Характеристика новых модульных нанотранспортёров для доставки эмиттеров электронов Оже в ядра клеток-мишеней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Карягина Татьяна Сергеевна

• Карягина Татьяна Сергеевна
• кандидат наук
• 2021

Оглавление диссертации кандидат наук Карягина Татьяна Сергеевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Цели и задачи исследования

Научная новизна, теоретическая и практическая значимость работы

Методология и методы исследования

Положения, выносимые на защиту

Степень достоверности и апробация результатов

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Личное участие автора в проведении исследований

Структура и объем работы

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Ядро как целевой компартмент для внутриклеточной доставки лекарств и других биологически активных веществ

1.2 Использование естественных процессов транспорта полипептидов и белков из цитоплазмы в ядро

1.2.1 Строение ядерного порового комплекса (ЯПК)

1.2.2 Сигналы ядерной локализации

1.2.3 Ядерные транспортные рецепторы

1.2.4 Яаи-цикл

1.2.5 Импорт макромолекул через ЯПК

1.2.6 Регуляция переноса макромолекул через ЯПК

1.3 Варианты конструкций для доставки в ядро с использованием цитоплазменно-ядерного транспорта

1.3.1 КЬБ-опосредованный транспорт через ЯПК

1.3.2 Рецептор-опосредованный транспорт через ЯПК

1.4 Доставка цитотоксических агентов в ядро с помощью модульных нанотранспортеров

1.5 Характеристика рецепторов эпидермального фактора роста, фолатного рецептора и их лигандов

1.5.1 Строение рецептора к эпидермальному фактору роста

1.5.2 Активация рецептора к эпидермальному фактору роста, основные сигнальные каскады и влияние их на жизнедеятельность клеток

1.5.3 Характеристика лигандов к EGFR, транспортирующих цитотоксические агенты

1.5.3.1 EGF

1.5.3.2 Трансформирующий фактор-а

1.5.3.3 Антитела и их производные

1.5.3.4 Альтернативные каркасные белки, связывающиеся с EGFR

1.5.4 Строение фолатных рецепторов

1.5.5 Двойная функция фолатного рецептора, основные сигнальные каскады и влияние их на жизнедеятельность клеток фолатному

1.5.6 Характеристика лиганда к рецептору, транспортирующего цитотоксические агенты 44 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Структура МНТ

2.2 Плазмиды, кодирующие МНТ

2.3 Экспрессия МНТ в клетках бактерий E. соН

2.4 Выделение, очистка и рефолдинг МНТ

2.5 Измерение концентрации белка

2.6 Электрофорез белков

2.7 Фолатирование безлигандного МНТ и оценка модификации

2.8 Культивирование клеток

2.9 Получение и очистка липосом, нагруженных флуоресцентным красителем -кальцеином

2.10 Оценка мембранолитической активности МНТ

2.11 Получение препаратов а- и ß-импортинов

2.11.1 Плазмиды, кодирующие а- и ß-импортины

2.11.2 Экспрессия импортинов в клетках E. coli

2.11.3 Выделение и очистка а-импортина

2.11.4 Выделение и очистка ß-импортина

2.11.5 Конъюгирование ß-импортина с Cy3 красителем

2.12 Анализ связывания МНТ с а/р импортинами методом термофореза

2.13 Получение конъюгатов МНТ с Alexa Fluor 647 и АТТО 647N

2.14 Исследование способности к специфической рецептор-опосредованной интернализиции флуоресцентно меченных МНТ методом проточной цитометрии

2.15 Определение внутриклеточной локализации МНТ в клетках, сверхэкспрессирующих соответствующие рецепторы, методом конфокальной лазерной микроскопии

2.16 Оценка влияния МНТ на пролиферацию клеток

2.17 Получение ш1п-меченных МНТ с использованием p-SCN-Bn-NOTA

2.17.1 Конъюгация МНТ с хелатором p-SCN-Bn-NOTA

2.17.2 Мечение конъюгатов NOTA-МНТ 111In

2.18 Накопление в ядрах клеток ш1п-№ОТА-МНТ

2.19 Исследование цитотоксичности 1111п-меченных МНТ для клеток со сверхэкспрессией соответствующих рецепторов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Получение и очистка МНТ

3.2 Фолатирование безлигандного МНТ

3.3 Проверка функциональной активности эндосомолитического модуля

3.4 Анализ связывания МНТ с а/р импортинами методом термофореза

3.5 Конъюгация МНТ с Alexa Fluor

3.6 Проточная цитометрия

3.7 Конфокальная лазерная микроскопия

3.8 Влияние МНТ на пролиферацию клеток-мишеней

3.9 Цитотоксичность 1111п-меченных МНТ

3.10 Накопление в ядрах клеток 1111п-меченных МНТ

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1 Оценка функциональной активности модулей новых МНТ

4.2 Специфичность интернализации и накопление МНТ в ядрах клеток-мишеней

4.3 Влияние МНТ на пролиферацию клеток-мишеней

4.4 Цитотоксический эффект ш1п-меченных МНТ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АФК - активные формы кислорода

БСА - бычий сывороточный альбумин

ГДФ - гуанозиндифосфат

ГТФ - гуанозинтрифосфат

ЛПЭ - линейная передача энергии

МНТ - модульные нанотранспортёры

МНТб/л - МНТ без лигандного модуля

МНТс-egf - МНТ с EGF на С-конце молекулы

MHTn-egf - МНТ с EGF на N-конце молекулы

МНТN -аффибоди - МНТ с аффибоди на N-конце молекулы

МНТ-ПЭГ-Ф - МНТ c присоединенным малеимид-ПЭГ-фолатом

МСГ - меланоцитостимулирующий гормон

ПЭГ - полиэтиленгиколь

ФГ-нуклеопорины - фенилаланин-глициновые нуклеопорины

ФДТ - фотодинамическая терапия

ФС - фотосенсибилизаторы

ЯПК - ядерный поровый комплекс

ЯТР - ядерные транспортные рецепторы

DOTA - dodecane tetraacetic acid - додекантетрауксусная кислота

DTox - diphtheria toxin translocation domain - транслокационный домен дифтерийного токсина DTPA - diethylenetriamine pentaacetic acid - диэтилентриаминпентауксусная кислота EGF - epidermal growth factor - эпидермальный фактор роста

EGFR - epidermal growth factor receptor - рецептор к эпидермальному фактору роста

hEGFR - human epidermal growth factor receptor - рецептор к эпидермальному фактору роста

человека

mEGFR - mouse epidermal growth factor receptor - рецептор к эпидермальному фактору роста мыши

FGF - fibroblast growth factor - фактор роста фибробластов FR - folate receptor - фолатный рецептор

HB-EGF - heparin-binding EGF-like growth factor - гепарин-связывающий EGF-подобный фактор роста

HMP - hemoglobin-like protein of E. coli - гемоглобиноподобный белок E. coli

Mab - monoclonal antibodies - моноклональные антитела

NGF - nerve growth factor - фактор роста нервов

NLS - nuclear localization signal - сигнал ядерной локализации

NOTA - 2,2',2" - (1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triyl)triacetic acid - 2,2',2"-(1,4,7-триациклонан-1,4,7-триил)трёхуксусная кислота

TGF-a - transforming growth factor-a - трансформирующий фактор роста a PBS - phosphate-buffered saline - натрий-фосфатный буфер

PCFT - proton-coupled folate transporter - протон-сопряженный транспортер фолатов PKC - protein kinase C - протеинкиназа С PLC - phospholipase C - фосфолипаза С

RFC - reduced folate carrier - переносчик восстановленного фолата

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика новых модульных нанотранспортёров для доставки эмиттеров электронов Оже в ядра клеток-мишеней»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы

Локально действующие цитотоксические агенты, такие, как, в частности, эмиттеры электронов Оже, имеют большой терапевтический потенциал, поскольку испущенные ими электроны Оже обладают, с одной стороны, высокой линейной передачей энергии, что приводит к повреждению биомолекул, а с другой - практически не оказывают повреждающего воздействия за пределами нескольких десятков нанометров от своего места расположения [105]. Для лечения обширного спектра заболеваний, для которых требуется избирательное уничтожение клеток-мишеней, использование эмиттеров электронов Оже приведёт к минимизации побочных эффектов. Однако максимального цитотоксического эффекта электронов Оже для клетки возможно достичь только при условии нахождения эмиттера внутри клеточного ядра, в непосредственной близости от молекул ДНК, являющихся основной мишенью для их поражающего действия [105, 242]. Для выполнения данного условия необходимо создание системы, позволяющей транспортировать эмиттеры электронов Оже внутрь ядер клеток-мишеней. Помимо способности транспортироваться в ядро, такая система должна быть способна к специфическому узнаванию клеток-мишеней. Эту возможность предоставляет использование механизма специфического лиганд-рецепторного взаимодействия. Для ряда заболеваний, таких как, например, различные онкологические заболевания, характерна сверхэкспрессия рецепторов определённого типа на поверхности опухолевых клеток, тогда как в норме эти рецепторы не экспрессированы, либо экспрессированы в незначительном числе, либо находятся в недоступной для связывания с лигандом форме. К таким рецепторам относятся, в частности, рецептор к эпидермальному фактору роста (БОБЯ) и фолатный рецептор а (FRа). Сверхэкспрессия БОБЯ характерна для раковых клеток при глиобластоме, немелкоклеточном раке лёгких, раке поджелудочной железы, мочевого пузыря, молочной железы, простаты, шейки матки. БЯа сверхэкспрессирован на раковых клетках при раке шейки матки, яичника, молочной железы, лёгкого, мезотелия, толстой кишки, кожи (меланома).

Направленную доставку эмиттеров электронов Оже возможно осуществлять, используя естественные процессы транспорта макромолекул в клетке. Разработанные ранее в нашей лаборатории полипептидные конструкции - модульные нанотранспортёры (МНТ) -

используют данный принцип. МНТ имеют универсальное строение, имея в своём составе несколько модулей, способных подвергаться замене и модификациям. В их состав обычно входят: 1) лигандный модуль, осуществляющий избирательное взаимодействие с интернализуемыми рецепторами на поверхности клеток-мишеней; 2) эндосомолитический модуль, обуславливающий выход МНТ из эндоцитозного компартмента. Роль данного модуля выполнял фрагмент транслокационного домена дифтерийного токсина (DTox); 3) NLS-модуль - модуль, содержащий оптимизированный сигнал ядерной локализации (NLS) большого Т-антигена вируса SV-40, благодаря которому МНТ может переноситься в ядро через ядерную пору; и 4) модуль-носитель, в качестве которого используется гемоглобиноподобный белок HMP E. Coli. [6]. Модуль-носитель объединяет все модули в единую структуру и разносит их в пространстве, а также является платформой для присоединения цитотоксического агента.

Для разработанных ранее транспортёров было показано, что каждый из модулей не препятствует функциональной активности остальных модулей. Основываясь на предыдущих успехах по переносу посредством МНТ локально действующих цитотоксических агентов в ядра клеток-мишеней на моделях in vitro и in vivo [68, 119, 189, 217], было решено разработать новый вариант МНТ, связывающийся с фолатным рецептором a (FRa), а также новый вариант, связывающийся с рецептором к эпидермальному фактору роста (EGFR). Это позволило бы расширить палитру молекул, способных к избирательной доставке биологически активных веществ (например, эмиттеров электронов Оже) внутрь опухолевых клеток-мишеней, экспрессирующих соответствующие рецепторы.

Цели и задачи исследования

Целью настоящего исследования было изучение свойств и характеристика ряда новых модульных нанотранспортёров (МНТ), осуществляющих внутриядерную доставку эмиттеров электронов Оже в раковые клетки-мишени, сверхэкспрессирующие фолатные рецепторы или рецепторы к эпидермальному фактору роста.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить способность новых МНТ проникать в клетки-мишени и их ядра.

2. Проверить мембранолитическую активность новых МНТ в диапазоне pH, характерном для эндоцитозных везикул.

3. Оценить способность новых МНТ специфически взаимодействовать с импортинами.

4. Исследовать влияние новых МНТ на пролиферативную активность клеток-мишеней.

5. Оценить цитотоксическую эффективность эмиттера электронов Оже 111In, доставляемого в ядра клеток-мишеней посредством новых МНТ.

Научная новизна, теоретическая и практическая значимость работы

В настоящей работе были охарактеризованы новые варианты МНТ, позволяющие доставлять биологически активные вещества в ядра опухолевых клеток-мишеней, которые экспрессируют EGFR или FRa на своей поверхности. Новые МНТ, связывающиеся с EGFR (МНТк-аффибоди), имели в качестве лигандного модуля молекулу антителоподобного белка аффибоди Z1907 (в дальнейшем - просто аффибоди) на N-конце полипептидной молекулы. Аффибоди обладает преимуществом по сравнению с эпидермальным фактором роста (EGF), который был использован в качестве лигандного модуля у ранее созданного варианта МНТ. Было показано, что, в отличие от EGF, свободный аффибоди, связываясь с рецептором, не индуцировал аутофосфорилирование EGFR, и не приводил к усилению пролиферации опухолевых клеток [53, 165]. Также для свободного аффибоди было показано, что он может эффективно связываться как с человеческим EGFR (human EGFR - hEGFR), так и с мышиным EGFR (mouse EGFR - mEGFR). Это подчёркивает целесообразность использования аффибоди в качестве лигандного модуля МНТ, а также определяет преимущество для дальнейших доклинических исследований in vivo [61].

Согласно данным рентгеноструктурного анализа, аффибоди взаимодействует с EGFR участком, расположенным на №конце молекулы, что предположительно делает вконец труднодоступным для конъюгации [52]. В работах других авторов, где аффибоди использовался в составе конъюгата, аффибоди присоединяли за С-конец, который не участвует в связывании с EGFR [65, 108, 109]. Основываясь на этих данных, мы поместили аффибоди на вконец МНТ. В качестве контролей к МНТ, содержащему аффибоди, выступали МНТ с эпидермальным фактором роста EGF на N конце молекулы (МНТ^боб) и описанный ранее МНТ с эпидермальным фактором роста EGF на С- конце молекулы (МНТс-бор), а также безлигандный МНТ (МНТб/л), то есть МНТ без модульного лиганда.

МНТ, способные связываться с FRa (МНТ-ПЭГ-Ф), были впервые получены путём сайт-специфической модификации МНТб/л с помощью малеимид-полиэтилен-гликоль-фолата (малеимид-ПЭГ-Ф) (3.4 кДа). Таким образом, присоединённый фолат выступал в качестве лиганда, способного взаимодействовать с FRa. В дальнейшем МНТN -аффибоди и МНТ-ПЭГ-Ф, упоминаемые совместно, будем для краткости называть «новые МНТ».

Поскольку нельзя исключить, что изменение конструкции МНТ могло повлиять на функционирование его модулей, то необходимо было исследовать их функциональную активность для каждого из новых МНТ, изучить воздействие новых МНТ на свойства клеток-мишеней, а также оценить эффективность применения новых МНТ в качестве платформы для доставки эмиттеров электронов Оже внутрь клеточных ядер, что и было сделано в данной работе. Мы полагаем, что создание новых вариантов МНТ открывает перспективы в области избирательной доставки биологически активных веществ в ядра опухолевых клеток-мишеней, экспрессирующих соответствующие рецепторы, и может быть потенциально использовано в терапевтических целях при лечении ряда онкологических заболеваний.

Методология и методы исследования

Работа выполнена с использованием методов молекулярной биологии (трансформация бактерий, наработка, выделение и очистка белка, термофорез, вестерн-блоттинг), клеточной биологии (конфокальная микроскопия, проточная цитометрия, МТТ-тест), а также радиобиологии (измерение радиоактивности, оценка радиоцитотоксичности по колониеобразованию).

Положения, выносимые на защиту

1. Продемонстрировано, что новые МНТ проникают в клетки-мишени рецептор-опосредованным путем.

2. Показано, что новые МНТ нарушают целостность липидных мембран в диапазонах рН 5-6 и 3-4.

3. Установлено, что новые МНТ обладают способностью специфически связываться с гетеродимером а/р импортинов, которые обеспечивают цитоплазменно-ядерный транспорт.

4. Отмечено, что МНТ^аффибоди и МНТ-ПЭГ-Ф не влияют на пролиферативную активность опухолевых клеток-мишеней, экспрессирующих соответствующие рецепторы, тогда как МНТ^бор увеличивает пролиферативную активность.

5. Показано, что цитотоксический эффект эмиттера электронов Оже 1111п, доставляемого посредством МНТ^аффибоди и МНТ-ПЭГ-Ф в ядра клеток-мишеней, более чем в 100 раз превосходит цитотоксический эффект свободного 1111п.

Степень достоверности и апробация результатов

Все результаты работы, представленные к защите, являются составными частями четырёх статей, опубликованных в рецензируемых научных журналах, и представлены на четырёх научных конференциях (см. перечень в разделе «Список работ, опубликованных по теме диссертации»).

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи в журналах

1. Karyagina T.S., Ulasov A.V., Slastnikova T.A., Rosenkranz A.A., Lupanova T.N., Khramtsov Yu.V., Georgiev G.P., Sobolev A.S. Targeted delivery of 111In into the nuclei of EGFR overexpressing cells via modular nanotransporters with anti-EGFR affibody. Frontiers in Pharmacology. 2020; 11: 176

2. Карягина Т.С., Уласов А.В., Розенкранц А.А., Сластникова Т.А., Храмцов Ю.В., Лупанова Т.Н., академик Георгиев Г.П., член-корреспондент РАН Соболев А.С. Новые рекомбинантные носители, специфически связывающиеся с рецептором эпидермального фактора роста. Доклады Российской академии наук. Науки о жизни. 2020; 490: 31 - 34

3. Slastnikova T.A., Rosenkranz A.A., Khramtsov Yu.V., Karyagina T.S., Ovechko S.A., Sobolev A.S. Development and evaluation of a new modular nanotransporter for drug delivery into nuclei of pathological cells expressing folate receptors. Drug design, development and therapy. 2017; 11: 1315—1334

4. Розенкранц А.А., Сластникова Т.А., Храмцов Ю.В., Карягина Т.С., Георгиев Г.П., Соболев А.С. Противоопухолевая эффективность эмиттера электронов Оже 111In, доставляемого модульным нанотранспортёром в ядра клеток с повышенной экспрессией фолатного рецептора. Доклады Академии наук. Биохимия, биофизика, молекулярная биология. 2017; 473; 1: 98-100

Тезисы конференций

1 Карягина Т.С., Сластникова Т.А., Розенкранц А.А., Уласов А.В., Храмцов Ю.В., Лупанова Т.Н., Соболев А.С. Исследование свойств и оптимизация структуры рекомбинантных носителей для доставки противораковых средств в ядра клеток-мишеней. Успехи молекулярной онкологии. 2019. Материалы V Всероссийской конференции по молекулярной онкологии. 16-18 декабря 2019 г., Москва.

2. Карягина Т.С., Уласов А.В., Сластникова Т.А., Лупанова Т.Н., Храмцов Ю.В., Розенкранц А.А., Соболев А.С. Оптимизация структуры модульных

нанортанспортёров для эффективной доставки эмиттера электронов Оже в ядра опухолевых клеток-мишеней со сверхэкспрессией эпидермального фактора роста. XIV Международная научная конференция «Актуальные вопросы биологической физики и химии», БФФХ - 2019. Материалы XIV международной научной конференции г. Москва, 21-24 ноября 2019 г., Москва.

3. Розенкранц А.А., Сластникова Т.А., Храмцов Ю.В., Уласов А.В., Карягина Т.С., Абросимов А.С., Соболев А.С. Применение микро-ОФЭКТ в доклинических исследованиях модульных нанотранспортёров для доставки эмиттера электронов Оже индия-111 в ядра опухолевых клеток-мишеней. Второй международный форум онкологии и радиологии, Москва, 23-27 сентября 2019 г.

4. Карягина Т.С., Уласов А.В., Сластникова Т.А., Лупанова Т.Н., Храмцов Ю.В., Писарева В.А., Розенкранц А.А., Соболев А.С. Таргетная доставка 111In в ядра опухолевых клеток-мишеней с помощью модульных нанотранспортеров, нацеленных на рецепторы эпидермального фактора роста. Успехи молекулярной онкологии. 2018. Материалы IV Всероссийской конференции по молекулярной онкологии. 17-19 декабря 2018 г., Москва.

Личное участие автора в проведении исследований

Автором самостоятельно выполнен основной объем исследований. Ключевые эксперименты (трансформация бактерий, наработка и выделение белков, присоединение малеимид-ПЭГ-Ф к безлигандному МНТ, анализ связывания МНТ с а/р импортинами методом термофореза, определение внутриклеточной локализации МНТ в клетках, сверхэкспрессирующих соответствующие рецепторы, методом конфокальной лазерной микроскопии, оценка влияния МНТ на пролиферацию клеток, мечение МНТ радиоизотопом 1111п, оценка накопления в ядрах клеток-мишеней ш1п-КОТА-МНТ а также исследование цитотоксичности 1111п-меченных МНТ для клеток со сверхэкспрессией соответствующих рецепторов) были выполнены автором. Также автор внес непосредственный вклад в написание научных публикаций по теме диссертации. Некоторые эксперименты были осуществлены совместно с коллегами. Создание генно-инженерных конструкций было выполнено Уласовым А.В. Исследование способности к специфической рецептор-опосредованной интернализиции флуоресцентно меченных МНТ методом проточной цитометрии было выполнено совместно с Храмцовым Ю.В и Сластниковой Т.А. Эксперименты с радиоизотопами были выполнены на базе изотопной лаборатории биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова, некоторые из них были выполнены совместно с Розенкранцем А.А. и Сластниковой Т.А.

Структура и объем работы

Диссертационная работа состоит из введения, четырёх глав («Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты», «Обсуждение результатов»), заключения и выводов. Работа изложена на 117 страницах, содержит 20 рисунков и 1 таблицу. Список литературы включает 272 источника.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Исследования, касающиеся направленной доставки биологически активных веществ внутрь клеточных ядер, сейчас находятся в фокусе научного внимания. Однако в большинстве случаев распределение терапевтических средств внутри клеток и их нацеливание на внутриклеточные мишени все еще представляет собой серьезную проблему. Ядро, где расположены молекулы ДНК, является наиболее уязвимым клеточным компартментом для многих цитотоксических веществ [3]. Направленная доставка локально действующих (в пределах нескольких десятков нанометров) цитотоксических агентов в ядра клеток-мишеней (например, раковых клеток) увеличит эффективность агента, не вызывая при этом повреждения нормальных клеток. Соответственно, подобный подход имеет не только фундаментальное, но и практическое медицинское значение.

Однако ядерная мембрана является непроницаемым барьером для макромолекул, последние могут поступать внутрь только через ядерные поровые комплексы, обладающие избирательной проницаемостью [89, 231]. Исследование естественных механизмов ядерного импорта определяет создание транспортных систем, которые способны проходить через ядерные поры, доставляя биологически активные вещества непосредственно к молекулам ДНК, в зону максимального эффекта.

1.1 Ядро как целевой компартмент для внутриклеточной доставки лекарств и других

биологически активных веществ

Для ряда лекарственных препаратов и прочих биологически активных веществ эффективность действия напрямую зависит от их локализации не только в пределах целого организма, но и внутри клетки. Такие агенты нацелены обычно либо на цитоплазматические факторы, либо на определённые органеллы, к которым обычно относятся митохондрии, лизосомы, эндоплазматический ретикулум и клеточное ядро [97, 144, 146]. Агентами, которые необходимо доставлять в ядро, обычно являются либо те, что функционируют только там, либо те, что вызывают максимальный эффект, оказавшись в непосредственной близости от ядерной ДНК.

К первой группе относятся разнообразные молекулы нуклеиновых кислот (таких как ДНК, ш1КЫА, бИККА, антисенс-олигонуклеотиды) или белков, например,

транскрипционных факторов. Они доставляются в ядро с целью решения различных генно-инженерных, генно-терапевтических и им подобных задач, чему посвящена обширная литература [15, 97, 139, 272].

В состав второй группы входят цитотоксические агенты, которые действуют на ДНК или связанные с ней ферменты. Нерепарируемые повреждения ДНК влекут за собой гибель клетки, что имеет существенное значение, например, для противоопухолевой терапии. Примерами подобных агентов могут служить такие часто используемые химиотерапевтические противоопухолевые препараты как доксорубицин, камптотецин и цисплатин [46, 230]. Доксорубицин способен интеркалировать в ядерную ДНК и ингибировать процессинг топоизомеразы II, останавливая тем самым процесс транскрипции [147, 158]. Камптотецин и его производные связываются и стабилизируют комплекс топоизомеразы I и ДНК, что вызывает повреждения ДНК или ингибирование ферментов, участвующих в репликации ДНК [100, 145]. Цисплатин вызывает сшивки ДНК, что также приводит к остановке регуляторных процессов, транскрипции, репликации, и вызывает повреждения молекул, что в итоге приводит к апоптозу [33, 46].

Существуют различные классы цитотоксических агентов, способных вызывать повреждение многих биомолекул, но поражение ими ядерной ДНК является критическим для жизнедеятельности клетки. Иными словами, ядро является критической мишенью для этих агентов. К их числу относятся фотосенсибилизаторы, а также радионуклиды, испускающие частицы с коротким пробегом, обладающие большой линейной передачей энергии (ЛПЭ). К таким радионуклидам относятся, в первую очередь, а-эмиттеры и эмиттеры электронов Оже.

И а-частицы, и электроны Оже выгодно отличаются от широко используемого в лучевой терапии Р-излучения тем, что длина их пробега существенно ниже, чем для Р-частиц, и они имеют значительно большие величины линейной передачи энергии (ЛПЭ). При этом для них не наблюдается так называемого «кислородного эффекта» (или он значительно ослаблен), что даёт им особое преимущество для поражения гипоксических раковых клеток [104, 202]; поражение клеток а-частицами практически не зависит от стадии их клеточного цикла [234]. Длина пробега а-частиц составляет несколько десятков (50-100) цм, что соответствует нескольким клеточным диаметрам. Поэтому, хотя они и не требуют обязательной интернализации в клетки-мишени, однако при этом способны затрагивать

окружающие нормальные клетки [6, 93, 114, 242]. К а-эмиттерам, входящим в состав радиофармпрепаратов, которые находятся на стадии доклинических/клинических испытаний или применяются в клинике, относятся, например, 211Л1 [189, 242], 223Яа [162, 220, 242], 225Ле [16, 120].

И а-излучение, и электроны Оже имеют ряд схожих характеристик. Как уже отмечено, оба они обладают высоким ЛПЭ: 80-100 кэВ/мкм для частиц а-излучения и 4-26 кэВ/мкм для электронов Оже [105]. Они вызывают ионизацию и последующие повреждения молекул, и, если это происходит внутри клеточного ядра, то в первую очередь нарушается структура молекул ДНК: происходят множественные двунитевые разрывы, что в итоге ведёт к клеточной гибели. Как и а-излучение, электроны Оже вызывают плохо репарируемые повреждения ДНК [27, 93].

Однако, в отличие от а-эмиттеров, биологическая эффективность эмиттеров электронов Оже резко снижается, если распад происходит вне клеточного ядра, не в непосредственной близости от ДНК, что делает их малотоксичными на этапе распространения радиопрепарата в кровотоке [5, 27, 114]. Это происходит вследствие крайне малого пробега Оже-электронов, длина пути которых не превышает несколько нанометров/десятков нанометров. Как правило, на один распад приходится от 5 до 30 Оже-электронов [105].

Хотя в целом большое число радиоизотопов способно к испусканию некоторого количества электронов Оже, далеко не все из них рассматриваются как потенциально возможные лекарственные агенты. Некоторые эмиттеры не используются по причине слишком длинного или напротив, слишком короткого периода полураспада, что делает их малопригодными для применения в терапии [27]. На стадии исследований находятся такие эмиттеры, как, например: 67Оа [119], 1111п [45, 64, 217], 99тТс [39], хотя этот список расширяется.

Распад радионуклида сопровождается и другими излучательными процессами, и зачастую на Оже-излучение приходится всего несколько процентов от общей энергии распада. Таким образом, выбирая в качестве цитотоксического агента радионуклид, необходимо ориентироваться сразу на несколько параметров, такие как: время полураспада, процент выхода электронов Оже, общая энергия распада [27, 222]. Также, говоря о направленной доставке радионуклида в ядра клеток, немаловажным аспектом оказывается и способ конъюгирования радиоизотопа с молекулой-транспортёром. Далеко не все такие конъюгаты способны выдерживать физиологические условия вплоть до момента доставки

радионуклида в целевой компартмент клеток-мишеней. Так, для радиоактивного йода 131I конъюгирование с транспортной молекулой через йодоген ведёт к меньшему накоплению и удержанию внутри клетки по сравнению с 131I, конъюгированным с использованием SIPC (N-succinimidyl 5-[131I]iodopyridine-3-carboxylate) [183] или, тем более, SGMIB (К-сукцинимидил1-4-гуанидинометил1-3[1311]йодобензоат) [189, 241]. При конъюгировании радионуклидов с веществами, обеспечивающими ядерную локализацию, можно многократно усилить цитотоксический эффект [215]. Стабильность радиоиммуноконъюгатов in vivo минимизирует токсический побочный эффект с одновременным повышением эффективности терапии [112].

1.2 Использование естественных процессов транспорта полипептидов и белков из

цитоплазмы в ядро

Понимание естественных процессов, происходящих внутри клетки, определяет возможность разработки систем доставки таргетных препаратов, которые используют эти процессы для транспортировки. Для тех лекарств, для которых мишенью является клеточное ядро, таким процессом может служить естественный импорт макромолекул в данный компартмент.

Ядро изолировано от цитоплазмы двумя мембранами: внешней и внутренней, расстояние между которыми составляет 30 нм, что представляет собой барьер для макромолекул. Внешняя мембрана переходит в эндоплазматический ретикулум, тогда как внутренняя ядерная мембрана связана с сетью промежуточных филаментов, составляющих ядерную ламину [36]. Мембраны непроницаемы для макромолекул, и последние могут поступать внутрь ядра только через ядерные поровые комплексы (ЯПК), которые представляют из себя огромные (125 000 кДа) белковые структуры 100-150 нм в диаметре [89]. В тех локусах, где находятся ЯПК, внутренняя и внешняя мембраны сливаются.

Количество ЯПК различно у разных видов и меняется в зависимости от фазы клеточного цикла и скорости деления клеток. Так, у активно пролиферирующих клеток количество ЯПК на ядро выше по сравнению с неделящимися клетками [126]. Также было установлено, что для опухолевых клеток характерна сверхэкспрессия некоторых белков, входящих в состав ЯПК, что потенциально может быть использовано в качестве маркера [43, 153].

ЯПК представляет из себя мультимодульную октагональную динамическую структуру. В центре её находится канал, окружённый тремя кольцеобразными структурами: цитоплазматическим кольцом, внутренним кольцом и ядерным кольцом [74]. От цитоплазматического кольца в сторону цитоплазмы отходят белковые филаменты, тогда как на ядерной стороне филаменты сходятся к терминальному кольцу, формируя ядерную корзину. Обе структуры выполняют функцию начальной и конечной площадок взаимодействия для транспортных комплексов.

Цитоплазматические филаменты, в отличие от, например, актиновых филаментов, не имеют постоянной длины и не олигомеризуются из мономеров, а представляют собой расположенные в беспорядке гибкие белковые домены [17].

Ионы солей, нуклеотиды, молекулы, белки, размер которых не превышает 40 кДа, ионы и метаболиты относительно свободно диффундирую через ЯПК между ядром и цитоплазмой [115]. Тем не менее, для ЯПК нет жёсткой границы отсечения по молекулярной массе и по размеру. ЯПК формирует «мягкий барьер» для пассивной диффузии молекул, размер которых превышает 40 кДа. С увеличением молекулярной массы молекул этот барьер возрастает. Белки, размер которых превышает 40 кДа, могут активно доставляться в ядро через ЯПК с помощью транспортных рецепторов [235].

ЯПК является не только «пропускными воротами» для макромолекул, но и принимает участие в других ядерных процессах, таких как: репарация ДНК, клеточный цикл, организация хроматина, регуляция транскрипции, эпигенетическая память, созревание РНК [92, 121, 227, 269].

1.2.1 Строение ядерного порового комплекса (ЯПК)

ЯПК состоит из нуклеопоринов - это около 30 белков, различающихся между собой по строению, которые, в свою очередь, организованы в несколько субкомплексов. Каждый из нуклеопоринов присутствует в составе ЯПК в нескольких (8-32) копиях, в результате чего ЯПК включает в себя до 1000 отдельных нуклеопоринов [9, 111]. Некоторые нуклеопорины связаны с конкретной порой на протяжении всего клеточного цикла, в то время как другие полностью обновляются в течение нескольких минут [36].

Можно выделить 2 типа нуклеопоринов, основываясь на их структурно-функциональных особенностях: это нуклеопорины каркаса ЯПК (scaffold nucleoporins) и фенилаланин-глициновые нуклеопорины (ФГ-нуклеопорины) [111]. Нуклеопорины каркаса

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Карягина Татьяна Сергеевна, 2021 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Петровская Л. Е. и др. Альтернативные каркасные белки (обзорная статья) // Биоорганическая химия. 2011. № 5 (37). C. 581-591.

2. Розенкранц А. А. и др. Усиление цитотоксического действия при направленной доставке а-эмиттера астата-211 в ядра клеток гепатомы человека // Молекулярная Медицина. 2004. № 1. C. 47-54.

3. Розенкранц А. А. и др. Использование процессов внутриклеточного транспорта для доставки лекарств в заданный компартмент клетки (обзорная статья) // Биохимия. 2014. № 9 (79). C. 1148-1168.

4. Розенкранц А. А., Сластникова Т. А. Рецептор эпидермального фактора роста: ключ для селективной доставки в клетки // Биохимия. 2020. № 9 (85). C. 1159-1188.

5. Соболев А. С. Модульные нанотранспортеры противораковых лекарств, придающие им клеточную специфичность и большую эффективность // Успехи биологической химии. 2009. (49). C. 389-404.

6. Соболев А. С. Модульные Нанотранспортёры - Многоцелевая платформа для доставки противораковых лекарств // Вестник Российской Академии Наук. 2013. № 8 (83). C. 685.

7. Соболев А. С., Розенкранц А. А., Гилязова Д. Г. Подходы к направленной внутриклеточной доставке фотосенсибилизаторов для увеличения их эффективности и придания клеточной специфичности // Биофизика. 2004. (49). C. 351-379.

8. Ahmad Z. A., et al. scFv antibody: principles and clinical application // Clinical & Developmental Immunology. 2012. (2012). C. 980250.

9. Alber F., et al. The molecular architecture of the nuclear pore complex // Nature. 2007. № 7170 (450). C. 695-701.

10. Antony A. C. Folate Receptors // Annual Review of Nutrition. 1996. № 1 (16). C. 501521.

11. Appen A. von, et al. In situ structural analysis of the human nuclear pore complex // Nature. 2015. № 7571 (526). C. 140-143.

12. Arteaga C. L., et al. Epidermal growth factor receptors in human breast carcinoma cells: a potential selective target for transforming growth factor alpha-Pseudomonas exotoxin 40 fusion protein // Cancer Research. 1994. № 17 (54). C. 4703-4709.

13. Baade I., Kehlenbach R. H. The cargo spectrum of nuclear transport receptors // Current Opinion in Cell Biology. 2019. (58). C. 1-7.

14. Bai L.-X., et al. Down-regulation of FRa inhibits proliferation and promotes apoptosis of cervical cancer cells in vitro // Asian Pacific journal of cancer prevention: APJCP. 2014. № 14 (15). C.5667-5672.

15. Bailus B. J., et al. Protein Delivery of an Artificial Transcription Factor Restores Widespread Ube3a Expression in an Angelman Syndrome Mouse Brain // Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 2016. № 3 (24). C. 548-555.

16. Bandekar A., et al. Anti-prostate-specific membrane antigen liposomes loaded with 225Ac for potential targeted antivascular a-particle therapy of cancer // Journal of Nuclear Medicine: Official Publication, Society of Nuclear Medicine. 2014. № 1 (55). C. 107-114.

17. Beck M., Hurt E. The nuclear pore complex: understanding its function through structural insight // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 2017. № 2 (18). C. 73-89.

18. Bellaye P.-S., et al. Radiolabeled F(ab')2-cetuximab for theranostic purposes in colorectal and skin tumor-bearing mice models // Clinical & Translational Oncology: Official Publication of the Federation of Spanish Oncology Societies and of the National Cancer Institute of Mexico. 2018. № 12 (20). C. 1557-1570.

19. Belting M., Sandgren S., Wittrup A. Nuclear delivery of macromolecules: barriers and carriers // Advanced Drug Delivery Reviews. 2005. № 4 (57). C. 505-527.

20. Beuttler J., et al. Targeting of Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR)-Expressing Tumor Cells with Sterically Stabilized Affibody Liposomes (SAL) // Bioconjugate Chemistry. 2009. № 6 (20). C. 1201-1208.

21. Boer E. de, et al. Folate receptor-beta has limited value for fluorescent imaging in ovarian, breast and colorectal cancer // PloS One. 2015. № 8 (10). C. e0135012.

22. Bonamore A., et al. Interaction with membrane lipids and heme ligand binding properties of Escherichia coli flavohemoglobin // Biochemistry. 2003. № 19 (42). C. 5792-5801.

23. Brand T. M., Iida M., Wheeler D. L. Molecular mechanisms of resistance to the EGFR monoclonal antibody cetuximab // Cancer Biology & Therapy. 2011. № 9 (11). C. 777-792.

24. Bromberg J. F., et al. Epidermal growth factor-induced growth inhibition requires Statl activation // Cell Growth & Differentiation. 1998. № 7 (9). C. 505.

25. Brown Jones M., et al. Rationale for folate receptor alpha targeted therapy in "high risk" endometrial carcinomas // International Journal of Cancer. 2008. № 7 (123). C. 1699-1703.

26. Bryant D. M., Stow J. L. Nuclear translocation of cell-surface receptors: lessons from fibroblast growth factor // Traffic (Copenhagen, Denmark). 2005. № 10 (6). C. 947-954.

27. Buchegger F., et al. Auger radiation targeted into DNA: a therapy perspective // European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 2006. № 11 (33). C. 1352-1363.

28. Bueno R., et al. The a folate receptor is highly activated in malignant pleural mesothelioma // The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 2001. № 2 (121). C. 225-233.

29. Burgess A. W. EGFR family: structure physiology signalling and therapeutic targets // Growth Factors (Chur, Switzerland). 2008. № 5 (26). C. 263-274.

30. Bussink J., Kogel A. J. van der, Kaanders J. H. Activation of the PI3-K/AKT pathway and implications for radioresistance mechanisms in head and neck cancer // The Lancet Oncology. 2008. № 3 (9). C. 288-296.

31. Cai W., et al. Quantitative PET of EGFR expression in xenograft-bearing mice using 64Cu-labeled cetuximab, a chimeric anti-EGFR monoclonal antibody // European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 2007. № 6 (34). C. 850-858.

32. Cai W.-Q., et al. The latest battles between EGFR monoclonal antibodies and resistant tumor cells // Frontiers in Oncology. 2020. (10).

33. Cai Y., et al. Supramolecular «Trojan horse» for nuclear delivery of dual anticancer drugs // Journal of the American Chemical Society. 2017. № 8 (139). C. 2876-2879.

34. Cai Z., Vallis K. A., Reilly R. M. Computational analysis of the number, area and density of gamma-H2AX foci in breast cancer cells exposed to (111)In-DTPA-hEGF or gamma-rays using Image-J software // International Journal of Radiation Biology. 2009. № 3 (85). C. 262-271.

35. Canton I., Battaglia G. Endocytosis at the nanoscale // Chemical Society Reviews. 2012. № 7 (41). C. 2718-2739.

36. Cautain B., et al. Components and regulation of nuclear transport processes // The FEBS journal. 2015. № 3 (282). C. 445-462.

37. Cavazza T., Vernos I. The RanGTP Pathway: From Nucleo-Cytoplasmic Transport to Spindle Assembly and Beyond // Frontiers in Cell and Developmental Biology. 2015. (3). C. 82.

38. Cekanova M., Rathore K. Animal models and therapeutic molecular targets of cancer: utility and limitations // Drug Design, Development and Therapy. 2014. (8). C. 1911-1921.

39. Chan C., et al. 111In- or 99mTc-labeled recombinant VEGF bioconjugates: in vitro evaluation of their cytotoxicity on porcine aortic endothelial cells overexpressing Flt-1 receptors // Nuclear Medicine and Biology. 2010. № 2 (37). C. 105-115.

40. Chen C., et al. Structural basis for molecular recognition of folic acid by folate receptors // Nature. 2013. № 7463 (500). C. 486-489.

41. Chen P., et al. Comparative antiproliferative effects of (111)In-DTPA-hEGF, chemotherapeutic agents and gamma-radiation on EGFR-positive breast cancer cells // Nuclear Medicine and Biology. 2002. № 6 (29). C. 693-699.

42. Cheung A., et al. Targeting folate receptor alpha for cancer treatment // Oncotarget. 2016. № 32 (7). C. 52553-52574.

43. Chow K.-H., Factor R. E., Ullman K. S. The nuclear envelope environment and its cancer connections // Nature Reviews. Cancer. 2012. № 3 (12). C. 196-209.

44. Chow N. H., et al. Significance of urinary epidermal growth factor and its receptor expression in human bladder cancer // Anticancer Research. 1997. № 2B (17). C. 1293-1296.

45. Costantini D. L., et al. Trastuzumab-resistant breast cancer cells remain sensitive to the auger electron-emitting radiotherapeutic agent 111In-NLS-trastuzumab and are radiosensitized by methotrexate // Journal of Nuclear Medicine: Official Publication, Society of Nuclear Medicine. 2008. № 9 (49). C. 1498-1505.

46. Dasari S., Tchounwou P. B. Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action // European Journal of Pharmacology. 2014. (740). C. 364-378.

47. Dassonville O., et al. EGFR targeting therapies: Monoclonal antibodies versus tyrosine kinase inhibitors: Similarities and differences // Critical Reviews in Oncology/Hematology. 2007. № 1 (62). C. 53-61.

48. Day C.-P., Merlino G., Van Dyke T. Preclinical mouse cancer models: a maze of opportunities and challenges // Cell. 2015. № 1 (163). C. 39-53.

49. Del Gatto V., et al. Use of 111In-pentetreotide scintigraphy for diagnosis and management of resistant macroprolactinoma // Endocrine. 2018. № 3 (60). C. 532-534.

50. Dickmanns A., Kehlenbach R. H., Fahrenkrog B. Nuclear pore complexes and nucleocytoplasmic transport: from structure to function to disease // International Review of Cell and Molecular Biology. 2015. (320). C. 171-233.

51. Eiblmaier M., et al. Correlating EGFR expression with receptor-binding properties and internalization of 64Cu-DOTA-cetuximab in 5 cervical cancer cell lines // Journal of Nuclear Medicine: Official Publication, Society of Nuclear Medicine. 2008. № 9 (49). C. 1472-1479.

52. Eigenbrot C., et al. Structural basis for high-affinity HER2 receptor binding by an engineered protein // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010. № 34 (107). C. 15039-15044.

53. Ekerljung L., et al. Generation and evaluation of bispecific affibody molecules for simultaneous targeting of EGFR and HER2 // Bioconjugate Chemistry. 2012. № 9 (23). C. 18021811.

54. Elleman T. C., et al. Identification of a determinant of epidermal growth factor receptor ligand-binding specificity using a truncated, high-affinity form of the ectodomain // Biochemistry. 2001. № 30 (40). C. 8930-8939.

55. Elnakat H., Ratnam M. Distribution, functionality and gene regulation of folate receptor isoforms: implications in targeted therapy // Advanced Drug Delivery Reviews. 2004. № 8 (56). C. 1067-1084.

56. Escriou V., et al. NLS bioconjugates for targeting therapeutic genes to the nucleus // Advanced Drug Delivery Reviews. 2003. № 2 (55). C. 295-306.

57. Fahrenkrog B., Aebi U. The nuclear pore complex: nucleocytoplasmic transport and beyond // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 2003. № 10 (4). C. 757-766.

58. Freed D. M., et al. EGFR ligands differentially stabilize receptor dimers to specify signaling kinetics // Cell. 2017. № 3 (171). C. 683-695.e18.

59. Frese K. K., Tuveson D. A. Maximizing mouse cancer models // Nature Reviews. Cancer. 2007. № 9 (7). C. 645-658.

60. Frey S., et al. Surface properties determining passage rates of proteins through nuclear pores // Cell. 2018. № 1 (174). C. 202-217.e9.

61. Friedman M., et al. Directed evolution to low nanomolar affinity of a tumor-targeting epidermal growth factor receptor-binding affibody molecule // Journal of Molecular Biology. 2008. № 5 (376). C. 1388-1402.

62. Friedman M., Stähl S. Engineered affinity proteins for tumour-targeting applications // Biotechnology and Applied Biochemistry. 2009. № Pt 1 (53). C. 1-29.

63. De la Fuente J. M., Berry C. C. Tat peptide as an efficient molecule to translocate gold nanoparticles into the cell nucleus // Bioconjugate Chemistry. 2005. № 5 (16). C. 1176-1180.

64. Gao C., et al. Auger electron-emitting (111)In-DTPA-NLS-CSL360 radioimmunoconjugates are cytotoxic to human acute myeloid leukemia (AML) cells displaying the CD123(+)/CD131(-) phenotype of leukemia stem cells // Applied Radiation and Isotopes: Including Data, Instrumentation and Methods for Use in Agriculture, Industry and Medicine. 2016. (110). C. 1-7.

65. Gao J., et al. Affibody-based nanoprobes for HER2-expressing cell and tumor imaging // Biomaterials. 2011. № 8 (32). C. 2141-2148.

66. Garrido G., et al. 7A7 MAb: a new tool for the pre-clinical evaluation of EGFR-based therapies // Hybridoma and Hybridomics. 2004. № 3 (23). C. 168-175.

67. Gazdar A. F. Activating and resistance mutations of EGFR in non-small-cell lung cancer: role in clinical response to EGFR tyrosine kinase inhibitors // Oncogene. 2009. (28 Suppl 1). C. S24-31.

68. Gilyazova D. G., et al. Targeting cancer cells by novel engineered modular transporters // Cancer Research. 2006. № 21 (66). C. 10534-10540.

69. Groenen L. C., Nice E. C., Burgess A. W. Structure-function relationships for the EGF/TGF-alpha family of mitogens // Growth Factors (Chur, Switzerland). 1994. № 4 (11). C. 235257.

70. Guo J., et al. Targeted drug delivery via folate receptors for the treatment of brain cancer: can the promise deliver? // Journal of Pharmaceutical Sciences. 2017. № 12 (106). C. 3413-3420.

71. Haeri A., Osouli M. EGFR targeted nanocarriers for cancer diagnosis and therapy // trends in peptide and protein sciences. 2017. № 2 (1). C. 41-55.

72. Haigler H., et al. Visualization by fluorescence of the binding and internalization of epidermal growth factor in human carcinoma cells A-431 // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1978. № 7 (75). C. 3317-3321.

73. Hamann A., Nguyen A., Pannier A. K. Nucleic acid delivery to mesenchymal stem cells: a review of nonviral methods and applications // Journal of Biological Engineering. 2019. (13). C. 7.

74. Hampoelz B., et al. Structure and assembly of the nuclear pore complex // Annual Review of Biophysics. 2019. (48). C. 515-536.

75. Hansen M. F., et al. Folic acid mediates activation of the pro-oncogene STAT3 via the Folate Receptor alpha // Cellular Signalling. 2015. № 7 (27). C. 1356-1368.

76. Hartimath S. V., et al. Preclinical evaluation of 111In-labeled PEGylated maytansine nimotuzumab drug conjugates in EGFR-positive cancer models // Journal of Nuclear Medicine: Official Publication, Society of Nuclear Medicine. 2019. № 8 (60). C. 1103-1110.

77. Hartmann L. C., et al. Folate receptor overexpression is associated with poor outcome in breast cancer // International Journal of Cancer. 2007. № 5 (121). C. 938-942.

78. Hashmi A. A., et al. Prognostic significance of epidermal growth factor receptor (EGFR) over expression in urothelial carcinoma of urinary bladder // BMC urology. 2018. № 1 (18). C. 59.

79. He X., et al. Characterization of 7A7, an anti-mouse EGFR monoclonal antibody proposed to be the mouse equivalent of cetuximab // Oncotarget. 2018. № 15 (9). C. 12250-12260.

80. Heimbrook D. C., et al. Transforming growth factor alpha-Pseudomonas exotoxin fusion protein prolongs survival of nude mice bearing tumor xenografts. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1990. № 12 (87). C. 4697-4701.

81. Herbst R. S. Review of epidermal growth factor receptor biology // International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 2004. № 2 Suppl (59). C. 21-26.

82. Heukers R., van Bergen en Henegouwen P. M. P., Oliveira S. Nanobody-photosensitizer conjugates for targeted photodynamic therapy // Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine. 2014. № 7 (10). C. 1441-1451.

83. Hicks D. G., et al. Breast cancers with brain metastases are more likely to be estrogen receptor negative, express the basal cytokeratin CK5/6, and overexpress HER2 or EGFR // The American Journal of Surgical Pathology. 2006. № 9 (30). C. 1097-1104.

84. Hilgenbrink A. R., Low P. S. Folate receptor-mediated drug targeting: from therapeutics to diagnostics // Journal of Pharmaceutical Sciences. 2005. № 10 (94). C. 2135-2146.

85. Hill R., et al. Targeting nucleocytoplasmic transport in cancer therapy // Oncotarget. 2013. № 1 (5). C. 11-28.

86. Hirsch F. R., Varella-Garcia M., Cappuzzo F. Predictive value of EGFR and HER2 overexpression in advanced non-small-cell lung cancer // Oncogene. 2009. (28 Suppl 1). C. S32-37.

87. Hisada-Ishii S., et al. Bipartite nuclear localization signal of matrin 3 is essential for vertebrate cells // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2007. № 1 (354). C. 7276.

88. Hoang B., Reilly R. M., Allen C. Block copolymer micelles target Auger electron radiotherapy to the nucleus of HER2-positive breast cancer cells // Biomacromolecules. 2012. № 2 (13). C. 455-465.

89. Hoelz A., Debler E. W., Blobel G. The structure of the nuclear pore complex // Annual Review of Biochemistry. 2011. (80). C. 613-643.

90. Hoppmann S., et al. 177Lu-DO3A-HSA-Z EGFR:1907: characterization as a potential radiopharmaceutical for radionuclide therapy of EGFR-expressing head and neck carcinomas // Journal of biological inorganic chemistry: JBIC: a publication of the Society of Biological Inorganic Chemistry. 2012. № 5 (17). C. 709-718.

91. Hornick C. A., et al. Progressive nuclear translocation of somatostatin analogs // Journal of Nuclear Medicine: Official Publication, Society of Nuclear Medicine. 2000. № 7 (41). C. 12561263.

92. Ibarra A., et al. Nucleoporin-mediated regulation of cell identity genes // Genes & Development. 2016. № 20 (30). C. 2253-2258.

93. Imam S. K. Advancements in cancer therapy with alpha-emitters: a review // International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 2001. № 1 (51). C. 271-278.

94. Jalilian A. R., et al. Development of 111In labeled insulin for receptor imaging/therapy // Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry. 2009. № 3 (279). C. 791.

95. Jans D. A., Hassan G. Nuclear targeting by growth factors, cytokines, and their receptors: a role in signaling? // BioEssays: News and Reviews in Molecular, Cellular and Developmental Biology. 1998. № 5 (20). C. 400-411.

96. Jans D. A., Sobolev A. S. Editorial: targeted subcellular delivery of anti-cancer agents // Frontiers in Pharmacology. 2018. (9). C. 1577.

97. Jhaveri A., Torchilin V. Intracellular delivery of nanocarriers and targeting to subcellular organelles // Expert Opinion on Drug Delivery. 2016. № 1 (13). C. 49-70.

98. Kabachinski G., Schwartz T. U. The nuclear pore complex-structure and function at a glance // Journal of Cell Science. 2015. № 3 (128). C. 423-429.

99. Kalli K. R., et al. Folate receptor alpha as a tumor target in epithelial ovarian cancer // Gynecologic Oncology. 2008. № 3 (108). C. 619-626.

100. Kang C., et al. Nanosized camptothecin conjugates for single and combined drug delivery // European Journal of BioMedical Research. 2016. № 1 (2). C. 8-14.

101. Kapinos L. E., et al. Karyopherin-centric control of nuclear pores based on molecular occupancy and kinetic analysis of multivalent binding with FG nucleoporins // Biophysical Journal. 2014. № 8 (106). C. 1751-1762.

102. Karyagina T. S., et al. New recombinant carriers binding specifically to the epidermal growth factor receptor // Doklady Biochemistry and Biophysics. 2020. № 1 (490). C. 22-24.

103. Karyagina T. S., et al. Targeted delivery of 111In into the nuclei of EGFR overexpressing cells via modular nanotransporters with anti-EGFR affibody // Frontiers in Pharmacology. 2020. (11).

104. Kassis A. I. Radiotargeting agents for cancer therapy // Expert Opinion on Drug Delivery. 2005. № 6 (2). C. 981-991.

105. Kassis A. I., Adelstein S. J. Radiobiologic principles in radionuclide therapy // Journal of Nuclear Medicine: Official Publication, Society of Nuclear Medicine. 2005. (46 Suppl 1). C. 4S-12S.

106. Kawamoto T., et al. Growth stimulation of A431 cells by epidermal growth factor: identification of high-affinity receptors for epidermal growth factor by an anti-receptor monoclonal antibody // Proceedings of the National Academy of Sciences. 1983. № 5 (80). C. 1337-1341.

107. Khramtsov Y. V., et al. Modular drug transporters with diphtheria toxin translocation domain form edged holes in lipid membranes // Journal of Controlled Release: Official Journal of the Controlled Release Society. 2008. № 3 (128). C. 241-247.

108. Kim D., et al. Heptameric targeting ligands against EGFR and HER2 with high stability and avidity // PloS One. 2012. № 8 (7). C. e43077.

109. Kim D., et al. Tribody: robust self-assembled trimeric targeting ligands with high stability and significantly improved target-binding strength // Biochemistry. 2013. № 41 (52).

110. Kim D.-G., et al. Construction of chimeric human epidermal growth factor containing short collagen-binding domain moieties for use as a wound tissue healing agent // Journal of Microbiology and Biotechnology. 2015. № 1 (25). C. 119-126.

111. Kim S. J., et al. Integrative structure and functional anatomy of a nuclear pore complex // Nature. 2018. № 7697 (555). C. 475-482.

112. Kim Y.-S., Brechbiel M. W. An overview of targeted alpha therapy // Tumour Biology: The Journal of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine. 2012. № 3 (33). C. 573-590.

113. Kimura M., Imamoto N. Biological significance of the importin-ß family-dependent nucleocytoplasmic transport pathways // Traffic. 2014. № 7 (15). C. 727-748.

114. Knapp F. F. (Russ), Dash A. Radiopharmaceuticals for therapy // Springer India, 2016.

115. Knockenhauer K. E., Schwartz T. U. The nuclear pore complex as a flexible and dynamic gate // Cell. 2016. № 6 (164). C. 1162-1171.

116. Kochupurakkal B. S., et al. Epigen, the last ligand of ErbB receptors, reveals intricate relationships between affinity and mitogenicity // The Journal of Biological Chemistry. 2005. № 9 (280). C. 8503-8512.

117. Koide A., Koide S. Monobodies methods in molecular biology. Edited by K. M. Arndt, K. M. Müller, Totowa, NJ. // Humana Press, 2007.C. 95-109.

118. Kosugi S., et al. Six classes of nuclear localization signals specific to different binding grooves of importin a // Journal of Biological Chemistry. 2009. № 1 (284). C. 478-485.

119. Koumarianou E., et al. Radiolabeling and in vitro evaluation of (67)Ga-NOTA-modular nanotransporter -- a potential Auger electron emitting EGFR-targeted radiotherapeutic // Nuclear Medicine and Biology. 2014. № 6 (41). C. 441-449.

120. Kratochwil C., et al. 225Ac-PSMA-617 for PSMA-targeted a-radiation therapy of metastatic castration-resistant prostate cancer // Journal of Nuclear Medicine. 2016. № 12 (57). C. 1941-1944.

121. Kuhn T. M., Capelson M. Nuclear pore proteins in regulation of chromatin state // Cells. 2019. № 11 (8). C. 1414.

122. Kurihara A., Deguchi Y., Pardridge W. M. Epidermal growth factor radiopharmaceuticals: 111In chelation, conjugation to a blood-brain barrier delivery vector via a biotin-polyethylene linker, pharmacokinetics, and in vivo imaging of experimental brain tumors // Bioconjugate Chemistry. 1999. № 3 (10). C. 502-511.

123. LaCasse E. C., Lefebvre Y. A. Nuclear localization signals overlap DNA- or RNA-binding domains in nucleic acid-binding proteins // Nucleic Acids Research. 1995. № 10 (23). C. 1647-1656.

124. Lai W.-F., Wong W.-T. Design of polymeric gene carriers for effective intracellular delivery // Trends in Biotechnology. 2018. № 7 (36). C. 713-728.

125. Lange A., et al. Classical nuclear localization signals: definition, function, and interaction with importin alpha // The Journal of Biological Chemistry. 2007. № 8 (282). C. 5101-5105.

126. Lange A., Corbett A. H. Nuclear-cytoplasmic transport American cancer society, 2009.

127. Larsen J. D., Ross N. L., Sullivan M. O. Requirements for the nuclear entry of polyplexes and nanoparticles during mitosis // The Journal of Gene Medicine. 2012. № 9-10 (14). C. 580-589.

128. Leamon C. P., Pastan I., Low P. S. Cytotoxicity of folate-Pseudomonas exotoxin conjugates toward tumor cells. Contribution of translocation domain // The Journal of Biological Chemistry. 1993. № 33 (268). C. 24847-24854.

129. Lee H.-H., Wang Y.-N., Hung M.-C. Non-canonical signaling mode of the epidermal growth factor receptor family // American Journal of Cancer Research. 2015. № 10 (5). C. 29442958.

130. Lee R. J., Low P. S. Folate-mediated tumor cell targeting of liposome-entrapped doxorubicin in vitro // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1995. № 2 (1233). C.134-144.

131. Lemoine N. R., et al. The epidermal growth factor receptor in human pancreatic cancer // The Journal of Pathology. 1992. № 1 (166). C. 7-12.

132. LeRoith D., Roberts C. T. The insulin-like growth factor system and cancer // Cancer Letters. 2003. № 2 (195). C. 127-137.

133. Li D., et al. A novel chlorin-PEG-folate conjugate with higher water solubility, lower cytotoxicity, better tumor targeting and photodynamic activity // Journal of Photochemistry and Photobiology. B, Biology. 2013. (127). C. 28-37.

134. Li H., et al. Abstract 1814: Effective auger electron radioimmunotherapy using modified anti-HER2 antibody with nuclear localizing signal // Cancer Research. 2015. № 15 Supplement (75). C.1814-1814.

135. Lim R. Y. H., et al. Nanomechanical basis of selective gating by the nuclear pore complex // Science (New York, N.Y.). 2007. № 5850 (318). C. 640-643.

136. Lin D. H., Hoelz A. The structure of the nuclear pore complex (an update) // Annual Review of Biochemistry. 2019. (88). C. 725-783.

137. Lin S. Y., et al. Nuclear localization of EGF receptor and its potential new role as a transcription factor // Nature Cell Biology. 2001. № 9 (3). C. 802-808.

138. Liu C., et al. Folate receptor alpha is associated with cervical carcinogenesis and regulates cervical cancer cells growth by activating ERK1/2/c-Fos/c-Jun // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2017. № 4 (491). C. 1083-1091.

139. Liu H., et al. Nuclear delivery of plasmid DNA determines the efficiency of gene expression // Cell Biology International. 2019. № 7 (43). C. 789-798.

140. Liu P., et al. Preparation of EGFR monoclonal antibody conjugated nanoparticles and targeting to hepatocellular carcinoma // Journal of Materials Science. Materials in Medicine. 2010. № 2 (21). C. 551-556.

141. Liu Y., Franzen S. Factors determining the efficacy of nuclear delivery of antisense oligonucleotides by gold nanoparticles // Bioconjugate Chemistry. 2008. № 5 (19). C. 1009-1016.

142. Lu J.-X., et al. Rational design of an EGF-IL18 fusion protein: implication for developing tumor therapeutics // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2005. № 1 (334). C. 157-161.

143. Lutzmann M., et al. Modular self-assembly of a Y-shaped multiprotein complex from seven nucleoporins // The EMBO journal. 2002. № 3 (21). C. 387-397.

144. Ma X., et al. Future of nanotherapeutics: Targeting the cellular sub-organelles // Biomaterials. 2016. (97). C. 10-21.

145. MacEwan S. R., Callahan D. J., Chilkoti A. Stimulus-responsive macromolecules and nanoparticles for cancer drug delivery // Nanomedicine (London, England). 2010. № 5 (5). C. 793806.

146. Maity A. R., Stepensky D. Delivery of drugs to intracellular organelles using drug delivery systems: Analysis of research trends and targeting efficiencies // International Journal of Pharmaceutics. 2015. № 2 (496). C. 268-274.

147. Manchun S., et al. Enhanced anti-tumor effect of pH-responsive dextrin nanogels delivering doxorubicin on colorectal cancer // Carbohydrate Polymers. 2015. (126). C. 222-230.

148. Marcinkowska E., Superat K., Wiedlocha A. FGF-1 as a possible carrier for targeted drug delivery // Oncology Research. 2006. № 1 (16). C. 27-34.

149. Marfori M., et al. Molecular basis for specificity of nuclear import and prediction of nuclear localization // Biochimica Et Biophysica Acta. 2011. № 9 (1813). C. 1562-1577.

150. Markert S., et al. Alpha-folate receptor expression in epithelial ovarian carcinoma and non-neoplastic ovarian tissue // Anticancer Research. 2008. № 6A (28). C. 3567-3572.

151. Marmor M. D., Skaria K. B., Yarden Y. Signal transduction and oncogenesis by ErbB/HER receptors // International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 2004. № 3 (58). C. 903-913.

152. Martinelli E., et al. Anti-epidermal growth factor receptor monoclonal antibodies in cancer therapy // Clinical & Experimental Immunology. 2009. № 1 (158). C. 1-9.

153. Martinez N., et al. The nuclear pore complex protein Nup88 is overexpressed in tumor cells // Cancer Research. 1999. № 21 (59). C. 5408-5411.

154. Melikov K., Chernomordik L. V. Arginine-rich cell penetrating peptides: from endosomal uptake to nuclear delivery // Cellular and molecular life sciences: CMLS. 2005. № 23 (62). C. 2739-2749.

155. Miao Z., et al. Small-animal PET imaging of human epidermal growth factor receptor positive tumor with a 64Cu labeled affibody protein // Bioconjugate Chemistry. 2010. № 5 (21). C. 947-954.

156. Misale S., et al. Emergence of KRAS mutations and acquired resistance to anti-EGFR therapy in colorectal cancer // Nature. 2012. № 7404 (486). C. 532-536.

157. Misra R., Sahoo S. K. Intracellular trafficking of nuclear localization signal conjugated nanoparticles for cancer therapy // European Journal of Pharmaceutical Sciences. 2010. № 1 (39). C. 152-163.

158. Mohan P., Rapoport N. Doxorubicin as a molecular nanotheranostic agent: effect of doxorubicin encapsulation in micelles or nanoemulsions on the ultrasound-mediated intracellular delivery and nuclear trafficking // Molecular Pharmaceutics. 2010. № 6 (7). C. 1959-1973.

159. Murphy J. R. Mechanism of diphtheria toxin catalytic domain delivery to the eukaryotic cell cytosol and the cellular factors that directly participate in the process // Toxins. 2011. № 3 (3). C. 294-308.

160. Nakase I., et al. Methodological and cellular aspects that govern the internalization mechanisms of arginine-rich cell-penetrating peptides // Advanced Drug Delivery Reviews. 2008. № 4-5 (60). C. 598-607.

161. Nicholson R. I., Gee J. M., Harper M. E. EGFR and cancer prognosis // European Journal of Cancer (Oxford, England: 1990). 2001. (37 Suppl 4). C. S9-15.

162. Nilsson S., et al. First clinical experience with a-emitting radium-223 in the treatment of skeletal metastases // Clinical Cancer Research. 2005. № 12 (11). C. 4451-4459.

163. Nitin N., et al. Tat peptide is capable of importing large nanoparticles across nuclear membrane in digitonin permeabilized cells // Annals of Biomedical Engineering. 2009. № 10 (37). C.2018-2027.

164. Nordberg E., et al. In vivo and in vitro uptake of 111 In, delivered with the affibody molecule (ZEGFR:955)2, in EGFR expressing tumour cells // Oncology Reports. 2008. № 4 (19). C. 853-857.

165. Nordberg E., et al. Effects of an EGFR-binding affibody molecule on intracellular signaling pathways // International Journal of Oncology. 2010. № 4 (36). C. 967-972.

166. Nunez M. I., et al. High expression of folate receptor alpha in lung cancer correlates with adenocarcinoma histology and mutation // Journal of Thoracic Oncology. 2012. № 5 (7). C. 833840.

167. Ocana A., et al. Preclinical development of molecular-targeted agents for cancer // Nature Reviews. Clinical Oncology. 2010. № 4 (8). C. 200-209.

168. Ojima I., et al. Tumor-specific novel taxoid-monoclonal antibody conjugates // Journal of Medicinal Chemistry. 2002. № 26 (45). C. 5620-5623.

169. Orlova A., et al. Update: Affibody Molecules for Molecular Imaging and Therapy for Cancer // Cancer Biotherapy and Radiopharmaceuticals. 2007. № 5 (22). C. 573-584.

170. O'Shannessy D. J., et al. Folate receptor alpha (FRA) expression in breast cancer: identification of a new molecular subtype and association with triple negative disease // SpringerPlus. 2012. № 1 (1). C. 22.

171. O'Shannessy D. J., et al. Expression of folate receptors alpha and beta in normal and cancerous gynecologic tissues: correlation of expression of the beta isoform with macrophage markers // Journal of Ovarian Research. 2015. (8). C. 29.

172. Pan L., et al. Nuclear-targeted drug delivery of TAT peptide-conjugated monodisperse mesoporous silica nanoparticles // Journal of the American Chemical Society. 2012. № 13 (134). C. 5722-5725.

173. Pan L., et al. Overcoming multidrug resistance of cancer cells by direct intranuclear drug delivery using TAT-conjugated mesoporous silica nanoparticles // Biomaterials. 2013. № 11 (34). C. 2719-2730.

174. Panosa C., et al. A comparison of non-biologically active truncated EGF (EGFt) and full-length hEGF for delivery of Auger electron-emitting 111In to EGFR-positive breast cancer cells and tumor xenografts in athymic mice // Nuclear Medicine and Biology. 2015. № 12 (42). C. 931-938.

175. Papa V., et al. Elevated insulin receptor content in human breast cancer // The Journal of Clinical Investigation. 1990. № 5 (86). C. 1503-1510.

176. Pemberton L. F., Paschal B. M. Mechanisms of receptor-mediated nuclear import and nuclear export // Traffic (Copenhagen, Denmark). 2005. № 3 (6). C. 187-198.

177. Peraldo-Neia C., et al. Epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation analysis, gene expression profiling and EGFR protein expression in primary prostate cancer // BMC cancer. 2011. (11). C. 31.

178. Peyro M., et al. Nucleoporin's like charge regions are major regulators of FG coverage and dynamics inside the nuclear pore complex // PloS One. 2015. № 12 (10). C. e0143745.

179. Podlecki D. A., et al. Nuclear translocation of the insulin receptor. A possible mediator of insulin's long term effects. // Journal of Biological Chemistry. 1987. № 7 (262). C. 3362-3368.

180. Pouton C. W., et al. Targeted delivery to the nucleus // Advanced Drug Delivery Reviews. 2007. № 8 (59). C. 698-717.

181. Rakowicz-Szulczynska E. M., Herlyn M., Koprowski H. Nerve growth factor receptors in chromatin of melanoma cells, proliferating melanocytes, and colorectal carcinoma cells in vitro // Cancer Research. 1988. № 24 Pt 1 (48). C. 7200-7206.

182. Reilly R. M., et al. 111In-labeled EGF is selectively radiotoxic to human breast cancer cells overexpressing EGFR // Journal of Nuclear Medicine: Official Publication, Society of Nuclear Medicine. 2000. № 3 (41). C. 429-438.

183. Reist C. J., et al. Radioiodination of internalizing monoclonal antibodies using N-succinimidyl 5-iodo-3-pyridinecarboxylate // Cancer Research. 1996. № 21 (56). C. 4970-4977.

184. Ren G., et al. Profiling EGFR in triple negative breast tumors using PET // Journal of Nuclear Medicine. 2011. № supplement 1 (52). C. 1686-1686.

185. Reubi J. C., et al. Somatostatin receptors in human cancer: incidence, characteristics, functional correlates and clinical implications // The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 1992. № 1-3 (43). C. 27-35.

186. Rinaldi A. C., et al. Interaction of vitreoscilla hemoglobin with membrane lipids // Biochemistry. 2006. № 13 (45). C. 4069-4076.

187. Robbins J., et al. Two interdependent basic domains in nucleoplasmin nuclear targeting sequence: identification of a class of bipartite nuclear targeting sequence // Cell. 1991. № 3 (64). C. 615-623.

188. Rodemann H. P., Dittmann K., Toulany M. Radiation-induced EGFR-signaling and control of DNA-damage repair // International Journal of Radiation Biology. 2007. № 11-12 (83). C. 781-791.

189. Rosenkranz A. A., et al. Engineered modular recombinant transporters: application of new platform for targeted radiotherapeutic agents to alpha-particle emitting 211 At // International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 2008. № 1 (72). C. 193-200.

190. Rosenkranz A. A., et al. Antitumor efficacy of Auger electron emitter 111In delivered by modular nanotransporter into the nuclei of cells with folate receptor overexpression // Doklady. Biochemistry and Biophysics. 2017. № 1 (473). C. 85-87.

191. Rosenkranz A. A., et al. Antitumor activity of Auger electron emitter 111In delivered by modular nanotransporter for treatment of bladder cancer with EGFR overexpression // Frontiers in Pharmacology. 2018. (9). C. 1331.

192. Sabharanjak S., Mayor S. Folate receptor endocytosis and trafficking // Advanced Drug Delivery Reviews. 2004. № 8 (56). C. 1099-1109.

193. Sanchez-del-Campo L., et al. The critical role of alpha-folate receptor in the resistance of melanoma to methotrexate // Pigment Cell & Melanoma Research. 2009. № 5 (22). C. 588-600.

194. Sarma A., Yang W. Calcium regulation of nucleocytoplasmic transport // Protein & Cell. 2011. № 4 (2). C. 291-302.

195. Schlessinger J. Ligand-induced, receptor-mediated dimerization and activation of EGF receptor // Cell. 2002. № 6 (110). C. 669-672.

196. Schmidt H. B., Görlich D. Transport selectivity of nuclear pores, phase separation, and membraneless organelles // Trends in Biochemical Sciences. 2016. № 1 (41). C. 46-61.

197. Schmidt N., et al. Arginine-rich cell-penetrating peptides // FEBS Letters. 2010. № 9 (584). C. 1806-1813.

198. Schneider A. F. L., et al. Targeted subcellular protein delivery using cleavable cyclic cell-penetrating peptides // Bioconjugate Chemistry. 2019. № 2 (30). C. 400-404.

199. Schoch R. L., Kapinos L. E., Lim R. Y. H. Nuclear transport receptor binding avidity triggers a self-healing collapse transition in FG-nucleoporin molecular brushes // Proceedings of the National Academy of Sciences. 2012. № 42 (109). C. 16911-16916.

200. Scott A. M., Wolchok J. D., Old L. J. Antibody therapy of cancer // Nature Reviews. Cancer. 2012. № 4 (12). C. 278-287.

201. Seshacharyulu P., et al. Targeting the EGFR signaling pathway in cancer therapy // Expert Opinion on Therapeutic Targets. 2012. № 1 (16). C. 15-31.

202. Sgouros G., et al. MIRD Pamphlet No. 22 (abridged): radiobiology and dosimetry of alpha-particle emitters for targeted radionuclide therapy // Journal of Nuclear Medicine: Official Publication, Society of Nuclear Medicine. 2010. № 2 (51). C. 311-328.

203. Sharip A., et al. Analysis of origin and protein-protein interaction maps suggests distinct oncogenic role of nuclear EGFR during cancer evolution // Journal of Cancer. 2017. № 5 (8). C. 903-912.

204. Sharpless N. E., Depinho R. A. The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development // Nature Reviews. Drug Discovery. 2006. № 9 (5). C. 741-754.

205. Shi B., et al. Challenges in DNA delivery and recent advances in multifunctional polymeric DNA delivery systems // Biomacromolecules. 2017. № 8 (18). C. 2231-2246.

206. Shia J., et al. Immunohistochemical expression of folate receptor a in colorectal carcinoma: patterns and biological significance // Human Pathology. 2008. № 4 (39). C. 498-505.

207. Shih Y.-H., et al. 111In-cetuximab as a diagnostic agent by accessible epidermal growth factor (EGF) receptor targeting in human metastatic colorectal carcinoma // Oncotarget. 2015. № 18 (6). C. 16601-16610.

208. Sigismund S., Avanzato D., Lanzetti L. Emerging functions of the EGFR in cancer // Molecular Oncology. 2019. C. 3-20.

209. Singh A. B., Harris R. C. Autocrine, paracrine and juxtacrine signaling by EGFR ligands // Cellular Signalling. 2005. № 10 (17). C. 1183-1193.

210. Singh B., Carpenter G., Coffey R. J. EGF receptor ligands: recent advances // F1000Research. 2016. (5).

211. Singh B., Coffey R. J. From wavy hair to naked proteins: the role of transforming growth factor alpha in health and disease // Seminars in Cell & Developmental Biology. 2014. (28). C. 1221.

212. Siniossoglou S., et al. Structure and assembly of the Nup84p complex // The Journal of Cell Biology. 2000. № 1 (149). C. 41-54.

213. Siu M. K. Y., et al. Paradoxical impact of two folate receptors, FRa and RFC, in ovarian cancer: effect on cell proliferation, invasion and clinical outcome // PloS One. 2012. № 11 (7). C. e47201.

214. Slastnikova T. A., et al. Modular nanotransporters: a multipurpose in vivo working platform for targeted drug delivery // International Journal of Nanomedicine. 2012. (7). C. 467-482.

215. Slastnikova T. A., et al. Modular nanotransporters: a versatile approach for enhancing nuclear delivery and cytotoxicity of Auger electron-emitting 125I // EJNMMI research. 2012. № 1 (2). C. 59.

216. Slastnikova T. A., et al. Modular nanotransporters for targeted intracellular delivery of drugs: folate receptors as potential targets // Current Pharmaceutical Design. 2015. № 9 (21). C. 1227-1238.

217. Slastnikova T. A., et al. Development and evaluation of a new modular nanotransporter for drug delivery into nuclei of pathological cells expressing folate receptors // Drug Design, Development and Therapy. 2017. (11). C. 1315-1334.

218. Slastnikova T. A., et al. Preparation, cytotoxicity, and in vivo antitumor efficacy of 111In-labeled modular nanotransporters // International Journal of Nanomedicine. 2017. (12). C. 395-410.

219. Slastnikova T. A., et al. Targeted intracellular delivery of antibodies: the state of the art // Frontiers in Pharmacology. 2018. (9).

220. Smith M. R., et al. ERA 223: A phase III trial of radium-223 (Ra-223) in combination with abiraterone acetate and prednisone/prednisolone for the treatment of asymptomatic or mildly symptomatic chemotherapy-naive patients (pts) with bone-predominant metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC) // Annals of Oncology. 2018. (29). C. viii723.

221. Sobolev A. S. Modular transporters for subcellular cell-specific targeting of anti-tumor drugs // BioEssays: News and Reviews in Molecular, Cellular and Developmental Biology. 2008. № 3 (30). C. 278-287.

222. Sobolev A. S. Modular nanotransporters for nuclear-targeted delivery of Auger electron emitters // Frontiers in Pharmacology. 2018. (9). C. 952.

223. Song L., Falzone N., Vallis K. A. EGF-coated gold nanoparticles provide an efficient nano-scale delivery system for the molecular radiotherapy of EGFR-positive cancer // International Journal of Radiation Biology. 2016. № 11 (92). C. 716-723.

224. Stacey D. W. Cyclin D1 serves as a cell cycle regulatory switch in actively proliferating cells // Current Opinion in Cell Biology. 2003. № 2 (15). C. 158-163.

225. Stachowiak E. K., et al. Nuclear accumulation of fibroblast growth factor receptors in human glial cells-association with cell proliferation // Oncogene. 1997. № 18 (14). C. 2201-2211.

226. Stachowiak M. K., et al. Nuclear accumulation of fibroblast growth factor receptors is regulated by multiple signals in adrenal medullary cells // Molecular Biology of the Cell. 1996. № 8 (7). C. 1299-1317.

227. Strambio-De-Castillia C., Niepel M., Rout M. P. The nuclear pore complex: bridging nuclear transport and gene regulation // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 2010. № 7 (11). C. 490-501.

228. Stumpp M. T., Binz H. K., Amstutz P. DARPins: A new generation of protein therapeutics // Drug Discovery Today. 2008. № 15 (13). C. 695-701.

229. Sudimack J., Lee R. J. Targeted drug delivery via the folate receptor // Advanced Drug Delivery Reviews. 2000. № 2 (41). C. 147-162.

230. Sui M., Liu W., Shen Y. Nuclear drug delivery for cancer chemotherapy // Journal of Controlled Release: Official Journal of the Controlled Release Society. 2011. № 2 (155). C. 227236.

231. Tammam S. N., Azzazy H. M. E., Lamprecht A. How successful is nuclear targeting by nanocarriers? // Journal of Controlled Release: Official Journal of the Controlled Release Society. 2016. (229). C. 140-153.

232. Teo P. Y., et al. Co-delivery of drugs and plasmid DNA for cancer therapy // Advanced Drug Delivery Reviews. 2016. (98). C. 41-63.

233. Terry L. J., Shows E. B., Wente S. R. Crossing the nuclear envelope: hierarchical regulation of nucleocytoplasmic transport // Science (New York, N.Y.). 2007. № 5855 (318). C. 1412-1416.

234. Tiernan J. P., et al. Carcinoembryonic antigen is the preferred biomarker for in vivo colorectal cancer targeting // British Journal of Cancer. 2013. № 3 (108). C. 662-667.

235. Timney B. L., et al. Simple rules for passive diffusion through the nuclear pore complex // The Journal of Cell Biology. 2016. № 1 (215). C. 57-76.

236. Tkachenko A. G., et al. Multifunctional gold nanoparticle-peptide complexes for nuclear targeting // Journal of the American Chemical Society. 2003. № 16 (125). C. 4700-4701.

237. Tolmachev V., et al. Affibody molecules for epidermal growth factor receptor targeting in vivo: aspects of dimerization and labeling chemistry // Journal of Nuclear Medicine. 2009. № 2 (50). C. 274-283.

238. Troiani T., et al. The use of xenograft models for the selection of cancer treatments with the EGFR as an example // Critical Reviews in Oncology/Hematology. 2008. № 3 (65). C. 200-211.

239. Truant R., Cullen B. R. The arginine-rich domains present in human immunodeficiency virus type 1 Tat and Rev function as direct importin ß-dependent nuclear localization signals // Molecular and Cellular Biology. 1999. № 2 (19). C. 1210-1217.

240. Ueda S., et al. The correlation between cytoplasmic overexpression of epidermal growth factor receptor and tumor aggressiveness: poor prognosis in patients with pancreatic ductal adenocarcinoma // Pancreas. 2004. № 1 (29). C. e1-8.

241. Vaidyanathan G., et al. A polar substituent-containing acylation agent for the radioiodination of internalizing monoclonal antibodies: N-succinimidyl 4-guanidinomethyl-3-[131 I]iodobenzoate ([131I]SGMIB) // Bioconjugate Chemistry. 2001. № 3 (12). C. 428-438.

242. Vaidyanathan G., Zalutsky M. R. Applications of 211At and 223Ra in targeted alpha-particle radiotherapy // Current Radiopharmaceuticals. 2011. № 4 (4). C. 283-294.

243. Valkema R., et al. Phase I study of peptide receptor radionuclide therapy with [In-DTPA]octreotide: the Rotterdam experience // Seminars in Nuclear Medicine. 2002. № 2 (32). C. 110-122.

244. Viana-Pereira M., et al. Analysis of EGFR overexpression, EGFR gene amplification and the EGFRvIII mutation in Portuguese high-grade gliomas // Anticancer Research. 2008. № 2A (28). C.913-920.

245. Vives E., Brodin P., Lebleu B. A truncated HIV-1 Tat protein basic domain rapidly translocates through the plasma membrane and accumulates in the cell nucleus // The Journal of Biological Chemistry. 1997. № 25 (272). C. 16010-16017.

246. Vogt M., Skerra A. Construction of an artificial receptor protein ("Anticalin") based on the human apolipoprotein D // ChemBioChem. 2004. № 2 (5). C. 191-199.

247. Voldborg B. R., et al. Epidermal growth factor receptor (EGFR) and EGFR mutations, function and possible role in clinical trials // Annals of Oncology: Official Journal of the European Society for Medical Oncology. 1997. № 12 (8). C. 1197-1206.

248. Wahlberg E., et al. An affibody in complex with a target protein: structure and coupled folding // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003. № 6 (100). C. 3185-3190.

249. Wang J., et al. Amplified delivery of indium-111 to EGFR-positive human breast cancer cells // Nuclear Medicine and Biology. 2001. № 8 (28). C. 895-902.

250. Wang Q., Villeneuve G., Wang Z. Control of epidermal growth factor receptor endocytosis by receptor dimerization, rather than receptor kinase activation // EMBO reports. 2005. № 10 (6). C. 942-948.

251. Wang S., et al. Design and synthesis of [111In]DTPA-folate for use as a tumor-targeted radiopharmaceutical // Bioconjugate Chemistry. 1997. № 5 (8). C. 673-679.

252. Wang S., et al. Mechanisms of resistance to third-generation EGFR tyrosine kinase inhibitors // Frontiers of Medicine. 2016. № 4 (10). C. 383-388.

253. Wang S.-C., Hung M.-C. Nuclear translocation of the epidermal growth factor receptor family membrane tyrosine kinase receptors // Clinical Cancer Research. 2009. № 21 (15). C. 64846489.

254. Wang X., et al. EGFR signaling promotes inflammation and cancer stem-like activity in inflammatory breast cancer // Oncotarget. 2017. № 40 (8). C. 67904-67917.

255. Wang Y., et al. Affibody-targeted fluorogen activating protein for in vivo tumor imaging // Chemical Communications (Cambridge, England). 2017. № 12 (53). C. 2001-2004.

256. Weller A., Meek J., Adamson E. D. Preparation and properties of monoclonal and polyclonal antibodies to mouse epidermal growth factor (EGF) receptors: evidence for cryptic EGF receptors in embryonal carcinoma cells // Development (Cambridge, England). 1987. № 2 (100). C. 351-363.

257. Wheeler D. L., Dunn E. F., Harari P. M. Understanding resistance to EGFR inhibitors-impact on future treatment strategies // Nature Reviews. Clinical Oncology. 2010. № 9 (7). C. 493507.

258. Wibowo A. S., et al. Structures of human folate receptors reveal biological trafficking states and diversity in folate and antifolate recognition // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2013. № 38 (110). C. 15180-15188.

259. Wu J., Corbett A. H., Berland K. M. The intracellular mobility of nuclear import receptors and NLS cargoes // Biophysical Journal. 2009. № 9 (96). C. 3840-3849.

260. Wu M., Gunning W., Ratnam M. Expression of folate receptor type a in relation to cell type, malignancy, and differentiation in ovary, uterus, and cervix // Cancer Epidemiology and Prevention Biomarkers. 1999. № 9 (8). C. 775-782.

261. Wu X., et al. Involvement of p27KIP1 in G1 arrest mediated by an anti-epidermal growth factor receptor monoclonal antibody // Oncogene. 1996. № 7 (12). C. 1397-1403.

262. Yao C., et al. Folate receptor alpha regulates cell proliferation in mouse gonadotroph alphaT3-1 cells // Experimental Cell Research. 2009. № 18 (315). C. 3125-3132.

263. Yarden Y. The EGFR family and its ligands in human cancer: signalling mechanisms and therapeutic opportunities // European Journal of Cancer. 2001. (37). C. 3-8.

264. Yarden Y., Sliwkowski M. X. Untangling the ErbB signalling network // Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 2001. № 2 (2). C. 127-137.

265. Yewale C., et al. Epidermal growth factor receptor targeting in cancer: A review of trends and strategies // Biomaterials. 2013. № 34 (34). C. 8690-8707.

266. Zahaf N.-I., et al. Targeted delivery of an ADP-ribosylating bacterial toxin into cancer cells // Scientific Reports. 2017. (7). C. 41252.

267. Zeng F., Harris R. C. Epidermal growth factor, from gene organization to bedside // Seminars in Cell & Developmental Biology. 2014. (28). C. 2-11.

268. Zhao R., Matherly L. H., Goldman I. D. Membrane transporters and folate homeostasis: intestinal absorption and transport into systemic compartments and tissues // Expert Reviews in Molecular Medicine. 2009. (11). C. e4.

269. Zhao X., Blobel G. A SUMO ligase is part of a nuclear multiprotein complex that affects DNA repair and chromosomal organization // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2005. № 13 (102). C. 4777-4782.

270. Zhao X., Li H., Lee R. J. Targeted drug delivery via folate receptors // Expert Opinion on Drug Delivery. 2008. № 3 (5). C. 309-319.

271. Zhong J., et al. A smart polymeric platform for multistage nucleus-targeted anticancer drug delivery // Biomaterials. 2015. (65). C. 43-55.

272. Zhou Z., et al. Nonviral cancer gene therapy: Delivery cascade and vector nanoproperty integration // Advanced Drug Delivery Reviews. 2017. (115). C. 115-154.