродством к рецептору и разной внутриклеточной судьбой в культивируемых энМСК и в клеточной линии HeLa, полученной из опухоли. Используя несколько линий МСК различного тканевого происхождения, мы обнаружили, что уровень РЭФР в этих клетках аналогичен таковому у HeLa. Это означает, что оверэкспрессия РЭФР в конечном итоге не обязательно связана со злока-

чественной трансформацией, поскольку МСК сохраняют жесткий контроль роста и дифференцировки. Наши результаты продемонстрировали противоположные эффекты ЭФР, ТФР-а и АР на пролиферацию и различную динамику деградации и восстановления РЭФР в энМСК и HeLa, что, возможно, отражает разницу в регуляции внутриклеточного поведения интернализованных рецепторов. Очевидно, ЭФР-рецепторная система является чрезвычайно пластичной и должна работать в координации с сигнальными системами, рассматриваемыми как более специфичные для стволовых клеток.

Чтобы понять, являются ли выявленные различия частными свойствами конкретных использованных линий или же они основаны на более общих механизмах, различающих нормальные и трансформированные пролиферирующие клетки, необходимы систематические исследования на более широкой панели клеточных объектов. Эндометриальные МСК привлекают внимание как модельные объекты для изучения различных патологий эндометрия и разработки подходов к их лечению. Однако в настоящее время имеется много противоречий в данных разных исследовательских групп, полученных на биопсийном материале и изолированных клеточных линиях. Это указывает на необходимость более глубокого понимания того, как процессы, наблюдаемые в клеточных линиях соотносятся с процессами реально происходящими в тканях человека. При этом исследования in vivo затруднены в случае эндометрия человека, потому что у большинства животных другой тип полового цикла. Таким образом, пока эндометриальные МСК и органоиды, получаемые из клеток эндометрия, вссё ещё играют большую роль в исследованиях эндометрия.

ВЫВОДЫ

1. Уровни мРНК и белка РЭФР в МСК из различных тканей при росте в обычных условиях культивирования сравнимы с таковыми в опухолевых линиях клеток, для которых характерна оверэкспрессия рецептора, обычно связываемая с их злокачественностью.

2. ЭФР, ТФР-а и АР по-разному влияют на пролиферацию энМСК и HeLa: если ЭФР и ТФР-а, не являясь митогенами для HeLa, способствуют пролиферации энМСК, то АР оказывает обратный эффект, стимулируя пролиферацию HeLa, но не энМСК. Такой эффект экзогенного АР связан, возможно, с тем, что клетки сами секретируют этот фактор.

3. ЭФР и ТФР-а препятствуют стимулированной децидуализации культивируемых энМСК, а подавление активности РЭФР специфическим ингибитором способствует повышению секреции маркера децидуальных клеток IGFBP1, что свидетельствует о рецептор-опосредованном механизме ингибирования дифференцировки энМСК.

4. В энМСК ЭФР и ТФР-а, но не амфирегулин, вызывают интернализацию РЭФР в многочисленные мелкие эндосомы, лишь небольшая доля которых, по сравнению с HeLa, последовательно колокализуется с маркерами канонического лизосомального пути. Также в отличие от HeLa, после интернализации в комплексе с ТФР-а в энМСК не наблюдается значительного рециклирования РЭФР.

5. Уровень РЭФР в энМСК снижается вследствие лизосомальной деградации, но с гораздо меньшей скоростью, чем в HeLa, не восстанавливаясь в течение нескольких суток.

6. ЭФР вызывает долговременное снижение количества поверхностного белка адгезии CD146, одного из маркеров МСК. Вместе со снижением уровня РЭФР это указывает на изменение общего состояния энМСК.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ling L. Wnt signaling controls the fate of mesenchymal stem cells / Ling L., Nurcombe V., Cool S.M. // Gene - 2009. - Т. 433 - № 1-2 - С.1-7.

2. Kurpinski K. Transforming Growth Factor-в and Notch Signaling Mediate Stem Cell Differentiation into Smooth Muscle Cells / Kurpinski K., Lam H., Chu J., Wang A., Kim A., Tsay E., Agrawal S., Schaffer D.V., Li S. // Stem Cells - 2010. - Т. 28 - № 4 - С.734-742.

3. Takam Kamga P. The Role of Notch and Wnt Signaling in MSC Communication in Normal and Leukemic Bone Marrow Niche / Takam Kamga P., Bazzoni R., Dal Collo G., Cassaro A., Tanasi I., Russignan A., Tecchio C., Krampera M. // Frontiers in Cell and Developmental Biology - 2021. - Т. 8 - С.599276.

4. Schuldiner M. Effects of eight growth factors on the differentiation of cells derived from human embryonic stem cells / Schuldiner M., Yanuka O., Itskovitz-Eldor J., Melton D.A., Benvenisty N. // Proceedings of the National Academy of Sciences -2000. - Т. 97 - № 21 - С.11307-11312.

5. Scalabrino G. Epidermal Growth Factor in the CNS: A Beguiling Journey from Integrated Cell Biology to Multiple Sclerosis. An Extensive Translational Overview / Scalabrino G. // Cellular and Molecular Neurobiology - 2022. - Т. 42 - № 4 - С.891-916.

6. Liu L.-P. LncRNA-TCL6 promotes early abortion and inhibits placenta implantation via the EGFR pathway / Liu L.-P., Gong Y.-B. // European Review for Medical and Pharmacological Sciences - 2018. - Т. 22 - № 21 - С.7105-7112.

7. Miettinen P.J. Epithelial immaturity and multiorgan failure in mice lacking epidermal growth factor receptor / Miettinen P.J., Berger J.E., Meneses J., Phung Y., Pedersen R.A., Werb Z., Derynck R. // Nature - 1995. - Т. 376 - № 6538 - С.337-341.

8. Large M.J. The Epidermal Growth Factor Receptor Critically Regulates Endometrial Function during Early Pregnancy / Large M.J., Wetendorf M., Lanz R.B., Hartig S.M., Creighton C.J., Mancini M.A., Kovanci E., Lee K.-F., Threadgill D.W.,

Lydon J.P., Jeong J.-W., DeMayo F.J. // PLoS Genetics - 2014. - T. 10 - № 6 -C.e1004451.

9. Yan X. Mesenchymal stem cells from primary breast cancer tissue promote cancer proliferation and enhance mammosphere formation partially via EGF/EGFR/Akt pathway / Yan X., Fu C., Chen L., Qin J., Zeng Q., Yuan H., Nan X., Chen H., Zhou J., Lin Y., Zhang X., Yu C., Yue W., Pei X. // Breast Cancer Research and Treatment -2012. - T. 132 - № 1 - C.153-164.

10. Kim S.H. Activation of the EGFR-PI3K-CaM pathway by PRL-1-overexpressing placenta-derived mesenchymal stem cells ameliorates liver cirrhosis via ER stress-dependent calcium / Kim S.H., Kim J.Y., Park S.Y., Jeong W.T., Kim J.M., Bae S.H., Kim G.J. // Stem Cell Research & Therapy - 2021. - T. 12 - № 1 - C.551.

11. Bozorgmehr M. Endometrial and Menstrual Blood Mesenchymal Stem/ Stromal Cells: Biological Properties and Clinical Application / Bozorgmehr M., Gurung S., Darzi S., Nikoo S., Kazemnejad S., Zarnani A.-H., Gargett C.E. // Frontiers in Cell and Developmental Biology - 2020. - T. 8 - C.497.

12. Irwin J.C. Sex Steroids and Growth Factors Differentially Regulate the Growth and Differentiation of Cultured Human Endometrial Stromal Cells / Irwin J.C., Utian W.H., Eckert R.L. // Endocrinology - 1991. - T. 129 - № 5 - C.2385-2392.

13. Singh M. Bridging endometrial receptivity and implantation: network of hormones, cytokines, and growth factors / Singh M., Chaudhry P., Asselin E. // Journal of Endocrinology - 2011. - T. 210 - № 1 - C.5-14.

14. Ejskj^r K. Expression of the epidermal growth factor system in human endometrium during the menstrual cycle / Ejskj^r K., S0rensen B.S., Poulsen S.S., Mogensen O., Forman A., Nex0 E. // MHR: Basic science of reproductive medicine -2005. - T. 11 - № 8 - C.543-551.

15. Möller B. Expression of the angiogenic growth factors VEGF, FGF-2, EGF and their receptors in normal human endometrium during the menstrual cycle / Möller B. // Molecular Human Reproduction - 2001. - T. 7 - № 1 - C.65-72.

16. Imai T. Changes in Epidermal Growth Factor Receptor and the Levels of its Ligands during Menstrual Cycle in Human Endometrium / Imai T., Kurachi H., Adachi K., Adachi H., Yoshimoto Y., Homma H., Tadokoro C., Takeda S., Yamaguchi M., Sakata M., Sakoyama Y., Miyake A. // Biology of Reproduction - 1995. - T. 52 - № 4

- C.928-938.

17. Niikura H. Expression of epidermal growth factor family proteins and epidermal growth factor receptor in human endometrium / Niikura H., Sasano H., Kaga K., Sato S., Yajima A. // Human Pathology - 1996. - T. 27 - № 3 - C.282-289.

18. Capuani F. Quantitative analysis reveals how EGFR activation and downregulation are coupled in normal but not in cancer cells / Capuani F., Conte A., Argenzio E., Marchetti L., Priami C., Polo S., Di Fiore P.P., Sigismund S., Ciliberto A. // Nature Communications - 2015. - T. 6 - № 1 - C.7999.

19. Fabricant R.N. Nerve growth factor receptors on human melanoma cells in culture. / Fabricant R.N., De Larco J.E., Todaro G.J. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 1977. - T. 74 - № 2 - C.565-569.

20. Radinsky R. Level and function of epidermal growth factor receptor predict the metastatic potential of human colon carcinoma cells / Radinsky R., Risin S., Fan D., Dong Z., Bielenberg D., Bucana C.D., Fidler I.J. // Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research - 1995. - T. 1 - № 1

- C.19-31.

21. Sigismund S. Emerging functions of the EGFR in cancer / Sigismund S., Avanzato D., Lanzetti L. // Molecular Oncology - 2018. - T. 12 - № 1 - C.3-20.

22. Rodriguez S.M.B. An Overview of EGFR Mechanisms and Their Implications in Targeted Therapies for Glioblastoma / Rodriguez S.M.B., Kamel A., Ciubotaru G.V., Onose G., Sevastre A.-S., Sfredel V., Danoiu S., Dricu A., Tataranu L.G. // International Journal of Molecular Sciences - 2023. - T. 24 - № 13 - C.11110.

23. Lindsey S. Epidermal Growth Factor Signaling in Transformed Cells Elsevier, 2015. - 1-41c.

24. Landry J.J.M. The genomic and transcriptomic landscape of a HeLa cell line / Landry J.J.M., Pyl P.T., Rausch T., Zichner T., Tekkedil M.M., Stütz A.M., Jauch A., Aiyar R.S., Pau G., Delhomme N., Gagneur J., Korbel J.O., Huber W., Steinmetz L.M. // G3 (Bethesda, Md.) - 2013. - T. 3 - № 8 - C.1213-1224.

25. Chung I. Spatial control of EGF receptor activation by reversible dimerization on living cells / Chung I., Akita R., Vandlen R., Toomre D., Schlessinger J., Mellman I. // Nature - 2010. - T. 464 - № 7289 - C.783-787.

26. Sawano A. Lateral Propagation of EGF Signaling after Local Stimulation Is Dependent on Receptor Density / Sawano A., Takayama S., Matsuda M., Miyawaki A. // Developmental Cell - 2002. - T. 3 - № 2 - C.245-257.

27. Wilson K.J. Functional selectivity of EGF family peptide growth factors: Implications for cancer / Wilson K.J., Gilmore J.L., Foley J., Lemmon M.A., Riese D.J. // Pharmacology & Therapeutics - 2009. - T. 122 - № 1 - C.1-8.

28. Rusch V. Overexpression of the epidermal growth factor receptor and its ligand transforming growth factor □ is frequent in resectable non-small cell lung cancer but does not predict tumor progression / Rusch V., Klimstra D., Venkatraman E., Pisters P.W., Langenfeld J., Dmitrovsky E. // Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research - 1997. - T. 3 - № 4 - C.515-522.

29. Yarden Y. The ERBB network: at last, cancer therapy meets systems biology / Yarden Y., Pines G. // Nature Reviews Cancer - 2012. - T. 12 - № 8 - C.553-563.

30. Roskoski R. The ErbB/HER family of protein-tyrosine kinases and cancer / Roskoski R. // Pharmacological Research - 2014. - T. 79 - C.34-74.

31. Ramalho-Santos M. On the Origin of the Term "Stem Cell" / Ramalho-Santos M., Willenbring H. // Cell Stem Cell - 2007. - T. 1 - № 1 - C.35-38.

32. Maximow A.A. Über embryonale Entwicklung der Blut- und Bindegewebszellen bei den Säugetieren Text / Maximow A.A. // Anat. Anz. - 1908. -T. 32 (Suppl.). - C.65-72.

33. Pappenheim A. Ueber Entwickelung und Ausbildung der Erythroblasten / Pappenheim A. // Archiv für Pathologische Anatomie und Physiologie und für Klinische Medicin - 1896. - T. 145 - № 3 - C.587-643.

34. Lendahl U. 100 plus years of stem cell research—20 years of ISSCR / Lendahl U. // Stem Cell Reports - 2022. - T. 17 - № 6 - C.1248-1267.

35. Rajabzadeh N. Stem cell-based regenerative medicine / Rajabzadeh N., Fathi E., Farahzadi R. // Stem Cell Investigation - 2019. - T. 6 - C.19.

36. Patt H.M. Bone marrow regeneration after local injury: a review / Patt H.M., Maloney M.A. // Experimental Hematology - 1975. - T. 3 - № 2 - C.135-148.

37. Friedenstein A.J. Fibroblast precursors in normal and irradiated mouse hematopoietic organs / Friedenstein A.J., Gorskaja J.F., Kulagina N.N. // Experimental Hematology - 1976. - T. 4 - № 5 - C.267-274.

38. Dominici M. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement / Dominici M., Le Blanc K., Mueller I., Slaper-Cortenbach I., Marini F.C., Krause D.S., Deans R.J., Keating A., Prockop D.J., Horwitz E.M. // Cytotherapy - 2006. - T. 8 - № 4 - C.315-317.

39. Bianco P. The meaning, the sense and the significance: translating the science of mesenchymal stem cells into medicine / Bianco P., Cao X., Frenette P.S., Mao J.J., Robey P.G., Simmons P.J., Wang C.-Y. // Nature Medicine - 2013. - T. 19 - № 1 -

C.35-42.

40. Viswanathan S. Mesenchymal stem versus stromal cells: International Society for Cell & Gene Therapy (ISCT®) Mesenchymal Stromal Cell committee position statement on nomenclature / Viswanathan S., Shi Y., Galipeau J., Krampera M., Leblanc K., Martin I., Nolta J., Phinney D.G., Sensebe L. // Cytotherapy - 2019. - T. 21 - № 10 - C.1019-1024.

41. Chu D.-T. An Update on the Progress of Isolation, Culture, Storage, and Clinical Application of Human Bone Marrow Mesenchymal Stem/Stromal Cells / Chu

D.-T., Phuong T.N.T., Tien N.L.B., Tran D.K., Thanh V.V., Quang T.L., Truong D.T.,

Pham V.H., Ngoc V.T.N., Chu-Dinh T., Kushekhar K. // International Journal of Molecular Sciences - 2020. - Т. 21 - № 3 - С.708.

42. Кольцова А.М. ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИНИИ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК, ВЫДЕЛЕННОЙ ИЗ ПУЛЬПЫ МОЛОЧНОГО ЗУБА ЧЕЛОВЕКА / Кольцова А.М., Зенин В.В., Турилова В.И., Яковлева Т.К., Полянская Г.Г. // Цитология - 2018. - Т. 60 - № 12 - С.955-968.

43. Tyurin-Kuzmin P.A. Functional Heterogeneity of Protein Kinase A Activation in Multipotent Stromal Cells / Tyurin-Kuzmin P.A., Karagyaur M.N., Kulebyakin K.Yu., Dyikanov D.T., Chechekhin V.I., Ivanova A.M., Skryabina M.N., Arbatskiy M.S., Sysoeva V.Yu., Kalinina N.I., Tkachuk V.A. // International Journal of Molecular Sciences - 2020. - Т. 21 - № 12 - С.4442.

44. Testa S. Skeletal Muscle-Derived Human Mesenchymal Stem Cells: Influence of Different Culture Conditions on Proliferative and Myogenic Capabilities / Testa S., Riera C.S., Fornetti E., Riccio F., Fuoco C., Bernardini S., Baldi J., Costantini M., Foddai M.L., Cannata S., Gargioli C. // Frontiers in Physiology - 2020. - Т. 11 -С.553198.

45. Домнина А.П. СВОЙСТВА ЭНДОМЕТРИАЛЬНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПОСЛЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ В СФЕРОИДАХ / Домнина А.П., Обидина Ю.В., Никольский Н.Н. // Цитология - 2018. - № 10 -С.797-800.

46. Telgmann R. Activated Protein Kinase A Is Required for Differentiation-Dependent Transcription of the Decidual Prolactin Gene in Human Endometrial Stromal Cells* / Telgmann R., Maronde E., Tasken K., Gellersen B. // Endocrinology -1997. - Т. 138 - № 3 - С.929-937.

47. Kozlowska U. Similarities and differences between mesenchymal stem/ progenitor cells derived from various human tissues / Kozlowska U., Krawczenko A., Futoma K., Jurek T., Rorat M., Patrzalek D., Klimczak A. // World Journal of Stem Cells - 2019. - Т. 11 - № 6 - С.347-374.

48. Liu J. Mesenchymal stem cells and their microenvironment / Liu J., Gao J., Liang Z., Gao C., Niu Q., Wu F., Zhang L. // Stem Cell Research & Therapy - 2022. -T. 13 - № 1 - C.429.

49. Loibl M. Direct Cell-Cell Contact between Mesenchymal Stem Cells and Endothelial Progenitor Cells Induces a Pericyte-Like Phenotype In Vitro / Loibl M., Binder A., Herrmann M., Duttenhoefer F., Richards R.G., Nerlich M., Alini M., Verrier S. // BioMed Research International - 2014. - T. 2014 - C.1-10.

50. Chen S. Preconditioning and Engineering Strategies for Improving the Efficacy of Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes in Cell-Free Therapy / Chen S., Sun F., Qian H., Xu W., Jiang J. // Stem Cells International - 2022. - T. 2022 - C.1-18.

51. Crisan M. A Perivascular Origin for Mesenchymal Stem Cells in Multiple Human Organs / Crisan M., Yap S., Casteilla L., Chen C.-W., Corselli M., Park T.S., Andriolo G., Sun B., Zheng B., Zhang L., Norotte C., Teng P.-N., Traas J., Schugar R., Deasy B.M., Badylak S., Bühring H.-J., Giacobino J.-P., Lazzari L., Huard J., Peault B. // Cell Stem Cell - 2008. - T. 3 - № 3 - C.301-313.

52. Corselli M. The Tunica Adventitia of Human Arteries and Veins As a Source of Mesenchymal Stem Cells / Corselli M., Chen C.-W., Sun B., Yap S., Rubin J.P., Peault B. // Stem Cells and Development - 2012. - T. 21 - № 8 - C.1299-1308.

53. Kirkwood P.M. Single-cell RNA sequencing redefines the mesenchymal cell landscape of mouse endometrium / Kirkwood P.M., Gibson D.A., Smith J.R., Wilson-Kanamori J.R., Kelepouri O., Esnal-Zufiaurre A., Dobie R., Henderson N.C., Saunders P.T.K. // The FASEB Journal - 2021. - T. 35 - № 4.

54. Sacchetti B. Self-Renewing Osteoprogenitors in Bone Marrow Sinusoids Can Organize a Hematopoietic Microenvironment / Sacchetti B., Funari A., Michienzi S., Di Cesare S., Piersanti S., Saggio I., Tagliafico E., Ferrari S., Robey P.G., Riminucci M., Bianco P. // Cell - 2007. - T. 131 - № 2 - C.324-336.

55. Lv F.-J. Concise Review: The Surface Markers and Identity of Human Mesenchymal Stem Cells / Lv F.-J., Tuan R.S., Cheung K.M.C., Leung V.Y.L. // Stem Cells - 2014. - T. 32 - № 6 - C.1408-1419.

56. Sorrentino A. Isolation and characterization of CD146+ multipotent mesenchymal stromal cells / Sorrentino A., Ferracin M., Castelli G., Biffoni M., Tomaselli G., Baiocchi M., Fatica A., Negrini M., Peschle C., Valtieri M. // Experimental Hematology - 2008. - T. 36 - № 8 - C.1035-1046.

57. Ulrich C. Human Placenta-Derived CD146-Positive Mesenchymal Stromal Cells Display a Distinct Osteogenic Differentiation Potential / Ulrich C., Abruzzese T., Maerz J.K., Ruh M., Amend B., Benz K., Rolauffs B., Abele H., Hart M.L., Aicher W.K. // Stem Cells and Development - 2015. - T. 24 - № 13 - C.1558-1569.

58. Paduano F. CD146 Expression Influences Periapical Cyst Mesenchymal Stem Cell Properties / Paduano F., Marrelli M., Palmieri F., Tatullo M. // Stem Cell Reviews and Reports - 2016. - T. 12 - № 5 - C.592-603.

59. Bardin N. Identification of CD146 as a component of the endothelial junction involved in the control of cell-cell cohesion / Bardin N., Anfosso F., Massé J.-M., Cramer E., Sabatier F., Bivic A.L., Sampol J., Dignat-George F. // Blood - 2001. - T. 98 - № 13 - C.3677-3684.

60. Kirkwood P.M. Single-cell RNA sequencing and lineage tracing confirm mesenchyme to epithelial transformation (MET) contributes to repair of the endometrium at menstruation / Kirkwood P.M., Gibson D.A., Shaw I., Dobie R., Kelepouri O., Henderson N.C., Saunders P.T. // eLife - 2022. - T. 11 - C.e77663.

61. Grigorieva O. Novel Potential Markers of Myofibroblast Differentiation Revealed by Single-Cell RNA Sequencing Analysis of Mesenchymal Stromal Cells in Profibrotic and Adipogenic Conditions / Grigorieva O., Basalova N., Vigovskiy M., Arbatskiy M., Dyachkova U., Kulebyakina M., Kulebyakin K., Tyurin-Kuzmin P., Kalinina N., Efimenko A. // Biomedicines - 2023. - T. 11 - № 3 - C.840.

62. Cao D. Single-cell RNA sequencing of cultured human endometrial CD140b+CD146+ perivascular cells highlights the importance of in vivo microenvironment / Cao D., Chan R.W.S., Ng E.H.Y., Gemzell-Danielsson K., Yeung W.S.B. // Stem Cell Research & Therapy - 2021. - T. 12 - № 1 - C.306.

63. Simmons P. CD34 expression by stromal precursors in normal human adult bone marrow / Simmons P., Torok-Storb B. // Blood - 1991. - Т. 78 - № 11 - С.2848-2853.

64. Bellagamba B.C. Induction of Expression of CD271 and CD34 in Mesenchymal Stromal Cells Cultured as Spheroids / Bellagamba B.C., Grudzinski P.B., Ely P.B., Nader P.D.J.H., Nardi N.B., Da Silva Meirelles L. // Stem Cells International - 2018. - Т. 2018 - С.1-14.

65. Stagg J. Interferon-y-stimulated marrow stromal cells: a new type of nonhematopoietic antigen-presenting cell / Stagg J., Pommey S., Eliopoulos N., Galipeau J. // Blood - 2006. - Т. 107 - № 6 - С.2570-2577.

66. Halfon S. Markers Distinguishing Mesenchymal Stem Cells from Fibroblasts Are Downregulated with Passaging / Halfon S., Abramov N., Grinblat B., Ginis I. // Stem Cells and Development - 2011. - Т. 20 - № 1 - С.53-66.

67. Jabbour H.N. Endocrine Regulation of Menstruation / Jabbour H.N., Kelly R.W., Fraser H.M., Critchley H.O.D. // Endocrine Reviews - 2006. - Т. 27 - № 1 -С.17-46.

68. Eremichev R.Y. Soluble factors formed during the healing of the endometrium suppress its "fibrosis" in vitro / Eremichev R.Y., Grigorieva O.A., Kulebyakin K.Y., Efimenko A.Y., Makarevich P.I. // Genes & Cells - 2018. - Т. 13 -№ 2 - С.63-66.

69. Deshmukh S. Histology and Hysteroscopic View of Normal Endometrium / под ред. S. Tandulwadkar, B. Pal. Springer Singapore, 2021. - 53-62с.

70. Gargett C.E. Endometrial regeneration and endometrial stem/progenitor cells / Gargett C.E., Nguyen H.P.T., Ye L. // Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders -2012. - Т. 13 - № 4 - С.235-251.

71. Ludwig H. Microarchitecture of the Human Endometrium by Scanning Electron Microscopy: Menstrual Desquamation and Remodeling / Ludwig H., Spornitz U.M. // Annals of the New York Academy of Sciences - 1991. - Т. 622 - № 1 - С.28-46.

72. Makieva S. Inside the Endometrial Cell Signaling Subway: Mind the Gap(s) / Makieva S., Giacomini E., Ottolina J., Sanchez A., Papaleo E., Vigano P. // International Journal of Molecular Sciences - 2018. - T. 19 - № 9 - C.2477.

73. Alvergne A. Is Female Health Cyclical? Evolutionary Perspectives on Menstruation / Alvergne A., Högqvist Tabor V. // Trends in Ecology & Evolution -2018. - T. 33 - № 6 - C.399-414.

74. Cousins F.L. Endometrial Stem/Progenitor Cells-Their Role in Endometrial Repair and Regeneration / Cousins F.L., Filby C.E., Gargett C.E. // Frontiers in Reproductive Health - 2022. - T. 3 - C.811537.

75. Zhao J. The effect of endometrial thickness and pattern measured by ultrasonography on pregnancy outcomes during IVF-ET cycles / Zhao J., Zhang Q., Li Y. // Reproductive Biology and Endocrinology - 2012. - T. 10 - № 1 - C.100.

76. Pijnenborg R. The Uterine Spiral Arteries In Human Pregnancy: Facts and Controversies / Pijnenborg R., Vercruysse L., Hanssens M. // Placenta - 2006. - T. 27 -№ 9-10 - C.939-958.

77. Achache H. Endometrial receptivity markers, the journey to successful embryo implantation / Achache H., Revel A. // Human Reproduction Update - 2006. -T. 12 - № 6 - C.731-746.

78. Maybin J.A. Progesterone: a pivotal hormone at menstruation / Maybin J.A., Critchley H.O.D. // Annals of the New York Academy of Sciences - 2011. - T. 1221 -№ 1 - C.88-97.

79. Brosens J.J. Death or survival - progesterone-dependent cell fate decisions in the human endometrial stroma / Brosens J.J., Gellersen B. // Journal of Molecular Endocrinology - 2006. - T. 36 - № 3 - C.389-398.

80. Bellofiore N. First evidence of a menstruating rodent: the spiny mouse (Acomys cahirinus) / Bellofiore N., Ellery S.J., Mamrot J., Walker D.W., Temple-Smith P., Dickinson H. // American Journal of Obstetrics and Gynecology - 2017. - T. 216 -№ 1 - C.40.e1-40.e11.

81. Groothuis P.G. Estrogen and the endometrium: lessons learned from gene expression profiling in rodents and human / Groothuis P.G., Dassen H.H.N.M., Romano A., Punyadeera C. // Human Reproduction Update - 2007. - T. 13 - № 4 - C.405-417.

82. Kurita T. The activation function-1 domain of estrogen receptor a in uterine stromal cells is required for mouse but not human uterine epithelial response to estrogen / Kurita T., Medina R., Schabel A.B., Young P., Gama P., Parekh T.V., Brody J., Cunha G.R., Osteen K.G., Bruner-Tran K.L., Gold L.I. // Differentiation - 2005. - T. 73 - № 6 - C.313-322.

83. Brosens J.J. A role for menstruation in preconditioning the uterus for successful pregnancy / Brosens J.J., Parker M.G., Mclndoe A., Pijnenborg R., Brosens I.A. // American Journal of Obstetrics and Gynecology - 2009. - T. 200 - № 6 -C.615.e1-615.e6.

84. Roberts R.M. The evolution of the placenta / Roberts R.M., Green J.A., Schulz L.C. // Reproduction - 2016. - T. 152 - № 5 - C.R179-R189.

85. Wang C. Comparative Analysis of Mouse Decidualization Models at the Molecular Level / Wang C., Zhao M., Zhang W.-Q., Huang M.-Y., Zhu C., He J.-P., Liu J.-L. // Genes - 2020. - T. 11 - № 8 - C.935.

86. Chan R.W.S. Clonogenicity of Human Endometrial Epithelial and Stromal Cells1 / Chan R.W.S., Schwab K.E., Gargett C.E. // Biology of Reproduction - 2004. -T. 70 - № 6 - C.1738-1750.

87. Gargett C.E. Endometrial stem/progenitor cells: the first 10 years / Gargett C.E., Schwab K.E., Deane J.A. // Human Reproduction Update - 2015. - T. 22 - № 2 -C.137-163.

88. Chan R.W.S. Identification of Label-Retaining Cells in Mouse Endometrium / Chan R.W.S., Gargett C.E. // Stem Cells - 2006. - T. 24 - № 6 - C.1529-1538.

89. Lara E. Endometrial Stem Cells in Farm Animals: Potential Role in Uterine Physiology and Pathology / Lara E., Rivera N., Cabezas J., Navarrete F., Saravia F., Rodriguez-Alvarez L., Castro F. // Bioengineering - 2018. - T. 5 - № 3 - C.75.

90. Wolff E.F. Endometrial stem cell transplantation in MPTP-exposed primates: an alternative cell source for treatment of Parkinson's disease / Wolff E.F., Mutlu L., Massasa E.E., Elsworth J.D., Eugene Redmond D., Taylor H.S. // Journal of Cellular and Molecular Medicine - 2015. - T. 19 - № 1 - C.249-256.

91. Musina R.A. Endometrial mesenchymal stem cells isolated from the menstrual blood / Musina R.A., Belyavski A.V., Tarusova O.V., Solovyova E.V., Sukhikh G.T. // Bulletin of Experimental Biology and Medicine - 2008. - T. 145 - № 4 - C.539-543.

92. Darzi S. Identification and Characterization of Human Endometrial Mesenchymal Stem/Stromal Cells and Their Potential for Cellular Therapy / Darzi S., Werkmeister J.A., Deane J.A., Gargett C.E. // Stem Cells Translational Medicine -2016. - T. 5 - № 9 - C.1127-1132.

93. Allickson J.G. Recent Studies Assessing the Proliferative Capability of a Novel Adult Stem Cell Identified in Menstrual Blood / Allickson J.G. // The Open Stem Cell Journal - 2011. - T. 3 - № 1 - C.4-10.

94. Gurung S. Inhibition of Transforming Growth Factor-ß Receptor signaling promotes culture expansion of undifferentiated human Endometrial Mesenchymal Stem/stromal Cells / Gurung S., Werkmeister J.A., Gargett C.E. // Scientific Reports -2015. - T. 5 - № 1 - C.15042.

95. Borlongan C.V. Menstrual Blood Cells Display Stem Cell-Like Phenotypic Markers and Exert Neuroprotection Following Transplantation in Experimental Stroke / Borlongan C.V., Kaneko Y., Maki M., Yu S.-J., Ali M., Allickson J.G., Sanberg C.D., Kuzmin-Nichols N., Sanberg P.R. // Stem Cells and Development - 2010. - T. 19 - № 4 - C.439-452.

96. Patel A.N. Multipotent Menstrual Blood Stromal Stem Cells: Isolation, Characterization, and Differentiation / Patel A.N., Park E., Kuzman M., Benetti F., Silva F.J., Allickson J.G. // Cell Transplantation - 2008. - T. 17 - № 3 - C.303-311.

97. Schwab K.E. Putative stem cell activity of human endometrial epithelial and stromal cells during the menstrual cycle / Schwab K.E., Chan R.W.S., Gargett C.E. // Fertility and Sterility - 2005. - T. 84 - C.1124-1130.

98. Ulrich D. Mesenchymal stem/stromal cells in post-menopausal endometrium / Ulrich D., Tan K.S., Deane J., Schwab K., Cheong A., Rosamilia A., Gargett C.E. // Human Reproduction - 2014. - T. 29 - № 9 - C.1895-1905.

99. Yang X. In vitro hepatic differentiation of human endometrial stromal stem cells / Yang X., Wang W., Li X. // In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal

- 2014. - T. 50 - № 2 - C.162-170.

100. Santamaria X. Derivation of Insulin Producing Cells From Human Endometrial Stromal Stem Cells and Use in the Treatment of Murine Diabetes / Santamaria X., Massasa E.E., Feng Y., Wolff E., Taylor H.S. // Molecular Therapy -2011. - T. 19 - № 11 - C.2065-2071.

101. Wolff E.F. Endometrial stem cell transplantation restores dopamine production in a Parkinson's disease model / Wolff E.F., Gao X.-B., Yao K.V., Andrews Z.B., Du H., Elsworth J.D., Taylor H.S. // Journal of Cellular and Molecular Medicine -2011. - T. 15 - № 4 - C.747-755.

102. Ebrahimi-Barough S. Differentiation of Human Endometrial Stromal Cells into Oligodendrocyte Progenitor Cells (OPCs) / Ebrahimi-Barough S., Kouchesfahani H.M., Ai J., Massumi M. // Journal of Molecular Neuroscience - 2013. - T. 51 - № 2 -C.265-273.

103. Stadtmauer D.J. Single-cell analysis of prostaglandin E2-induced human decidual cell in vitro differentiation: a minimal ancestral deciduogenic signal / Stadtmauer D.J., Wagner G.P. // Biology of Reproduction - 2022. - T. 106 - № 1 -C.155-172.

104. Jessmon P. Diverse functions of HBEGF during pregnancy / Jessmon P., Leach R.E., Armant D.R. // Molecular Reproduction and Development - 2009. - T. 76

- № 12 - C.1116-1127.

105. Irwin J.C. Role of the IGF system in trophoblast invasion and preeclampsia / Irwin J.C., Suen L.F., Martina N.A., Mark S.P., Giudice L.C. // Human Reproduction - 1999. - T. 14 - № Suppl. 2 - C.90-96.

106. Abu Shehab M. Inhibition of decidual IGF-1 signaling in response to hypoxia and leucine deprivation is mediated by mTOR and AAR pathways and increased IGFBP-1 phosphorylation / Abu Shehab M., Biggar K., Kakadia J.H., Dhruv M., Jain B., Nandi P., Nygard K., Jansson T., Gupta M.B. // Molecular and Cellular Endocrinology - 2020. - T. 512 - C.110865.

107. Matsumoto H. Insulin-like growth factor binding protein-1 induces decidualization of human endometrial stromal cells via 5 1 integrin / Matsumoto H., Sakai K., Iwashita M. // Molecular Human Reproduction - 2008. - T. 14 - № 8 -C.485-489.

108. Lockwood C.J. Decidual Cell-expressed Tissue Factor in Human Pregnancy and Its Involvement in Hemostasis and Preeclampsia-related Angiogenesis / Lockwood C.J., Krikun G., Caze R., Rahman M., Buchwalder L.F., Schatz F. // Annals of the New York Academy of Sciences - 2008. - T. 1127 - № 1 - C.67-72.

109. Hess A.P. Decidual Stromal Cell Response to Paracrine Signals from the Trophoblast: Amplification of Immune and Angiogenic Modulators1 / Hess A.P., Hamilton A.E., Talbi S., Dosiou C., Nyegaard M., Nayak N., Genbecev-Krtolica O., Mavrogianis P., Ferrer K., Kruessel J., Fazleabas A.T., Fisher S.J., Giudice L.C. // Biology of Reproduction - 2007. - T. 76 - № 1 - C.102-117.

110. Burton G.J. Uterine Glands Provide Histiotrophic Nutrition for the Human Fetus during the First Trimester of Pregnancy / Burton G.J., Watson A.L., Hempstock J., Skepper J.N., Jauniaux E. // The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism -2002. - T. 87 - № 6 - C.2954-2959.

111. Kudo Y. Mechanisms regulating the expression of indoleamine 2,3-dioxygenase during decidualization of human endometrium / Kudo Y. // Human Reproduction - 2004. - T. 19 - № 5 - C.1222-1230.

112. Citri A. EGF-ERBB signalling: towards the systems level / Citri A., Yarden Y. // Nature Reviews Molecular Cell Biology - 2006. - T. 7 - № 7 - C.505-516.

113. Singh B. EGF receptor ligands: recent advances / Singh B., Carpenter G., Coffey R.J. // F1000Research - 2016. - T. 5 - C.2270.

114. Miller M.A. ADAM-10 and -17 regulate endometriotic cell migration via concerted ligand and receptor shedding feedback on kinase signaling / Miller M.A., Meyer A.S., Beste M.T., Lasisi Z., Reddy S., Jeng K.W., Chen C.-H., Han J., Isaacson K., Griffith L.G., Lauffenburger D.A. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2013. - T. 110 - № 22.

115. Higginbotham J.N. Identification and characterization of EGF receptor in individual exosomes by fluorescence-activated vesicle sorting / Higginbotham J.N., Zhang Q., Jeppesen D.K., Scott A.M., Manning H.C., Ochieng J., Franklin J.L., Coffey R.J. // Journal of Extracellular Vesicles - 2016. - T. 5 - № 1 - C.29254.

116. Isokane M. Plasma-membrane-anchored growth factor pro-amphiregulin binds A-type lamin and regulates global transcription / Isokane M., Hieda M., Hirakawa S., Shudou M., Nakashiro K., Hashimoto K., Hamakawa H., Higashiyama S. // Journal of Cell Science - 2008. - T. 121 - № 21 - C.3608-3618.

117. Morato A. External and internal EGFR-activating signals drive mammary epithelial cells proliferation and viability / Morato A., Martignani E., Miretti S., Baratta M., Accornero P. // Molecular and Cellular Endocrinology - 2021. - T. 520 -C.111081.

118. Busser B. The multiple roles of amphiregulin in human cancer / Busser B., Sancey L., Brambilla E., Coll J.-L., Hurbin A. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Reviews on Cancer - 2011. - T. 1816 - № 2 - C.119-131.

119. Macdonald-Obermann J.L. Different Epidermal Growth Factor (EGF) Receptor Ligands Show Distinct Kinetics and Biased or Partial Agonism for Homodimer and Heterodimer Formation / Macdonald-Obermann J.L., Pike L.J. // The Journal of Biological Chemistry - 2014. - T. 289 - № 38 - C.26178-26188.

120. Sanders J.M. Molecular Determinants of Epidermal Growth Factor Binding: A Molecular Dynamics Study / Sanders J.M., Wampole M.E., Thakur M.L., Wickstrom E. // PLoS ONE - 2013. - T. 8 - № 1 - C.e54136.

121. Oda K. A comprehensive pathway map of epidermal growth factor receptor signaling / Oda K., Matsuoka Y., Funahashi A., Kitano H. // Molecular Systems Biology - 2005. - T. 1 - № 1 - C.2005.0010.

122. Huang F. Differential Regulation of EGF Receptor Internalization and Degradation by Multiubiquitination within the Kinase Domain / Huang F., Kirkpatrick D., Jiang X., Gygi S., Sorkin A. // Molecular Cell - 2006. - T. 21 - № 6 - C.737-748.

123. Huang F. EGF receptor ubiquitination is not necessary for its internalization / Huang F., Goh L.K., Sorkin A. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2007. - T. 104 - № 43 - C.16904-16909.

124. Henriksen L. Internalization Mechanisms of the Epidermal Growth Factor Receptor after Activation with Different Ligands / Henriksen L., Grandal M.V., Knudsen S.L.J., Deurs B. van, Gravdal L.M. // PLoS ONE - 2013. - T. 8 - № 3 -C.e58148.

125. Grandal M.V. Epidermal growth factor receptor and cancer: control of oncogenic signalling by endocytosis / Grandal M.V., Madshus I.H. // Journal of Cellular and Molecular Medicine - 2008. - T. 12 - № 5a - C.1527-1534.

126. Oksvold M.P. Immunocytochemical Localization of Shc and Activated EGF Receptor in Early Endosomes After EGF Stimulation of HeLa Cells / Oksvold M.P., Skarpen E., Lindeman B., Roos N., Huitfeldt H.S. // Journal of Histochemistry & Cytochemistry - 2000. - T. 48 - № 1 - C.21-33.

127. Woodman P. ESCRT proteins, endosome organization and mitogenic receptor down-regulation / Woodman P. // Biochemical Society Transactions - 2009. -T. 37 - № 1 - C.146-150.

128. Kong C. Rin1 Interacts with Signal-transducing Adaptor Molecule (STAM) and Mediates Epidermal Growth Factor Receptor Trafficking and Degradation / Kong

C., Su X., Chen P.-I., Stahl P.D. // Journal of Biological Chemistry - 2007. - Т. 282 -№ 20 - С.15294-15301.

129. De Melker A.A. c-Cbl ubiquitinates the EGF receptor at the plasma membrane and remains receptor associated throughout the endocytic route / De Melker A.A., Van Der Horst G., Calafat J., Jansen H., Borst J. // Journal of Cell Science - 2001.

- Т. 114 - № 11 - С.2167-2178.

130. Меликова М.С. Влияние синтетического ингибитора протеасом MG132 на динамику эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов в клетках А431 / Меликова М.С., Аксенов А.А., Никольский Н.Н., Корнилова Е.С. // Цитология - 2004. - Т. 46 - № 7 - С.601-608.

131. Sadowski L. Signaling from endosomes: Location makes a difference / Sadowski L., Pilecka I., Miaczynska M. // Experimental Cell Research - 2009. - Т. 315

- № 9 - С.1601-1609.

132. Zhou J. Adaptor protein APPL1 interacts with EGFR to orchestrate EGF-stimulated signaling / Zhou J., Liu H., Zhou S., He P., Liu X. // Science Bulletin - 2016.

- Т. 61 - № 19 - С.1504-1512.

133. Ritt D.A. KSR Regulation of the Raf-MEK-ERK Cascade Elsevier, 2006. -224-237с.

134. McKay M.M. Integrating signals from RTKs to ERK/MAPK / McKay M.M., Morrison D.K. // Oncogene - 2007. - Т. 26 - № 22 - С.3113-3121.

135. Iyer A.K.V. Cell surface restriction of EGFR by a tenascin cytotactin-encoded EGF-like repeat is preferential for motility-related signaling / Iyer A.K.V., Tran K.T., Griffith L., Wells A. // Journal of Cellular Physiology - 2008. - Т. 214 - № 2 - С.504-512.

136. Kolch W. Coordinating ERK/MAPK signalling through scaffolds and inhibitors / Kolch W. // Nature Reviews Molecular Cell Biology - 2005. - Т. 6 - № 11

- С.827-837.

137. Huang L. Simulating EGFR-ERK Signaling Control by Scaffold Proteins KSR and MP1 Reveals Differential Ligand-Sensitivity Co-Regulated by Cbl-CIN85 and

Endophilin / Huang L., Pan C.Q., Li B., Tucker-Kellogg L., Tidor B., Chen Y., Low B.C. // PLoS ONE - 2011. - T. 6 - № 8 - C.e22933.

138. Ebner R. Epidermal growth factor and transforming growth factor-a: differential intracellular routing and processing of ligand-receptor complexes. / Ebner R., Derynck R. // Cell Regulation - 1991. - T. 2 - № 8 - C.599-612.

139. Roepstorff K. Differential Effects of EGFR Ligands on Endocytic Sorting of the Receptor / Roepstorff K., Grandal M.V., Henriksen L., Knudsen S.L.J., Lerdrup M., Gr0vdal L., Willumsen B.M., Deurs B. van // Traffic - 2009. - T. 10 - № 8 - C.1115-1127.

140. Melikova M. Two different stages of epidermal growth factor (EGF) receptor endocytosis are sensitive to free ubiquitin depletion produced by proteasome inhibitor MG132 / Melikova M., Kondratov K., Kornilova E. // Cell Biology International - 2005. - C.S106569950500226X.

141. Herbst R.S. Review of epidermal growth factor receptor biology / Herbst R.S. // International Journal of Radiation Oncology-Biology-Physics - 2004. - T. 59 -№ 2 - C.S21-S26.

142. Kim M.A. EGFR in gastric carcinomas: prognostic significance of protein overexpression and high gene copy number / Kim M.A., Lee H.S., Lee H.E., Jeon Y.K., Yang H.K., Kim W.H. // Histopathology - 2008. - T. 52 - № 6 - C.738-746.

143. Addeo R. Erlotinib: early clinical development in brain cancer / Addeo R., Zappavigna S., Parlato C., Caraglia M. // Expert Opinion on Investigational Drugs -2014. - T. 23 - № 7 - C.1027-1037.

144. Foley J. EGFR signaling in breast cancer: Bad to the bone / Foley J., Nickerson N.K., Nam S., Allen K.T., Gilmore J.L., Nephew K.P., Riese D.J. // Seminars in Cell & Developmental Biology - 2010. - T. 21 - № 9 - C.951-960.

145. Wee P. Epidermal Growth Factor Receptor Cell Proliferation Signaling Pathways / Wee P., Wang Z. // Cancers - 2017. - T. 9 - № 5 - C.52.

146. Sellmann C. Balancing Selectivity and Efficacy of Bispecific Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) x c-MET Antibodies and Antibody-Drug Conjugates /

Sellmann C., Doerner A., Knuehl C., Rasche N., Sood V., Krah S., Rhiel L., Messemer A., Wesolowski J., Schuette M., Becker S., Toleikis L., Kolmar H., Hock B. // Journal of Biological Chemistry - 2016. - T. 291 - № 48 - C.25106-25119.

147. Haigler H. Visualization by fluorescence of the binding and internalization of epidermal growth factor in human carcinoma cells A-431. / Haigler H., Ash J.F., Singer S.J., Cohen S. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 1978. - T. 75 - № 7 - C.3317-3321.

148. Xu Y.H. Characterization of epidermal growth factor receptor gene expression in malignant and normal human cell lines. / Xu Y.H., Richert N., Ito S., Merlino G.T., Pastan I. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 1984. -T. 81 - № 23 - C.7308-7312.

149. Bachran D. Epidermal growth factor receptor expression affects the efficacy of the combined application of saponin and a targeted toxin on human cervical carcinoma cells / Bachran D., Schneider S., Bachran C., Urban R., Weng A., Melzig M.F., Hoffmann C., Kaufmann A.M., Fuchs H. // International Journal of Cancer -2010. - T. 127 - № 6 - C.1453-1461.

150. Takata M. Lack of AKT activation in lung cancer cells with EGFR mutation is a novel marker of cetuximab sensitivity / Takata M., Chikumi H., Miyake N., Adachi K., Kanamori Y., Yamasaki A., Igishi T., Burioka N., Nanba E., Shimizu E. // Cancer Biology and Therapy - 2012. - T. 13 - № 6 - C.369-378.

151. Berkers J.A. Three classes of epidermal growth factor receptors on HeLa cells. / Berkers J.A., Bergen en Henegouwen P.M. van, Boonstra J. // Journal of Biological Chemistry - 1991. - T. 266 - № 2 - C.922-927.

152. Hanahan D. Hallmarks of Cancer: The Next Generation / Hanahan D., Weinberg R.A. // Cell - 2011. - T. 144 - № 5 - C.646-674.

153. Suzuki K. Ascites sarcoma 180, a tumor associated with hypercalcemia, secretes potent bone-resorbing factors including transforming growth factor-a, interleukin-1a and interleukin-6 / Suzuki K., Yamada S. // Bone and Mineral - 1994. -T. 27 - № 3 - C.219-233.

154. Frattini V. The integrated landscape of driver genomic alterations in glioblastoma / Frattini V., Trifonov V., Chan J.M., Castano A., Lia M., Abate F., Keir S.T., Ji A.X., Zoppoli P., Niola F., Danussi C., Dolgalev I., Porrati P., Pellegatta S., Heguy A., Gupta G., Pisapia D.J., Canoll P., Bruce J.N., McLendon R.E., Yan H., Aldape K., Finocchiaro G., Mikkelsen T., Privé G.G., Bigner D.D., Lasorella A., Rabadan R., Iavarone A. // Nature Genetics - 2013. - T. 45 - № 10 - C.1141-1149.

155. Reya T. Stem cells, cancer, and cancer stem cells / Reya T., Morrison S.J., Clarke M.F., Weissman I.L. // Nature - 2001. - T. 414 - № 6859 - C.105-111.

156. Yu S.-J. ß-Catenin Accumulation is Associated with Increased Expression of Nanog Protein and Predicts Maintenance of MSC Self-Renewal / Yu S.-J., Kim H.-J., Lee E.S., Park C.-G., Cho S.J., Jeon S.-H. // Cell Transplantation - 2017. - T. 26 - № 2 - C.365-377.

157. Yang K. The evolving roles of canonical WNT signaling in stem cells and tumorigenesis: implications in targeted cancer therapies / Yang K., Wang X., Zhang H., Wang Z., Nan G., Li Y., Zhang F., Mohammed M.K., Haydon R.C., Luu H.H., Bi Y., He T.-C. // Laboratory Investigation - 2016. - T. 96 - № 2 - C.116-136.

158. Knight C. Epidermal growth factor can signal via ß-catenin to control proliferation of mesenchymal stem cells independently of canonical Wnt signalling / Knight C., James S., Kuntin D., Fox J., Newling K., Hollings S., Pennock R., Genever P. // Cellular Signalling - 2019. - T. 53 - C.256-268.

159. Fuchs E. Tissue Stem Cells: Architects of Their Niches / Fuchs E., Blau H.M. // Cell Stem Cell - 2020. - T. 27 - № 4 - C.532-556.

160. Tamama K. Epidermal Growth Factor (EGF) Treatment on Multipotential Stromal Cells (MSCs). Possible Enhancement of Therapeutic Potential of MSC / Tamama K., Kawasaki H., Wells A. // Journal of Biomedicine and Biotechnology -2010. - T. 2010 - C.1-10.

161. Krampera M. HB-EGF/HER-1 signaling in bone marrow mesenchymal stem cells: inducing cell expansion and reversibly preventing multilineage differentiation /

Krampera M., Pasini A., Rigo A., Scupoli M.T., Tecchio C., Malpeli G., Scarpa A., Dazzi F., Pizzolo G., Vinante F. // Blood - 2005. - T. 106 - № 1 - C.59-66.

162. Gharibi B. Akt- and Erk-mediated regulation of proliferation and differentiation during PDGFRß-induced MSC self-renewal / Gharibi B., Ghuman M.S., Hughes F.J. // Journal of Cellular and Molecular Medicine - 2012. - T. 16 - № 11 -C.2789-2801.

163. Wang Y. TGF-a increases human mesenchymal stem cell-secreted VEGF by MEK- and PI3-K- but not JNK- or ERK-dependent mechanisms / Wang Y., Crisostomo P.R., Wang M., Markel T.A., Novotny N.M., Meldrum D.R. // American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology - 2008. - T. 295 - № 4 - C.R1115-R1123.

164. Aghajanova L. HB-EGF but Not Amphiregulin or Their Receptors HER1 and HER4 Is Altered in Endometrium of Women With Unexplained Infertility / Aghajanova L., Bjuresten K., Altmäe S., Landgren B.-M., Stavreus-Evers A. // Reproductive Sciences - 2008. - T. 15 - № 5 - C.484-492.

165. Jasonni V.M. Progestin effects on epidermal growth factor receptor (EGFR) endometrial expression in normal and hyperplastic endometrium / Jasonni V.M., La Marca A., Santini D. // International Journal of Gynecology & Obstetrics - 2005. - T. 89 - № 3 - C.297-298.

166. Morishige K. Menstrual stage-specific expression of epidermal growth factor and transforming growth factor-D in human oviduct epithelium and their role in early embryogenesis. / Morishige K., Kurachi H., Amemiya K., Adachi H., Adachi K., Sakoyama Y., Miyake A., Tanizawa O. // Endocrinology - 1993. - T. 133 - № 1 -C.199-207.

167. Bulletti C. Basement Membrane in Human Endometrium: Possible Role of Proteolytic Enzymes in Developing Hyperplasia and Carcinoma / Bulletti C., Jasonni V.M., Polli V., Cappuccini F., Galassi A., Flamigni C. // Annals of the New York Academy of Sciences - 1991. - T. 622 - № 1 The Primate E - C.376-382.

168. Yue Z.P. Epidermal growth factor family in rhesus monkey uterus during the menstrual cycle and early pregnancy / Yue Z.P., Yang Z.M., Li S.J., Wang H.B., Harper M.J.K. // Molecular Reproduction and Development - 2000. - T. 55 - № 2 - C.164-174.

169. Lockwood C.J. Decidual Cell-Expressed Tissue Factor Maintains Hemostasis in Human Endometrium / Lockwood C.J., Krikun G., Schatz F. // Annals of the New York Academy of Sciences - 2001. - T. 943 - № 1 - C.77-88.

170. Schwenke M. Control of Human Endometrial Stromal Cell Motility by PDGF-BB, HB-EGF and Trophoblast-Secreted Factors / Schwenke M., Knöfler M., Velicky P., Weimar C.H.E., Kruse M., Samalecos A., Wolf A., Macklon N.S., Bamberger A.-M., Gellersen B. // PLoS ONE - 2013. - T. 8 - № 1 - C.e54336.

171. Erikson D.W. Inhibition of epidermal growth factor receptor restores decidualization markers in stromal fibroblasts from women with endometriosis / Erikson D.W., Chen J.C., Piltonen T.T., Conti M., Irwin J.C., Giudice L.C. // Journal of Endometriosis and Pelvic Pain Disorders - 2014. - T. 6 - № 4 - C.196-211.

172. Lessey B.A. Regulated expression of heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF) in the human endometrium: A potential paracrine role during implantation / Lessey B.A., Gui Y., Apparao K.B.C., Young S.L., Mulholland J. // Molecular Reproduction and Development - 2002. - T. 62 - № 4 - C.446-455.

173. Martin K.L. Heparin-binding epidermal growth factor significantly improves human blastocyst development and hatching in serum-free medium / Martin K.L., Barlow D.H., Sargent I.L. // Human Reproduction - 1998. - T. 13 - № 6 - C.1645-1652.

174. Zamah A.M. Human oocyte maturation is dependent on LH-stimulated accumulation of the epidermal growth factor-like growth factor, amphiregulinf / Zamah A.M., Hsieh M., Chen J., Vigne J.L., Rosen M.P., Cedars M.I., Conti M. // Human Reproduction - 2010. - T. 25 - № 10 - C.2569-2578.

175. Berasain C. Amphiregulin / Berasain C., Avila M.A. // Seminars in Cell & Developmental Biology - 2014. - T. 28 - C.31-41.

176. Das S.K. Amphiregulin is an implantation-specific and progesterone-regulated gene in the mouse uterus. / Das S.K., Chakraborty I., Paria B.C., Wang X.N., Plowman G., Dey S.K. // Molecular Endocrinology - 1995. - Т. 9 - № 6 - С.691-705.

177. Guerard M. Nuclear translocation of IGF1R by intracellular amphiregulin contributes to the resistance of lung tumour cells to EGFR-TKI / Guerard M., Robin T., Perron P., Hatat A.-S., David-Boudet L., Vanwonterghem L., Busser B., Coll J.-L., Lantuejoul S., Eymin B., Hurbin A., Gazzeri S. // Cancer Letters - 2018. - Т. 420 -С.146-155.

178. Stoll S.W. Membrane-Tethered Intracellular Domain of Amphiregulin Promotes Keratinocyte Proliferation / Stoll S.W., Stuart P.E., Lambert S., Gandarillas

A., Rittie L., Johnston A., Elder J.T. // Journal of Investigative Dermatology - 2016. -Т. 136 - № 2 - С.444-452.

179. Земелько В.И. Мультипотентные мезенхимные стволовые клетки десквамированного эндометрия. Выделение, характеристика и использование в качестве фидерного слоя для культивирования эмбриональных стволовых линий человека / Земелько В.И., Гринчук Т.М., Домнина А.П., Арцыбашева И.В., Зенин

B.В., Кирсанов А.А., Бичевая Н.К., Корсак В.С., Никольский Н.Н. // Цитология -2011. - Т. 53 - № 12 - С.919-929.

180. Ochiai A. Resveratrol inhibits decidualization by accelerating downregulation of the CRABP2-RAR pathway in differentiating human endometrial stromal cells / Ochiai A., Kuroda K., Ozaki R., Ikemoto Y., Murakami K., Muter J., Matsumoto A., Itakura A., Brosens J.J., Takeda S. // Cell Death & Disease - 2019. - Т. 10 - № 4 - С.276.

181. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 / Laemmli U.K. // Nature - 1970. - Т. 227 - № 5259 -

C.680-685.

182. Moghbeli M. ErbB1 and ErbB3 co-over expression as a prognostic factor in gastric cancer / Moghbeli M., Makhdoumi Y., Soltani Delgosha M., Aarabi A.,

Dadkhah E., Memar B., Abdollahi A., Abbaszadegan M.R. // Biological Research -2019. - T. 52 - № 1 - C.2.

183. Steel L. PPIA and YWHAZ Constitute a Stable Pair of Reference Genes during Electrical Stimulation in Mesenchymal Stem Cells / Steel L., Ansell D.M., Amaya E., Cartmell S.H. // Applied Sciences - 2021. - T. 12 - № 1 - C.153.

184. Berg S. Ilastik: Interactive Machine Learning for (Bio)Image Analysis / Berg S., Kutra D., Kroeger T., Straehle C.N., Kausler B.X., Haubold C., Schiegg M., Ales J., Beier T., Rudy M., Eren K., Cervantes J.I., Xu B., Beuttenmueller F., Wolny A., Zhang C., Koethe U., Hamprecht F.A., Kreshuk A. // Nature Methods - 2019. - T. 16 - № 12 - C.1226-1232.

185. Cordelières F.P. 3D Quantitative Colocalisation Analysis Learning Materials in Biosciences / Springer, Cham, 2020. - 33-66c.

186. Schneider C.A. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis / Schneider C.A., Rasband W.S., Eliceiri K.W. // Nature Methods - 2012. - T. 9 - № 7 -C.671-675.

187. R Core Team R: A Language and Environment for Statistical Computing // -

2015.

188. Chen T.R. SK-UT-1B, a human tumorigenic diploid cell line / Chen T.R. // Cancer Genetics and Cytogenetics - 1988. - T. 33 - № 1 - C.77-81.

189. Favaro R. Decidualization and Endometrial Extracellular Matrix Remodeling Elsevier, 2014. - 125-142c.

190. Gellersen B. Cyclic Decidualization of the Human Endometrium in Reproductive Health and Failure / Gellersen B., Brosens J.J. // Endocrine Reviews -2014. - T. 35 - № 6 - C.851-905.

191. Gorsek Sparovec T. The fate of human SUSD2+ endometrial mesenchymal stem cells during decidualization / Gorsek Sparovec T., Markert U.R., Reif P., Schoell W., Moser G., Feichtinger J., Mihalic Z.N., Kargl J., Gargett C.E., Gold D. // Stem Cell Research - 2022. - T. 60 - C.102671.

192. Shoyab M. Amphiregulin: a bifunctional growth-modulating glycoprotein produced by the phorbol 12-myristate 13-acetate-treated human breast adenocarcinoma cell line MCF-7 / Shoyab M., McDonald V.L., Bradley J.G., Todaro G.J. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 1988. - T. 85 - № 17 - C.6528-6532.

193. Sorkin A. Recycling of epidermal growth factor-receptor complexes in A431 cells / Sorkin A., Kornilova E., Teslenko L., Sorokin A., Nikolsky N. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Cell Research - 1989. - T. 1011 - № 1 - C.88-96.

194. Mark P. Human Mesenchymal Stem Cells Display Reduced Expression of CD105 after Culture in Serum-Free Medium / Mark P., Kleinsorge M., Gaebel R., Lux C.A., Toelk A., Pittermann E., David R., Steinhoff G., Ma N. // Stem Cells International - 2013. - T. 2013 - C.1-8.

195. Domnina A. Human mesenchymal stem cells in spheroids improve fertility in model animals with damaged endometrium / Domnina A., Novikova P., Obidina J., Fridlyanskaya I., Alekseenko L., Kozhukharova I., Lyublinskaya O., Zenin V., Nikolsky N. // Stem Cell Research and Therapy - 2018. - T. 9 - № 1 - C.50.

196. Kawamoto T. Growth stimulation of A431 cells by epidermal growth factor: identification of high-affinity receptors for epidermal growth factor by an anti-receptor monoclonal antibody. / Kawamoto T., Sato J.D., Le A., Polikoff J., Sato G.H., Mendelsohn J. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 1983. - T. 80 - № 5 - C.1337-1341.

197. Le Gall S.M. Regulated Cell Surface Pro-EGF Ectodomain Shedding Is a Zinc Metalloprotease-dependent Process / Le Gall S.M., Auger R., Dreux C., Mauduit P. // Journal of Biological Chemistry - 2003. - T. 278 - № 46 - C.45255-45268.

198. Lockwood C.J. Progestin-Epidermal Growth Factor Regulation of Tissue Factor Expression during Decidualization of Human Endometrial Stromal Cells / Lockwood C.J., Krikun G., Runic R., Schwartz L.B., Mesia A.F., Schatz F. // The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism - 2000. - T. 85 - № 1 - C.5.

199. Lim H.J. HB-EGF: A unique mediator of embryo-uterine interactions during implantation / Lim H.J., Dey S.K. // Experimental Cell Research - 2009. - T. 315 - № 4 - C.619-626.

200. Sakamoto T. Epidermal Growth Factor Inhibits 8-Br-cAMP-Induced Decidualization of Human Endometrial Stromal Cells / Sakamoto T., Tanaka T., Umesaki N., Ogita S. // Hormone Research in Paediatrics - 2001. - T. 53 - № 6 -C.294-299.

201. Cheung V.C. Pluripotent stem cell-derived endometrial stromal fibroblasts in a cyclic, hormone-responsive, coculture model of human decidua / Cheung V.C., Peng C.-Y., Marinic M., Sakabe N.J., Aneas I., Lynch V.J., Ober C., Nobrega M.A., Kessler J.A. // Cell Reports - 2021. - T. 35 - № 7 - C.109138.

202. Stern K.A. EGF and amphiregulin differentially regulate Cbl recruitment to endosomes and EGF receptor fate / Stern K.A., Place T.L., Lill N.L. // Biochemical Journal - 2008. - T. 410 - № 3 - C.585-594.

203. Deb T.B. Epidermal Growth Factor (EGF) Receptor Kinase-independent Signaling by EGF / Deb T.B., Su L., Wong L., Bonvini E., Wells A., David M., Johnson G.R. // Journal of Biological Chemistry - 2001. - T. 276 - № 18 - C.15554-15560.

204. Refaat A. Role of tyrosine kinase-independent phosphorylation of EGFR with activating mutation in cisplatin-treated lung cancer cells / Refaat A., Aminullah, Zhou Y., Kawanishi M., Tomaru R., Abdelhamed S., Shin M.-S., Koizumi K., Yokoyama S., Saiki I., Sakurai H. // Biochemical and Biophysical Research Communications - 2015. - T. 458 - № 4 - C.856-861.

205. Abrahamsen H. Ubiquitination and phosphorylation of Beclin 1 and its binding partners: Tuning class III phosphatidylinositol 3-kinase activity and tumor suppression / Abrahamsen H., Stenmark H., Platta H.W. // FEBS Letters - 2012. - T. 586 - № 11 - C.1584-1591.

206. Pavlinov I. Beclin 1-ATG14L Protein-Protein Interaction Inhibitor Selectively Inhibits Autophagy through Disruption of VPS34 Complex I / Pavlinov I.,

Salkovski M., Aldrich L.N. // Journal of the American Chemical Society - 2020. - Т. 142 - № 18 - С.8174-8182.

207. Birgisdottir Ä.B. Autophagy and endocytosis - interconnections and interdependencies / Birgisdottir Ä.B., Johansen T. // Journal of Cell Science - 2020. -Т. 133 - № 10 - C.jcs228114.

208. Bilanges B. PI3K isoforms in cell signalling and vesicle trafficking / Bilanges B., Posor Y., Vanhaesebroeck B. // Nature Reviews Molecular Cell Biology -2019. - Т. 20 - № 9 - С.515-534.

209. Coccia M.E. Endometriosis and Infertility: A Long-Life Approach to Preserve Reproductive Integrity / Coccia M.E., Nardone L., Rizzello F. // International Journal of Environmental Research and Public Health - 2022. - Т. 19 - № 10 - С.6162.

210. Poorasamy J. Overexpression of ErbB-1 (EGFR) Protein in Eutopic Endometrium of Infertile Women with Severe Ovarian Endometriosis during the 'Implantation Window' of Menstrual Cycle / Poorasamy J., Garg D., Bharti J., Nambirajan A., Patil A., Sengupta J., Ghosh D. // Reproductive Medicine - 2022. - Т. 3 - № 4 - С.280-296.

211. Nollet M. A novel anti-CD146 antibody specifically targets cancer cells by internalizing the molecule / Nollet M., Stalin J., Moyon A., Traboulsi W., Essaadi A., Robert S., Malissen N., Bachelier R., Daniel L., Foucault-Bertaud A., Gaudy-Marqueste C., Lacroix R., Leroyer A.S., Guillet B., Bardin N., Dignat-George F., Blot-Chabaud M. // Oncotarget - 2017. - Т. 8 - № 68 - С.112283-112296.

212. Marwaha R. DQ-Red BSA Trafficking Assay in Cultured Cells to Assess Cargo Delivery to Lysosomes / Marwaha R., Sharma M. // BIO-PROTOCOL - 2017. -Т. 7 - № 19.

213. Kaidor. Диаграмма, иллюстрирующая гормональные и гистологические изменения в ходе Менструального цикла / Kaidor - 2014. - URL: https://commons.wikimedia.org/wiki/File:MenstrualCycle_-_ru.svg?uselang=ru